KR102177221B1

KR102177221B1 - 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 함유하는 항염증용 조성물

Info

Publication number: KR102177221B1
Application number: KR1020180131586A
Authority: KR
Inventors: 민유홍
Original assignee: 대구한의대학교산학협력단; (주)퓨어셀코리아
Priority date: 2018-10-31
Filing date: 2018-10-31
Publication date: 2020-12-14
Anticipated expiration: 2038-10-31
Also published as: KR20200050032A

Abstract

본 발명은 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 함유하는 항염증용 약학적, 건강기능식품, 건강식품 및 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 상기 조성물은 발효용담 추출물과 국화 추출물 및 박하 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물의 혼합 추출물을 함유함에 따라, 항염증 효능이 현저히 향상되는 효과가 있으며, 세포 생존율에 영향을 미치지 않아 부작용이 없으므로, 천연 항염증용 약학적, 건강기능식품, 건강식품 및 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 함유하는 항염증용 조성물{Anti-inflammatory composition containing mixed extracts of fermented Gentianae scabrae Radix, Chrysanthemum indicum and Mentha piperascens}

본 발명은 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 함유하는 항염증용 약학적, 건강기능식품, 건강식품 및 화장료 조성물에 관한 것이다.

염증은 외부의 물리·화학적 자극, 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염에 대한 생체의 방어 반응이다. 염증 반응은 선천성 면역 반응의 일부이며, 다른 동물에서처럼 인간의 선천성 면역 반응은 대식세포가 병원체에 특이적으로 존재하는 세포 표면의 패턴을 통해 비자기(non-self)로 인식하고 공격함으로써 시작된다. 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다.

염증 반응에는 다양한 생화학적 현상이 관여하지만, 특히 대식세포(Macrophage)는 화학적 자극 등에 의하여 산화질소(NO)와 여러 염증성 사이토카인을 생성하여 염증반응에서 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 산화질소는 산화질소의 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)의 작용에 의하여 L-아르기닌(L-arginine)으로부터 합성되는데, NOS는 몇 가지 이소 형태가 존재한다. 뇌에 존재하는 bNOS(brain NOS), 신경계에 존재하는 nNOS(neuronal NOS), 혈관 내피계에 존재하는 eNOS(endothelial NOS) 등은 체내에서 항상 일정수준으로 발현되고 있으며, 이들에 의해 소량 생성되는 일산화질소(NO)는 혈압 조절 작용, 신경 전달 작용, 학습, 기억 등과 관련된 다양한 생리 반응을 수행함으로써 인체의 항상성 유지에 중요한 역할을 수행한다. 이에 반하여 어떤 자극에 의하여 그 발현이 유도되는 iNOS(induced NOS)는 NO를 과다 생성하며, iNOS에 의해 과다 생성된 산화질소는 수퍼옥사이드(superoxide)와 반응하여 퍼옥시니트라이트(peroxynitrite)를 형성하고 이는 강력한 산화제로 작용하여 세포에 손상을 입힘으로써 염증과 암을 포함한 다양한 병리적 과정에 관여한다.

한편, 용담(Gentiana scabra)은 용담과 용담속(Gentiana)에 속하는 여러해살이풀로 한국, 중국, 일본 등에 분포한다. 한방에서 용담(Gentianae scabrae Radix)은 용담의 뿌리 및 뿌리 줄기로서, 쓰고 차가운 성질로 청열조습(淸熱燥濕)하는 효능이 있다.

국화(Chrysanthemum indicum)는 국화과 국화속 여러해살이풀로서 한국, 중국, 일본 등에 분포한다. 한방에서는 달고 쓰며 서늘한 성질로서 풍열사(風熱邪)를 제거하는 효능이 있어 종기 등 염증에 사용한다.

박하(Mentha piperascens)는 꿀풀과 박하속 식물로 전세계적으로 분포한다. 한방에서는 맵고 서늘한 성질로 풍열사(風熱邪)로 인한 각종 병증에 사용된다.

그러나 상기 용담, 국화 및 박하 모두를 혼합한 조성물의 항염증 효능에 관해서는 아직까지 연구된 바 없다. 이에 본 발명자들은 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 혼합하여 사용하는 경우 항염증 효능이 현저히 증가되는 상승 작용이 나타남을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

한국등록특허 제10-1910156호

본 발명의 목적은 항염증용 약학적, 건강기능식품, 건강식품 및 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 발효용담 추출물; 및 국화(Chrysanthemum indicum) 추출물 및 박하(Mentha piperascens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물;을 함유하고, 상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 약학적 조성물, 건강기능식품 조성물, 건강식품 조성물 및 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 함유하는 항염증용 조성물은 발효용담 추출물과 국화 추출물 및 박하 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물의 혼합 추출물을 함유함에 따라, 항염증 효능이 현저히 향상되는 효과가 있으며, 세포 생존율에 영향을 미치지 않아 부작용이 없으므로, 천연 항염증용 약학적, 건강기능식품, 건강식품 및 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

항염증용 약학적 조성물

본 발명은 발효용담 추출물; 및

국화(Chrysanthemum indicum) 추출물 및 박하(Mentha piperascens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물;을 함유하고,

상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 약학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)인 것일 수 있다. 본 발명의 일실시예에서는 건조효모(Saccaromyces cerevisiae KCCM 11201)를 이용하여 상기 용담을 발효시켜 용담발효 추출물을 제조하였다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 발효용담은 용담(Gentiana scabra)의 뿌리를 이용하는 것일 수 있고, 상기 국화는 국화(Chrysanthemum indicum)의 꽃을 이용하는 것일 수 있으며, 상기 박하는 박하(Mentha piperascens)의 잎을 이용하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명에서 사용되는 용어 "추출물(extract)"은 추출 대상 원료를 그대로 또는 분쇄하여 적절한 용매를 사용하여 침출액으로 수득하고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 상기 추출물은 통상의 기술분야에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게 용매 추출, 수증기 증류, 압착, 유지흡수, 휘발성 유기용제 추출, 또는 초임계 유체 추출, 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있고, 바람직하게는 용매 추출 또는 수증기 증류의 방법을 사용하는 것일 수 있다. 이때 추출물을 수득하기 위해 사용할 수 있는 적절한 용매로는 당업계에서 허용되는 용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있다. 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

바람직하게는 상기 국화 추출물 및 박하 추출물은 각각 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 다가 알코올, 탄화수소계 용매 또는 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출용매를 사용하여 추출한 것일 수 있고, 더 바람직하게는 물 또는 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 추출한 것일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 1.0:0.1~3.0의 부피비로 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 1.0:0.8~2.5의 부피비로 포함하는 것일 수 있다. 더 바람직하게는 발효용담 추출물 및 국화 추출물 또는 발효용담 추출물 및 박하 추출물을 각각 1:0.8~1.2의 부피비로 포함하거나 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 1:0.8~1.2:0.8~1.2의 부피비로 포함하는 것일 수 있고, 발효용담 추출물 및 국화 추출물 또는 발효용담 추출물 및 박하 추출물을 각각 1:0.9~1.1의 부피비로 포함하거나 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 1:0.9~1.1:0.9~1.1의 부피비로 포함하는 것이 특히 바람직하다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여, 경피 투여, 국소 투여, 흡입 투여, 비강내 투여, 정맥내 투여, 진피내 투여, 복강내 투여, 주사 및 피하 주사용 제형으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 제형으로 투여되는 것일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 왕불류행 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 크림, 겔, 스프레이, 점적제(drops) 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.01-1000 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.1-500 mg/kg/일 수 있고, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 유효성분으로서 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물 이외에 공지된 항염증제를 추가로 포함할 수 있다.

항염증용 건강기능식품 및 건강식품 조성물

본 발명은 발효용담 추출물; 및

상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 통상의 기술분야에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 통상의 기술분야에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한없이 제조될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 항염증제의 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.

또한, 본 발명은 발효용담 추출물; 및

상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 건강식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 조성물을 건강기능식품 조성물 또는 건강식품 조성물로 사용하는 경우, 상기 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 추출물로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있으며, 유효성분의 혼합량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품 또는 건강식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 건강기능식품 또는 건강식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 추출물로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 활성성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 건강기능식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.

항염증용 화장료 조성물

본 발명은 발효용담 추출물; 및

상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장수, 영양로션, 영양크림, 수분크림, 마사지크림, 에센스, 페이스트, 마스크팩, 패치, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌저, 오일, 파운데이션, 메이크업 베이스, 왁스 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 제형인 것일 수 있다. 상기한 성분 이외의 다른 성분들은 기타 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

상기 화장료 조성물은, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 오일, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 상기 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 추출물로부터 선택된 1종 이상의 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 이들 보조제는 화장품학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 상기 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 추출물로부터 선택된 1종 이상의 추출물이 0.1 내지 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.

본 발명에 따른 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 추출물로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명에 따른 발효용담 추출물, 국화 추출물, 박하 추출물은 천연 식물을 원료로 하므로 약학적, 식품 또는 화장료 조성물로 사용할 경우에도 일반적인 합성 화합물에 비하여 부작용이 덜할 수 있으므로, 안전하게 약학적 조성물, 건강기능식품, 건강식품 및 화장료 조성물에 포함되어 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 제조예 1> 발효용담 추출물의 제조

건조된 용담(Gentiana scabra Bunge) 뿌리(중국산, 휴먼허브) 50g, 정제수 500ml 및 건조효모 (Saccaromyces cerevisiae, 주식회사 조흥) 0.5g을 섞은 후, 30℃에서 100rpm으로 교반하며 24시간 배양하였다. 이를 여과지(Whatman No.1, USA)로 거른 후, 다시 0.2μm 필터(Sartorius, Germany)로 여과한 뒤 멸균하여 발효용담 추출물을 제조하였다.

< 제조예 2> 국화 추출물의 제조

건조된 국화(Chrysanthemum indicum) 꽃(경북 영천, 휴먼허브) 50g을 정제수 500ml와 섞은 후, 80℃로 가열하여 1시간 동안 추출하였다. 이를 여과지 (Whatman No.1, USA)로 거른 후, 다시 0.2μm 필터(Sartorius, Germany)로 여과한 뒤 멸균하여 국화 추출물을 제조하였다.

< 제조예 3> 박하 추출물의 제조

건조된 박하(Mentha piperascens) 잎(경북 영천, 휴먼허브) 50g을 각각 정제수 500ml와 섞은 후, 80℃로 가열하여 1시간 동안 추출하였다. 이를 여과지 (Whatman No.1, USA)로 거른 후, 다시 0.2μm 필터(Sartorius, Germany)로 여과한 뒤 멸균하여 박하 추출물을 제조하였다.

< 실험예 1> 세포 독성 측정

상기 제조예 1 내지 3의 방법으로 제조된 발효용담 추출물, 국화 추출물, 박하 추출물의 단독 추출물 및 2종 또는 3종의 추출물을 동일한 중량부로 혼합한 혼합 추출물에 대한 세포 독성을 평가하였다.

구체적으로, 마우스 대식세포주인 RAW264.7 세포(한국생명공학연구원)를 10% fetal bovine serum (Gibco, USA)가 함유된 DMEM 배지(Gibco, USA)를 이용하여 96well plate에 well당 5×10⁴의 세포수로 분주하고 24시간 배양한 후, 단독 추출물 또는 혼합 추출물 시료가 첨가된 serum-free DMEM 배지로 교환하였다. 상기 각 시료의 처리는 하기 표 1에 나타난 바와 같이, 단독 추출물은 배지 전체 부피 대비 0.5%(v/v)로 처리하고, 2종 또는 3종의 추출물 배합 시에도 각 추출물을 0.5%(v/v)씩 혼합하여 처리하였다. 24시간 배양한 후, MTT(thiazolyl blue tetrazolium bromide, Sigma Aldrich, USA)를 PBS(phosphate-buffered saline)에 5mg/ml이 되도록 녹인 용액을 각 공에 20μl씩 넣은 후 3시간 더 배양하였다. 배지를 제거하고, DMSO(dimethyl sulfoxide, Amresco, USA)를 100μl씩 넣어 생성된 formazan crystal을 녹인 후, 마이크로플레이트 리더(Infinite F200, Tecan, Switzerland)를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

단위:%(v/v)	발효용담 추출물 (제조예 1)	국화 추출물 (제조예 2)	박하 추출물 (제조예 3)
실시예 1	0.5	0.5	0.5
실시예 2	0.5	0.5	-
실시예 3	0.5	-	0.5
비교예 1	0.5	-	-
비교예 2	-	0.5	-
비교예 3	-	-	0.5

각 시료 처리에 따른 세포 생존율은 하기 식 1을 이용하여 확인하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

[식 1]

세포 생존율(%) = A/B × 100

(이때, A는 각 시료의 흡광도이고, B는 대조군(시료 무첨가)의 흡광도이다.)

시료		세포 생존율 (%)
실시예 1	발효용담 + 국화 + 박하	102.78±2.42
실시예 2	발효용담 + 국화	109.59±2.27
실시예 3	발효용담 + 박하	104.90±1.99
비교예 1	발효용담	111.89±3.28
비교예 2	국화	116.71±1.64
비교예 3	박하	103.06±0.75

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 각 추출물을 0.5%로 단독 처리 또는 혼합 처리시 RAW264.7 세포의 생존율이 모두 100% 이상으로 나타나, 본 발명에 따른 발효용담 추출물, 국화 추출물, 박하 추출물 및 이들의 2종 또는 3종 혼합 추출물은 독성이 없음을 확인하였다.

< 실험예 2> Nitric oxide(NO) 생성량 측정(항염증 활성 평가)

마우스 대식세포주인 RAW264.7 세포(한국생명공학연구원)를 10% fetal bovine serum이 함유된 DMEM 배지를 이용하여 96well plate에 well당 5×10⁴의 세포수로 분주하고 24시간 배양한 후, 단독 추출물 또는 혼합 추출물 시료가 첨가된 serum-free DMEM 배지로 교환하였다. 상기 각 시료의 처리는 상기 실험예 1과 동일하게 상기 표 1에 나타난 바와 같이, 단독 추출물은 배지 전체 부피 대비 0.5%(v/v)로 처리하고, 2종 또는 3종의 추출물 배합 시에도 각 추출물을 0.5%(v/v)씩 혼합하여 처리하였다. 1시간 후 여기에 lipopolysaccharide(Sigma Aldrich, USA)를 1μg/ml이 되도록 첨가하고 24시간 배양하였다. 배지 60μl와 Griess reagent (Sigma Aldrich, USA) 60μl를 섞고 10분후 마이크로플레이트 리더(Infinite F200, Tecan, Switzerland)를 이용하여 570nm 흡광도 측정을 하였다. 각 시료 처리에 따른 NO 생성 저해율은 하기 식 2를 이용하여 확인하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

[식 2]

NO 생성 저해율 (%) = [1-(A/B)] × 100

시료		NO 생성 저해율 (%)
실시예 1	발효용담 + 국화 + 박하	74.86±3.02
실시예 2	발효용담 + 국화	69.88±3.75
실시예 3	발효용담 + 박하	48.31±3.21
비교예 1	발효용담	29.16±0.71
비교예 2	국화	45.56±1.14
비교예 3	박하	11.78±1.11

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 발효용담 추출물, 국화 추출물 및 박하 추출물을 2종 또는 3종 혼합한 실시예 1 내지 3의 혼합 추출물은 모두 비교예 1 내지 3의 단독 추출물보다 높은 NO 생성 저해율을 나타내었고, 특히, 실시예 1의 발효용담, 국화 및 박하 추출물은 74.86%의 가장 높은 NO 생성 저해율을 나타내었다.

따라서, 발효용담, 국화 및 박하 추출물을 혼합하면 항염증 활성에 대한 상승효과가 나타남을 확인하였고, 이로부터 상기 혼합추출물을 새로운 항염증용 조성물 및 피부진정 효능의 화장료 조성물로 유용하게 사용할 수 있음을 확인하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

발효용담 추출물; 및
국화(Chrysanthemum indicum) 추출물 및 박하(Mentha piperascens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물;을 함유하고,
상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 약학적 조성물로서 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 국화 추출물 및 박하 추출물은 각각 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 다가 알코올, 탄화수소계 용매 또는 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 1.0:0.1~3.0의 부피비로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제4항에 있어서,
상기 발효용담 추출물 및 국화 추출물 및 박하 박하 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물을 1.0:0.8~2.5의 부피비로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
발효용담 추출물; 및
국화(Chrysanthemum indicum) 추출물 및 박하(Mentha piperascens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물;을 함유하고, 상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물로서 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
발효용담 추출물; 및
국화(Chrysanthemum indicum) 추출물 및 박하(Mentha piperascens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물;을 함유하고, 상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 건강식품 조성물로서 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 항염증용 건강식품 조성물.
발효용담 추출물; 및
국화(Chrysanthemum indicum) 추출물 및 박하(Mentha piperascens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물;을 함유하고, 상기 발효용담 추출물은 용담(Gentiana scabra)을 효모로 발효시킨 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 화장료 조성물로서 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 항염증용 화장료 조성물.
제8항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 화장수, 영양로션, 영양크림, 수분크림, 마사지크림, 에센스, 페이스트, 마스크팩, 패치, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌저, 오일, 파운데이션, 메이크업 베이스, 왁스 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.