KR102366919B1 - 상지, 두충, 오가피 및 흑두 혼합 추출물을 포함하는 근감소 억제 기능성 건강식품 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 건강식품 조성물은 세포독성이 없고, 산화적 스트레스로 인한 근육세포의 생존율을 증가시키는 효과를 나타냄으로써, 근감소증 등 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

상지, 두충, 오가피 및 흑두 혼합 추출물을 포함하는 근감소 억제 기능성 건강식품 조성물{Functional health food composition for inhibiting muscle reduction comprising a mixed extract of mulberry twig, Eucommia bark, Acanthopanax, and black bean}

본 발명은 상지, 두충, 오가피 및 흑두 혼합 추출물을 포함하는 근감소 억제 기능성 건강식품 조성물에 관한 것이다.

최근 우리나라는 출산율의 감소와 평균수명의 연장으로 이미 고령사회에 진입하였고, 초고령사회가 다가오고 있다. 통계청 자료에 따르면 2021년 65세 이상 노인인구가 인구의 16.5 %를 차지하고 10 년 이내에 25 %를 넘어설 것으로 예측되고 있다.

노화에 따른 생리적 변화는 다양하게 나타나는데 가장 보편적인 변화 중에 하나는 신체의 근육량의 감소이다.

골격근(skeletal muscle)은 인체를 구성하는 가장 큰 기관으로서 인체의 40 % 내지 50 %을 차지한다. 상기 골격근은 30 세 이후가 되면 우리 몸에서 매년 약 1 %씩 감소하는 경향을 보이다가 65세 이후부터는 급격하게 감소하여, 30 대와 비교했을 때 절반 수준인 것으로 알려져 있다. 노화가 진행됨에 따라 근육의 기능적 능력(근력, 파워)도 점진적으로 감소하게 되는데, 이러한 근육의 감소는 체형의 변화, 자세 유지의 어려움 등의 일상적인 불편함을 일으킬 뿐만 아니라 기초대사량을 저하시키고 이에 따른 에너지 공급/소비 사이의 불균형을 초개함으로써 궁극적으로 비만, 당뇨, 고지혈증을 포함한 성인병 발생의 원인으로 최근 주목받고 있다.

근감소증(Sarcopenia)은 그리스어에서 기원한 muscle을 뜻하는 'Sarco'와 감소되었다는 뜻의 'penia'가 합성된 단어로서 노화와 연관된 근육량 감소를 의미한다. 이러한 노화과정을 과거에는 단지 자연적인 현상으로 여겼으나, 2016 년 세계보건기구(WHO)는 노인성 근감소증에 질병코드(ICD-10-CM M62.84)를 부여한 이래, 노인성 근감소증을 치료의 대상인 질병으로 여기고 있다.

최근에는 상기 근감소증이 대사질환의 발생, 기능장애, 삶의 질, 의료비용 등에 심각한 영향을 미친다는 것을 인지하고, 상기 근감소증을 예방하고 개선시키기 위한 노력이 다양하게 시도되고 있는 추세로, 상기 근감소증의 발생 원인, 성인병 발생과의 상관관계 등에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있다.

따라서 대사질환의 예방, 노화예방, 삶의 질 개선을 위해 근육 건강 향상에 대한 중요성이 대두됨에 따라 기능성 소재의 탐색이 활발히 이루어지고 있다.

이와 같은 사회적인 관심으로 근감소증 예방에 효과가 높으면서 안전하고 경제적인 식물기원의 천연 기능성 소재를 개발하고자 하는 많은 연구가 기대 속에 이루어지고 있으나, 현재까지 식품으로써 섭취가 안전하며 효과적인 소재의 개발이 미비한 실정이다.

이에, 본 발명자들은 근감소증의 예방, 치료 또는 개선을 위한 효과적인 천연 유래 성분을 개발하기 위한 연구를 수행한 결과, 상지, 두충, 오가피 및 흑두 혼합물의 혼합 추출물이 근육세포 보호와 밀접한 관련이 있어, 근감소 억제에 대한 상승 효과가 있음을 알아내고 본 발명을 완성하였다.

한국공개특허 제10-2110040호

본 발명의 목적은 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 기술적 과제로 한정되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 목적은 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물은 세포독성이 없고, 산화적 스트레스로 인한 근육세포의 생존율을 증가시키는 효과를 나타냄으로써, 근감소증 등 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 특허청구 범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 본 발명의 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물 및 비교예의 세포 생존능 평가 결과 그래프이다.
도 2의 a)는 본 발명의 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물의 처리로 인한 근원세포(Myoblast)에서의 농도별 세포 생존율 측정 결과를 나타낸 그래프이고, b)는 본 발명의 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물 및 비교예를 동일한 농도에서 처리한 경우의 근원세포(Myoblast)의 세포 생존율 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3의 a)는 본 발명의 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물의 처리로 인한 근관(Myotube)에서의 농도별 세포 생존율 측정 결과를 나타낸 그래프이고, b)는 본 발명의 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물 및 비교예를 동일한 농도에서 처리한 경우의 근관(Myotube)의 세포 생존율 측정 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 않으며 본 발명은 후술할 청구 범위에 의해 정의될 뿐이다.

덧붙여, 본 발명에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시 예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 본 발명의 명세서 전체에서 어떤 구성요소를 '포함'한다는 것은 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있다는 것을 의미한다. 또한, 상기 '포함'한다는 것은 구성요소를 단독으로 사용한다는 것 역시 의미한다.

식품 및 건강기능성식품 조성물

본 발명의 일 양태는 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 상지(mulberry twig)란, 뽕나무속 식물의 여린 가지를 말린 것을 의미하고, 주로 늦은 봄과 초여름 사이에 채취하는 약간 쓴 맛이 나며, 소염, 이뇨, 강장, 발한 및 풍을 제거하는 효능을 가지고 있어, 오래전부터 한약재로 이용되고 있다.

또한, 두충(Eucommia bark)이란, 두충나무과(Eucommiaceae)에 속하는 낙엽교목 또는 이의 나무껍질을 말린 생약을 의미한다. 두충은 줄기나 잎 등이 예로부터 차로서 음용되어 왔으며, 비타민 C가 많이 함유되어 있 고 부신의 기능을 높이는 작용과 함께 심장병과 당뇨병, 동맥경화 예방에 효과가 있다. 그 줄기나 잎 등이 고혈압, 스트레스, 관절염, 숙취 등의 각종 질병에 유용한 생약으로서 음용되어 왔을 뿐만 아니라, 최근들어 임상적인 실험을 통해 두충에 함유된 여러 성분들의 약리학적 메카니즘이 점차 밝혀짐에 따라 그 가치가 재인식되고 있다.

또한, 오가피(Acanthopanax)는 드릅나무과(Araliacease)에 속하는 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorum Seeman) 또는 그의 뿌리, 줄기 및 가지의 껍질을 의미한다. 동의보감에 따르면 오가피는 오갈피나무(Acanthopanax Sessilifloum Seem)의 껍질을 말린 것으로, 오갈피 나무는 산기슭과 산골짜기에서 자라며 여름철에 뿌리 또는 줄기껍질을 벗긴 다음 겉껍질을 긁어 햇볕에 말리며 강심, 강장 작용 등이 있다고 하였으며, 오가피 열매는 남자음위와 여자 음부 소양증을 치료하고 중풍을 없애고 불로하게 하는 선약이라고 하였고, 본초강목에서는 통증, 낭하습, 요척통, 남자음위, 저창 등을 없애주고 근육과 뼈를 튼튼하게 해주고 위를 보호하며 정력을 좋게 하며 피를 맑게 하는 등 많은 효능이 있다고 기록되어, 오래전부터 한방에서는 강장제로 이용되어 왔으며 소염, 진통, 거풍습 및 활혈등의 효능이 있어 마비통증, 요통, 수종, 창종, 각기 및 근골위약 등의 질환을 치료하는데 사용되어 온 생약으로 알려져 있다.

또한, 흑두(Black bean)는 검은콩을 의미한다. 콩은 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 식용작물로서, 35 % 내지 40 %의 단백질을 함유하고 있는 완전 단백식품이다. 콩 단백질은 일반 단백질과 아미노산에 비해 흡수가 빠르고 위장에 부담을 주지 않으면서 단백질 영양을 섭취할 수 있다는 장점이 있고, 체중감량, 근육강화, 골밀도 증강, 유방암 발병률 감소, 당뇨병예방의 효과가 있는 것으로 보고되고 있다. 특히, 검은콩은 일반 콩과 비교하여 영양소의 함량은 비슷하지만 노화방지 성분이 4배나 많고, 성인병 예방과 체중감량에 효능이 더 좋다고 알려져 있다.

본 발명자들은 상기 각기 효능이 다른 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물이 근육세포 보호에 효과적임을 알아내고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 혼합물은 상기 상지 100 중량부에 대하여 상기 두충이 10 내지 30 중량부, 상기 오가피가 10 내지 30 중량부 및 상기 흑두가 10 내지 30 중량부 포함될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 혼합물은 상기 상지 100 중량부에 대하여 상기 두충이 17 내지 23 중량부, 상기 오가피가 17 내지 23 중량부 및 상기 흑두가 17 내지 23 중량부 포함될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 혼합물은 상기 상지 100 중량부에 대하여 상기 두충이 19 내지 21 중량부, 상기 오가피가 19 내지 21 중량부 및 상기 흑두가 19 내지 21 중량부 포함될 수 있고, 예를 들면, 상기 상지 100 중량부에 대하여 상기 두충이 20 중량부, 상기 오가피가 20 중량부 및 상기 흑두가 20 중량부 포함될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 혼합 추출물은 상기 혼합물을 물, 탄소수 2 내지 4의 직쇄 또는 분지쇄 알콜 또는 이들의 혼합물, 예를 들면, 물로 추출한 것일 수 있고, 상기 상지, 두충, 오가피 및 흑두 혼합물을 추출할 수 있는 용매로, 이 분야에서 자명한 것이면, 이를 제한하지 않는다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 근육 감소 관련 질병은 산화적 스트레스로 인하여 유발되는 근감소로 인하여 발생하는 것으로, 예를 들면, 근감소증, 근위축증, 근이영양증, 무긴장증 및 근무력증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상, 예를 들면, 근감소증일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 건강식품 조성물은 세포독성이 없어 안전하면서도, 산화적인 스트레스에 대한 보호효능이 우수한 바, 산화적 스트레스에서 세포 보호 효능이 탁월하여, 근감소 예방 또는 치료에 이용될 수 있고, 나아가, 근육강화 및 산화적 근손상 회복에 대한 기능성 조성물로 이용될 수 있다.

본 발명의 일 양태는 또한, 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합추출물은 상기 양태의 혼합추출물과 동일할 수 있고, 상기 혼합추출물에 대한 설명은 상기 양태의 설명으로 갈음한다.

식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 유효물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품 및 건강기능성식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 유효물질을 함유하는 건강식품 및 건강기능성식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효물질의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 및 건강기능성식품 중의 상기 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 유지를 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 건강식품 및 건강기능성식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명 유효물질을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능성 식품 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 유효물질을 함유하는 건강식품 및 건강기능성식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품 및 건강기능성식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 유효물질을 함유하는 건강식품 및 건강기능성식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

약학적 조성물

본 발명의 일 양태는 또한, 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합추출물을 포함하는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합추출물은 상기 양태의 혼합추출물과 동일할 수 있고, 상기 혼합추출물에 대한 설명은 상기 양태의 설명으로 갈음한다.

본 발명의 유효물질은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 유효물질에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 유효물질의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001-100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01-35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07-7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7-2500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.

하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

실시예

실시예 1. 혼합추출물의 제조

상지 2 Kg과 오가피, 두충 및 흑두를 각각 0.4 kg을 5: 1: 1: 1의 중량비로 혼합하여 물 100 kg을 가하고, 110 ℃에서 4 시간 동안 가열한 후, 40 ℃까지 자연 냉각하여 여과하여 상지, 오가피, 두충 및 흑두의 혼합추출물을 제조하였다.

비교예 1. 상지 추출물의 제조

상기 실시예 1에서, 상지, 오가피, 두충 및 흑두 대신 상지를 단일 재료로 이용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여, 상지 추출물을 제조하였다.

비교예 2. 오가피 추출물의 제조

상기 실시예 1에서, 상지, 오가피, 두충 및 흑두 대신 오가피를 단일 재료로 이용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여, 오가피 추출물을 제조하였다.

비교예 3. 두충 추출물의 제조

상기 실시예 1에서, 상지, 오가피, 두충 및 흑두 대신 두충을 단일 재료로 이용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여, 두충 추출물을 제조하였다.

비교예 4. 흑두 추출물의 제조

상기 실시예 1에서, 상지, 오가피, 두충 및 흑두 대신 흑두를 단일 재료로 이용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여, 흑두 추출물을 제조하였다.

비교예 5. 오가피, 두충 및 흑두 혼합 추출물의 제조

상기 실시예 1에서, 상지, 오가피, 두충 및 흑두 대신 오가피, 두충 및 흑두를 1: 1: 1의 중량비로 혼합한 혼합 재료로 이용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여, 오가피, 두충 및 흑두 혼합 추출물을 제조하였다.

참고예 1. 실험재료 준비

C2C12 cell은 ATCC에서 구매하여 사용하였고, 혼합액은 물에 희석하여 사용하였다.

참고예 2. 세포배양

C2C12 cell을 10 % FBS(fetal bovine serum)와 1 % penicillin을 첨가한 DMEM 배지를 배양액으로 37 ℃, CO₂ incubator에서 배양하였으며, 분화 시 10 %의 FBS 대신 2 % HS(horse serum)로 변경하여 37 ℃, 5 % CO₂ 조건에서 6 일간 배양하였다.

참고예 3. 통계처리

실험성적의 통계적 유의성은 평균±표준편차로 표기하였고, 각 군간의 차이는 SPSS 25(SPSS Inc. USA)프로그램을 사용하였으며, ANOVA, Duncan 검정으로 사후 검정을 실시하여 유의성을 분석하였다. P<0.05 이하인 경우에 유의한 것으로 인정하였으며, 정상군과의 통계학적 유의성을 도면에 표기하였다. 각각의 실험은 모두 적어도 3 번 이상 실시하여 통계처리 하였다.

실험예 1. 세포 생존능 평가

C2C12에 대한 시료의 세포 생존능 평가는 MTT(thiazoly blue tetrazolium bromid)를 이용하여 측정하였다. 즉, C2C12 세포는 실험 전날 1×106 cells/mL 농도로 96-well plate에 seeding하고, 상기 실시예 1 및 비교예 1 내지 4에서 수득한 시료(추출물)를 0.1 mg/mL 내지 1 mg/mL를 처리하여 24 시간 동안 배양하였다.

그 후 4 ℃에 보관 중인 MTT를 1 mg/mL의 농도로 PBS에 녹인 다음 pipet을 이용하여 96-well medium 부피의 20 % 되는 양만큼 취하여 각각의 well에 조심스럽게 첨가하여 plate를 바닥에 붙인 상태로 전후 좌우로 가볍게 흔들면서 혼합하였다.

CO₂ incubator에서 4 시간 동안 배양한 후 배양액을 제거하고, DMSO 200 μL를 첨가하여 formazan을 용출시킨 뒤 용출된 용액을 새 96-well plate로 옮겨 ELISA를 이용하여 570 nm 흡광도 값에서 측정하고, 결과를 하기의 표 1 및 도 1에 도시하였다:

[표 1]

상기 표 1 및 도 1을 참조하면, 각 추출물을 농도별 0.1 mg/mL에서 1 mg/mL까지 처리 시 비교예 1의 상지 추출물 및 비교예 2의 두충 추출물은 0.6 mg/mL 농도에서 각각 68.28±2.03 %, 81.93±2.01 %로 세포독성이 나타났으며, 비교예 3의 오가피 추출물은 0.8 mg/mL 농도에서 45.03±7.28 %로 세포독성이 나타나는 반면, 실시예 1의 혼합 추출물에서는 모든 농도에서 세포독성이 나타나지 않은 것을 확인할 수 있었다.

실험예 2. H ₂ O ₂ 처리에 따른 산화적 스트레스에 의한 세포 손상 보호효과 평가

H₂O₂처리에 따른 산화적 스트레스에 의한 세포 손상 보호효과를 확인하기 위하여 MTT assay를 이용하였다. 이를 위하여 세포 배양용 6 well plate에 C2Cl2 세포의 근원세포(Myoblast) 및 이로부터 분화된 근관(Myotube)을 각각 1×106 cells/well로 분주하고 48 시간 동안 안정화시킨 후, 실시예 1의 혼합 추출물 및 비교예 1 내지 5의 추출물을 0.1 mg/mL 내지 0.4 mg/mL 농도로 2 시간 동안 전 처리한 후 H₂O₂를 처리하였다. 24 시간 배양 후, MTT 시약을 1 mg/mL 농도로 희석하여 처리한 후 37 ℃에서 4 시간 동안 다시 반응시켰다. 반응이 끝난 다음 MTT 시약을 제거하고 DMSO를 이용하여 각 well에 생성된 formazin을 모두 녹인 후 96 well plate에 200 μL씩 옮겨서 ELISA를 이용하여 570 nm 흡광도 값을 측정하였다.

Myoblast에서, 실시예 1의 혼합 추출물의 처리로 인한 농도별 세포 생존율 값을 도 2의 a)에 도시하였고, 비교예 1 내지 비교예 5 및 실시예 1의 추출물 각각을 0.1 mg/mL처리한 경우의 세포 생존율 측정값을 하기의 표 2 및 도 2의 b)에 도시하였다:

[표 2]

상기 도 2의 a)를 참조하면, Myoblast에 H₂O₂ 0.8 mM 처리시, 대조군(CON)에 비해 47.24±4.25 %의 생존률로 측정되었고, 실시예 1의 혼합 추출물 0.1, 0.2 및 0.4 mg/mL농도로 처리 시 각 78.43±2.22, 78.11±1.81 및 92.75±16.66 %로 H₂O₂ 단독 처리하였을 때 감소된 생존률이 혼합 추출물 처리 시 농도 의존적으로 산화적 스트레스에 의한 생존율 저하를 차단한다는 것을 확인할 수 있었다.

또한, 상기 표 2 및 도 2의 b)를 참조하면, 각 추출물 0.1 mg/mL 농도에서, 비교예 1의 상지, 비교예 2의 두충, 비교예 3의 오가피, 비교예 4의 흑두 단일 추출물 및 비교예 5의 두충, 오가피 및 흑두 혼합 추출물과 비교하여, 실시예 1의 상지, 두충, 오가피 및 흑두 혼합 추출물에서 제일 우수한 세포보호능이 나타났으므로, 각 추출물들의 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

Myotube에서, 실시예 1의 혼합 추출물의 처리로 인한 농도별 세포 생존율 값을 도 3의 a)에 도시하였고, 비교예 1 내지 비교예 5 및 실시예 1의 추출물 각각을 0.1 mg/mL처리한 경우의 세포 생존율 측정값을 하기의 표 3 및 도 3의 b)에 도시하였다:

[표 3]

상기 도 3의 a)를 참조하면, Myotube에 H₂O₂ 0.8 mM 처리시, 대조군(CON)에 비해 65.98±1.25 %의 생존률로 측정되었고, 실시예 1의 혼합 추출물 0.1, 0.2 및 0.4 mg/mL농도로 처리 시 각 127.46±9.76, 103.48±2.09 및 99.67±3.05%로 H₂O₂ 단독 처리하였을 때 감소된 생존률이 혼합 추출물 처리 시 농도 의존적이진 않으나 산화적 스트레스에 의한 생존율 저하를 차단한다는 것을 확인하였다.

또한, 상기 표 3 및 도 3의 b)를 참조하면, 각 추출물 0.1 mg/mL 농도에서, 비교예 1의 상지, 비교예 2의 두충, 비교예 3의 오가피, 비교예 4의 흑두 단일 추출물 및 비교예 5의 두충, 오가피 및 흑두 혼합 추출물과 비교하여, 실시예 1의 상지, 두충, 오가피 및 흑두 혼합 추출물에서 제일 우수한 세포보호능이 나타났으므로, 각 추출물들의 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

건강식품의 제조예

본 발명에 따른 유효물질은 목적에 따라 여러 형태의 건강식품으로 제조 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 유효물질을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 건강식품의 제조방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

<건강식품 제조예 1> 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 유효물질 0.01-1 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<건강식품 제조예 2> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 유효물질을 진공 농축기에서 감압농축하고 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 유효물질의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 34 중량부, 율무 19 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

유효물질 (2 중량부),

영지(1.5 중량부), 및

지황(1.5 중량부).

건강기능성식품의 제조예

본 발명에 따른 유효물질은 목적에 따라 여러 형태의 건강기능성식품으로 제조 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 유효물질을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 건강기능성식품의 제조방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

<건강기능성식품 제조예 1> 건강기능성식품의 제조

유효물질 100 mg

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 μg

비타민 E 1.0 mg

비타민 B1 0.13 mg

비타민 B2 0.15 mg

비타민 B6 0.5 mg

비타민 B12 0.2 μg

비타민 C 10 mg

비오틴 10 μg

니코틴산아미드 1.7 mg

엽산 50 μg

판토텐산 칼슘 0.5 mg

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 mg

산화아연 0.82 mg

탄산마그네슘 25.3 mg

제1인산칼륨 15 mg

제2인산칼슘 55 mg

구연산칼륨 90 mg

탄산칼슘 100 mg

염화마그네슘 24.8 mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능성 식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능성 식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능성 식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<건강기능성식품 제조예 2> 건강 기능 음료의 제조

유효물질 100 mg

구연산 100 mg

올리고당 100 mg

매실농축액 2 mg

타우린 100 mg

정제수를 가하여 전체 500 mL

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 1 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

약제의 제조예

본 발명에 따른 유효물질은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 유효물질을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

<약제 제조예 1> 산제의 제조

유효물질 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<약제 제조예 2> 정제의 제조

유효물질 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<약제 제조예 3> 캡슐제의 제조

유효물질 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<약제 제조예 4> 주사제의 제조

유효물질 10 ㎍/㎖

묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지

주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖

적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 본 발명에 따른 유효물질을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120 ℃에서 15 분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.

<약제 제조예 5> 경비흡수제 (Nasal spray)의 제조

유효물질 1.0 g

아세트산나트륨 0.3 g

메틸파라벤 0.1 g

프로필파라벤 0.02 g

염화나트륨 적량

HCl 또는 NaOH pH 조정 적량

정제수 적량

통상의 경비흡수제의 제조방법에 따라, 염수 (0.9% NaCl, w/v, 용매는 정제수) 1 mL당 유효물질 3 mg이 포함되도록 제조하고, 이를 불투명한 스프레이 용기에 충진하고 멸균시켜 경비흡수제를 제조하였다.

<약제 제조예 6> 액제의 제조

유효물질 100 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라, 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체 100 mL로 조절한 후 갈색 병에 충진하고 멸균시켜 액제를 제조하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (12)

1. 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 산화적 스트레스로 인해 유발되는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.
   
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 상지 100 중량부에 대하여 상기 두충은 10 내지 30 중량부, 상기 오가피는 10 내지 30 중량부 및 상기 흑두는 10 내지 30 중량부 포함되는 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
   
3. 제 2 항에 있어서,
   상기 상지 100 중량부에 대하여 상기 두충은 17 내지 23 중량부, 상기 오가피는 17 내지 23 중량부 및 상기 흑두는 17 내지 23 중량부 포함되는 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
   
4. 제 3 항에 있어서,
   상기 상지 100 중량부에 대하여 상기 두충은 19 내지 21 중량부, 상기 오가피는 19 내지 21 중량부 및 상기 흑두는 19 내지 21 중량부 포함되는 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
   
5. 제 1 항에 있어서,
   상기 혼합 추출물은 상기 혼합물을 물, 탄소수 2 내지 4의 직쇄 또는 분지쇄 알콜 또는 이들의 혼합물로 추출한 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
   
6. 제 5 항에 있어서,
   상기 혼합 추출물은 물로 추출한 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
   
7. 제 1 항에 있어서,
   상기 근육 감소 관련 질병은 근감소증, 근위축증, 근이영양증, 무긴장증 및 근무력증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
   
8. 삭제
9. 제 1 항에 있어서,
   상기 건강식품은 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제에서 선택되는 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
   
10. 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하는 산화적 스트레스로 인해 유발되는 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
    
11. 삭제
12. 상지, 두충, 오가피 및 흑두의 혼합 추출물을 포함하고,
    산화적 스트레스로 인하여 유발되는 근감소증, 근위축증, 근이영양증, 무긴장증 및 근무력증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 근육 감소 관련 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

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