KR102264231B1

KR102264231B1 - 생체고분자와 금속-유기 프레임워크가 결합된 복합체 및 이의 용도

Info

Publication number: KR102264231B1
Application number: KR1020190087878A
Authority: KR
Inventors: 유자형; 최원영; 김기범; 이성민
Original assignee: 울산과학기술원
Priority date: 2019-07-19
Filing date: 2019-07-19
Publication date: 2021-06-11
Anticipated expiration: 2039-07-19
Also published as: KR20210010226A

Abstract

생체고분자와 금속-유기 프레임워크가 결합된 복합체, 약학적 조성물 및 개체의 암을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것으로, 일 양상에 따른 금속-유기 프레임워크 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 의하면, 표적 세포로의 표적능이 높아 타켓으로 하는 세포로 효과적으로 전달될 수 있고, 화학 요법뿐만 아니라 광 역학 요법까지 이용할 수 있어 표적 치료제로서 유용하게 사용될 수 있는 효과가 있다. 또한 다른 양상에 따른 암을 치료하는 방법에 의하면, 암을 효율적으로 치료할 수 있다.

Description

생체고분자와 금속-유기 프레임워크가 결합된 복합체 및 이의 용도{Biopolymers and metal-organic frameworks conjugated complexes and uses thereof}

생체고분자와 금속-유기 프레임워크가 결합된 복합체, 약학적 조성물 및 개체의 암을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

금속-유기 프레임워크(metal-organic frameworks, MOFs)는 금속 이온 또는 금속 이온 클러스터가 유기 리간드와 배위결합을 통해 형성된 결정성 유무기 하이브리드 고분자이다. 다공성 배위결합 고분자(porous coordination polymers, PCPs)라고도 불리는 MOFs는 규칙적인 세공구조와 높은 비표면적을 가지며 리간드와 금속이온의 선택을 통해 다양한 구조로 합성될 수 있다. 일반적으로 유기 리간드의 크기를 조절 함으로써 수 Å에서 나노미터까지 세공의 크기를 조절할 수 있고 적절한 금속 이온을 선택하거나 유기 리간드에 작용기를 도입하여 세공의 표면 성질을 제어할 수 있다. 특히 탈수나 탈용매시 구조 내부에 형성되는 불포화 금속 자리는 기체 분자 또는 손님 분자(guest molecules)의 흡착자리로 작용한다. 이러한 특징들을 바탕으로 연료 가스 흡착 및 저장 재료, 촉매, 센서, 합성 매질, 약물전달매체, 양성자 전도체 등의 개발을 위해 활발히 연구되고 있다. 하지만 많은 발전에도 불구하고 여전히 낮은 열적·화학적·기계적 안정성으로 인해 연구분야를 벗어나 산업으로의 도입은 주춤하고 있는 실정이다. 이를 해결하기 위해 제올라이트 유사 구조체(zeolitic imidazolate frameworks, ZIFs) 또는 유기 골격 구조체(covalent organic frameworks, COFs)등이 개발 되고 있지만 이들 역시 입자 크기가 작은 분말 형태로 얻어 지는 경우가 많고 응집으로 인한 비활성화 문제가 제기되고 있다.

따라서 MOFs의 특성을 개선하고 새로운 기능을 부여하기 위한 새로운 전략으로 다양한 소재와 융합하여 복합체(composites)로 만드는 연구가 진행 중이다.

이에 따라 본 발명자들은 세포 표적기능을 가지는 MOFs의 표면에 생체고분자가 결합된 복합체를 제공한다.

일 양상은 표면에 생체고분자가 결합되어 있고 유기분자 사이에 금속 이온이 결합되어 다공성인 3차원 구조를 갖는 금속-유기 프레임워크(Metal-Organic framework: MOFs)를 제공하는 것이다.

다른 양상은 항암제를 포함하는, 표면에 생체고분자가 결합되어 있는 금속-유기 프레임워크(Metal-Organic framework: MOFs)를 활성 성분으로서 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 상기한 약학적 조성물을 암을 예방 또는 치료하기에 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

일 양상은 표면에 생체고분자가 결합되어 있고 유기분자 사이에 금속 이온이 결합되어 다공성인 3차원 구조를 갖는 금속-유기 프레임워크(Metal-Organic framework: MOFs)를 제공한다.

본 발명에서 상기 생체고분자는 생체 내에서 분해되는(biodegradable) 생분해성 및 생체 적합성을 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.

용어 "생분해성"은 블럭 공중합체가 신체 내에서 화학적으로 분해되어서 비독성 화합물을 형성할 수 있음을 의미할 수 있다. 분해속도는 약물 방출 속도와 동일 또는 상이할 수 있다. 그리고 "생체적합성"이란 바람직하지 않은 후속효과 없이 인체와 상호작용하는 특성을 의미할 수 있다.

본 명세서에서 용어 "금속-유기 프레임워크(Metal-Organic framework: MOFs)"은 금속이온 또는 이온 클러스터가 유기분자와 배위해서 1-, 2- 또는 3-차원 구조의 유기물/무기물 하이브리드 물질이며 다공성일 수 있다.

상기 금속 이온은 순금속 또는 전해 금속일 수 있고, 순금속 또는 전해 금속의 예에는 비제한적으로 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 철(Fe), 구리(Cu), 아연(Zn), 갈륨(Ga), 게르마늄(Ge), 셀레늄(Se), 스트론튬(Sr), 지르코늄(Zr), 몰리브덴(Mo), 은(Ag) 또는 백금(Pt)이 포함될 수 있다.

상기 유기분자와 금속 이온은 배위결합에 의해 결합되어 있는 것일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 생체고분자는 자극 민감성 고분자인 것일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 생체고분자는 세포표면에 발현된 수용체와 상호작용하는 것일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 세포는 암 세포인 것일 수 있다.

본 명세서에서 용어 "자극 민감성 고분자"은 외부자극에 의해 감응하여 연속적으로 또는 불연속적으로 물성 변화를 보이는 고분자를 의미할 수 있다. 외부 자극으로는 pH, 이온 및 대사물 등에 의한 화학적 또는 생화학적 자극과, 온도, 빛, 전기장, 용매 및 세포 간 상호작용 등에 의한 물리적 자극이 있을 수 있다.

상기 암 세포 표면에 발현된 수용체의 예에는 비제한적으로 CD44, CD133, CD166, CD19, CD20, CD21, CD22, CD45, BCMA, MART-1, MAGE-A3, 당단백질 100 (gp100), NY-ESO-1, HER2 (ErbB2), IGF2B3, EGFRvIII, 칼리크레인 4, KIF20A, Lengsin, Meloe, MUC-1, MUC5AC, MUC-16, B7-H3, B7-H6, CD70, CEA, CSPG4, EphA2, EpCAM, EGFR 패밀리, FAP, FRα, 글루피칸-3, GD2, GD3, HLA-A1+MAGE1, IL-11Rα, IL-23Rα2, 루이스-Y, 메소텔린, NKG2D 리간드, PSMA, ROR1, 서바이빈, TAG72 또는 VEGFR2가 포함될 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 고분자는 내포작용에 의해 세포 내로 흡수되어 효소에 의해 분해됨으로써 담지된 약물을 방출할 수 있는 것일 수 있다.

본 명세서에서 용어 "내포작용" 세포 밖의 물질을 세포막으로 감싸 소낭으로 만들어 세포 안으로 끌어들이는 물질 이동 방식을 의미할 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 생체고분자는 히알루론산(Hyaluronic acid, HA), 플루란(pullulan), 커드란(curdlan), 펙틴(pectin), 헤파린(Heparin), 키토산(chitosan), 메틸셀룰로오스(methyl cellulose), 폴리비닐알코올(poly(vinyl alcohol)), 덱스트란(dextran), 전분(starch), 아가로오스(agarose), 폴리-L-라이신, 폴리아스파르트산, 및 이들의 유도체로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 것일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 금속-유기 프레임워크는 MIL-88A, MIL-88Bt, MIL-89, MIL-127, MIL-101, MIL-100, MIL-53, MOF-74, UiO-66, UiO-67, ZIF-8, ZIFs, HKUST-1, M₂(dobpdc), NU-1000, PCN-222, PCN-224 및 이들의 유도체들로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나를 포함하는 것일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 유기분자는 광감작제(photosensitizer)로써, 일중항산소를 생성할 수 있는 것일 수 있다.

본 명세서에서 용어 "광감작제(photosensitizer)"는 빛에 의해 활성화되어 광화학반응을 할 수 있는 물질일 수 있다. 광촉매, 광역학치료 등에 사용되는 유기 분자에서 삼중항 여기 상태를 발생시키는데 사용될 수 있다. 주로 암 치료에서 인체에 투입된 후 광 조사에 의해 일중항산소를 발생시켜 세포를 사멸시키는데 사용될 수 있다.

본 명세서에서 용어 "일중항산소"는 산소분자에 있는 2개의 π^* 궤도 중 한쪽에만 전자가 옮겨진 상태의 산소일 수 있으며, 여기된 상태에 있기 때문에 반응성이 매우 높을 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 금속-유기 프레임워크는 약물이 담지되어 있는 것일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 약물은 항암제인 것일 수 있다.

상기 항암제는 아바렐릭스 [abarelix (Plenaxis depot^®)]; 알데스류킨 [aldesleukin (Prokine^®)]; 알데스류킨 [Aldesleukin (Proleukin^®)]; 알렘투주맙 [Alemtuzumabb (Campath^®)]; 알리트레티노인 [alitretinoin (Panretin^®)]; 알로퓨리놀 [allopurinol (Zyloprim^®)]; 알트레타민 [altretamine (Hexalen^®)]; 아미포스틴 [amifostine (Ethyol^®)]; 아나스트로졸 [anastrozole (Arimidex^®)]; 아르세닉 트리옥사이드 [arsenic trioxide (Trisenox^®)]; 아스파라기나아제 [asparaginase (Elspar^®)]; 아자시티딘 [azacitidine (Vidaza^®)]; 베바쿠지맙 [bevacuzimab (Avastin^®)]; 벡사로텐 캡슐 [bexarotene capsules (Targretin^®)]; 벡사로텐 겔 [bexarotene gel (Targretin^®)]; 블레오마이신 [bleomycin (Blenoxane^®)]; 보르테조밉 [bortezomib (Velcade^®)]; 정맥용 부술판 [busulfan intravenous (Busulfex^®)]; 경구용 부술판 [busulfan oral (Myleran^®)]; 칼루스테론 [calusterone (Methosarb^®)]; 카페시타빈 [capecitabine (Xeloda^®)]; 카르보플라틴 [carboplatin (Paraplatin^®)]; 카르무스틴 [carmustine (BCNU^®, BiCNU^®)]; 카르무스틴 [carmustine (Gliadel^®)]; 카르무스틴과 폴리페프로산 20 임플란트 (Polifeprosan 20 Implant) (Gliadel Wafer^®); 셀레콕십 [celecoxib (Celebrex^®)]; 세툭시맙 [cetuximab (Erbitux^®)]; 클로람부실 [chloambucil (Leukeran^®)]; 시스플라틴 [cisplatin (Platinol^®)]; 클라드리빈 [cladribine (Leustatin^®) 2-CdA^®]; 클로파라빈 [clofarabine (Clolar^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan^®, Neosar^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan Injection^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan Tablet^®)]; 사이타라빈 [cytarabine (Cytosar-U^®)]; 사이타라빈 리포조말 [cytarabine liposomal (DepoCyt^®)]; 다카르바진 [dacarbazine (DTIC-Dome^®)]; 닥티노마이신 (dactinomycin), 액티노마이신 D [actinomycinD (Cosmegen^®)]; 다르베포에틴 알파 [Darbepoetin alfa (Aranesp^®)]; 다우노루비신 리포조말 [daunorubicin liposomal (Danuoxome^®)]; 다우노루비신 (daunorubicin), 다우노마이신 [daunomycin (Daunorubicin^®)]; 다우노루비신 (daunorubicin), 다우노마이신 [daunomycin (Cerubidine^®)]; 데니류킨 디프티톡스 [Denileukin diftitox (Ontak^®)]; 덱스라조산 [dexrazoxane (Zinecard^®)]; 도세탁셀 [docetaxel (Taxotere^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin PFS^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin^®, Rubex^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin PFS Injection^®)]; 독소루비신 리포조말 [doxorubicin liposomal (Doxil^®)]; 드로모스타놀론 프로피오네이트 [dromostanolone propionate (dromostanolone^®)]; 드로모스타놀론 프로피오네이트 [dromostanolone propionate (masterone injection^®)]; 엘리엇 B 용액 [Elliott's B Solution (Elliott's B Solution^®)]; 에피루비신 [epirubicin (Ellence^®)]; 이포에틴 알파 [Epoetin alfa (epogen^®)]; 에를로티닙 [erlotinib (Tarceva^®)]; 에스트라무스틴 [estramustine (Emcyt^®)]; 에토포사이드 포스페이트 [etoposide phosphate (Etopophos^®)]; 에토포사이드 (etoposide), VP-16 (Vepesid^®); 엑세메스탄 [exemestane (Aromasin^®)]; 필그라스팀 [Filgrastim (Neupogen^®)]; 플록수리딘 [floxuridine (intraarterial) (FUDR^®)]; 플루다라빈 [fludarabine (Fludara^®)]; 플루오로우라실 [Fluorouracil, 5-FU (Adrucil^®)]; 플루베스트란트 [folvestrant (Faslodex^®)]; 게피티닙 [gefitinib (Iressa^®)]; 겜시타빈 [gemcitabine (Gemzar^®)]; 겜투주맙 오조가미신 [gemtuzumab ozogamicin (Mylotarg^®)]; 고세렐린 아세테이트 [goserelin acetate (Zoladex Implant^®)]; 고세렐린 아세테이트 [goserelin acetate (Zoladex^®)]; 히스트렐린 아세테이트 [histrelin acetate (Histrelin implant^®)]; 하이드록시우레아 [hydroxyurea (Hydrea^®)]; 이브리투모맙 티욱세탄 [Ibritumomab Tiuxetan (Zevalin^®)]; 이다루비신 [idarubicin (Idamycin^®)]; 이포스파미드 [ifosfamide (IFEX^®)]; 이마티닙 메실레이트 [imatinib mesylate (Gleevec^®)]; 인터페론 알파-2a [interferon alfa-2a (Roferon A^®)]; 인터페론 알파-2b [Interferon alfa-2b (Intron A^®)]; 이리노테칸 [irinotecan (Camptosar^®)]; 레날리도마이드 [lenalidomide (Revlimid^®)]; 레트로졸 [letrozole (Femara^®)]; 류코보린 [leucovorin (Wellcovorin^®, Leucovorin^®)]; 류프롤리드 아세테이트 [Leuprolide Acetate (Eligard^®)]; 레바미솔 [levamisole (Ergamisol^®)]; 로무스틴-CCNU [lomustine-CCNU (CeeBU^®)]; 메클로레타민 (meclorethamine), 니트로겐 머스타드 [nitrogen mustard (Mustargen^®)]; 메게스트롤 아세테이트 [megestrol acetate (Megace^®)]; 멜파란 (melphalan), L-PAM (Alkeran^®); 머캅토퓨린 [mercaptopurine, 6-MP (purinethol^®)]; 메스나 [mesna (Mesnex^®)]; 메스나 [mesna (Mesnex tabs^®)]; 메토트렉제이트 [methotraxate (methotraxate^®)]; 메톡스살렌 [methoxsalen (Uvadex^®)]; 미토마이신 C [mitomycin C (Mutamycin^®)]; 미토탄 [mitotane (Lysodren^®)]; 미토잔트론 [mitoxantrone (Novantrone^®)]; 난드롤란 펜프로피오네이트 [nandrolone phenpropionate (Durabolin-50^®)]; 넬라라빈 [nelarabine (Arranon^®)]; 노페투모맙 [Nofetumomab (Verluma^®)]; 오프렐베킨 [Oprelvekin (Neumega^®)]; 옥살리플라틴 [oxaliplatin (Eloxatin^®)]; 파클리탁셀 [paclitaxel (Paxene^®)]; 파클리탁셀 [paclitaxel (Taxol^®)]; 파클리탁셀 단백질 결합 입자 [paclitaxel protein-bound particles (Abraxane^®)]; 팔리페르민 [palifermin (Kepivance^®)]; 파미드로네이트 [pamidronate (Aredia^®)]; peg아데마스 [pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)^®)]; peg아스파르가아제 [pegaspargase (Oncaspar^®)]; peg필그라스팀 [Pegfilgrastim (Neulasta^®)]; 페멕트렉제트 디소듐 [pemetrexed disodium (Alimta^®)]; 펜토스타틴 [pentostatin (Nipent^®)]; 피포브로만 [pipobroman (Vercyte^®)]; 플리카마이신 [plicamycin], 미트라마이신 [mithramycin (Mithracin^®)]; 포르피머 소듐 [porfimer sodium (Photofrin^®)]; 프로카르바진 [procarbazine (Matulane^®)]; 퀴나크린 [quinacrine (Atabrine^®)]; 라스뷰리카아제 [Rasburicase (Elitek^®)]; 리툭시맙 [Rituximab (Rituxan^®)]; 사르그라모스팀 [sargramostim (Leukine^®)]; 사르그라모스팀 [Sargramostim (Prokine^®)]; 소라페닙 [sorafenib (Nexavar^®)]; 스트렙타조신 [streptozocin (Zanosar^®)]; 수니티닙 말리에이트 [sunitinib maleate (Sutent^®)]; 탈크 [talc (Sclerosol^®)]; 타목시펜 [tamoxifen (Nolvadex^®)]; 테모졸로마이드 [temozolomide (Temodar^®)]; 테니포사이드 [teniposide, VM-26 (Vumon^®)]; 테스톨락톤 [testolactone (Teslac^®)]; 티오구아닌 [thioguanine, 6-TG (thioguanine^®)]; 티오테파 [thiotepa (thioplex^®)]; 토포테칸 [topotecan (Hycamtin^®)]; 토레미펜 [toremifene (Fareston^®)]; 토시투모맙 [Tositumomab (Bexxar^®)]; 토시투모맙/I-131 토시투모맙 (Bexxar^®); 트라스투주맙 [Trastuzumab (Herceptin^®)]; 트레티노인 [tretinoin, ATRA (Vesanoid^®)]; 우라실 머스타드 [Uracil Mustard (Uracil Mustard Capsules^®)]; 발루비신 [valrubicin (Valstar^®)]; 빈블라스틴 [vinblastine (Velban^®)]; 빈크리스틴 [vincristine (Oncovin^®)]; 비노렐빈 [vinorelbine (Navelbine^®)]; 졸레드로네이트 [zoledronate (Zometa^®)], 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 이들의 혼합물 등을 포함할 수 있다.

또 다른 양상은 항암제를 포함하는, 표면에 생체고분자가 결합되어 있는 금속-유기 프레임워크(Metal-Organic framework: MOFs)를 활성 성분으로서 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

용어 "약학적 조성물"은, 대상체로의 투여 시에 몇몇 유리한 효과를 부여하는 분자 또는 화합물을 지칭할 수 있다. 유리한 효과는 진단적 결정을 가능하게 하는 것; 질병, 증상, 장애 또는 병태의 개선; 질병, 증상, 장애 또는 질환의 발병의 감소 또는 예방; 및 일반적으로 질병, 증상, 장애 또는 병태의 대응을 포함할 수 있다.

상기 암은 폐암(예를 들면, 비소세포성 폐암), 췌장암, 위암, 간암, 대장암, 뇌암, 유방암, 갑상선암, 방광암, 식도암, 또는 자궁암일 수 있다. 또한, 상기 암은 항암제에 대한 내성(예를 들면, 다제 내성)을 갖는 위암, 유방암, 폐암, 간암, 식도암 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것일 수 있다.

상기 약학적 조성물은 임상투여시 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 비경구 투여는 직장, 정맥, 복막, 근육, 동맥, 경피, 비강(Nasal), 흡입, 안구 및 피하와 같은 경구 이외의 투여경로를 통한 투여를 의미할 수 있다. 본 발명의 상기 약학적 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

상기 활성 성분을 개체 내로 전달할 수 있는 약학적 활성 성분의 종류는 항암제, 조영제(염료), 호르몬제, 항호르몬제, 비타민제, 칼슘제, 무기질 제제, 당류제, 유기산 제제, 단백질 아미노산 제제, 해독제, 효소 제제, 대사성 제제, 당뇨 병용제, 조직 부활 용약, 클로로필 제제, 색소제제, 종양 용약, 종양 치료제, 방사성 의약품, 조직 세포 진단제, 조직 세포 치료제, 항생 물질 제제, 항바이러스제, 복합항생물질제제, 화학요법제, 백신, 독소, 톡소이드, 항독소, 렙토스피라혈청, 혈액 제제, 생물학적 제제, 진통제, 면역원성 분자, 항히스타민제, 알레르기 용약, 비특이성 면역원 제제, 마취제, 각성제, 정신 신경 용제, 저분자 화합물, 핵산, 앱타머, 안티센스 핵산, 올리고뉴클레오타이드, 펩타이드, siRNA 및 마이크로 RNA 등을 포함할 수 있다.

상기 약학적 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(Witepsol), 마크로골, 트윈(Tween) 61, 카카오지, 리우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 상기 약학적 조성물은 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 전달체(Carrier)와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 탄수화물, 아스코르브산(Ascorbic acid) 또는 글루타치온(Glutathione)과 같은 항산화제(Antioxidants), 킬레이트화제(Chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제(Stabilizers)들이 약제로 사용될 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 항암제는 아바렐릭스 [abarelix (Plenaxis depot^®)]; 알데스류킨 [aldesleukin (Prokine^®)]; 알데스류킨 [Aldesleukin (Proleukin^®)]; 알렘투주맙 [Alemtuzumabb (Campath^®)]; 알리트레티노인 [alitretinoin (Panretin^®)]; 알로퓨리놀 [allopurinol (Zyloprim^®)]; 알트레타민 [altretamine (Hexalen^®)]; 아미포스틴 [amifostine (Ethyol^®)]; 아나스트로졸 [anastrozole (Arimidex^®)]; 아르세닉 트리옥사이드 [arsenic trioxide (Trisenox^®)]; 아스파라기나아제 [asparaginase (Elspar^®)]; 아자시티딘 [azacitidine (Vidaza^®)]; 베바쿠지맙 [bevacuzimab (Avastin^®)]; 벡사로텐 캡슐 [bexarotene capsules (Targretin^®)]; 벡사로텐 겔 [bexarotene gel (Targretin^®)]; 블레오마이신 [bleomycin (Blenoxane^®)]; 보르테조밉 [bortezomib (Velcade^®)]; 정맥용 부술판 [busulfan intravenous (Busulfex^®)]; 경구용 부술판 [busulfan oral (Myleran^®)]; 칼루스테론 [calusterone (Methosarb^®)]; 카페시타빈 [capecitabine (Xeloda^®)]; 카르보플라틴 [carboplatin (Paraplatin^®)]; 카르무스틴 [carmustine (BCNU^®, BiCNU^®)]; 카르무스틴 [carmustine (Gliadel^®)]; 카르무스틴과 폴리페프로산 20 임플란트 (Polifeprosan 20 Implant) (Gliadel Wafer^®); 셀레콕십 [celecoxib (Celebrex^®)]; 세툭시맙 [cetuximab (Erbitux^®)]; 클로람부실 [chloambucil (Leukeran^®)]; 시스플라틴 [cisplatin (Platinol^®)]; 클라드리빈 [cladribine (Leustatin^®) 2-CdA^®]; 클로파라빈 [clofarabine (Clolar^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan^®, Neosar^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan Injection^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan Tablet^®)]; 사이타라빈 [cytarabine (Cytosar-U^®)]; 사이타라빈 리포조말 [cytarabine liposomal (DepoCyt^®)]; 다카르바진 [dacarbazine (DTIC-Dome^®)]; 닥티노마이신 (dactinomycin), 액티노마이신 D [actinomycinD (Cosmegen^®)]; 다르베포에틴 알파 [Darbepoetin alfa (Aranesp^®)]; 다우노루비신 리포조말 [daunorubicin liposomal (Danuoxome^®)]; 다우노루비신 (daunorubicin), 다우노마이신 [daunomycin (Daunorubicin^®)]; 다우노루비신 (daunorubicin), 다우노마이신 [daunomycin (Cerubidine^®)]; 데니류킨 디프티톡스 [Denileukin diftitox (Ontak^®)]; 덱스라조산 [dexrazoxane (Zinecard^®)]; 도세탁셀 [docetaxel (Taxotere^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin PFS^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin^®, Rubex^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin PFS Injection^®)]; 독소루비신 리포조말 [doxorubicin liposomal (Doxil^®)]; 드로모스타놀론 프로피오네이트 [dromostanolone propionate (dromostanolone^®)]; 드로모스타놀론 프로피오네이트 [dromostanolone propionate (masterone injection^®)]; 엘리엇 B 용액 [Elliott's B Solution (Elliott's B Solution^®)]; 에피루비신 [epirubicin (Ellence^®)]; 이포에틴 알파 [Epoetin alfa (epogen^®)]; 에를로티닙 [erlotinib (Tarceva^®)]; 에스트라무스틴 [estramustine (Emcyt^®)]; 에토포사이드 포스페이트 [etoposide phosphate (Etopophos^®)]; 에토포사이드 (etoposide), VP-16 (Vepesid^®); 엑세메스탄 [exemestane (Aromasin^®)]; 필그라스팀 [Filgrastim (Neupogen^®)]; 플록수리딘 [floxuridine (intraarterial) (FUDR^®)]; 플루다라빈 [fludarabine (Fludara^®)]; 플루오로우라실 [Fluorouracil, 5-FU (Adrucil^®)]; 플루베스트란트 [folvestrant (Faslodex^®)]; 게피티닙 [gefitinib (Iressa^®)]; 겜시타빈 [gemcitabine (Gemzar^®)]; 겜투주맙 오조가미신 [gemtuzumab ozogamicin (Mylotarg^®)]; 고세렐린 아세테이트 [goserelin acetate (Zoladex Implant^®)]; 고세렐린 아세테이트 [goserelin acetate (Zoladex^®)]; 히스트렐린 아세테이트 [histrelin acetate (Histrelin implant^®)]; 하이드록시우레아 [hydroxyurea (Hydrea^®)]; 이브리투모맙 티욱세탄 [Ibritumomab Tiuxetan (Zevalin^®)]; 이다루비신 [idarubicin (Idamycin^®)]; 이포스파미드 [ifosfamide (IFEX^®)]; 이마티닙 메실레이트 [imatinib mesylate (Gleevec^®)]; 인터페론 알파-2a [interferon alfa-2a (Roferon A^®)]; 인터페론 알파-2b [Interferon alfa-2b (Intron A^®)]; 이리노테칸 [irinotecan (Camptosar^®)]; 레날리도마이드 [lenalidomide (Revlimid^®)]; 레트로졸 [letrozole (Femara^®)]; 류코보린 [leucovorin (Wellcovorin^®, Leucovorin^®)]; 류프롤리드 아세테이트 [Leuprolide Acetate (Eligard^®)]; 레바미솔 [levamisole (Ergamisol^®)]; 로무스틴-CCNU [lomustine-CCNU (CeeBU^®)]; 메클로레타민 (meclorethamine), 니트로겐 머스타드 [nitrogen mustard (Mustargen^®)]; 메게스트롤 아세테이트 [megestrol acetate (Megace^®)]; 멜파란 (melphalan), L-PAM (Alkeran^®); 머캅토퓨린 [mercaptopurine, 6-MP (purinethol^®)]; 메스나 [mesna (Mesnex^®)]; 메스나 [mesna (Mesnex tabs^®)]; 메토트렉제이트 [methotraxate (methotraxate^®)]; 메톡스살렌 [methoxsalen (Uvadex^®)]; 미토마이신 C [mitomycin C (Mutamycin^®)]; 미토탄 [mitotane (Lysodren^®)]; 미토잔트론 [mitoxantrone (Novantrone^®)]; 난드롤란 펜프로피오네이트 [nandrolone phenpropionate (Durabolin-50^®)]; 넬라라빈 [nelarabine (Arranon^®)]; 노페투모맙 [Nofetumomab (Verluma^®)]; 오프렐베킨 [Oprelvekin (Neumega^®)]; 옥살리플라틴 [oxaliplatin (Eloxatin^®)]; 파클리탁셀 [paclitaxel (Paxene^®)]; 파클리탁셀 [paclitaxel (Taxol^®)]; 파클리탁셀 단백질 결합 입자 [paclitaxel protein-bound particles (Abraxane^®)]; 팔리페르민 [palifermin (Kepivance^®)]; 파미드로네이트 [pamidronate (Aredia^®)]; peg아데마스 [pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)^®)]; peg아스파르가아제 [pegaspargase (Oncaspar^®)]; peg필그라스팀 [Pegfilgrastim (Neulasta^®)]; 페멕트렉제트 디소듐 [pemetrexed disodium (Alimta^®)]; 펜토스타틴 [pentostatin (Nipent^®)]; 피포브로만 [pipobroman (Vercyte^®)]; 플리카마이신 [plicamycin], 미트라마이신 [mithramycin (Mithracin^®)]; 포르피머 소듐 [porfimer sodium (Photofrin^®)]; 프로카르바진 [procarbazine (Matulane^®)]; 퀴나크린 [quinacrine (Atabrine^®)]; 라스뷰리카아제 [Rasburicase (Elitek^®)]; 리툭시맙 [Rituximab (Rituxan^®)]; 사르그라모스팀 [sargramostim (Leukine^®)]; 사르그라모스팀 [Sargramostim (Prokine^®)]; 소라페닙 [sorafenib (Nexavar^®)]; 스트렙타조신 [streptozocin (Zanosar^®)]; 수니티닙 말리에이트 [sunitinib maleate (Sutent^®)]; 탈크 [talc (Sclerosol^®)]; 타목시펜 [tamoxifen (Nolvadex^®)]; 테모졸로마이드 [temozolomide (Temodar^®)]; 테니포사이드 [teniposide, VM-26 (Vumon^®)]; 테스톨락톤 [testolactone (Teslac^®)]; 티오구아닌 [thioguanine, 6-TG (thioguanine^®)]; 티오테파 [thiotepa (thioplex^®)]; 토포테칸 [topotecan (Hycamtin^®)]; 토레미펜 [toremifene (Fareston^®)]; 토시투모맙 [Tositumomab (Bexxar^®)]; 토시투모맙/I-131 토시투모맙 (Bexxar^®); 트라스투주맙 [Trastuzumab (Herceptin^®)]; 트레티노인 [tretinoin, ATRA (Vesanoid^®)]; 우라실 머스타드 [Uracil Mustard (Uracil Mustard Capsules^®)]; 발루비신 [valrubicin (Valstar^®)]; 빈블라스틴 [vinblastine (Velban^®)]; 빈크리스틴 [vincristine (Oncovin^®)]; 비노렐빈 [vinorelbine (Navelbine^®)]; 및 졸레드로네이트 [zoledronate (Zometa^®)]로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.

또 다른 양상은 상기 약학적 조성물을 암을 예방 또는 치료하기에 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.

상기 개체는 포유동물일 수 있다. 상기 포유동물은 사람, 개, 고양이, 소, 염소, 또는 돼지일 수 있다.

상기 투여는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 예를 들어 점안 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경피 패치투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여 등의 경로를 통해 투여될 수 있고, 구체적으로 점안 투여의 경로 등을 통해 목적하는 바에 따라 투여될 수 있다.

본원에 사용되는 바와 같이, "치료" 또는 "치료하는" 또는 "완화하는" 또는 "개선하는"은 상호교환가능하게 사용된다. 이들 용어는 치료 이익 및/또는 예방 이익을 포함하나 이들에 한정되지 않는 유리한 또는 요망되는 결과를 수득하는 방법을 지칭한다. 치료 이익은 치료 하의 하나 이상의 질병, 질환 또는 증상의 임의의 치료적으로 유의미한 개선 또는 그에 대한 효과를 의미한다. 예방 이익에 있어서, 조성물은 특정 질병, 질환 또는 증상이 발생할 위험이 있는 대상체에게 또는 질병, 질환 또는 증상이 아직 나타나지 않을지라도, 질병의 하나 이상의 생리학적 증상을 보고하는 대상체에게 투여될 수 있다.

용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 유리한 또는 요망되는 결과를 야기하기에 충분한 작용제의 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 치료되는 대상체 및 병태, 대상체의 체중 및 연령, 병태의 중증도, 투여 방식 등 중 하나 이상에 따라 달라질 수 있으며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 또한, 상기 용어는 본원에 기술된 영상화 방법 중 임의의 것에 의한 검출을 위한 이미지를 제공할 용량에 적용된다. 특정 용량은 선택된 특정 작용제, 뒤따르는 투여 요법, 그것이 다른 화합물과 병용하여 투여되는지 여부, 투여 시기, 영상화되는 조직 및 그것을 운반하는 신체 전달 시스템 중 하나 이상에 따라 달라질 수 있다.

상기 약학적 조성물 및 암을 치료하는 방법에서 언급된 용어 또는 요소 중 청구된 금속-유기 프레임워크에 대한 설명에서 언급된 것과 같은 것은, 앞에서 청구된 금속-유기 프레임워크에 대한 설명에서 언급된 바와 같은 것으로 이해된다.

일 양상에 따른 금속-유기 프레임워크 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 의하면, 표적 세포로의 표적능이 높아 타켓으로 하는 세포로 효과적으로 전달될 수 있고, 화학 요법뿐만 아니라 광 역학 요법까지 이용할 수 있어 표적 치료제로서 유용하게 사용될 수 있는 효과가 있다. 다른 양상에 따른 암을 치료하는 방법에 의하면, 암을 효율적으로 치료할 수 있다.

도 1은 HA가 결합된 금속-유기 프레임워크가 제작되는 과정과 화학 요법 및 광 역학 요법이 결합되어 세포를 사멸하는 과정을 도식화한 것이다.
도 2는 PCN-224의 모양을 관찰한 것이다:
도 2a는 TEM으로 관찰한 결과이며; 및 도 2b는 SEM으로 관찰한 결과이다.
도 3은 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 결정성을 확인하기 위해 PXRD 패턴을 분석한 결과이다.
도 4는 PCN-224의 공극 크기를 확인하기 위해 질소 흡착 결과를 분석한 결과이다.
도 5는 DLS 기술로 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 입자 크기를 확인한 결과이다:
도 5a는 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 입자 크기를 비교하기 위해 DLS 결과를 분석한 결과이고; 및 도 5b는 HA-Dox-PCN의 콜로이드 안정성을 확인하기 위해 0, 1, 2, 24 및 48시간 동안의 DLS 결과를 분석한 결과이다.
도 6은 HA가 PCN-224 표면에 결합되었음을 확인하기 위해 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 표면을 제타 전위로 측정한 결과이다.
도 7은 HA와 PCN-224 사이의 결합관계를 분석한 결과이다:
도 7a는 PCN-224 표면의 HA 결합이 안정적인지 확인하기 위해 0, 2, 20 및 200mM NaCl 농도에서 카바졸 분석(carbazole assay)을 한 결과이고; 및 도 7b은 HA와 PCN-224 사이의 결합을 확인하기 위해 형광 적정을 분석한 결과이다.
도 8은 PCN-224와 HA의 물리적 흡착을 확인한 결과이다:
도 8a는 PCN-224, HA 및 물이 상호작용하는 것을 분자 역학 시뮬레이션을 통해 확인한 결과이고; 도 8b는 HA와 Zr6 노드 간의 배위결합을 확인하기 위해 DET 계산을 분석한 결과이며; 도 8c는 도 8b의 그래프에서 각 단계에서의 상태를 원자 모형으로 도식화한 결과이다.
도 9는 HA-Dox-PCN로부터 Dox의 방출 프로파일을 분석하기 위해 Shimadzu RFPC 5430 분광 광도계로 측정한 결과이다.
도 10은 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 일중항산소 생성을 확인하기 위해 ABDA 흡광도를 분석한 결과이다.
도 11은 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 치료 효과를 비교하기 위해 세포 생존율을 분석한 결과이다:
도 11a는 Hek 293T 세포에서의 세포 생존율을 분석한 결과이고; 도 11b는 MDA-MB-231 세포에서의 세포 생존율을 분석한 결과이다.
도 12는 HA-Dox-PCN의 세포 내 침투 기전을 확인하기 위해 세포질 섭취 경로를 확인한 세포 사진이다.
도 13은 HA-Dox-PCN의 세포 흡수 능력을 분석한 세포 사진이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실험재료

모든 화학 물질 및 시약은 달리 명시되지 않는 한 Sigma-Aldrich, TCI 및 Alfa Aesar (한국)에서 구입하여 추가 정제없이 사용했다. 소듐 히알루로네이트(Sodium hyaluronate)는 Acros Organic(벨기에)에서 구입하였다. 독소루비신 히드로클로라이드(Doxorubicin hydrochloride)는 온타리오 케미칼스 인크(Ontario Chemicals Inc, Canada)에서 구입하였다. 탈이온(Deionized, DI) 수는 Millipore Milli-Q 시스템 (18.2 MΩ cm)에서 생산되었다.

실시예 1. 표면에 고분자가 결합되어 있고 약물을 담지할 수 있는 금속-유기 프레임워크의 제조

1. PCN-224 nanoMOFs의 제조

본 발명에서는 약물 전달체로 사용하기 위한 금속-유기 프레임워크의 표면에 고분자를 결합시켜 표적능이 향상된 약물전달체를 제조하고자 하였다. 이를 위해, 먼저 금속-유기 프레임워크(Metal-Organic framework: MOFs)를 제조하였다.

구체적으로, 90nm PCN-224 nanoMOFs는 용매열(solvothermal) 조건에서 합성되었다. 메조-테트라(4-카복시페닐)포르피린(Meso-Tetra(4-carboxyphenyl)porphyrin (TCPP)) (100mg, 0.13mmol), ZrOCl₂ · 8H₂O (300mg, 0.93mmol), 벤조산(Benzoic acid) (2.8g, 23mmol) 및 DMF (100mL)를 250mL의 둥근 바닥 플라스크에서 조합하였다. 혼합물을 300 rpm으로 교반하면서 5 시간 동안 90 ℃로 가열한 후 실온으로 냉각시켰다. 생성물을 15000rpm으로 30 분간 원심 분리하여 수집하고 신선한 DMF 및 아세톤으로 세척하여 PCN-224를 최종적으로 수득하였다. 합성된 PCN-224 샘플은 분말 X-선 회절 (powder X-ray diffraction, PXRD)에 의해 특성화되었다(도 3). 도 3은 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 결정성을 확인하기 위해 PXRD 패턴을 분석한 결과이다.

2. Dox-PCN nanoMOFs의 제조

상기 1절에서 제조한 약 4 mg의 PCN-224를 8 mg의 Dox에 분산시키고 1 mL의 DMSO에 용해시키고 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 이어서, Dox를 함유한 PCN-224를 원심 분리에 의해 수집하고 고진공하에 건조시켰다. 그런 다음 건조된 샘플을 탈이온수(DI)에 재분산시켜 Dox-PCN을 최종적으로 수득하였다.

3. HA-Dox-PCN 제조

상기 2절에서 제조한 약 1 mg의 Dox가 함유된 PCN을 2 mg의 히알루론산(HA)을 함유하는 20 ml의 탈이온수(DI)에 분산시키고, 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 그런 다음 HA로 코팅된 Dox-PCN을 원심 분리에 의해 수집하고 탈이온수(DI)에 재분산시켜 HA-Dox-PCN을 최종적으로 수득하였다.

실험예 1. PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 특성 분석

상기 실시예 1의 1절 또는 3절에서 제조된 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 특성을 분석하였다.

먼저, 투과전자현미경(Transmission Electron Microscopy, TEM) 및 주사전자현미경(Scanning electron microscopy, SEM)으로 PCN-224의 모양을 관찰하였다. 그 결과 도2a 및 도2b와 같이 90nm 정도 크기의 구형 형태로 관찰되었다. 도 2a는 TEM으로 관찰한 결과이며, 도 2b는 SEM으로 관찰한 결과이다.

PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 결정성을 분말 X-선 회절 (powder X-ray diffraction, PXRD)로 확인하였다. PXRD 패턴은 PCN-224 시뮬레이션과 일치하는 것을 확인하였고, 이는 HA 코팅된 후에도 결정성을 유지하며, 합성 과정에서 MOF 구조가 남아있음을 의미한다(도 3). 도 3은 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 결정성을 확인하기 위해 PXRD 패턴을 분석한 결과이다.

Brunauer-Emmett-Teller(BET)와 비국소 밀도 기능 이론(non-local density functional theory, NLDFT) 분석을 통해 PCN-224의 표면적 넓이 및 공극 크기 분포를 확인하였다.

구체적으로, 가스 흡착 측정 전에 90nm-PCN-224 시료를 DMF로 3 회, 아세톤으로 2 회 철저하게 세척했다. 아세톤을 버린 후, 샘플을 진공하에 3 시간 동안 건조시켰다. 그리고 건조된 분말을 질소 흡착 측정을 위해 ASAP 2020에서 85 ℃에서 30 분간, 120 ℃에서 5 시간 동안 활성화시켰다.

그 결과 2296(8) m²/g의 큰 BET 표면적과 77K에서의 질소 흡착 연구로 측정한 1.8 nm 기공 크기의 3 차원 채널을 가지고 있는 것을 확인하였다(도 4). 도 4는 PCN-224의 공극 크기를 확인하기 위해 질소 흡착 결과를 분석한 결과이다.

이를 통해, PCN-224의 높은 표면적 및 다공성은 약물 전달체로서 다량의 약물 담지가 가능한 것을 확인하였다.

동적 광 산란(Dynamic light scattering, DLS) 기술을 이용하여 PCN-224와 HA-Dox-PCN의 입자크기를 확인하였다. 그 결과 PCN-224의 크기인 ~164 ± 20 nm와 비교하여, HA-Dox-PCN의 크기가 ~250 ± 20 nm로 유체 역학 반경이 증가함을 확인하였다(도 5a). 도 5a는 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 입자 크기를 비교하기 위해 DLS 결과를 분석한 결과이다. 또한, HA-Dox-PCN의 콜로이드 안정성을 확인하기 위해 매질에서 시간을 달리하여 DLS 기술로 입자 크기 변화를 측정하였다. 그 결과 HA-Dox-PCN의 입자 크기를 48시간 동안 현저한 차이가 나지 않음을 확인하였고, 이를 통해 HA-Dox-PCN의 높은 콜로이드 안정성을 확인하였다(도 5b). 도 5b는 HA-Dox-PCN의 콜로이드 안정성을 확인하기 위해 0, 1, 2, 24 및 48시간 동안의 DLS 결과를 분석한 결과이다.

또한, 수용액에서 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 표면을 제타 전위(zeta potential)로 측정하였다. 그 결과 PCN-224의 양전위(+27mV)에서 HA-Dox-PCN의 음성 전위(-34mV)로 표면 전하의 변화를 확인하였다(도 6). 이와 같이 크기 및 표면 전하 변화는 HA가 PCN-224 표면에 성공적으로 결합되었음을 의미한다. 도 6은 HA가 PCN-224 표면에 결합되었음을 확인하기 위해 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 표면을 제타 전위로 측정한 결과이다.

실험예 2. HA와 PCN-224 사이의 결합 분석

HA와 PCN-224 사이의 결합관계를 분석하기 위한 실험을 수행하였다.

먼저, HA가 PCN-224에 코팅되었을 때 HA가 NaCl 농도에 따라 안정적인지 카바졸 분석(cabazole assay)을 통해 확인하였다. 그 결과 높은 염 농도(2M)에서도 매우 안정적인 것을 확인하였다(도 7a). 도 7a는 PCN-224 표면의 HA 코팅이 안정적인지 확인하기 위해 0, 2, 20 및 200mM NaCl 농도에서 카바졸 분석(carbazole assay)을 한 결과이다. 이러한 결과는 HA의 코팅이 도 6에서의 정전기적 상호 작용과 함께 배위 결합에 의해 일어날 수 있음을 의미한다.

HA와 PCN-224 사이의 결합을 더 연구하기 위해 형광 적정을 수행하였다. 구체적으로, 먼저 FITC-HA를 제조하기 위해 아민 작용기를 플루오레세인 아이소싸이오사이안산염(fluorescein isothiocyanate, FITC)으로 변형시켰다. FITC (5mg, 12μmol) 및 에틸렌디아민(ethylenediamine) (1μL, 18μmol)을 2mL의 DMSO에 용해시켰다. 그리고 나서 혼합물을 실온에서 12 시간 동안 교반한 후, 동결 건조기로 용매 및 에틸렌디아민을 제거하였다. 그 다음 FITC-HA의 합성을 위해 히알루론산(HA) (20 mg)을 10 mL의 탈이온수에 용해시킨 후, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보디이미드(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide, EDC) (15mg, 97μmol)와 N-하이드록시석신이미드(N-hydroxysuccinimide, NHS) (11mg, 96μmol)를 HA 용액에 넣고 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 이어서, 아민 변성 된 FITC (2.2 ㎎, 5 μmol)를 혼합 용액에 첨가한 후, 실온에서 24 시간 동안 교반하고 혼합물을 2.5K 투석 백을 사용하여 1 주간 투석하여 정제 하였다. 투석 후, 동결 건조기로 용액을 제거하였다.

그 결과 FITC 개질된 고 분자량 HA (1,500 ~ 2,200 kDa) 및 저 분자량 HA (8 ~ 15 kDa)의 결합 상수를 비교했을 때, FITC 개질된 HA (FITC-HA)의 형광은 PCN-224 나노 입자가 첨가될 때 FITC에서 포르피린 프레임워크로의 에너지 전달로 인해 상당히 감소된 것을 확인했다. 520 nm에서의 FITC-HA의 표준화된 형광 강도를 나노 입자 대 중합체의 비율에 대해 나타내었다(도 7b). 도 7b은 HA와 PCN-224 사이의 결합을 확인하기 위해 형광 적정을 분석한 결과이다.

또한, HA와 PCN-224 사이의 결합상수(Ks)를 분석하였다. 구체적으로, 1 mL HA-FITC 용액 (2.5 nM)을 바이알에 넣고, 다른 양의 PCN-224 (8.55nM) 및 탈이온수를 HA-FITC 용액에 첨가하여 혼합물 용액의 부피를 3 mL로 맞췄다. 샘플의 방출 스펙트럼은 470 nm에서 기록되었다. 측정 후, 520 nm에서 각각의 대조군으로 보정된 표준화된 형광 세기를 PCN-224의 농도에 대해 도시하였다. 결합 상수 (Ks)는 비선형 최소 제곱 커브 - 피팅 분석(Nonlinear least-squares curve-fitting analysis)을 통해 얻어졌다. 그 결과 PCN-224에 결합한 고 분자량 HA-FITC의 Ks는 2.9 x 10¹¹ M^-1이고, 저 분자량 HA-FITC는 3.19 x 10⁷ M^-1로 현저히 감소된 것을 확인하였다(도 7b). 이러한 결과는 HA의 카르복실레이트기가 결합력에 영향을 미친다는 것을 의미한다.

분자 역학 시뮬레이션을 통해 PCN-224 표면의 HA의 물리적 흡착을 관찰했다.

그 결과 수화 상태에서 도 8a에서 보듯이 Zr6 노드의 말단 하이드록실기와 물 분자가 상호 작용함으로써, 표면 근처에 HA 코팅층이 안정적으로 위치하는데 기여하는 것을 확인했다. 이를 통해 HA와 PCN-224 사이의 배위 결합이 강한 수소 결합력에 의해 유도되는 것임을 알 수 있었다. 도 8a는 PCN-224, HA 및 물이 상호작용하는 것을 분자 역학 시뮬레이션을 통해 확인한 결과이다.

HA와 Zr6 노드 간의 배위 결합을 확인하기 위해 밀도 함수 이론(density functional theory, DFT) 계산을 통해 열역학 메커니즘을 계산하였다 (도 8b, 8c). 도 8b는 HA와 Zr6 노드 간의 배위결합을 확인하기 위해 DET 계산을 분석한 결과이고, 도 8c는 도 8b의 그래프에서 각 단계에서의 상태를 원자 모형으로 도식화한 결과이다. MD 시뮬레이션에서 수화된 상태에서 관찰된 분자 배열을 고려하여, HA 단량체와 물 분자를 Zr6 클러스터의 말단 -OH 그룹 근처에 두었다. HA와 PCN-224 사이의 배위 결합을 만들기 위해, 수소 결합 상호 작용, 즉 물 분자, HA의 카르복시산 및 Zr6 클러스터의 말단 -OH기에 의해 상호 연결된 구조에서 반응이 일어날 것으로 판단했다. 초기 반응에서 수소 원자는 HA의 카르복시산에서 인접한 물 분자에 의해 안정화 된 Zr6 노드의 말단 -OH기로 이동되었다. 이어서, 잔류 카르복실레이트는 4.16 kcal/mol의 활성화 에너지(Ea) 및 -6.63 kcal/mol의 반응열(ΔE)을 수반하여 Zr 사이트를 열도록 배위되었다. IM1에서 FS까지, 만들어진 물 분자는 Zr 원자로부터 쉽게 분리되었고 동시에 카르복실레이트는 9.42 kcal/mol의 Ea와 -13.25 kcal/ΔE의 mol로 Zr 원자에 배위되었다. 이와 같이 상대적으로 낮은 Ea를 고려할 때, HA 폴리머가 PCN-224의 Zr6 금속 노드에 가깝게 위치한다면, 폴리머는 상온에서도 PCN-224와 새로운 배위 결합을 만들 것임을 알 수 있었다.

실험예 3. 약물 방출 분석

HA-Dox-PCN의 약물 방출 프로파일을 분석하기 위한 실험을 수행하였다.

먼저 표면 전하의 변화를 관찰함으로써 수용액에서 HAdase에 의한 HA 분해를 모니터링했다. 도 6에 도시된 바와 같이, HA-PCN의 표면 전하는 HAdase와 함께 배양한 후에 -34mV에서 + 4mV로 변화되었다. 이것은 PCN-224의 코팅된 HA가 HAdase에 의해 분해되었음을 나타낸다.

HAdase 유발 약물 방출은 HA-Dox-PCN으로부터 Dox의 방출을 측정함으로써 조사되었다. 구체적으로, HA-Dox-PCN의 방출 속도는 Shimadzu RFPC 5430 분광 광도계로 분석하였다. HA-Dox-PCN을 인산완충식염수(phosphate-buffered saline) (pH 7.4)에 분산시킨 후, Dox 형광 강도를 480 nm의 파장에서 측정하였다. 유도된 약물 방출 프로파일을 결정하기 위해, HAdase를 4 시간 동안 HA-Dox-PCN 용액에 첨가하고 방출 프로파일을 형광을 사용하여 분석하였다.

도 9에 나타난 바와 같이, 3 시간 배양 후 HAdase가 HA-Dox-PCN 수성 현탁액에 첨가될 때, Dox 형광 강도는 점차 증가하였는데, 이는 HAdase가 PCN-224 표면에 부착된 HA를 분해함으로써 약물 방출을 유도함을 의미한다. 이를 통해, HA-Dox-PCN에서 Dox의 안정적인 캡슐화에 의해 원치 않는 약물의 방출이 없음을 확인하였다. 이는 HA가 HAdase에 의한 분해 전에 PCN-224 기공 입구를 효율적으로 차단함을 의미한다. 도 9는 HA-Dox-PCN로부터 Dox의 방출 프로파일을 분석하기 위해 Shimadzu RFPC 5430 분광 광도계로 측정한 결과이다.

실험예 4. 일중항산소(Singlet oxygen) 생성 분석

PCN-224를 구성하는 (4-카르복시페닐) 포르피린 광감각제는 빛을 이용하여 일중항산소를 생성할 수 있기 때문에 이를 확인하기 위한 실험을 수행하였다.

구체적으로, Newport IQE-200 solar simulator (Irvine, CA, USA)를 광원으로 사용하였고, 빛에 대한 전력 밀도는 40mW/cm2였다. 생성된 일중항산소를 측정하기 위해 증류수에서 9,10-안트라센디일 비스(메틸렌)말론산(anthracenediyl bis(methylene)malonic acid, ABDA)과 나노 입자(PCN-224) (100 μM과 20 μM)를 제조하였다. ABDA의 흡광도는 PCN-224의 일중항산소와의 반응 후에 약화되고 광조사 전후의 흡광도 변화의 정도는 일중항산소 생성의 절대량을 의미한다. 조사 후 2분마다 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 10에 나타난 바와 같이, ABDA 흡광도는 조명 시간을 증가시킴으로써 일관되게 감소함을 확인하였다. 이를 통해 본 발명은 화학 요법 뿐만 아니라 광 역학 요법을 이용한 치료제로서 이용될 수 있음을 의미한다. 도 10은 PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 일중항산소 생성을 확인하기 위해 ABDA 흡광도를 분석한 결과이다.

실험예 5. 세포 생존율 분석

PCN-224 및 HA-Dox-PCN의 치료 효과를 비교하기 위해 세포 생존율을 측정하였다.

구체적으로, 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231(CD44 양성), 및 비 암성 섬유 아세포 HeK293T(CD44 음성) 세포를 10 % 소 태아 혈청 (FBS), 100 ㎍ / ㎖^-1 스트렙토마이신 및 100 U / mL^-1 페니실린을 넣은 배지에 (RPMI 1640 및 DMEM 배지를 각각 사용하여), 37 ℃, 5 % CO2에서 배양하였다. 그 후에 세포 (5 × 10³ 세포 / 웰)를 무균 96-웰 Nunc (Thermo Scientific Inc.) 플레이트에서 24 시간 동안 배양하고, 상이한 농도의 PCN-224, HA-Dox-PCN (1.0, 2.0, 3.0, 4.0 및 5.0 ㎍ / ㎖)를 처리하여 12 시간 동안 어둠속에서 배양하였다. 그 후, 배지를 새로운 배지로 교체하고 솔라 시뮬레이터(solar simulator)를 사용하여 태양 광선 (100 mW/cm^-2)에서 30 분 동안 세포를 조사하였다. 제조사의 프로토콜 (DAL 1025, Invitrogen)에 따라 Alamar blue dye assay를 사용하여 세포 독성을 확인하기 전에 세포를 12 시간 더 배양했다.

그 결과 PCN-224만이 광 조사 하에서 CD44 음성 세포에 독성을 보였다 (도 11a). 또한, HA-Dox-PCN은 CD44 양성 세포에서 광 조사할 때 증가된 독성을 보였다 (도 11b). 이러한 결과는 HA가 선택적 암 세포 섭취를 촉진하고 화학-광 역학이 결합된 요법이 광 조사 하에서 암 치료 효과를 증가시킨다는 것을 의미한다. 도 11a는 Hek 293T 세포에서의 세포 생존율을 분석한 결과이고, 도 11b는 MDA-MB-231 세포에서의 세포 생존율을 분석한 결과이다.

실험예 6. 내포작용 경로 분석

HA-Dox-PCN의 세포 내 침투 기전을 확인하기 위하여 세포질 섭취 경로 실험을 수행 하였다.

내포작용(endocytosis)이 매개된 HA-Dox-PCN의 세포내로 들어가는 경로를 확인하기 위한 실험을 수행하였다.

구체적으로, MDA-MB231 세포를 4개의 well이 있는 커버 글라스(cover glass) (Lab Tek II, Thermo Scientific Inc.)에 파종하고, 수크로오스(sucrose) (클라트린(clathrin)-매개 내포, 400nM), 메틸-베타 사이토덱스트린(methyl-beta cytodextrin) (카베올라(caveolae)-매개 내포), 아밀로린(amilorin) (대음세포작용(macropinocytosis))을 각각 포함한 저해제를 혈청이 없는 DMEM에서 1 시간 동안 전처리하고 새로운 배지로 교체하였다. 그 후, HA-Dox-PCN 배지에 첨가하여 1 시간 더 배양하고, CO₂ 배양기에 연결된 공 초점 현미경(confocal microscope) (Olympus FV1000)으로 세포를 분석하였다.

그 결과, HA-Dox-PCN의 세포 내 흡수가 클라트린(clathrin) 매개 내포작용(endocytosis)과 관련되어 있음을 확인하였다(도 12). 도 12는 HA-Dox-PCN의 세포 내 침투 기전을 확인하기 위해 세포질 섭취 경로를 확인한 세포 사진이다.

실험예 7. 세포 흡수(uptake) 분석

HA-Dox-PCN의 세포 흡수 능력을 분석하기 위한 실험을 수행하였다.

구체적으로, HeK293T(CD44 음성 세포), MDA-MB-231(CD44 양성 세포) 및 SCC-7(CD44 양성 세포) 세포에서의 HA-Dox-PCN 나노 입자의 세포 흡수를 라이브 공 초점 현미경 이미지(live confocal microscope images) (Olympus FV 1000 시리즈)로 조사하였다. 2 개의 well이 있는 커버 글래스 (Lab Tek II, Thermo Scientific.)에서 2 x 10⁵ 세포/웰의 밀도로 세포를 파종하고, 24 시간 동안 배양한 후, Dox를 최종 농도 10 μg / mL로 하여 HA-Dox-PCN을 상이한 시점에 처리하여, 공 초점 현미경(confocal microscope)으로 분석하였다.

그 결과 MDA-MB231 및 SCC-7 세포는 Hek 293T 세포와 비교하여 더 높은 Dox 강도를 나타내었다(도 13). 이러한 결과는 HA-Dox-PCN 나노 입자가 암세포를 발현하는 CD44 수용체로 선택적으로 흡수될 수 있음을 의미한다. 도 13은 HA-Dox-PCN의 세포 흡수 능력을 분석한 세포 사진이다.

Claims

표면에 생체고분자가 결합되어 있고, 유기분자 사이에 금속 이온이 결합되어 다공성인 3차원 구조를 갖는 금속-유기 프레임워크(Metal-Organic framework: MOFs) 나노입자로,
상기 표면은 금속-유기 프레임워크 표면이고,
상기 금속-유기 프레임워크는 MIL-88A, MIL-88Bt, MIL-89, MIL-127, MIL-101, MIL-100, MIL-53, MOF-74, UiO-66, UiO-67, ZIF-8, ZIFs, HKUST-1, M2(dobpdc), NU-1000, PCN-222 및 PCN-224로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나를 포함하는 것인 금속-유기 프레임워크 나노입자.
청구항 1에 있어서, 상기 생체고분자는 자극 민감성 고분자인 것인 금속-유기 프레임워크 나노입자.
청구항 2에 있어서, 상기 생체고분자는 세포표면에 발현된 수용체와 상호작용하는 것인 금속-유기 프레임워크 나노입자.
청구항 3에 있어서, 상기 세포는 암 세포인 것인 금속-유기 프레임워크 나노입자.
삭제
청구항 1에 있어서, 상기 생체고분자는 히알루론산(Hyaluronic acid, HA), 플루란(pullulan), 커드란(curdlan), 펙틴(pectin), 헤파린(Heparin), 키토산(chitosan), 메틸셀룰로오스(methyl cellulose), 폴리비닐알코올(poly(vinyl alcohol)), 덱스트란(dextran), 전분(starch), 아가로오스(agarose), 폴리-L-라이신 및 폴리아스파르트산으로 이루어지는 군 중에서 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 것인 금속-유기 프레임워크 나노입자.
삭제
청구항 1에 있어서, 상기 유기분자는 광감작제(photosensitizer)로써, 일중항산소를 생성할 수 있는 것인 금속-유기 프레임워크 나노입자.
청구항 1에 있어서, 약물이 담지되어 있는 것인 금속-유기 프레임워크 나노입자.
청구항 9에 있어서, 상기 약물은 항암제인 것인 금속-유기 프레임워크 나노입자.
표면에 생체고분자가 결합되어 있는 금속-유기 프레임워크(Metal-Organic framework: MOFs) 나노입자를 활성 성분으로서 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
상기 표면은 금속-유기 프레임워크 표면이고,
상기 금속-유기 프레임워크 나노입자는 항암제가 담지되어 있는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 11에 있어서, 상기 항암제는 아바렐릭스 [abarelix (Plenaxis depot^®)]; 알데스류킨 [aldesleukin (Prokine^®)]; 알데스류킨 [Aldesleukin (Proleukin^®)]; 알렘투주맙 [Alemtuzumabb (Campath^®)]; 알리트레티노인 [alitretinoin (Panretin^®)]; 알로퓨리놀 [allopurinol (Zyloprim^®)]; 알트레타민 [altretamine (Hexalen^®)]; 아미포스틴 [amifostine (Ethyol^®)]; 아나스트로졸 [anastrozole (Arimidex^®)]; 아르세닉 트리옥사이드 [arsenic trioxide (Trisenox^®)]; 아스파라기나아제 [asparaginase (Elspar^®)]; 아자시티딘 [azacitidine (Vidaza^®)]; 베바쿠지맙 [bevacuzimab (Avastin^®)]; 벡사로텐 캡슐 [bexarotene capsules (Targretin^®)]; 벡사로텐 겔 [bexarotene gel (Targretin^®)]; 블레오마이신 [bleomycin (Blenoxane^®)]; 보르테조밉 [bortezomib (Velcade^®)]; 정맥용 부술판 [busulfan intravenous (Busulfex^®)]; 경구용 부술판 [busulfan oral (Myleran^®)]; 칼루스테론 [calusterone (Methosarb^®)]; 카페시타빈 [capecitabine (Xeloda^®)]; 카르보플라틴 [carboplatin (Paraplatin^®)]; 카르무스틴 [carmustine (BCNU^®, BiCNU^®)]; 카르무스틴 [carmustine (Gliadel^®)]; 카르무스틴과 폴리페프로산 20 임플란트 (Polifeprosan 20 Implant) (Gliadel Wafer^®); 셀레콕십 [celecoxib (Celebrex^®)]; 세툭시맙 [cetuximab (Erbitux^®)]; 클로람부실 [chloambucil (Leukeran^®)]; 시스플라틴 [cisplatin (Platinol^®)]; 클라드리빈 [cladribine (Leustatin^®) 2-CdA^®]; 클로파라빈 [clofarabine (Clolar^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan^®, Neosar^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan Injection^®)]; 사이클로포스파미드 [cyclophosphamide (Cytoxan Tablet^®)]; 사이타라빈 [cytarabine (Cytosar-U^®)]; 사이타라빈 리포조말 [cytarabine liposomal (DepoCyt^®)]; 다카르바진 [dacarbazine (DTIC-Dome^®)]; 닥티노마이신 (dactinomycin), 액티노마이신 D [actinomycinD (Cosmegen^®)]; 다르베포에틴 알파 [Darbepoetin alfa (Aranesp^®)]; 다우노루비신 리포조말 [daunorubicin liposomal (Danuoxome^®)]; 다우노루비신 (daunorubicin), 다우노마이신 [daunomycin (Daunorubicin^®)]; 다우노루비신 (daunorubicin), 다우노마이신 [daunomycin (Cerubidine^®)]; 데니류킨 디프티톡스 [Denileukin diftitox (Ontak^®)]; 덱스라조산 [dexrazoxane (Zinecard^®)]; 도세탁셀 [docetaxel (Taxotere^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin PFS^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin^®, Rubex^®)]; 독소루비신 [doxorubicin (Adriamycin PFS Injection^®)]; 독소루비신 리포조말 [doxorubicin liposomal (Doxil^®)]; 드로모스타놀론 프로피오네이트 [dromostanolone propionate (dromostanolone^®)]; 드로모스타놀론 프로피오네이트 [dromostanolone propionate (masterone injection^®)]; 엘리엇 B 용액 [Elliott's B Solution (Elliott's B Solution^®)]; 에피루비신 [epirubicin (Ellence^®)]; 이포에틴 알파 [Epoetin alfa (epogen^®)]; 에를로티닙 [erlotinib (Tarceva^®)]; 에스트라무스틴 [estramustine (Emcyt^®)]; 에토포사이드 포스페이트 [etoposide phosphate (Etopophos^®)]; 에토포사이드 (etoposide), VP-16 (Vepesid^®); 엑세메스탄 [exemestane (Aromasin^®)]; 필그라스팀 [Filgrastim (Neupogen^®)]; 플록수리딘 [floxuridine (intraarterial) (FUDR^®)]; 플루다라빈 [fludarabine (Fludara^®)]; 플루오로우라실 [Fluorouracil, 5-FU (Adrucil^®)]; 플루베스트란트 [folvestrant (Faslodex^®)]; 게피티닙 [gefitinib (Iressa^®)]; 겜시타빈 [gemcitabine (Gemzar^®)]; 겜투주맙 오조가미신 [gemtuzumab ozogamicin (Mylotarg^®)]; 고세렐린 아세테이트 [goserelin acetate (Zoladex Implant^®)]; 고세렐린 아세테이트 [goserelin acetate (Zoladex^®)]; 히스트렐린 아세테이트 [histrelin acetate (Histrelin implant^®)]; 하이드록시우레아 [hydroxyurea (Hydrea^®)]; 이브리투모맙 티욱세탄 [Ibritumomab Tiuxetan (Zevalin^®)]; 이다루비신 [idarubicin (Idamycin^®)]; 이포스파미드 [ifosfamide (IFEX^®)]; 이마티닙 메실레이트 [imatinib mesylate (Gleevec^®)]; 인터페론 알파-2a [interferon alfa-2a (Roferon A^®)]; 인터페론 알파-2b [Interferon alfa-2b (Intron A^®)]; 이리노테칸 [irinotecan (Camptosar^®)]; 레날리도마이드 [lenalidomide (Revlimid^®)]; 레트로졸 [letrozole (Femara^®)]; 류코보린 [leucovorin (Wellcovorin^®, Leucovorin^®)]; 류프롤리드 아세테이트 [Leuprolide Acetate (Eligard^®)]; 레바미솔 [levamisole (Ergamisol^®)]; 로무스틴-CCNU [lomustine-CCNU (CeeBU^®)]; 메클로레타민 (meclorethamine), 니트로겐 머스타드 [nitrogen mustard (Mustargen^®)]; 메게스트롤 아세테이트 [megestrol acetate (Megace^®)]; 멜파란 (melphalan), L-PAM (Alkeran^®); 머캅토퓨린 [mercaptopurine, 6-MP (purinethol^®)]; 메스나 [mesna (Mesnex^®)]; 메스나 [mesna (Mesnex tabs^®)]; 메토트렉제이트 [methotraxate (methotraxate^®)]; 메톡스살렌 [methoxsalen (Uvadex^®)]; 미토마이신 C [mitomycin C (Mutamycin^®)]; 미토탄 [mitotane (Lysodren^®)]; 미토잔트론 [mitoxantrone (Novantrone^®)]; 난드롤란 펜프로피오네이트 [nandrolone phenpropionate (Durabolin-50^®)]; 넬라라빈 [nelarabine (Arranon^®)]; 노페투모맙 [Nofetumomab (Verluma^®)]; 오프렐베킨 [Oprelvekin (Neumega^®)]; 옥살리플라틴 [oxaliplatin (Eloxatin^®)]; 파클리탁셀 [paclitaxel (Paxene^®)]; 파클리탁셀 [paclitaxel (Taxol^®)]; 파클리탁셀 단백질 결합 입자 [paclitaxel protein-bound particles (Abraxane^®)]; 팔리페르민 [palifermin (Kepivance^®)]; 파미드로네이트 [pamidronate (Aredia^®)]; peg아데마스 [pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)^®)]; peg아스파르가아제 [pegaspargase (Oncaspar^®)]; peg필그라스팀 [Pegfilgrastim (Neulasta^®)]; 페멕트렉제트 디소듐 [pemetrexed disodium (Alimta^®)]; 펜토스타틴 [pentostatin (Nipent^®)]; 피포브로만 [pipobroman (Vercyte^®)]; 플리카마이신 [plicamycin], 미트라마이신 [mithramycin (Mithracin^®)]; 포르피머 소듐 [porfimer sodium (Photofrin^®)]; 프로카르바진 [procarbazine (Matulane^®)]; 퀴나크린 [quinacrine (Atabrine^®)]; 라스뷰리카아제 [Rasburicase (Elitek^®)]; 리툭시맙 [Rituximab (Rituxan^®)]; 사르그라모스팀 [sargramostim (Leukine^®)]; 사르그라모스팀 [Sargramostim (Prokine^®)]; 소라페닙 [sorafenib (Nexavar^®)]; 스트렙타조신 [streptozocin (Zanosar^®)]; 수니티닙 말리에이트 [sunitinib maleate (Sutent^®)]; 탈크 [talc (Sclerosol^®)]; 타목시펜 [tamoxifen (Nolvadex^®)]; 테모졸로마이드 [temozolomide (Temodar^®)]; 테니포사이드 [teniposide, VM-26 (Vumon^®)]; 테스톨락톤 [testolactone (Teslac^®)]; 티오구아닌 [thioguanine, 6-TG (thioguanine^®)]; 티오테파 [thiotepa (thioplex^®)]; 토포테칸 [topotecan (Hycamtin^®)]; 토레미펜 [toremifene (Fareston^®)]; 토시투모맙 [Tositumomab (Bexxar^®)]; 토시투모맙/I-131 토시투모맙 (Bexxar^®); 트라스투주맙 [Trastuzumab (Herceptin^®)]; 트레티노인 [tretinoin, ATRA (Vesanoid^®)]; 우라실 머스타드 [Uracil Mustard (Uracil Mustard Capsules^®)]; 발루비신 [valrubicin (Valstar^®)]; 빈블라스틴 [vinblastine (Velban^®)]; 빈크리스틴 [vincristine (Oncovin^®)]; 비노렐빈 [vinorelbine (Navelbine^®)]; 및 졸레드로네이트 [zoledronate (Zometa^®)]로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 11의 약학적 조성물을 암을 예방 또는 치료하기에 유효한 양으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체에서 암을 치료하는 방법으로,
상기 개체는 사람을 제외한 포유동물인 것인 개체에서 암을 치료하는 방법.