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KR102191695B1 - Inhibitors of Metastasis - Google Patents

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KR102191695B1
KR102191695B1 KR1020157031658A KR20157031658A KR102191695B1 KR 102191695 B1 KR102191695 B1 KR 102191695B1 KR 1020157031658 A KR1020157031658 A KR 1020157031658A KR 20157031658 A KR20157031658 A KR 20157031658A KR 102191695 B1 KR102191695 B1 KR 102191695B1
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KR
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인두 파리크
케네쓰 비. 아들러
Original Assignee
바이오마크 파마슈티칼스 리미티드
노쓰 캐롤라이나 스테이트 유니버시티
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Abstract

본 발명은 암을 치료 또는 예방하는 방법 및 화합물에 관한 것이다. 상기 방법 및 화합물은 암의 발생, 유지, 증식을 억제 또는 저해와, 암세포 전이의 억제를 포함한다.The present invention relates to methods and compounds for treating or preventing cancer. The methods and compounds include inhibiting or inhibiting the occurrence, maintenance, and proliferation of cancer, and inhibiting cancer cell metastasis.

Description

전이 억제제{Inhibitors of Metastasis}Inhibitors of Metastasis

관련출원의 상호참조Cross-reference of related applications

본 출원은 전문이 참고문헌으로 본 명세서에 포함된, 2013년 4월 5일자 미합중국 가특허출원 제 61/808,966호를 우선권으로 주장한다.
This application claims priority to United States Provisional Patent Application No. 61/808,966 filed April 5, 2013, which is incorporated herein by reference in its entirety.

발명의 분야Field of invention

본 발명은 항체, 핵산 분자, 폴리뉴클레오티드 및 펩티드를 포함하는 조성물 및 제제, 및 전이성 암의 예방 및 치료, 특히 암세포의 증식, 전이 및/또는 혈관신생의 감소, 차단, 또는 억제를 위한 이들의 이용방법에 관한 것이다.
The present invention relates to compositions and preparations comprising antibodies, nucleic acid molecules, polynucleotides and peptides, and their use for the prevention and treatment of metastatic cancer, in particular for reducing, blocking, or inhibiting the proliferation, metastasis and/or angiogenesis of cancer cells. It's about how.

전자적으로 제출한 텍스트의 설명Description of text submitted electronically

전자적으로 제출한 텍스트의 내용은 전문이 참고문헌으로 본 명세서에 포함되었다: 서열목록의 컴퓨터 해독가능본(filename: BMRK_006_01WO_SubSeqList_ST25.txt, date recorded: May 12, 2014, file size 58 kilobytes).
The content of the electronically submitted text is incorporated herein by reference in its entirety: a computer-readable version of the Sequence Listing (filename: BMRK_006_01WO_SubSeqList_ST25.txt, date recorded: May 12, 2014, file size 58 kilobytes).

MARCKS 단백질(미리스토일화 알라닌-풍부 C-키나제 기질, Myristoylated Alanine-Rich C-Kinase Substrate)은 단백질 키나제 C(PKC)의 아주 흔한 인산화 표적이다(참조: Li et al ., Journal of Biological Chemistry 276; 40982 (2002)). MARCKS는 다음과 같은 3개의 발생학적으로 보존된 영역을 가진다(참조: Aderem et al., Nature 1988; 332:362-364; Thelen et al., Nature 1991; 351:320-322; Hartwig et al., Nature 1992; 356:618-622; Seykora et al., J Biol Chem 1996; 271:18797-18802): N-말단, 인산화 부위 영역(phosphorylation site domain, PSD; 효과기 영역(effector domain)으로도 알려짐), 다중 상동성 2 영역(multiple homology 2 (MH2) domain). 상기 N-말단, N-말단 글리신 잔기에 아미드 결합으로 연결된 미리스틴산을 가지는 24개의 아미노산 잔기를 포함하는 알파-아미노산 서열은 세포막(참조: Seykora et al., J Biol Chem 1996; 271:18797-18802), 및 경우에 따라서 칼모듈린(calmodulin)(Matsubara et al., J Biol Chem 2003; 278:48898-48902)에 MARCKS의 결합에 관여한다. 이 24개 아미노산 서열은 MANS 펩티드로 알려져 있다. MANS 펩티드 및 관련 펩티드는 미합중국 특허 제7,265,088호; 제7,529,926호; 제7,544,772호; 제8,492,518호; 제8,501,911호; 제7,918,293,870호; 및 제8,563,689호에 개시되어 있으며; 이들의 전문은 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.The MARCKS protein (Myristoylated Alanine-Rich C-Kinase Substrate) is a very common target for phosphorylation of protein kinase C (PKC) (L et al. al . , Journal of Biological Chemistry 276; 40982 (2002)). MARCKS has three embryologically conserved regions (Aderem et al., Nature 1988; 332:362-364; Thelen et al., Nature 1991; 351:320-322; Hartwig et al. , Nature 1992; 356:618-622; Seykora et al., J Biol Chem 1996; 271:18797-18802): N-terminal, phosphorylation site domain (PSD); also known as effector domain ), multiple homology 2 (MH2) domain. The alpha-amino acid sequence comprising 24 amino acid residues having myristic acid linked to the N-terminal and N-terminal glycine residues by amide bonds is a cell membrane (Seykora et al., J Biol Chem 1996; 271:18797-). 18802), and, in some cases, calmodulin (Matsubara et al., J Biol Chem 2003; 278:48898-48902). This 24 amino acid sequence is known as the MANS peptide. MANS peptides and related peptides are described in U.S. Patent No. 7,265,088; 7,529,926; 7,544,772; 8,492,518; 8,501,911; 7,918,293,870; And 8,563,689; Their entirety is incorporated herein by reference.

당업계에서는 암세포의 전이, 암세포의 증식, 종양의 성장, 및/또는 혈관신생의 억제를 포함하는, 암을 예방하고, 치료하고 억제하는, 새롭고, 안전한 치료방법의 필요성이 대두되었다. 본 발명은 이들과 다른 필요성에 관한 것이다.
In the art, there is a need for a new and safe treatment method for preventing, treating and inhibiting cancer, including inhibition of metastasis of cancer cells, proliferation of cancer cells, growth of tumors, and/or angiogenesis. The present invention relates to these and other needs.

본 발명은 암을 예방 또는 치료하는 방법 및 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암세포의 전이, 암세포의 증식, 종양의 성장 또는 혈관신생을 억제하는 방법 및 조성물이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 미리스토일화 알라닌-풍부 C-키나제 기질(MARCKS, Myristoylated Alanine-Rich C-Kinase Substrate)의 억제를 포함하는, 암세포의 전이, 암세포의 증식, 종양의 성장 또는 혈관신생을 억제하는 방법 및 조성물이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 조성물은 펩티드, 폴리펩티드, 항체 또는 이들의 단편, 및 안티센스 폴리뉴클레오티드, 앱타머(aptamer), 작은 간섭 RNA(small interfering RNA, siRNA), 마이크로 RNA(miRNA), 및 숏-헤어핀 RNA(shRNA) 등 핵산분자와 같은 MARCKS-억제 화합물을 포함한다. 본 명세서에 기술된 "MARCKS-억제 핵산분자(MARCKS-inhibitory nucleic acid molecule)"는 MARCKS의 발현 및/또는 기능을 감쇄시키는 폴리뉴클레오티드 또는 siRNA, miRNA, shRNA, 또는 안티센스 폴리뉴클레오티드를 일컫는다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 조성물은 하나 또는 그 이상의 MARCKS-관련 펩티드를 포함한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 MARCKS-관련 펩티드는 MARCKS의 MH2 영역에 상응한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 미리스토일화 N-말단 서열(MARCKS의 24개 아미노산 단편인 MANS 펩티드)-관련 펩티드(즉, "MANS-관련 펩티드")이다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 MANS 펩티드(MANS peptide); 4개 또는 그 이상의 아미노산을 가지고 MANS 펩티드에서 N-말단 아미노산 서열에서 발견되는 것과 같은 서열을 포함하는 MANS의 비치환 단편(unsubstituted fragment); MANS 펩티드 또는 MANS 펩티드 단편에서 발견되는 서열과 대체적으로 동일한 서열을 포함하는 펩티드(peptide); 예를 들면, 아세틸기와 N-말단 미리스토일화 또는 N-말단 아실화되는 MANS 펩티드와 동일하거나 대체적으로 동일한 아미노산 서열을 가지는 MANS 펩티드(MANS peptide) 또는 MANS 펩티드 단편(MANS peptide fragment); C-말단이 화학적으로 변형된 MANS 펩티드와 동일하거나 대체적으로 동일한 MANS 펩티드(MANS peptide) 또는 MANS 펩티드 단편(MANS peptide fragment)이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 본 명세서에 개시된 MARCKS-억제 화합물은 항체 또는 항체의 단편이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 항체 또는 항체의 단편은 MARCKS 단백질의 기능을 억제한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 항체 또는 항체의 단편은 MARCKS 단백질의 N-말단 또는 MARCKS 단백질의 MH2 서열에 결합한다. 놀라웁게도, 본 발명자들은 여러가지 형태의 MARCKS-억제 화합물이 실험실 조건에서 암세포의 이동을 억제하고 생체 조건에서 전이를 억제하는 효과를 발견하였다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 공격적인 암 세포주들의 이동(migration)을 억제한다. 본 명세서에 개시된 MARCKS-억제 화합물은 포유동물의 종양에서 암세포들의 전이를 억제한다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 종양은 고형(solid)이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 종양은 비-고형(non-solid)이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 본 명세서에 개시된 MARCKS-억제 화합물은 림프종(lymphoma) 또는 백혈병(leukemia)과 연관된 암세포의 전이를 억제한다. The present invention relates to methods and compositions for preventing or treating cancer. According to an embodiment of the present invention, there is provided a method and composition for inhibiting metastasis of cancer cells, proliferation of cancer cells, growth of tumors, or angiogenesis. According to an embodiment of the present invention, metastasis of cancer cells, proliferation of cancer cells, growth of tumors or blood vessels, including inhibition of Myristoylated Alanine-Rich C-Kinase Substrate (MARCKS) Methods and compositions for inhibiting angiogenesis are provided. According to an embodiment of the present invention, the composition comprises a peptide, a polypeptide, an antibody or a fragment thereof, and an antisense polynucleotide, an aptamer, a small interfering RNA (siRNA), a micro RNA (miRNA), And MARCKS-inhibiting compounds such as nucleic acid molecules such as short-hairpin RNA (shRNA). The "MARCKS-inhibitory nucleic acid molecule" as described herein refers to a polynucleotide or siRNA, miRNA, shRNA, or antisense polynucleotide that attenuates the expression and/or function of MARCKS. According to an embodiment of the present invention, the composition comprises one or more MARCKS-related peptides. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide corresponds to the MH2 region of MARCKS. According to one embodiment of the present invention, the peptide is a myristoylated N-terminal sequence (MANS peptide, a 24 amino acid fragment of MARCKS)-related peptide (ie, "MANS-related peptide"). According to another embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is a MANS peptide; An unsubstituted fragment of MANS having 4 or more amino acids and comprising the same sequence as found in the N-terminal amino acid sequence in the MANS peptide; A peptide comprising a sequence substantially identical to the sequence found in the MANS peptide or MANS peptide fragment; For example, a MANS peptide or a MANS peptide fragment having an amino acid sequence identical or substantially identical to that of the acetyl group and the N-terminal myristoylated or N-terminal acylated MANS peptide; The C-terminus is a MANS peptide or MANS peptide fragment that is identical or substantially identical to the chemically modified MANS peptide. According to one embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound disclosed herein is an antibody or fragment of an antibody. According to an embodiment of the present invention, the antibody or antibody fragment inhibits the function of the MARCKS protein. According to an embodiment of the present invention, the antibody or antibody fragment binds to the N-terminus of the MARCKS protein or the MH2 sequence of the MARCKS protein. Surprisingly, the present inventors have found that various types of MARCKS-inhibiting compounds inhibit the migration of cancer cells in laboratory conditions and inhibit metastasis in vivo. According to one embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound inhibits the migration of aggressive cancer cell lines. MARCKS-inhibiting compounds disclosed herein inhibit metastasis of cancer cells in mammalian tumors. According to another embodiment of the invention, the tumor is solid. According to one embodiment of the invention, the tumor is non-solid. According to one embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound disclosed herein inhibits metastasis of cancer cells associated with lymphoma or leukemia.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 MARCKS-억제 폴리뉴클레오티드 또는 MARCKS-억제 핵산분자를 포함한다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 MARCKS의 발현 및/또는 기능을 감쇄시키는 안티센스 RNA, siRNA, shRNA, 또는 miRNA 폴리뉴클레오티드이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 단백질 유사체 또는 MARCKS의 발현을 조절하는 miR21의 유사체(mimic)와 같은 폴리뉴클레오티드이다.According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound comprises a MARCKS-inhibiting polynucleotide or a MARCKS-inhibiting nucleic acid molecule. According to another embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound is an antisense RNA, siRNA, shRNA, or miRNA polynucleotide that attenuates the expression and/or function of MARCKS. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound is a polynucleotide, such as a protein analog or miR21 analog that regulates the expression of MARCKS.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 MARCKS-관련 또는 MANS-관련 펩티드이다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 MARCKS의 N-말단 미리스토일화 영역에 상응한다. 따라서, 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 MANS-관련 펩티드이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드 및 화학적으로 변형된 MANS-관련 펩티드는 공격적인 암 세포주의 이동을 차단한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 암세포의 전이를 억제하는데 사용한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 생체 조건에서 암세포의 전이를 억제하는 효과를 나타낸다. 전이성 질환(metastatic disease)의 생체내에서 억제 지점은 폐 조직, 심장 조직, 장 조직(intestine tissue), 및 횡경막 조직 등을 포함한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 암세포 전이, 암세포 증식, 종양 세포 성장, 또는 혈관신생을 치료 및 예방하는데 사용한다.According to one embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound is a MARCKS-related or MANS-related peptide. According to another embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide corresponds to the N-terminal myristoylation region of MARCKS. Thus, according to one embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound is a MANS-related peptide. According to one embodiment of the invention, the MANS-related peptide and the chemically modified MANS-related peptide block the migration of aggressive cancer cell lines. According to one embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is used to inhibit metastasis of cancer cells. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound exhibits an effect of inhibiting metastasis of cancer cells in vivo. In vivo points of inhibition of metastatic disease include lung tissue, heart tissue, intestine tissue, diaphragm tissue, and the like. According to one embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is used to treat and prevent cancer cell metastasis, cancer cell proliferation, tumor cell growth, or angiogenesis.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암세포, 또는 암세포의 발생, 유지, 증식, 또는 전이에 역할을 하는 다른 세포에 MARCKS-억제 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 조성물 및 방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암세포에 전이-억제량의 MARCKS-억제 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 암세포의 전이를 억제하는 방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암세포에 전이-억제량의 MANS-관련 펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 암세포의 전이를 억제하는 방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암세포에 전이-억제량의 서열번호 1 내지 서열번호 231(inclusive), 서열번호 234, 및 서열번호 235로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지고, 상기 펩티드 서열의 N-말단 및/또는 C-말단 아미노산이 선택적으로 화학적 변형이 이루어진 펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 종양에서의 암세포의 전이를 억제하는 방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암세포에 전이-억제량의 MANS-관련 펩티드를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료하는 방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 서열번호 1 내지 서열번호 231(inclusive), 서열번호 234, 및 서열번호 235로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지고, 상기 펩티드 서열의 N-말단 및/또는 C-말단 아미노산이 선택적으로 화학적 변형이 이루어진 펩티드의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료방법이 제공된다.
According to one embodiment of the present invention, a composition and method for treating or preventing cancer comprising administering a MARCKS-inhibiting compound to cancer cells or other cells that play a role in the occurrence, maintenance, proliferation, or metastasis of cancer cells Is provided. According to an embodiment of the present invention, there is provided a method for inhibiting metastasis of cancer cells comprising administering a metastasis-inhibiting amount of a MARCKS-inhibiting compound to cancer cells. According to an embodiment of the present invention, there is provided a method for inhibiting metastasis of cancer cells, comprising administering a metastasis-inhibiting amount of a MANS-related peptide to cancer cells. According to an embodiment of the present invention, cancer cells have an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 231 (inclusive), SEQ ID NO: 234, and SEQ ID NO: 235 in a metastatic-inhibiting amount, and the peptide sequence There is provided a method for inhibiting metastasis of cancer cells in a tumor comprising administering a peptide in which the N-terminal and/or C-terminal amino acids are selectively chemically modified. According to one embodiment of the present invention, there is provided a method of treating cancer comprising administering to a subject a metastasis-inhibiting amount of a MANS-related peptide to cancer cells. According to an embodiment of the present invention, it has an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 231 (inclusive), SEQ ID NO: 234, and SEQ ID NO: 235, and the N-terminus of the peptide sequence and/or There is provided a method of treating cancer comprising administering to an individual a therapeutically effective amount of a peptide in which a C-terminal amino acid is selectively chemically modified.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, According to an embodiment of the present invention,

상기 펩티드의 N-말단 아미노산이, The N-terminal amino acid of the peptide,

＊직쇄형(linear), 분지형(branched), 포화 또는 불포화 C2(아세틸)~C24 지방족 카복실산의 아미드, ＊ amides of linear, branched, saturated or unsaturated C 2 (acetyl) to C 24 aliphatic carboxylic acids,

＊트리플루오르아세트산의 아미드, * Amide of trifluoroacetic acid,

＊벤조산의 아미드, 또는＊Amide of benzoic acid, or

＊C1~C24 지방족 알킬술폰산의 아미드 형태로 아실화(acylation)에 의해 화학적으로 변형되거나; 또는, * Is chemically modified by acylation in the amide form of C 1 to C 24 aliphatic alkylsulfonic acid; or,

상기 펩티드의 N-말단 아미노산의 N-말단 아민기가, The N-terminal amine group of the N-terminal amino acid of the peptide,

＊C1~C24 지방족 알킬기, ＊C 1 to C 24 aliphatic alkyl group,

＊직쇄형 2-(C1~C24 지방족 알킬)옥시에틸기, 또는＊Linear 2-(C 1 ~C 24 aliphatic alkyl)oxyethyl group, or

＊오메가-메톡시-폴리(에틸렌옥시)n-에틸기(n은 0 내지 10)로 알킬화(alkylation)됨으로써 화학적으로 변형된다.
＊Omega-methoxy-poly(ethyleneoxy)n-ethyl group (n is 0 to 10) is chemically modified by alkylation.

본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 N-말단 아미드는 아세틸 또는 미리스토일기이다.
According to another embodiment of the present invention, the N-terminal amide is an acetyl or myristoyl group.

본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, According to another embodiment of the present invention,

상기 펩티드의 C-말단 아미노산이, The C-terminal amino acid of the peptide,

＊암모니아의 아미드, ＊Amide of ammonia,

＊C1~C24 지방족 알킬 아민의 아미드, * Amides of C 1 to C 24 aliphatic alkyl amines,

＊히드록실-치환된 C2~C24 지방족 알킬아민의 아미드, * Amide of hydroxyl-substituted C 2 to C 24 aliphatic alkylamine,

＊직쇄형 2-(C1~C24 지방족 알킬)옥시에틸아민기의 아미드, 또는 * An amide of a straight-chain 2-(C 1 to C 24 aliphatic alkyl)oxyethylamine group, or

＊오메가-메톡시-폴리(에틸렌옥시)n-에틸아민기(n은 0 내지 10)의 아미드 형태로 상기 펩티드 C-말단 아미노산의 C-말단 카복실산기에 아미드를 형성함으로써 화학적으로 변형된다.
* It is chemically modified by forming an amide in the C-terminal carboxylic acid group of the peptide C-terminal amino acid in an amide form of an omega-methoxy-poly(ethyleneoxy)n-ethylamine group (n is 0 to 10).

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암세포, 또는 개체에 각각 MANS-관련 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 암세포의 전이를 억제하거나 암을 치료하는 방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (서열번호 1); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAV (서열번호 2); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAA (서열번호 4); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEA (서열번호 7); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGE (서열번호 11); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPG (서열번호 16); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERP (서열번호 22); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAER (서열번호 29); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAE (서열번호 37); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAA (서열번호 46); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAA (서열번호 56); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEA (서열번호 67); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGE (서열번호 79); N-미리스토일-GAQFSKTAAKG (서열번호 92); N-미리스토일-GAQFSKTAAK (서열번호 106); N-미리스토일-GAQFSKTAA (서열번호 121); N-미리스토일-GAQFSKTA (서열번호 137); N-미리스토일-GAQFSKT (서열번호 154); N-미리스토일-GAQFSK (서열번호 172), N-미리스토일-GAQFS (서열번호 191), N-미리스토일-GAQF (서열번호 211), N-아세틸-RGAQFSKTAAK (서열번호 234), N-아세틸-RGAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 234), N-아세틸-RAKGE (서열번호 235), 및 이들의 조합으로 구성되는 그룹으로부터 선택된다.According to an embodiment of the present invention, there is provided a method of inhibiting metastasis of cancer cells or treating cancer comprising administering a MANS-related compound to cancer cells or individuals, respectively. According to an embodiment of the present invention, the peptide is N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO: 1); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAV (SEQ ID NO: 2); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAA (SEQ ID NO: 4); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEA (SEQ ID NO: 7); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGE (SEQ ID NO: 11); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPG (SEQ ID NO: 16); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERP (SEQ ID NO: 22); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAER (SEQ ID NO: 29); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAE (SEQ ID NO: 37); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAA (SEQ ID NO: 46); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAA (SEQ ID NO: 56); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEA (SEQ ID NO: 67); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGE (SEQ ID NO: 79); N-myristoyl-GAQFSKTAAKG (SEQ ID NO: 92); N-myristoyl-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106); N-myristoyl-GAQFSKTAA (SEQ ID NO: 121); N-myristoyl-GAQFSKTA (SEQ ID NO: 137); N-myristoyl-GAQFSKT (SEQ ID NO: 154); N-myristoyl-GAQFSK (SEQ ID NO: 172), N-myristoyl-GAQFS (SEQ ID NO: 191), N-myristoyl-GAQF (SEQ ID NO: 211), N-acetyl-RGAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 234), N-acetyl-RGAQFSKTAAK-NH2 (SEQ ID NO: 234), N-acetyl-RAKGE (SEQ ID NO: 235), and combinations thereof.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 N-아세틸-GAQFSKTAAK (서열번호 106; BIO-11006), N-미리스토일-AKGE (서열번호 219; BIO-91200), N-미리스토일-GAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 106; BIO-11002), N-미리스토일-GAQFSKTAAK (서열번호 106; BIO-11000), N-아세틸-GAQFSKTAA (서열번호 121; BIO-10901), N-미리스토일-GAQFSKTAAK (서열번호 121; BIO-10900), 및 N-아세틸-GAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 106; BIO-11026)으로 구성되는 그룹으로부터 선택된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 일부 아미노산은 d-구조(configuration)로 존재한다. 예를 들면, 상기 펩티드는 N-아세틸-GAQFS(d)KTAA(d)K (서열번호 106; BIO-11037)(6번 및 10번 위치의 라이신(K)은 d-구조이다).According to an embodiment of the present invention, the peptide is N-acetyl-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106; BIO-11006), N-myristoyl-AKGE (SEQ ID NO: 219; BIO-91200), N-myristoyl- GAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 106; BIO-11002), N-myristoyl-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106; BIO-11000), N-acetyl-GAQFSKTAA (SEQ ID NO: 121; BIO-10901), N-myristo Mono-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 121; BIO-10900), and N-acetyl-GAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 106; BIO-11026). According to one embodiment of the present invention, some amino acids exist in a d-configuration. For example, the peptide is N-acetyl-GAQFS(d)KTAA(d)K (SEQ ID NO: 106; BIO-11037) (lysine (K) at positions 6 and 10 has a d-structure).

본 발명의 일부 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 치료적 응용에 적절한 특성, 예를 들어, 암의 치료와 같은 특성을 나타낸다. 예를 들면, 본 발명의 실시태양에 따르면, 본 명세서에 개시된 일부 MANS-관련 펩티드는 MANS 펩티드 또는 MANS-관련 펩티드 외의 다른 펩티드에 비하여 증대된 용해도(solubility)를 나타낸다. 본 발명의 실시태양에 따르면, 본 명세서에 개시된 일부 MANS-관련 펩티드는 MANS 펩티드 또는 MANS-관련 펩티드외의 다른 펩티드에 비하여 혈장(plasma)에서 보다 긴 반감기(half-lives)를 나타낸다. According to some embodiments of the present invention, MANS-related peptides exhibit properties suitable for therapeutic applications, eg, treatment of cancer. For example, according to embodiments of the present invention, some MANS-related peptides disclosed herein exhibit increased solubility compared to the MANS peptide or other peptides other than MANS-related peptides. According to an embodiment of the invention, some MANS-related peptides disclosed herein exhibit longer half-lives in plasma compared to the MANS peptide or other peptides other than the MANS-related peptide.

본 발명의 일부 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 암세포의 이동을 감소시킨다. 예를 들면, 본 발명의 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드(예를 들면, BIO-11006, BIO-11002, BIO-10901, BIO-10900, BIO-11000 또는 BIO-91200)는, 세포를 10uM 내지 200uM의 펩티드로 전처리하거나; 20uM 내지 200uM의 펩티드로 전처리하거나; 25uM 내지 75uM의 펩티드로 전처리함으로써, 암세포의 이동을 감소시킨다. 본 발명의 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 약 1uM 내지 500uM, 약 5uM 내지 250uM, 약 10uM 내지 200uM의 농도로 투여함으로써, 암세포의 이동을 감소시킨다. 본 발명의 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 약 1uM, 약 5uM, 약 10uM, 약 25uM, 약 50uM, 약 100uM, 약 150uM, 약 200uM, 또는 약 500uM의 농도로 투여함으로써, 암세포의 이동을 감소시킨다. 본 발명의 실시태양에 따르면, 펩티드의 효과를 측정하기 위하여 암세포를 실험실 조건에서 펩티드로 처리한다. 본 발명의 실시태양에 따르면, 암세포는 환자로부터 유래한다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 환자가 펩티드 처리에 반응할 것인가를 측정하기 위하여, 암세포를 실험실 조건에서 펩티드로 처리한다. According to some embodiments of the present invention, the MARCKS-related peptide reduces the migration of cancer cells. For example, according to an embodiment of the present invention, a MANS-related peptide (e.g., BIO-11006, BIO-11002, BIO-10901, BIO-10900, BIO-11000 or BIO-91200) contains 10 μM of cells. Pretreatment with a peptide of to 200 uM; Pretreatment with 20 uM to 200 uM peptide; By pretreatment with 25 uM to 75 uM peptide, the migration of cancer cells is reduced. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide is administered at a concentration of about 1 uM to 500 uM, about 5 uM to 250 uM, about 10 uM to 200 uM, thereby reducing the migration of cancer cells. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide is administered at a concentration of about 1uM, about 5uM, about 10uM, about 25uM, about 50uM, about 100uM, about 150uM, about 200uM, or about 500uM, thereby controlling the migration of cancer cells. Decrease. According to an embodiment of the present invention, cancer cells are treated with the peptide in laboratory conditions in order to measure the effect of the peptide. According to an embodiment of the present invention, the cancer cells are derived from a patient. According to another embodiment of the present invention, cancer cells are treated with the peptide in laboratory conditions to determine whether a patient will respond to the peptide treatment.

본 발명의 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드를 약 0.01mg/kg/day 내지 약 10mg/kg/day의 용량으로 환자에게 투여함으로써, 암세포의 이동을 감소시킨다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 약 0.1mg/kg/day 내지 약 5.0mg/kg/day의 용량으로 환자에게 투여함으로써, 암세포의 이동을 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 약 0.5mg/kg/day 내지 약 2.5mg/kg/day의 용량으로 환자에게 투여함으로써, 암세포의 전이를 억제시킨다. 예를 들면, MARCKS-관련 펩티드는 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.5, 약 0.75, 약 1.0, 약 1.25, 약 1.5, 약 1.75, 약 2.0, 약 2.25, 약 2.5, 약 2.75, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 5.0, 약 6.0, 약 7.0, 약 8.0, 약 9.0, 약 10.0mg/kg/day 또는 그 이상의 용량으로 환자에게 투여함으로써, 암세포의 이동을 감소시킨다. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide is administered to a patient at a dose of about 0.01 mg/kg/day to about 10 mg/kg/day, thereby reducing the migration of cancer cells. According to another embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide is administered to a patient at a dose of about 0.1 mg/kg/day to about 5.0 mg/kg/day, thereby reducing the migration of cancer cells. According to another embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide is administered to a patient at a dose of about 0.5 mg/kg/day to about 2.5 mg/kg/day, thereby inhibiting metastasis of cancer cells. For example, MARCKS-related peptides are about 0.01, about 0.05, about 0.1, about 0.5, about 0.75, about 1.0, about 1.25, about 1.5, about 1.75, about 2.0, about 2.25, about 2.5, about 2.75, about 3.0 , About 3.5, about 4.0, about 5.0, about 6.0, about 7.0, about 8.0, about 9.0, about 10.0mg/kg/day or more by administering to the patient to reduce the migration of cancer cells.

본 발명의 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 펩티드의 용액 또는 현탁액의 흡입(inhalation), 또는 건조분말 제제의 흡입에 의해 투여된다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 펩티드의 액상 제제 또는 현탁액으로 주사된다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 주사는 암세포를 포함하는 1차 종양 부위(primary tumor region)로 투여된다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 암세포는 포유동물의 종양에 존재한다. 본 발명의 실시태양에 따르면, 상기 종양은 고형이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 종양은 비-고형이다. 본 발명의 실시태양에 따르면, 본 명세서에 개시된 MARCKS-억제 화합물은 림프종(lymphoma) 또는 백혈병(leukemia)과 연관된 암세포의 전이를 억제한다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 액상 제제는 등장성(isotonic)이다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 액상 제제는 완충액이다. According to an embodiment of the present invention, the peptide is administered by inhalation of a solution or suspension of the peptide or inhalation of a dry powder formulation. According to another embodiment of the present invention, the peptide is injected as a liquid preparation or suspension of the peptide. According to another embodiment of the present invention, the injection is administered to a primary tumor region containing cancer cells. According to another embodiment of the present invention, the cancer cells are present in a mammalian tumor. According to an embodiment of the invention, the tumor is solid. According to one embodiment of the invention, the tumor is non-solid. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound disclosed herein inhibits metastasis of cancer cells associated with lymphoma or leukemia. According to another embodiment of the present invention, the liquid formulation is isotonic. According to another embodiment of the present invention, the liquid formulation is a buffer solution.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 펩티드의 전이-억제량은 ml 당 약 0.1 내지 약 100uM의 범주이다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 펩티드의 전이-억제량은 ml 당 약 1 내지 약 10uM의 범주이다. 상기 펩티드은 암 치료에 유용한 추가적인 약물을 포함하는 조성물 형태나, 또는 투여를 위해 추가적인 약물과 함께 제제화된다.According to one embodiment of the present invention, the amount of the peptide is in the range of about 0.1 to about 100 uM per ml. According to another embodiment of the invention, the amount of metastasis-inhibiting of the peptide is in the range of about 1 to about 10 uM per ml. The peptides are formulated in the form of compositions containing additional drugs useful for the treatment of cancer, or with additional drugs for administration.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 포유동물에 MARCKS-억제 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 포유동물에 있어서 암세포의 전이를 치료 및 예방하는 방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 MARCKS의 발현 또는 활성을 감소시키는 폴리뉴클레오티드 또는 핵산분자이다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 안티센스 RNA, siRNA, shRNA, 또는 miRNA이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 폴리뉴클레오티드는 약 10nM 내지 10uM, 또는 약 20nM 내지 약 500nM, 또는 약 30nM 내지 약 300nM, 또는 약 40nM 내지 약 200nM, 또는 약 50nM 내지 약 100nM의 양으로 투여된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 MARCKS의 발현을 조절하는 miR21의 유사체이다. 예를 들면, 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 폴리뉴클레오티드는 miR21의 유사체이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드와 핵산분자는 펩티드, 단백질, 지질, 스테롤, 고분자, 전이제(transfection reagent)와 같은 전달제(delivery agent), 또는 당업계에 주지된 폴리뉴클레오티드 또는 핵산분자 전달제와 함께 투여된다.According to one embodiment of the present invention, there is provided a method for treating and preventing metastasis of cancer cells in a mammal comprising administering a MARCKS-inhibiting compound to the mammal. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound is a polynucleotide or nucleic acid molecule that reduces the expression or activity of MARCKS. According to another embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound is antisense RNA, siRNA, shRNA, or miRNA. According to an embodiment of the invention, the MARCKS-inhibiting polynucleotide is in an amount of about 10 nM to 10 uM, or about 20 nM to about 500 nM, or about 30 nM to about 300 nM, or about 40 nM to about 200 nM, or about 50 nM to about 100 nM. Is administered. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound is an analog of miR21 that regulates the expression of MARCKS. For example, according to one embodiment of the invention, the MARCKS-inhibiting polynucleotide is an analog of miR21. According to an embodiment of the present invention, the polynucleotide and the nucleic acid molecule are peptides, proteins, lipids, sterols, polymers, delivery agents such as a transfection reagent, or polynucleotides well known in the art, or It is administered with a nucleic acid molecule delivery agent.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 비-소형-세포 폐암종(non-small-cell lung carcinoma, NSCLC) 세포를 전처리하고, 포유동물에 MANS-관련 펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 포유동물의 암을 치료 또는 예방하거나, 포유동물 암세포의 전이를 억제하는 방법이 제공되는데, 상기 펩티드는 최소 약 1.5, 최소 약 1.6, 최소 약 1.7, 최소 약 1.8, 최소 약 1.9, 최소 약 2.0, 최소 약 2.1, 최소 약 2.2, 최소 약 2.3, 최소 약 2.4, 최소 약 2.5, 최소 약 2.6, 최소 약 2.7, 최소 약 2.8, 최소 약 2.9, 최소 약 3.0, 또는 그 이상의 유주지수(migration index)를 나타낸다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 상기 펩티드의 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 또는 200umolar의 농도로 존재한다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 이동기간(migration period)은 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12, 15, 20, 21, 22, 23, 또는 24시간이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 NSCLC 세포를 50umolar의 농도 및 약 12시간의 이동기간(migration period)으로 전처리하면, 최소 약 1.5의 유주지수(migration index)를 나타낸다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 NSCLC 세포를 100umolar의 농도 및 약 12시간의 이동기간으로 전처리하면, 최소 약 2.0의 유주지수를 나타낸다. According to one embodiment of the present invention, cancer of a mammal comprising the step of pretreating non-small-cell lung carcinoma (NSCLC) cells and administering a MANS-related peptide to the mammal. There is provided a method for treating or preventing or inhibiting metastasis of mammalian cancer cells, wherein the peptide is at least about 1.5, at least about 1.6, at least about 1.7, at least about 1.8, at least about 1.9, at least about 2.0, at least about 2.1, It represents a migration index of at least about 2.2, at least about 2.3, at least about 2.4, at least about 2.5, at least about 2.6, at least about 2.7, at least about 2.8, at least about 2.9, at least about 3.0, or higher. According to an embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, of the peptide. It is present in concentrations of 150, 175, or 200 umolar. According to another embodiment of the present invention, the migration period is 3, 4, 5, 6, 7, 8, 12, 15, 20, 21, 22, 23, or 24 hours. According to an embodiment of the present invention, the MANS-related peptide exhibits a migration index of at least about 1.5 when NSCLC cells are pretreated with a concentration of 50 umolar and a migration period of about 12 hours. According to an embodiment of the present invention, the MANS-related peptide exhibits a migration index of at least about 2.0 when pretreated NSCLC cells at a concentration of 100 μmol and a migration period of about 12 hours.

본 발명의 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 약 0.01mg/kg/day 내지 약 10mg/kg/day의 용량으로 환자에게 투여함으로써, 암전이를 포함하는 암의 치료 및 예방하는 방법이 제공된다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 약 0.1mg/kg/day 내지 약 5.0mg/kg/day의 용량으로 투여된다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 약 0.5mg/kg/day 내지 약 2.5mg/kg/day의 용량으로 투여된다. 예를 들면, MARCKS-관련 펩티드는 암을 치료 및 예방하기 위하여, 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.5, 약 0.75, 약 1.0, 약 1.25, 약 1.5, 약 1.75, 약 2.0, 약 2.25, 약 2.5, 약 2.75, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 5.0, 약 6.0, 약 7.0, 약 8.0, 약 9.0, 약 10.0mg/kg/day 또는 그 이상의 용량으로 투여된다.
According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide is administered to a patient at a dose of about 0.01 mg/kg/day to about 10 mg/kg/day, thereby providing a method for treating and preventing cancer including cancer metastasis. . According to another embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide is administered at a dose of about 0.1 mg/kg/day to about 5.0 mg/kg/day. According to another embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide is administered at a dose of about 0.5 mg/kg/day to about 2.5 mg/kg/day. For example, MARCKS-related peptides are about 0.01, about 0.05, about 0.1, about 0.5, about 0.75, about 1.0, about 1.25, about 1.5, about 1.75, about 2.0, about 2.25, for the treatment and prevention of cancer. It is administered at a dose of about 2.5, about 2.75, about 3.0, about 3.5, about 4.0, about 5.0, about 6.0, about 7.0, about 8.0, about 9.0, about 10.0 mg/kg/day or more.

미리스토일화 알라닌-풍부 C-키나제 기질(MARCKS) 단백질은 여러가지 세포의 활동과 연관되어 있다. 예를 들면, MARCKS 단백질은 세포 분비(secretion), 탈과립(degranulation), 이동(migration) 및 유전자 발현(expression)에 총체적으로 관여하는 것으로 알려져 있다. 이러한 연구결과는 세포를 자극하기 이전에 MANS 펩티드로 전처리하는 경우, 서로 다른 세포의 활동에 영향을 주는 MARCKS 단백질(즉, MANS 펩티드)의 미리스토일화 N-말단 서열과 동일한 펩티드의 능력에 기반한다. 이 모든 경우에 미스센스 대조구 펩티드(missense control peptide, MANS 펩티드 아미노산의 임의적 아미노산 서열로 구성되며, 본 명세서에서는 "RNS 펩티드"로 일컫는다)는 MANS 펩티드에 의해 발휘되는 활성과 비교하면 효과가 없었다.Myristoylated alanine-rich C-kinase matrix (MARCKS) proteins are involved in the activities of several cells. For example, MARCKS protein is known to be totally involved in cell secretion, degranulation, migration, and gene expression. These findings are based on the ability of the peptide to be identical to the myristoylated N-terminal sequence of the MARCKS protein (i.e., the MANS peptide), which, when pretreated with the MANS peptide prior to cell stimulation, affects the activity of different cells. . In all these cases, the missense control peptide (consisting of an arbitrary amino acid sequence of the MANS peptide amino acids, referred to herein as “RNS peptide”) was ineffective compared to the activity exerted by the MANS peptide.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 조성물은 펩티드, 폴리펩티드, 항체, 또는 이들의 단편, 및 폴리뉴클레오티드, 안티센스 폴리뉴클레오티드, 앱타머(aptamer), 작은 간섭 RNA(small interfering RNA, siRNA), 마이크로 RNA(miRNA), 및 숏-헤어핀 RNA(shRNA)와 같은 핵산분자를 포함하는 MARCKS-억제 화합물을 포함한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 조성물은 하나 또는 그 이상의 미리스토일화 알라닌-풍부 C-키나제 기질(MARCKS)-관련 펩티드를 포함한다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, MARCKS-관련 펩티드는 MARCKS 단백질의 MH2 영역에 상응한다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 상기 조성물은 MARCKS 단백질의 N-말단 서열에 상응하는 펩티드를 포함하는 MARCKS-억제 펩티드를 포함한다.According to an embodiment of the present invention, the composition comprises a peptide, a polypeptide, an antibody, or a fragment thereof, and a polynucleotide, an antisense polynucleotide, an aptamer, a small interfering RNA (siRNA), and a micro RNA. (miRNA), and MARCKS-inhibiting compounds, including nucleic acid molecules such as short-hairpin RNA (shRNA). According to one embodiment of the invention, the composition comprises one or more myristoylated alanine-rich C-kinase substrates (MARCKS)-related peptides. According to another embodiment of the present invention, the MARCKS-related peptide corresponds to the MH2 region of the MARCKS protein. According to another embodiment of the present invention, the composition comprises a MARCKS-inhibiting peptide comprising a peptide corresponding to the N-terminal sequence of the MARCKS protein.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 본 발명에서 제공되는 MARCKS-억제 화합물은 항체이다. 본 명세서에서, "항체(antibody)"라는 용어는 최소한 하나의 항원-결합 영역을 가지는 결합 단백질을 의미하고, 단클론 항체, 다클론 항체, 및 항체의 단편, 및/또는 재조합 폴리펩티드, 융합 단백질, 및 면역접합체(immunoconjugate)와 같은 변이체를 포함한다. 상기 항체의 단편의 예로서는, 이에 한정되는 것은 아니나, Fab 단편, Fc 단편, Fv 단편, dAb 단편, 단리된 CDR 영역, F(ab')2, 두개의 연결된 Fab 단편을 포함하는 이가 단편(bivalent fragment), 및 단일 사슬(single chain) Fv (scFv)을 포함한다. 당업자라면 상기 항체 또는 단편이, 이에 한정되는 것은 아니나, 마우스, 쥐, 토끼, 영장류(primate), 라마(llama) 및 사람을 포함하는 어떠한 종(species)으로부터도 생성될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 또한, 당업자라면 상기 항체 또는 단편이 키메라, 인간화 또는 완전 인간(fully human)일 수 있다는 것을 이해할 것이다. According to one embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound provided in the present invention is an antibody. As used herein, the term "antibody" refers to a binding protein having at least one antigen-binding region, and monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, and fragments of antibodies, and/or recombinant polypeptides, fusion proteins, and Includes variants such as immunoconjugates. Examples of the antibody fragment include, but are not limited to, a Fab fragment, an Fc fragment, an Fv fragment, a dAb fragment, an isolated CDR region, F(ab') 2 , a bivalent fragment including two linked Fab fragments. ), and single chain Fv (scFv). Those skilled in the art will appreciate that the antibody or fragment can be produced from any species including, but not limited to, mice, rats, rabbits, primates, llama and humans. . It will also be appreciated by those of skill in the art that such antibodies or fragments may be chimeric, humanized or fully human.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암을 치료 또는 예방하는 조성물 및 방법이 제공된다. 본 명세서에 개시된 암을 치료 또는 예방하는 방법은, 이에 한정되는 것은 아니나, 전이(metastasis), 암세포의 증식(proliferation), 종양의 성장(growth), 또는 혈관신생(angiogenesis)을 포함하는 여러 측면에서의 암의 치료 또는 예방을 포함한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암을 치료 또는 예방하는 조성물 및 방법이 제공되는데, 상기 방법은 암세포, 또는 예를 들면 상피세포와 같은 암세포의 발생, 유지, 증식, 또는 전이에 역할을 하는 다른 세포에 MARCKS-억제 화합물을 투여하는 단계를 포함한다.According to one embodiment of the present invention, compositions and methods for treating or preventing cancer are provided. The method for treating or preventing cancer disclosed herein is in various aspects including, but not limited to, metastasis, proliferation of cancer cells, growth of tumors, or angiogenesis. Including the treatment or prevention of cancer. According to one embodiment of the present invention, there is provided a composition and method for treating or preventing cancer, the method comprising cancer cells, or other cancer cells that play a role in the generation, maintenance, proliferation, or metastasis of cancer cells such as epithelial cells. And administering a MARCKS-inhibiting compound to the cell.

본 발명의 일 측면에 따르면, 암세포의 전이를 억제하는 조성물 및 방법이 제공되는데, 상기 방법은 MARCKS-억제 화합물을 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MARCKS-억제 화합물은 MARCKS 또는 MARCKS 펩티드에 결합하는 MARCKS-억제 펩티드, 항체 또는 이들의 단편, 또는 MARCKS 단백질의 기능을 억제하는 안티센스 폴리뉴클레오티드, 앱타머(aptamer), 작은 간섭 RNA(small interfering RNA, siRNA), 마이크로 RNA(miRNA), 및 숏-헤어핀 RNA(shRNA)와 같은 핵산분자이다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 암세포의 전이를 억제하는 MANS-관련 펩티드이다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암세포의 전이를 억제하는 MARCKS-억제 펩티드가 제공된다. 본 발명의 일 측면에 따르면, 상기 조성물을 이용하는 암의 치료방법이 제공된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 방법은 암세포를 MARCKS-억제 펩티드와 접촉시키는 단계를 포함한다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 암세포는 종양으로 존재한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 MARCKS-억제 펩티드는 MANS-관련 펩티드이다. 본 명세서에서, "MANS-관련 펩티드(MANS-realted peptide)"라는 용어는, MANS 펩티드 또는 MANS와 대체적으로 동일한 펩티드; MANS 펩티드에서 발견되는 최소 4개의 연속하는 아미노산을 포함하거나, 또는 MANS 펩티드에서 발견되는 최소 4개의 연속하는 아미노산을 포함하는 펩티드에 대체적으로 동일한 MANS 펩티드의 단편을 일컫는다. 따라서, MANS-관련 펩티드는 4 내지 24개의 아미노산 길이를 갖는다. 본 명세서에서, "대체적으로 동일한(substantially identical)"이라는 용어는, 두 펩티드 사이의 아미노산 서열 비교 또는 두 펩티드 절편(즉, 참조 아미노산의 서열의 절편) 사이의 아미노산 서열 비교에 있어서, 펩티드 또는 펩티드 절편의 아미노산 서열이 최소 75%의 서열 동일성, 최소 80%의 서열 동일성, 최소 90%의 서열 동일성, 최소 95%의 서열 동일성을 갖는 것을 의미한다. 바람직하게는, 펩티드의 아미노산 서열은 MANS 펩티드 또는 MANS 펩티드 절편에 80%의 서열 동일성을 가진다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 MANS 펩티드에 동일하거나 대체로 동일한 4 내지 24개의 연속되는 아미노산을 포함할 수도 있고, 하나 또는 그 이상의 아미노산을 포함할 수도 있다. 예를 들면, 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 MANS 펩티드와 동일하거나 대체로 동일한 4 내지 24개의 연속하는 아미노산을 포함할 수 있고, MANS 펩티드에 존재하지 않는 예를 들면 알기닌과 같은 최소한 하나의 N-말단 아미노산을 포함할 수도 있다.According to an aspect of the present invention, there is provided a composition and method for inhibiting metastasis of cancer cells, the method comprising administering a MARCKS-inhibiting compound. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting compound is a MARCKS-inhibiting peptide that binds to MARCKS or MARCKS peptide, an antibody or a fragment thereof, or an antisense polynucleotide, an aptamer, It is a nucleic acid molecule such as small interfering RNA (siRNA), micro RNA (miRNA), and short-hairpin RNA (shRNA). According to another embodiment of the present invention, the peptide is a MANS-related peptide that inhibits metastasis of cancer cells. According to one embodiment of the present invention, there is provided a MARCKS-inhibiting peptide that inhibits metastasis of cancer cells. According to one aspect of the present invention, a method of treating cancer using the composition is provided. According to one embodiment of the present invention, the method comprises contacting cancer cells with a MARCKS-inhibiting peptide. According to another embodiment of the present invention, the cancer cells exist as tumors. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting peptide is a MANS-related peptide. In the present specification, the term "MANS-realted peptide" refers to a MANS peptide or a peptide that is substantially identical to MANS; It refers to a fragment of a MANS peptide that contains at least 4 contiguous amino acids found in MANS peptides, or is generally identical to a peptide containing at least 4 contiguous amino acids found in MANS peptides. Thus, MANS-related peptides are 4 to 24 amino acids in length. As used herein, the term "substantially identical" refers to an amino acid sequence comparison between two peptides or an amino acid sequence comparison between two peptide fragments (ie, a fragment of the sequence of a reference amino acid), a peptide or a peptide fragment. It means that the amino acid sequence of has at least 75% sequence identity, at least 80% sequence identity, at least 90% sequence identity, and at least 95% sequence identity. Preferably, the amino acid sequence of the peptide has 80% sequence identity to the MANS peptide or MANS peptide fragment. According to an embodiment of the present invention, the MANS-related peptide may comprise 4 to 24 contiguous amino acids identical or substantially identical to the MANS peptide, and may comprise one or more amino acids. For example, according to one embodiment of the present invention, the MANS-related peptide may comprise 4 to 24 contiguous amino acids that are the same or substantially identical to the MANS peptide, and are not present in the MANS peptide, such as arginine. It may also contain at least one N-terminal amino acid.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 MARCKS-억제 펩티드는 화학적으로 변형된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 MARCKS-억제 펩티드는 N-말단 위치가 아실화되는 MANS-관련 펩티드이다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 N-말단 위치가 아세틸기로 아실화된다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 N-말단 위치가 미리스토일화된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 C-말단 위치가 화학적으로 변형된다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 C-말단 위치가 아민(예를 들면, 암모니아)과 아미드를 형성하여 화학적으로 변형된다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 N-말단 및 C-말단 위치가 화학적으로 변형된다. 하기 표 1은 그들의 N-말단이 미리스토일화되나 C-말단은 비치환되는 본 발명의 펩티드를 개시한다. 일부 대조구 펩티드(RNS 펩티드)들이 표 1 및 표 2에 개시되어 있고, 미리스토일화된다. 하지만, RNS 펩티드는 본 발명의 범주에 있는 것으로 고려되지는 않는다.
According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting peptide is chemically modified. According to an embodiment of the present invention, the MARCKS-inhibiting peptide is a MANS-related peptide whose N-terminal position is acylated. According to another embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is acylated at its N-terminal position with an acetyl group. According to another embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is myristoylated at the N-terminal position. According to one embodiment of the present invention, the C-terminal position of the MANS-related peptide is chemically modified. According to another embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is chemically modified by forming an amide with an amine (eg, ammonia) at the C-terminal position. According to another embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is chemically modified in its N-terminal and C-terminal positions. Table 1 below discloses the peptides of the present invention in which their N-terminus is myristoylated but the C-terminus is unsubstituted. Some control peptides (RNS peptides) are disclosed in Tables 1 and 2 and are myristoylated. However, RNS peptides are not considered to be within the scope of the present invention.

N-말단이 미리스토일화되고 C-말단 위치가 화학적으로 변형된 본 발명의 MANS-관련 펩티드들MANS-related peptides of the present invention wherein the N-terminus is myristoylated and the C-terminal position is chemically modified 펩티드 번호Peptide number N-N- 미리스토일화Myristoylation 아미노산 서열 Amino acid sequence 서열번호Sequence number 펩티드 1Peptide 1 GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVAGAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA 서열번호 1SEQ ID NO: 1 MANSMANS 펩티드 2Peptide 2 GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVGAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAV 서열번호 2SEQ ID NO: 2 펩티드 4Peptide 4 GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAGAQFSKTAAKGEAAAERPGEAA 서열번호 4SEQ ID NO: 4 펩티드 7Peptide 7 GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAGAQFSKTAAKGEAAAERPGEA 서열번호 7SEQ ID NO: 7 펩티드 11Peptide 11 GAQFSKTAAKGEAAAERPGE GAQFSKTAAKGEAAAERPGE 서열번호 11SEQ ID NO: 11 펩티드 16Peptide 16 GAQFSKTAAKGEAAAERPGGAQFSKTAAKGEAAAERPG 서열번호 16SEQ ID NO: 16 펩티드 22Peptide 22 GAQFSKTAAKGEAAAERPGAQFSKTAAKGEAAAERP 서열번호 22SEQ ID NO: 22 펩티드 29Peptide 29 GAQFSKTAAKGEAAAERGAQFSKTAAKGEAAAER 서열번호 29SEQ ID NO: 29 펩티드 37Peptide 37 GAQFSKTAAKGEAAAEGAQFSKTAAKGEAAAE 서열번호 37SEQ ID NO: 37 펩티드 46Peptide 46 GAQFSKTAAKGEAAAGAQFSKTAAKGEAAA 서열번호 46SEQ ID NO: 46 펩티드 56Peptide 56 GAQFSKTAAKGEAAGAQFSKTAAKGEAA 서열번호 56SEQ ID NO: 56 펩티드 67Peptide 67 GAQFSKTAAKGEAGAQFSKTAAKGEA 서열번호 67SEQ ID NO: 67 펩티드 79Peptide 79 GAQFSKTAAKGE GAQFSKTAAKGE 서열번호 79SEQ ID NO: 79 펩티드 92Peptide 92 GAQFSKTAAKGGAQFSKTAAKG 서열번호 92SEQ ID NO: 92 펩티드 106Peptide 106 GAQFSKTAAKGAQFSKTAAK 서열번호 106SEQ ID NO: 106 펩티드 121Peptide 121 GAQFSKTAAGAQFSKTAA 서열번호 121SEQ ID NO: 121 펩티드 137Peptide 137 GAQFSKTAGAQFSKTA 서열번호 137SEQ ID NO: 137 펩티드 154Peptide 154 GAQFSKT GAQFSKT 서열번호 154SEQ ID NO: 154 펩티드 172Peptide 172 GAQFSK GAQFSK 서열번호 172SEQ ID NO: 172 펩티드 191Peptide 191 GAQFS GAQFS 서열번호 191SEQ ID NO: 191 펩티드 211Peptide 211 GAQF GAQF 서열번호 211SEQ ID NO: 211 펩티드 232Peptide 232 GTAPAAEGAGAEVKRASAEAKQAFGTAPAAEGAGAEVKRASAEAKQAF 서열번호 232SEQ ID NO: 232 RNSRNS

하기 표 2는 N-말단 및/또는 C-말단 위치가 치환되거나 화학적으로 변형되는 본 발명의 MANS-관련 펩티드 단편을 개시한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 이들 MANS 펩티드의 활성 단편은 표 1에 개시된 바와 같이, N-말단이 미리스토일화될 수 있다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, C-말단 위치에서의 화학적 변형은 예를 들면, 암모니아와 같은 아민과의 아미드 형성과 같은 아미드화(amidation)를 포함한다. 펩티드 234(서열번호 234)는 N-말단이 화학적으로 변형될 수 있고(예를 들면, N-아세틸 유사체(analog), Ac-RGAQFSKTAAK), 또한 그의 N-말단 및 그의 C-말단이 화학적으로 변형될 수 있는(예를 들면, N-말단 아세틸-, C-말단 암모니아 유사체와의 아미드, Ac-RGAQFSKTAAK-NH2 펩티드 106(서열번호 106)의 N-말단 알기닌- 치환된 펩티드 상동체(homolog)(RGAQFSKTAAK)이다. 펩티드 235(서열번호 235)는 N-말단이 화학적으로 변형될 수 있고(예를 들면, N-아세틸 유사체, Ac-RAKGE), 또한 그의 N-말단 및 그의 C-말단이 화학적으로 변형될 수 있는(예를 들면, N-말단 아세틸-, C-말단 암모니아 유사체와의 아미드, Ac-RAKGE-NH2) 펩티드 219의 N-말단 알기닌-치환 펩티드 유사체(RAKGE)이다. 바람직한 N-말단 변형 또는 치환은 미리스토일 및 아세틸기 뿐만 아니라, N-말단 알기닌기, N-말단 아세틸-알기닌기, 및 N-말단 미리스토일-알기닌기를 포함한다. 바람직한 C-말단의 변형은 암모니아로부터의 아민기를 포함한다.
Table 2 below discloses the MANS-related peptide fragments of the present invention in which the N-terminal and/or C-terminal positions are substituted or chemically modified. According to one embodiment of the present invention, the active fragments of these MANS peptides may be myristoylated at the N-terminus, as disclosed in Table 1. According to another embodiment of the present invention, the chemical modification at the C-terminal position comprises amidation, such as the formation of an amide with an amine such as ammonia. Peptide 234 (SEQ ID NO: 234) can be chemically modified at its N-terminus (e.g., N-acetyl analogue, Ac-RGAQFSKTAAK), and also its N-terminus and its C-terminus are chemically modified. (E.g., N-terminal acetyl-, amide with C-terminal ammonia analogues, N-terminal arginine-substituted peptide homologs of Ac-RGAQFSKTAAK-NH 2 peptide 106 (SEQ ID NO: 106)) (RGAQFSKTAAK) Peptide 235 (SEQ ID NO: 235) can be chemically modified at its N-terminus (eg, N-acetyl analogue, Ac-RAKGE), and also its N-terminus and its C-terminus are chemically modified. (E.g., N-terminal acetyl-, amide with C-terminal ammonia analogue, Ac-RAKGE-NH 2 ) N-terminal arginine-substituted peptide analogue (RAKGE) of peptide 219. Preferred N -Terminal modifications or substitutions include myristoyl and acetyl groups as well as N-terminal arginine groups, N-terminal acetyl-arginine groups, and N-terminal myristoyl-arginine groups Preferred C-terminal modifications are ammonia It contains an amine group from

N-말단 및/또는 C-말단에서 화학적으로 변형될 수 있는 MARCKS-관련 펩티드 서열들MARCKS-related peptide sequences that can be chemically modified at the N-terminus and/or C-terminus MANSMANS 펩티드 및 Peptides and
활성 activation MANSMANS -관련 펩티드 단편-Related peptide fragment 펩티드 Peptide NoNo .. 아미노산 서열Amino acid sequence 서열번호Sequence number 펩티드 1Peptide 1 GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVAGAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA 서열번호 1SEQ ID NO: 1 MANSMANS 펩티드 2Peptide 2 GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVGAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAV 서열번호 2SEQ ID NO: 2 펩티드 3Peptide 3 AQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVAAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA 서열번호 3SEQ ID NO: 3 펩티드 4Peptide 4 GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAGAQFSKTAAKGEAAAERPGEAA 서열번호 4SEQ ID NO: 4 펩티드 5Peptide 5 AQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAV 서열번호 5SEQ ID NO: 5 펩티드 6Peptide 6 QFSKTAAKGEAAAERPGEAAVAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA 서열번호 6SEQ ID NO: 6 펩티드 7Peptide 7 GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAGAQFSKTAAKGEAAAERPGEA 서열번호 7SEQ ID NO: 7 펩티드 8Peptide 8 AQFSKTAAKGEAAAERPGEAAAQFSKTAAKGEAAAERPGEAA 서열번호 8SEQ ID NO: 8 펩티드 9Peptide 9 QFSKTAAKGEAAAERPGEAAVQFSKTAAKGEAAAERPGEAAV 서열번호 9SEQ ID NO: 9 펩티드 10Peptide 10 FSKTAAKGEAAAERPGEAAVAFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA 서열번호 10SEQ ID NO: 10 펩티드 11Peptide 11 GAQFSKTAAKGEAAAERPGE GAQFSKTAAKGEAAAERPGE 서열번호 11SEQ 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MANS 펩티드는 미리스토일화(MA)되고, 24개의 아미노산 서열을 갖는다(MA-GAQFSKTAAKGEAAARPGEAAVA). 이론에 구애되지는 않으나, 이론적으로 상기 펩티드는 세포막에 자연적으로 부착되고, 단백질 키나제 C(PKC)에 의해 MARCKS 단백질의 인산화를 방해하는 총장(full length) MARCKS 단백질과 저촉된다.The MANS peptide is myristoylated (MA) and has a sequence of 24 amino acids (MA-GAQFSKTAAKGEAAARPGEAAVA). While not wishing to be bound by theory, in theory, the peptide naturally attaches to the cell membrane, and interferes with the full length MARCKS protein, which inhibits the phosphorylation of the MARCKS protein by protein kinase C (PKC).

MANS 펩티드는 실험실 및 생체 조건에서 배상세포(goblet cell)의 탈과립화(degranulation)를 유의적으로 억제하는 것이 밝혀졌다. MANS는 또한 호중구(neutrophil) 및 중배엽 줄기세포(mesenchymal stem cell)의 이동속도에 영향을 준다. 또한, MANS에 의해 사람 백혈구의 탈과립화가 억제된다. 본 발명의 일 측면에 따르면, 암 세포주를 MANS-관련 펩티드로 처리하는 경우, 이들 암 세포주의 이동이 감소된다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 암세포의 전이를 억제한다. 따라서, 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 개체에서 전이성 암을 치료 또는 예방하는데 이용될 수 있다. 본 발명의 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는, 예를 들면, 암의 치료와 같은 치료적 응용에 적합한 특성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 예를 들면, 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 MANS 펩티드에 비하여 증대된 용해도를 나타낸다. 본 발명의 실시태양에 따르면, 일부 MANS-관련 펩티드는 MANS 펩티드 또는 MANS-관련 펩티드외의 다른 펩티드에 비하여 혈장(plasma)에서 보다 긴 반감기(half-lives)를 나타낸다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 암세포의 증식의 치료에 유용하다. 예를 들면, 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 암세포의 증식 또는 이동을 억제한다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 일부 MANS-관련 펩티드는 MANS 펩티드는 MANS-관련 펩티드보다 더 낮은 농도에서 암세포의 증식 및/또는 이동을 더욱 억제한다.
The MANS peptide was found to significantly inhibit degranulation of goblet cells in laboratory and in vivo conditions. MANS also affects the speed of migration of neutrophils and mesenchymal stem cells. In addition, degranulation of human leukocytes is inhibited by MANS. According to one aspect of the present invention, when cancer cell lines are treated with MANS-related peptides, migration of these cancer cell lines is reduced. According to one embodiment of the present invention, the MANS-related peptide inhibits metastasis of cancer cells. Thus, according to an embodiment of the present invention, the MANS-related peptide can be used to treat or prevent metastatic cancer in an individual. According to an embodiment of the invention, it has been found that MANS-related peptides exhibit properties suitable for therapeutic applications, such as, for example, the treatment of cancer. For example, according to an embodiment of the present invention, the MANS-related peptide exhibits increased solubility compared to the MANS peptide. According to an embodiment of the invention, some MANS-related peptides exhibit longer half-lives in plasma compared to MANS peptides or other peptides other than MANS-related peptides. According to one embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is useful for the treatment of proliferation of cancer cells. For example, according to one embodiment of the present invention, the MANS-related peptide inhibits the proliferation or migration of cancer cells. According to another embodiment of the invention, some MANS-related peptides further inhibit the proliferation and/or migration of cancer cells at lower concentrations than MANS-related peptides.

본 발명의 일 측면에 따르면, MANS-관련 펩티드는 이하로 구성된 그룹으로부터 선택된다:According to one aspect of the invention, the MANS-related peptide is selected from the group consisting of:

N-미리스토일-GAQFSKTAAK (서열번호 106; BIO-11000)N-myristoyl-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106; BIO-11000)

N-아세틸-GAQFSKTAAK (서열번호 106; BIO-11006); N-acetyl-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106; BIO-11006);

N-미리스토일-AKGE (서열번호 219; BIO-91200); N-myristoyl-AKGE (SEQ ID NO: 219; BIO-91200);

N-미리스토일-GAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 106; BIO-11002); N-myristoyl-GAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 106; BIO-11002);

N-아세틸-GAQFSKTAA (서열번호 121; BIO-10901); N-acetyl-GAQFSKTAA (SEQ ID NO: 121; BIO-10901);

N-아세틸-GAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 106; BIO-11026); N-acetyl-GAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 106; BIO-11026);

N-아세틸-GAQFS(d)KTAA(d)K (서열번호 106; BIO-11037) N-acetyl-GAQFS(d)KTAA(d)K (SEQ ID NO: 106; BIO-11037)

(6번 및 10번 위치에서의 라이신은 d-구조이다); (Lysine at positions 6 and 10 is a d-structure);

N-아세틸-RGAQFSKTAAK (서열번호 234; BIO-11027); N-acetyl-RGAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 234; BIO-11027);

N-아세틸-RGAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 234; BIO-11028); 및 N-acetyl-RGAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 234; BIO-11028); And

N-아세틸-RAKGE (서열번호 235; BIO-91204).
N-acetyl-RAKGE (SEQ ID NO: 235; BIO-91204).

본 발명의 일 측면에 따르면, 4 내지 24개의 아미노산을 가지고 MANS 펩티드에서 발견되는 아미노산 서열과 동일하거나 대체적으로 동일한 아미노산 서열을 가지는 펩티드들이 유용하다. 이들 펩티드들은 본 명세서에서 MANS-관련 펩티드(MANS-related peptide)로 일컫어지고, 예시적인 MANS-관련 펩티드들이 상기 표 2에 서열번호 1 내지 231, 234, 및 235로 개시되어 있다. 표 2는 또한 대조구로 사용되며, 아미노산 서열의 순서가 본 발명에서의 효과와 관련이 있는 임의적 서열(random sequence, RNS 펩티드 232 (서열번호 232) 뿐만 아니라, 2차 임의적 서열 대조구 펩티드열(second random sequence control peptide) 233 (RNS2; 서열번호 233)을 개시한다. 펩티드 234 및 235 (서열번호 234 및 235)는 각각 펩티드 106 및 219의 N-말단 알기닌-치환 펩티드 상동체(homolog)이다. 알기닌은 예를 들면, 아세틸기 또는 미리스토일기로 아실화될 수 있다.According to an aspect of the present invention, peptides having 4 to 24 amino acids and having an amino acid sequence identical or substantially identical to an amino acid sequence found in MANS peptides are useful. These peptides are referred to herein as MANS-related peptides, and exemplary MANS-related peptides are disclosed in Table 2 above as SEQ ID NOs: 1-231, 234, and 235. Table 2 is also used as a control, and the sequence of the amino acid sequence is a random sequence, RNS peptide 232 (SEQ ID NO: 232), as well as a second random sequence control peptide sequence (second random sequence) related to the effect in the present invention. Sequence control peptide) 233 (RNS2; SEQ ID NO: 233) is disclosed. Peptides 234 and 235 (SEQ ID NOs: 234 and 235) are the N-terminal arginine-substituted peptide homologs of peptides 106 and 219, respectively. Arginine is For example, it may be acylated with an acetyl group or a myristoyl group.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 본 발명에 유용한 펩티드들은 상기 표 2에 개시된 아미노산 서열을 가지는 합성 펩티드들로 구성된 그룹으로부터 선택된다(임의적 서열 펩티드 232 및 233 제외).According to an embodiment of the present invention, peptides useful in the present invention are selected from the group consisting of synthetic peptides having the amino acid sequence disclosed in Table 2 above (except for arbitrary sequence peptides 232 and 233).

본 발명의 다른 측면에 따르면, 본 발명에 유용한 펩티드들은 N-말단 및/또는 C-말단이 화학적으로 변형될 수 있는 표 2에 개시된 아미노산 서열(서열번호 1 내지 231(inclusive), 234, 및 235)의 펩티드들로부터 선택될 수 있다. According to another aspect of the present invention, the peptides useful in the present invention include the amino acid sequences disclosed in Table 2 (SEQ ID NOs: 1 to 231 (inclusive), 234, and 235) in which the N-terminus and/or C-terminus can be chemically modified. ) Can be selected from peptides.

표 2에 개시된 펩티드들에 있어서, 바람직하고도 상호 독립적인 N-말단의 화학적 변형은,In the peptides disclosed in Table 2, preferred and mutually independent N-terminal chemical modifications are,

상기 펩티드의 N-말단 아미노산이The N-terminal amino acid of the peptide is

＊직쇄형(linear), 분지형(branched), 포화 또는 불포화 C2(아세틸)~C24 지방족 카복실산의 아미드, ＊ amides of linear, branched, saturated or unsaturated C 2 (acetyl) to C 24 aliphatic carboxylic acids,

＊트리플루오르아세트산의 아미드, * Amide of trifluoroacetic acid,

＊벤조산의 아미드, 및 * Amide of benzoic acid, and

＊C1~C24 지방족 알킬술폰산의 아미드 형태로 아실화(acylation)되거나; 또는, * C 1 to C 24 acylation in the amide form of aliphatic alkylsulfonic acid; or,

상기 펩티드의 N-말단 아미노산의 N-말단 아민기가The N-terminal amine group of the N-terminal amino acid of the peptide

＊C1~C24 지방족 알킬기, ＊C 1 to C 24 aliphatic alkyl group,

＊직쇄형 2-(C1~C24 지방족 알킬)옥시에틸기, * Straight-chain 2-(C 1 to C 24 aliphatic alkyl) oxyethyl group,

＊오메가-메톡시-폴리(에틸렌옥시)n-에틸기(n은 0 내지 10)로 알킬화(alkylation)되는 것을 포함한다.* Omega-methoxy-poly(ethyleneoxy) n-ethyl group (n is 0 to 10) includes alkylation.

표 2에 개시된 펩티드들에 있어서, 바람직하고도 상호 독립적인 C-말단의 화학적 변형은, C-말단 아미노산이In the peptides disclosed in Table 2, the preferred and mutually independent C-terminal chemical modification is that the C-terminal amino acid is

＊암모니아의 아미드, ＊Amide of ammonia,

＊C1~C24 지방족 알킬아민의 아미드, * Amides of C 1 to C 24 aliphatic alkylamines,

＊히드록실기-치환된 C2~C24 지방족 알킬아민의 아미드, * Amide of hydroxyl group-substituted C 2 to C 24 aliphatic alkylamine,

＊직쇄형 2-(C1~C24 지방족 알킬)옥시에틸아민기의 아미드, 또는 * An amide of a straight-chain 2-(C 1 to C 24 aliphatic alkyl)oxyethylamine group, or

＊오메가-메톡시-폴리(에틸렌옥시)n-에틸아민기(n은 0 내지 10)의 아미드 형태로 상기 펩티드 C-말단 아미노산의 C-말단 카복실산기에 아미드를 형성하는 것을 포함한다.
* It includes the formation of an amide in the C-terminal carboxylic acid group of the peptide C-terminal amino acid in the form of an amide of an omega-methoxy-poly(ethyleneoxy)n-ethylamine group (n is 0 to 10).

또한, 상기 펩티드 C-말단 아미노산의 C-말단 카복실산기는 이하로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 에스테르 형태이다: C1 내지 C24 지방족 알킬 알코올의 에스테르, 2-(오메가-메톡시-폴리(에틸렌옥시)n-에탄올기(n은 0 내지 10)의 에스테르, 및 직쇄형 PEG-아민(상기 PEG의 분자량은 1,000 내지 25,000달톤이다)의 에스테르.
In addition, the C-terminal carboxylic acid group of the peptide C-terminal amino acid is in the form of an ester selected from the group consisting of: C 1 To C 24 Ester of aliphatic alkyl alcohol, ester of 2-(omega-methoxy-poly(ethyleneoxy)n-ethanol group (n is 0 to 10), and straight-chain PEG-amine (the molecular weight of PEG is 1,000 to 25,000 Daltons ) Of esters.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 카복실산기 및 술폰산기와 같은 기(group)의 지방족 부분 및 알코올과 아민기는 최소한 C3의 환(ring)(즉, 최소한 사이클로프로필 환)을 포함할 수 있다.According to an embodiment of the present invention, the aliphatic moiety of a group such as a carboxylic acid group and a sulfonic acid group and the alcohol and amine groups may contain at least a C3 ring (ie, at least a cyclopropyl ring).

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 예를 들면, 아세틸기 또는 미리스토일기에 의해 각각 아세틸-GAQFSKTAAK (N-말단 아세틸 서열번호 106) 및 미리스토일-GAQFSKTAAK (N-말단 미리스토일 서열번호 106)와 같이 N-말단이 변형될 수 있다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 (예를 들면, 암모니아의 아미드에 의해) GAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 106 C-말단 아미드)와 같이 C-말단이 변형될 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 상기 펩티드는 예를 들면 아세틸-GAQFSKTAAK-NH2와 같은 N-아세틸-펩티드-C-아미드(암모니아와)로서 N-말단 및 C-말단이 변형될 수 있다. (N-말단 아세틸 서열번호 106 C-말단 아미드) 및 미리스토일-GAQFSKTAAK-NH2 (N-말단 미리스토일 서열번호 106 C-말단 아미드). 이들 펩티드는 본 발명의 방법에 사용될 수 있으며, 암세포의 전이를 억제하는 그들의 능력을 측정하는데 사용할 수 있다.According to an embodiment of the present invention, the peptide is, for example, acetyl-GAQFSKTAAK (N-terminal acetyl SEQ ID NO: 106) and myristoyl-GAQFSKTAAK (N-terminal myristoyl), respectively, by an acetyl group or a myristoyl group. As shown in SEQ ID NO: 106), the N-terminus may be modified. According to another embodiment of the present invention, the peptide is GAQFSKTAAK-NH 2 (eg, by the amide of ammonia) The C-terminus may be modified as in (SEQ ID NO: 106 C-terminal amide). According to another embodiment of the present invention, the peptide is N-acetyl-peptide-C-amide (with ammonia), such as acetyl-GAQFSKTAAK-NH 2 , which can be modified at the N-terminus and C-terminus. . (N-terminal acetyl SEQ ID NO: 106 C-terminal amide) and myristoyl-GAQFSKTAAK-NH 2 (N-terminal myristoyl SEQ ID NO: 106 C-terminal amide). These peptides can be used in the method of the present invention and can be used to measure their ability to inhibit metastasis of cancer cells.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 본 발명의 용도를 확인할 수 있는 펩티드는 아미노산 서열 AKGE (서열번호 219)을 포함하는 펩티드 그룹(group)으로부터 선택될 수 있다. 이러한 펩티드로서는 서열번호 1 내지 서열번호 54, 서열번호 56 내지 서열번호 64, 서열번호 67 내지 서열번호 75, 서열번호 79 내지 서열번호 87, 서열번호 93 내지 서열번호 100, 서열번호 108 내지 서열번호 114, 서열번호 124 내지 서열번호 129, 서열번호 141 내지 서열번호 145, 서열번호 159 내지 서열번호 162, 서열번호 178 내지 서열번호 180, 서열번호 198, 서열번호 199, 서열번호 219, 및 서열번호 235를 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시태양으로서, 이들 펩티드는 N-말단 아미노기가 미리스토일화 또는 아세틸화된다. According to an embodiment of the present invention, a peptide that can confirm the use of the present invention may be selected from a group of peptides comprising the amino acid sequence AKGE (SEQ ID NO: 219). Such peptides include SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56 to SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 67 to SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 79 to SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 93 to SEQ ID NO: 100, and SEQ ID NO: 108 to SEQ ID NO: 114 , SEQ ID NO: 124 to SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 141 to SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 159 to SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 178 to SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 219, and SEQ ID NO: 235 Include. In a preferred embodiment of the present invention, these peptides are myristoylated or acetylated with the N-terminal amino group.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 본 발명은 암세포를 MANS-관련 펩티드인 이동-조절 펩티드(migration-modulating peptide)의 이동-억제량으로 처리하고, 상기 세포를 상기 펩티드와 함께 반응시켜 이동-억제된 암세포를 형성하는 단계를 포함하는, 유액(fluid) 또는 조직(tissue)에서 주화성 인자(chemotactic agent)의 증가하는 농도구배(increasing concentration gradient)로의 암세포 전이를 완화하는 방법을 개시한다. According to one embodiment of the present invention, the present invention treats cancer cells with a migration-inhibiting amount of a MANS-related peptide, a migration-modulating peptide, and reacts the cells with the peptide to inhibit migration. Disclosed is a method for mitigating the metastasis of cancer cells to an increasing concentration gradient of a chemotactic agent in a fluid or tissue, comprising the step of forming cancer cells.

본 발명의 일 측면에 따르면, 상기 이동-조절 펩티드는 MANS-관련 펩티드로 구성되는 그룹으로부터 선택된다. 본 발명의 다른 측면에 따르면, MANS-관련 펩티드는 아미노산 서열 GAQFSKTAAK (서열번호 106)을 포함한다.According to one aspect of the present invention, the migration-regulating peptide is selected from the group consisting of MANS-related peptides. According to another aspect of the invention, the MANS-related peptide comprises the amino acid sequence GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106).

본 발명의 일 측면에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (서열번호 1) N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAV (서열번호 2); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAA (서열번호 4); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEA (서열번호 7); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGE (서열번호 11); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPG (서열번호 16); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERP (서열번호 22); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAER (서열번호 29); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAE (서열번호 37); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAA (서열번호 46); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAA (서열번호 56); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEA (서열번호 67); N-미리스토일-GAQFSKTAAKGE (서열번호 79); N-미리스토일-GAQFSKTAAKG (서열번호 92); N-미리스토일-GAQFSKTAAK (서열번호 106); N-미리스토일-GAQFSKTAA (서열번호 121); N-미리스토일-GAQFSKTA (서열번호 137); N-미리스토일-GAQFSKT (서열번호 154); N-미리스토일-GAQFSK (서열번호 172), N-미리스토일-GAQFS (서열번호 191), N-미리스토일-GAQF (서열번호 211), N-아세틸-RGAQFSKTAAK (서열번호 234), N-아세틸-RGAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 234), N-아세틸-RAKGE (서열번호 235), 및 이들의 조합으로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
According to an aspect of the present invention, the MANS-related peptide is N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO: 1) N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAV (SEQ ID NO: 2); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAA (SEQ ID NO: 4); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEA (SEQ ID NO: 7); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGE (SEQ ID NO: 11); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPG (SEQ ID NO: 16); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERP (SEQ ID NO: 22); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAER (SEQ ID NO: 29); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAE (SEQ ID NO: 37); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAA (SEQ ID NO: 46); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAA (SEQ ID NO: 56); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEA (SEQ ID NO: 67); N-myristoyl-GAQFSKTAAKGE (SEQ ID NO: 79); N-myristoyl-GAQFSKTAAKG (SEQ ID NO: 92); N-myristoyl-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106); N-myristoyl-GAQFSKTAA (SEQ ID NO: 121); N-myristoyl-GAQFSKTA (SEQ ID NO: 137); N-myristoyl-GAQFSKT (SEQ ID NO: 154); N-myristoyl-GAQFSK (SEQ ID NO: 172), N-myristoyl-GAQFS (SEQ ID NO: 191), N-myristoyl-GAQF (SEQ ID NO: 211), N-acetyl-RGAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 234), N-acetyl-RGAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 234), N-acetyl-RAKGE (SEQ ID NO: 235), and combinations thereof.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 MANS-관련 펩티드는 N-미리스토일-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (서열번호 1; MANS 펩티드); N-미리스토일-GAQFSKTAAK (서열번호 106; BIO-11000); N-아세틸-GAQFSKTAAK (서열번호 106; BIO-11006); N-아세틸-GAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 106; BIO-11026); N-미리스토일-AKGE (서열번호 219; BIO-91200); N-미리스토일-GAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 106; BIO-11002); N-아세틸-GAQFSKTAA (서열번호 121; BIO-10901); N-아세틸-RGAQFSKTAAK (서열번호 234; BIO-11027); N-아세틸-RGAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 234; BIO-11028); 및, N-아세틸-RAKGE (서열번호 235; BIO-91204)로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
According to another aspect of the invention, the MANS-related peptide is N-myristoyl-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO: 1; MANS peptide); N-myristoyl-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106; BIO-11000); N-acetyl-GAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 106; BIO-11006); N-acetyl-GAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 106; BIO-11026); N-myristoyl-AKGE (SEQ ID NO: 219; BIO-91200); N-myristoyl-GAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 106; BIO-11002); N-acetyl-GAQFSKTAA (SEQ ID NO: 121; BIO-10901); N-acetyl-RGAQFSKTAAK (SEQ ID NO: 234; BIO-11027); N-acetyl-RGAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 234; BIO-11028); And, N-acetyl-RAKGE (SEQ ID NO: 235; BIO-91204).

본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명의 펩티드의 전이-억제 용량은 약 0.01mg/kg/day 내지 약 10mg/kg/day의 범위 내에 있다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 상기 펩티드의 전이-억제 용량은 약 0.1mg/kg/day 내지 약 5.0mg/kg/day이다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 상기 펩티드의 전이-억제 용량은 약 0.5mg/kg/day 내지 약 2.5mg/kg/day이다. 예를 들면, 본 발명의 펩티드의 전이-억제 용량은 약 0.01, 약 0.05, 약 0.1, 약 0.5, 약 0.75, 약 1.0, 약 1.25, 약 1.5, 약 1.75, 약 2.0, 약 2.25, 약 2.5, 약 2.75, 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 5.0, 약 6.0, 약 7.0, 약 8.0, 약 9.0, 약 10.0mg/kg/day, 또는 그 이상이다. According to one aspect of the invention, the trans-inhibiting dose of the peptide of the invention is in the range of about 0.01 mg/kg/day to about 10 mg/kg/day. According to another embodiment of the present invention, the trans-inhibiting dose of the peptide is about 0.1 mg/kg/day to about 5.0 mg/kg/day. According to another embodiment of the present invention, the trans-inhibiting dose of the peptide is from about 0.5 mg/kg/day to about 2.5 mg/kg/day. For example, the trans-inhibiting dose of the peptide of the present invention is about 0.01, about 0.05, about 0.1, about 0.5, about 0.75, about 1.0, about 1.25, about 1.5, about 1.75, about 2.0, about 2.25, about 2.5, About 2.75, about 3.0, about 3.5, about 4.0, about 5.0, about 6.0, about 7.0, about 8.0, about 9.0, about 10.0 mg/kg/day, or more.

본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 본 발명은 암세포의 전이를 억제하는 방법을 제공하는데, 이때 투여는 경구(oral), 정맥내(intravenous), 복강내(intraperitoneal), 근육내(intramuscular), 흡입(inhalation) 또는 좌약(suppository) 경로에 의한다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 본 발명은 암세포의 전이를 억제하는 방법을 제공하는데, 이때 투여는 MARCKS-억제 화합물의 액상 용액(liquid solution), 현탁액(suspension) 또는 건조 분말제제(dry powder formulation)의 흡입에 의해 이루어진다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 암을 치료하는 방법이 제공되는데, 이때 MARCKS-억제 화합물은 개체에 MARCKS-억제 화합물의 액상 용액 또는 건조 분말 조성물의 흡입에 의해 투여된다. 예를 들면, 본 발명의 일 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 개체에 MANS-관련 화합물의 액상 용액 또는 현탁액 또는 건조 분말제제의 흡입에 의해 투여된다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, MANS-관련 펩티드는 정맥, 복강, 또는 근육 주사, 또는 경구 또는 좌약 투여에 의해 투여된다. According to another embodiment of the present invention, the present invention provides a method of inhibiting metastasis of cancer cells, wherein administration is oral, intravenous, intraperitoneal, intramuscular, inhalation (inhalation) or suppository (suppository) route. According to another embodiment of the present invention, the present invention provides a method of inhibiting metastasis of cancer cells, wherein administration is a liquid solution, suspension, or dry powder of a MARCKS-inhibiting compound. formulation) by inhalation. According to one embodiment of the present invention, a method of treating cancer is provided, wherein the MARCKS-inhibiting compound is administered to the subject by inhalation of a liquid solution of the MARCKS-inhibiting compound or a dry powder composition. For example, according to one embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is administered to a subject by inhalation of a liquid solution or suspension of a MANS-related compound or a dry powder formulation. According to another embodiment of the present invention, the MANS-related peptide is administered by intravenous, intraperitoneal, or intramuscular injection, or oral or suppository administration.

본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명은 암세포의 전이를 억제하거나, 또는 암을 치료하는 방법을 개시하는데, 이때 MANS-관련 펩티드는 펩티드의 액상 제제의 주사에 의해 투여되고, 상기 액상 제제는 등장성(isotonic)이며, 액상 또는 현탁액 제제는 완충액이고, 주사는 개체의 전신(systemic)에 행해진다. 본 발명의 다른 실시태양에 따르면, 주사는 종양 부위에 가해진다. 본 발명의 또 다른 실시태양에 따르면, 주사는 종양에 가해진다. According to one aspect of the present invention, the present invention discloses a method of inhibiting metastasis of cancer cells or treating cancer, wherein the MANS-related peptide is administered by injection of a liquid formulation of the peptide, and the liquid formulation is Isotonic, liquid or suspension formulations are buffered, and injections are made systemic to the subject. According to another embodiment of the invention, the injection is applied to the tumor site. According to another embodiment of the invention, the injection is applied to the tumor.

본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명은 암세포의 전이를 억제하는 방법을 개시하는데, 이때 암세포는 포유동물에 존재한다. 본 발명의 일 실시태양에 따르면, 본 발명은 암을 치료하는 방법을 개시하는데, 이때 MANS-관련 펩티드는 종양을 가지는 개체에 투여된다. 상기 본 발명의 펩티드는 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용되는 부형제(excipient) 또는 성분(ingredient)으로 제제화되어, 예를 들면 1차 종양(primary tumor)에서의 암세포와 같은 암세포에 투여하는데 유용한 약학 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 용액(solution) 또는 액, 특히 완충액, 바람직하게는 인산 완충액 중의 현탁액(suspension)일 수 있으며, 투여는 주사(injection) 또는 흡입(inhalation)이 바람직하다. 등장액(isotonic solution) 또는 현탁액(suspension)이 바람직하다.
According to one aspect of the present invention, the present invention discloses a method of inhibiting metastasis of cancer cells, wherein the cancer cells are present in a mammal. According to one embodiment of the invention, the invention discloses a method of treating cancer, wherein the MANS-related peptide is administered to a subject having a tumor. The peptide of the present invention is formulated as one or more pharmaceutically acceptable excipients or ingredients, and is useful for administration to cancer cells such as cancer cells in a primary tumor. Provides. Such a composition may be a solution or a solution, in particular a suspension in a buffer, preferably a phosphate buffer, and administration is preferably by injection or inhalation. An isotonic solution or suspension is preferred.

본 발명의 항체, 폴리뉴클레오티드, 핵산 분자, 또는 펩티드의 조성물의 투여는, 1차 종양부위(primary tumor region)에 주사(예를 들면, 1차 종양에 직접 주사하거나, 또는 1차 종양의 인접부위에 주사하거나, 혹은 1차 종양을 이송하는 혈관에 주사)하는 경우, 개과(canine), 고양이과(feline), 및 사람(human) 환자와 같은 포유동물에의 투여가 효과적이고, 주사는 일정한 간격(예를 들면, 매 1시간 내지 72시간)으로, 선택적으로 하나 또는 그 이상의 추가적인 화학요법 약물(chemotherapy drug)과 조합하거나 별도로 행해지는 것을 예상할 수 있다. Administration of the composition of the antibody, polynucleotide, nucleic acid molecule, or peptide of the present invention can be performed by injection into a primary tumor region (e.g., direct injection into a primary tumor, or a region adjacent to the primary tumor). In the case of injection into a blood vessel carrying the primary tumor), administration to mammals such as canine, feline, and human patients is effective, and the injection is performed at regular intervals ( For example, every 1 hour to 72 hours), optionally in combination with one or more additional chemotherapy drugs or can be expected to be done separately.

펩티드 투여 전, 도중 또는 후에, MARCKS-억제 항체, 폴리뉴클레오티드, 핵산분자, 또는 펩티드 제제 외에, 화학요법 약물 및 암 특이적 항체를 포함하는 하나 또는 그 이상의 추가적인 치료제가 투여될 수 있다. 예시적인 화학요법 제제는, 이에 한정되는 것은 아니나, 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 다카바진(dacarbazine), 테모졸로마이드(temozolomide), 젬시타빈(gemcitabine), 카페시타빈(capecitabine), 클라드리빈(cladribine), 클로파라빈(clofarabine), 시타라빈(cytarabine), 플록스유리딘(floxuridine), 플루다라빈(fludarabine), 히드록시유레아(hydroxyurea), 메토트렉세이트(methotrexate), 페메트렉세드(pemetrexed), 펜토스타틴(pentostatin), 티오구아니딘(thioguanadine), 다우노루비신(daunorubicin), 독스루비신(doxurubicin), 에피루비신(epirubicin), 이다루비신(idarubicin), 토포테칸(topotecan), 이리노테칸(irinotecan), 에토포시드(etoposide), 에니포시드(eniposide), 콜히친(colchicine), 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 비노렐빈(vinorelbine), 파클리탁셀(paclitaxel), 및 도세탁셀(docetaxel)을 포함한다. 또한, 예시적인 암-특이적(cancer-specific) 약물 또는 항체는, 이에 한정되는 것은 아니나, 아파티닙(Afatinib), 알데스루킨(Aldesleukin), 알렘투주맙(Alemtuzumab), 악시티닙(Axitinib), 벨리무맙(Belimumab), 베바시주맙(Bevacizumab), 보테조밉(Bortezomib), 보수티닙(Bosutinib), 브렌툭시맙 베도틴(Brentuximab vedotin), 카보자티닙(Cabozantinib), 카나키누맙(Canakinumab), 카필조밉(Carfilzomib), 세툭시맙(Cetuximab), 크리조티닙(Crizotinib), 다브라페닙(Dabrafenib), 다사티닙(Dasatinib), 네노수맙(Denosumab), 엘로티닙(Erlotinib), 에벨로무스(Everolimus), 제피티닙(Gefitinib), 이부리투모맙 티욱세탄(Ibritumomab tiuxetan), 이브루티닙(Ibrutinib), 이마티닙(Imatinib), 이필리무맙(Ipilimumab), 라파티닙(Lapatinib), 닐로티닙(Nilotinib), 오비누투주맙(Obinutuzumab), 오파투무맙(Ofatumumab), 파니투무밥(Panitumumab), 파조파닙(Pazopanib), 퍼두주맙(Pertuzumab), 포나티닙(Ponatinib), 레고라페닙(Regorafenib), 리툭시맙(Rituximab), 로미뎁신(Romidepsin), 룩소리티닙(Ruxolitinib), 시푸에셀-T(Sipuleucel-T), 소라페닙(Sorafenib), 템시로리무스(Temsirolimus), 토실리주맙(Tocilizumab), 토파시티닙(Tofacitinib), 토시투모맙(Tositumomab), 트라메티닙(Trametinib), 트라쯔맙(Trastuzumab), 반데타닙(Vandetanib), 베무라페닙(Vemurafenib), 비스모데집(Vismodegib), 비리노스탓(Vorinostat), 및 지브-아플리버셉트(Ziv-aflibercept)를 포함한다.Before, during or after peptide administration, In addition to the MARCKS-inhibiting antibody, polynucleotide, nucleic acid molecule, or peptide preparation, one or more additional therapeutic agents may be administered, including chemotherapy drugs and cancer specific antibodies. Exemplary chemotherapeutic agents include, but are not limited to, carboplatin, cisplatin, oxaliplatin, cyclophosphamide, dacarbazine, temozolomide. , Gemcitabine, capecitabine, cladribine, clofarabine, cytarabine, floxuridine, fludarabine, hydroxy Urea, methotrexate, pemetrexed, pentostatin, thioguanadine, daunorubicin, doxurubicin, epirubicin, epirubicin, Idarubicin, topotecan, irinotecan, etoposide, eniposide, colchicine, vincristine, vinblastine, Vinorelbine, paclitaxel, and docetaxel. In addition, exemplary cancer-specific drugs or antibodies are, but are not limited to, afatinib, aldesleukin, alemtuzumab, and axitinib ), belimumab, bevacizumab, botezomib, bosutinib, brentuximab vedotin, cabozantinib, canakinumab Canakinumab), Carfilzomib, Cetuximab, Crizotinib, Dabrafenib, Dasatinib, Denosumab, Erlotinib , Everolimus, Gefitinib, iburitumomab tiuxetan, Ibrutinib, Imatinib, Ipilimumab, Lapatinib, Nilotinib, Obinutuzumab, Ofatumumab, Panitumumab, Pazopanib, Perduzumab, Ponatinib, Regorafenib, Rituximab, Romidepsin, Ruxolitinib, Sipuleucel-T, Sorafenib, Temsirolimus, Tocilizumab, Tofacitinib, Tositumomab, Trametinib, Trastuzumab, Vandetanib, Vemurafenib, Bismodezip (Vismodegib), Virinostat, and Ziv-aflibercept (Ziv-af libercept).

투여는 예를 들면, 암 환자의 기도를 통한 흡입에 의해 이루어지며, 암세포를 가지는 조직을 코팅하는 액체 또는 건조 분말의 에어로졸(aerosol) 또는 스프레이(spray)로서, 혹은 전이 이전의 암세포를 가지는 유액 또는 조직에 가해지거나 암세포와 접촉하는 주사액제(liquid for injection)로서 투여된다. 인지질 (phospholipid)과 같은 유연한(mild) 표면 활성제는 MANS-관련 펩티드의 가용화(solubilization) 및 경막 흡수(transmembrane uptake)를 용이하게 한다. 투여는 또한 예를 들면, 암세포를 가지는 조직에 뿌려질 수 있는 건조 분말, 바람직하게는 나노입자 또는 마이크로입자 분말에 의해 행해질 수도 있다. 펩티드 제제에 마이크로입자 탄수화물 담체(carbohydrate carrier)를 가하면, 나노입자 펩티드가 기도 및 상피 조직에 흡입되는 것을 용이하게 한다.Administration is performed, for example, by inhalation through the airway of a cancer patient, as a liquid or dry powder aerosol or spray coating a tissue with cancer cells, or as an emulsion with cancer cells before metastasis or It is administered as a liquid for injection applied to tissues or in contact with cancer cells. Mild surface active agents such as phospholipids facilitate solubilization and transmembrane uptake of MANS-related peptides. Administration may also be effected by dry powder, preferably nanoparticles or microparticle powders, which can be sprayed onto tissues with, for example, cancer cells. The addition of a microparticle carbohydrate carrier to the peptide formulation facilitates the inhalation of the nanoparticle peptide into the airways and epithelial tissues.

MARCKS-억제 항체, 폴리뉴클레오티드, 핵산분자, 또는 펩티드 조성물의 바람직한 사용방법은 전이되기 이전의 암세포를 포함하는 종양의 조직 또는 그 부근에 주사하는 것을 포함한다. A preferred method of use of the MARCKS-inhibiting antibody, polynucleotide, nucleic acid molecule, or peptide composition involves injection into or near the tissue of a tumor containing cancer cells prior to metastasis.

본 명세서에 사용된 "효과량(effective amount)" 또는 "치료적 유효량 (therapeutically effective amount)"은 원하는 효과(즉 암세포의 전이 및/또는 증식의 억제, 및/또는 개체의 암을 억제, 치료 또는 예방)를 얻기 위하여, 본 발명을 실시하는데 사용되는 조성물의 독성을 나타내지 않으면서(nontoxic) 충분한(sufficient) 양을 일컫는다. 따라서, 본 발명의 방법에 의한 활성은 의학적 치료 및/또는 예방 둘 다를 포함하며, 예를 들면 암의 증세, 증상 또는 원인의 감쇄 또는 완화를 포함한다. 본 발명의 화합물의 치료적 유효량은 생리적으로 허용되는 부형제 조성물로서 투여되었을 때, 효과적인 세포간 농도(intracellular concentration) 및 조직에서의 국부 농도(local concentration)를 얻기에 충분한 양을 의미한다.
As used herein, "effective amount" or "therapeutically effective amount" refers to a desired effect (ie, inhibition of metastasis and/or proliferation of cancer cells, and/or inhibiting, treating, or Prevention), it refers to a nontoxic and sufficient amount of the composition used to practice the present invention. Thus, activity by the methods of the present invention includes both medical treatment and/or prevention, for example attenuation or amelioration of the symptoms, symptoms or causes of cancer. A therapeutically effective amount of a compound of the present invention refers to an amount sufficient to obtain an effective intracellular concentration and a local concentration in a tissue when administered as a physiologically acceptable excipient composition.

본 명세서에서 "암(cancer)"이라 함은 일반적으로 조절되지 않은 세포성장(unregulated cell growth)으로 특징지어지는 포유동물에서의 생리적 조건을 의미하거나 기술한다. 암의 예로서는, 이에 한정되는 것은 아니나, 암종(carcinoma), 림프종(lymphoma), 아세포종(blastoma), 육종(sarcoma)(지방 육종, 골 육종, 혈관 육종, 내피 육종(endotheliosarcoma), 림프관 육종(lymphangiosarcoma), 림프관 내피 육종(lymphangioendotheliosarcoma), 평활근 육종(leiomyosarcoma), 횡문근 육종(rhabdomyosarcoma), 섬유육종(fibrosarcoma), 점액 육종, 연골 육종을 포함), 뼈파괴세포종, 신경내분비종, 중피종, 척색종, 활액막종, 신경초종(schwanoma), 뇌수막종, 선암종, 흑색종, 백혈병 또는 림프종을 포함한다. 이러한 암의 보다 구체적인 예로서는, 편평세포 암(squamous cell cancer, 예를 들어, 상피의 편평세포 암), 소형 세포 폐암, 비-소형 세포 폐암, 폐의 선암과 편평암, 소세포 폐암종을 포함하는 폐암(lung cancer), 복막암(cancer of peritoneum), 간세포 암(hepatocellular cancer), 위장암을 포함하는 위암, 췌장암, 교아종, 자궁 경부암, 난소암, 간암(liver cancer), 방광암, 간세포암(hepatoma), 유방암, 결장암(colon cancer), 직장암, 대장암(colorectal cancer), 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간암종(hepatic carcinoma), 항문암, 음경암종, 고환암, 식도암(esophageal cancer), 담도 종양, 위잉 종양(Ewing's tumor), 기저 세포암, 선암, 땀샘암, 피지선암종, 갑상선 유두암(papillary carcinoma), 유두 선암, 낭포 선암, 속질 암종, 기관지 원성암종, 신장 세포암, 담관암, 융모암(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 태생기암(embryonal carcinoma), 태생성 신혼합 종양(Wilms' tumor), 고환 종양, 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경 교종(glioma), 성상 세포종, 수아 종, 두개 인두종(craniopharyngioma), 상의세포종, 송과체종, 혈관모 세포종, 청신경종(acoustic neuroma), 핍지교종(oligodendroglioma), 뇌수막종(meningioma), 흑색종, 신경아 세포종, 망막 아종, 백혈병, 림프종, 다중 골수종, Waldenstrom의 마크로글로불린 혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 골수이형성 증후군(myelodysplastic disease), 중쇄병(heavy chain disease), 신경 내분비계 종양, 신경초종, 및 기타 암종, 머리와 목의 암, 성숙 AML(AML with maturation), 미분화 급성 골수성 백혈병(AML without differentiation)을 포함하는 급성 골수성 백혈병(acute myelogenous leukemias)과 같은 골수 종양(myeloid neoplasias), 급성 전골 수구성 백혈병, 급성 골수 단구성 백혈병, 급성 단구성 백혈병(acute monocytic leukemias), 골수형성이상 증후군(myelodysplastic syndromes), 만성 골수성 백혈병을 포함하는 만성 골수 증식 질환(chronic myeloproliferative disorder), 중추 신경계 종양, 예를 들어, 뇌 종양(신경 교종, 신경아 세포종, 성상 세포종, 수아 종, 뇌질 피복 세포증, 및 망막아세포종), 고형 암(비강 인두암, 기저 세포암, 췌장암, 담즙관, 카포시 육종, 고환암, 자궁(uterine), 또는 질 또는 자궁경부암(vaginal or cervical cancer), 난소암, 일차성 간암(primary liver cancer) 또는 자궁 내막암(endometrial cancer), 혈관계 종양(혈관 육종과 혈관주위 세포종), 혈액 종양형성(hematologic neoplasia) 및 종양-유사 조건, 예를 들면 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma)(버킷의 림프종(Burkitt's lymphoma), 작은 림프구 림프종/만성병 림프구 백혈병, 균상식 육종(mycosis fungoides), 맨틀 세포 림프종, 여포성 림프종, 큰 확산 B-세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma), 갓번짐 림프종(marginal zone lymphoma), 모양 세포성 백혈병(hairy cell leukemia) 및 림프형질세포 림프종(lymphoplasmacytic leukemia)), B-세포 급성 림프구성 백혈병/림프종 포함하는 림프구 전구체 세포의 종양, 및 T-세포 급성 림프구성 백혈병/림프종, 흉선종(thymoma), 말초 T-세포 백혈병, 성인 T-세포 백혈병/T-cell 림프종과 큰 과립 림프성 백혈병을 포함하는 성숙 T 및 NK 세포의 종양, 골용해성 골암(osteolytic bone cancer), 및 골전이(bone metastasis)를 포함한다.
As used herein, "cancer" refers to or describes a physiological condition in a mammal that is generally characterized by unregulated cell growth. Examples of cancer include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma (liposarcoma, osteosarcoma, hemangiosarcoma, endotheliosarcoma, lymphangiosarcoma). , Lymphangioendotheliosarcoma, leiomyosarcoma, rhabdomyosarcoma, fibrosarcoma, myxosarcoma, including chondrosarcoma), bone destructive cell tumor, neuroendocrine tumor, mesothelioma, chordoma, synovial , Schwanoma, meningioma, adenocarcinoma, melanoma, leukemia or lymphoma. More specific examples of such cancer include squamous cell cancer (e.g., squamous cell carcinoma of the epithelium), small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, adenocarcinoma and squamous cancer of the lung, lung cancer including small cell lung carcinoma. (lung cancer), cancer of peritoneum, hepatocellular cancer, gastric cancer including gastrointestinal cancer, pancreatic cancer, glioblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma ), breast cancer, colon cancer, rectal cancer, colorectal cancer, endometrial or uterine cancer, salivary gland cancer, kidney cancer, prostate cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, hepatic carcinoma, anal cancer, penile carcinoma , Testicular cancer, esophageal cancer, biliary tract tumor, Ewing's tumor, basal cell carcinoma, adenocarcinoma, sweat gland cancer, sebaceous adenocarcinoma, papillary carcinoma, papillary adenocarcinoma, cystic adenocarcinoma, pulmonary carcinoma, bronchogenic carcinoma , Renal cell carcinoma, bile duct carcinoma, choriocarcinoma, seminoma, embryonic carcinoma, viviparous hybrid tumor (Wilms' tumor), testicular tumor, lung carcinoma, bladder carcinoma, epithelial carcinoma, nerve Glioma, astrocytoma, glioblastoma, craniopharyngioma, epistemoma, pineal body tumor, hemangioblastoma, acoustic neuroma, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, Retinoblastoma, leukemia, lymphoma, multiple myeloma, Waldenstrom's macroglobulinemia, myelodysplastic disease, heavy chain disease, neuroendocrine tumors, schwannomas, and other carcinomas, Myeloid neoplasias, such as acute myelogenous leukemias, including head and neck cancer, mature AML (AML with maturation), undifferentiated acute myelogenous leukemia, acute promyelocytic leukemia, acute Myeloid monocytic leukemia, acute monocytic leukemias, myelodysplastic syndromes, chronic myeloproliferative disorders including chronic myeloid leukemia, central nervous system tumors, e.g. brain tumors (Glioma, neuroblastoma, astrocytoma, glioblastoma, cerebral corpuscleocytosis, and retinoblastoma), solid cancer (nasal pharyngeal cancer, basal cell carcinoma, pancreatic cancer, bile duct, Kaposi's sarcoma, testicular cancer, uterine, or vaginal) Or cervical cancer (vaginal or cervical cancer), ovarian cancer, primary liver cancer (primary liver cancer) or endometrial cancer (endometrial cancer), vascular tumors (angiosarcoma and perangiocytoma), hematologic neoplasia and tumors -Similar conditions, such as Hodgkin's lymphoma, non-Hodgkin's lymphoma (Burkitt's lymphoma, small lymphocyte lymphoma/chronic lymphocytic leukemia, mycosis fungoides) , Mantle cell lymphoma, follicular lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma, marginal zone lymphoma, hairy cell leukemia and lymphoplasmacytic leukemia )), lymphocyte precursors including B-cell acute lymphocytic leukemia/lymphoma Tumors of cells, and mature T and NK cells, including T-cell acute lymphocytic leukemia/lymphoma, thymoma, peripheral T-cell leukemia, adult T-cell leukemia/T-cell lymphoma and large granular lymphocytic leukemia. Tumors, osteolytic bone cancer, and bone metastasis.

도 1은 12시간의 이동시간(migration time) 이후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분(cell count field)를 나타낸다.
도 2의 좌측 사진은 50umolar MANS 펩티드의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은 100umolar MANS 펩티드의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.
도 3의 좌측 사진은 50umolar RNS 펩티드의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은 100umolar RNS 펩티드의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.
도 4의 좌측 사진은 50umolar MANS-관련 펩티드 BIO-11002의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은 100umolar MANS-관련 펩티드 BIO-11002의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.
도 5의 좌측 사진은 50umolar의 MANS-관련 펩티드 BIO-10901의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은 100umolar MANS-관련 펩티드 BIO-10901의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.
도 6의 좌측 사진은 50umolar MANS-관련 펩티드 BIO-91200의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은 100umolar MANS-관련 펩티드 BIO-91200의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.
도 7의 좌측은 50umolar의 MANS 펩티드, BIO11002, BIO10901, BIO91200, 또는 RNS 펩티드를 전처리하거나 펩티드를 처리하지 않은(대조구) 이후 얻어지는 이동된 세포수를 나타낸 그래프이고, 우측은 100umolar의 MANS 펩티드, BIO11002, BIO10901, BIO91200, 또는 RNS 펩티드를 전처리하거나 펩티드를 처리하지 않은(대조구) 이후 얻어지는 이동된 세포수를 나타낸 그래프이다.
도 8의 좌측은 본 발명의 펩티드를 50umolar 전처리하고 프로토콜에 따른 12시간의 처리 이후, 유주지수(migration index)가 더 높을수록 덜 이동하는 공격적(aggressive) 사람 NSCLC 세포주의 유주지수를 나타낸 그래프이다.
도 8의 우측은 본 발명의 펩티드를 100umolar 전처리하고 프로토콜에 따른 12시간의 처리 이후, 유주지수가 더 높을수록 덜 이동하는 공격적인 사람 NSCLC 세포주의 유주지수를 나타낸 그래프이다.
도 9는 50umolar의 MANS, RNS, BIO-11000, 또는 BIO-11006를 처리하거나 펩티드를 처리하지 않은(대조구) 공격적인 사람 NSCLC 세포주를 이용한 실험에서의 세포수(좌측 패널) 및 유주지수(migration index number, 우측 패널)를 각각 나타낸 그래프이다.
도 10은 100umolar의 MANS, RNS, BIO-11000, 또는 BIO-11006를 처리하거나 펩티드를 처리하지 않은(대조구) 공격적인 사람 NSCLC 세포주를 이용한 실험에서의 세포수(좌측 패널) 및 유주지수(우측 패널)를 각각 나타낸 그래프이다.
도 11은 A549 세포에 펩티드를 처리하지 않거나, 시험 펩티드(MANS, RNS, BIO-11006, BIO-11000, BIO-91200, 또는 BIO-10901)를 10umolar(위 좌측 패널), 25umolar(위 우측 패널), 또는 50umolar(아래 패널) 전처리하고 12시간 경과한 후의 이동된 세포수를 나타낸다.
도 12는 BIO-11006, BIO-11006(100uM in PBS)를 암세포 접종후 3일째부터 시작하여 22일 동안 매일 1회씩 복강주사(50㎕) 또는 흡입(30분, Nebulizer Delivery System, Aeroneb Lab.) 처리한 동물에서, 좌측 폐, 우측 폐, 심장, 및 횡경막(diaphragm)에서의 마우스 당 평균 종양수를 나타낸다.
도 13은 Nebulizer Delivery System(Aeroneb Lab.)을 이용한 흡입에 의하여 사람 선암(adenocarcinoma) 세포(PC-9)의 주사에 대하여 15일째 또는 4일째부터 하루 1회씩 30일 넘도록 BIO-11006(100uM in PBS)를 처리한 마우스에서 좌측 폐, 우측 폐, 심장, 및 횡경막(diaphragm)에서의 마우스 당 평균 종양수를 나타낸다.
도 14는 Nebulizer Delivery System(Aeroneb Lab.)을 이용한 30일이 넘는 흡입(inhalation)에 의해 PC-9 세포의 주사에 대한 15일째 또는 4일째부터 하루 1회씩 BIO-11006(100uM in PBS)를 처리한 마우스에서 전체 종양수를 나타낸다.
도 15는 매일 담체(대조구), A549 암세포 주사에 대하여 -1일 또는 +3일 에어로졸화 BIO-11006, A549 암세포 주사에 대하여 -1일 또는 +3일 에어로졸화 MANS로 처리한 마우스에서 발견되는 전이결절(metastatic nodule)의 수를 나타낸다. 에어로졸화 펩티드(100uM in PBS)는 Nebulizer Delivery System(Aeroneb Lab.)을 이용한 흡입에 의하여 투여하였다. *, p<0.05, 대조구와 대비하여 통계학적으로 유의미; a, 실험구 사이에 통계학적으로 무의미.
도 16은 PC9 세포에 100nM MARCKS siRNA 또는 대조구 siRNA를 투여한 이후 MARCKS 단백질의 수준을 나타낸다.
도 17은 A549 세포에 100nM MARCKS siRNA 또는 대조구 siRNA를 투여한 이후 MARCKS 단백질의 수준을 나타낸다.
도 18은 100nM MARCKS siRNA 또는 대조구 siRNA를 투여한 후 PC9 암세포의 이동을 나타낸다.
도 19는 100nM MARCKS siRNA 또는 대조구 siRNA를 투여한 후 A549 암세포의 이동을 나타낸다.
도 20은 PC9 세포에서의 50nM 음성 대조구(HiPerfect vehicle; A 레인) 또는 50nM miR21 억제제(B 레인)를 처리한 이후 웨스턴 블롯에 의한 MARCKS의 발현을 나타낸다.
도 21은 miR21 억제(50nM 또는 100nM miR21 억제제) 또는 miR21 활성화(50nM 또는 100nM miR21 유사체)한 이후 PC9 암세포의 이동을 나타낸다.1 shows a cell count field of a negative control group after a migration time of 12 hours.
The left photo of FIG. 2 shows the counted part of the cells of the negative control obtained after pretreatment of 50umolar MANS peptide and the passage of 12 hours migration time, and the right photo shows the negative control obtained after pretreatment of 100umolar MANS peptide and the migration time of 12 hours. Shows the counted part of the cells.
The left photo of FIG. 3 shows the counted part of the cells of the negative control obtained after pretreatment of 50umolar RNS peptide and 12 hours of migration time, and the right photo shows the negative control obtained after pretreatment of 100umolar RNS peptide and 12 hours of migration time. Shows the counted part of the cells.
The photo on the left of FIG. 4 shows the part of counting cells of the negative control obtained after pretreatment of 50umolar MANS-related peptide BIO-11002 and the passage of 12 hours, and the right photo is pretreatment and pretreatment of 100umolar MANS-related peptide BIO-11002 It shows the part of counting the cells of the negative control obtained after the passage of 12 hours.
The photo on the left of FIG. 5 shows a part of counting cells of the negative control obtained after pretreatment of 50 umolar MANS-related peptide BIO-10901 and 12 hours of migration time, and the right photo is pretreatment of 100 umolar MANS-related peptide BIO-10901 And a portion of the cells of the negative control obtained after the passage of 12 hours was counted.
The left photo of FIG. 6 shows a part of counting cells of the negative control obtained after pretreatment of 50umolar MANS-related peptide BIO-91200 and the passage of 12 hours, and the right photo shows pretreatment of 100umolar MANS-related peptide BIO-91200 and It shows the part of counting the cells of the negative control obtained after the passage of 12 hours.
The left side of FIG. 7 is a graph showing the number of transferred cells obtained after pretreatment with 50 umolar of MANS peptide, BIO11002, BIO10901, BIO91200, or RNS peptide or without peptide treatment (control), and the right is a graph showing the number of transferred cells obtained after 100 umolar of MANS peptide, BIO11002, It is a graph showing the number of migrated cells obtained after pretreatment with BIO10901, BIO91200, or RNS peptide or without peptide treatment (control).
The left side of FIG. 8 is a graph showing the migration index of an aggressive human NSCLC cell line that moves less as the migration index is higher after 50umolar pretreatment of the peptide of the present invention and 12 hours of treatment according to the protocol.
The right side of FIG. 8 is a graph showing the migration index of an aggressive human NSCLC cell line that moves less as the migration index is higher after the peptide of the present invention is pretreated with 100 umolar and treated for 12 hours according to the protocol.
Figure 9 shows the number of cells (left panel) and migration index number in an experiment using an aggressive human NSCLC cell line treated with 50umolar of MANS, RNS, BIO-11000, or BIO-11006 or without peptide (control). , Right panel) respectively.
Figure 10 is 100umolar of MANS, RNS, BIO-11000, or BIO-11006 treated or not treated with a peptide (control) in an experiment using an aggressive human NSCLC cell line (left panel) and a migration index (right panel) It is a graph showing each.
Figure 11 shows that A549 cells are not treated with peptides, or test peptides (MANS, RNS, BIO-11006, BIO-11000, BIO-91200, or BIO-10901) are 10 umolar (top left panel), 25 umolar (top right panel). , Or 50umolar (bottom panel) shows the number of migrated cells after 12 hours of pretreatment.
FIG. 12 is an intraperitoneal injection (50 µl) or inhalation (30 minutes, Nebulizer Delivery System, Aeroneb Lab.) once daily for 22 days starting from the 3rd day after inoculation of BIO-11006 and BIO-11006 (100uM in PBS) cancer cells. In treated animals, the average number of tumors per mouse in the left lung, right lung, heart, and diaphragm is shown.
13 is BIO-11006 (100uM in PBS) once a day for more than 30 days from the 15th or 4th day for injection of human adenocarcinoma cells (PC-9) by inhalation using the Nebulizer Delivery System (Aeroneb Lab.) ) Shows the average number of tumors per mouse in the left lung, right lung, heart, and diaphragm in the treated mice.
14 is a treatment with BIO-11006 (100uM in PBS) once a day from the 15th or 4th day for injection of PC-9 cells by inhalation for more than 30 days using the Nebulizer Delivery System (Aeroneb Lab.) Shows the total number of tumors in one mouse.
Fig. 15 shows metastasis found in mice treated with daily carrier (control), -1 or +3 day aerosolized BIO-11006 for A549 cancer cell injection, and -1 or +3 day aerosolized MANS for A549 cancer cell injection. It represents the number of metastatic nodules. The aerosolized peptide (100uM in PBS) was administered by inhalation using a Nebulizer Delivery System (Aeroneb Lab.). *, p<0.05, statistically significant compared to the control; a, statistically meaningless between the experimental plots.
16 shows the level of MARCKS protein after administration of 100nM MARCKS siRNA or control siRNA to PC9 cells.
17 shows the level of MARCKS protein after administration of 100nM MARCKS siRNA or control siRNA to A549 cells.
18 shows the migration of PC9 cancer cells after administration of 100 nM MARCKS siRNA or control siRNA.
Figure 19 shows the migration of A549 cancer cells after administration of 100nM MARCKS siRNA or control siRNA.
Figure 20 shows the expression of MARCKS by Western blot after treatment with 50nM negative control (HiPerfect vehicle; lane A) or 50nM miR21 inhibitor (lane B) in PC9 cells.
Figure 21 shows the migration of PC9 cancer cells after miR21 inhibition (50nM or 100nM miR21 inhibitor) or miR21 activation (50nM or 100nM miR21 analogue).

이상에서 본 발명을 기술하였지만, 이하에서는 동일한 내용을 본 명세서에 오직 설명을 목적으로 포함하고, 본 발명을 제한하지 않는 실시예를 참조하여 설명할 것이다.
Although the present invention has been described above, the same content will be described below with reference to examples that include the same content in the present specification for purposes of explanation only, and do not limit the present invention.

암 세포주의 이동에 대한 펩티드의 효과Effect of peptides on the migration of cancer cell lines

이동분석 프로토콜Movement Analysis Protocol

사람 폐의 선암(adenocarcinoma)으로부터 유래된 공격적 전이세포주인 CL1-5 세포를 10% FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 37℃, 95% 산소/5% CO2의 조건으로 사용하기 이전까지 배양하였다. 이동분석을 위해서는 트랜스웰 플레이트(24-웰, 8-㎛ 공경(pore size); Costar, Cambridge, MA, USA)를 사용하였다. 트랜스웰 플레이트의 하부 챔버를 600㎕의 10% FBS를 함유하는 기본배지로 채웠다. 세포(1 x 105)를 50 또는 100uM의 지정된 펩티드로 30분 동안 전처리하고, 100㎕의 1% BSA를 함유하는 기본배지에 현탁시켜 상부 챔버에 가한 다음, 37℃에서 12시간 동안 배양하였다. 여과지의 상부 표면에 있는 세포를 면봉으로 제거하고, 여과지의 하부 표면으로 이동한 세포를 세정하고, 고정하며, 헤마톡실린으로 염색하고, 현미경 하에서 계수하였다. 이동의 백분율 변화를 여과지의 하부 표면으로 이동한 세포수를 계수하여 측정하였다. 1개의 막 당 최소한 3개의 분리된 부분이 현미경으로 관찰되었다(n=4). CL1-5 cells, an aggressive metastatic cell line derived from adenocarcinoma of human lung, were cultured in RPMI 1640 medium containing 10% FBS at 37° C. and 95% oxygen/5% CO 2 before use. For the migration analysis, a transwell plate (24-well, 8-µm pore size; Costar, Cambridge, MA, USA) was used. The lower chamber of the transwell plate was filled with 600 μl of basic medium containing 10% FBS. Cells (1×10 5 ) were pretreated with 50 or 100 μM of the designated peptide for 30 minutes, suspended in a basal medium containing 100 μl of 1% BSA, added to the upper chamber, and incubated at 37° C. for 12 hours. The cells on the upper surface of the filter paper were removed with a cotton swab, and the cells that migrated to the lower surface of the filter paper were washed, fixed, stained with hematoxylin, and counted under a microscope. The percentage change in migration was measured by counting the number of cells that migrated to the lower surface of the filter paper. At least three separate portions per membrane were observed under the microscope (n=4).

선택적 트랜스웰법Selective Transwell Method

초대 CL1-5 세포(primary CL1-5 cell)는 사람 폐의 선암으로부터 유래되었다. 이동분석을 위하여 24-웰, 8-㎛ 공경(pore size)을 가지는 트랜스웰 플레이트(Costar, Cambridge, MA, USA)를 사용하였다. 트랜스웰 플레이트의 하부 챔버를 600㎕의 10% FBS를 함유하는 기본배지로 채웠다. 1-2 x 105 세포를 100㎕의 1% BSA를 함유하는 기본배지에 현탁시켰다. 암세포를 전배양한 후, 원하는 농도의 시험 펩티드를 상부 챔버에 직접 가하였다. 그런 다음, 플레이트를 37℃에서 12시간 동안 배양하였다. 여과지의 상부 표면에 있는 세포를 면봉으로 제거하였다. 여과지의 하부 표면으로 이동한 세포를 세정하고, 고정하며, 헤마톡실린으로 염색하고, 현미경 하에서 계수하였다. 1개의 막 당 최소한 5개의 분리된 부분이 현미경으로 관찰되었다(n=3). 이동 백분율 변화를 여과지의 하부 표면으로 이동한 세포수를 계수하여 측정하였다. Primary CL1-5 cells were derived from adenocarcinoma of the human lung. For migration analysis, a 24-well, 8-µm pore size transwell plate (Costar, Cambridge, MA, USA) was used. The lower chamber of the transwell plate was filled with 600 μl of basic medium containing 10% FBS. 1-2 x 10 5 cells were suspended in basal medium containing 100 μl of 1% BSA. After pre-culture of cancer cells, the desired concentration of test peptide was added directly to the upper chamber. Then, the plate was incubated at 37° C. for 12 hours. The cells on the upper surface of the filter paper were removed with a cotton swab. Cells that migrated to the lower surface of the filter paper were washed, fixed, stained with hematoxylin, and counted under a microscope. At least 5 separated parts per membrane were observed under the microscope (n=3). The change in migration percentage was measured by counting the number of cells that migrated to the lower surface of the filter paper.

"수(count)"는 하부 챔버로 이동하고 40배의 광학 현미경에 의해 계수된 세포의 실제 개수를 의미하고, 매 처리당 10개의 임의 선택된 부분(field)에서 하부 표면으로 이동한 세포의 평균 개수로 나타낸다."Count" refers to the actual number of cells that have moved to the lower chamber and counted by a 40-fold optical microscope, and the average number of cells that have migrated from 10 randomly selected fields per treatment to the lower surface Represented by

"지수(index)"는 펩티드 존재하에 이동한 세포의 개수를 임의로 이동한 세포(대조구)의 개수로 나눈 것이다. 지수(index) = 대조구 세포수/ 처리한 세포수. 이러한 계산은 MANS-관련 펩티드로 30분 전처리하여 차단된 세포의 이동 정도를 반영한다.The "index" is the number of cells that have migrated in the presence of the peptide divided by the number of cells that have moved randomly (control). Index = number of control cells / number of treated cells. These calculations reflect the extent of migration of blocked cells by 30 min pretreatment with MANS-related peptides.

도 1은 12시간의 이동시간(migration time) 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분(cell count field)을 나타낸다.FIG. 1 shows a cell count field of a negative control group after a migration time of 12 hours.

도 2의 좌측 사진은 50umolar MANS 펩티드의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은 100umolar MANS 펩티드의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.The left photo of FIG. 2 shows the part of counting the cells of the negative control after pretreatment of 50umolar MANS peptide and the passage of 12 hours migration time, and the right photo shows the cells of the negative control after pretreatment of 100umolar MANS peptide and the migration time of 12 hours. Represents the counted part.

도 3의 좌측 사진은 50umolar RNS 펩티드의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은 100umolar RNS 펩티드의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.The left photo of FIG. 3 shows the part of counting cells of the negative control after pretreatment of 50umolar RNS peptide and 12 hours of migration time, and the right photo shows cells of negative control after pretreatment of 100umolar RNS peptide and 12 hours of migration time. Represents the counted part.

도 4의 좌측 사진은 50umolar MANS-관련 펩티드 BIO-11002의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은100umolar MANS-관련 펩티드 BIO-11002(N-미리스토일-서열번호 106-NH2)의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 얻어지는 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.The left photo of FIG. 4 shows the part of counting cells of the negative control after pretreatment of 50umolar MANS-related peptide BIO-11002 and the passage of 12 hours, and the right photo is 100umolar MANS-related peptide BIO-11002 (N- Stoyl-SEQ ID NO: 106-NH 2 ) shows the counted portion of the cells of the negative control obtained after pretreatment and migration time of 12 hours.

도 5의 좌측 사진은 50umolar의 MANS-관련 펩티드 BIO-10901(N-미리스토일-서열번호 121)의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측 사진은 100umolar MANS-관련 펩티드 BIO-10901의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.The photo on the left of FIG. 5 shows the part where the cells of the negative control were counted after pretreatment of 50umolar of MANS-related peptide BIO-10901 (N-myristoyl-SEQ ID NO: 121) and migration time of 12 hours, and the right photo It shows the part of counting the cells of the negative control group after pretreatment of 100umolar MANS-related peptide BIO-10901 and the passage of 12 hours.

도 6의 좌측 사진은 50umolar MANS-관련 펩티드 BIO-91200(N-미리스토일-서열번호 219)의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타내고, 우측사진은 100umolar MANS-관련 펩티드 BIO-91200의 전처리 및 12시간의 이동시간 경과 후 음성 대조군의 세포를 계수한 부분을 나타낸다.The photo on the left of FIG. 6 shows the part where the cells of the negative control were counted after pretreatment of 50umolar MANS-related peptide BIO-91200 (N-myristoyl-SEQ ID NO: 219) and a migration time of 12 hours, and the photo on the right is 100umolar. It shows the part where the cells of the negative control group were counted after pretreatment of the MANS-related peptide BIO-91200 and the passage time of 12 hours.

도 7의 좌측은 50umolar의 MANS 펩티드, RNS 펩티드, 및 MANS-관련 펩티드인 BIO-11002(서열번호 106), BIO-10901(서열번호 121), BIO-91200(서열번호 219)을 전처리하거나 펩티드를 처리하지 않은 경우(대조구)의 이동된 세포수를 나타낸 그래프이다. MANS 펩티드의 경우, 세포수는 약 40; RNS 펩티드의 경우, 세포수는 약 95; BIO-11002(서열번호 106)의 경우, 세포수는 약 50; BIO-10901(서열번호 121)의 경우, 세포수는 약 60; BIO-91200(서열번호 219)의 경우, 세포수는 약 65이었다. 각 MANS-관련 펩티드인 BIO-11002, BIO-10901, BIO-91200은 대조구 및 RNS 임의 서열 펩티드에 비하여 유의적으로 감소된 공격적인(aggressive) 사람 NSCLC 세포주(CL1-5)의 이동 세포수를 나타내었다.The left side of FIG. 7 is a 50umolar of MANS peptide, RNS peptide, and MANS-related peptides, BIO-11002 (SEQ ID NO: 106), BIO-10901 (SEQ ID NO: 121), BIO-91200 (SEQ ID NO: 219), or pretreatment of the peptide. This is a graph showing the number of cells that have not been treated (control). For the MANS peptide, the cell count is about 40; For the RNS peptide, the cell number is about 95; In the case of BIO-11002 (SEQ ID NO: 106), the number of cells is about 50; In the case of BIO-10901 (SEQ ID NO: 121), the number of cells is about 60; In the case of BIO-91200 (SEQ ID NO: 219), the number of cells was about 65. Each MANS-related peptide, BIO-11002, BIO-10901, and BIO-91200, showed a significantly reduced number of migrating cells of the aggressive human NSCLC cell line (CL1-5) compared to the control and RNS random sequence peptides. .

도 7의 우측은 100umolar의 MANS 펩티드, RNS 펩티드, 및 MANS-관련 펩티드인 BIO-11002(서열번호 106), BIO-10901(서열번호 121), BIO-91200(서열번호 219)을 전처리하거나 펩티드를 처리하지 않은 경우(대조구)의 이동된 세포수를 나타낸 그래프이다. MANS 펩티드의 경우, 세포수는 약 20; RNS 펩티드의 경우, 세포수는 약 90; BIO-11002(서열번호 106)의 경우, 세포수는 약 25; BIO-10901(서열번호 121)의 경우, 세포수는 약 35; BIO-91200(서열번호 219)의 경우, 세포수는 약 40; 대조구의 경우, 세포수는 약 90이었다. 각 MANS-관련 펩티드인 BIO-11002, BIO-10901, BIO-91200은 대조구 및 RNS 임의 서열 펩티드에 비하여 유의적으로 감소된 공격적인 사람 NSCLC 세포주(CL1-5)의 이동 세포수를 나타내었다.The right side of Figure 7 is 100umolar of the MANS peptide, RNS peptide, and MANS-related peptides BIO-11002 (SEQ ID NO: 106), BIO-10901 (SEQ ID NO: 121), BIO-91200 (SEQ ID NO: 219) pre-treatment or peptide This is a graph showing the number of cells that have not been treated (control). For the MANS peptide, the cell number is about 20; For the RNS peptide, the cell number is about 90; In the case of BIO-11002 (SEQ ID NO: 106), the number of cells is about 25; In the case of BIO-10901 (SEQ ID NO: 121), the number of cells is about 35; In the case of BIO-91200 (SEQ ID NO: 219), the number of cells is about 40; In the case of the control, the number of cells was about 90. Each of the MANS-related peptides BIO-11002, BIO-10901, and BIO-91200 showed a significantly reduced number of migrating cells of the aggressive human NSCLC cell line (CL1-5) compared to the control and RNS random sequence peptides.

도 8의 좌측은 본 발명의 펩티드를 50umolar 전처리하고 프로토콜에 따라 12시간 처리한 후, 공격적인 사람 NSCLC 세포주의 유주지수(migration index)를 나타낸 그래프인데, 유주지수가 더 높을수록 덜 이동하는 것을 의미한다. 유주지수 값은 다음과 같다: 대조구 = 1; MANS 펩티드 = 약 2.5; RNS 펩티드 = 약 1.1; BIO-11002 = 약 2.7; BIO-10901 = 약 1.75; BIO-91200 = 약 1.7. 각 MANS-관련 펩티드인 BIO-11002, BIO-10901, BIO-91200은 대조구나 RNS 펩티드에 비하여 유의적으로 증가된 유주지수 값을 나타내었다.The left side of FIG. 8 is a graph showing the migration index of an aggressive human NSCLC cell line after 50 umolar pretreatment of the peptide of the present invention and treatment according to the protocol for 12 hours, the higher the migration index, the less migration. . The values of the index are as follows: control = 1; MANS peptide = about 2.5; RNS peptide = about 1.1; BIO-11002 = about 2.7; BIO-10901 = about 1.75; BIO-91200 = about 1.7. Each of the MANS-related peptides, BIO-11002, BIO-10901, and BIO-91200, showed significantly increased migration index values compared to the control and RNS peptides.

도 8의 우측은 본 발명의 펩티드를 100umolar 전처리하고 프로토콜에 따라 12시간 처리한 후, 공격적인 사람 NSCLC 세포주의 유주지수를 나타낸 그래프인데, 유주지수가 더 높을수록 덜 이동하는 것을 나타낸다. 유주지수 값은 다음과 같다: 대조구 = 1; MANS 펩티드 = 약 4.3; RNS 펩티드 = 약 1; BIO-11002 = 약 3.8; BIO-10901 = 약 2.7; BIO-91200 = 약 2.4. 각 MANS-관련 펩티드인 BIO-11002, BIO-10901, BIO-91200은 대조구나 RNS 펩티드에 비하여 유의적으로 증가된 유주지수 값을 나타내었다.The right side of FIG. 8 is a graph showing the migration index of an aggressive human NSCLC cell line after pretreatment with 100 umolar of the peptide of the present invention and treatment according to the protocol for 12 hours, the higher the migration index, the less migration. The values of the index are as follows: control = 1; MANS peptide = about 4.3; RNS peptide = about 1; BIO-11002 = about 3.8; BIO-10901 = about 2.7; BIO-91200 = about 2.4. Each of the MANS-related peptides, BIO-11002, BIO-10901, and BIO-91200, showed significantly increased migration index values compared to the control and RNS peptides.

도 9는 공격적인 사람 NSCLC 세포주(CL1-5)를 이용한 실험에서 50umolar의 펩티드를 처리한 결과, 각 세포수 및 유주지수를 나란히 나타낸 그래프이다. 펩티드를 처리하지 않은 대조구는 약 105개의 세포수와 1.0의 유주지수를 나타냈다. 프로토콜에 따른 50umolar의 MANS 펩티드 전처리 후 12시간 경과의 결과는 약 45개의 세포수와 2.5의 유주지수를 나타냈다. 50umolar의 RNS 펩티드 전처리 후 12시간 경과의 결과는 약 90개의 세포수와 1.3의 유주지수를 나타냈다. 50umolar의 BIO-11000 펩티드 전처리 후 12시간 경과의 결과는 약 70개의 세포수와 1.5의 유주지수를 나타냈다. 50umolar의 BIO-11006 펩티드 전처리 후 12시간 경과의 결과는 약 50개의 세포수와 2의 유주지수를 나타냈다. 이러한 결과는 높은 값의 유주지수는 작은 이동과 연관되고, 작은 이동은 높은 값의 유주지수와 연관된다는 사실을 의미한다. 각 MANS-관련 펩티드들, 즉 MANS, BIO-11000, 및 BIO-11006은 대조구 및 RNS 펩티드에 비하여 감소된 세포수 및 증가된 유주지수를 나타내었다. 9 is a graph showing the number of cells and the migration index side by side as a result of treatment with a peptide of 50 umolar in an experiment using an aggressive human NSCLC cell line (CL1-5). The control without treatment with the peptide showed a number of about 105 cells and a migration index of 1.0. After 12 hours of pretreatment with 50umolar of the MANS peptide according to the protocol, the results showed a number of about 45 cells and a migration index of 2.5. The result of 12 hours after 50umolar RNS peptide pretreatment showed a number of about 90 cells and a migration index of 1.3. The result of 12 hours after 50umolar BIO-11000 peptide pretreatment showed a number of about 70 cells and a migration index of 1.5. The result of 12 hours after 50umolar BIO-11006 peptide pretreatment showed a number of about 50 cells and a migration index of 2. These results imply that high-valued retention indices are associated with small shifts, and small shifts are associated with high-value retention indices. Each of the MANS-related peptides, namely MANS, BIO-11000, and BIO-11006, exhibited reduced cell count and increased migration index compared to the control and RNS peptides.

도 10은 공격적인 사람 NSCLC 세포주(CL1-5)를 이용한 실험에서 100umolar의 펩티드를 처리한 결과, 각 세포수 및 유주지수를 나란히 나타낸 그래프이다. 펩티드를 처리하지 않은 대조구는 약 105개의 세포수와 1.0의 유주지수를 나타냈다. 프로토콜에 따라 100umolar의 MANS 펩티드 전처리 후 12시간 경과의 결과는 약 35개의 세포수와 3.5의 유주지수를 나타냈다. 100umolar의 RNS 펩티드 전처리 후 12시간 경과의 결과는 약 95개의 세포수와 1.2의 유주지수를 나타냈다. 100umolar의 BIO-11000 펩티드 전처리 후 12시간은 약 50개의 세포수와 2.3의 유주지수를 나타냈다. 100umolar의 BIO-11006 펩티드 전처리 후 12시간은 약 50개의 세포수와 약 2.1의 유주지수를 나타냈다. 100umolar의 BIO-91200 펩티드 전처리 후 12시간 경과의 결과는 약 55개의 세포수와 약 2.1의 유주지수를 나타냈다. 이러한 결과는 높은 값의 유주지수는 작은 이동과 연관되고, 작은 이동은 높은 값의 유주지수와 연관된다는 사실을 의미한다. 각 MANS-관련 펩티드들, 즉 MANS, BIO-11000, BIO-11006, 및 BIO-91200은 대조구 및 RNS 펩티드에 비하여 감소된 세포수 및 증가된 유주지수를 나타낸다.10 is a graph showing the number of cells and the migration index side by side as a result of treatment with a peptide of 100 umolar in an experiment using an aggressive human NSCLC cell line (CL1-5). The control without treatment with the peptide showed a number of about 105 cells and a migration index of 1.0. According to the protocol, the results after 12 hours of pretreatment with 100 umolar of MANS peptide showed a number of about 35 cells and a migration index of 3.5. After 12 hours of pretreatment with 100 umolar RNS peptide, the number of cells was about 95 and the migration index was 1.2. After 12 hours of pretreatment with 100 umolar of BIO-11000 peptide, the number of cells was about 50 and the migration index was 2.3. After 12 hours of pretreatment with 100 umolar of BIO-11006 peptide, the number of cells was about 50 and the migration index was about 2.1. After 12 hours of pretreatment with 100 umolar of BIO-91200 peptide, the result was about 55 cells and a migration index of about 2.1. These results imply that high-valued retention indices are associated with small shifts, and small shifts are associated with high-value retention indices. Each of the MANS-related peptides, namely MANS, BIO-11000, BIO-11006, and BIO-91200, exhibited reduced cell count and increased migration index compared to the control and RNS peptides.

동소 폐주사 제노그래프(orthotopic lung injection xenograph) 모델을 이용한 MANS 펩티드 또는 BIO-11006에 의한 폐암 전이의 억제Inhibition of lung cancer metastasis by MANS peptide or BIO-11006 using an orthotopic lung injection xenograph model

MANS 펩티드 또는 BIO-11006 처리 이후 생체내 암세포의 전이활성을 동소 폐주사 제노그래프(orthotopic lung injection xenograph) 모델을 이용하여 평가하였다. 100uM의 PBS, 또는 PBS + MANS, BIO-11006(서열번호 106), 또는 대조구 RNS 펩티드로 4시간 전처리한 후, PC-9 세포를 누드 마우스 폐의 좌엽(left lobe)에 주사하였다. 7일 후, 이들 마우스를 PBS(Con), RNS(추가의 대조구 펩티드), MANS 또는 BIO-11006 50nmole을 복강주사로 매 3일마다 1회 전신 처리하였다. 종양세포 접종 후 25일(6회 주사)째에, 마우스를 희생시키고 반대쪽 폐(contralateral lung) 및 다른 기관에서의 전이된 종양결절(tumor nudule)을 계수하였다. 하기 표 3에서 보듯이, MANS, RNS 또는 BIO-11006-처리구는 PBS-처리구나 서로 서로를 대비할 때 주사부위에서 종양의 평균 크기에서 차이가 없었는데, 이는 이들 처리가 종양형성(tumorigenesis)에 영향을 주지 않는다는 사실을 의미한다. 그러나, PBS- 또는 RNS-처리구와 대비하여 전이결절(metastatic nodule)의 의미있는 감소가 MANS 및 BIO-11006 처리 마우스의 반대편 폐 및 다른 기관에서 확인되었다; 실제로, MANS 또는 BIO-11006 펩티드는 다른 폐 부위나 다른 기관으로의 모든 전이를 종양으로부터 근본적으로 완전히 차단하였다.Metastatic activity of cancer cells in vivo after treatment with MANS peptide or BIO-11006 was evaluated using an orthotopic lung injection xenograph model. After 4 hours pretreatment with 100 uM PBS, or PBS + MANS, BIO-11006 (SEQ ID NO: 106), or control RNS peptide, PC-9 cells were injected into the left lobe of nude mouse lungs. After 7 days, these mice were systemically treated with PBS (Con), RNS (additional control peptide), MANS or 50 nmole of BIO-11006 intraperitoneally once every 3 days. On the 25th day after tumor cell inoculation (6 injections), mice were sacrificed and metastasized tumor nudules in the contralateral lung and other organs were counted. As shown in Table 3, MANS, RNS, or BIO-11006-treated groups did not differ in the mean size of tumors at the injection site when compared to each other in PBS-treated groups, which is why these treatments affect tumorigenesis. It means not giving. However, a significant reduction in metastatic nodules compared to PBS- or RNS-treated groups was confirmed in the opposite lung and other organs of MANS and BIO-11006 treated mice; In fact, the MANS or BIO-11006 peptide essentially completely blocked all metastasis from the tumor to other lung sites or other organs.

생체 조건에서의 MARCKS-관련 펩티드의 암전이 억제효과Inhibitory Effect of MARCKS-related Peptide on Cancer Metastasis in Vivo
그 룹group 종양 크기Tumor size
(mm)(mm) 전이된 폐종양의 개수Number of metastasized lung tumors 전이 (영향받은 마우스/전체 마우스)Metastasis (affected mice/all mice) Mean ± SEMean ± SE Mean±SE Mean±SE
(L't; R't)(L't; R't) 심장Heart 비장spleen 장chapter 횡경막Diaphragm PBS (n=3)PBS (n=3) 1.50±0.261.50±0.26 1.67±0.29;
5.67±0.771.67±0.29;
5.67±0.77 1/11/1 2/32/3 1/31/3 2/32/3 RNS (n=4)RNS (n=4) 1.72±0.411.72±0.41 1.00±0.40;
5.75±0.011.00±0.40;
5.75±0.01 3/43/4 2/42/4 1/41/4 3/43/4 MANS (n=4)MANS (n=4) 1.48±0.541.48±0.54 0;0 0;0 0/40/4 0/40/4 0/40/4 0/40/4 BIO-11006 (n=2)BIO-11006 (n=2) 1.61±0.371.61±0.37 0;00;0 0/20/2 0/20/2 0/20/2 0/20/2

이러한 생체 조건에서의 실험결과는 MANS-관련 펩티드에 의한 MARCKS 기능의 억제가 생체 조건에서 폐 암세포의 전이를 감소시킨다는 사실을 지지한다.These experimental results in vivo support the fact that inhibition of MARCKS function by MANS-related peptides reduces metastasis of lung cancer cells in vivo.

A549 암 세포주의 이동에 대한 펩티드의 효과Effect of peptide on migration of A549 cancer cell line

사람 선암종(adenocarcinoma)-유도 폐포 상피세포주 A549(침습 세포주)를 미합중국 종균협회(ATCC)로부터 입수하여, 10% 우태아 혈청 및 100U/ml 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 RPMI-1640의 75cm2 조직배양 플라스크에서 배양하였다. 세포는 37℃, 95% 대기 및 5% CO2 조건에서 배양 3일째 되는 날 꽉 차게 배양되었고, 계대로(by passage) 유지하였다.Human adenocarcinoma-induced alveolar epithelial cell line A549 (invasive cell line) was obtained from the United States Seed Association (ATCC) and cultured in 75 cm 2 of RPMI-1640 supplemented with 10% fetal bovine serum and 100 U/ml penicillin/streptomycin. Incubated in flask. Cells were fully cultured on the third day of culture at 37° C., 95% atmosphere, and 5% CO 2 conditions, and maintained by passage.

시험 펩티드들(MANS, RNS, BIO-11006, BIO-11000, BIO-11002, BIO-91200 및 BIO-10901)을 pH 7.0의 PBS에 용해시키고, 용해도를 높이기 위해 천천히 2시간 동안 소용돌이를 일으켰다.Test peptides (MANS, RNS, BIO-11006, BIO-11000, BIO-11002, BIO-91200 and BIO-10901) were dissolved in PBS at pH 7.0 and vortexed slowly for 2 hours to increase the solubility.

트랜스웰 플레이트(24-웰, 8-㎛ 공경(pore size); Costar, Cambridge, MA, USA)를 이동분석을 위해 사용하였다. 트랜스웰 플레이트의 하부 챔버를 600㎕의 10% FBS를 함유하는 기본배지로 채웠다. 세포(1 x 105)를 50 또는 100uM의 지정된 펩티드로 30분 동안 전처리하고, 1% BSA를 함유하는 100㎕의 기본배지에 현탁시켜 상부 챔버에 가한 다음, 세포를 37℃에서 12시간 동안, PBS(대조구), 또는 10, 25 또는 50uM의 지정된 펩티드에서 배양하였다. 여과지의 상부 표면에 있는 세포를 면봉으로 제거하고, 여과지의 하부 표면으로 이동한 세포를 세정하고, 고정하며, 헤마톡실린으로 염색하고, 현미경 하에서 계수하였다. 이동에 있어서 백분율 변화를 여과지의 하부 표면으로 이동한 세포수를 계수하여 측정하였다. 각 농도에서의 총 3회의 반복실험에서 막 당 최소한 4개의 분리된 부분이 현미경으로 관찰되었다. "Prizm"이라는 통계 소프트웨어가 데이타 분석에 사용되었다.Transwell plates (24-well, 8-µm pore size; Costar, Cambridge, MA, USA) were used for migration analysis. The lower chamber of the transwell plate was filled with 600 μl of basic medium containing 10% FBS. Cells (1×10 5 ) were pretreated with 50 or 100 μM of the designated peptide for 30 minutes, suspended in 100 μl of basal medium containing 1% BSA, added to the upper chamber, and then cells were added to the upper chamber at 37° C. for 12 hours, Incubated in PBS (control), or 10, 25 or 50 uM of the designated peptide. The cells on the upper surface of the filter paper were removed with a cotton swab, and the cells that migrated to the lower surface of the filter paper were washed, fixed, stained with hematoxylin, and counted under a microscope. The percentage change in migration was measured by counting the number of cells that migrated to the lower surface of the filter paper. In a total of 3 replicates at each concentration, at least 4 separated portions per membrane were observed under a microscope. Statistical software called "Prizm" was used for data analysis.

도 11에서 보듯이, 각 시험 펩티드의 처리는 대조구(펩티드 무처리) 또는 RNS 펩티드에 비하여 감소된 세포수를 나타내었다. 각 MANS-관련 펩티드(MANS, RNS, BIO-11006, BIO-11000, BIO-11002, BIO-91200, 및 BIO-10901)의 50uM 처리는 대조구 및 RNS 펩티드에 비하여 감소된 이동 세포수 및 증가된 유주지수를 나타냈다. 낮은 농도에서, 몇몇 MANS-관련 펩티드의 효과는 MANS 펩티드에 비하여 유의적으로 상이하였다. 특히, 25uM의 BIO-11006, BIO-11002, 또는 BIO-91200를 처리하면, 대조구(펩티드 무처리) 및 대조구 RNS 펩티드 뿐만 아니라 MANS 펩티드에 비하여 유의적으로 감소된 세포수를 나타내었다(도 11).As shown in Fig. 11, the treatment of each test peptide showed a reduced number of cells compared to the control (no peptide treatment) or RNS peptide. 50uM treatment of each MANS-related peptide (MANS, RNS, BIO-11006, BIO-11000, BIO-11002, BIO-91200, and BIO-10901) resulted in a decreased number of migrating cells and increased migration compared to the control and RNS peptides. Indicated the index. At low concentrations, the effects of some MANS-related peptides were significantly different compared to MANS peptides. In particular, when 25uM of BIO-11006, BIO-11002, or BIO-91200 was treated, the number of cells significantly decreased compared to the control (no peptide treatment) and the control RNS peptide as well as the MANS peptide (Fig. 11). .

상술한 바를 종합하면, 본 실시예의 결과는 MANS-관련 펩티드가 공격적인 암 세포주의 이동을 차단하며, 몇몇 MANS-관련 펩티드는 최소한 3개의 서로 다른 암 세포주의 이동에 영향을 준다는 사실을 나타낸다. 상기 결과는 최소한 2개의 서로 다른 MANS-관련 펩티드로 포유동물에 주사된 암세포의 전이를 차단하거나 억제할 수 있다는 사실을 시사하였다. Taken together, the results of this example show that MANS-related peptides block the migration of aggressive cancer cell lines, and some MANS-related peptides influence the migration of at least three different cancer cell lines. The above results suggested that at least two different MANS-related peptides could block or inhibit metastasis of cancer cells injected into mammals.

폐암 이식에 있어서 BIO-11006 펩티드의 영향
Effect of BIO-11006 Peptide on Lung Cancer Transplantation

본 실시예에서는 SCID 마우스에서의 동소 폐암 이식모델에서 BIO-11006 펩티드에 의한 폐암 전이억제를 평가하였다. 사람 선암종 세포(PC-9)(1-2 x 105)를 40㎕의 0.5mg/mL의 MatrigelTM(BD Bioscience)을 함유하는 PBS(pH 7.4)에 현탁시키고, SCID 마우스(n=3)의 왼쪽 폐에 29 게이지 니들이 장착된 시린지로 주사하였다. BIO-11006을 PBS 중 100uM 용액으로 암세포 접종 이후 3일째부터 22일간 하루 1회 복강내 주사(50㎕)하거나, 암세포 접종 이후 3일째부터 22일간 30분에 걸쳐 Nebulizer Delivery System(Aeroneb Lab)을 이용하여 에어졸 흡입시켰다. 도 12는 시험 화합물의 투여경로에 따른(복강내 주사 대 흡입) 좌측 폐, 우측 폐, 심장 및 횡경막에서의 마우스 당 평균 종양수를 나타낸다. BIO-11006의 복강내 주사와 흡입 모두 우측 폐, 심장에서 50% 이상, 횡경막에서는 100% 암세포 전이를 감소시켰다. 따라서, 두 가지 투여경로 모두 암세포 전이에 유의적인 억제효과를 나타내었다.
In this example, inhibition of lung cancer metastasis by the BIO-11006 peptide was evaluated in an orthotopic lung cancer transplantation model in SCID mice. Human adenocarcinoma cells (PC-9) (1-2 x 10 5 ) were suspended in PBS (pH 7.4) containing 40 μl of 0.5 mg/mL Matrigel ™ (BD Bioscience), and SCID mice (n=3) The left lung of the patient was injected with a syringe equipped with a 29 gauge needle. BIO-11006 is injected intraperitoneally (50µl) once a day for 22 days from the 3rd day after the inoculation of cancer cells in 100uM solution in PBS, or the Nebulizer Delivery System (Aeroneb Lab) is used over 30 minutes for 22 days from the 3rd day after the inoculation of cancer cells. And inhaled the aerosol. 12 shows the average number of tumors per mouse in the left lung, right lung, heart and diaphragm according to the route of administration of the test compound (intraperitoneal injection versus inhalation). Both intraperitoneal injection and inhalation of BIO-11006 reduced cancer cell metastasis by more than 50% in the right lung and heart and 100% in the diaphragm. Therefore, both routes of administration showed significant inhibitory effects on cancer cell metastasis.

폐암 전이의 억제
Inhibition of lung cancer metastasis

본 실시예에서는 BIO-11006 펩티드에 의한 폐암 전이억제를 SCID 마우스에서의 동소 폐암 이식모델에서 평가하였다. 사람 선암종 세포(PC-9)(1-2 x 105)를 40㎕의 0.5mg/mL의 MatrigelTM(BD Bioscience)을 함유하는 PBS에 현탁시키고, SCID 마우스(n=3)의 왼쪽 폐에 29 게이지 니들이 장착된 시린지로 주사하였다. BIO-11006을 PBS 중 100uM 용액으로 Nebulizer Delivery System (Aeroneb Lab)을 이용하여 암세포 접종 이후 25일간 30분에 걸쳐 4일째 또는 15일째부터 에어졸 흡입으로 투여하였다. 실험이 종료될 무렵, 마우스를 희생시키고, 폐, 심장 및 횡경막 조직을 수득하여 각 조직의 종양결절의 수를 측정하였다. 이 실험의 결과를 도 13 및 도 14에 나타내었다. 도 13은 암세포 접종 이후 4일째부터 처리를 시작하였을 때, 좌측 폐, 심장 및 횡경막에서의 종양 전이가 60~90% 억제되고, 암세포 접종 이후 15일째부터 처리를 시작하였을 때, 폐, 심장 및 횡경막에서의 종양 전이가 약 50% 억제되었음을 나타낸다. 도 14는 암세포 접종 이후 15일째 또는 4일째부터 펩티드를 처리하였을 때, 모든 조직에서 발견되는 종양결절의 총 개수를 나타낸다. 도 14는 암세포 접종 이후 15일째부터 펩티드를 처리하였을 때 종양결절이 감소되고, 암세포 접종 이후 4일째부터 펩티드를 처리하였을 때 종양결절이 더욱 감소하는 것을 나타낸다.In this example, inhibition of lung cancer metastasis by the BIO-11006 peptide was evaluated in an orthotopic lung cancer transplantation model in SCID mice. Human adenocarcinoma cells (PC-9) (1-2 x 10 5 ) were suspended in PBS containing 40 μl of 0.5 mg/mL Matrigel ™ (BD Bioscience), and in the left lung of SCID mice (n=3). It was injected with a syringe equipped with a 29 gauge needle. BIO-11006 was administered by inhalation of an aerosol from the 4th or 15th day over 25 days after inoculation of cancer cells using the Nebulizer Delivery System (Aeroneb Lab) as a 100uM solution in PBS over 30 minutes. At the end of the experiment, mice were sacrificed, and lung, heart and diaphragm tissues were obtained, and the number of tumor nodules in each tissue was measured. The results of this experiment are shown in FIGS. 13 and 14. FIG. 13 shows that when treatment was started from day 4 after cancer cell inoculation, tumor metastasis in the left lung, heart, and diaphragm was inhibited by 60-90%, and when treatment was started from day 15 after cancer cell inoculation, lung, heart and diaphragm Indicates that the tumor metastasis was inhibited by about 50%. 14 shows the total number of tumor nodules found in all tissues when the peptide was treated from the 15th or 4th day after inoculation of cancer cells. 14 shows that tumor nodules are reduced when the peptide is treated from the 15th day after cancer cell inoculation, and that tumor nodules are further reduced when the peptide is treated from the 4th day after cancer cell inoculation.

펩티드의 항-전이 효능
Anti-metastatic efficacy of peptides

본 실시예는 본 발명의 시험 화합물의 사람 폐 선암종을 가지는 SCID 마우스에 대한 항-전이 효능(anti-metastatic efficacy)을 입증한다. 우선, 개별 환기 케이지 속의 암컷 NOD.CB17-Prkdcscid/NCrHsd, Mus musculus 마우스(Harlan, The Netherlands)를 임의로 각 8마리씩 6개의 그룹으로 나누었다. 이어, A549 세포(2.5 x 106)를 꼬리 정맥을 통하여 마우스에 주사하였다. 에어졸화 담체(aerosolized vehicle)를 대조구로 하고; 제2 그룹과 제3 그룹은 에어졸화 시험 화합물 BIO-11006을 7주간 매일 네뷸라이저(nebulizer, Aeroneb Lab)를 이용하여 암세포 접종 이전 -1일(제2 그룹)부터 혹은 암세포 접종 이후 +3일(제3 그룹)부터의 주사 투여로 하였다. 제4그룹과 제5그룹은 에어졸화 시험 화합물 MANS 펩티드를 7주간 매일 네뷸라이저(Aeroneb Lab)를 이용하여 암세포 접종 이전 -1일(제4 그룹)부터 혹은 암세포 접종 이후 +3일(제5 그룹)부터의 주사 투여로 하였다. 에어로졸 전달을 위하여, 각 시험 화합물의 용액(100uM)을 PBS(pH 7.0)에 제조하고, 각 처리를 위해서 5mL의 시험 화합물 용액을 한번에 4마리의 마우스를 가지는 챔버에 30분에 걸쳐 에어로졸 분무하였다. 마우스의 체중을 7주간 매일 측정하였다.This example demonstrates the anti-metastatic efficacy of the test compound of the present invention for SCID mice with human lung adenocarcinoma. First, in the individual ventilated cage female NOD.CB17-Prkdc scid / NCrHsd, Mus Musculus mice (Harlan, The Netherlands) were randomly divided into 6 groups of 8 mice each. Subsequently, A549 cells (2.5 x 10 6 ) were injected into mice through the tail vein. An aerosolized vehicle as a control; Groups 2 and 3 used a nebulizer (Aereneb Lab) daily for 7 weeks with aerosolization test compound BIO-11006 from -1 days before cancer cell inoculation (group 2) or +3 days after cancer cell inoculation ( It was set as injection administration from 3rd group). Groups 4 and 5 used a nebulizer (Aeroneb Lab) daily for 7 weeks with the aerosolization test compound MANS peptide from -1 days before cancer cell inoculation (group 4) or +3 days after cancer cell inoculation (group 5). ) From the injection. For aerosol delivery, a solution of each test compound (100 uM) was prepared in PBS (pH 7.0), and for each treatment, 5 mL of the test compound solution was sprayed with an aerosol over 30 minutes in a chamber having 4 mice at a time. The weight of the mice was measured every day for 7 weeks.

마우스의 한 그룹(n=7)은 정상 대조구로 하였는데, 이들은 시험 기간동안 마우스의 건강 상태를 측정하는데 사용한 무처리 마우스이다. 모든 그룹의 동물은 53일째 희생시켰으며, 실험결과를 표 4와 도 15에 나타내었다. 도 15는 BIO-11006과 MANS 펩티드의 53일째 투여와 A549 세포주사 이후 폐에서의 전이결절의 수를 비교한 결과이다. 표 4는 폐에서의 전이결절의 개수뿐만 아니라, 국소 종양결절(focal tumor nodule) 및/또는 원격전이(distant metastasis)를 가지는 동물의 수를 나타낸다. 총체적으로 볼 때, 시험 펩티드는 A549 세포 주사에 비하여 -1일째 또는 +3일째부터 BIO-11006 또는 MANS 펩티드를 투여한 동물에서 종양 전이를 대체적으로 억제하였다(70-80%) (도 15). 더욱이, 처리 마우스에서의 종양결절의 수는 담체 대조구에 비하여 유의적 감소를 나타내었고, 처리 마우스 어느 것도 원격전이의 증거를 보이지 않았다(표 4). A549 세포 주사에 비하여 -1일째 또는 +3일째부터 BIO-11006 또는 MANS 펩티드를 투여한 마우스의 7/8에서 국소 종양결절이 발견되었다.
One group of mice (n=7) was used as a normal control, which were untreated mice used to measure the health status of mice during the test period. Animals of all groups were sacrificed on day 53, and the experimental results are shown in Table 4 and FIG. 15. 15 is a result of comparing the number of metastatic nodules in the lungs after administration of BIO-11006 and MANS peptide on day 53 and injection of A549 cells. Table 4 shows the number of metastasis nodules in the lung, as well as the number of animals with focal tumor nodules and/or distant metastasis. Overall, the test peptide generally inhibited tumor metastasis in animals administered with BIO-11006 or MANS peptide from day -1 or +3, compared to A549 cell injection (70-80%) (Fig. 15). Moreover, the number of tumor nodules in the treated mice showed a significant decrease compared to the carrier control, and none of the treated mice showed evidence of distant metastasis (Table 4). Local tumor nodules were found in 7/8 of the mice administered with BIO-11006 or MANS peptide from day -1 or +3 compared to A549 cell injection.

BIO-11006 또는 MANS를 처리한 마우스에서의 전이결절 및 원격전이Metastatic nodules and distant metastasis in mice treated with BIO-11006 or MANS 그 룹group 폐에서의 전이결절 개수Number of metastatic nodules in the lung
MeanMean ± ± SEMSEM 비 고Remark
담체carrier 대조구Control
97±21
97±21 전체 동물에서의 다 병소(multi-focal)
종양결절(8/8)
횡경막과 흉골(sternum)에서의 원격전이(2/8)Multi-focal in all animals
Tumor nodule (8/8)
Distant metastases in the diaphragm and sternum (2/8) BIOBIO -11006 펩티드-11006 peptide
(-1일 (-1 day 처리구Treatment ))
34±14
34±14 7/8 동물에서의 일부 병소 종양결절
원격전이 없음7/8 Some focal tumor nodules in animals
No remote warfare BIOBIO -11006 펩티드-11006 peptide
(+3일 (+3 days 처리구Treatment ))
21±6
21±6 7/8 동물에서의 일부 병소 종양결절
원격전이 없음7/8 Some focal tumor nodules in animals
No remote warfare MANSMANS 펩티드 Peptide
(-1일 (-1 day 처리구Treatment ))
22±7
22±7 4/8 동물에서의 일부 병소 종양결절
원격전이 없음4/8 Some focal tumor nodules in animals
No remote warfare MANSMANS 펩티드 Peptide
(+3일 (+3 days 처리구Treatment ))
13±4
13±4 7/8 동물에서의 일부 병소 종양결절
원격전이 없음7/8 Some focal tumor nodules in animals
No remote warfare

MANS-관련 펩티드의 마우스 흑색종에서의 항-전이 활성
Anti-metastatic activity of MANS-related peptides in mouse melanoma

본 실시예에서는 4개의 서로 다른 경로로 투여된 MANS-관련 펩티드의 상대적 항-전이활성을 동계(syngeneic) 마우스 모델을 이용하여 측정하였다. DMEM 배지 중 마우스 흑색종 세포주 B16F10 2 x 106의 200㎕ 세포 현탁액을 발바닥 또는 귀의 등쪽 피부와 연골사이에 주사하거나; 또는, 정맥내, 근육내, 또는 복강내 주사하였다. In this example, the relative anti-metastatic activity of MANS-related peptides administered by four different routes was measured using a syngeneic mouse model. 200 [mu]l cell suspension of the mouse melanoma cell line B16F10 2 x 10 6 in DMEM medium was injected between the sole of the foot or the dorsal skin of the ear and the cartilage; Alternatively, it was injected intravenously, intramuscularly, or intraperitoneally.

세포 접종후 2일째, 동물들을 각 그룹 당 개체수 10으로 임의 분할하였다. 서로 다른 그룹의 동물에 MANS-관련 펩티드를 복강내(ip), 정맥내(iv), 또는 근육내(im)로 약 6.25mg/kg의 용량으로 투여하였다. 일부 그룹에서는, 전임상 분무기(preclinical nebulizer, Aeroneb Lab; Aerogen)를 이용하여 흡입 경로로 동물을 처리하였다(5ml의 PBS 중 0.1mM MANS-관련 펩티드). 1개 그룹은 담체 대조구(vehicle control)로 하고, 근육내로 PBS를 처리하였다. 펩티드는 6주에 걸쳐 하루 걸러 한번씩 투여하였다. On the 2nd day after cell inoculation, animals were randomly divided into 10 populations per group. Different groups of animals were administered the MANS-related peptide intraperitoneally (ip), intravenously (iv), or intramuscularly (im) at a dose of about 6.25 mg/kg. In some groups, animals were treated by the inhalation route using a preclinical nebulizer (Aereneb Lab; Aerogen) (0.1 mM MANS-related peptide in 5 ml of PBS). One group was used as a carrier control, and PBS was treated intramuscularly. Peptides were administered every other day over 6 weeks.

종양 점수(tumor scoring)는 매주 행하였다. 6주간 처리후, 모든 동물들을 인도적으로 희생시키고 림프 노드 및 다른 조직 시료를 수집하여, 포르말린에 고정시키고 전이성 흑생종 세포의 존재를 평가하기 위하여 조직병리학적 관찰을 행하였다. 임상적 독성 사인(clinical toxic sign)과 증세는 6주 투여 후에 평가하였다. 종양의 크기와 사망개체수는 실험기간의 끝무렵 평가하였다. 본 실시예의 결과는 MANS-관련 펩티드는 마우스 흑색종 모델에서 종양의 전이를 억제함을 나타내었다.
Tumor scoring was done weekly. After 6 weeks of treatment, all animals were humanely sacrificed, lymph nodes and other tissue samples were collected, fixed in formalin, and histopathological observations were made to assess the presence of metastatic melanoma cells. Clinical toxic signs and symptoms were evaluated after 6 weeks of administration. Tumor size and number of dead individuals were evaluated at the end of the experimental period. The results of this example showed that the MANS-related peptide inhibited tumor metastasis in the mouse melanoma model.

암세포에서의 MARCKS의 siRNA 넉다운
MARCKS siRNA knockdown in cancer cells

본 실시예는 암세포의 이동에 대한 MARCKS 발현의 siRNA 넉다운의 영향을 알아보기 위하여 수행되었다. PC-9 또는 A-549 사람 폐 암세포를 플라스틱제 웰에 접종하고, 세포가 70%를 채울 때까지 배양하였다. 그런 다음, 세포를 Ambion(Austin, TX)으로부터 입수한 100nM MARCKS siRNA 또는 대조구 siRNA(100nM)로 DharmaFECT DuoTransfection 시약(Dharmacon, Lafayette, CO)을 이용하여 형질도입시켰다. 72시간이 경과한 후, 세포를 수집하고 MARCKS 특이 항체를 이용한 면역블롯 분석을 위하여 SDS/PAGE로 분리하였다. 내생 MARCKS의 siRNA-유도 하향조절(down regulation)을 확인하기 위하여, 웨스턴 블롯 분석을 실시하였다. 도 16 및 도 17에서 보듯이, MARCKS 단백질은 대조구 siRNA로 처리한 세포와 대비하여, kfid PC9 세포에서 거의 60%(도 16), A549 세포에서 거의 50%(도 17) 넉다운되었다. This Example was performed to investigate the effect of siRNA knockdown of MARCKS expression on the migration of cancer cells. PC-9 or A-549 human lung cancer cells were inoculated into plastic wells and cultured until the cells filled 70%. Then, cells were transduced using DharmaFECT DuoTransfection reagent (Dharmacon, Lafayette, CO) with 100nM MARCKS siRNA or control siRNA (100nM) obtained from Ambion (Austin, TX). After 72 hours, cells were collected and separated by SDS/PAGE for immunoblot analysis using MARCKS specific antibody. To confirm siRNA-induced down regulation of endogenous MARCKS, Western blot analysis was performed. As shown in FIGS. 16 and 17, the MARCKS protein was knocked down almost 60% in kfid PC9 cells (FIG. 16) and almost 50% in A549 cells (FIG. 17) compared to cells treated with control siRNA.

세포이동에 대한 siRNA에 의한 MARCKS 넉다운의 효과를 트랜스웰 분석(transwell assay)에 의하여 확인하였다. siRNA 넉다운에 이어, PC-9 또는 A549 세포를 10% FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 37℃, 5% CO2의 조건하에 배양하였다. 이동분석을 위해 Transwell® 플레이트(24-웰, 8-㎛ 공경)를 사용하였다. 하부 챔버는 600㎕ 기본 배지 + 10% FBS를 함유하였다. 세포(1 x 105)를 100㎕ 기본 배지 + 1% BSA에 현탁시켜 상부 챔버에 가하고; 플레이트를 12시간 배양하였다. 여과막의 하부면으로 이동하는 세포를 헤막토실린으로 염색하고 계수하였다. 막 1개당 최소 3개의 분리된 부분이 현미경으로 관찰되었다.The effect of MARCKS knockdown by siRNA on cell migration was confirmed by transwell assay. Following siRNA knockdown, PC-9 or A549 cells were cultured in RPMI 1640 medium containing 10% FBS at 37° C. and 5% CO 2 . Transwell® plates (24-well, 8-µm pore diameter) were used for migration analysis. The lower chamber contained 600 μl basal medium + 10% FBS. Cells (1 x 10 5 ) were suspended in 100 μl basal medium + 1% BSA and added to the upper chamber; The plate was incubated for 12 hours. Cells moving to the lower surface of the filtration membrane were stained with hemactocillin and counted. At least three separate portions per membrane were observed under the microscope.

본 실시예의 결과를 도 18 및 도 19에 나타내었다. MARCKS siRNA의 처리는 PC-9 및 A549 세포 둘 다의 이동을 유의적으로 억제하였다. MARCKS의 siRNA 넉다운은 PC9 세포주의 세포이동을 90% 감소시켰고(도 18), A549 세포주의 세포이동을 거의 50% 감소시켰다(도 19). 따라서, MARCKS 발현의 억제는 암세포의 이동을 유의적으로 감소시키는 결과를 가져왔다.
18 and 19 show the results of this example. Treatment of MARCKS siRNA significantly inhibited the migration of both PC-9 and A549 cells. The siRNA knockdown of MARCKS reduced the cell migration of the PC9 cell line by 90% (FIG. 18) and the cell migration of the A549 cell line by almost 50% (FIG. 19 ). Therefore, inhibition of MARCKS expression resulted in a significant reduction in the migration of cancer cells.

microRNA21의 억제는 암세포의 이동을 증가시킨다.
Inhibition of microRNA21 increases the migration of cancer cells.

MicroRNA 21(miR21)은 세포에서 MARCKS의 수준을 조절한다. 본 실시예에서는 PC9 사람의 폐 암세포를 50nM 또는 100nM의 miR21 억제제 또는 miR21 유사체, 또는 담체만의 음성 대조구로 형질도입하였다. MARCKS의 수준을 웨스턴 블롯에 의해 48시간 후에 측정하였다. 50nM miR21 억제제의 처리는 세포에서 약 2.5배 만큼 MARCKS의 수준을 증가시켰다(도 20). 이러한 값은 12시간 동안 이동 챔버(migration chamber)에 위치시켰을때 세포의 이동능력(migration capability)과 일치하였다. 50nM 또는 100nM의 miR21 억제제로 세포를 처리하면, MARCKS 수준의 증가와 상관되어 이동이 증가되는 반면, 세포를 miR21 유사체로 처리하면 MARCKS 수준의 감소와 상관되어 이동이 감소하였다(도 21). 세포를 HiPerfect 담체 대조구로 처리하면, 처리하지 않은 PC9 세포와 비교하여 같은 수준의 이동을 나타내었다(도 21). 본 실시예의 결과는 miR21 억제를 통한 MARCKS 발현의 증가는 암세포의 이동을 증가시킴을 나타낸다. 또한, miR21의 활성화는 PC9 세포의 이동을 감소시켰다. MicroRNA 21 (miR21) regulates the level of MARCKS in cells. In this example, PC9 human lung cancer cells were transduced with a 50nM or 100nM miR21 inhibitor or miR21 analogue, or a carrier-only negative control. The level of MARCKS was measured after 48 hours by Western blot. Treatment of the 50nM miR21 inhibitor increased the level of MARCKS in cells by about 2.5 times (FIG. 20). These values matched the migration capability of cells when placed in a migration chamber for 12 hours. Treatment of cells with a 50nM or 100nM miR21 inhibitor correlated with an increase in MARCKS levels, resulting in increased migration, whereas treatment with cells with a miR21 analog correlated with a decrease in MARCKS levels and decreased migration (FIG. 21 ). When the cells were treated with the HiPerfect carrier control, they showed the same level of migration compared to the untreated PC9 cells (FIG. 21). The results of this example indicate that the increase in MARCKS expression through miR21 inhibition increases the migration of cancer cells. In addition, the activation of miR21 reduced the migration of PC9 cells.

이들 결과를 종합하면, 본 실시예는 암세포의 이동, 암세포의 전이는 MANS-관련 펩티드 및 억제 microRNA(즉, miR21 유사체)를 포함하는 서로 다른 MARCKS 억제 수단을 이용하여 MARCKS를 표적으로 하여 억제할 수 있음을 나타낸다.
Taken together these results, in this example, the migration of cancer cells and metastasis of cancer cells can be inhibited by targeting MARCKS using different MARCKS inhibitory means including MANS-related peptides and inhibitory microRNAs (i.e., miR21 analogs). Indicates that there is.

달리 정의하지 않는 한, 본 명세서의 모든 기술 및 학술 용어는 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 이해되는 것과 같은 의미를 가진다. 본 명세서에 기술된 방법 및 재료와 유사하거나 상응하는 어떠한 방법 및 재료도 본 발명을 실시 또는 시험하는데 사용될 수 있으나, 바람직한 방법 및 재료가 본 명세서에 기술되었다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물이 상기 간행물이 언급된 본 발명의 특이적 측면을 개시하고 설명하기 위한 목적으로, 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.
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이상 본 발명을 그들의 특이적인 실시태양에 의해 기술하였으나, 더욱 변형이 가능하고, 이러한 응용은, 일반적으로, 발명의 원리를 따르고, 본 발명이 속하는 기술분야 내의 공지되거나 통상적인 실시범위 내 및 상술하고 첨부된 특허청구범위의 범주 내의 기본적인 특징에 응용될 수 있는 것과 같이 본 명세서의 개시로부터 출발하는 어떠한 변형, 이용, 또는 본 발명의 적용을 망라하는 것으로 이해될 것이다.
Although the present invention has been described above by their specific embodiments, further modifications are possible, and such applications generally follow the principles of the invention, and are within the scope of known or common practice within the technical field to which the present invention pertains, and detailed It will be understood to encompass any modifications, uses, or applications of the invention starting from the disclosure of this specification as may be applied to basic features within the scope of the appended claims.

<110> BIOMARCK PHARMACEUTICALS, LTD. NORTH CAROLINA STATE UNIVERSITY <120> INHIBITORS OF METASTASIS <130> FP1503/CG/US <150> US 61/808,966 <151> 2013-04-05 <160> 235 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 10 15 Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 20 <210> 2 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 10 15 Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val 20 <210> 3 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 10 15 Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 20 <210> 4 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 10 15 Arg Pro Gly Glu Ala Ala 20 <210> 5 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 10 15 Pro Gly Glu Ala Ala Val 20 <210> 6 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gln 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NORTH CAROLINA STATE UNIVERSITY <120> INHIBITORS OF METASTASIS <130> FP1503/CG/US <150> US 61/808,966 <151> 2013-04-05 <160> 235 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 10 15 Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 20 <210> 2 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 10 15 Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val 20 <210> 3 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 10 15 Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 20 <210> 4 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 10 15 Arg Pro Gly Glu Ala Ala 20 <210> 5 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 10 15 Pro Gly Glu Ala Ala Val 20 <210> 6 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gln 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<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala 1 5 10 <210> 103 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala 1 5 10 <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val 1 5 10 <210> 105 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 1 5 10 <210> 106 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys 1 5 10 <210> 107 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly 1 5 10 <210> 108 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu 1 5 10 <210> 109 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala 1 5 10 <210> 110 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala 1 5 10 <210> 111 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111 Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala 1 5 10 <210> 112 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 112 Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 10 <210> 113 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113 Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 10 <210> 114 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114 Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro 1 5 10 <210> 115 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115 Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly 1 5 10 <210> 116 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 116 Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu 1 5 10 <210> 117 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala 1 5 10 <210> 118 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 118 Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala 1 5 10 <210> 119 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 119 Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val 1 5 10 <210> 120 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 120 Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 1 5 10 <210> 121 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 121 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala 1 5 <210> 122 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 122 Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys 1 5 <210> 123 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 123 Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly 1 5 <210> 124 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 124 Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu 1 5 <210> 125 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125 Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala 1 5 <210> 126 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126 Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 127 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 127 Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala 1 5 <210> 128 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 128 Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 <210> 129 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 129 Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 <210> 130 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130 Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro 1 5 <210> 131 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 131 Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly 1 5 <210> 132 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 132 Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu 1 5 <210> 133 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 133 Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala 1 5 <210> 134 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 134 Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 135 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 135 Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val 1 5 <210> 136 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 136 Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 1 5 <210> 137 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 137 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala 1 5 <210> 138 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 138 Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala 1 5 <210> 139 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 139 Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys 1 5 <210> 140 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 140 Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly 1 5 <210> 141 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 141 Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu 1 5 <210> 142 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 142 Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala 1 5 <210> 143 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 143 Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 144 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 144 Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala 1 5 <210> 145 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 145 Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 <210> 146 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 146 Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 <210> 147 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 147 Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro 1 5 <210> 148 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 148 Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly 1 5 <210> 149 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 149 Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu 1 5 <210> 150 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 150 Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala 1 5 <210> 151 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 151 Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 152 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 152 Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val 1 5 <210> 153 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 153 Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 1 5 <210> 154 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 154 Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr 1 5 <210> 155 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 155 Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala 1 5 <210> 156 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 156 Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala 1 5 <210> 157 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 157 Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys 1 5 <210> 158 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 158 Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly 1 5 <210> 159 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 159 Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu 1 5 <210> 160 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 160 Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala 1 5 <210> 161 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 161 Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 162 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 162 Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala 1 5 <210> 163 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 163 Lys Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 <210> 164 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 164 Gly Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 <210> 165 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 165 Glu Ala Ala Ala Glu Arg Pro 1 5 <210> 166 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 166 Ala Ala Ala Glu Arg Pro Gly 1 5 <210> 167 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 167 Ala Ala Glu Arg Pro Gly Glu 1 5 <210> 168 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 168 Ala Glu Arg Pro Gly Glu Ala 1 5 <210> 169 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 169 Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 170 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 170 Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val 1 5 <210> 171 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 171 Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala 1 5 <210> 172 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 172 Gly Ala Gln Phe Ser Lys 1 5 <210> 173 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 173 Ala Gln Phe Ser Lys Thr 1 5 <210> 174 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 174 Gln Phe Ser Lys Thr Ala 1 5 <210> 175 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 175 Phe Ser Lys Thr Ala Ala 1 5 <210> 176 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 176 Ser Lys Thr Ala Ala Lys 1 5 <210> 177 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 177 Lys Thr Ala Ala Lys Gly 1 5 <210> 178 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 178 Thr Ala Ala Lys Gly Glu 1 5 <210> 179 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 179 Ala Ala Lys Gly Glu Ala 1 5 <210> 180 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 180 Ala Lys Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 181 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 181 Lys Gly Glu Ala Ala Ala 1 5 <210> 182 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 182 Gly Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 <210> 183 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 183 Glu Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 <210> 184 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 184 Ala Ala Ala Glu Arg Pro 1 5 <210> 185 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 185 Ala Ala Glu Arg Pro Gly 1 5 <210> 186 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 186 Ala Glu Arg Pro Gly Glu 1 5 <210> 187 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 187 Glu Arg Pro Gly Glu Ala 1 5 <210> 188 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 188 Arg Pro Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 189 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 189 Pro Gly Glu Ala Ala Val 1 5 <210> 190 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 190 Gly Glu Ala Ala Val Ala 1 5 <210> 191 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 191 Gly Ala Gln Phe Ser 1 5 <210> 192 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 192 Ala Gln Phe Ser Lys 1 5 <210> 193 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 193 Gln Phe Ser Lys Thr 1 5 <210> 194 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 194 Phe Ser Lys Thr Ala 1 5 <210> 195 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 195 Ser Lys Thr Ala Ala 1 5 <210> 196 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 196 Lys Thr Ala Ala Lys 1 5 <210> 197 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 197 Thr Ala Ala Lys Gly 1 5 <210> 198 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 198 Ala Ala Lys Gly Glu 1 5 <210> 199 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 199 Ala Lys Gly Glu Ala 1 5 <210> 200 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 200 Lys Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 201 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 201 Gly Glu Ala Ala Ala 1 5 <210> 202 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 202 Glu Ala Ala Ala Glu 1 5 <210> 203 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 203 Ala Ala Ala Glu Arg 1 5 <210> 204 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 204 Ala Ala Glu Arg Pro 1 5 <210> 205 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 205 Ala Glu Arg Pro Gly 1 5 <210> 206 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 206 Glu Arg Pro Gly Glu 1 5 <210> 207 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 207 Arg Pro Gly Glu Ala 1 5 <210> 208 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 208 Pro Gly Glu Ala Ala 1 5 <210> 209 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 209 Gly Glu Ala Ala Val 1 5 <210> 210 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 210 Glu Ala Ala Val Ala 1 5 <210> 211 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 211 Gly Ala Gln Phe One <210> 212 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 212 Ala Gln Phe Ser One <210> 213 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 213 Gln Phe Ser Lys One <210> 214 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 214 Phe Ser Lys Thr One <210> 215 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 215 Ser Lys Thr Ala One <210> 216 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 216 Lys Thr Ala Ala One <210> 217 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 217 Thr Ala Ala Lys One <210> 218 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 218 Ala Ala Lys Gly One <210> 219 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 219 Ala Lys Gly Glu One <210> 220 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 220 Lys Gly Glu Ala One <210> 221 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 221 Gly Glu Ala Ala One <210> 222 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 222 Glu Ala Ala Ala One <210> 223 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 223 Ala Ala Ala Glu One <210> 224 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 224 Ala Ala Glu Arg One <210> 225 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 225 Ala Glu Arg Pro One <210> 226 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 226 Glu Arg Pro Gly One <210> 227 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 227 Arg Pro Gly Glu One <210> 228 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 228 Pro Gly Glu Ala One <210> 229 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 229 Gly Glu Ala Ala One <210> 230 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 230 Glu Ala Ala Val One <210> 231 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 231 Ala Ala Val Ala One <210> 232 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RNS missense control peptide <400> 232 Gly Thr Ala Pro Ala Ala Glu Gly Ala Gly Ala Glu Val Lys Arg Ala 1 5 10 15 Ser Ala Glu Ala Lys Gln Ala Phe 20 <210> 233 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RNS2 missense control peptide <400> 233 Gly Lys Ala Ser Gln Phe Ala Lys Thr Ala 1 5 10 <210> 234 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated MANS peptide fragment <400> 234 Arg Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys 1 5 10 <210> 235 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated MANS peptide fragment <400> 235 Arg Ala Lys Gly Glu 1 5

Claims (37)

MARCKS 단백질(미리스토일화 알라닌-풍부 C-키나제 기질, Myristoylated Alanine-Rich C-Kinase Substrate)-억제 화합물을 유효성분으로 하고, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물에 있어서,
상기 MARCKS 단백질-억제 화합물은 서열번호 106, 121, 219 및 234로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 서열을 가지는 펩티드이고,
상기 암은 고형 암인 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
A pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer comprising a MARCKS protein (myristoylated alanine-rich C-kinase substrate, Myristoylated Alanine-Rich C-Kinase Substrate)-inhibiting compound as an active ingredient, and a pharmaceutically acceptable carrier In,
The MARCKS protein-inhibiting compound is a peptide having a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 106, 121, 219 and 234,
The cancer, characterized in that the solid cancer
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 삭제delete 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 펩티드의 N-말단 아미노산은 직쇄형(linear), 분지형(branched), 포화, 또는 불포화 C2(아세틸)~C24 지방족 카복실산의 아미드, 트리플루오르아세트산의 아미드, 벤조산의 아미드, 또는 C1~C24 지방족 알킬술폰산의 아미드 형태로 아실화(acylation)되거나; 또는,
상기 펩티드의 N-말단 아미노산의 N-말단 아민기가 C1~C24 지방족 알킬기, 직쇄형 2-(C1~C24 지방족 알킬)옥시에틸기, 또는 오메가-메톡시-폴리(에틸렌옥시)n-에틸기(n은 0 내지 10)로 알킬화(alkylation)되는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
The N-terminal amino acid of the peptide is linear, branched, saturated, or unsaturated C 2 (acetyl) to C 24 amide of aliphatic carboxylic acid, amide of trifluoroacetic acid, amide of benzoic acid, or C 1 ~ C 24 acylated to the amide form of aliphatic alkylsulfonic acid; or,
The N-terminal amine group of the N-terminal amino acid of the peptide is a C 1 to C 24 aliphatic alkyl group, a straight-chain 2-(C 1 to C 24 aliphatic alkyl) oxyethyl group, or an omega-methoxy-poly(ethyleneoxy)n- Characterized in that it is alkylated with an ethyl group (n is 0 to 10)
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 제5항에 있어서,
N-말단 아미드는 아세틸 또는 미리스토일기인 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 5,
N-terminal amide is an acetyl or myristoyl group, characterized in that
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 삭제delete 제1항에 있어서,
펩티드 용액 또는 현탁액의 흡입, 또는 건조분말 제제의 흡입에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
Characterized in that it is administered by inhalation of a peptide solution or suspension, or by inhalation of a dry powder formulation.
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 제1항에 있어서,
펩티드 액상 제제의 주사에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
Characterized in that it is administered by injection of a liquid peptide formulation
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 제1항에 있어서,
개체에 정맥내, 근육내, 복강내 주사, 또는 경구 또는 좌약에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
It is characterized in that it is administered to a subject by intravenous, intramuscular, intraperitoneal injection, or oral or suppository
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 고형 암은 폐암인 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
The solid cancer, characterized in that the lung cancer
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 삭제delete 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 펩티드는 0.01mg/kg/day 내지 10mg/kg/day의 용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
The peptide is characterized in that it is administered at a dose of 0.01mg/kg/day to 10mg/kg/day.
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 제1항에 있어서,
상기 펩티드는 0.5mg/kg/day 내지 2.5mg/kg/day의 용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
The peptide is characterized in that it is administered in a dose of 0.5mg/kg/day to 2.5mg/kg/day.
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
암세포의 전이를 억제하는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
Characterized in that it inhibits the metastasis of cancer cells
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 삭제delete 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
암의 치료에 유용한 부가적인 약물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
Characterized in that it further comprises an additional drug useful for the treatment of cancer
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 제25항에 있어서,
상기 부가적인 약물은 화학요법 약물인 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 25,
The additional drug, characterized in that the chemotherapy drug
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 제35항에 있어서,
상기 화학요법 약물은 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 다카바진(dacarbazine), 테모졸로마이드(temozolomide), 젬시타빈(gemcitabine), 카페시타빈(capecitabine), 클라드리빈(cladribine), 클로파라빈(clofarabine), 시타라빈(cytarabine), 플록스유리딘(floxuridine), 플루다라빈(fludarabine), 히드록시유레아(hydroxyurea), 메토트렉세이트(methotrexate), 페메트렉세드(pemetrexed), 펜토스타틴(pentostatin), 티오구아니딘(thioguanadine), 다우노루비신(daunorubicin), 독스루비신(doxurubicin), 에피루비신(epirubicin), 이다루비신(idarubicin), 토포테칸(topotecan), 이리노테칸(irinotecan), 에토포시드(etoposide), 에니포시드(eniposide), 콜히친(colchicine), 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 비노렐빈(vinorelbine), 파클리탁셀(paclitaxel), 및 도세탁셀(docetaxel)로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 35,
The chemotherapy drugs are carboplatin, cisplatin, oxaliplatin, cyclophosphamide, dacarbazine, temozolomide, gemcitabine, caffeine. Citabine, cladribine, clofarabine, cytarabine, floxuridine, fludarabine, hydroxyurea, methotrexate ), pemetrexed, pentostatin, thioguanadine, daunorubicin, doxurubicin, epirubicin, idarubicin, topo Topotecan, irinotecan, etoposide, eniposide, colchicine, vincristine, vinblastine, vinorelbine, paclitaxel ( paclitaxel), and docetaxel (docetaxel), characterized in that selected from the group consisting of
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
 제1항에 있어서,
상기 펩티드는 Ac-GAQFSKTAAK-OH (서열번호 106), Ma-GAQFSKTAAK-OH (서열번호 106), Ma-GAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 106), Ac-RGAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 234), Ac-GAQFSKTAA-OH (서열번호 121), Ma-RGAQFSKTAAK-NH2 (서열번호 234), 및 Ma-AKGE-OH (서열번호 219)로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는
암의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
The method of claim 1,
The peptides are Ac-GAQFSKTAAK-OH (SEQ ID NO: 106), Ma-GAQFSKTAAK-OH (SEQ ID NO: 106), Ma-GAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 106), Ac-RGAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 234), Ac -GAQFSKTAA-OH (SEQ ID NO: 121), Ma-RGAQFSKTAAK-NH 2 (SEQ ID NO: 234), and Ma-AKGE-OH (SEQ ID NO: 219), characterized in that selected from the group consisting of
Pharmaceutical composition for the treatment or prevention of cancer.
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