KR102350857B1

KR102350857B1 - 국화 및 목련 유성온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR102350857B1
Application number: KR1020190153454A
Authority: KR
Inventors: 김지현; 서은경; 남승옥; 하유주; 김동민
Original assignee: (주)에이텍
Priority date: 2019-11-26
Filing date: 2019-11-26
Publication date: 2022-01-14
Anticipated expiration: 2039-11-26
Also published as: KR20210064818A

Abstract

본 발명은 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이며, 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 화장료 총중량에 대하여 0.01 내지 20.0중량% 함유한다.
본 발명의 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물은 피부에 안전하면서도 국화 및 목련의 복합성분에 의한 상승작용으로 우수한 멜라닌생성 억제, 및 항산화 활성을 나타내므로 피부 미백, 주름개선과 탄력증진 및 노화지연에 따른 효과가 우수하다.

Description

국화 및 목련 유성온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물 및 그 제조방법{Cosmetic composition containing lactic acid bacteria fermentation of chrysanthemum and magnolia extracted with YU SEONG hot spring water}

본 발명은 국화, 목련의 유산균 발효추출물을 함유하는 피부미백, 주름개선 및 노화지연 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이며, 구체적으로는 유성온천수로 추출한 국화, 목련의 추출물과 발효시킨 발효물을 함유하는 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

과학 및 의료분야 기술이 발달로 인체의 건강이 향상되고, 생명이 연장되어 고령화 현상이 심화됨에 따라 외모의 아름다움 등의 유지와 함께 피부노화의 방지 내지 개선을 위한 관심이 높아지고 있으며, 이러한 이유로 바이오벤처 및 화장품, 생명공학 업계에서는 천연소재의 고기능성을 활용한 미백 및 피부노화를 억제하기 위한 노력이 활발히 이루어지고 있다.

피부노화는 크게 세월이 흘러감에 따라 피할 수 없는 노화 현상인 내인성 노화(intrinsic aging)와 오랫동안 햇빛에 노출된 피부에서 관찰되는 광노화 (photoaging)로 크게 두 가지 형태로 구분되는데, 내인성 노화는 외부 환경과는 무관하게 유전적 요소에 영향을 받아 나이가 들면서 자연스럽게 나타나는 현상으로 인위적인 조절이 어렵지만 광노화는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로 인위적인 조절이 비교적 용이하다. 광노화의 대표적인 인자는 자외선으로, 태양광선에 노출된 피부에서 자외선에 의해 과잉의 활성산소종이 생성되고, 체내의 항산화효소와 비타민 C, E, 글루타치온 및 유비퀴놀 등의 항산화제가 감소함으로 인해 산화와 항산화의 불균형이 야기된다. 이에 따라 지질 과산화, 단백질 산화, 단백질 분해효소의 활성화, 콜라겐과 엘라스틴의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합, 히알루론산 사슬절단, 멜라닌 생성반응 촉진, DNA 산화 등에 의해 생체 구성성분들의 손상을 가져오기 때문에 피부노화가 일어나게 된다.

상기한 피부노화 현상의 지연 내지 개선을 위해서는 콜라겐합성 촉진 또는 세포재생 기능을 부여하거나 활성산소를 제거할 수 있는 항산화제의 사용이 필요하며, 대표적인 항산화제로서는 수퍼옥사이드디스뮤타제(SOD) 라는 효소와 비타민 C, 비타민 E(토코페롤), 플라보노이드 등이 있고 또한 콜라겐합성 촉진물질로는 비타민C, 비타민 A(retinoic acid), 피부성장인자(EGF) 등이 있지만, 이러한 항산화제들은 불안정하기 때문에 장기간의 유통기간을 갖는 화장품에 적용이 쉽지 않고, 과량 사용 시 피부에 부작용을 일으킬 수 있는 문제점이 있으며, 이러한 문제점을 개선하기 위하여 여러 종류 천연물질을 유효성분으로 한 화장용 조성물이 개시되어 있으나, 대부분의 경우에 항산화작용, 안정성 등의 효과가 미흡한 것으로 알려져 있다.

천연물질을 이용한 항산화 관련 화장품과 관련한 선행기술로 예를 들면, 특허문헌1에 줄기, 잎 및 꽃으로 이루어지는 울릉국화(Dendranthema zawadskii var. lucidum)의 지상부를 물, 알코올, 에틸아세테이트, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 용매로 추출한 울릉국화 추출물을 유효성분으로 함유하는 나이로 인한 혈관노화로 야기되는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개시하고 있으며, 특허문헌2에 엉겅퀴 추출물, 오렌지꽃 추출물, 엘더꽃 추출물, 푸르메리아 루브라꽃 추출물, 캐모마일꽃 추출물, 백합꽃 추출물, 연꽃 추출물 및 목련꽃 추출물 각각을 동일 중량비로 혼합하여 형성된 복합 식물 추출물을 유효성분으로 포함하고, 상기 복합 식물 추출물을 화장료 조성물의 총중량을 기준으로 0.1 내지 10 중량% 포함하며, 상기 엉겅퀴 추출물, 상기 오렌지꽃 추출물, 상기 엘더꽃 추출물, 상기 푸르메리아 루브라꽃 추출물, 상기 캐모마일꽃 추출물, 상기 백합꽃 추출물, 상기 연꽃 추출물 및 상기 목련꽃 추출물 각각의 DPPH 자유라디컬 소거활성 값보다 상기 복합 식물 추출물의 DPPH 자유라디컬 소거활성 값이 더 큰 것을 특징으로 하는 피부개선용 화장료 조성물을 개시하고 있다.

또 특허문헌3에 항산화, 주름 개선 및 피부 탄력 개선용 화장료 조성물로서 콩, 연꽃, 완두콩, 목련, 동백, 매실 및 모란의 피토플라센타 복합 추출물을 일정 중량비로 포함하는 화장료 조성물을 개시하고 있다.

본 출원의 발명자는 피부에 천연물질을 온천수 및 유산균발효를 이용한 발효추출물을 조합하여 안전하면서도 피부미백, 주름개선 및 노화지연 효과가 우수한 화장품을 개발하고 본 발명을 완성하게 되었다.

특허문헌1; 대한민국 등록특허공보 등록번호 10-1945862호 특허문헌2; 대한민국 등록특허공보 등록번호 10-1969497호 특허문헌3; 대한민국 등록특허공보 등록번호 10-2022216호

본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 국화 및 목련의 유성온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물의 제공에 관한 것이며, 보다 상세하게는 천연물질인 국화 및 목련의 온천수 추출물을 유산균으로 발효시킨 국화 및 목련 유산균 발효추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백, 주름개선 및 노화지연 화장료 조성물 및 그 제조방법의 제공을 목적으로 하는 것이다.

본 발명에 따른 과제의 해결수단으로는 국화 및 목련의 온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물은 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 것으로 이루어지며, 일 실시형태는 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화와 피부미백용 화장료 조성물로 이루어진다.

본 발명에 따른 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물의 일 실시형태는 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 화장료 총중량에 대하여 0.01 내지 20중량% 함유하는 것으로 이루어진다.

그리고 본 발명에 따른 또 다른 과제의 해결수단으로 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물의 제조방법은 국화 및 목련을 온천수로 추출하여 추출물을 얻은 다음, 국화 및 목련 온천수 추출물을 유산균으로 발효시킨 국화 및 목련 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제조하는 방법으로 이루어진다.

본 발명에 따른 국화 및 목련의 온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물의 제조방법의 일 실시형태는 a) 국화 및 목련을 온천수 또는 온천수와 알코올의 혼합용매로 추출하여 국화 및 목련 온천수 추출물을 얻는 제1공정, b) 상기 제1공정의 추출물을 유산균으로 발효시켜 국화 및 목련의 유산균 발효물을 얻는 제2공정 및 c) 상기 제2공정의 국화 및 목련 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 얻는 제3공정을 포함하는 것으로 이루어진다.

본 발명에 따른 국화 및 목련의 온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물의 제조방법의 또 다른 실시형태는 a) 국화 1 ~ 10중량부, 목련 1 ~ 10중량부를 온천수 또는 온천수와 탄소수 1 ~ 4개의 저급알코올의 혼합용매로 추출하여 국화 및 목련 온천수 추출물을 얻는 제1공정, b) 상기 제1공정의 추출물을 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 레우트리(Lactobacillus reuteri), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비포도박테리움 브레이브(Bifodobacterium breve) 및 비포도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 균으로 발효시켜 국화 및 목련 추출물의 유산균 발효물을 얻는 제2공정 및 c) 상기 제2공정의 유산균 발효물을 화장료 조성물 총중량에 대하여 0.01 내지 20 중량% 함유하는 화장료 조성물을 제조하는 제3공정으로 이루어진다.

상기 본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장료 제조의 통상의 방법에 따라 제조되는 것으로 이루어지며, 예를 들면 약학적, 화장학적 또는 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 화장수, 로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 겔, 세럼, 팩, 세정제 또는 에멀젼의 제형 등에 적용될 수 있다.

본 발명의 국화 및 목련 유성온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물은 피부에 안전하면서도 국화 및 목련의 복합성분에 의한 상승작용으로 우수한 멜라닌생성 억제 및 항산화 활성을 나타내므로 피부미백, 주름개선과 탄력증진 및 노화지연에 따른 효과가 우수하다.

도 1은 본 발명에 따른 국화 및 목련 유성온천수 추출물의 유산균발효물의 Tyrosinase 저해 활성을 나타내는 그래프

이하에서는 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용, 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 구체적으로 설명하지만 실시예의 기재에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물은 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 화장료 총중량에 대하여 0.01 내지 20중량% 함유하는 것으로 이루어진다.

그리고 국화 및 목련 온천수 추출물의 유산균 발효물을 함유하는 화장료 조성물의 제조방법은 a) 국화 및 목련을 온천수 또는 온천수와 알코올의 혼합용매로 추출하여 국화 및 목련 온천수 추출물을 얻는 제1공정, b) 상기 제1공정의 추출물을 유산균으로 발효시켜 국화 및 목련 추출물의 유산균 발효물을 얻는 제2공정 및 c) 상기 제2공정의 유산균 발효물을 화장료 조성물 총중량에 대하여 0.01 내지 20중량% 함유하는 화장료 조성물을 제조하는 제3공정으로 이루어진다.

본 발명에 따른 상기 제1공정은 국화 및 목련의 복합추출물을 얻는 추출공정이며, 국화 1 ~ 10중량부에 대하여 목련 1 ~ 10중량부로 조합하여 추출하며, 국화와 목련을 동일 중량비로 조합 사용하는 것이 바람직하다.

상기 제1공정의 추출공정은 국화 및 목련의 혼합물을 추출용매로 10 ~ 100℃의 온도에서 12시간 ~ 5일, 보다 바람직하게는 1일 ~ 3일, 가장 바람직하게는 24시간 ~ 48시간 동안 추출하며, 상기 추출 시간이 12시간 미만이면 원하는 성분의 추출이 미흡하고, 추출 시간이 5일을 넘게 되면 추출 성분의 변화가 없고 추출물이 변색되는 문제가 발생기 때문에 바람직하지 못하다.

상기 제1공정의 추출이 완료된 후 추출물에서 고형분을 제거하고 여액을 수거한 후 감압 농축하고 동결건조, 분무건조, 냉풍건조, 열풍건조 등의 방법으로 건조하여 건조물 형태로 국화 및 목련의 복합추출물을 얻는다.

상기 제1공정에서 선택하는 추출용매로 선택하는 온천수는 대한민국 대전의 유성온천수가 바람직하며 온천수와 혼합 사용하는 알코올은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로부터 하나 이상의 성분이 선택되며 구체적으로는 메탄올 또는 에탄올의 유성온천수 혼합용매가 선택된다.

본 발명에 따른 제2공정은 제1공정의 국화 및 목련의 복합추출물을 유산균으로 발효시키는 공정이며, 제2공정에서 선택하는 유산균은 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 레우트리(Lactobacillus reuteri), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비포도박테리움 브레이브(Bifodobacterium breve) 및 비포도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 성분이 선택된다.

상기 제2공정에 따른 유산균발효 공정은 국화 및 목련 복합추출물 5 ~ 15%(w/v), 온천수 2 ~ 4%(w/v), 포도당 2 ~ 4%(w/v) 및 효모추출물 0.5 ~ 1.5%(w/v)을 혼합한 후, pH를 5.5로 조정하고, 멸균하여 액체배지 조성물을 준비한 다음, 상기한 유산균을 1 ~ 10%(v/v)가 되게 첨가한 후, 온도 32℃에서 3 ~ 5일간 발효시킨다.

상기 제2공정의 발효가 완료된 후, 균체를 원심분리를 통해 제거하고, 배양여액을 필터로 여과시켜 발효물을 얻으며, 이때 필터로는 0.2 내지 0.5 마이크로미터 멤브레인(membrane) 필터 등이 사용되며, 여액 상태의 발효추출물을 추가적로 감압농축 및 동결건조하여, 건조물 상태의 유산균 발효물을 얻는 것으로 이루어진다.

본 발명에 따른 상기 제3공정은 제2공정에서 얻은 국화 및 목련의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유시켜 화장료 조성물을 제조하는 공정이다.

상기 제3공정에서 유효성분으로 국화 및 목련의 유산균 발효물은 화장료 총중량에 대하여 0.01 ~ 20중량%로 함유하며, 바람직하게는 0.1 ~ 10중량%, 보다 바람직하게는 1 ~ 5중량%로 첨가된다.

상기 유효성분이 화장료 조성물 총 중량의 0.01중량% 미만에서는 만족할 만한 효능을 제공하기 어렵고, 20.0중량% 이상에서는 조성물의 냄새와 색상에 영향을 미쳐서 상품성이 떨어지고 추가적인 효능을 기대하기도 어렵다.

상기 제3공정에서 화장료 조성물은 화장료 제조의 통상의 방법에 따라 제조되는 것으로 이루어지며, 예를 들면 약학적, 화장학적 또는 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 화장수, 로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 겔, 세럼, 팩, 세정제 또는 에멀젼의 제형 등에 적용될 수 있다.

본 발명에 따른 국화 및 목련의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 항산화용, 피부미백용 또는 노화방지용의 화장료 조성물로 적용될 수 있다.

이하에서는 <실시예> 및 <시험예>를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기로 한다.

<실시예 1>

1. 국화 및 목련의 복합 추출물의 제조

시판하는 국화 500g, 목련 500g을 혼합된 상태에서 분쇄기로 미세하게 절단하여 준비된 추출기에 투입한 다음에 10,000g의 유성온천수를 가한 후, 25℃에서 24시간 동안 추출하였다.

추출이 완료된 후 고형분을 제거하고 여액을 수거한 후 감압농축 및 동결건조하여 국화와 목련의 복합추출물로서 건조분말 13.4g을 얻었다.

2. 국화 및 목련의 복합 유산균 발효물의 제조

상기에서 얻은 국화와 목련의 복합추출물을 이용하여 복합추출물 10%(w/v), 유성 온천수 2%(w/v), 포도당 3%(w/v) 및 효모추출물 1%(w/v)로 되게 조성한 다음 pH를 5.5로 조정하고, 멸균하여 액체배지 조성물을 준비하였다.

상기 액체배지에 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei)를 무균적으로 균질화하여 5%(v/v)가 되게 첨가하고, 32℃ 에서 회전수 150rpm, 통기량 1.5 vvm의 조건으로 5일간 배양하여 발효시켰다.

발효가 완료된 후 원심분리하여 균체를 모두 제거하고, 얻은 여액을 감압농축 및 동결건조하여 국화와 목련의 복합 유산균 발효물 10.0g을 얻었다.

<비교예 1>

비교를 위하여 국화와 목련을 각각 단독적으로 사용하여 각각의 온천수 추출물을 얻었으며, 추출조건은 상기 <실시예 1>과 동일하게 적용하였다. 제조된 추출물은 아래 [표 1]에 나타내었다.

구분	국화 온천수추출물(건조물 중량)	목련 온천수 추출물(건조물 중량)
비교예 1	16.4g	14.5g

<비교예 2>

비교를 위하여 상기 <비교예 1>와 동일한 방법으로 국화 및 목련 온천수 추출물을 제조한 후 각각의 온천수추출물을 이용하여 상기 <실시예 1>과 동일한 방법으로 각각의 유산균 발효물을 제조하였으며, 제조된 유산균 발효물은 아래 [표 2]에 나타내었다.

구분	국화 유산균 발효물(건조물 중량)	목련 유산균 발효물(건조물 중량)
비교예 2	10.2g	9.7g

<시험예 1> 피부세포 독성 시험

상기 <실시예 1> 및 <비교예 1> 를 통하여 제조한 유산균 발효물과 온천수 추출물을 시료로 하여 피부세포에 대한 독성을 측정하였다.

본 시험을 위해 사용된 세포주는 인간 진피 섬유아세포(human dermal fibroblast; Lonza, Basel, Switzerland) 등 3종의 세포를 사용하였다. 상기의 세포들은 Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM; Gibco-BRL, Invitrogen; Life Technologies, Gaithersburg, MD, USA)에 10% 소태아혈청(FBS; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), 1% 페니실린/스트렙토마이신(penicillin 100 IU/mL, streptomycin 100μg/mL; Life Technologies)를 함유한 배지를 사용하여, 5% CO₂ 세포배양기 내에서 37℃의 온도 조건 하에서 배양하였다.

WST-1(Water-soluble tetrazolium salt) 어세이는 세포 내 미토콘드리아성 NADH-탈수소화효소(mitochondrial NADH-dehydrogenase)의 활성을 측정하여 알아보는 방법으로써 테트라졸륨염(tetrazolium salt)을 살아있는 세포에 처리하게 되면 미토콘드리아에 있는 탈수소화효소에 의하여 유색의 포마잔(formazan)이 형성되게 된다. 형성된 포마잔을 450nm 파장의 흡광도로 확인하면 살아있는 세포의 농도를 확인할 수 있다. 세포를 96-well plate에 2×10³cells/well의 세포를 분주하고 24시간 배양 후 시료를 적정농도에 맞게 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 그 후 WST-1 어세이 용액을 배지양의 10%씩 처리하여 추가적으로 0.5 ~ 1시간 37°C에서 반응 후, iMark microplate reader(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)를 이용하여, 450nm에서 흡광도를 측정하였으며 참조 흡광도는 650nm에서 측정하여 결과값을 보정하였다. 결과값은 세 번의 독립적 실험으로부터 평균값± 표준편차로 나타내었으며, 아래 [표 3]에 나타내었다. P<0.05는 Student's t-test를 통해 검증하였으며 결과값의 유의성을 나타낸다.

시료명		농도(ppm)	세포생존율(%)
실시예1	국화 및 목련 복합 발효물	100	103.7
		150	105.3
		200	104.7
비교예1	국화 온천수 추출물	100	105.1
		150	107.3
		200	106.4
	목련 온천수 추출물	100	98.8
		150	97.4
		200	97.0

상기 [표 3]의 결과를 통하여, 국화와 목련의 각 온천수 추출물 및 이들 복합 발효물은 피부세포에 독성을 주지 않는 안전한 성분임을 알 수 있다.

<시험예 2> 멜라닌 합성 저해 효과 시험

<실시예 1>, <비교예 1> 및 <비교예 2>를 통하여 제조한 발효물, 온천수 추출물을 시료로 하여 멜라닌 합성 저해 효과를 시험하였다.

B16F10 세포를 60mm culture dish에 3x10⁵개로 분주 후 <실시예 1>, <비교예 1> 및 <비교예 2>의 시료1 ~ 5의 배지에 200㎍/㎖ 농도로 처리하였다. 양성대조를 위해 멜라닌 합성을 촉진하는 호르몬인 α-MSH(Sigma-Aldrich)를 200nM의 농도로 동일세포에 처리하였다.

시료와 α-MSH를 B16F10 멜라노마 세포에 처리한 후 실온에서 48시간 세포를 배양시킨 뒤에 세포를 수확하여 PBS로 2회 세척 후 각 시료별로 멜라닌합성 저해율을 측정하였으며 결과를 아래 [표 4]에 나타내었다.

시료명		멜라닌 합성 저헤율(%)
실시예1	국화 및 목련 복합 발효물	49.8
비교예1	국화 온천수 추출물	21.4
비교예1	목련 온천수 추출물	31.2
비교예2	국화 발효물	32.7
비교예2	목련 발효물	36.1

상기 [표 4]에서 알 수 있는 바와 같이 멜라닌합성 저해율에 있어서, <실시예>에 해당하는 국화와 및 목련 복합 발효물이 <비교예 1> 및 <비교예 2>의 온천수 추출물, 발효물에 비해 훨씬 우수함을 알 수 있다.

<시험예 3> 항산화력 효과 시험

<실시예 1>, <비교예 1> 및 <비교예 2>를 통하여 제조한 발효물, 온천수 추출물을 시료로 하여 항산화력을 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)라디칼 소거 활성으로 측정하였다.

DPPH 라디칼 소거능은 Mensor 등의 방법을 참고하였다. 80㎕의 0.2mM DPPH 에탄올 용액을 제조예 1 내지 제조예 6의 발효액 시료에 20㎕ 가한 후 1분간 교반한 후 25℃ 인큐베이터에서 10분간 반응시켜 ELISA reader를 사용하여 517nm에서 흡광도를 측정하였다.

DPPH 라디칼 소거활성은 아래 [계산식 1]에 따라 백분율로 나타내었으며 그 결과를 아래 [표 5]로 나타내었다.

[계산식 1]

시료명		항산화효과 (DPPH소거 활성율,%)
실시예1	국화 및 목련 복합 발효물	83.6
비교예1	국화 온천수 추출물	43.9
비교예1	목련 온천수 추출물	35.4
비교예2	국화 발효물	59.2
비교예2	목련 발효물	49.5

DPPH 라디칼 소거활성의 수치가 높다는 것은 항산화 효과가 높다는 것을 의미하며, 이는 멜라닌 생합성 과정의 산화반응의 억제를 통한 멜라닌 생성을 억제하여 미백효과를 나타낸다는 것이다.

상기 [표 5]에 나타난 바와 같이 <실시예 1>의 경우, 매우 높은 DPPH 라디칼 소거활성 수치값이 측정되었으며, 이에 따라 본 발명의 국화 및 목련 복합 발효물이 국화 및 목련의 복합성분의 상승작용에 의해 우수한 항산화 효과가 나타내는 것을 확인할 수 있다.

<시험예 4> Tyrosinnase 저해 효과 시험

<실시예 1>, <비교예 1> 및 <비교예 2>를 통하여 제조한 발효물, 온천수 추출물을 시료로 하여 Tyrosinase 저해 활성(Tyrosinase inhibitation activity)을 측정하였다.

Tyrosinase 저해 활성은 농도 별 시료 100㎕에 0.2M potassium phosphate buffer(pH6.5) 50㎕, 2mM L-tyrosine 50㎕, mushroom tyrosinase(110U/ml) 10㎕를 혼합하여 37℃에서 20분간 반응시킨 후 490nm에서 Multiplate Reader를 사용하여 흡광도를 측정하였다. Tyrosinase 저해활성(Tyrosinase inhibition activity)은 아래[계산식 2]와 같이, 시료 무첨가구에 대한 시료 첨가구의 흡광도비로 계산하였으며 그 결과를 [도 1]에 나타내었다.

[계산식 2]

Tyrosinnase 저해활성 = {1-(A-B)/(C-D)}×100

상기 식에서 A: 시료 첨가구의 흡광도, B: 공시료의 흡광도, C: 대조군 흡광도, D: 대조군 공시료 흡광도이다.

첨부한 [도 1]에 나타난 바와 같이 <실시예 1>, <비교예 1> 및 <비교예 2>의 경우 타이로시나제 억제제의 함량이 많아 우수한 미백 효과를 나타낸다는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 <실시예 1>의 경우 매우 많은 타이로시나제 억제제의 함량에 의해 매우 우수한 미백효과를 보인다는 것을 확인할 수 있다.

<실시예 2>

상기 <실시예 1>를 통하여 제조한 발효물을 유효성분으로 하여 <실시예 2>의 수중유형 유화(O/W emulsion) 타입의 크림 제형의 화장품을 제조하였으며 <실시예 2>의 조성성분 및 성분은 아래 [표 6]에 나타내었다.

조성성분	실시예 2 조성비(중량%)
세토스테아릴알코올	3.0
글리세릴스테이레이트	2.0
세테아릴올리베이트, 솔비탄올리베이트	1.0
폴리글리세릴-3 메틸글루코스디스테아레이트	1.5
스큐알렌	5.0
에틸헥실올리베이트, 소듐아크릴레이트코폴리머, 폴리글리세릴-4올리에이트	0.5
아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머	0.3
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
세틸에칠헥사노에이트	5.0
디메치콘	0.5
부틸렌글리콜	5.0
글리세린	8.0
1,2헥산디올	2.0
암모니움아크롤로일디메틸타우레이트/브이피코폴리머	0.3
알지닌	0.3
소듐아크릴레이트,폴리솔베이트80	0.3
국화 및 목련 복합 유산균 발효물(실시예 1)	5.0
정제수	To 100

<비교예 3> 내지 <비교예 8>

<비교예 1> 및 <비교예 2>를 통하여 제조한 온천수 추출물 및 발효물을 유효성분 으로 하여 수중유형 유화(O/W emulsion) 타입의 크림 제형의 화장품을 제조하였으며 <비교예 3> 내지 <비교예 8>은 유효성분의 함량을 제외하고 첨가하는 조성성분 및 조성비는 상기 <실시예 2>와 동일하며, <비교예 3>은 활성성분을 첨가하지 않았으며, <비교예 4> 내지 <비교예 8>의 유효성분의 조성 및 조성비는 아래 [표 7]에 나타내었다.

유효성분		조성비(화장품 조성물 총중량 기준 중량%)
유효성분		비교예4	비교예5	비교예6	비교예7	비교예8
비교예1	국화 온천수 추출물	5.0
비교예1	목련 온천수 추출물		5.0
비교예2	국화 발효추출물			5.0		1.25
비교예2	목련 발효추출물				5.0	1.25

<시험예 5>

상기 <실시예 2>, <비교예 3> 내지 <비교예 8>의 수중유형 유화(O/W emulsion) 타입의 크림 제형의 화장품에 피부자극성 정도를 비교하기 위하여 인체에 대한 폐쇄첩포 시험(closed patch test)을 실시하였다.

건강한 성인 남녀 20명을 대상으로 하박부 안쪽에 각각의 시료를 0.2g씩 첩포하고 24시간 후 핀챔버를 제거한 후 4시간 경과한 다음 육안으로 피부상태를 확인하고, 그 결과를 아래 [표 8]에 나타내었다. 피부자극도는 하기 [계산식 3]에 의해 계산하였다.

[계산식 3]

피부자극도 = {(+-)수×1}+{(+)수×2}+{(++)수×3}/피험자수

시료명	피시험자수	판정결과				자극도
시료명	피시험자수	-	+ -	+	+ +	자극도
실시예2	20명	20	0	-	-	0.00
비교예3		20	0	-	-	0.00
비교예4		20	0	-	-	0.00
비교예5		20	0	-	-	0.00
비교예6		19	1	-	-	0.05
비교예7		20	0	-	-	0.00
비교예8		20	0	-	-	0.00
-:홍반이나 특이사항 없음, +-:주위보다 약간 붉어짐, +:주위보다 현저히 붉어짐 ++:주위보다 심히게 붉어지고 부풀어 오름

상기 [표 8에]에 나타낸 바와 같이, 국화와 목련의 각 온천수 추출물이나, 복합 발효물을 함유하는 화장품 조성물은 피부자극도가 매우 낮은 것으로 확인할 수가 있었다.

<시험예 6>

상기 <실시예 2>, <비교예 3> 및 <비교예 8>에 대하여 실제 사용 시 피부 미백효과 및 주름개선효과를 알아보기 위하여 건강한 30 ~ 55세 성인여성 100명에 대하여 각각 <실시예 2>, <비교예 3> 및 <비교예 8>의 3그룹으로 나누어 인체 사용성 시험을 실시하였다.

상기<실시예 2>, <비교예 3> 및 <비교예 8>의 조성으로 제조된 시험품 50g씩을 설문지와 함께 나눠주고 아침과 저녁에 하루 2회씩 총 8주간 사용하게 한 후 설문지를 회수하여 분석하였다.

총 100명의 시험대상자 중 <실시예 2> 그룹의 34명, <비교예 > 그룹의 33명 <비교예 8> 그룹의 각 33명의 설문지를 회수하여 분석한 결과를 아래 [표 9]에 나타내었다.

구분		응답자 수
구분		매우 악화됨	약간 악화됨	변화없음	약간 좋아짐	매우 좋아짐
피부색 변화정도	실시예2	-	-	11	13	10
	비교예3	-	1	23	9	-
	비교예8	-	1	22	10	-
피부 탄력감 변화정도	실시예2	-	-	5	24	5
	비교예3	-	-	20	13	-
	비교예8	-	-	20	13	-
피부 주름 변화 정도	실시예2	-	-	7	19	8
	비교예3	-	-	19	14	-
	비교예8	-	-	23	10	-

상기 [표 9]에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 복합 발효물을 함유하는 <실시예 2>의 크림 제형 화장료 조성물이 <비교예 5> 또는 <비교예 10>의 크림에 비하여 피부색, 피부탄력감, 피부주름개선 효능에 대한 사용자의 만족도가 높은 것을 확인할 수가 있다.

Claims

국화 1 ~ 10중량부에 대하여 목련 1 ~ 10중량부로 조합하여 온천수로 추출한 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 0.01 ~ 20중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피부미백 및 피부주름 개선용 화장료 조성물.
삭제
삭제
청구항 1에 있어서, 국화 및 목련 온천수 추출물은 유성온천수 추출물이고, 유산균 발효물은 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 레우트리(Lactobacillus reuteri), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비포도박테리움 브레이브(Bifodobacterium breve) 및 비포도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 유산균으로 발효시킨 유산균 발효물인 것을 특징으로 하는 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물.
청구항 4에 있어서, 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물이 항산화효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물.
청구항 1 또는 청구항 4 또는 청구항 5에 있어서, 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물이 화장수, 로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 겔, 세럼, 팩, 및 에멀젼 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물.
a). 국화 1 ~ 10중량부와 목련 1 ~ 10중량부를 조합하고 온천수 또는 온천수와 알코올의 혼합용매로 추출하여 국화 및 목련 온천수 추출물을 얻는 제1공정,
b). 상기 제1공정의 추출물을 유산균으로 발효시켜 국화 및 목련 추출물의 유산균 발효물을 얻는 제2공정 및
c). 상기 제2공정의 유산균 발효물을 화장료 조성물 총중량에 대하여 0.01 내지 20.0중량% 함유하는 화장료 조성물을 제조하는 제3공정을 포함하는 것을 특징으로 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물의 제조방법.
청구항 7에 있어서, 제1공정의 온천수는 유성온천수이고, 탄소수 1 ~ 4의 저급알코올은 메탄올, 메탄올 수용액, 에탄올, 에탄올 수용액, 노말 프로판올, 이소-프로판올, 노말 부탄올, 1,3-부틸렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜로부터 선택되는 하나 이상의 성분인 것을 특징으로 하는 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물의 제조방법.
청구항 8에 있어서, 제2공정의 유산균은 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 레우트리(Lactobacillus reuteri), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비포도박테리움 브레이브(Bifodobacterium breve) 및 비포도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 유산균인 것을 특징으로 하는 피부미백 및 피부 주름개선용 화장료 조성물의 제조방법.