KR102210060B1 - 어류 부화액으로부터의 화장료 조성물, 그의 제조방법, 그리고 피부의 미용적 외관을 개선시키기 위한 그의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 어류 부화액으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 화장료 조성물, 상기 조성물의 생성방법 및 피부에 다양한 미용적 적용에서, 특히 포유류 동물의 피부에서 주름, 잔주름, 과색소침착증, 늘어짐, 건성 피부, 벗겨짐 및/또는 경피수분손실의 미용적 외관 또는 유병률을 감소 또는 예방하기 위한 이들의 용도에 관한 것이다.

Description

어류 부화액으로부터의 화장료 조성물, 그의 제조방법, 그리고 피부의 미용적 외관을 개선시키기 위한 그의 용도{A COSMETIC COMPOSITION FROM FISH HATCHING FLUID, METHODS FOR ITS PRODUCTION AND USES THEREOF FOR IMPROVING THE COSMETIC APPEARANCE OF SKIN}

본 발명은 어류 부화액(fish hatching fluid)으로부터 유래될 수 있는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물의 제조 방법, 및 피부에 대한 다양한 적용에서의 그의 용도에 관한 것이다. 특히, 상기 조성물은 노화 피부의 미용적 외관을 변화, 바람직하게는 개선시키는데 유용하다.

피부는 신체의 연약한 기관 중 하나이다. 피부는 직접적으로 또는 간접적으로 외부 자극과 일정하게 상호작용하며, 환경적 작용제(agent)에 빈번하게 노출되고 영향받는다. 사실, 피부는 외부 세계와 처음 접촉되는 시점으로 볼 수 있다. 이 일정한 노출은 피부에 대해, 특히 피부의 미용적 외관에 대해 불쾌한 및/또는 원치않는 신체적 및 시각적 변화를 야기할 수 있다. 이러한 변화는 개체의 건강을 위협하지 않을 수도 있지만, 이러한 변화는 신체적으로 불편하거나 또는 시각적으로 유쾌하지 못할 수 있다. 사실, 피부는 너무 가시적이기 때문에, 피부의 외관에 대한 변화는 정신적 스트레스를 야기할 수 있다. 따라서 피부 상태를 유지, 회복 또는 개선시키기 위한, 특히 피부의 젊은 외관을 회복하기 위한 효과적인 치료에 대한 지속적 필요 및 요구가 있다.

피부는 사람 체중의 약 12 내지 16%를 차지하는 신체의 가장 큰 기관을 형성한다. 이는 사람의 신체 외부 세계와 신체 내부의 통제된 환경 사이의 장벽으로서 그리고 영향의 조절로서 다수의 생명 유지와 관련된 역할을 수행한다.

피부는 3층, 즉, 표피, 진피 및 피하 조직으로 이루어진다. 표피는 피부의 가장 위의 상피층이다. 이는 물리적 장벽으로서 작용하며, 신체로부터 물의 손실을 방지하고, 물질 및 유기체의 신체 내로의 유입을 방지한다. 그의 두께는 신체 부위에 따라 다르다.

표피는 층화 편평상피로 이루어지며, 즉, 편평화된 세포의 층으로 이루어진다. 피부, 모발 및 손발톱은 케라틴화되어 있는데, 이는 그들이 케라틴으로 불리는 단백질로 만들어진 죽은, 경화된 소수성 표면을 가진다는 것을 의미한다. 표피는 케라틴세포와 결합된 세포밖 지질의 함량에 기인하여, 특히 표피의 중간층(투명층)에서 불침투성으로 만들어진다. (예를 들어, 식도, 구강 인강, 생식기 및 기타의) 점막은 주로 비케라틴화되어 있으며, 촉촉하다. 표피는 3가지 주된 유형의 세포, 즉, 케라틴세포(피부 세포), 멜라닌세포(색소 생성 세포) 및 랑게르한스 세포(면역 세포)를 가진다. 메르켈(Merkel) 세포는 제4의 덜 우세한 표피 세포이다.

케라틴세포는 그들이 바깥으로 이동함에 따라 케라틴의 축적에 따라 성숙하고 분화된다. 그들은 결국 줄어들거나 없어진다. 그들은 4 또는 5개의 별개의 층을 형성하는데, 가장 피상적인 층으로부터 가장 깊은 층까지 (i) 핵이 없는, 죽고, 완전히 마른 경화 세포를 지니는 각질(각질층), (ii) 호염기성 과립을 함유하고 얇은 투명층에 의해 각질층으로부터 표면상으로 분리된 세포를 지니는 과립(과립층), (iii) 유극층(뾰족하거나, 가시가 있는 또는 가시세포층)(이때 세포는 그들이 상부로 이동됨에 따라 점점 더 편평하게 됨) (iv) 원주(긴) 재생성 세포를 지니는 배아층(기저층)이다.

표피 바로 밑은 표피와 진피 간에 놓인 전문화된 구조인 기저막이다.

진피는 피부의 섬유성 결합조직 또는 지지층이다. 주된 섬유는 콜라겐 섬유 및 섞어 짜인(interwoven) 엘라스틴이다.

피하 조직은 진피와 표피 바로 밑의 지방층이다. 이는 또한 피하 조직, 진피하 또는 피하지방층으로 불린다. 피하 조직은 주로 지방 세포(함지방세포), 신경 및 혈관으로 이루어진다.

새로운 상피 피부 세포는 피부의 더 하부 층인 과립층에서 생성된다. 시간에 따라, 세포는 피부의 표면으로 이동하고, 더 산성이 된다. 그들의 30일의 여행 동안, 그들은 사멸되고 케라틴으로 포화된다. 케라틴 및 결합된 지질은 그들이 외부 구성요소로부터 피부를 보호하기 때문에 중요하다.

다수의 인자는 질환, 손상, 환경적 인자, 연령, 호르몬, 수준, 의약, 외부로 적용 또는 섭취된 물질, 유전적 병태 또는 이들 및 다른 인자의 조합을 포함하는 피부의 미용적 외관에서의 악화에 기여할 수 있다. 피부의 미용적 외관에서의 노화성 악화, 특히 광노화, 즉, 일사성 피부염이 보편적 인자이다. 이 악화는, 예를 들어 건성 피부, 주름, 잔주름, 증가된 늘어짐(처짐)(함몰) 또는 변형된 색소형성으로서 나타날 수 있는 피부의 불규칙 또는 이상증에서 볼 수 있다.

광노화는 만성 UVA 및 UVB 노출에 의해 유도된 특징적 변화에 대해 사용되는 용어이다. 대사 스트레스를 관리하기 위한 생물학적 기능 및 능력의 악화는 노화 과정의 주된 결과 중 하나이다. 노화는 또한 피부에서의 기능적 및 미학적 변화를 야기하는 복잡한 진행적 과정이다.

광노화는 천연광 또는 합성광으로부터 유래될 수 있는 대략 245 내지 290㎚의 자외선(UV) 조사에 대한 피부의 지속적, 장기간 노출이 기인하는 피부의 노화과정이다. 따라서 광노화는 또한 UVA 및 UVB광에 의해 야기되는 피부, 특히 얼굴, 귀, 목 및 손의 노화로서 알려져 있다.

건성 및/또는 벗겨지는 피부는 노화된 피부의 가장 흔한 징후 중 하나이다. 특정 개체가 건성 및/또는 벗겨지는 피부의 여지가 더 많음에도 불구하고, 건조 및/또는 벗겨지는 피부의 외관은 연령, 성별 또는 피부 유형과 관계없이 누군가에게 영향을 미칠 수 있다.

피부의 외부층(투명층을 지니는 각질층)에 물이 없을 때, 즉, 경표피수분손실(trans-epidermal water loss: TEWL)을 통해 건성 피부가 생긴다. 이 층이 제대로 보습될 때, 이는 피부를 통한 수분 손실을 최소화하며, 자극물, 알레르겐 및 세균이 들어가지 않게 한다. 그러나, 각질층이 건조될 때, 그의 보호적 기능은 감소된다. 이는 수분 손실을 더 크게 하며, 피부가 환경 인자에 상처받기 쉽게 한다.

이상적으로는, 각질층은 10% 내지 30%의 수분 함량을 가진다. 이 수분은 피부에 그의 부드럽고, 매끈하며, 유연한 질감, 즉, 피부의 젊은 외관과 관련된 특징을 전한다. 물은 대기, 피부의 기저층 및 땀으로부터 생긴다. 피부샘에 의해 생성되는 오일 및 피부 세포에 의해 생성된 지방 물질은 천연 보습제로서 작용하여 각질층이 수 중에서 밀봉되게 한다.

신체는 증발에 의해 피부 표면으로부터 지속적으로 수분을 손실한다(TEWL). 정상 조건 하에서, 손실 속도는 느리며, 물은 적절히 대체된다. 건성 피부의 특징적 징후 및 증상은 수분 손실이 물 대체를 초과할 때 생기며, 각질층의 수분 함량은 10% 미만으로 떨어진다.

건성 및/또는 벗겨지는 피부를 개선 또는 근절함으로써, 피부의 미용적 외관을 개선시키는 보습제가 고도로 바람직하다. 다수의 보습제가 당업계에 공지되어 있지만, 효과적으로 더 순한 천연 생성물에 대한 필요가 남아있다.

원치않는 또는 과량의 색소형성, 즉, 과다색소침착, 예를 들어, 기미를 나타내는 표피세포는 노화된 피부의 다른 통상적인 징후이다. 전통적으로 박피(exfoliation)는 피부의 미용적 외관을 해치는 표피 세포를 제거하기 위해 사용될 수 있다.

박피는 표피의 외부층을 제거하여 아래의 더 새로운 피부 세포를 드러낸다. 박피는 물리적 수단에 의해(즉, 피부의 찰과상) 또는 화학적 수단에 의해 달성될 수 있다. 화학적 박피제는 살리실산, 글라이콜산, 과일효소, 시트르산 또는 말산을 함유하는 스크럽을 포함하고, 피부과 전문의에 의해 고농도로 또는 처방전 없이 살 수 있는 제품에서 저농도로 적용될 수 있다. 화학적 박피는 알파 하이드록시산(AHA) 또는 베타 하이드록시산(BHA)을 함유하는 생성물의 사용, 또는 세포 접합에서 함께 세포를 보유하는 아교 유사 물질을 느슨하게 하여 그들을 늦추게 하는 작용을 하는 효소의 사용을 수반할 수 있다. 이 유형의 박피는 여드름 치료 중인 사람들에게 권고된다.

박피에 대한 가장 큰 단점은 그것을 달성하기 위해 사용되는 일부 생성물 및 방법의 높은 가격이다. 박피는 피부에 일부 초기 발적을 야기할 것이다. 화학적 박피의 마지막 근처에서, 피부 표면 상에서 색이 밝은 백색 내지 회색으로 변하면서 피부는 탈색될 것이다.

그러므로, 박리보다 피부상에서 더 순하게 피부의 과다색소침착을 감소시키는 효과적인 방법이 바람직하다.

따라서 피부의 미적 외관을 촉진하는데 적합한 생성물 및 치료에 대한 필요가 남아있다. 다시 말해서, 피부의 미용적 외관을 개선시키기 위한 생성물 및 방법이 바람직하다. 특히, 노화된 피부에 젊은 외관을 회복하고/하거나 노화 중인 피부의 징후와 싸우는 생성물 및 방법에 대한 요구가 있다.

어류 부화액에서 발견되는 분자, 즉, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물은 이제 놀랍게도 피부의 미용적 외관을 개선시키는데, 특히 노화 중인 피부와 관련된 신체의 징후 또는 증상을 감소시키는데 현저하게 효과적인 것으로 발견되었다.

난생 척추동물 유기체, 예를 들어 어류, 양서류, 조류 및 파충류로부터의 배아의 부화는 알 껍질(eggshell)의 단백질성 부분을 부분적으로 또는 완전히 분해할 수 있는 전형적으로 부화 효소로서 알려진 다양한 효소에 의해 용이하게 된다. 모든 척추동물의 난모세포는 다양한 폴리펩타이드의 가교에 의해 구성된 난황 외피, 알 껍질 또는 장막(본 명세서에서 상호호환적으로 사용됨)으로서 공지된 특징적 세포밖 외피를 가진다. 상이한 특이도를 지니는 프로테아제는 알 껍질을 연화, 침식 및/또는 붕괴(즉, 분해)하고 배아의 방출을 용이하게 하기 위해 장막 상에서 작용한다. 따라서, 부화 과정 동안 알로부터 방출된 유체 및/또는 배아 부화 유체(즉, 부화액)는 다수의 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드의 일부, 즉, 분해 산물을 포함한다.

연어과(Salmonidae) 부화액으로부터 유래된 단백질 및 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물은 놀랍게도 피부의 미용적 외관에 대해 확연한 효과를 갖는 것으로 발견되었다. 이론에 의해 구속받지 않고, 예는 연어과 부화액 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물이 피부의 젊은 외관을 회복할 수 있다는 것을 입증한다. 다른 어류로부터의 부화액은 연어과로부터의 부화액에서 발견되는 폴리펩타이드와 기능적으로 동등한 폴리펩타이드를 함유한다. 본 명세서에 정의된 조성물 중의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부의 조합(적어도 50가지의 상이한 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 것으로 생각됨)은 피부의 진피 및 표피 내에 존재하는 상이한 유형의 단백질과 상호작용할 수 있는 것으로 생각된다. 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부의 조합은 상승적으로 작용할 수 있고, 이들 상호작용은 적어도 부분적으로 피부의 미용적/미적 외관에 대한 조성물의 효과를 초래할 수 있는 것으로 믿어진다.

따라서, 가장 넓게, 본 발명은 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물을 제공하는 것으로 볼 수 있되, 조성물은 연어과 부화액으로부터 얻어지지 않거나 또는 얻어질 수 없다. 특히, 조성물은 피부의 미적 외관을 촉진함에 있어, 또는 촉진하기 위한 방법에서 사용하기 위한 것이다. 다시 말해서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물은 피부의 미용적 외관을 개선시키는데 또는 개선시키기 위한 방법에서 사용하기 위한 것이다. 특히 바람직한 양태에서, 본 발명은 노화된 피부에 대해 젊은 외관을 회복하고/하거나 노화 중인 피부의 징후와 싸우는데 또는 이를 위한 방법에서 사용하기 위해, 본 명세서에 기재된 바와 같은, 연어과 부화액을 제외한 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물을 제공하는 것으로 볼 수 있다. 상기 지칭한 조성물은 또한 본 명세서에서 "부화액 추출물"로서 지칭된다. 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부에 추가로, 상기 추출물은 천연 비-단백질성 물질을 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 연어과 부화액으로부터 얻어지지 않거나 또는 얻어질 수 없는(즉, 유래되지 않는) 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부를 포함하는 조성물이 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 화장료 조성물로서 제공될 수 있다는 것은 명백할 것이다.

따라서, 일 양태에서 본 발명은 어류 부화액으로부터 본 명세서에 기재된 바와 같은 화장료 조성물을 제공하는 방법을 제공하되, 상기 부화액은 연어과 부화액이 아니고, 적어도 하기 단계들 a) 내지 d)를 포함하는, 어류 부화액으로부터 본 명세서에 기재된 바와 같은 약제학적 또는 화장료 조성물을 제조하는 방법을 제공한다:

a) 최소 용적(예를 들어, 알과 동일한 용적 이하)의 물 중에서 어류 알을 현탁시키는 단계로서, 상기 알은 연어과 알이 아닌, 상기 현탁시키는 단계;

b) (바람직하게는 80% 초과의 배아에 대해 부화가 6시간 미만 내에 완료되도록) 상기 알의 동기화된 신속한 부화(synchronized, rapid hatching)를 유도하는 단계;

c) 선택적으로 부화된 알을 여과시켜 부화액을 얻는 단계; 및

d) 조성물을 얻기 위하여 b) 또는 c)의 부화액을 여과시키는 단계로서, 적어도 하기 단계들 (i) 내지 (v)를 포함하는, 상기 부화액을 여과시키는 단계:

(i) 적어도 5㎛의 기공 크기, 바람직하게는 5 내지 15㎛, 및 특히 바람직하게는 7㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 부화액을 여과시키고, 그 여과액을 수집하는 단계;

(ii) 0.30 내지 0.60㎛의 기공크기, 바람직하게는 0.35 내지 0.55㎛의 기공 크기, 특히 바람직하게는 0.40 내지 0.50㎛, 가장 바람직하게는 0.45㎛를 지니는 필터를 사용하여 (i) 단계로부터의 여과액을 여과시키고 그 여과액을 수집하는 단계;

(iii) 단계 (ii)로부터의 여과액 중의 물을 약제학적으로 또는 미용적으로 허용가능한 완충제와 교환하는 단계;

(iv) 0.15 내지 0.30㎛의 기공 크기, 바람직하게는 0.22㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 단계 (iii)으로부터 얻어진 용액을 여과시키고, 그 여과액을 수집하는 단계; 및

(v) 단계 (iv)로부터의 여과액으로부터 상기 화장료 조성물을 제조하는 단계.

본 명세서에 언급된 바와 같은 "부화액"은 부화 과정 동안 알로부터 방출된 유체이며, 조질의, 희석 또는 여과된 형태로 있을 수 있다. 조질의 부화액은 미희석, 미처리 유체를 지칭한다. 희석된 부화액은 부화 동안 또는 부화 후에 다른 유체와 혼합될 수 있는 부화액을 지칭한다.

본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 방법에 의해 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 화장료 조성물을 제공한다.

여과액 중에서 물을 교환하는 단계는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법, 예를 들어 정용여과 또는 투석을 사용하여 수행될 수 있다. 특정의 바람직한 실시형태에서, 이 단계는 15kDa 이하, 바람직하게는 10kDa 이하, 예를 들어 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3kDa 이하의 배제 크기를 지니는 필터를 사용하는 정용여과를 사용하여 수행된다.

정용여과는 용액으로부터, 예를 들어 염 또는 다른 원치않는 또는 바람직하지 않은 미세용질을 제거하기 위해 또는 용매, 예를 들어 완충제 용액을 교환하는 방법으로서 초미세여과막을 사용한다. 소분자는 용액으로부터 분리되는 한편, 잔류액 중에 더 큰 분자(필터를 통과하지 않은 물질)를 남긴다. 미세용질 및 용매, 예를 들어 물은 일반적으로 막을 통해 용이하게 세척된다. 전형적으로 약 3 용적의 정용여과 용매(예를 들어, 인산염 완충 식염수)는 95%의 미세용질을 제거할 것이다. 따라서, 단계 (ii)로부터의 상기 여과액은 정용여과에 의해 처음으로 처리되고, 이는 용액의 부분(부화액의 가용성 불순물/원치않는 분획을 함유)이 막을 통과함에 따라 잔류액의 농도를 생성한다. 이어서, 잔류액은 약제학적으로 허용가능한 완충제, 예를 들어 0.5mM 인산나트륨 및 1mM 염화나트륨, 인산염 완충 식염수 등으로 희석된다. 필요하다면, 희석된 잔류액에 반복된 횟수의 정용여과를 실시할 수 있다. 전형적으로, 단계 (iv) 전에, 잔류액은 단계 (iv)로부터의 여과액이 3000 내지 5000mU/ℓ, 바람직하게는 3000 내지 4000mU/ℓ 및 가장 바람직하게는 약 3400mU/ℓ의 효소 활성을 가지도록 희석된다. 여과액의 효소 활성은 인자 Xa 색원체 기질(CH₃OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH, 시그마 알드리치(Sigma aldrich) 제품 번호: F3301-25MG)을 절단하는 여과액의 능력에 의해 측정될 수 있다. 정용여과 단계 전에, 부화액은 10 내지 150,000mU/ℓ의 범위에서 효소적 활성을 포함할 수 있다. 일 단위(1U)는 분당 1μ㏖의 기질의 전환을 촉매하는데 필요한 효소의 양으로서 정의될 수 있다.

인자 Xa 색원체 기질(시그마 알드리치)은 부화액 중에 존재하는 효소에 의해 절단되어 405㎚의 파장에서 분광 측정학적 분석을 사용하여 편리하게 측정될 수 있는 황색 생성물을 수득한다. 전형적 분석은 10㎕ 인자 Xa 색원체 기질(밀리-q 또는 증류수 중에서 10㎎/㎖), 70㎕ 0.2 M 트리스-HCl pH 8.5 및 520㎕ dH₂O를 포함하는 600㎕ 기질 용액에 상기 방법의 단계 (iii)로부터 얻을 수 있는 100㎕ 부화액 용액의 첨가를 포함한다. 편리하게는 흡광도의 변화는 5 내지 20분 동안(또는 낮은 효소 활성을 지니는 샘플에 대해 1시간까지), 전형적으로 10분 동안 측정될 수 있다. 샘플 1㎖ 당 효소 활성을 얻기 위해 상기 결과에 적절한 인자, 예를 들어 10(10분 분석 동안)을 곱한다. 부화액의 활성을 결정하기 위해 다른 적절하고 동등한 기질이 사용될 수 있다.

상기 언급한 바와 같이, 일부 실시형태에서, 정제를 위해 얻어진 부화액의 양, 특히 부화액 중에서 목적으로 하는 폴리펩타이드 또는 이의 부분의 양을 최대화하기 위해 알 부화 단계와 동기화시키는 것이 유리할 수 있다. 동기화된 부화는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 일부 알은 광 조작을 사용하여, 예를 들어, 알을 광(부화를 저해함)으로부터 광이 없는 조건으로 전달하여 동기화될 수 있다. 알 온도, 예를 들어 알이 부화하는 용액 온도의 조작, 부화 환경에서 이산화탄소의 양을 증가시키는 부화 환경의 탈산소화, 예를 들어 알이 부화하는 용액의 탈산소화(Oppen-Berntsen et al. 1990, Aquaculture, 86, pp. 417-430)) 및 전기를 사용하는 알의 자극은 또한 동기화된 부화를 야기하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 동기화된 부화는 페로몬, 예를 들어 배아 발생 및 부화에 영향을 미칠 수 있는, 즉, 자극할 수 있는 펩타이드 페로몬을 사용하여 달성될 수 있다. 상기 언급한 바와 같이, 알은 알 용적 이하일 수 있는 최소 용적의 물속에 현탁될 수 있으며, 예를 들어 1㎖의 알마다, 1, 0.75, 0.5, 0.25㎖ 이하의 현탁 액체, 예를 들어 0.5 내지 1㎖가 사용될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 상기 알의 동기화된 신속한 부화는 80% 초과의 배아에 대해 6시간 미만 내에 부화가 완료되도록 하는 것이다. 특히 바람직한 실시형태에서, 부화는 5, 4, 3 또는 2시간 미만, 예컨대 0.5 내지 6시간, 1 내지 5시간, 1.5 내지 4시간, 2 내지 3시간, 예를 들어 1 내지 2시간 내에 완료된다. 더 나아가, 일부 실시형태에서 부화는 배아의 85%, 90% 또는 95% 초과, 예를 들어 배아의 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 초과에 대해 상기 언급한 기간 내에 완료된다.

일부 실시형태에서 후속 정제 단계를 용이하게 하기 위해 부화액을 희석시키는 것, 예를 들어 부화액의 점성도를 감소시키는 것이 유리할 수 있다. 따라서, 상기 방법은 단계 (d) 전에 부화액을 희석시키는 추가 단계를 포함할 수 있다. 바람직하게는 여과액은 적어도 0.1, 0.2, 0.5, 0.75, 1.0, 1.5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 50, 100, 1000, 5000 또는 10000배만큼 희석될 수 있다.

상기 기재한 화장료 조성물을 제조하는 방법은 바람직하게는 공급원 물질 또는 단리 절차에서 사용되는 물질로부터 유래된 임의의 오염 구성성분, 예를 들어 조질의 부화액에 포함된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부 이외의 구성성분이 실질적으로 없는 풍부화된 제제를 초래한다. 바람직한 실시형태에서, 조성물은 시작 부화액에 비해 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드의 일부의 평가된 w/w(건조 중량)으로서 30, 40, 50 또는 60% 초과, 예를 들어 70, 80 또는 90% 초과의 순도로 풍부화될 수 있고, 즉, 90% 순도는 제조 방법의 과정을 통해 출발 물질(오염 구성성분)의 90% 손실을 지칭한다. 그러나, 더 낮은 순도를 갖는 조성물이 사용될 수 있고, 예를 들어 40, 50, 60, 70, 80 또는 90% 초과의 출발 물질을 보유한다.

여과액은 그 자체가 화장료 조성물을 형성할 수 있지만, 선택적으로 상기 방법으로부터 얻어진 또는 얻을 수 있는 생성물(단계 (iv)의 여과액)은 화장료 조성물을 생성하는 적절한 농도로 및/또는 단계 (v)에서 본 발명의 방법 및 용도에서 그것의 사용 전에 희석(또는 농축)될 수 있다. 따라서, 상기 방법은 조성물을 희석(또는 농축)시키는 추가 단계를 포함할 수 있다. 바람직하게는 여과액은 적어도 1.5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 50, 100, 1000, 5000 또는 10000배만큼 희석(또는 농축)될 수 있다. 특히 바람직하게는 최종 조성물은 단계 (iv)의 여과액의 0.5 내지 10%, 예를 들어 0.5 내지 5%, 바람직하게는 0.5 내지 3%(예를 들어, 1 또는 3%)를 포함한다. 특정의 바람직한 실시형태에서, 상기 방법의 단계 (iii)으로부터의 용액은 희석 또는 농축되어 상기 기재한 방법에 의해 측정되는 바와 같이 1000 내지 10000mU/ℓ의 효소적 활성을 지니는 용액을 달성한다. 바람직하게는 용액, 및 그에 따라 단계 (f)로부터의 여과액은 2000 내지 10000, 3000 내지 9000, 3000 내지 7000, 3000 내지 6000, 3000 내지 5000 또는 3000 내지 4000mU/ℓ의 활성을 포함한다. 가장 바람직하게는 용액은 약 3400mU/ℓ의 활성을 포함한다.

선택적으로, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제가 상기 방법으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 생성물에 첨가될 수 있다. 따라서, 방법은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제를 조성물에 첨가하는 추가 단계 또는 단계 (v) 동안 조성물을 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제와 합하는 단계를 포함할 수 있다. 대안의 또는 추가적인 제조 방법 단계는 용매, 예를 들어 pH, 이온 농도 등을 변화 또는 변형시키는 것을 포함한다.

다른 약제학적으로 허용가능한 구성성분 또는 성분은, 예를 들어 단계 (v) 동안 상기 방법으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 생성물에 첨가될 수 있다. 하나 이상의 다른 구성성분은 활성 구성성분, 즉, 피부 상에서 효과를 갖는, 또한 바람직하게는 피부의 미적 외관을 촉진하거나 피부의 미용적 외관을 개선시키는 작용을 하는, 예를 들어 본 명세서에 기재된 미용적 적응증에서 유용한 구성성분일 수 있다. 따라서, 대안적으로 또는 추가적으로, 상기 방법은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 활성 구성성분을 조성물에 첨가하거나 또는 상기 조성물을 단계 (v)에서의 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 활성 구성성분과 조합하는 추가 단계를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 활성 구성성분은 이하에 더 상세하게 기재하는 바와 같이 무기염, 비타민, 효소, 단백질, 펩타이드, 아미노산, 지질, 항산화제, 다당류, 자외선차단제로서 적합한 물질, 화학적 박피제, 추출물 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

상기 방법으로부터 얻어지거나 또는 얻을 수 있는 화장료 조성물은 본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같이 본 발명의 방법에서 사용하기에 적합하다. 특히, 화장료 조성물은 포유류 동물에서 피부의 미용적 외관을 개선시킴에 있어 사용을 위한 것이다.

본 발명은 또한 포유류 동물의 피부의 미용적 외관을 개선시키기 위한 방법을 제공하되, 상기 정의한 바와 같은 화장료 조성물이 상기 동물에게 투여된다.

본 발명의 추가 양태는 포유류 동물의 피부의 미용적 외관을 개선시키기 위한 의약의 제조에서 상기 정의한 바와 같은 화장료 조성물의 용도이다.

본 명세서에서 언급되는 바와 같은 "폴리펩타이드"는 바람직하게는 50, 100, 150, 200 또는 250개 초과의 잔기 및/또는 500, 400, 300, 200 또는 100개 미만의 잔기 또는 그것들로부터 선택된 범위를 지니는 분자이다. 본 명세서에 언급되는 바와 같은 "일부"는 바람직하게는 그것이 유래된 서열의 적어도 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240개 이상의 아미노산을 포함한다. 상기 일부는 서열의 중심 또는 N-말단 또는 C-말단으로부터 얻어질 수 있다.

본 명세서에 정의된 바와 같은 조성물은 연어과 알을 제외한 임의의 어류 알로부터 얻어질 수 있으며, 즉, 본 발명의 조성물은 연어과 알, 예를 들어, 살모( Salmo)의 아과 및 연어속(Oncorhynchus), 예컨대 대서양 연어(살모 살라((Salmo salar)) 또는 태평양 연어(산천어(Oncorhynchus masou))로부터의 알로부터 얻어지지 않거나 또는 얻어질 수 없다. 일반적으로, 어류는 모체 내에서 배아 발생을 거의 또는 전혀 겪지 않은 알을 낳으며, 따라서 어류 알은, 본 발명의 화장료 조성물이 본 명세서에 기재된 방법에 의해 얻어지거나 또는 얻어질 수 있는 부화액의 유용한 공급원을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 방법을 위한 출발 물질로서 알을 제공할 수 있는 적합한 어류는 연어과로부터의 어류를 제외하고 조기아강(Actinopterygii)의 3종의 하급 중 하나인 진골상목(Teleostei) 하강의 임의의 어류를 포함한다. 따라서, 어류는 골설어상목(Osteoglossomorpha), 당멸치상목(Elopomorpha), 청어상목(Clupeomorpha), 골표상목(Ostariophysi), 원극기상목(Protacanthopterygii)(연어과로부터의 어류를 제외함), 협기상목(Stenopterygii), 원린상목(Cyclosquamata), 스코펠로상목(Scopelomorpha), 이악어상목(Lampridiomorpha), 폴리믹시아상목(Polymyxiomorpha), 측극기상목(Paracanthopterygii) 및 극기상목(Acanthopterygii)로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 상목으로부터의 어류로부터 선택될 수 있다.

일부 실시형태에서, 어류는 골설어목(Osteoglossiformes), 히오돈목(Hiodontiformes), 당멸치목(Elopiformes), 여을멸목(Albuliformes), 밑보리멸목(Notacanthiformes), 뱀장어목(Anguilliformes), 심해뱀장어목(Saccopharyngiformes), 청어목(Clupeiformes), 압치목(Gonorynchiformes), 잉어목(Cypriniformes), 카라신목(Characiformes), 김노투스목(Gymnotiformes), 메기목(Siluriformes), 샛멸목(Argentiniformes), 연어목(Salmoniformes)(연어과로부터의 어류를 제외함), 민물꼬치고기목(Esociformes), 바다빙어목(Osmeriformes), 꼬리치목(Ateleopodiformes), 앨퉁이목(Stomiiformes), 홍메치목(Aulopiformes), 샛비늘치목(Myctophiformes), 이악어목(Lampriformes), 턱수염금눈돔목(Polymixiiformes), 연농어목(Percopsiformes), 두꺼비고기목(Batrachoidiformes), 아귀목(Lophiiformes), 대구목(Gadiformes), 첨치목(Ophidiiformes), 숭어목(Mugiliformes), 색줄멸목(Atheriniformes), 동갈치목(Beloniformes), 케토미무스목(Cetomimiformes), 열대송사리목(Cyprinodontiformes), 스테파노베리스목(Stephanoberyciformes), 금눈돔목(Beryciformes), 달고기목(Zeiformes), 학치목(Gobiesociformes), 큰가시고기목(Gasterosteiformes), 실고기목(Syngnathiformes), 드렁허리목(Synbranchiformes), 복어목(Tetraodontiformes), 가자미목(Pleuronectiformes), 쏨뱅이목(Scorpaeniformes) 농어목(Perciformes) 및 철갑상어목(Acipenseriformes)으로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 목의 어류로부터 선택될 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 어류는 연어목(연어과로부터의 어류를 제외함), 잉어목, 농어목, 메기목, 숭어목 및 철갑상어목으로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 목의 어류로부터 선택될 수 있다.

특정의 바람직한 실시형태에서, 어류는 잉어과(Cyprinidae), 시클리드과(Cichlidae), 팬가시메기과(Pangasiidae), 민어과(Sciaenidae), 바리과(Serranidae), 전갱이과(Carangidae), 도미과(Sparidae), 스즈키과(Lateolabracidae), 농어과(Moronidae), 숭어과(Mugilidae), 송사리과(Oryziinae), 나일농어과(Latidae), 구굴무치과(Eleotridae) 및 철갑상어과(Acipenseridae)로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 과의 어류로부터 선택될 수 있다.

따라서, 일부 실시형태에서, 어류는 골린 어류, 문아이, 불볼락, 당멸치, 타폰, 여울멸, 발광멸과, 스파이니일, 트루일, 풍선장어, 큰입장어, 청어, 멸치, 밀크피쉬, 밥(barb), 잉어, 다니오, 금붕어, 미꾸라지, 피라미, 라스보라, 카라신, 펜슬피쉬, 도끼고기, 피라냐, 테트라, 전기뱀장어, 나이프피쉬, 메기, 배럴아이 피쉬, 민머리치, 강꼬치고기, 바다빙어, 갤락시드, 꼬리치과, 앨퉁이류, 납작앨퉁이, 물천구, 늑대고기, 샛비늘치, 산갈치, 빨간개복치, 홍투라치, 금눈돔과, 동굴어, 송어-퍼치, 복어, 아구, 대구, 숨이고기, 실버아로와나, 숭어, 은줄멸, 레인보우피쉬, 날치, 웨일피쉬, 태생어, 킬리피쉬, 릿지헤드, 귀신고기, 철갑둥어, 달고기, 황학치, 큰가시고기, 파이프피쉬, 해마, 드렁허리, 파랑쥐치, 복어, 가자미, 쏨뱅이, 둑중개, 버들붕어과, 배스, 시클리드, 망둥이, 구라미, 고등어, 퍼치, 스캣, 명태 또는 레스일 수 있다.

특히 바람직한 실시형태에서, 어류는 초어(크테노파링고돈 이델라(Ctenopharyngodon idella)), 백연어(하이포프탈미크티스 모리트릭스(Hypophthalmichthys molitrix)), 카틀라(카틀라 카틀라(Catla catla)), 잉어(시프리누스 카르피오(Cyprinus carpio)), 대두어(하이포프탈미크티스 노빌리스(Hypophthalmichthys nobilis)), 붕어(카라시우스 카라시우스(Carassius carassius)), 역돔(오레오크로미스 닐로티쿠스 닐로티쿠스(Oreochromis niloticus niloticus)), 판가스 메기(판가시우스 판가시우스(Pangasius pangasius)), 로호 라베오(Roho labeo)(라베오 로히타(Labeo rohita)), 부세(라리미크티스 크로세아(Larimichthys crocea)), 그리지 그루퍼(Greasy grouper)(에피네펠루스 타우비나(Epinephelus tauvina)), 방어(세리올라 퀸쿼라디아타(Seriola quinqueradiata)), 길트레트 시브레암(Gilthead seabream)(스파루스 아우라타(Sparus aurata)), 농어(라테올라브랙스 자포니쿠스(Lateolabrax japonicus)), 유러피언 시배스(디센트라쿠스 라브랙스(Dicentrarchus labrax)), 참돔(크리소프리스 아우라투스(Chrysophrys auratus)), 숭어(무길 세팔루스(Mugil cephalus)), 바라문디(라테스 칼카리페르(Lates calcarifer)), 마블 고비(옥시엘레오트리스 마르모라타(Oxyeleotris marmorata)), 역돔(오레오크로미스 모잠비쿠스(Oreochromis mossambicus)), 시베리아 철갑상어(아시펜세르 바에리(Acipenser baerii)) 및 다누베 스투르게온(Danube sturgeon)(아시펜세르 구엘덴스타에드티(Acipenser gueldenstaedtii))으로부터 선택된 임의의 종일 수 있다.

일부 실시형태에서, 화장료 조성물은 한 가지 이상의 유형의 알, 즉, 한 가지 이상 유형의 어류 알, 즉, 한 가지 이상의 유형의 어류로부터의 알로부터의 부화액으로부터 얻어질 수 있다. 예를 들어, 2 이상의 유형의 알로부터의 부화액은 본 발명의 화장료 조성물을 얻기 위해 본 명세서에 기재된 방법에서 사용될 수 있었다. 따라서, 본 발명의 방법은, 예를 들어 여과 전 또는 여과 후에 하나 이상의 어류의 부화알로부터 수집된 부화액을 합하는 단계를 포함할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 어류로부터의 알은 출발물질의 천연 생물학적 변형으로서 검토될 수 있다.

본 명세서에 기재된 화장료 조성물은 본 명세서에 논의된 바와 같은 생체내 사용을 위한 것이다.

"약제학적으로 허용가능한" 또는 "생리학적으로 허용가능한" 또는 "미용으로 허용가능한"은 성분이 미용적 적용분야 및 조성물에 적합하여야 한다는 것을 의미한다. 성분은 또한 조성물 내 다른 성분과 양립가능할 뿐만 아니라 환자에 대해 생리학적으로 허용가능하여야 한다.

투여를 위한 활성 성분, 즉, 상기 기재한 방법에 의해 얻어질 수 있는 조성물은 화장료 조성물에서 사용하기 위해 적절하게 변형될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 조성물은, 예를 들어 염 또는 비전해질, 아세테이트, SDS, EDTA, 시트레이트 또는 아세트산 완충제, 만니톨, 글라이신, HSA 또는 폴리솔베이트와 같은 적절한 첨가제의 사용에 의해 분해에 대해 안정화될 수 있다.

본 명세서에 기재된 방법에 의해 얻어지는 폴리펩타이드 구성성분은 유일한 활성 성분으로서 미용적 용도를 위한 조성물에 존재할 수 있거나, 또는 다른 성분, 특히 다른 활성 성분과 조합되어, 예를 들어 미용적 효과(상기 기재한 바와 같음)를 증가시키거나 또는 조성물이 소비자에게 더 매력적이 되게 한다. 일부 실시형태에서, 상이한 공급원의 부화액으로부터 유래된 본 발명의 방법에 의해 얻어진 조성물이 합쳐질 수 있다.

상기 언급한 바와 같이, 본 명세서에 기재된 조성물은 피부, 특히 노화된 피부, 예를 들어 광-노화된 피부의 미용적 외관을 개선시킴에 있어 유용한 특성을 나타낸다.

본 명세서에 기재된 조성물은 또한, 예를 들어 상기 기재한 천연 공급원 중 하나로부터 상기 조성물의 제조 후에 불순물을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재한 바와 같은 조성물에서, 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 다양한 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 상기 기재한 방법에 따라 제조된 조성물의 범위 0.0001 내지 50% w/w에서 (조합하여) 존재할 수 있다. 바람직하게는 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 상기 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 화장료 조성물의 0.0001 내지 10% w/w 범위(또는 10 내지 40%까지)에서, 예를 들어 상기 방법에 따라 제조되는 조성물의 0.0001 내지 5%, 0.0001 내지 3%, 0.0001 내지 2%, 0.0001 내지 1%, 0.0001 내지 0.5%, 0.0001 내지 0.1% w/w에서(예를 들어, 최종 단계에서 희석된다면, 0.01 내지 0.1% w/w 또는 0.0001 내지 0.001 w/w w/w에서)(조합하여) 존재한다. 따라서, 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 개개 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 화장료 조성물의 1x10^-6 내지 10% w/w의 범위에서 존재할 수 있다. 일부 실시형태에서 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 상기 개개 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는, 단계 (iv)에서 추가로 희석되지 않는다면, 화장료 조성물의 범위 1x10^-6 내지 5% w/w에서, 예를 들어 화장료 조성물의 1x10^-6 내지 4%, 1x10^-6 내지 3%, 1x10^-6 내지 2%, 1x10^-6 내지 1%, 1x10^-6 내지 0.5%, 1x10^-6 내지 0.1% 또는 1x10^-6 내지 0.01% w/w에서 존재할 수 있거나, 또는 단계 (v)에서 희석된다면, 예를 들어 10 내지 200, 예를 들어 30 내지 100배만큼 감소된다.

화장료 조성물 중의 어류 부화액으로부터 유래될 수 있는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부의 비율은 조성물 중의 다른 용질에 대해, 즉, 용매, 예를 들어 물을 제외하고 정해질 수 있다. 따라서, 상기 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조합하여 조성물의 건조 질량의 1 내지 100% w/w 범위에서 존재할 수 있다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조합하여 조성물의 건조 질량의 1 내지 90% w/w의 범위에서, 예를 들어 5 내지 80%, 10 내지 70%, 20 내지 60%, 30 내지 50%w/w의 범위에서 존재할 수 있다. 다른 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조합하여 조성물의 건조 질량의 1 내지 40%, 2 내지 39%, 3 내지 38%, 4 내지 37% 등 w/w의 범위에서 존재할 수 있다. 따라서, 개개 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부는 조성물의 건조 질량의 0.0001 내지 50% w/w의 범위에서, 예를 들어 조성물의 건조 질량의 0.0001 내지 40%, 0.001 내지 30%, 0.01 내지 25% w/w에서 존재할 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 조성물은 단계 (v)에서 본 발명에 따른 사용을 위해 희석될 수 있다.

본 발명은 피부의 미용적 외관을 개선시키기 위한 방법에 관한 것임에도 불구하고, 이는 장애, 이상증 또는 병태의 치료를 포함할 수 있지만, 모든 경우에 치료는 사실상 미용적이다.

본 명세서에 지칭되는 바와 같은 "미용적"은 질환 또는 장애를 치유, 치료 또는 예방하지는 않지만, 대신에 피부관리 제품으로서 작용하거나 또는 피부 외관, 예를 들어 피부의 색, 질감 또는 수분 함량을 변형 또는 개선시키는 처리를 지칭하는 것으로 의도된다.

본 명세서에 기재된 치료의 기반은 본 명세서에 개시된 바와 화장료 조성물의 피부 항-노화 효과이다. 이들 효과는 본 명세서에 제공된 실시예에 나타내었다.

따라서 화장료 조성물의 항-노화 특성에 기반한 치료가 상정된다.

따라서 본 발명은 포유류 동물의 피부의 외관을 개선시키는 미용적 방법을 제공하되, 본 명세서에서 앞서 기재된 바와 같은 화장료 조성물은 상기 동물에게 투여된다.

특히 바람직한 실시형태에서, 피부는 노화된 피부이다.

"노화된 피부"는 하나 이상의 노화 징후 또는 증상, 즉, 주름, 잔주름, 과색소침착증, 늘어짐(처짐), 건성 피부, 벗겨짐 또는 경피수분손실(TEWL)을 나타내는 피부를 지칭한다. 특히, "노화된 피부"는 정상의 최적 피부, 즉, 건강한, 수화된, 정상적으로 색소형성되고 비-노화된 피부에 비해 결정된다. 이와 관련하여, 노화된 피부는 대상체 연령과 관련될 필요는 없으며, 너무 이르게, 예를 들어 태양광에 대한 만성 노출에 의해(광노화) 노화될 수 있다. 따라서, "정상의 최적 피부"에 대한 상대적 파라미터는 동일 또는 유사한 연령의 다수 대상체로부터 당해 대상체, 예를 들어 태양광에 대해 만성 노출을 받지 않은 대상체까지 상기 노화 징후의 평균 측정으로서 결정될 수 있다. 대안적으로, "정상 최적 피부"에 대한 상대적 파라미터는 당해 대상체보다 더 젊은 대상체로부터의 측정으로서 취해질 수 있다. 다시 말해서, 본 명세서에 기재된 조성물은 더 어린 연령의 대상체의 피부에 비해 더 젊은 외관의 피부를 회복하기 위해 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명은 포유류 동물에서 광노화의 치료를 위한 미용적 방법을 제공하되, 본 명세서에서 앞서 기재된 바와 같은 화장료 조성물은 상기 동물에게 투여되며, 바람직하게는 상기 조성물은 국소적으로 투여된다.

대안적으로 검토하면, 본 발명은 포유류 동물에서 광노화의 치료에서 사용을 위해 본 명세서에서 앞서 기재한 바와 같은 화장료 조성물을 제공하되, 바람직하게는 상기 화장료 조성물은 상기 동물의 피부에 투여를 위한 것이다. 특정 실시형태에서, 조성물은 국소 투여를 위한 것이다.

특히 바람직한 실시형태에서, 피부(예를 들어, 노화 또는 광손상된 피부)의 미용적 외관을 개선시키는 것은 주름, 잔주름, 과색소침착증, 늘어짐, 건성 피부, 벗겨짐 및/또는 경피수분손실의 미용적 외관 또는 유병률의 감소 또는 예방을 수반한다. 이들 파라미터 중 하나 이상은 개선될 수 있다. 바람직하게는 잔주름 및/또는 주름은 감소된다.

예를 들어, 노화된 피부 또는 광노화의 징후 또는 증상의 미용적 외관 또는 유병률에서의 감소 또는 예방은 징후 또는 증상의 수 및/또는 중증도의 감소가 있음을 의미할 수 있다. 예를 들어, 잔주름 및 주름의 수는 감소될 수 있고/있거나, 주름 또는 잔주름의 크기, 예를 들어 깊이는 감소 또는 최소화될 수 있다. 더 나아가, 감소 또는 예방은 새로운 징후 또는 증상의 외관 속도를 중단 또는 감소시키는 것을 수반할 수 있다.

본 명세서에 지칭되는 바와 같은 "건성 피부"는 잔주름, 벗겨짐 및 가려움 및/또는 작열감의 패턴을 특징으로 하는 수분 또는 피지가 없는 표피를 지칭한다. 건성 피부는 그 자체가 피부 병태로서 생길 수 있거나(예를 들어, 노화에 기인) 또는 일광 손상과 같은 피부 장애 또는 병태의 증상일 수 있다.

이와 관련하여, 건성 피부, 벗겨짐, 잔주름 또는 경피수분손실의 감소는 상기 기재한 조성물의 보습 효과에 의해 달성될 수 있다.

따라서, 본 발명은 포유류 동물의 피부를 보습화하는 미용적 방법을 제공하는 것으로 볼 수 있되, 본 명세서에 정의된 바와 같은 화장료 조성물은 상기 동물에게 투여된다.

대안적으로 언급하면, 본 발명은 포유류 동물의 피부 보습화에서 사용을 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 화장료 조성물을 제공한다. (조성물은 대안적으로 해당 목적을 위한 미용적 의약을 제조하기 위해 사용될 수 있다)

본 명세서에 지칭된 바와 같은 "보습"은 피부로부터의 수분손실(예를 들어, TEWL)을 방지하는 보습제뿐만 아니라 피부에 도포될 때 물을 끌어당기고 보유하는 보습제(습윤제) 및 유연제(결손 낙설을 개선시킴)를 아우른다.

상기 언급한 바와 같이, 이러한 보습 특성은 피부의 미용적 외관을 개선시키는데 유리하다. 특히 바람직한 실시형태에서, 피부는 얼굴, 귀, 목, 손 또는 두피의 피부이다.

"주름"은 피부에서의 접힘(fold), 능선(ridge) 또는 금(crease)이다. 피부 주름은 전형적으로 노화 과정의 결과로서 생긴다. 이와 관련하여, 진피는 피부에 힘을 제공하는 콜라겐, 피부에 긴장도를 제공하는 글라이코사미노글라이칸, 및 피부에 탄성도 또는 탄력성을 제공하는 엘라스틴 섬유를 포함하는 다수의 피부 구조 구성요소를 포함한다.

피부가 노화됨에 따라, 진피층은 더 얇아지고, 피부는 또한 콜라겐을 더 적게 생성한다. 게다가, 탄력도를 제공하는 엘라스틴 섬유가 닳아 없어진다. 피부의 스캐폴딩에서의 이들 변화는 주름 및 처짐을 야기한다. 진피-상피 접합의 망융선( rete-ridge)은 점차 평평해지는데, 이는 피부를 더 약하게 만들며, 피부가 더 용이하게 전단되게 한다. 이 과정은 또한 진피와 접촉하는 표면적을 감소시킴으로써, 또한 피부의 정상 수선 과정을 방해함으로써 표피에 이용가능한 영양소의 양을 감소시킨다.

피하층에서 지방 세포는 노화됨에 따라 더 작아진다. 이는 지방 세포가 다른 층으로부터의 손상을 "채울 수 없기" 때문에 주름 및 처짐(늘어짐)을 더 뚜렷하게 한다.

UVA 및 UVB 복사, 즉, 태양광에 대한 노출은 단지 연대학적 노화(chronologic ageing)보다는 더 높은 비율로 콜라겐을 파손시킨다. 태양광은 콜라겐 섬유를 손상시키며, 비정상 엘라스틴의 축적을 야기한다. 광-유발 엘라스틴이 축적될 때, 기질금속단백분해효소(matrix metalloproteinase: MMP)는 다량으로 생성된다. 정상적으로는, 금속단백분해효소는 콜라겐의 제조 및 재형성에 의해 광손상 피부를 리모델링한다. 그러나, 이 과정은 항상 제대로 작동하지는 않으며, 금속단백분해효소 중 일부는 실제로 콜라겐을 분해한다. 이는 태양광 흉터(solar scar)로 알려진 무질서한(disorganized) 콜라겐 섬유의 형성을 야기한다. 이 불완전한 재건/재생 과정의 반복은 주름이 생기게 하며 피부를 늘어지게 한다.

추가 바람직한 양태에서, 미용적으로 치료 또는 예방될 피부 병태는 색소형성 병태, 장애 또는 이상증이다.

피부의 색소형성 장애 또는 이상증, 즉, 과색소침착증은 노화의 결과로서 생길 수 있거나, 또는 예를 들어 광 손상에 기인하여 조기 노화로부터 초래될 수 있다. 변용된 색소형성은 국소적 과량의 멜라닌세포 혹은 멜라닌세포 활성의 증가로부터, 또는 둘 다로부터 초래될 수 있다. 색소형성 장애는 간, 태양 또는 검버섯(일광흑색점) 및 다른 잡티, 예컨대 주근깨를 포함한다.

본 명세서에서 지칭되는 바와 같은 "개선시키는"은 피부의 미용적 외관이 정상의 최적 피부, 즉, 건강하고, 수화되며, 정상적으로 색소형성되고 비-노화된 피부에 대해 결정된다. 따라서, 노화된 피부에 대해, 노화의 하나 이상의 징후 또는 증상은 실시예에 기재된 바와 같이 그리고 연대순으로 또는 생리학적으로 더 젊은 피부의 동일 증상과 비교하여, 바람직하게는 개선이 노화의 하나 이상의 징후 또는 증상의 감소일 때, 측정될 수 있다.

바람직한 양태에서, 미용적 용도는 피부에 국소 투여에 의해 달성된다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은, "치료하는"은 피부가 상기 병태 또는 장애로 고통받지 않는 또는 상기 치료를 받지 않은 상기 개체의 신체의 상이한 부분에 존재하는 증상 또는 효과에 비해 또는 상기 치료를 받지 않은 대응하는 정상 개체에 비해 상기 병태 또는 장애의 하나 이상의 미용적 증상 또는 효과, 예를 들어 건성 피부의 존재 또는 정도, 색소형성의 정도 또는 면적 등의 바람직하게는 정상 수준으로 감소, 완화 또는 제거를 지칭한다.

"예방하는" 또는 "감소하는"은 해당 증상 또는 효과의 개시의 정도 또는 타이밍(예를 들어, 지연)의 절대적 방지, 또는 예방 또는 완화를 지칭한다. 예를 들어, 건성, 비정상적으로 색소형성되고, 주름진 피부에 의해 전형화된 병태는 이러한 병태의 출현 전에 본 명세서에 기재된 화장료 조성물의 주기적 적용에 의해 예방될 수 있다.

본 발명에 따른 미용적 치료 또는 예방 방법은 유리하게는 장애 또는 병태를 치료 또는 예방하는데 및/또는 예를 들어, 보습화를 달성하는데 효과적인 하나 이상의 활성 성분의 투여와 조합될 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 화장료 조성물은 이러한 활성 성분 중 하나 이상을 추가적으로 함유할 수 있다.

본 발명의 또한 추가 양태에 따르면, 본 발명자들은 본 명세서에 정의된 바와 같은 조성물 및 선택적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간 또는 포유류 동물 요법에서 동시, 별개 또는 순차적 사용을 위해 조합된 제제로서 하나 이상의 추가적인 활성 성분을 제공한다.

본 명세서에 기재된 조성물은 용이하게 입수가능한 성분을 사용하여 당업계에 잘 공지된 기법에 따라 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제와 함께 전통적인 방법으로 제형화될 수 있다. 조성물은 수계, 글라이세린계, 알코올(20%까지)계, 아크릴레이트계 오일/물 에멀전, 잔탄검계 오일/물 에멀전 또는 물/오일 에멀전으로서, 예를 들어 pH 3.5 내지 11, 바람직하게는 pH 5.5 내지 9로서 제공될 수 있다.

따라서, 조성물은 선택적으로 조합 제제로서 다른 활성 성분과 함께, 하나 이상의 전통적인 담체, 희석제 및/또는 부형제와 함께 혼입되어 전통적인 갈레닉(galenic) 제제, 예컨대 분말, 사쉐, 카셰(cachet), 엘릭시르, 현탁액(주입 유체로서), 에멀전, 용액, 시럽, 에어로졸(고체로서 또는 액체 매질 중에서), 연고, 멸균 포장 분말 등과 함께 혼입될 수 있다. 조성물은 냉동 건조, 과냉각 또는 퍼마자임(Permazyme)의 사용에 의해 안정화될 수 있다. 이러한 조성물은 본 발명의 조성물(즉, 단계 (v)에 따라 제조됨)을 형성한다.

적합한 부형제, 담체 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아검, 인산칼슘, 탄산칼슘, 락트산칼슘, 옥수수 전분, 알긴산염, 트래거캔스, 젤라틴, 규산칼슘, 미정질셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물 시럽, 물, 물/에탄올, 물/글라이콜, 물/폴리에틸렌, 글라이콜, 프로필렌 글라이콜, 메틸 셀룰로스, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필 하이드록시벤조에이트, 탈크, 스테아르산마그네슘, 광유 또는 지방 물질, 예컨대 경지 또는 이들의 적합한 혼합물이다. 지속 방출 제형을 얻기 위한 작용제, 예컨대 카복시폴리메틸렌, 카복시메틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트 또는 폴리비닐아세테이트가 또한 사용될 수 있다.

조성물은 추가적으로 윤활제, 습윤제, 유화제, 점성 증가제, 과립화제, 붕해제, 결합제, 삼투 활성제, 현탁제, 보존제, 감미제, 향미제, 흡착 향상제(예를 들어, 표면 침투제, 예를 들어 담즙염, 레시틴, 계면활성제, 지방산, 킬레이터), 항갈변제, 유기 용매, 항산화제, 안정제, 유화제, 실리콘, 알파-하이드록시산, 완화제, 소포제, 보습제, 비타민, 향료, 이온성 또는 비이온성 점증제, 계면활성제, 충전제, 이온성 또는 비이온성 점증제, 금속이온봉쇄제, 중합체, 추진제, 알칼리화제 또는 산성화제, 유백제, 착색제 및 지방 화합물 등을 포함할 수 있다. 일부 이들 구성성분은 이하에 더욱 상세하게 기재된다.

화장료 조성물 중의 다른 활성 성분 또는 구성성분은 무기염, 비타민, 효소, 단백질, 펩타이드, 아미노산, 지질, 다당류, 자외선차단제로서 적합한 물질, 화학적 박피제, 추출물, 피부 컨디셔닝제, 항산화제 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 단백질의 예는 콜라겐 및/또는 이들의 유도체(예를 들어, 상기 정의된 바와 같은 이들의 일부), 세포성장을 촉진할 수 있는 단백질 또는 펩타이드, 당단백질 1, 당단백질 2 및 라미닌을 포함한다.

본 발명의 조성물은 과일효소(예를 들어, 브로멜라인), 과산화물제거효소, 과산화효소, 하이알루로니다제 및 뮤코폴리사카리다제 중 하나 이상을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 효소와 함께 제공될 수 있다.

펩타이드는 D,L-카르노신, D-카르노신, L-카르노신, 안세린 및 매트릭실(펜타펩타이드 유도체) 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

아미노산은 L-알라닌, L-알기닌, L-아스파라긴, L-아스팔트산, L-시스테인, L-시스틴, 글라이신, L-글루타민, L-글루탐산, L-히스티딘, L-아이소류신, L-류신, L-라이신, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-트립토판, L-타이로신 및 L-발린 및 표 1에 정의된 바와 같은 비자연적으로 생기는 아미노산을 포함하는 이들의 유도체 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. 항산화제로서 특히 바람직한 아미노산은 글라이신, 라이신, 알기닌, 시스테인, 시스틴, 히스티딘, 타이로신 및 트립토판 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 지방, 오일, 왁스 등을 포함하는 하나 이상의 지질을 포함할 수 있다. 적합한 극성 오일은, 예를 들어 레시틴 및 지방산 트라이글라이세라이드의 그룹으로부터의 오일, 즉, 8 내지 24개, 특히 12 내지 18개의 탄소 원자의 쇄 길이를 지니는 포화 및/또는 불포화, 분지 및/또는 비분지 알칸카복실산이다. 지방산 트라이글라이세라이드는, 예를 들어, 합성, 반합성 및 천연 오일, 예컨대 올리브유, 해바라기유, 대두유, 땅콩유, 유채씨유, 아몬드유, 팜유, 코코넛유, 피마자유, 밀배아유, 포도씨유, 엉겅퀴유, 달맞이 종자유, 마카다미아 너트유 등으로부터 유리하게 선택될 수 있다.

대안적으로 또는 추가적으로 오일은 휘발성 오일, 비휘발성 오일 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 비휘발성 오일은 다음의 정의 중 적어도 하나를 충족시키는 오일을 포함한다: (a) 오일은 25℃ 및 1 대기압에서 0.2㎜Hg 이하의 수증기압을 나타내고; (b) 오일은 적어도 300℃의 1 대기압에서 비등점을 가진다. 휘발성 오일은 상기 정의한 바와 같은 "비-휘발성"이 아닌 물질을 포함한다.

비휘발성 오일은 비휘발성 실리콘 오일, 비휘발성 탄화수소 오일 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 적합한 비휘발성 실리콘 오일은 선형 폴리메틸실록산을 포함하고, 바람직하게는, 비-휘발성 실리콘 오일은 고분자량 디메티콘이다. 상업적으로 입수가능한 선형 폴리메틸실록산의 예는 다우 코팅 코포레이션사(Dow Corning Corporation)의 DC 200 유체 20Cst, DC 200 유체 100Cst, DC 200 유체 350Cst를 포함한다.

적합한 비-휘발성 탄화수소 오일은 다이글라이세린 또는 트라이글라이세린의 분지 에스터 또는 1,2,3,4 부탄 트라이올 또는 에리트리톨, 다이에리트리톨 또는 트라이 에리트리톨의 에스터를 포함한다. 바람직하게는, 비-휘발성 탄화수소 오일은 에리트리틸 트라이에틸헥사노에이트(닛산 올리오사(Nisshin Oilio)제의 살라코스(Salacos) E-38로서 입수가능) 및 폴리글라이세릴-2 트라이아이소스테아레이트(닛산 올리오사제의 코스몰(Cosmol) 43V로서 입수가능), 다이에틸 헥실 카보네이트(데구사(Degussa)제의 Tegosoft DEC로서 입수가능), 디카프릴 에터(코그니스 아게사(Cognis AG)로부터 세티올 OE(Cetiol OE)로서 입수가능), 디카프릴 카보네이트(코그니스 아게사로부터 세티올 CC(Cetiol CC)로서 입수가능), 아이소노닐 아이소노나네이트(셉픽사(Seppic)로부터 라놀(Lanol) 99로서 입수가능), 트라이데실 네오펜타노에이트(인터네셔널 스페셜티 프로덕츠사(International Speciality Product)제의 세라필(Ceraphyl) 55로서 공급), 또는 이들의 혼합물을 포함한다.

휘발성 오일은 휘발성 실리콘 오일, 기능화된 휘발성 탄화수소 오일과 비기능화된 휘발성 탄화수소 오일 둘 다 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 본 발명에서 유용한 휘발성 오일은 포화 또는 불포화될 수 있거나, 직쇄 또는 분지쇄 또는 환식 구조를 가질 수 있거나, 또는 이들 특징 중 임의의 하나 이상을 가질 수 있다.

휘발성 탄화수소 오일의 예는 폴리데칸, 예컨대 아이소도데칸 및 아이소데칸(예를 들어, 프레스퍼스 인코포레이티드사(Presperse Inc.)로부터 입수가능한 퍼메틸(Permethyl)-99A) 및 C7-C15 아이소파라핀(예컨대, 엑손 케미칼스사(Exxon Chemicals)로부터 입수가능한 아이소파 시리즈(Isopar Series))을 포함한다.

휘발성 실리콘 오일은 사이클로펜타실록산, 사이클로헥사실록산 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 휘발성 환식 실리콘 오일의 예는 다우 코닝 코포레이션사로부터의 DC 244, DC 245, DC 344, 및 DC 345; 모멘티브 퍼포먼스 머테리얼스사(Momentive Performance Materials)로부터의 SF-1204 및 SF-1202 실리콘 유체; 제너럴 일렉트릭 코포레이션사로부터의 GE 7207 및 7158); 및, SWS 실리콘 코포레이션사(SWS Silicones Corp.)로부터의 SWS-03314를 포함한다.

선형 휘발성 실리콘 오일은 선형 폴리메틸실록산일 수 있다. 상업적으로 입수가능한 선형 폴리메틸실록산의 예는 다우 코닝 코포레이션사로부터의 DC 200 유체, 5Cst를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 음이온성 다당류(예를 들어, 알긴산, 펙틴, 잔탄검, 하이알루론산, 콘드로이틴 설페이트, 아라비아검, 카라야 검, 트래거캔스검, 카복시메틸-키틴, 셀룰로스검, 글라이코사미노글라이칸), 양이온성 다당류(예를 들어, 키토산, 아세틸화된 키토산, 양이온성 구아검, 양이온성 하이드록시에틸셀룰로스(HEC)), 비이온성 다당류(예를 들어, 전분, 덱스트린, 구아검, 셀룰로스 에터, 예컨대 하이드록시에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스 및 나이트로셀룰로스), 양쪽성 다당류(예를 들어, 카복시메틸키토산, N-하이드록시-다이카복시에틸-키토산, 변형된 감자 전분) 및 소수성 다당류(예를 들어, 세틸 하이드록시에틸셀룰로스, 폴리쿼터늄24) 중 하나 이상으로부터 선택된 하나 이상의 다당류를 추가로 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

화장료 조성물은 유기 자외선 차단제와 같은 자외선차단제로서 적합한 물질, 예를 들어 신남산 유도체를 추가로 포함할 수 있다. 유기 자외선차단제 활성은 친수성 유기 자외선차단제, 소수성 유기 자외선차단제 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 자외선차단제의 적합한 예는 문헌[CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 7th edition volume 2, pp.1672, edited by Wenning and Mc Ewen (The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 1997)]에서 찾을 수 있다.

유기 자외선차단제는 알킬 β,β-다이페닐아크릴레이트 유도체, α-사이아노 β,β-다이페닐아크릴레이트 유도체, 안트라닐레이트 유도체, 벤조페논 유도체, 캄퍼 유도체, 다이벤조일메탄 유도체, p-아미노벤조산 유도체, 살리실산 유도체, 트라이아진 유도체, 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 소수성 유기 선스크린은 4-(1,1-다이메틸에틸)-4'-메톡시다이벤조일메탄; 4-아이소프로필다이벤조일메탄; 4-(1,1-다이메틸에틸)-4'-메톡시다이벤조일메탄, 2-에틸헥실-2-사이아노-3,3-다이페닐아크릴레이트, 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다.

뷰틸 메톡시다이벤조일메탄 또는 아보벤존(Avobenzone)으로도 알려진 상업적으로 입수가능한 4-(1,1-다이메틸에틸)-4'-메톡시다이벤조일메탄의 예는 지보당-루르 에스. 에이.사(Givaudan Roure S. A.)로부터의 파르솔(Parsol) TM 1789 및 머크 앤 코포레이션, 인코포레이티드사(Merck & Co., Inc.)로부터의 유솔렉스(Eusolex) TM 9020을 포함한다. 아이소프로필다이벤조일메탄으로서도 알려진 상업적으로 입수가능한 4-아이소프로필다이벤조일메탄의 예는 머크 앤 코포레이션, 인코포레이티드사로부터의 유솔렉스 TM 8020을 포함한다. 옥토크릴렌으로서도 알려진 상업적으로 입수가능한 2-에틸헥실-2-사이아노-3,3-다이페닐아크릴레이트의 예는 BASF사로부터의 유비널(Uvinul) N539 SG; 및 로나/머크(Rona/Merck)사로부터의 유솔렉스 OCR을 포함한다.

일부 실시형태에서, 친수성 유기 자외선차단제는 2-페닐벤즈이미다올-5-설폰산일 수 있다. PBSA로서도 알려진 상업적으로 입수가능한 2-페닐벤즈이미다올-5-설폰산의 예는 로나/머크사로부터의 유솔렉스 232를 포함한다.

신남산 유도체 자외선차단제의 적합한 예는 문헌[CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook, 7th edition volume 2, pp.1672, edited by Wenning and Mc Ewen (The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc., Washington, D.C. 1997)]에서 찾을 수 있다. 신남산 유도체는 2-에틸헥실-p-메톡시신나메이트, 디에탄올아민 메톡시신나메이트, 2-에톡시에틸-p-메톡시신나메이트, 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 신남산 유도체는 2-에틸헥실-p-메톡시신나메이트일 수 있다.

화장료 조성물은 알파 하이드록시산(AHA), 베타 하이드록시산(BHA) 또는 폴리-하이드록시산, 예컨대 살리실산, 글라이콜산, 시트르산 및 말산 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되지만, 이들로 제한되지 않는 화학적 박피제를 함유할 수 있다.

화장료 조성물 중에 혼입될 수 있는 추출물은, 예를 들어 플라보노이드(예를 들어, 글라이코실 루틴, 페룰산, 카페인산), 푸르푸릴리덴 글루시톨, 뷰틸화된 하이드록시 톨루엔, 뷰틸화된 하이드록시아니솔, 노르다이하이드로구아이아레트 수지산, 노르다이하이드로구아이아레트산, 트라이하이드록시뷰티로페논 및 이들의 유도체를 포함할 수 있는 식물 추출물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 발명의 조성물에서 사용하기 위한 특정 식물 추출물은 알로에 베라 추출물, 인삼 추출물 및 쇠뜨기 추출물을 포함한다.

인삼 추출물은 인삼(Panax ginseng)의 뿌리를 친수성 용매(특히, 물, 에탄올, 글라이콜 또는 이들의 임의의 혼합물)로 추출함으로써 얻어질 수 있다. 추출물은 사포닌, 스테롤, 탄수화물, 펙틴, 비타민, 무기염 및 지질을 함유한다.

쇠뜨기 추출물은 에퀴세툼 아르벤스(Equisetum arvense)의 전체 허브를 친수성 용매(예를 들어, 물, 에탄올, 글라이콜 또는 이들의 임의의 혼합물)로 추출함으로써 얻어질 수 있다. 추출물은 실리케이트, 플라비노이드, 사포노사이드, 카페인산 및 페룰산을 함유한다.

화장료 조성물은 피부 컨디셔닝제를 추가로 포함할 수 있다. 피부 컨디셔닝제는 습윤제, 박피제, 완화제 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 습윤제는 글라이세린, 프로필렌 글라이콜, 다이프로필렌 글라이콜, 폴리프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜 글라이콜, 솔비톨, 하이드록시프로필 솔비톨, 헥실렌 글라이콜, 1,3-뷰틸렌 글라이콜, 1,2,6-헥산트라이올, 에톡실화된 글라이세린, 프로폭실화된 글라이세린 또는 이들의 혼합물과 같은 다가 알코올을 포함한다.

본 발명의 조성물에서 제공될 수 있는 항산화제의 예는 아미노산, 비타민, 무기염, 카로테노이드, 펩타이드, 티올, 설폭시민 화합물, 킬레이터, 불포화 지방산, 페놀 화합물, 식물 추출물, 스틸벤, 요산, 만노스, 클로로겐산, 이미다졸(예를 들어, 유로칸산), 푸르푸릴리덴솔비톨, 유비퀴논, 유비퀴놀, 플라스토퀴논, 피토스테롤 및 이들의 유도체(예를 들어, 염, 에스터, 에터, 당, 뉴클레오타이드, 뉴클레오사이드, 펩타이드 및/또는 지질 유도체)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, 이들 중 일부는 상기 기재되어 있다.

비타민은 비타민 A 및 이의 유도체(예를 들어, 레티노이드 또는 레티놀 또는 그들의 유도체, 예컨대 레티닐 팔미테이트 또는 레티닐 프로프리오에이트), 바이오틴, 폴산, 판토텐산칼슘, 니코틴아마이드, 피리독신 HCl, 피리독살 HCl, 리보플라빈, 티아민 HCl, 티미딘, 비타민 B12, 비타민 B3(예를 들어, 니아신아마이드), 비타민 B5(예를 들어, 판테놀), 비타민 C 및 이의 유도체(예를 들어, 아스코빌 팔미테이트, Mg 아스코빌 포스페이트, 아스코빌 아세테이트), 토코페롤 및 유도체(예를 들어, 비타민 E 아세테이트) 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

무기염은 몰리브데네이트(예를 들어, (NH₄)OMo₇O₂₄) 알루미늄(예를 들어, AlCl₃), 칼슘(예를 들어, CaCl₂), 코발트(예를 들어, CoCl₂), 크로뮴(예를 들어, CrK(SO₄)), 구리(예를 들어, CuSO₄), 철(예를 들어, Fe(NO₃)₃, FeSO₄), 칼륨(예를 들어, KCl), 마그네슘(예를 들어, MgCl₂), 망간(예를 들어, MnCl₂, MnSO₄), 인산염(예를 들어, Na₂HPO₄, NaH₂PO₄), 탄산염(예를 들어, NaHCO₃), 규산염(예를 들어, Na₂SiO₃), 나트륨(예를 들어, NaCl), 바나듐산염(예를 들어, NH₄VO₃), 니켈(예를 들어, NiCl₂), 주석(예를 들어, SnCl₂), 아연(예를 들어, ZnO, ZnSO₄), 셀레늄(예를 들어, 셀레노메티오닌, 엡셀렌, H₂SeO₃, Na₂SeO₃), 황산염 및 질산염 중 임의의 하나 이상의 염으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

카로테노이드는 카로텐, 예를 들어 α-카로텐, β-카로텐, ψ-라이코펜, 피토엔 등 및 이들의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

티올은 오로티오글루코스, 프로필티오유라실, 티오레독신, 리포산, 글루타티온, 시스테인, 시스틴, 시스타민 및 그들의 글라이코실, N-아세틸, 메틸, 에틸, 프로필, 아밀, 뷰틸 및 라우릴, 팔미토일, 올레일, γ-리놀레일, 콜레스테릴 및 글라이세릴 에스터 및 이들의 염, 다이라우릴 티오다이프로피오네이트, 다이스테아릴 티오다이프로피오네이트, 티오다이프로피온산 및 이들의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

설폭시민 화합물은 호모시스테인 설폭시민, 뷰티오닌 설폰, 펜타-, 헥사-, 헵타티오닌 설폭시민 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않으며, 그들이 매우 낮은 투약량(예를 들어, p㏖ 내지 μ㏖/㎏)으로 제공되도록 조성물 중에 포함될 수 있다.

킬레이터는 아포페리틴, 데스페랄, 락토페린, α-하이드록시 지방산, 팔미트산, 피트산, α-하이드록시산(예를 들어, 시트르산, 락트산, 말산), 흄산, 담즙산, 담즙산 추출물, 빌리루빈, 빌리베르딘, EDTA, EGTA 및 이들의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

포화 지방산은 γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산 및 이들의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택될 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.

스틸벤 및 이의 유도체는 스틸벤 옥사이드 및 트랜스-스틸벤 옥사이드를 포함한다.

다양한 추가적인 선택적 활성 성분은 본 발명의 화장료 조성물 내로 혼입될 수 있다. 이들 추가적인 성분의 비제한적 예는 추가적인 스킨 케어 활성제, 예컨대 파르네솔, 비사볼롤, 피탄트라이올, 유레아, 구아니딘(예를 들어, 아미노 구아니딘); 헥사미니딘 화합물, 이의 염 또는 유도체; 당 아민; 셀프-태닝제(예를 들어, 데하이드록시아세톤); 구조화제; 친수성 겔화제; 항-여드름 의약(레조르시놀, 살리실산 등); 피부 진정 및 치유제, 예컨대 알란토인 등; 및 미적 목적에 적합한 작용제, 예컨대 에센셜 오일, 향료, 피부 센세이트, 불투명화제, 방향족 화합물(예를 들어, 정향유, 멘솔, 캄퍼, 유칼립투스 오일, 및 유게놀)을 포함한다. 본 명세서에 기재된 화합물은 당업계에 잘 공지된 기술을 사용함으로써 신체에 투여 후에 활성 성분의 빠른, 지속 또는 지연된 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다.

조성물은, 예를 들어 활성 성분이 흡수, 흡착, 혼입 또는 결합될 수 있는 에멀전으로서 또는 리포좀, 니오좀, 미소구체, 나노입자 등에서 특정 세포 또는 조직을 전달하게 하는 또는 표적화하기 위한 임의의 적절한 제형일 수 있다. 이는 생성물을 불용성 형태로 효과적으로 전환시킬 수 있다. 이들 미립자 형태는 안정성(예를 들어, 분해)과 전달 문제를 둘 다 극복할 수 있다.

용액, 현탁액, 겔 및 에멀전의 사용이 바람직하며, 예를 들어 활성 성분은 물, 기체, 수계 액체, 오일, 겔, 에멀전, 수중유 또는 유중수 에멀전, 분산물 또는 이들의 혼합물 중에서 운반될 수 있다.

유화제는 비이온성 유화제, 음이온성 유화제, 양이온성 유화제, 쌍성 유화제, 양쪽성 유화제 또는 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 유화제는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 알루어드 출판사(Allured Publishing Corporation)에 의해 공개된 문헌[McCutcheon's, Detergents and Emulsifiers, North American Edition (1986)] 참조.

미용적으로 허용가능한 담체가 실리콘 중의 물 에멀전일 때, 유화제는 바람직하게는 폴리옥시알킬렌 공중합체, 폴리글라이세릴 공중합체 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다. 실리콘 폴리에터로도 알려진 폴리옥시알킬렌 공중합체는 미국 특허 제4,268,499호에 상세하게 기재되어 있다. 상업적으로 입수가능한 폴리옥시알킬렌 공중합체의 예는, 다우 코닝 코포레이션사로부터의 DC5225C 또는 DC2-5185C(사이클로펜타실록산과의 배합물로서 입수가능한 PEG/PPG-18/18 디메티콘); 및 신에츠 인코포레이티드사로부터의 KF6017 또는 KF6028(PEG-9 디메티콘)을 포함한다. 상업적으로 입수가능한 폴리글라이세릴 유화제의 예는 신에츠 인코포레이티드사로부터의 KF6100 및 KF6104를 포함한다.

조성물은 국소(즉, 피부에) 투여에 대해 바람직하다.

국소 조성물은 겔, 크림, 연고, 스프레이, 로션, 살브, 스틱, 비누, 분말, 필름, 에어로졸, 폼(foam), 용액, 에멀전, 현탁액, 분산물, 예를 들어 비이온성 소수포 분산물, 밀크 및 당업계에서 임의의 다른 전통적인 미용적 형태를 포함한다.

연고, 겔 및 크림은, 예를 들어 적합한 증점제 및/또는 겔화제의 첨가에 의해 수성 또는 유성 베이스와 함께 제형화될 수 있다. 로션은 수성 또는 유성 베이스와 함께 제형화될 수 있고, 일반적으로 또한 하나 이상의 유화제, 분산제, 현탁제, 증점제 또는 착색제를 함유할 것이다. 분말은 임의의 적합한 분말 베이스의 도움으로 형성될 수 있다. 점적 및 용액은 또한 하나 이상의 분산제, 가용화제 또는 현탁제를 포함하는 수성 또는 비수성 베이스와 함께 제형화될 수 있다. 에어로졸 스프레이는 적합한 추진제의 사용과 함께 가압 팩을 이용하여 편리하게 전달된다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 화장료 조성물은 폴리펩타이드 또는 조성물이 적용, 함침 또는 화학적으로 결합된 생성물, 장치 또는 물질을 통해 피부에 국소적으로 투여될 수 있다. 이것 때문에, 붕대, 플라스터(예를 들어, 접착성 패치), 거즈, 수술용 테이프, 면봉 또는 다른 흡수성 물질, 예를 들어 퍼프, 플리스 또는 스펀지, 또는 지지 매트릭스가 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물로 코팅, 함침 또는 화학적으로 결합될 수 있다. 예를 들어, 다수의 조성물은, 예를 들어 본 명세서에 참고로 포함되는 미국 특허 공개 제2008/0038300호, 미국 특허 공개 제 2009/0043236호, WO 2005/067499호 및 WO 2009/085302호에 잘 기재되어 있는 진피 패치를 사용하여 피부에 적용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물을 포함하는 재료는, 예를 들어 치료될 대상체에 의해 착용될 수 있는 장치의 형태일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재되는 바와 같은 조성물은 기저귀, 장갑, 양말 등의 모두 또는 부분을 형성하는 재료 또는 지지 매트릭스 상에 적용, 함침 또는 화학적으로 결합될 수 있다.

화장료 조성물은 투여를 위한 설명서와 함께 용기, 팩 또는 디스펜서에 포함될 수 있다.

따라서, 본 발명의 추가 양태는 본 명세서에 기재된 바와 같은 조성물로 코팅, 함침 또는 화학적으로 결합된 생성물, 재료 또는 장치의 제공을 포함한다. 본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 바와 같은 용도를 위해 이러한 생성물, 재료 또는 장치로 연장된다. 바람직하게는 상기 생성물은 붕대, 플라스터(예를 들어, 접착성 패치), 거즈, 수술용 테이프, 면봉이거나, 또는 상기 장치는 기저귀, 장갑 또는 양말이다.

본 명세서에 기재된 조성물 중의 활성 성분의 농도는 조성물의 공급원(즉, 상기 기재한 방법에 대한 출발 물질), 투여 방식, 치료 과정, 환자의 연령 및 체중, 미용적 적응증, 치료될 신체 또는 신체 영역에 의존할 수 있으며, 선택에 따라 변하거나 또는 조절될 수 있다. 일반적으로, 그러나, 단계 (iv) 후에 본 발명의 방법에 따라 제조되는 조성물은 단계 (v)에서 0.001, 0.005, 0.01 또는 0.1 내지 50%, 예를 들어 0.005 내지 40%, 예를 들어 0.1 내지 25%, 예컨대 0.1 또는 0.5 내지 5, 예를 들어 1 내지 5%(w/w 또는 v/v)로 희석되어 단계 (iv) 후에 투여를 위한, 특히 국소 투여를 위한 최종 제제, 예를 들어 조성물의 1% 또는 3% 용액을 제공한다.

추가적인 구성성분이 상기 기재한 방법에 의해 제조된 조성물, 예를 들어 본 명세서에서 상기 기재된 바와 같은 추가적인 보습제에 첨가될 때, 추가적인 성분은 0.0001, 0.0005, 0.001 또는 0.01 내지 50%, 예를 들어 0.0005 내지 40%, 예를 들어 0.01 내지 25%, 예컨대 0.1 또는 0.5 내지 5, 예를 들어 1 내지 5%(투여, 특히 국소 투여를 위한 최종 제제의 w/w)의 양으로 존재할 수 있다. 조성물에 대한 유효 단일 용량은 치료되는 포유류 동물에 따라서 국소로 적용되고, 단일 용량으로 취해질 때, 0.0001 내지 100㎎/㎠/일(조성물 중의 총 단백질), 예를 들어 0.1 내지 100㎎/㎠/일, 바람직하게는 0.0001 내지 10㎎/㎠/일, 예를 들어 0.1 내지 10㎎/㎠/일의 범위에 있을 수 있다.

바람직하게는 액체 용액, 크림 또는 현탁액은 국소 투여용으로 사용될 수 있다.

조성물이 적용 또는 투여될 동물은 포유류로 제한된다. 바람직하게는 포유류는 영장류, 집에서 기르는 동물, 가축 및 실험실 동물이다. 따라서 바람직한 포유류 동물은 마우스, 래트, 토끼, 기니아 피그, 고양이, 개, 원숭이, 돼지, 소, 염소, 양 및 말을 포함한다. 특히 바람직하게는 조성물은 인간에 적용 또는 투여된다.

다음의 실시예는 단지 예시의 방법으로 제공하며, 언급되는 도면은 다음과 같다:
도 1은 처리 전(기준), 처리 2주 후 및 12주 후에 본 발명의 부화액 조성물로 처리한 대상체의 사진을 도시한 도면. 노화된 피부의 다양한 징후의 감소는 2주와 12주 후 둘 다에서 분명하다. 제공된 값은 35명의 참여자에 대한 평균 변화를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 부화액 조성물로 처리하고 2 및 12주 후에 보이는 잔주름 및 주름의 감소를 강조하기 위한 도 1의 대상체의 클로즈업 사진을 도시한 도면.
도 3은 처리 전(기준) 및 처리 12주 후에 본 발명의 부화액 조성물로 처리한 대상체의 클로즈업 사진을 도시한 도면. 원형 영역은 처리 12주 후에 주름의 분명한 감소를 나타낸다.
도 4는 얼굴 양쪽에 대한 촉각적/시각적 임상 등급을 기준으로 한 다양한 노화 징후에서 개선된 것으로 생각되는 대상체의 백분율을 도시하는 막대 차트를 도시한 도면.
도 5는 물, 5% 글라이콜산, 1mU/㎖ 브로멜라인 또는 1% 부화액 조성물로 12시간 동안 처리한 재구성 인간 표피의 주사 전자 현미경 사진(x400, x5000 및 x15000 배율)을 도시한 도면.
도 6은 물, 5% 글라이콜산, 1mU/㎖ 브로멜라인 또는 1% 부화액 조성물로 48시간동안 처리한 재구성 인간 표피의 주사 전자 현미경 사진(x400, x5000 및 x15000 배율)을 도시한 도면.
도 7은 5% 글라이콜산, 1mU/㎖ 브로멜라인 또는 1% 부화액 조성물로 12 또는 24시간 동안 처리 또는 미처리한 재구성 인간 표피 절편의 광학 현미경사진을 도시한 도면. 화살표 (A)는 세포 증식 및 분화를 나타내고, 화살표 (B)는 더 밀집한 과립층 및 더 고농도의 층판 과립을 나타낸다.
도 8은 (A) 쿠마씨로 염색된 SDS-PAGE 겔 및 (B) 연어 부화액으로부터 유래된 화장료 조성물의 주성분에 대해 상승된 항체로 염색한 (A)에서의 겔의 웨스텃 블롯을 도시한 도면. 레인 1, 연어 부화액; 레인 2, 송사리 부화액; 및 레인 3, 제브라피쉬 부화액.

실시예 1: 조성물의 제조

본 조성물을 연어 부화액으로부터 제조하였다. 부화액의 단백질 농도를 개선시키기 위해, 연어알을 부화전 최소 용적의 물에 옮겼다. 승온(실온)에 의해 또는 탈산소에 의해 고도로 동기화된 부화를 유도할 수 있으며(Oppen-Berntsen et al. 1990, Aquaculture, 86, pp. 417-430), 이것으로 조질의 폴리펩타이드 및 폴리펩타이드의 일부의 소 용적의 고도로 농축된 제제를 수득한다. 배아의 95% 초과에 대해 2시간 내에 부화를 완료하여야 한다.

7㎛ 기공 크기를 지니는 표준 필터를 사용하여 부화액을 여과시켜서 후속 여과 단계에서 필터를 막을 가능성이 있는 물질을 제거한다. 처리한 부화액인 이 여과액을 상당한 분해 없이 몇 년 동안 냉동시킨 후에 추가 단백질 정제를 위해 해동하고 사용할 수 있다. 이 사실은 부화액 조성물을 정제하기 위한 출발 물질의 생성을 크게 단순화시킨다.

0.45㎛ 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 가공한 부화액을 여과시키고 나서 여과액을 수집하였다. 이어서, 부화액의 물을 완충제로 교환하기 위해 여과액을 8kDa의 필터 크기 배제를 이용하여 정용여과시켰다. 이 경우에, 다른 완충제가 동일하게 적합하지만, 완충제는 0.5mM 인산염 및 1mM NaCl을 함유하였다. 예를 들어, 5 mM NaCl을 함유하는 중성 또는 약간 알칼리성(pH 7.5 내지 8.5) 근처의 pH에서 트리스(예를 들어, 10 mM)를 함유하는 완충제 또는 인산염 완충 식염수가 적합하다. 정용여과 단계로부터의 잔류액을 수집하고, 상기 정의한 바와 같은 여과액의 효소적 활성이 3400mU/리터가 되도록 완충제의 첨가에 의해 희석하였다.

최종적으로, 0.22㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 통해 여과액을 여과시키고 나서 최종 여과액을 수집하였다. 이 여과액은 조질의 부화액에서 발견되는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 일부가 풍부한 제제이다.

실시예 2: 노화된 피부에 대한 부화액 조성물의 생체내 효과

부화액 조성물을 실시예 1에 기재한 바와 같이 제조하였다. 조성물을 시험에서 2가지의 활성 스킨 로션인 1% 및 3% 스킨 로션[v/v](총 용적의 조성물/단위 용적의 로션)으로서 제조하였고, 활성 성분, 즉, 부화액 조성물을 포함하지 않는 대조군 스킨 로션과 비교하였다. 스킨 로션은 수중유(O/W) 에멀전이었다. 오일상은 9%의 총 조성물을 나타내며, 수소화된 레시틴에 의해 유화시켰다.

이중맹검, 위약통제 임상 시험을 수행하여 경증 내지 중등증의 광손상된, 즉 노화된 얼굴 피부에서의 국소 피부 처리의 유효성 및 내약성을 평가하였다. 이 시험의 지속기간은 12주였고, 기준시, 제2주, 제6주 및 제12주에 방문하였다. 시각적 등급, 계측, 디지털 VISIA CR 촬영 및 대상체 자기 평가 설문지를 이용하여 효능을 평가하였다.

대상체의 수

백일(101)명의 여성 대상체가 연구에(3가지 처리, 즉, 위약 1가지 및 상이한 농도로 부화액 조성물을 포함하는 2가지 조성물에 대해 N>30) 참여를 완료하였다.

대상체 집단 및 동정

대상체는 40 내지 65세의 건강한 여성이었고, 임상 연구 수와 함께 사용하였을 때, 연구에서 대상체마다 독특하게 동정한 3-자리 번호를 할당하였다. 실험의 익명성을 유지하기 위해 이 번호는 연구 내내 대상체에서 유지하였다.

탄력도 기준

포함 기준

1. 건강 및 탄력도 설문에 의해 결정한 바와 같은 일반적 건강 상태인 40 내지 65세(40세와 65세를 포함)의 여성.

2. 연구의 지속기간 동안 후속 연구 필요에 기꺼이 협력 및 참여하고 임의의 유해 증상을 즉시 보고함.

3. 스코어 3 내지 7의 변형된 그리피스 등급 척도(Griffith’s grading scale)에 대응하는 얼굴 상에서 경증 내지 중등증의 광손상(잔주름, 주름, 과색소침착증, 늘어짐 및 거칠기)이 임상적으로 결정됨.

4. 시험 부위의 평가를 손상시킬 수 있거나 또는 연구 참여에 의해 대상체에 대한 건강상의 위험이 증가될 수 있는 임의의 질환 상태 또는 생리적 얼굴 피부 병태(예를 들어, 아토피 피부염, 습진, 건선, 지루성 피부염)가 없음.

5. 연구의 지속기간 동안 장기간의 태양광 노출 및 모든 태닝 베드의 사용을 기꺼이 회피함. 선글라스를 포함하는 보호의복을 착용하고, 10 AM 내지 4 PM에 광 노출을 피해야 하는 추가적인 관리를 하여야 함.

6. 연구의 지속기간 동안 모든 평상시 브랜드의 색조 화장품, 클렌저, 토너(해당되는 경우) 및 메이크업 리무버를 기꺼이 계속해서 사용함. 개체는 할당된 시험 물질 이외의 임의의 항노화 제품 또는 피부 미백 제품을 삼가해야 함.

7. 각각의 계획된 임상 방문 전 적어도 20분에 모든 메이크업을 기꺼이 지워야 함. 연구 방문이 완료될 때까지 어떤 국소 제품도 얼굴 또는 눈가에 도포하여서는 안 됨. 도착한 대상체가 모든 메이크업을 지우지 않았다면, 그녀는 임상 때까지 잔여 메이크업을 지울 필요가 있고, 절차에 앞서 적어도 20분 기다렸다.

8. 호르몬 대체 요법 또는 피임용 호르몬을 섭취한 개체는 연구 시작 전 적어도 1개월 동안 안정한 요법을 행해야하고, 그들은 연구의 지속기간 동안 이 의약을 기꺼이 계속해야 하며 바꾸지 않아야 한다. 연구의 시작 시 HRT 또는 호르몬을 섭취하지 않은 개체는 연구 과정 동안 기꺼이 사용을 시작해서는 안 된다.

9. 후속 연구에 기꺼이 협력 및 참여하고, 임의의 유해 증상을 즉시 보고함.

제외 기준

1. 임의의 퍼스널케어 제품에 대해 불내약성 또는 알레르기의 이력이 있는 개체.

2. 연구 유입 전 30일 미만에 임의의 처방 또는 OTC 피부 미백 제품을 사용한 개체.

3. 참여 동안 시험 조사자가 부적절한 것으로 여기는 피부의 병태 및/또는 질환을 갖는 개체.

4. 연구 동안 간호직에 있거나, 임신하였거나 또는 임신 계획 중에 있는 개체.

5. 연구 유입 전 30일 미만에 임의의 항-노화, 항-주름, 국소 항산화제를 일상적으로 사용한 개체.

6. 연구 시작 6개월 내에 효소적 얼굴 피부 처리를 사용한 개체.

7. 연구 시작 3개월 내에 레틴-에이(Retin-A)(등록상표), 레틴-에이 마이크로(Retin-A Micro)(등록상표), 레노바(Renova)(등록상표), 아비타(Avita)(등록상표), 타조락(Tazorac)(등록상표), 아바제(Avage)(등록상표) 또는 디페린(Differin)(등록상표) 또는 다른 국소 레티노이드를 사용하거나 또는 과거 6개월 내에 아큐탄(Accutane) 또는 구강 레티노이드를 섭취.

8. 연구 시작 30일 내에 얼굴에 알파-, 베파- 또는 폴리-하이드록시산(살리실산 및 라크하이드린을 포함), 레티놀 또는 레티놀의 유도체를 함유하는 제품 또는 다른 '항-노화' 제품의 일상적 사용.

9. 치료 3개월 내에 또는 연구 동안 얼굴의 피부 찰상법 또는 화학적 박피 처리를 받은 개체.

10. 6개월의 처리 내에 또는 연구 동안 처리 영역 내에서의 처리 영역에서 광 RF 또는 다른 장치로 처리를 받은 개체.

11. 처리 9개월 내에 또는 연구 동안 처리 영역에서 보톡스, 콜라겐, 지방 주사 또는 주사 또는 이식 물질에 의한 다른 강화 방법을 받은 개체

12. 이 시험의 시작 전 12개월에 재표면 절차, 얼굴 리프팅 또는 눈 또는 눈꺼풀 수술을 겪은 개체.

13. 얼굴에 이미 존재하는 및/또는 우세한 피부과학적 병태(예를 들어, 백반증, 아토피 피부염, 건선, 주사(rosacea), 습진, 지루성 피부염, 중증의 찰상 등) 또는 조사자의 의견에서 연구 결과를 방해할 수 있는 의학적 병태/질환을 갖는 개체.

14. 면역억제제/면역결핍 장애(HIV 감염 또는 AIDS를 포함) 또는 현재 면역억제성 의약을 사용하는 것의 이력을 가지는 개체.

15. 임의의 다른 임상 용법 연구에 참여한 개체(패치 연구는 허용가능함).

16. 당뇨병, 고혈압, 갑상선 기능 항진증 또는 갑상선 기능 저하증과 같은 통제되지 않는 질환을 갖는 개체. 다양한 건강 상태를 갖는 일부 개체는 식이요법, 의약 등에 의해 제어되지 않더라고 참가로부터 제외시켰다.

17. 연구에 포함 전 28일 내에 임의의 임상 시험에 참여한 개체.

의학적 이력 및 사전 연구 인터뷰 및 시험에 기반하여 조사자의 재량으로 또는 그의 지정으로 개체에 대한 연구를 승낙하였다.

연구 설계

이중맹검, 위약통제 임상 시험을 수행하여 경증 내지 중등증의 광손상된, 즉 노화된 얼굴 피부에서의 국소 피부 처리의 유효성을 평가하였다. 이 시험의 지속기간은 12주였고, 기준시, 제2주, 제6주 및 제12주에 방문하였다. 시각적 등급, 계측, 디지털 VISIA CR 촬영 및 대상체 자기 평가 설문지를 이용하여 효능을 평가하였다.

그룹 당 N>30의 3 그룹에 대해 연구를 완료하였다. 대상체는 12주 동안 얼굴에 도포하는 활성 피부 처리, 즉, 상기 기재한 부화액 조성물, 또는 비히클 대조군(물)을 받았다. 3 그룹으로 대상체의 무작위화를 사전 결정한 무작위화에 따라 수행하였다.

효능 및 내약성 평가

전문 임상 평가자는 이하에 나타낸 파라미터에 대한 얼굴의 우측 및 좌측을 평가하였다. 변형 그리피스 척도를 사용하였고, 여기서 0=없음, 1 내지 3=경증, 4 내지 6=중등증 및 7 내지 9=중증이었다. 피부 병태를 더 제대로 설명하는데 필요하다면, 0.5점을 사용하였다.

잔주름

주름

과색소침착증

늘어짐

둔탁/매트(Matte)(투명함)

촉각 거칠기

전문 임상 평가자는 이하에 나타내는 파라미터에 대해 얼굴의 우측 및 좌측을 평가하였다. 4점 척도를 사용하였으며, 여기서, 0=없음, 2=경증, 3=중등증 및 4=중증. 피부 병태를 더 제대로 설명하는데 필요하다면, 0.5점을 사용하였다.

홍반

건조도/벗겨짐

작열감/찌르는 느낌

가려움

당김/건조한 느낌

디지탈 VISIA CR 촬영

VISIA-CR 영상화로 얼굴의 우측과 좌측을 촬영하였다. 대상체는 그들의 모발을 뒤로 잡아당기고, 장신구를 제거하였으며, 눈을 감고 촬영하였고, 대상체는 프레임 내에서 중앙에 서 있었으며, 무표정이었다.

경피수분손실( TEWL )

기기 측정 전에, 대상체는 적어도 20분 동안 주위 임상 조건과 동일하게 하였다. 주위 조건을 연구 방문 동안 1시간마다 기록하였다. 이 시간 동안, 대상체를 등급화하고, 설문지를 완료하고/하거나 VISIA CR 영상화를 수행하였다.

경피수분손실량 측정기(Tewameter)를 사용하여 모든 방문자에서 경피수분손실(TEWL)을 측정하였다. 눈가로부터 아래쪽으로 연장되는 선과 코 하부를 수평으로 가로지르는 선의 교차 지점에서의 우측 및 좌측 볼에서 측정하였다.

개방 챔버 시스템을 이용하여 경피수분손실량 측정기로 TEWL을 측정한다. 피부 표면 상에 놓은 핸드 헬드(hand held) 프로브로 표면 위 2개 지점에서 상대 습도를 샘플링하여, 측정한 습도 구배로부터 수분 손실률을 계산하였다.

큐토미터 ( Cutometer ) MPA 580

모든 대상체는 모든 방문 시 큐토미터 측정을 하였다. 큐토미터를 사용하여 피부의 점탄성 특성(즉, 연장성 및 탄력도)을 평가하였다. 기기를 피부의 소 영역에 진공으로 적용하고, 광학 기법에 의해 피부의 탄성 반응(조리개 내 및 밖의 움직임)을 측정한다.

이 연구를 위해, 2㎜ 프로브를 사용하였고, 300 mbar의 진공을 적용하고 나서, 2주기의 흡입 및 방출을 수행하였다. 주기 시간은 5초 켜짐 및 10초 꺼짐이었다.

눈가로부터 아래쪽으로 연장되는 선과 코 하부를 수평으로 가로지르는 선의 교차 지점에서의 우측 및 좌측 볼, 또는 턱 근처의 대안의 위치에서 측정하였다.

피부 평가 및 자기-평가 설문지

대상체는, 대상체가 얼굴의 우측 및 좌측에 대한 그들의 얼굴 피부 외관 및 상태를 인식하는 방법을 설명하는 질문을 포함하는 피부 자기 평가 설문지를 완료하였다.

결과

잔주름

제2주에 활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체는 위약(4.58%)에 비해 잔주름의 감소(예를 들어, 5.59%(1% 용액) 및 5.65%(3% 용액)의 백분율 변화)를 나타내었다. 잔주름의 감소는 제6주(예를 들어, 14.34%(1% 용액), 14.86%(3% 용액) 및 8.98%(위약)) 및 제12주(예를 들어, 23.43%(1% 용액), 25.99%(3% 용액) 및 14.68%(위약))에 지속되었다. 이하의 도 1 및 도 2는 잔주름의 28% 감소를 나타낸다.

주름

제2주에 활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체는 위약(0.70%)에 비해 주름의 감소(예를 들어, 2.15%(1% 용액) 및 1.75% (3% 용액)의 백분율 변화)를 나타내었다. 주름의 감소는 제6주(예를 들어, 6.13%(1% 용액), 7.32%(3% 용액) 및 3.70%(위약)) 및 제12주(예를 들어, 14.72%(1% 용액), 15.15%(3% 용액) 및 9.57%(위약))에 지속되었다. 도 1은 주름에서 12.5% 감소를 지니는 대상체를 나타낸다. 도 3은 주름에서 26.32% 감소를 지니는 대상체를 나타낸다.

과색소침착증

제2주에 활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체는 위약(0.40%)에 비해 주름의 감소(예를 들어, 2.11%(1% 용액) 및 2.68%(3% 용액)의 백분율 변화)를 나타내었다. 과색소침착증의 감소는 제6주(예를 들어, 5.61%(1% 용액), 7.91%(3% 용액) 및 3.16%(위약)) 및 제12주(예를 들어, 10.53%(1% 용액), 15.35%(3% 용액) 및 5.73%(위약))에 지속되었다. 도 1은 12주 후에 검버섯의 색소형성에서 15% 감소를 지니는 대상체를 나타낸다.

늘어짐

제2주에 활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체는 위약(0.87%)에 비해 늘어짐의 감소(예를 들어, 2.64%(1% 용액) 및 1.62%(3% 용액)의 백분율 변화)를 나타내었다. 늘어짐의 감소는 제6주(예를 들어, 6.33%(1% 용액) 및 6.61%(3% 용액), 2.51%(위약)) 및 제12주(예를 들어, 10.55%(1% 용액) 및 11.33%(3% 용액), 5.18%(위약))에 지속되었다. 도 1은 12주 후에 늘어짐(처짐)에서 7.69% 감소를 지니는 대상체를 나타낸다.

둔탁 /매트(투명함)

제2주에 활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체는 위약(10.67%)에 비해 피부 투명함의 개선(예를 들어, 12.95%(1% 용액) 및 16.00%(3% 용액)의 백분율 변화)을 나타내었다. 개선은 제6주(예를 들어, 29.26%(1% 용액), 28.50%(3% 용액) 및 19.07%(위약)) 및 제12주(예를 들어, 37.17%(1% 용액), 39.18%(3% 용액) 및 26.72%(위약))에 지속되었다. 도 1은 둔탁함의 33.33% 감소를 지니는 대상체를 나타낸다.

촉각 거칠기

제2주에 활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체는 위약(13.38%)에 비해 피부의 촉각 거칠기의 감소(예를 들어, 16.51%(1% 용액) 및 20.24%(3% 용액)의 백분율 변화)를 나타내었다. 개선은 제6주(예를 들어, 24.77%(1% 용액), 26.65%(3% 용액) 및 16.79%(위약))에 지속되었지만, 제12주(예를 들어, 26.61%(1% 용액), 29.19%(3% 용액) 및 15.79%(위약))에 추가 감소는 없었다. 도 1은 촉각 거칠기에서 12.5% 감소를 지니는 대상체를 나타낸다.

건조도/벗겨짐

제2주에 활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체는 위약(64.71%)에 비해 피부의 건조/벗겨짐의 감소(예를 들어, 72.09%(1% 용액) 및 100.00%(3% 용액)의 백분율 변화)를 나타내었다. 그러나, 제6주(예를 들어, 86.05%(1% 용액), 84.62%(3% 용액) 및 100.00%(위약)) 및 제12주(예를 들어, 90.70%(1% 용액), 100.00%(3% 용액) 및 89.47%(위약))에 추가 감소는 없었다.

TEWL

제2주에 활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체가 TEWL에서 감소를 나타내었지만, 이는 위약(17.26%)에 비해 위약(예를 들어, 15.35%(1% 용액) 및 14.53%(3% 용액)의 백분율 변화)에 대해 분명하게 상이하지 않았다. 그러나, 제6주(예를 들어, 29.46%(1% 용액), 26.66%(3% 용액) 및 22.96%(위약)) 및 제12주에 위약보다 더 큰 추가 감소가 있었다(예를 들어, 37.46%(1% 용액), 40.04%(3% 용액) 및 34.21%(위약)).

연장성

활성 조성물 중 하나를 포함하는 스킨 로션으로 처리한 대상체는 제2주에 피부 연장성에서 개선을 나타내었지만, 이는 위약(10.82%)에 비해 위약(예를 들어, 16.18%(1% 용액) 및 17.21%(3% 용액)의 백분율 변화)에 대해 단지 약간 상이하였다. 제6주에 3가지 처린 간에 분명한 차이가 없었지만(예를 들어, 18.04%(1% 용액), 17.18%(3% 용액) 및 19.90%(위약)), 제12주는 활성 성분을 포함하는 조성물로 피부 처리에 대해 추가 개선을 나타내었고, 이는 위약보다 더 컸다(예를 들어, 31.84%(1% 용액), 33.57%(3% 용액), 및 16.48%(위약)).

연구의 시작시(기준) 및 처리 12주 후에 수행한 얼굴의 양측에 대한 촉각/시각적 임상 등급화의 비료는 모든 대상체가 본 발명의 부화액 조성물로 처리 후 그들 피부의 둔탁 및 거칠기에서 개선을 나타내었고, 대다수의 대상체는 잔주름(대상체의 97%), 주름(대상체의 91%), 과색소침착증(대상체의 87%) 및 처짐(대상체의 80%)에서 개선을 나타내었다(도 4).

설문지는 위약과 본 발명의 부화액 조성물을 포함하는 화장료 조성물 간의 전반적인 외관, 전반적인 느낌, 평활도, 부드러움, 투명도 및 탄력도에 대한 상태의 평균 스코어에 대해 사용 6주로부터 통계학적으로 유의한 차이가 발견되었다는 것을 나타낸다.

따라서, 부화액 추출물 조성물은 위약에 비해 노화된 피부의 각각의 양태에 대한 효과를 입증하였다는 것이 상기로부터 명백하다.

실시예 3: 공지된 화장료 피부 처리에 비해 재구성 인간 표피 상에서 부화액 조성물 효과의 비교 시험관내 연구

시험관내에서 재구성된 인간 표피는 화학적으로 정해진 배지 내 공기-액체 계면에서 비활성 폴리카보네이트에 대해 배양한 비정상 인간 케라틴세포로 이루어진다. 이 시험관내 모델은 생체내 인간 표피와 조직학적으로 유사하다.

재구성된 인간 표피(스킨에스닉(SkinEthic))를 다음의 용액 중 하나의 200㎕에 대해 12시간, 24시간 또는 48시간 동안 각질층 상에 노출시켰다:

1% 부화액 조성물;

5% 글라이콜산(AHA);

1 mU/㎖ 브로멜라인(과일 효소); 또는

dH₂O(대조군).

노출 후, 배양물을 4℃에서 PBS 중의 4%(w/v) 파라폼알데하이드 중에 고정시키고 나서, 주사 전자현미경 또는 광학 현미경에 의해 분석하였다.

12시간 후 처리한 재구성 인간 표피의 주사 전자 현미경 평가(도 5)는 글라이콜산의 5% 용액으로 처리가 손상된 각질층 및 피부 부식을 초래한다는 것을 나타낸다. 브로멜라인으로 처리는 세포 외피의 분해에 의한 낙설을 야기한다. 대조적으로, 본 발명의 부화액 조성물에 의한 처리는 세포 결합 부위만이 분해되었기 때문에 무결함 각질세포의 탈락(쉐딩)에 의한 낙설을 야기한다. 따라서, 부화액 용액은 피부의 순한 미세-박리(micro-exfoliation)를 제공한다.

48시간 동안 노출 후에, 재구성된 인간 표피의 주사 전자 현미경 사진(도 6)은 글라이콜산이 심하게 광노화된 피부를 초래하되, 세포 외피가 파괴되고, 세포골격이 분명하게 보인다는 것을 나타낸다. 브로멜라인에 의한 처리가 상당히 매끈한 피부 표면을 초래하지만, 또한 거친 패치의 증거가 있다. 그러나, 본 발명의 부화액 조성물에 의한 처리는 대조군(즉, 미처리) 피부보다 더 양호한 상당히 매끄러운 피부 표면을 초래한다. 이렇게 해서, 부화액 조성물은 피부 평활 효과를 제공하는 것으로 검토될 수 있다.

재구성 인간 표피 절편의 광학 현미경(도 7)은 24시간 동안 글라이콜산에 대한 노출이 기저층으로부터 상피 줄기 세포를 포함하는 살아있는 세포의 파괴를 초래한다는 것을 나타낸다. 글라이콜산에 의한 처리 후 남아있는 모든 것은 소수의 농축핵(pyknotic nuclei)(염색질이 비가역적으로 응축되는 경우) 및 유핵세포이다. 24시간 동안 브로멜라인에 대한 노출은 기저층 및 유극층에 대한 최소의 변화를 야기한다. 대조적으로, 24시간 동안 본 발명의 부화액 조성물에 대한 노출 후, 재구성된 피부는 세포 증식 및 분화의 증거를 나타낸다(도 7의 화살표 A 참조). 부화액 조성물에 대한 48시간 노출 후, 피부는 더 밀집한 과립층 및 더 고농도의 층판 과립의 증거를 나타낸다(도 7의 화살표 B). 따라서, 본 발명의 부화액 조성물은 피부 재생 효과를 가지며, 피부 장벽 기능의 개선을 초래한다.

실시예 4: 비-연어과 부화액의 분석

연어과 부화액으로부터 유래된 화장료 조성물에서 발견된 폴리펩타이드와 동일한 폴리펩타이드를 함유하는지 여부를 결정하기 위해 비-연어과 어류종으로부터의 부화액을 분석하였다.

항체는 실시예 1 내지 3에 기재된 부화액 조성물의 원칙적 폴리펩타이드 성분에 대해 상승되었다. 항체를 사용하여 유사한 폴리펩타이드가 송사리(오리지아스 라티페스(Oryzias latipes)) 및 제브라피쉬(다니오 레리오(Danio rerio))로부터의 부화액에 존재하는지 여부를 결정하였다.

실시예 1에 기재한 방법에 따라 연어 부화액을 얻었다.

송사리 및 제브라피쉬로부터의 부화액을 베르겐 대학교(University of Bergen) 생물학부의 제브라피쉬 연구실로부터 얻었다. 이와 관련하여, 제브라피쉬 부화액(30㎖)의 샘플을 대략 100개 배아가 부화된 물로부터 얻었다. 송사리 부화액(14㎖)의 샘플을 대략 14개 배아가 부화된 물로부터 얻었다. 수족관으로부터의 물을 블랭크 대조군으로서 사용하였다.

분석 전 48시간 동안 냉동 건조에 의해 샘플을 농축시켰다(대략 10배). 농축 샘플의 단백질 농도를 280㎚에서 분광광도계에서 측정하였다. 샘플의 흡광도는: 연어 A280 = 5.6; 송사리 A280 = 1.6; 및 제브라피쉬 A280 = 0.1이었다.

농축 폴리펩타이드 샘플을 SDS-PAGE에 의해 분석하였다. 얻어진 겔을 쿠마씨 블루에 의해 염색하고 나서, 연어 부화액 조성물의 주성분에 대해 앞서 언급한 항체를 사용하여 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다.

도 8A에서 쿠마씨 염색 겔은 송사리 샘플(레인 2)에 대한 몇몇 분명한 밴드를 나타내는데, 이는 연어 샘플(레인 1)에서 관찰한 밴드와 비슷한다. 블랭크 샘플(미제시) 또는 제브라피쉬 샘플(레인 3)에서 가시적 밴드는 관찰되지 않았다. 그러나, 제브라피쉬 샘플에서 가시적 밴드의 부재는 제브라피쉬 샘플에서 상대적으로 저농도의 단백질에 의해 설명될 수 있다. 유사하게, 연어 샘플 내 추가적인 밴드의 존재는 연어 샘플 내 고농도의 단백질에 의해 설명될 수 있는데, 이는 훨씬 덜 흔한 단백질이 보인다는 것을 의미한다.

도 8B는 항체가 연어 샘플에서 단일 밴드와 특이적으로 반응하고 송사리 샘플과 제브라피쉬 샘플 둘 다에서 단백질과 교차 반응한다는 것을 입증하는 웨스턴 블롯을 나타낸다. 또한, 밴드 강도의 차이는 이들 샘플 내 단백질의 상이한 농도에 의해 설명될 수 있다.

연어 샘플에서 동정된 폴리펩타이드는 대략 25kDa(레인 1)이었다. 송사리 샘플 내 교차 반응성 폴리펩타이드는 대략 35 kDa(레인 2) 및 제브라피쉬 샘플에서 대략 27kDa(레인 3)이었다. 블랭크 샘플에서 항체에 의해 검출된 폴리펩타이드는 없었다(미제시). 이론에 의해 구속되는 일 없이, 연어, 송사리 및 제브라피쉬로부터의 폴리펩타이드 크기의 차이는 종간변이에 기인할 수 있으며, 이는, 예를 들어 글라이코실화와 같은 상이한 번역 후 변형에 기인하여 상이한 종에서 크기가 다른 기능적으로 동일한 폴리펩타이드에 대해 드물지 않다.

이들 결과는 각각의 종으로부터의 부화액이 유사한 배열의 폴리펩타이드를 함유하고 비연어과 어류 종은 실시예 1 내지 3에 기재된 화장료 조성물 내 폴리펩타이드와 구조적으로 유사한 폴리펩타이드를 함유한다는 것을 나타낸다. 비-연어과 부화액 중의 폴리펩타이드는 연어 부화액으로부터 유래된 화장료 조성물 중의 폴리펩타이드와 동일한 기능적 특성을 갖는 것으로 예상될 수 있었다. 따라서, 비-연어과 어류로부터의 부화액은 본 명세서에 기재된 방법에서 적합한 출발 물질이며, 본 발명에 따른 효과적인 화장료 조성물을 초래할 것으로 예상된다.

Claims (24)

1. 포유류 동물의 피부에서 주름, 잔주름, 과색소침착증, 늘어짐, 건성 피부, 벗겨짐 및/또는 경피수분손실의 미용적 외관 또는 유병률의 감소 또는 예방을 위한 비치료적(non-therapeutic) 미용 방법으로서, 상기 동물에게 화장료 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 조성물은 하기 단계들 a) 내지 d)로 이루어진 방법에 의해 얻어지거나 또는 얻어질 수 있는, 비치료적 미용 방법:
   a) 최소 용적의 물속에 어류 알을 현탁시키는 단계로서, 상기 알은 연어과(Salmonidae) 알이 아닌, 상기 현탁시키는 단계;
   b) 상기 알의 동기화된 신속한 부화(synchronized, rapid hatching)를 유도하는 단계;
   c) 선택적으로 상기 부화된 알을 여과시켜 부화액(hatching fluid)을 얻는 단계; 및
   d) 상기 조성물을 얻기 위하여 b) 또는 c)의 상기 부화액을 여과시키는 단계로서, 적어도 하기 단계들 (i) 내지 (vii)을 포함하는, 상기 부화액을 여과시키는 단계:
   (i) 적어도 5㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 상기 부화액을 여과시키고, 여과액을 수집하는 단계;
   (ii) 0.30 내지 0.60㎛의 기공크기를 지니는 필터를 사용하여 단계 (i)로부터의 상기 여과액을 여과시키고, 상기 여과액을 수집하는 단계;
   (iii) 15kDa 미만의 배제 크기를 지니는 필터를 사용하는 정용여과를 수행함으로써 단계 (ii)로부터의 상기 여과액 중의 물을 약제학적으로 허용가능한 완충제와 교환하는 단계;
   (iv) 선택적으로 단계 (iii)의 정용여과를 반복하는 단계;
   (v) 선택적으로 용액의 효소 활성이 1000 mU/L 내지 10000 mU/L가 되도록 단계 (iii) 또는 (iv)로부터 얻어진 용액을 희석하는 단계로서, 상기 효소 활성은 인자 Xa 색원체 기질(CH₃OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH)을 절단하는 용액의 능력으로 측정된 것인, 단계 (iii) 또는 (iv)로부터 얻어진 용액을 희석하는 단계;
   (vi) 0.15 내지 0.30㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 단계 (iii), (iv) 또는 (v)로부터 얻어진 용액을 여과시키고, 여과액을 수집하는 단계; 및
   (vii) 단계 (vi)으로부터의 상기 여과액으로부터 상기 화장료 조성물을 제조하는 단계.
2. 제1항에 있어서, 상기 비치료적 미용 방법은 주름 및/또는 늘어짐의 미용적 외관 또는 유병률을 감소 또는 방지하기 위한, 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   a) 단계 (i)에서의 상기 필터의 기공 크기는 5 내지 15㎛이고;
   b) 단계 (ii)에서의 상기 필터의 상기 기공 크기는 0.35 내지 0.55㎛이고/이거나;
   c) 단계 (vi)에서의 상기 필터의 상기 기공 크기는 0.22㎛인, 방법.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단계 (i)에서의 필터의 기공 크기는 7㎛인, 방법.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단계 (ii)에서의 필터의 기공 크기는 0.45㎛인, 방법.
6. 제1항에 있어서, 상기 알은 골설어상목(Osteoglossomorpha), 당멸치상목(Elopomorpha), 청어상목(Clupeomorpha), 골표상목(Ostariophysi), 원극기상목(Protacanthopterygii)(연어과로부터의 어류를 제외함), 협기상목(Stenopterygii), 원린상목(Cyclosquamata), 스코펠로상목(Scopelomorpha), 이악어상목(Lampridiomorpha), 폴리믹시아상목(Polymyxiomorpha), 측극기상목(Paracanthopterygii) 및 극기상목(Acanthopterygii)으로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 상목(Superorder)의 어류로부터 선택된 어류로부터 유래되는, 방법.
7. 제6항에 있어서, 상기 어류는 골설어목(Osteoglossiformes), 히오돈목(Hiodontiformes), 당멸치목(Elopiformes), 여을멸목(Albuliformes), 밑보리멸목(Notacanthiformes), 뱀장어목(Anguilliformes), 심해뱀장어목(Saccopharyngiformes), 청어목(Clupeiformes), 압치목(Gonorynchiformes), 잉어목(Cypriniformes), 카라신목(Characiformes), 김노투스목(Gymnotiformes), 메기목(Siluriformes), 샛멸목(Argentiniformes), 연어목(Salmoniformes)(연어과로부터의 어류를 제외함), 민물꼬치고기목(Esociformes), 바다빙어목(Osmeriformes), 꼬리치목(Ateleopodiformes), 앨퉁이목(Stomiiformes), 홍메치목(Aulopiformes), 샛비늘치목(Myctophiformes), 이악어목(Lampriformes), 턱수염금눈돔목(Polymixiiformes), 연농어목(Percopsiformes), 두꺼비고기목(Batrachoidiformes), 아귀목(Lophiiformes), 대구목(Gadiformes), 첨치목(Ophidiiformes), 숭어목(Mugiliformes), 색줄멸목(Atheriniformes), 동갈치목(Beloniformes), 케토미무스목(Cetomimiformes), 열대송사리목(Cyprinodontiformes), 스테파노베리스목(Stephanoberyciformes), 금눈돔목(Beryciformes), 달고기목(Zeiformes), 학치목(Gobiesociformes), 큰가시고기목(Gasterosteiformes), 실고기목(Syngnathiformes), 드렁허리목(Synbranchiformes), 복어목(Tetraodontiformes), 가자미목(Pleuronectiformes), 쏨뱅이목(Scorpaeniformes) 농어목(Perciformes) 및 철갑상어목(Acipenseriformes)으로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 목(Order)으로부터 유래되는, 방법.
8. 제7항에 있어서, 상기 어류는 잉어과(Cyprinidae), 시클리드과(Cichlidae), 팬가시메기과(Pangasiidae), 민어과(Sciaenidae), 바리과(Serranidae), 전갱이과(Carangidae), 도미과(Sparidae), 스즈키과(Lateolabracidae), 농어과(Moronidae), 숭어과(Mugilidae), 나일농어과(Latidae), 구굴무치과(Eleotridae) 및 철갑상어과(Acipenseridae)로 이루어진 목록으로부터 선택된 임의의 과(Family)로부터 유래되는, 방법.
9. 제8항에 있어서, 상기 어류는 초어(크테노파링고돈 이델라(Ctenopharyngodon idella)), 백연어(하이포프탈미크티스 모리트릭스(Hypophthalmichthys molitrix)), 카틀라(카틀라 카틀라(Catla catla)), 잉어(시프리누스 카르피오(Cyprinus carpio)), 대두어(하이포프탈미크티스 노빌리스(Hypophthalmichthys nobilis)), 붕어(카라시우스 카라시우스(Carassius carassius)), 역돔(오레오크로미스 닐로티쿠스 닐로티쿠스(Oreochromis niloticus niloticus)), 판가스 메기(판가시우스 판가시우스(Pangasius pangasius)), 로호 라베오(Roho labeo)(라베오 로히타(Labeo rohita)), 부세(라리미크티스 크로세아(Larimichthys crocea)), 그리지 그루퍼(Greasy grouper)(에피네펠루스 타우비나(Epinephelus tauvina)), 방어(세리올라 퀸쿼라디아타(Seriola quinqueradiata)), 길트레트 시브레암(Gilthead seabream)(스파루스 아우라타(Sparus aurata)), 농어(라테올라브랙스 자포니쿠스(Lateolabrax japonicus)), 유러피언 시배스(디센트라쿠스 라브랙스(Dicentrarchus labrax)), 참돔(크리소프리스 아우라투스(Chrysophrys auratus)), 숭어(무길 세팔루스(Mugil cephalus)), 바라문디(라테스 칼카리페르(Lates calcarifer)), 마블 고비(옥시엘레오트리스 마르모라타(Oxyeleotris marmorata)), 역돔(오레오크로미스 모잠비쿠스(Oreochromis mossambicus)), 산천어(온코린쿠스 미키스(Oncorhynchus mykiss)), 시베리아 철갑상어(아시펜세르 바에리(Acipenser baerii))및 다누베 스투르게온(Danube sturgeon)(아시펜세르 구엘덴스타에드티(Acipenser gueldenstaedtii))으로 이루어진 목록으로부터 선택된 종인, 방법.
10. 제1항에 있어서, 상기 피부는 노화된 피부인, 방법.
11. 제1항에 있어서, 상기 동물의 상기 피부는 보습되는, 방법.
12. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부에 대한 국소 투여를 위한, 방법.
13. 제1항에 있어서, 상기 단계 (vii)의 제조는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제, 희석제, 구성성분 및/또는 성분을 첨가하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
14. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 생성물, 재료 또는 장치에 코팅, 함침 또는 화학적으로 결합되는 것인, 방법.
15. 제1항에 있어서, 상기 부화는 80% 초과의 배아에 대해 6시간 미만 내에 완료되는, 방법.
16. 제1항에 있어서, 상기 부화는 95% 초과의 배아에 대해 2시간 미만 내에 완료되는, 방법.
17. 하기 단계들 a) 내지 d)로 이루어진, 화장료 조성물을 제조하는 방법:
    a) 최소 용적의 물속에 어류 알을 현탁시키는 단계로서, 상기 알은 연어과 알이 아닌, 상기 현탁시키는 단계;
    b) 상기 알의 동기화된 신속한 부화를 유도하는 단계;
    c) 상기 부화된 알을 여과시켜 부화액을 얻는 단계; 및
    d) 상기 조성물을 얻기 위하여 단계 c)의 상기 부화액을 여과시키는 단계로서, 적어도 하기 단계들 (i) 내지 (vii)을 포함하는, 상기 부화액을 여과시키는 단계:
    (i) 적어도 5㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 상기 부화액을 여과시키고, 여과액을 수집하는 단계;
    (ii) 0.30 내지 0.60㎛의 기공크기를 지니는 필터를 사용하여 단계 (i)로부터의 상기 여과액을 여과시키고, 상기 여과액을 수집하는 단계;
    (iii) 15kDa 미만의 배제 크기를 지니는 필터를 사용하는 정용여과를 수행함으로써 단계 (ii)로부터의 상기 여과액 중의 물을 약제학적으로 허용가능한 완충제와 교환하는 단계;
    (iv) 선택적으로 단계 (iii)의 정용여과를 반복하는 단계;
    (v) 선택적으로 용액의 효소 활성이 1000 mU/L 내지 10000 mU/L가 되도록 단계 (iii) 또는 (iv)로부터 얻어진 용액을 희석하는 단계로서, 상기 효소 활성은 인자 Xa 색원체 기질(CH₃OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA-AcOH)을 절단하는 용액의 능력으로 측정된 것인, 단계 (iii) 또는 (iv)로부터 얻어진 용액을 희석하는 단계;
    (vi) 0.15 내지 0.30㎛의 기공 크기를 지니는 필터를 사용하여 단계 (iii), (iv) 또는 (v)로부터 얻어진 용액을 여과시키고, 여과액을 수집하는 단계; 및
    (vii) 단계 (vi)으로부터의 상기 여과액으로부터 상기 화장료 조성물을 제조하는 단계.
18. 제17항에 있어서, 상기 부화는 80% 초과의 배아에 대해 6시간 미만 내에 완료되는, 방법.
19. 제17항에 있어서, 상기 부화는 95% 초과의 배아에 대해 2시간 미만 내에 완료되는, 방법.
20. 제17항에 있어서, 상기 단계 (vii)의 제조는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제, 희석제, 구성성분 및/또는 성분을 첨가하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
21. 제17항에 규정된 방법으로부터 얻을 수 있는, 포유류 동물의 피부에서 주름, 잔주름, 과색소침착증, 늘어짐, 건성 피부, 벗겨짐 및/또는 경피수분손실의 미용적 외관 또는 유병률의 감소 또는 예방을 위한 화장료 조성물.
22. 제21항에 규정된 바와 같은 조성물로 코팅, 함침 또는 화학적으로 결합되는, 생성물.
23. 제21항에 규정된 바와 같은 조성물로 코팅, 함침 또는 화학적으로 결합되는, 재료.
24. 제21항에 규정된 바와 같은 조성물로 코팅, 함침 또는 화학적으로 결합되는, 장치.

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