KR102022338B1

KR102022338B1 - 당과 아미노산을 함유하는 안정한 수액제 조성물

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Publication number: KR102022338B1
Application number: KR1020180091284A
Authority: KR
Inventors: 이건무; 강희영; 이인성; 이준성; 정미분
Original assignee: 이건무; 강희영; 이인성; 이준성; 정미분
Priority date: 2018-08-06
Filing date: 2018-08-06
Publication date: 2019-09-18
Anticipated expiration: 2038-08-06
Also published as: WO2020032439A1; EP3834818A4; US20210170030A1; CN112543628A; CN112543628B; EP3834818A1; EP3834818B1

Abstract

아미노산과 당의 혼합 시에 변색이 되고 안정성이 감소하는 문제점을 해결한 아미노산과 당의 안정한 혼합 조성물을 개시한다.

Description

당과 아미노산을 함유하는 안정한 수액제 조성물 {A stable infusion solution comprising saccharide and amino acid}

본 발명은 당과 아미노산을 함유하는 안정한 수액제 조성물에 관한 것이다. 당과 아미노산을 수액제의 성분으로서 혼합하여 두면, 시간이 경과함에 따라 안정성이 감소하고 변색이 되는 단점이 있다. 본 발명에 따른 당과 아미노산의 혼합 수액제 조성물은 이러한 단점을 크게 감소시켜, 보관 안정성을 향상시키고, 인체의 필수 영양소인 당과 아미노산의 동시 공급을 가능하게 하고자 한 것이다.

당과 같은 탄수화물은 에너지를 생산하는 것 이외에도 면역계 조절, 호르몬 분비, 생체 내 주요 신호전달 등 인체의 필수적인 생리기능에 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 인체의 건강상태를 유지하기 위해 특정 당분의 공급이 필요하다. 특히, 글루코스(Glucose; Glu), 갈락토스(Galactose; Gal), 만노스(Mannose; Man), 푸코스(Fucose; Fuc), 자일로스(Xylose; Xy), N-아세틸글루코사민(N-Acetylglucosamine; GlcNAc), N-아세틸갈락토사민 (N-Acetylgalactosamine; GalNAc), N-아세틸뉴라민산(N-Acetylneuraminic acid; NANA 또는 시알산(sialic acid)의 8가지 당은 체내에서 생리활성유지에 매우 중요한 역할을 담당하고 있어 이들을 필요한 만큼 공급하는 것은 인체 건강 유지에 매우 중요하다.

또한, 아미노산은 체내에서 근육의 원료물질로 에너지를 발생시키고, 신진대사를 원활히 하여 인체조직의 재생과 회복을 돕는 역할을 하기 때문에 인체의 건강상태를 유지하기 위해 적절한 아미노산의 공급이 필수적이다. 이에 따라 질병의 예방과 치료에 있어 많은 경우에 당과 아미노산이 동시에 필요하다.

따라서 당과 아미노산을 혼합하여 동시에 투여하고자 하였으나, 마이야르 반응(Maillard reaction)이라고 알려진 갈변반응 문제 때문에 기존에는 각각의 아미노산 수액제와 당 수액제를 사용 시에 조제과정에서 혼합하여 사용하였다(용시 제조). 하지만, 이러한 방법은 조제과정에서 균 감염의 우려가 있고, 많은 시간이 소요된다는 단점이 있었다. 이러한 측면에서 볼 때 안정성이 보장된 당과 아미노산의 혼합 수액제를 공급할 수 있다면 환자에게 효율적으로 양질의 영양수액 요법을 가능하게 할 것이다.

한국 공개특허공보 제10-2011-0131699호

본 발명은 당과 아미노산의 혼합 시에 일어나는 반응으로 인하여 안정성이 감소하고 변색이 되는 문제를 해결하여, 혼합 시에도 안정한 당과 아미노산의 혼합 수액제를 제공하기 위한 것이다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명에서는 당과 아미노산 사이의 마이야르 반응을 억제하고 안정성을 강화할 수 있는 안정화제를 발굴하여, 안정성 및 유효성이 향상된 당과 아미노산의 안정한 혼합 조성물을 제조하고자 한다.

본 발명에 따른 당과 아미노산의 안정한 혼합 조성물은 당과 아미노산의 혼합 시에 발생하는 변색과 안정성 저하의 문제를 크게 개선시킨 것으로서, 당과 아미노산의 동시 공급을 가능하게 하여 효율적으로 인체의 필수적인 영양소를 공급할 수 있다.

특히, 수액제는 제조 후에 즉시 사용되는 것이 아니라, 의료기관에서 대량으로 상당 기간 보관하면서 사용하는 것이 일반적이기 때문에(일반적으로 병원 또는 의원에서는 12~24개월간 보관하면서 사용하는 실정이다), 보관 안정성은 수액제의 제조에 있어서 매우 중요하게 고려하여야 할 요소이다.

따라서, 본 발명자들은 보관 안정성을 획기적으로 향상시키고자 연구하여, 당과 아미노산의 안정한 혼합 조성물을 제조할 수 있게 되었다.

도 1은 실험예 1에 따라, 8가지 당과 아미노산의 혼합액에 서로 다른 안정화제 후보군을 첨가함에 따른 혼합액의 측정된 삼투압몰농도 변화율(%)을 비교한 것이다.
도 2는 위 도 1의 삼투압몰농도 변화율(%)의 그래프로부터 선형 회귀 분석을 통하여 삼투압몰농도가 20% 변화하는데 걸리는 시간을 예측한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 실험예 2에 따라, 8가지 당과 아미노산의 혼합액에, 실험예 1에서 안정화 효과를 보였던 안정화제인 베타-사이클로덱스트린과 아미노구아니딘의 비율을 달리하여 혼합 첨가함에 따른 혼합액의 삼투압몰농도 변화율(%)을 비교한 것이다.
도 4는 위 도 3의 삼투압몰농도 변화율(%)의 그래프로부터 선형 회귀 분석을 통하여 삼투압몰농도가 20% 변화하는데 걸리는 시간을 예측한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 실험예 3에 따라, 8가지 당과 아미노산의 혼합액에, 실험예 2에서 안정화 효과의 영향이 더 크다고 판명된 안정화제인 아미노구아니딘의 양을 달리하여 첨가함에 따른 혼합액의 삼투압몰농도 변화율(%)을 비교한 것이다.
도 6은 위 도 5의 삼투압몰농도 변화율(%)의 그래프로부터 선형 회귀 분석을 통하여 삼투압몰농도가 20% 변화하는데 걸리는 시간을 예측한 결과를 나타낸 것이다.

본 발명은 당과 아미노산의 안정한 혼합 수액제 조성물에 관한 것이다.

인체의 다양한 생리기능에 중요한 역할을 하여 건강증진에 기여하는 8가지 당과 아미노산에 특정 안정화제를 조합하여 안정성을 획기적으로 향상시킨 혼합물을 제조함으로써 당과 아미노산의 동시 공급을 가능하게 한다.

본 발명의 혼합 조성물은 1종 이상의 아미노산과, 글루코스, 갈락토스, 만노스, 푸코스, 자일로스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민, N-아세틸뉴라민산의 8가지 당을 포함하는, 아미노산과 당이 혼합된 형태의 영양수액제이다.

위에 열거한 당은 당단백질 합성에 필수불가결한 주요 당 성분이다. 단백질 중 약 50% 이상에 당쇄가 붙어있는 것으로 알려져 있으며, 이들 중 대부분은 특정 구조의 당이 결합해야만 단백질의 고유기능이 발현된다. 또한, 결합된 당쇄는 단백질 자체의 기능을 증대 또는 억제 시키기도 하여 세포 성장 및 면역 작용 등을 더욱 더 세밀하게 조절하는 역할을 수행한다.

예를 들면, 글루코스(포도당)는 체내에서 대표적 에너지원으로 작용하고, 갈락토스는 서로 다른 종 간의 구별인자로 기능하며, 만노스는 혈당조절, 면역작용 및 항염증 효과를 갖는다. 항체에 붙어있는 푸코스는 항체의존성 세포독성(Antibody Dependent Cellular Cytotoxicity; ADCC)의 활성을 조절하는데 매우 중요한 역할을 하며, 뼈의 성장에도 핵심적 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 자일로스는 세포막 점액에 병원균의 결합을 억제하는 항균, 항박테리아, 항암물질로 작용하며, N-아세틸글루코사민은 연골재생산에 도움을 준다. N-아세틸갈락토사민은 종양세포의 성장억제, 류마티스성 관절염 완화, 노화억제의 기능을 하며, N-아세틸뉴라민산은 항바이러스 작용 및 뇌 성장에 결정적 역할을 한다.

또한, 아미노산들은 체내에서 근육의 원료물질로 사용되어 에너지를 발생시키고, 신진대사를 원활히 하여 인체 조직의 재생과 회복을 돕는 역할을 한다. 따라서 앞서 기술한 8가지 당을 아미노산 수액제에 혼합된 형태로 공급함으로써, 효율적인 영양수액 요법을 가능하게 하고, 인체의 면역계 및 건강을 더욱 증진시킬 수 있다.

그러나, 위에서 언급한 8가지 당과 아미노산을 함께 포함하는 수액제를 제조하는 것은 매우 어렵다. 이는 당과 아미노산 사이의 반응 문제 때문이다. 따라서 본 발명에서는 당과 아미노산 사이의 반응을 억제하고 안정성을 향상시키는 안정화제를 발굴해 당과 아미노산의 혼합 시에 발생하는 문제를 해결하고자 하였다.

본 발명에서는 에틸렌디아민테트라아세트산(Ethylenediamine tetra acetic acid; EDTA), 트리폴리인산나트륨(Sodium tripolyphosphate), L-아스파르트산(L-Aspartic Acid), 베타-사이클로덱스트린(β-Cyclodextrin), 타우린(Taurine), 피리독사민(Pyridoxamine), 아미노구아니딘 (Aminoguanidine)을 당과 아미노산의 혼합 조성물에 첨가할 안정화제 후보물질로 선정한 후, 안정성을 시험하였다.

본 발명을 통해 당과 아미노산의 혼합 시에도 안정성을 오랜 기간 유지할 수 있도록 해주는 안정화제를 발굴하였으며, 안정성을 비교하는 방법으로는 시간에 따른 기저치 대비 삼투압몰농도 변화율을 비교하는 방법과 0~5까지의 Color scale을 설정하여 변색 정도를 비교하는 방법을 사용하였다. 이는 당과 아미노산의 혼합물에 적절한 안정화제를 첨가하여 안정화 효과가 발생하면 물질의 분해가 적게 일어나게 되어 안정화제를 첨가하지 않은 대조군보다 삼투압몰농도 변화가 적게 나타나게 되는 것을 이용한 방법이다.

본 발명자가 발굴한 안정화제를 첨가한 당/아미노산 혼합물은, 안정화제를 첨가하지 않은 당/아미노산의 혼합물 또는 다른 안정화제를 첨가한 당/아미노산 혼합물보다 시간에 따른 변색 정도가 크게 감소하였으며, 삼투압몰농도 변화율도 상당히 큰 폭으로 감소하였다.

본 발명에서 상기 아미노산은 단백질을 구성할 수 있는 20종의 아미노산 중에서 1종 이상 선택될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만, 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위하여 제공되는 것이다.

실험예 1. 서로 상이한 안정화제 후보물질을 함유하는 아미노산 수액제와 당의 혼합 조성물의 제조

가. 재료 및 기기

시그마-알드리치 (Sigma-Aldrich, 세인트루이스, 미주리주, 미국)사로부터 입수한 글루코스, 갈락토스, 만노스, 푸코스, 자일로스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민, 및 N-아세틸뉴라민산의 8가지의 당을 사용하였다.

위의 8가지 당을 주사용수(Water for injection, 중외제약)에 녹인 후, 시판 중인 아미노산 수액제인 89.4% 푸로아민주(Proamin injection, 한올바이오파마㈜)에 혼합하여 제조하였다. 푸로아민주에는 이소류신, 류신, 리신아세테이트, 메티오닌, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판, 발린, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴산, 시스테인, 글루타민산, 히스티딘, 프롤린, 세린, 티로신, 글리신 등의 아미노산이 함유되어 있다.

시료의 pH를 조정하기 위하여 1N 농도의 NaOH 용액(삼전순약공업, samchun pure chemical Co.)을 사용하였다. 8가지 당과 아미노산이 함유된 수액제들의 pH를 pH 측정기(METTLER TOLEDO Seven Compact pH/Ion)를 이용하면서 6.0 정도로 맞추었다.

아미노산과 당의 혼합 조성물에 첨가할 안정화제 후보물질로는, 98.0% 에틸렌디아민테트라아세트산 디나트륨 염(Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate; EDTA-2Na dihydrate, 대정화금(주)), 85.0% 트리폴리인산나트륨(Sodium tripolyphosphate, Sigma-Aldrich), L-아스파르트산(L-Aspartic Acid, Sigma-Aldrich), 97% 베타-사이클로덱스트린(ßSigma-Aldrich), 99% 타우린(Taurine, Sigma-Aldrich), 피리독사민(Pyridoxamine, Sigma-Aldrich), 아미노구아니딘(Aminoguanidine, Sigma-Aldrich)을 사용하였다.

안정화제 후보물질을 첨가한 후, 안정화 효과를 평가하기 위하여 시간에 따른 기저치 대비 삼투압몰농도 변화율(%)을 측정하고 Color scale을 이용한 색 변화 정도를 측정하였다. 삼투압몰농도는 삼투압측정기 (OSMOMAT 030, Cryoscopic osmometer)를 이용하여 측정하였으며, 색의 변화는 육안으로 관찰하여 갈변이 심화될수록 숫자가 증가하는 0~5까지의 Color scale로 표시하였다.

나. 실험 방법

하기 표 1과 같이 푸로아민주와 8가지 당의 혼합액 조성물 F1 및 이러한 조성물에 서로 다른 안정화제를 첨가한 조성물 F2, F3, F4, F5, F6, F7, F8을 각각 제조하였다. 구체적인 실험방법은 다음과 같다.

먼저 8가지의 당 각각을 12.4 mg씩(따라서, 첨가되는 8가지의 당의 총량은 12.4 mg*8=99.2 mg이다) 주사용수 20 mL에 첨가한 후, 아미노산 수액제인 푸로아민주 20 mL와 혼합하여 충분히 교반한다. 교반한 혼합액을 4 mL씩 10개 바이알(vial)에 소분하였다. 이 후, 각각의 바이알에 서로 다른 안정화제를 첨가하고, 잘 혼합하였다. 각 바이알에 1N 농도의 NaOH를 적량 첨가하여 pH를 약 6.0 정도로 맞추었다.

빠른 반응을 위해 F1, F2, F3, F4, F5, F6, F7, F8 바이알은 파라필름으로 감싸 밀봉한 뒤 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 조건에서 가속시험을 진행하여 시간에 따른 삼투압몰농도를 측정하고 색 변화를 관찰하였다.

F1, F2, F3, F4, F5, F6, F7, F8 시료의 조성
Ingredients	Formulation code
Ingredients	F1	F2	F3	F4	F5	F6	F7	F8
푸로아민주 (mL)	2	2	2	2	2	2	2	2
8가지 당* (mg)	12.4	12.4	12.4	12.4	12.4	12.4	12.4	12.4
주사용수 (mL)	2	2	2	2	2	2	2	2
Tripolyphosphate (mg)		16
β-Cyclodextrin (mg)			16
Pyridoxamine (mg)				16
Taurine (mg)					16
Aminoguanidine (mg)						16
Aspartic acid (mg)							16
EDTA (mg)								16
Total (mL)	4	4	4	4	4	4	4	4

* 8가지 당은 글루코스, 갈락토스, 만노스, 푸코스, 자일로스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민 및 N-아세틸뉴라민산이 각각 12.4 mg씩 첨가된 것이므로, 8가지 당의 총량은 12.4 mg*8=99.4 mg임.

다. 실험 결과

장기보존 안정성 시험으로 가속시험 시작 후, 안정화제를 첨가하지 않은 대조군 F1에서는 약 10일 후부터 변색이 나타나기 시작하였고, 안정화제로 베타-사이클로덱스트린을 첨가한 F3과 아미노구아니딘을 첨가한 F6에서는 대조군 F1보다 변색이 적고, 낮은 삼투압몰농도 변화율(%)을 보였다. F3과 F6을 제외한 나머지 시료에서는 색 변화와 삼투압몰농도 변화율(%)에 있어 대조군 F1 대비 유의미한 결과를 얻지 못하였다.

실험 결과는 표 2와 표 3에 나타내었다.

F1, F2, F3, F4, F5, F6, F7, F8 시료에 대한 삼투압몰농도 측정 결과(단위: osmol/L)
Formulation code	Osmolality (초기 상태와 대비한 상대적 변화율( % ))
Formulation code	제조	7일 경과	14일 경과	21일 경과	28일 경과
F1(Control)	0.598	0.619 (3.5%)	0.656 (9.7%)	0.706 (18.1%)	0.760 (27.1%)
F2(Tripolyphosphate)*	0.632
F3(β-Cyclodextrin)	0.591	0.609 (3.0%)	0.643 (8.8%)	0.694 (12.4%)	0.706 (19.4%)
F4(Pyridoxamine)*	0.648
F5(Taurine)*	0.625	0.650 (4.0%)	0.706 (13.0%)
F6(Aminoguanidine)	0.639	0.651 (1.9%)	0.681 (6.6%)	0.716 (12.0%)	0.762 (19.2%)
F7(Aspartic acid)	0.637	0.657 (3.1%)	0.692 (8.6%)	0.719 (12.9%)	0.771 (21.0%)
F8(EDTA)	0.616	0.636 (3.2%)	0.687 (11.5%)	0.717 (16.1%)	0.765 (24.2%)

* 대조군 F1 대비 삼투압몰농도 변화량과 색 변화가 심한 시료는 이후의 측정을 중단했음

도 1은 위 표 2의 F1, F3, F6에 대한 삼투압몰농도 변화율(%)을 그래프로 비교한 것이고, 도 2는 위 도 1의 삼투압몰농도 변화율(%)의 그래프로부터 선형 회귀 분석을 통하여 삼투압몰농도가 20% 변화하는데 걸리는 시간을 예측한 결과를 나타낸 것이다.

위 도 2로부터 아미노구아니딘을 안정화제로 사용하는 경우에 안정성이 가장 높을 것으로 예상된다.

F1, F2, F3, F4, F5, F6, F7, F8 시료에 대한 Color scale 측정 결과
Formulation code	Color scale (0~5)
Formulation code	제조	7일 경과	14일 경과	21일 경과	28일 경과
F1 (Control)	0	0	2	3	4
F2 (Tripolyphosphate)	0	2	3	4	4
F3 (β-Cyclodextrin)	0	0	1	3	4
F4 (Pyridoxamine)	0	3	4	4	5
F5 (Taurine)	0	0	2	2	4
F6 (Aminoguanidine)	0	0	1	2	3
F7 (Aspartic acid)	0	0	2	3	4
F8 (EDTA)	0	0	2	3	4

실험예 2. 실험예 1에서 안정화 효과를 보였던 베타- 사이클로덱스트린과 아미노구아니딘을 서로 다른 조성 비율로 함유하는 아미노산 수액제와 당의 혼합 조성물의 제조

가. 재료 및 기기

위의 8가지 당은 주사용수(Water for injection, 중외제약)에 녹인 후, 시판 중인 아미노산 수액제인 89.4% 푸로아민주 (Proamin injection, 한올바이오파마㈜)에 혼합하여 제조하였다.

시료의 pH를 조정하기 위하여 1N 농도의 NaOH 용액 (삼전순약공업, samchun pure chemical Co.)을 사용하였다. 8가지 당과 아미노산이 함유된 수액제들의 pH를 pH 측정기 (METTLER TOLEDO Seven Compact pH/Ion)를 이용하여 약 6.0 정도로 맞추었다.

안정화제로는 97% 베타-사이클로덱스트린(ßSigma-Aldrich)과 아미노구아니딘 (Aminoguanidine, Sigma-Aldrich)을 사용하였다.

안정화제를 첨가한 후, 안정화 효과를 평가하기 위하여 시간에 따른 기저치 대비 삼투압몰농도 변화율(%)을 측정하고 Color scale을 이용한 색 변화 정도를 측정하였다. 삼투압몰농도는 삼투압측정기 (OSMOMAT 030, Cryoscopic osmometer)를 이용하여 측정하였으며, 색의 변화는 육안으로 관찰하여 갈변이 심화될수록 숫자가 증가하는 0~5까지의 Color scale로 표시하였다.

나. 실험 방법

하기 표 4와 같이 푸로아민주와 8가지 당의 혼합물에 실험예 1에서 안정화 효과를 보였던 베타-사이클로덱스트린과 아미노구아니딘을 서로 다른 조성 비율로 함유하는 조성물 G1, G2, G3, G4, G5, G6, G7을 각각 제조하였다. 구체적인 실험방법은 다음과 같다.

먼저 8가지의 당 각각을 12.4 mg씩(따라서, 첨가되는 8가지의 당의 총량은 12.4 mg*8=99.2 mg이다) 주사용수 20 mL에 첨가한 후, 아미노산 수액제인 푸로아민주 20 mL와 혼합하여 충분히 교반한다. 교반한 혼합액을 4 mL씩 10개 바이알(vial)에 소분하였다. 이 후, 각각의 바이알에 베타-사이클로덱스트린 및/또는 아미노구아니딘을 첨가하고, 잘 혼합하였다. 각 바이알에 1N 농도의 NaOH를 적량 첨가하여 pH를 약 6.0 정도로 pH 측정기를 이용해 맞추었다.

빠른 반응을 위해 G1, G2, G3, G4, G5, G6, G7 바이알은 파라필름으로 감싸 밀봉한 뒤 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 조건에서 가속시험을 진행하여 시간에 따른 삼투압몰농도를 측정하고 색 변화를 관찰하였다.

G1, G2, G3, G4, G5, G6, G7 시료의 조성
Ingredients	Formulation code
Ingredients	G1	G2	G3	G4	G5	G6	G7
푸로아민주 (mL)	2	2	2	2	2	2	2
8가지 당* (mg)	12.4	12.4	12.4	12.4	12.4	12.4	12.4
주사용수 (mL)	2	2	2	2	2	2	2
β-cyclodextrin (mg)	16		16	16	16	8	32
Aminoguanidine (mg)		16	8	16	32	16	16
Total (mL)	4	4	4	4	4	4	4

다. 실험 결과

장기보존 안정성 시험으로 가속시험 시작 후, 안정화제로 베타-사이클로덱스트린만을 첨가한 G2보다 아미노구아니딘만을 첨가한 G3에서 적은 변색과, 낮은 삼투압몰농도 변화율(%)을 보였다.

베타-사이클로덱스트린의 양을 고정하고 아미노구아니딘의 양을 달리하여 혼합한 G3, G4, G5에서는 아미노구아니딘의 양이 증가할수록 적은 변색과, 낮은 삼투압몰농도 변화율(%)을 보였다. 반면, 아미노구아니딘의 양을 고정하고 베타-사이클로덱스트린의 양을 달리하여 혼합한 G4, G6, G7에서는 베타-사이클로덱스트린의 양에 따른 유의미한 결과는 얻을 수 없었다.

이를 통해 아미노산 수액제와 당의 혼합 조성물에 첨가한 안정화제의 효과는 베타-사이클로덱스트린보다 아미노구아니딘의 영향이 크다는 것을 알 수 있었다.

실험 결과는 표 5와 표 6에 나타내었다.

G1, G2, G3, G4, G5, G6, G7 시료에 대한 삼투압몰농도 측정 결과 (단위: osmol/L)
Formulation code	Osmolality (초기 상태와 대비한 상대적 변화율( % ))
Formulation code	제조	3일 경과	7일 경과	10일 경과	14일 경과
G1 (β-CD only)	0.575	0.596 (3.6%)	0.620 (7.8%)	0.656 (14.1%)	0.744 (31.7%)
G2 (AG only)	0.630	0.643 (2.1%)	0.656 (4.1%)	0.705 (11.9%)	0.800 (27.0%)
G3 (β-CD : AG = 16 : 8)	0.602	0.613 (1.8%)	0.628 (4.3%)	0.683 (13.4%)	0.782 (29.9%)
G4 (β-CD : AG = 16 : 16)	0.628	0.630 (0.3%)	0.652 (3.8%)	0.702 (11.8%)	0.747 (18.9%)
G5 (β-CD : AG = 16 : 32)	0.685	0.687 (0.3%)	0.708 (3.4%)	0.757 (10.5%)	0.787 (14.9%)
G6 (AG : β-CD = 16 : 8)	0.628	0.631 (0.5%)	0.652 (3.8%)	0.720 (14.6%)	0.803 (27.9%)
G7 (AG : β-CD = 16 : 32)	0.637	0.639 (0.3%)	0.647 (1.6%)	0.721 (13.2%)	0.810 (27.2%)
β-CD = βCyclodextrin, AG = Aminoguanidine

도 3은 위 표 5의 G1 내지 G5에 대한 삼투압몰농도 변화율(%)을 그래프로 비교한 것이고, 도 4는 위 도 3의 삼투압몰농도 변화율(%)의 그래프로부터 선형 회귀 분석을 통하여 삼투압몰농도가 20% 변화하는데 걸리는 시간을 예측한 결과를 나타낸 것이다.

위 도 4로부터 베타-사이클로덱스트린 및 아미노구아니딘을 단독으로 사용하는 것보다 혼합하여 안정화제로 사용하는 경우에 안정화 효과가 더 높고, 혼합 시 베타-사이클로덱스트린 보다 아미노구아니딘의 양이 많을 때 보다 더 높은 안정화 효과를 나타낸다는 것을 알 수 있었다.

G1, G2, G3, G4, G5, G6, G7 시료에 대한 Color scale 측정 결과
Formulation code	Color scale (0~5)
Formulation code	제조	3일 경과	7일 경과	10일 경과	14일 경과
G1 (β-CD only)	0	0	1	1	4
G2 (AG only)	0	0	0	1	3
G3 (β-CD : AG = 16 : 8)	0	0	0	1	4
G4 (β-CD : AG = 16 : 16)	0	0	0	1	2
G5 (β-CD : AG = 16 : 32)	0	0	0	0	2
G6 (AG : β-CD = 16 : 8)	0	0	0	1	3
G7 (AG : β-CD = 16 : 32)	0	0	0	1	2
β-CD = βCyclodextrin, AG = Aminoguanidine

실험예 3. 실험예 2에서 더 높은 안정화 효과를 보였던 아미노구아니딘을 서로 다른 양으로 함유하는 아미노산 수액제와 당의 혼합 조성물의 제조

가. 재료 및 기기

위의 8가지 당은 주사용수 (Water for injection, 중외제약)에 녹인 후, 시판 중인 아미노산 수액제인 89.4% 푸로아민주 (Proamin injection, 한올바이오파마㈜)에 혼합하여 제조하였다.

안정화제로는 아미노구아니딘 (Aminoguanidine, Sigma-Aldrich)을 사용하였다.

나. 실험 방법

하기 표 7과 같이 푸로아민주와 8가지 당의 혼합물에 실험예 2에서 더 높은 안정화 효과를 보였던 아미노구아니딘을 서로 다른 양으로 함유하는 조성물 H1, H2, H3, H4를 각각 제조하였다. 구체적인 실험방법은 다음과 같다.

먼저 8가지의 당을 62 mg씩(따라서, 첨가되는 8가지의 당의 총량은 62 mg*8=496 mg이다) 주사용수 10 mL에 첨가한 후, 아미노산 수액제인 푸로아민주 10 mL와 혼합하여 충분히 교반한다. 교반한 혼합액을 4 mL씩 5개 바이알 (vial)에 소분하였다. 이 후, 각각의 바이알에 아미노구아니딘을 하기 표 7과 같은 용량으로 첨가하고, 잘 혼합하였다. 각 바이알에 1N 농도의 NaOH를 적량 첨가하여 pH를 약 6.0 정도로 pH 측정기를 이용해 맞추었다.

빠른 반응을 위해 H1, H2, H3, H4 바이알은 파라필름으로 감싸 밀봉한 뒤 온도 40±2 ℃, 상대습도 75±5 % 조건에서 가속시험을 진행하여 시간에 따른 삼투압몰농도를 측정하고 색 변화를 관찰하였다.

H1, H2, H3, H4 시료의 조성
Ingredients	Formulation code
Ingredients	H1	H2	H3	H4
푸로아민주 (mL)	2	2	2	2
8가지 당* (mg)	12.4	12.4	12.4	12.4
주사용수 (mL)	2	2	2	2
Aminoguanidine (mg)	0.1	1	10	100
Total (mL)	4	4	4	4

* 8가지 당은 글루코스, 갈락토스, 만노스, 푸코스, 자일로스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민 및 N-아세틸뉴라민산이 각각 12.4 mg씩 첨가된 것이므로, 8가지 당의 총량은 12.4 mg*8=99.2 mg임.

다. 실험 결과

장기보존 안정성 시험으로 가속시험 시작 후 약 14일 후부터 변색이 나타나기 시작하였다. 안정화제로 아미노구아니딘을 각각 0.1mg, 1mg, 10mg, 100 mg 첨가한 H1, H2, H3, H4에서는 대체적으로 적은 변색과 낮은 삼투압몰농도 변화율(%)을 보였으며, 이러한 효과는 첨가한 아미노구아니딘의 양이 많을수록 증가되었다.

따라서, 아미노산 및 당의 혼합 조성물의 안정화 효과는 아미노구아니딘에 의해 크게 나타나며, 아미노구아니딘의 첨가량이 증가될수록 안정화 효과 또한 커진다는 것을 알 수 있었다.

실험 결과는 표 8과 표 9에 나타내었다.

H1, H2, H3, H4 시료에 대한 삼투압몰농도 측정 결과 (단위: osmol/L)
Formulation code	Osmolality (초기 상태와 대비한 상대적 변화율( % ))
Formulation code	제조	4일 경과	7일 경과	10일 경과	14일 경과	18일 경과
H1	0.590	0.618 (4.7%)	0.624 (5.8%)	0.637 (8.0%)	0.658 (11.5%)	0.685 (16.1%)
H2	0.591	0.603 (2.0%)	0.614 (3.9%)	0.629 (6.4%)	0.642 (8.6%)	0.667 (12.8%)
H3	0.624	0.639 (2.4%)	0.646 (3.5%)	0.660 (5.8%)	0.673 (7.8%)	0.688 (10.2%)
H4	0.906	0.908 (0.2%)	0.916 (1.1%)	0.923 (1.9%)	0.937 (3.4%)	0.956 (5.5%)

도 5는 위 표 8의 H1 내지 H4에 대한 삼투압몰농도 변화율(%)를 그래프로 비교한 것이고, 도 6은 위 도 5의 삼투압몰농도 변화율(%)의 그래프로부터 선형 회귀 분석을 통하여 삼투압몰농도가 20% 변화하는데 걸리는 시간을 예측한 결과를 나타낸 것이다.

위 도 6으로부터 아미노구아니딘의 첨가량이 증가될수록 안정화 효과 또한 커진다는 것을 예상할 수 있다.

H1, H2, H3, H4 시료에 대한 Color scale 측정 결과
Formulation code	Color scale (0~5)
Formulation code	제조	4일 경과	7일 경과	10일 경과	14일 경과	18일 경과
H1	0	0	0	0	2	3
H2	0	0	0	0	1	3
H3	0	0	0	0	0	1
H4	0	0	0	0	0	0

본 발명에 따른 당 및 아미노산의 안정한 혼합 수액제 조성물은 안정성, 특히 장기보관 안정성을 크게 향상시켰다.

Claims

삭제
1종 이상의 아미노산;
글루코스, 갈락토스, 만노스, 푸코스, 자일로스, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민 및 N-아세틸뉴라민산; 및
안정화제를 포함하는 수액제 조성물.
제2항에 있어서, 상기 안정화제는 베타-사이클로덱스트린(β-Cyclodextrin) 및 아미노구아니딘 (Aminoguanidine) 중 1종 이상인 것을 특징으로 하는 수액제 조성물.
제2항에 있어서, 상기 안정화제는 아미노구아니딘인 것을 특징으로 하는 수액제 조성물.
제2항에 있어서, 상기 아미노산은 단백질을 구성할 수 있는 20종의 아미노산 중 1종 이상인 것을 특징으로 하는 수액제 조성물.