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KR102017070B1 - 치료 펩티드 - Google Patents

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KR102017070B1
KR102017070B1 KR1020147011604A KR20147011604A KR102017070B1 KR 102017070 B1 KR102017070 B1 KR 102017070B1 KR 1020147011604 A KR1020147011604 A KR 1020147011604A KR 20147011604 A KR20147011604 A KR 20147011604A KR 102017070 B1 KR102017070 B1 KR 102017070B1
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카이 더블유. 우처프페니그
베티나 프란츠
주니어 케네쓰 메이
글렌 드래노프
에프. 스티븐 호디
크리스토퍼 하비
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다나-파버 캔서 인스티튜트 인크.
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Abstract

본 개시내용은, 부분적으로, 정의된 결합 파트너에 면역특이적으로 결합하며 적어도 표 1에 제시된 상보성 영역과 관련된 상보성 결정 영역을 포함하는 펩티드를 포함하는 조성물을 제공한다.

Description

치료 펩티드 {THERAPEUTIC PEPTIDES}
우선권 청구
본 출원은 2011년 9월 30일에 출원된 미국 특허 가출원 일련 번호 61/541,921을 우선권 주장하고, 상기 가출원의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
정부 지원
본 발명은 국립 보건원이 수여한 교부 번호 PO1 AI045757 하의 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 특정 권리가 있다.
서열 목록
본 출원은 EFS-Web을 통해 ASCII 포맷으로 제출되었고 본원에 전문이 참조로 포함되는 서열 목록을 함유한다. 2012년 9월 27일에 생성된 상기 ASCII 카피는 53293WO1.txt로 명명되었고 크기는 90,411 바이트이다.
기술 분야
본 발명은 인간 대상체에 관련된 치료 조성물 (예를 들어, 펩티드)에 관한 것이다.
배경
병태 또는 질환에 노출된 인간 대상은 치료 잠재력이 있는 항체의 공급원을 제공하고, 이같은 항체를 수득하기 위한 일반적인 방법이 업계에 공지되어 있다. 그러나, 치료 잠재력이 있는 항체를 특이적으로 수득하기 위한 방법은 이같은 항체를 발현하는 B 세포의 낮은 빈도, 느린 증식 속도 및 낮은 항체 분비 수준에 의해 일반적으로 제한된다. 예를 들어, 규정된 특이성을 지니는 기억 B 세포는 전형적으로 백만개의 말초혈 단핵 세포 또는 약 1 ㎖의 혈액 당 오직 1개의 세포만을 차지한다 (문헌 [Lanzavecchia et al., Curr. Opin. Immunol., 21:298-304 (2009)]: [Yoshida et al., Immunol. Rev., 237:117-139 (2010)]). 치료 잠재력이 있는 항체의 빈도는 암 환자에서 오히려 더 낮을 것이어서, 이같은 세포를 높은 민감도 및 효율로 단리하는 것을 가능하게 하는 신규 접근법의 개발이 필요하다.
통상적인 방법은 시험관내 배양 및/또는 면역화된 동물 모델 (예를 들어, 마우스)의 사용에 의한 기억 B 세포의 항체 분비 세포로의 전환에 일반적으로 의존한다 (문헌 [Crotty et al., J. Immunol., 171:4969-4973 (2003)]: [Fecteau et al., Immunology, 128:e353-e365 (2009)]: [Buisman et al., Vaccine, 28:179-186 (2009)]: [Corti et al., PLoS One, 5:e8805 (2010)]). 예를 들어, 1주일까지의 시험관내 배양 후에, 배양 상청액에서 항체가 측정될 수 있고, 효소-결합 면역흡착 스폿 (ELISPOT: enzyme-linked immunosorbent spot) 검정법을 사용하여 항체 분비 세포의 빈도가 평가될 수 있다. 이같은 방법의 한계가 보고되어 있다 (문헌 [Henn et al., J. Immunol., 183:31777-3187 (2009)]: [Cao et al., J. Immunol., Methods, 358:56-65 (2010)]). 예를 들어, 기억 B 세포의 시험관내 배양은 기억 B 세포 표현형을 별개의 기능성 성질이 있는 혈장 세포를 닮도록 변경시킨다 (문헌 [Jiang et al., Eur. J. Immunol., 37:2205-2213 (2007)]: [Huggins et al., Blood, 109:1611-1619 (2007)]: [Jourdan et al., Blood, 114:5173-5181 (2009)]). 형광 항원-기반 방법의 한계가 또한 보고되어 있다 (문헌 [Hofer et al., Immunol. Rev., 211:295-302 (2006)]: [Odendahl et al., Blood, 105:1614-1621 (2005)]; [Kunkel et al., Nat. Rev. Immunol., 3:822-829 (2003)]: [Scheid et al., Nature, 458:636-640 (2009)]: [Wu et al., Science, 329:856-861 (2010)]).
치료 잠재력이 있는 항체를 특이적으로 수득하거나 또는 표적화하는 개선된 방법이 요구된다.
MICA는 대부분의 인간 NK 세포, γδ T 세포, 및 CD8+ T 세포 상에서 발현되는 C-유형 렉틴-유사, II형 막횡단 수용체인 NKG2D에 대한 리간드이다. 라이게이션 시, NKG2D는 퍼포린 의존적 세포용해를 유발하도록, 그리고 공동-자극을 제공하도록 어댑터 단백질 DAP10을 통해 신호를 전달한다. 인간에서, NKG2D 리간드에는 MHC 클래스 I 쇄-관련 단백질 A (MICA), 밀접하게 관련된 MICB, UL-16 결합 단백질 (ULBP) 1-4, 및 RAE-1G가 포함된다. 건강한 조직에서는 NKG2D 리간드가 일반적으로 발견되지 않지만, DNA 손상이 포함되는 다양한 형태의 세포 스트레스가 리간드 발현을 상향-조절할 수 있고, 이는 흑색종이 포함되는 다수의 고형 및 혈액학적 악성 종양에서의 이들의 빈번한 검출을 초래한다. 항-NKG2D 차단 항체로 처치된 NKG2D 결핍 및 야생형 마우스가 강화된 종양 감수성을 나타내기 때문에, 리간드 양성 형질전환 세포를 통한 NKG2D 활성화는 외인성 종양 억제에 기여한다. 그러나, 종양 세포로부터의 NKG2D 리간드의 박리에 의해 환자에서 면역 도피가 달성될 수 있고, 이는 표면 NKG2D의 내재화 및 세포독성 림프구의 기능 손상을 유발한다. 가용성 NKG2D 리간드는 Fas 리간드, IL-10, 및 TGF-β를 통한 항-종양 세포독성을 길항할 수 있는 조절성 NKG2D+CD4+Foxp3- T 세포의 확장을 또한 자극할 수 있다. MICA는 종양 세포로부터 박리된, 즉 세포 표면으로부터 주변 매질 내로 방출된 NKG2D 리간드이고, 암 환자로부터의 혈청은 전형적으로 상승된 수준의 가용성 형태 (sMICA)를 함유한다. MICA 박리는 단백질 디술피드 이소머라제(isomerase) ERp5와의 상호작용을 통해 부분적으로 달성되고, 이는 중요한 시스테인과 디술피드 결합을 형성하고, 이러한 결합은 α3 도메인의 언폴딩(unfolding)을 초래하여 MICA를 ADAM-10/17 및 MMP14에 의한 단백질 분해에 대해 감수성이게 한다.
혈관신생은 선재하는 혈관으로부터 새로운 모세혈관을 형성하는 과정이고, 종양 성장 및 파종의 결정적인 부분으로서 연루되었다. 종양은 확산 단독으로 충족될 수 있는 것을 초과하는 증가하는 산소 및 영양소 요건을 충족시키도록 혈관신생을 자극한다. 결과적으로, 종양은 자신의 대사 요구를 충족시키도록 기존의 혈관을 동원하고, 리모델링시키며, 확장시킨다. 성장 중인 종양이 새로운 혈관 형성에 의존하는 것은 혈관신생을 항암 요법에 대한 매력적인 표적으로 만들었다. 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 패밀리 구성원 및 안지오포이에틴이 포함되는 다수의 시토카인이 혈관신생의 조절에서 역할을 하는 것으로 여겨졌다. 안지오포이에틴은 혈관 내피에서 선택적으로 발현되는 티로신 키나제들의 패밀리인 Tie에 대한 리간드로서 발견되었다. 4개의 안지오포이에틴이 공지되어 있다: 안지오포이에틴-1 ("Ang-1") 내지 안지오포이에틴-4 ("Ang-4"). 안지오포이에틴 (예를 들어, Ang-1 및 Ang-2)이 종양 혈관신생에서 수반될 수 있는 것으로 여러 연구에서 제안되었다. 이러한 정보로, 안지오포이에틴이 면역-기반 암 요법의 잠재적인 표적으로서 확인되었다.
면역-기반 암 요법의 표적, 예컨대 MICA 및 안지오포이에틴을 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 새로운 작용제들을 확인하는 것이 요구된다. 이같은 작용제들은 종양 발달과 연관된 질환 상태에서의 진단성 스크리닝 및 치료적 개입에 유용할 것이다.
개요
본 개시내용은 치료 잠재력이 있는 항체에 관한 조성물 및 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA), 또는 MICA 상의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 펩티드를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 측면에서, 조성물의 펩티드는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VH의 상보성 결정 영역 (CDR) 3, 및 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 측면에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VH의 상보성 결정 영역 (CDR) 3, 및 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VH의 CDR2, 또는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VL의 CDR2, 또는 양쪽 모두를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VH의 상보성 결정 영역 CDR2, 또는 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VL의 CDR2, 또는 양쪽 모두를 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VH의 CDR1, 또는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VL의 CDR1, 또는 양쪽 모두를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VH의 상보성 결정 영역 CDR1, 또는 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VL의 CDR1, 또는 양쪽 모두를 포함한다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 2에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 2 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 1의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 11에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 11 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 1의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편이다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 2를 포함하는 VH 쇄 및 서열 11을 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드에 더하여, 조성물은 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 20개 미만)의 항암 치료제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 제약 조성물 (예를 들어, 대상체에게 투여하기 위한 제약 조성물)로서 제제화된다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 149에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 6의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 149 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 6의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 151에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 6의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 151 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 6의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편이다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 149를 포함하는 VH 쇄 및 서열 151을 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드에 더하여, 조성물은 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 20개 미만)의 항암 치료제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 제약 조성물 (예를 들어, 대상체에게 투여하기 위한 제약 조성물)로서 제제화된다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 168에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 7의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 168 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 7의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 170에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 7의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 170 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 7의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편이다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 168을 포함하는 VH 쇄 및 서열 170을 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드에 더하여, 조성물은 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 20개 미만)의 항암 치료제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 제약 조성물 (예를 들어, 대상체에게 투여하기 위한 제약 조성물)로서 제제화된다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 186에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 8의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 186 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 8의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 188에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 8의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 188 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 8의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편이다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 186을 포함하는 VH 쇄 및 서열 188을 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드에 더하여, 조성물은 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 20개 미만)의 항암 치료제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 제약 조성물 (예를 들어, 대상체에게 투여하기 위한 제약 조성물)로서 제제화된다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 204에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 9의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 204 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 9의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 206에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 9의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 206 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 9의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편이다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 204를 포함하는 VH 쇄 및 서열 206을 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드에 더하여, 조성물은 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 20개 미만)의 항암 치료제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 제약 조성물 (예를 들어, 대상체에게 투여하기 위한 제약 조성물)로서 제제화된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 안지오포이에틴 또는 안지오포이에틴 상의 에피토프에 결합하는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 측면에서, 조성물의 펩티드는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4, 5 또는 10의 VH의 상보성 결정 영역 (CDR) 3, 및 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4, 5 또는 10의 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VH의 상보성 결정 영역 (CDR) 3, 및 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VL의 CDR3을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 펩티드는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VH의 CDR2, 또는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VL의 CDR2, 또는 양쪽 모두를 추가로 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VH의 상보성 결정 영역 CDR2, 또는 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VL의 CDR2, 또는 양쪽 모두를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 펩티드는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VH의 CDR1, 또는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4, 또는 5의 VL의 CDR1, 또는 양쪽 모두를 추가로 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VH의 상보성 결정 영역 CDR1, 또는 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VL의 CDR1, 또는 양쪽 모두를 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 20에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 20 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 2의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 29에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 29 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 2의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 20을 포함하는 VH 쇄 및 서열 29를 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 38에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 3의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 38 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 3의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 47에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 3의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 47 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 3의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 38을 포함하는 VH 쇄 및 서열 47을 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 56에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 4의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 56 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 4의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 65에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 4의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 65 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 4의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 56을 포함하는 VH 쇄 및 서열 65를 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 74에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 5의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 74 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 5의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 83에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 5의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 83 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 5의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 74를 포함하는 VH 쇄 및 서열 83을 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 적어도 안지오포이에틴-2에 면역특이적으로 결합한다. 일부 측면에서, 조성물은 하나 이상의 항암 치료제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 제약 조성물로서 제제화된다.
일부 측면에서, 펩티드는 서열 222에 대한 동일성을 갖는 VH 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 10의 VH의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 222 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 10의 VH의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VH 쇄; 및 서열 224에 대한 동일성을 갖는 VL 쇄로서, 여기서 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 상응하는 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 내에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 10의 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하고, FR1, FR2, FR3, FR4에 상응하는 서열 224 내의 영역은 표 1에 제시된 항체 ID 10의 VL의 FR1, FR2, FR3, FR4에 대한 동일성이 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％인 아미노산 서열을 포함하는 것인 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 서열 222를 포함하는 VH 쇄 및 서열 224를 포함하는 VL 쇄를 포함하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 펩티드는 적어도 안지오포이에틴-2에 면역특이적으로 결합한다. 일부 측면에서, 조성물은 하나 이상의 항암 치료제를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 조성물은 제약 조성물로서 제제화된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 이러한 방법은 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용은 면역요법 후에 암 환자로부터 인간 항체를 단리하는 방법을 또한 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 자기 항원에 대한 양성 면역 반응을 나타내는 대상체를 확인하는 단계, 다량체 형태의 자기 항원을 제공하는 단계, 다량체 형태의 자기 항원을, 자기 항원에 대한 양성 면역 반응을 나타내는 대상체로부터의 샘플과 접촉시키는 단계, 및 다량체 형태의 자기 항원에 결합된 면역 세포를 수득하는 단계를 포함하는, 대상체로부터 자기 항원에 대해 지시된 면역 세포를 수득하는 방법을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 자기 항원에 대한 양성 면역 반응을 나타내는 대상체를 확인하는 단계, 다량체 형태의 자기 항원을 제공하는 단계, 다량체 형태의 자기 항원을, 자기 항원에 대한 양성 면역 반응을 나타내는 대상체로부터의 샘플과 접촉시키는 단계, 및 다량체 형태의 자기 항원에 결합된 면역 세포를 수득하는 단계를 포함하는, 자기 항원에 대해 지시된 암 환자로부터의 면역 세포를 수득하는 방법을 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 의미가 동일하다. 방법 및 물질이 본 발명에서 사용하기 위해 본원에서 기술된다; 업계에 공지된 기타 적절한 방법 및 물질이 또한 사용될 수 있다. 이러한 물질, 방법 및 예는 단지 설명적이고, 제한적으로 의도되지 않는다. 본원에서 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 서열, 데이터베이스 엔트리, 및 기타 참고문헌은 전문이 참조로 포함된다. 상충되는 경우, 본 명세서 (정의 포함)가 제어할 것이다.
본 발명의 기타 특색 및 장점이 하기의 상세한 설명 및 도면으로부터, 그리고 청구항으로부터 명백할 것이다.
도면 설명
도 1: 항체 ID 1 (항-MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA) 항체)의 가변 중쇄 (VH)의 핵산 서열 (서열 1).
도 2: 항체 ID 1 (항-MICA 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 2).
도 3: 항체 ID 1 (항-MICA 항체)의 가변 경쇄 (VL)의 핵산 서열 (서열 10).
도 4: 항체 ID 1 (항-MICA 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 11).
도 5: 항체 ID 2 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 핵산 서열 (서열 19).
도 6: 항체 ID 2 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 20).
도 7: 항체 ID 2 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 핵산 서열 (서열 28).
도 8: 항체 ID 2 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 29).
도 9: 항체 ID 3 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 핵산 서열 (서열 37).
도 10: 항체 ID 3 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 38).
도 11: 항체 ID 3 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 핵산 서열 (서열 46).
도 12: 항체 ID 3 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 47).
도 13: 항체 ID 4 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 핵산 서열 (서열 55).
도 14: 항체 ID 4 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 56).
도 15: 항체 ID 4 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 핵산 서열 (서열 64).
도 16: 항체 ID 4 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 65).
도 17: 항체 ID 5 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 핵산 서열 (서열 73).
도 18: 항체 ID 5 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 74).
도 19: 항체 ID 5 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 핵산 서열 (서열 82).
도 20: 항체 ID 5 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 83).
도 21a-21f: B-세포로부터 항체를 제조하기 위한 예시적인 방법을 도해한다. (a) 항원이 부위-특이적 비오티닐화 및 형광-표지 스트렙타비딘으로의 사량체화를 위한 BirA 태그(tag)와 함께 발현된다. (b) B 세포가 사량체 및 모노클로날 항체들의 패널로 염색된다. 사량체+, 클래스-변환 기억 B 세포가 PCR 스트립(strip) 내로 단일-세포 분류된다. (c) T7 RNA 폴리머라제(polymerase)로 mRNA 증폭이 수행된다. (d) 300-400 bp PCR 생성물을 사용하여 PCR 생성물의 서열분석이 수행된다. (e) 중첩 PCR이 별도의 벡터들 내로 클로닝되는 전장 IgG1 중쇄 및 카파/람다 경쇄 서열의 구축에 사용된다. 완전히 인간형인 재조합 항체의 발현을 위해 벡터들이 CHO-S 세포 내로 일시적으로 형질감염된다. (f) 항체가 항원 결합에 대해 테스트되고, 잠재적인 치료 성질에 대해 평가된다.
도 22a-22b: 기억 B 세포의 확인에 대한 단량체 및 사량체 항원의 비교를 나타내는 그래프. (a) 모노-비오티닐화 TTCF 또는 CD80 항원이 알렉사(Alexa)-488 형광단으로 직접적으로 표지된다; 표지되지 않은 스트렙타비딘으로 사량체가 생성되었다. 각각의 공여자(donor)로부터의 강화된 B 세포를 3개의 분획으로 분할하고, 0.125 ㎍/㎖의 동일한 총 항원 농도의 대조군 CD80 사량체, TTCF 단량체, 또는 TTCF 사량체로 염색하였다. FACS 플롯은 CD19+ CD27+ IgM- 클래스-변환 기억 B 세포를 도시한다; 게이트 부근의 숫자는 모(parental) 게이트의 백분율을 나타낸다. (b) 3개의 상이한 공여자에서 검출된 사량체+ 기억 B 세포의 빈도. 1×106개의 CD19+ 기억 B 세포 당 사량체+ 세포로서 숫자가 계산된다.
도 23a-23b: 형질모세포 및 기억 B 세포로부터 생성된 항체에 의한 TTCF의 고-친화력 결합을 나타내는 선 그래프. 포화 결합 실험을 수행하여 재조합 항체의 친화력을 결정하였다. TTCF 항원이 유로퓸으로 표지되었고, 이는 킬레이팅 시약과의 인큐베이션 시 615 nm에서 강한 형광 신호를 방출한다. 항체를 96웰 플레이트에 고정시켰고, TTCF-유로퓸 (100 nM 내지 4 pM)과 함께 2시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 615 nm에서의 형광 카운트를 기록하였고, 비-선형 회귀 분석을 사용하여 K D를 계산하였다. 마찬가지로 CHO-S 세포에서 생산된 대조군 항체 (클론 8.18.C5)가 모든 실험에 포함되었다. (a) 재조합 TTCF Ab 1 및 2는 TTCF 사량체+ 형질모세포 (공여자 1)로부터 생성되었다. (b) TTCF 항체 3, 4, 및 5는 3개의 상이한 공여자의 TTCF 사량체+ 기억 B 세포로부터 유래되었다.
도 24: MICA-코팅 루미넥스(luminex) 비드에 대한 항-MICA 항체의 결합을 나타내는 막대 차트.
도 25a-25o: MICA-코팅 비드에 대한 항-MICA 항체의 결합을 나타내는 선 그래프.
도 26a-26d: 3가지 인간 안지오포이에틴 (안지오포이에틴-1, 2 및 4) 및 ang-유사-3에 대한 4개의 인간 안지오포이에틴 2 특이적 항체, 뿐만 아니라 대조군 항체의 결합을 나타내는 막대 그래프. 재조합 안지오포이에틴을 ELISA 플레이트에 고정시켰고, 인간 재조합 항체의 결합을 유로퓸-표지 스트렙타비딘으로 검출하였다.
도 27a-27c: 폐암 환자로부터의 안지오포이에틴-특이적 항체의 단리에 관한 그래프 및 겔을 나타낸다. (a) ELISA에 의해 결정된 폐암 환자 (L19) 혈청 (1:1000 희석됨)의 안지오포이에틴-2 반응성. (b) X축의 CD19 및 Y축의 형광-태그 안지오포이에틴-2로 CD19+, CD27+ IgM-B 세포에 대해 게이팅된 PBMC 샘플 (시점- 10/98)을 나타내는 FACS 플롯. (c) 환자 L19로부터 단리된 10개의 안지오포이에틴-2 반응성 기억 B-세포로부터의 중쇄, 경쇄, 및 힌지(hinge) 영역 PCR 생성물. 염기쌍 500개의 마커가 왼쪽에서 지시된다.
도 28: 항체 ID 6 (항-MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA) 항체)의 가변 중쇄 (VH)의 핵산 서열 (서열 148).
도 29: 항체 6 (항-MICA 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 149).
도 30: 항체 ID 6 (항-MICA 항체)의 가변 경쇄 (VL)의 핵산 서열 (서열 150).
도 31: 항체 ID 6 (항-MICA 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 151).
도 32: 항체 ID 7 (항-MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA) 항체)의 가변 중쇄 (VH)의 핵산 서열 (서열 167).
도 33: 항체 ID 7 (항-MICA 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 168).
도 34: 항체 ID 7 (항-MICA 항체)의 가변 경쇄 (VL)의 핵산 서열 (서열 169).
도 35: 항체 ID 7 (항-MICA 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 170).
도 36: 항체 ID 8 (항-MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA) 항체)의 가변 중쇄 (VH)의 핵산 서열 (서열 185).
도 37: 항체 ID 8 (항-MICA 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 186).
도 38: 항체 ID 8 (항-MICA 항체)의 가변 경쇄 (VL)의 핵산 서열 (서열 187).
도 39: 항체 ID 8 (항-MICA 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 188).
도 40: 항체 ID 9 (항-MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA) 항체)의 가변 중쇄 (VH)의 핵산 서열 (서열 203).
도 41: 항체 ID 9 (항-MICA 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 204).
도 42: 항체 ID 9 (항-MICA 항체)의 가변 경쇄 (VL)의 핵산 서열 (서열 205).
도 43: 항체 ID 9 (항-MICA 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 206).
도 44: 항체 ID 10 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 핵산 서열 (서열 221).
도 45: 항체 ID 10 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VH 쇄의 아미노산 서열 (서열 222).
도 46: 항체 ID 10 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 핵산 서열 (서열 223).
도 47: 항체 ID 10 (항-안지오포이에틴-2 항체)의 VL 쇄의 아미노산 서열 (서열 224).
도 48a-g: 재조합 항-MICA 항체에 의한 MICA 대립유전자-특이적 결합의 평가를 나타내는 선 그래프.
도 49: 항-MICA 항체 CM24002 Ab2에 의한 자가 종양 세포의 표지를 나타내는 선 그래프.
도 50: 혈청 MICA에 의한 NKG2D의 조절을 나타내는 일련의 FACS 플롯. 인간 NK 세포를 1:10 희석의 환자 CM24002로부터의 대조군 혈청과 함께 48시간 동안 인큐베이션하였다. 지시된 항체를 10 ㎍/㎖의 농도로 인큐베이션을 시작할 때 첨가하였다. 유동 세포측정법에 의해 CD56+ NK 세포 상에서 NKG2D 발현을 평가하였다.
도 51: 재조합 MICA에 의한 NKG2D의 조절을 나타내는 일련의 FACS 플롯. 인간 NK 세포를 2 ng/㎖ 농도의 재조합 MICA와 함께 48시간 동안 인큐베이션하였다. 지시된 항체를 10 ㎍/㎖의 농도로 인큐베이션을 시작할 때 첨가하였다. 48시간 후, 유동 세포측정법에 의해 CD56+ NK 세포 상에서 NKG2D 발현을 평가하였다.
도 52: 항-MICA 항체 CM24002 Ab2에 의한 세포-매개 독성의 강화를 나타내는 선 그래프. 인간 NK 세포를 10 ㎍/㎖의 지시된 항체의 존재 하에 재조합 MICA (2 ng/㎖)와 함께 48시간 동안 인큐베이션하였다. 지시된 비에서의 4시간 인큐베이션 후의 LDH 방출을 측정함으로써, K562 표적 세포를 사멸시키는 NK 세포 (이펙터)의 능력을 평가하였다.
도 53: 항-MICA 항체 CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29에 의한 세포-매개 독성을 나타내는 막대 그래프. 인간 NK 세포를 10 ㎍/㎖의 지시된 항체의 존재 하에 재조합 MICA (2 ng/㎖)와 함께 48시간 동안 인큐베이션하였다. 4시간 인큐베이션 후의 LDH 방출을 측정함으로써, K562 표적 세포를 사멸시키는 NK 세포 (이펙터)의 능력을 평가하였다. 이펙터 및 표적 세포의 4시간 인큐베이션 동안 NKG2D 차단 항체 또는 Fc 차단 항체를 첨가하여, 세포-매개 독성에 대한 Fc 수용체 및 NKG2D의 기여를 평가하였다.
도 54: 재조합 항-MICA 항체에 의한 MICA 알파 3 도메인의 결합을 나타내는 일련의 선 그래프. 재조합 MICA 알파 3 도메인을 비오티닐화시키고, 스트렙타비딘-코팅 비드의 표면 상에 포획시켰다. 10 ㎍/㎖의 지시된 항체를 개별적인 재조합 단백질로 코팅된 비드와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 비드를 세정하고, FITC-접합 항-인간 IgG 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 유동 세포측정법에 의해 FITC 형광을 정량하였다.
도 55: 항-MICA 항체 CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29에 의한 종양 세포의 표지를 나타내는 선 그래프. 유동 세포측정법에 의해 형광을 결정하였다.
도 56: 루미넥스 검정법에 의해 결정된 바와 같은 항-MICA 항체 CM33322 Ab29의 MICA 대립유전자 특이성을 나타내는 막대 그래프.
도 57: 3가지 인간 안지오포이에틴 (안지오포이에틴-1, 2 및 4) 및 ang-유사-3에 대한 항-안지오포이에틴 2 특이적 항체 항-Ang6 Ab2, 뿐만 아니라 대조군 항체의 결합을 나타내는 막대 그래프. 재조합 안지오포이에틴을 ELISA 플레이트에 고정시켰고, 인간 재조합 항체의 결합을 유로퓸-표지 스트렙타비딘으로 검출하였다.
상세한 설명
본 개시내용은, 부분적으로, 질환에서 중요한 치료 표적에 대해 지시된 항체가 사량체 형태의 관심 항원으로 B 세포를 표지하는 것에 의해 질환에 노출된 인간 대상체로부터 수득될 수 있다는 관찰을 기초로 한다. 상기 배경 섹션에서 기술된 바와 같이, 이전의 방법들은 적어도 이들이 인간 대상체에서 적합한 B 세포를 확인하는데 비효율적이라는 점에서 및/또는 이들이 임의의 포획된 B 세포가 표현형 변화를 겪도록 야기하여 이의 가치를 감소시키기 때문에 제한된다. 대조적으로, 특이적 질환-관련 항원에 대해 지시된 희귀 B 세포의 포획을 허용하는 방법이 본원에서 기술된다. 하기에서 기술되는 바와 같이, 이러한 방법은 질환-관련 항원의 사량체화를 필요로 하고, 이러한 프로세스는 하기 실시예에서 입증되는 바와 같이 적합한 기억 B 세포의 확인을 강화한다. 구체적으로, 본원에서의 방법은 항원에 대한 대상체의 최초 노출 후에 증가된 기간 동안 적합한 기억 B 세포의 더욱 효율적인 포획을 허용한다. 본원에서의 방법은 본원에 개시된 방법을 사용하여 포획된 기억 B 세포로부터 수득된 유전 물질을 사용하여 생성된 항체 (및 이같은 항체의 서열로부터 생성된 펩티드)를 또한 포함한다.
MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA)에 대한 인간 항체 및 안지오포이에틴-2에 대해 표적화된 인간 항체가 본원에서 기술된다. 양쪽 모두의 유형의 인간 항체가 사량체 항원의 사용을 수반하는 방법에 의해 세포-기반 암 백신 (GM-CSF가 형질도입된 자가 종양 세포)을 받은 환자로부터 확인되었다.
일부 예에서, 본 개시내용은 선별된 인간 대상체로부터 치료 잠재력이 있는 항체를 특이적으로 수득하거나 표적화하는 방법, 및 이로부터 생성된 치료 조성물을 제공한다. 이러한 방법은 인간 대상체로부터 예를 들어 B 세포 및/또는 기억 B 세포를 포함하지만 이에 한정되지 않는 면역 세포를 수득하거나 표적화하는 단계, 수득 또는 표적화된 면역 세포로부터 유전 물질 (예를 들어, DNA 및/또는 mRNA)을 단리 또는 정제하는 단계, 및 단리 또는 정제된 유전 물질을 사용하여 치료 조성물, 예를 들어 본원에 개시된 치료 조성물을 생산하는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 방법의 추가적인 설명이 제목이 "방법"인 섹션 하에 하기에서 제공된다.
일부 예에서, 본 개시내용은 병태 또는 질환에 걸려 있거나 걸렸었고 이러한 병태 또는 질환에 대해 양성 면역 반응을 나타낸 대상체 내에 존재하는 항체에 관련된 치료 조성물 (예를 들어, 항체, 항체 단편, 항체 유도체, 및/또는 항체 접합체를 비롯한 치료 펩티드를 포함함)을 제공한다.
치료 조성물
일부 예에서, 본원에서의 치료 조성물은 질환 또는 병태에 관련된 결합 파트너 (예를 들어, 면역원(들), 항원(들), 및/또는 에피토프(들))와 상호작용할 수 있고 (예를 들어, 결합하고/하거나, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합함), 이때 치료 조성물과 결합 파트너 간의 상호작용은 이러한 병태 또는 질환에 대한 양성 면역 반응 (예를 들어, 대상체에서의 질환 또는 이의 증상의 수준에서의 감소)을 초래한다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 1, 2, 3, 4, 또는 5, 6, 7, 8, 9 또는 10의 가변 중쇄 (VH) 및/또는 가변 경쇄 (VL)의 1개 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 및/또는 6개)의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 (예를 들어, 이러한 영역을 포함하거나, 본질적으로 이러한 영역으로 이루지거나, 또는 이러한 영역으로 이루어지는) 펩티드를 포함할 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 1, 2, 3, 4, 또는 5, 6, 7, 8, 9 또는 10의 가변 중쇄 (VH) 및/또는 가변 경쇄 (VL)의 1개 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 및/또는 6개)의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고 (예를 들어, 이러한 영역을 포함하거나, 본질적으로 이러한 영역으로 이루지거나, 또는 이러한 영역으로 이루어지고), MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA (예를 들어, UniGene Hs.130838)) (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)) 및/또는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, UniGene Hs.583870) (이들의 에피토프 포함)와 상호작용하는 (예를 들어, 결합하고/하거나, 특이적으로 결합하고/하거나, 면역특이적으로 결합하는) 펩티드를 포함할 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 및/또는 9의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 펩티드는 2개 이상의 CDR을 포함할 수 있고, 이때 이러한 2개 이상의 CDR은 상이한 항체들에 대해 표 1에 제시된 CDR이다. 달리 말하면, 항체 ID 1, 6, 7, 8 및 9에 대해 표 1에 제시된 CDR들 (및 FR들 및/또는 AA 서열들)이 상호교환가능하고, 펩티드가 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합하는 한 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합하는 한) 펩티드가 생성되도록 조합될 수 있다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 및/또는 9의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 1, 6, 7, 8 및/또는 9의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 및/또는 9의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 1, 6, 7, 8 및/또는 9의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 1, 6, 7, 8 및/또는 9의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 1, 6, 7, 8 및/또는 9의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 2, 149, 168, 186 또는 204 중 하나 및/또는 서열 11, 151, 170, 188, 또는 206 중 하나를 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 MICA 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 6의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 6의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 6의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 6의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 6의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 6의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 6의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 149 및/또는 서열 151을 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 MICA 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 7의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 7의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 7의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 7의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 7의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 7의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 7의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 168 및/또는 서열 170을 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 MICA 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 8의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 8의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 8의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 8의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 8의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 8의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 8의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 186 및/또는 서열 188을 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 MICA 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 9의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 9의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 9의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 9의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 9의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 9의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 9의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 204 및/또는 서열 206을 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 MICA (예를 들어, 인간 MICA (예를 들어, 가용성 MICA (sMICA)))에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 MICA 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4, 5, 및/또는 10의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 펩티드는 2개 이상의 CDR을 포함할 수 있고, 이때 이러한 2개 이상의 CDR은 상이한 항체들에 대해 표 1에 제시된 CDR이다. 달리 말하면, 항체 ID 2, 3, 4, 5, 및 10에 대해 표 1에 제시된 CDR들 (및 FR들 및/또는 AA 서열들)이 상호교환가능하고, 펩티드가 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합하는 한 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합하는 한) 펩티드가 생성되도록 조합될 수 있다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4, 5, 및/또는 10의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 2, 3, 4, 5, 및/또는 10의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4, 5, 및/또는 10의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 2, 3, 4, 5, 및/또는 10의 VH 및/또는 VL의 CDR1 CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 2, 3, 4, 5, 및/또는 10의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 2, 3, 4, 5, 및/또는 10의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 20, 38, 56, 74, 또는 222 중 하나 및/또는 서열 29, 47, 65, 83 또는 224 중 하나를 포함한다. 일부 예에서, 펩티드는 서열 20, 38, 56, 74, 또는 222 중 하나 및 서열 29, 47, 65, 83 또는 224 중 하나를 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2 (예를 들어, UniGene Hs.583870))에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다).
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 2의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 2의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 2의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 2의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 2의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 2의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 2의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 20 및/또는 서열 29를 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 안지오포이에틴-2 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 3의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 3의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 3의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 3의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 3의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 3의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 3의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 38 및/또는 서열 47을 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 안지오포이에틴-2 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 4의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 4의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 4의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 4의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 4의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 4의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 4의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 56 및/또는 서열 65를 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 안지오포이에틴-2 사이의 결합 친화력은 X-Y 사이, 예를 들어 X-Y, X-Y일 수 있다. 일부 예에서, 이러한 펩티드와 안지오포이에틴-2 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 5의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 5의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 5의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 5의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 5의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 5의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 5의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 74 및/또는 서열 83을 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 안지오포이에틴-2 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 표 1에 제시된 항체 ID 10의 VH 및/또는 VL의 1개 이상의 CDR을 포함하는 펩티드를 포함할 수 있고, 이때 이러한 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합한다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합한다). 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된 항체 ID 10의 VH 및/또는 VL의 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 10의 VH 및 VL의 CDR3 및 표 1에 제시된 항체 ID 10의 VH 및/또는 VL의 CDR1 및/또는 CDR2를 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 항체 ID 10의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 표 1에 제시된, 항체 ID 10의 VH 및/또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 항체 ID 10의 VH 및/또는 VL의 FR1, FR2, FR3, 및/또는 FR4 중 1개 이상을 포함한다. 일부 예에서, 이같은 펩티드는 서열 222 및/또는 서열 224를 포함한다. 각각의 경우에, 펩티드는 안지오포이에틴-2 (예를 들어, 인간 안지오포이에틴-2)에 결합할 수 있다 (예를 들어, 특이적으로 결합하고/하거나 면역특이적으로 결합할 수 있다). 일부 예에서, 이러한 펩티드와 안지오포이에틴-2 사이의 결합 친화력은 약 0.1 nM 내지 1 μM, 예를 들어 약 10 nM일 수 있다.
일부 예에서, 안지오포이에틴-2에 결합하는 펩티드는 안지오포이에틴-1 (예를 들어, Unigene Hs.369675) 및/또는 안지오포이에틴-4 (예를 들어, Unigene Hs.278973)에 또한 결합할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 안지오포이에틴-2에 결합하는 펩티드는 다른 항원 (안지오포이에틴-1 이외의 것)과 비교하여 안지오포이에틴-1에 특이적으로 및/또는 면역특이적으로 또한 결합할 수 있다. 일부 예에서, 안지오포이에틴-2에 결합하는 펩티드는 다른 항원 (안지오포이에틴-4 이외의 것)과 비교하여 안지오포이에틴-4에 특이적으로 및/또는 면역특이적으로 또한 결합할 수 있다.
일부 예에서, 치료 조성물은 서열 2 및/또는 서열 11; 서열 149 및/또는 서열 151; 서열 168 및/또는 서열 170; 서열 186 및/또는 서열 188; 서열 204 및/또는 서열 206; 서열 20 및/또는 서열 29; 서열 38 및/또는 서열 47; 서열 56 및/또는 서열 65; 서열 74 및/또는 서열 83; 및 서열 222 및/또는 서열 224를 포함하는 펩티드를 포함할 수 있다.
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일부 예에서, 치료 조성물은 항체 (전장 및/또는 무손상 항체 포함) 또는 항체 단편을 예를 들어 포함하는 펩티드를 포함할 수 있다. "항체"는 이뮤노글로불린 분자의 가변 영역 내에 위치하는 1개 이상의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예컨대 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드 등에 특이적으로 결합할 수 있는 이뮤노글로불린 분자이다. 본원에서 사용되는 경우에, "항체"라는 용어는 무손상 폴리클로날 또는 모노클로날 항체뿐만 아니라, 이의 임의의 항원 결합 단편 (즉, "항원-결합 부분") 또는 단일쇄, 항체를 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는, 이뮤노글로불린 분자의 임의의 기타 변형 형상을 또한 포함한다. 항체는 임의 클래스, 예컨대 IgG, IgA, 또는 IgM (이의 서브클래스)의 항체를 포함하고, 항체가 임의의 특정 클래스일 필요는 없다. 중쇄의 불변 영역의 항체 아미노산 서열에 따라, 이뮤노글로불린은 상이한 클래스로 할당될 수 있다. IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM인 이뮤노글로불린의 5개의 주요 클래스가 있고, 이들 중 몇몇은 서브클래스 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분할될 수 있다. 이뮤노글로불린의 상이한 클래스에 상응하는 중쇄 불변 영역은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 칭해진다. 이뮤노글로불린의 상이한 클래스들의 서브유닛 구조 및 3차원 형상이 주지되어 있다. 예시적인 항체 및 항체 단편은 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 2개 이상의 상이한 에피토프 결합 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 낙타화 항체, 키메라 항체, 단일쇄 Fv (scFv), 단일쇄 항체, 단일 도메인 항체, 도메인 항체, Fab 단편, F(ab')2 단편, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 항체 단편 (예를 들어, 항원 결합 부분), 디술피드-연결 Fv (dsFv), 및 항-이디오타입 (항-Id) 항체 (예를 들어, 본 발명의 항체에 대한 항-Id 항체 포함), 인트라바디(intrabody), 및 상기 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 항체 또는 항체 단편은 인간 항체 또는 항체 단편 또는 인간화 항체 또는 항체 단편일 수 있다.
항체의 단편은 이들이 전장 항체의 원하는 친화력 및 특이성을 나타내는 한 제공된 방법에서 사용하기에 적절하다. 따라서, 항-MICA 항체 또는 항-안지오포이에틴 항체의 단편은 Fv 부분에서의 MICA 또는 안지오포이에틴 각각에 결합하는 능력 및 FC 부분에서의 수지상 세포 상의 Fc 수용체에 결합하는 능력을 유지할 것이다. 이같은 단편은 상응하는 전장 항-MICA 항체 또는 항-안지오포이에틴 항체와 유사한 성질을 특징으로 하고, 즉, 단편은 인간 세포의 표면 상에 발현된 인간 MICA 항원 또는 안지오포이에틴 항원 각각, 또는 배지 내로 박리된 상응하는 sMICA 항원에 특이적으로 결합할 것이다.
Fv 단편은 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 함유하는 항체 단편이다. 이러한 영역은 단단하게 회합된 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어지고, 예를 들어 scFv에서, 상기 회합은 사실상 공유결합일 수 있다. 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에 항원 결합 부위를 규정하는 것은 이러한 형상 내이다. 총괄적으로, 6개의 CDR 또는 이의 부분집합이 항원 결합 특이성을 항체에 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 대해 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)도, 비록 전체 결합 부위보다는 더 낮은 친화력이지만, 항원을 인식하고 이에 결합하는 능력을 지닐 수 있다.
단일쇄 Fv 또는 (scFv) 항체 단편은 단일 폴리펩티드 쇄 내에 존재하는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 일반적으로, 이러한 Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는, VH와 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다.
Fab 단편은 경쇄의 가변 및 불변 도메인 및 중쇄의 가변 도메인 및 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. F(ab')2 항체 단편은 한 쌍의 Fab 단편을 포함하고, 일반적으로 이러한 단편들은 이들의 카르복시 말단 근처에서 이들 사이의 힌지 시스테인에 의해 공유결합으로 연결된다. 항체 단편들의 또 다른 화학적 커플링이 업계에 또한 공지되어 있다.
디아바디(diabody)는 단편들이 동일한 폴리펩티드 쇄 (VH 및 VL) 내의 VL에 연결된 VH를 포함하는, 2개의 항원-결합 부위가 있는 소형 항체 단편들을 지칭한다. 동일한 쇄 상의 두 도메인 간에 쌍을 형성하도록 하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인들은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 이루어 2개의 항원-결합 부위를 생성하도록 강요된다.
선형 항체는 상보성 경쇄 폴리펩티드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 직렬 Fd 절편 (VH-CH1-VH-CH1)을 포함한다. 선형 항체는 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
본 개시내용의 항체 및 항체 단편은 원하는 이펙터 기능 또는 혈청 반감기를 제공하도록 Fc 영역에서 변형될 수 있다. 일부 예에서, Fc 영역이 혈청 반감기를 증가시키기 위해 PEG 또는 알부민에 접합될 수 있거나, 또는 일부 기타 접합이 원하는 효과를 초래한다. 대안적으로, 부작용 또는 치료 합병증을 최소화하도록 이펙터 기능을 제거하거나 감소시키는 것이 바람직한 경우, 특정한 기타 Fc 영역이 사용될 수 있다.
인간 및 인간화 항체는 인간 생식계열 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 (또는 이로부터 유래된 것과 아미노산 서열이 동일한) 가변 및 불변 영역이 있는 항체를 포함한다. 인간 항체는, 예를 들어 CDR, 특히 CDR3 내에, 인간 생식계열 이뮤노글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (예를 들어, 시험관 내에서 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 도입된 돌연변이 또는 생체 내에서의 체세포 돌연변이에 의해).
가변 도메인의 "CDR"은 카바트(Kabat), 코티아(Chothia), 카바트 및 코티아 양쪽 모두의 누적, AbM, 접촉, 및/또는 형상 정의, 또는 업계에 주지된 임의의 CDR 결정 방법의 정의에 따라 확인되는 초가변 영역 내의 아미노산 잔기이다. 항체 CDR은 카바트 등이 최초로 정의한 초가변 영역으로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C.] 참조. CDR의 위치는 코티아 등이 최초로 기술한 구조적 루프 구조로서 또한 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883] 참조. CDR 확인에 대한 기타 접근법은 카바트와 코티아 사이의 절충안이고 옥스포드 몰레큘러(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어 (현재 액셀리스(Accelrys)®)를 사용하여 유도된 "AbM 정의", 또는 문헌 [MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745]에 기재된, 관찰된 항원 접촉을 기초로 하는 CDR의 "접촉 정의"를 포함한다. 본원에서 "형상 정의"로 지칭되는 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 항원 결합에 대한 엔탈피 기여를 이루는 잔기로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166] 참조. 또 다른 CDR 경계 정의는 상기 접근법 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있지만, 그럼에도 불구하고, 특정 잔기 또는 잔기들의 군 또는 심지어 전체 CDR이 유의하게 항원 결합에 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견의 견지에서 짧아지거나 길어질 수는 있더라도 카바트 CDR의 적어도 일부와 중첩될 것이다. 본원에서 사용되는 경우에, CDR은 접근법들의 조합을 포함하여, 업계에 공지된 임의의 접근법에 의해 정의되는 CDR을 지칭할 수 있다. 본원에서 사용되는 방법은 이러한 접근법들 중 임의의 것에 따라 정의된 CDR을 이용할 수 있다. 1개를 초과하는 CDR을 함유하는 임의의 소정의 실시양태에서, CDR들은 카바트, 코티아, 확장형, AbM, 접촉, 및/또는 형상 정의 중 임의의 것에 따라 정의될 수 있다.
일부 예에서, 본원에 개시된 펩티드의 아미노산 서열은, 예를 들어 변형되지 않은 펩티드와 비교하여 펩티드 변이체의 항원 결합 성질이 유지되거나 또는 개선되는 한, 펩티드 변이체 (예를 들어, 본원에 개시된 펩티드에 대한 규정된 서열 상동성이 있는 펩티드)가 생성되도록 변형 및 변경될 수 있다 (임의의 변형된 펩티드의 항원 결합 성질은 본원에 기술된 시험관내 및/또는 생체내 검정법 및/또는 업계에 공지된 기술을 사용하여 평가할 수 있다).
펩티드 변이체는 일반적으로 아미노산 수준에서 관찰되고 논의되지만, 실체 변형은 전형적으로 핵산 수준에서 도입되거나 수행된다. 예를 들어, 업계에 공지된 기술 (예를 들어, 클로닝 기술) 및/또는 본원에 개시된 것을 사용하여, 서열 1, 10, 19, 28, 37, 46, 55, 64, 73, 및/또는 82 또는 이의 일부분/단편을 코딩하는 핵산을 변형시킴으로써 표 1에 제시된 펩티드에 대한 아미노산 서열 동일성이 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98, 또는 99％인 변이체가 생성될 수 있다.
아미노산 서열 변형은 전형적으로 3가지 클래스 중 하나 이상에 속한다: 치환, 삽입 또는 결실 변형. 삽입은 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 아미노 및/또는 말단 융합, 뿐만 아니라 서열내 삽입을 포함한다. 삽입은 통상적으로 아미노 또는 카르복실 말단 융합의 것보다 더 작은 삽입, 예를 들어 잔기 1개 내지 4개 정도일 것이다. 결실은 단백질 서열로부터의 하나 이상의 아미노산 잔기의 제거를 특징으로 한다. 전형적으로, 대략 2개 내지 6개 이하의 잔기가 단백질 분자 내의 임의의 한 부위에서 결실된다. 아미노산 치환은 전형적으로 단일 잔기의 치환이지만, 다수의 상이한 위치에서 동시에 일어날 수 있다; 삽입은 일반적으로 대략 1개 내지 10개의 아미노산 잔기 정도일 것이고; 결실은 대략 1개 내지 30개의 잔기 범위일 것이다. 결실 또는 삽입은 인접한 쌍에서 이루어질 수 있고, 즉, 2개의 잔기의 결실 또는 2개의 잔기의 삽입이 가능하다. 치환, 결실, 삽입 또는 이들의 임의의 조합이 최종 구축물에 도달하도록 조합될 수 있다. 돌연변이는 서열을 리딩 프레임(reading frame) 밖에 놓지 않아야 하고, 바람직하게는, 2차 mRNA 구조를 생산할 수 있는 상보적인 영역을 생성시키지 않을 것이다. 치환 변형은 1개 이상의 잔기가 제거되고 상이한 잔기가 그 자리에 삽입되는 것이다. 일부 예에서, 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다. 일부 예에서, 본원에서의 펩티드는 표 1에 제시된 펩티드에 비해 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, 변이체는 표 1에 제시된 펩티드에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 20-30, 30-40, 또는 40-50개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 대안적으로, 변이체는 표 1에 제시된 펩티드에 비해 50개 이하, 40개 이하, 30개 이하, 20개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 이같은 치환은 일반적으로 하기 표 2에 따라 이루어지고, 보존적 치환으로서 지칭된다. 단백질 변형에 대한 내성을 예측하는 방법이 업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Guo et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 101(25):9205-9210 (2004)] 참조).　
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일부 예에서, 치환이 보존적이지 않다. 예를 들어, 표 1에 제시된 펩티드 내의 아미노산이 펩티드의 일부 성질 또는 측면을 변경시킬 수 있는 아미노산으로 교체될 수 있다. 일부 예에서, 펩티드의 결합 성질을 변화시키기 위해 (예를 들어, 항원에 대한 펩티드의 결합 친화력을 증가시키거나 또는 감소시키기 위해 및/또는 항원에 대한 펩티드의 결합 특이성을 변경시키거나, 증가시키거나 또는 감소시키기 위해), 예를 들어 펩티드의 구조를 변화시키도록 비-보존적 아미노산 치환이 이루어질 수 있다.
일부 예에서, 펩티드 및/또는 펩티드 변이체는 표 1에 제시된 펩티드의 단편을 포함할 수 있거나 또는 이러한 단편일 수 있다. 이같은 단편은, 예를 들어 단편이 전장 펩티드의 결합 성질의 적어도 일부분 (예를 들어, 전장 펩티드의 결합 성질의 적어도 50％, 60％, 70％, 80％, 90％, 또는 100％)을 유지하는 한, 표 1에 제시된 CDR, FR, 및/또는 AA보다 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 50-100, 101-150개 더 적은 아미노산을 포함할 수 있다. 본원에서의 펩티드에서 아미노-말단 및/또는 카르복시-말단에서 말단절단이 이루어질 수 있다.
일부 예에서, 예를 들어 변형되지 않은 펩티드와 비교하여 펩티드 변이체의 결합 성질을 변경시키거나 (예를 들어 증가 또는 감소), 보존하거나, 또는 유지하도록, 펩티드 변이체의 상호작용 표면(interacting face)은 변형되지 않은 펩티드와 동일할 수 있다 (예를 들어, 실질적으로 동일할 수 있다). 펩티드의 상호작용 면을 확인하는 방법이 업계에 주지되어 있다 (문헌 [Gong et al., BMC: Bioinformatics, 6:1471-2105 (2007)]; [Andrade and Wei et al., Pure and Appl. Chem., 64(11):1777-1781 (1992)]; [Choi et al., Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 77(1):14-25 (2009)]; [Park et al., BMC: and Bioinformatics, 10:1471-2105 (2009)]).
당업자는 2개의 폴리펩티드 (예를 들어, 변형되지 않은 펩티드 및 펩티드 변이체)의 동일성을 결정하는 방법을 쉽게 이해할 것이다. 예를 들어, 동일성이 최고 수준이도록 2개의 서열을 정렬한 후에 동일성을 계산할 수 있다. 동일성을 계산하는 또 다른 방식은 공개된 알고리즘에 의해 수행될 수 있다. 문헌 [Smith and Waterman, Adv. Appl. Math, 2:482 (1981)]의 국소 동일성 알고리즘에 의해, 문헌 [Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)]의 동일성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌 [Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)]의 유사성 검색 방법에 의해, 이러한 알고리즘들의 전산화된 구현 (미국 위스콘신주 매디슨 사이언스 드라이브 575의 제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group)의 위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지(Wisconsin Genetics Software Package) 내의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 검사에 의해, 비교를 위한 서열들의 최적 정렬을 수행할 수 있다.
동일한 유형의 동일성을, 예를 들어 문헌 [Zuker, Science 244:48-52 (1989)]; [Jaeger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:7706-10 (1989)]; [Jaeger et al., Methods Enzymol. 183:281-306 (1989)]에 개시된 알고리즘에 의해, 핵산에 대해 수득할 수 있고, 이러한 문헌들은 적어도 핵산 정렬에 관한 물질에 대해 본원에 참조로 포함된다. 이러한 방법들 중 임의의 것이 전형적으로 사용될 수 있는 것으로, 그리고 특정 예에서 이러한 다양한 방법들의 결과가 상이할 수 있는 것으로 이해되지만, 당업자는 이러한 방법들 중 1가지 이상으로 동일성이 확인되면 서열이 진술된 동일성이 있다고, 그리고 본원에 개시된다고 언급된 것을 이해한다.
일부 예에서, 하기 방법 섹션에서 더욱 상세하게 기술되는 바와 같이, 본원에 개시된 방법을 사용하여 수득된 면역 세포 (예를 들어, 기억 B 세포를 포함하는 B 세포)로부터 단리 및/또는 정제된 유전 물질 (예를 들어, DNA 및/또는 mRNA)을 사용하여 본원에 개시된 치료 조성물이 생산될 수 있다. 일단 이같은 유전 물질이 수득되면, 이를 사용하여 본원에 개시된 치료 조성물을 생산하는 방법은 업계에 주지되어 있고/있거나 하기에서 요약된다.
일부 예에서, 펩티드는 검출가능한 표지를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 경우에, "표지"는 표지가 부착된 펩티드의 검출을 가능하게 하는 1개 이상의 원소, 동위원소, 또는 관능기가 모이어티(moiety) 내로 혼입되어 있는 모이어티를 지칭한다. 표지는 직접적으로 부착될 수 있거나 (즉, 결합을 통해), 또는 링커 (예를 들어, 고리형 또는 비-고리형, 분지형 또는 비-분지형, 치환 또는 비-치환 알킬렌; 고리형 또는 비-고리형, 분지형 또는 비-분지형, 치환 또는 비-치환 알케닐렌; 고리형 또는 비-고리형, 분지형 또는 비-분지형, 치환 또는 비-치환 알키닐렌; 고리형 또는 비-고리형, 분지형 또는 비-분지형, 치환 또는 비-치환 헤테로알킬렌; 고리형 또는 비-고리형, 분지형 또는 비-분지형, 치환 또는 비-치환 헤테로알케닐렌; 고리형 또는 비-고리형, 분지형 또는 비-분지형, 치환 또는 비-치환 헤테로알키닐렌; 치환 또는 비-치환 아릴렌; 치환 또는 비-치환 헤테로아릴렌; 또는 치환 또는 비-치환 아실렌, 또는 링커를 구성할 수 있는 이들의 임의의 조합)에 의해 부착될 수 있다. 표지는 검출될 본 발명의 폴리펩티드의 생물학적 활성 또는 특징을 방해하지 않는 임의의 위치에서 펩티드에 부착될 수 있다.
표지는 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 31P, 32P, 35S, 67Ga, 99mTc (Tc-99m), 111In, 123I, 125I, 169Yb, 및 186Re를 포함하지만 이에 한정되지 않는, 방사성 또는 중질 동위원소일 수 있는 동원원소 모이어티를 함유하는 표지; 효소 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제(peroxidase))에 결합될 수 있는 면역 또는 면역반응성 모이어티 (항체 또는 항원일 수 있음)를 포함하는 표지; 유색, 발광성, 인광성이거나 또는 형광 모이어티를 포함하는 표지 (예를 들어, 형광 표지 FITC); 하나 이상의 광친화 모이어티가 있는 표지; 하나 이상의 결합 파트너가 있는 리간드 모이어티가 있는 표지 (예컨대 비오틴-스트렙타비딘, FK506-FKBP 등)를 포함할 수 있다.
일부 예에서, 표지는 생물학적 시스템 내의 분자간 상호작용의 직접적인 해명을 위한 하나 이상의 광친화 모이어티를 포함할 수 있다. 디아조 화합물, 아지드, 또는 디아지린의 니트렌 또는 카르벤으로의 광변환을 대부분 기초로 하는 다양한 공지된 발광체를 사용할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Bayley, H., Photogenerated Reagents in Biochemistry and Molecular Biology (1983), Elsevier, Amsterdam]을 참조하고, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다). 본 발명의 특정 실시양태에서, 사용된 광친화 표지는 4-아지도-2,3,5,6-테트라플루오로벤조산을 포함하지만 이에 한정되지 않는, 하나 이상의 할로겐 모이어티로 치환된 o-, m- 및 p-아지도벤조일이다.
표지는 또한 영상화제일 수 있거나 또는 영상화제로서의 역할을 할 수 있다. 예시적인 영상화제는 양전자 방출 단층촬영 (PET), 컴퓨터 보조 단층촬영 (CAT), 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영, x선, 투시 검사, 및 자기 공명 영상화 (MRI)에서 사용되는 것들; 항구토제; 및 조영제를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 예시적인 진단제는 형광 모이어티, 발광 모이어티, 자기 모이어티; 가돌리늄 킬레이트 (예를 들어, DTPA, DTPA-BMA, DOTA 및 HP-DO3A와의 가돌리늄 킬레이트), 철 킬레이트, 마그네슘 킬레이트, 망가니즈 킬레이트, 구리 킬레이트, 크로뮴 킬레이트, CAT 및 x-선 영상화에 유용한 아이오딘-기반 물질, 및 방사성핵종을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 적절한 방사성핵종은 123I, 125I, 130I, 131I, 133I, 135I, 47Sc, 72As, 72Se, 90Y, 88Y, 97Ru, 100Pd, 101mRh, 119Sb, 128Ba, 197Hg, 211At, 212Bi, 212Pb, 109Pd, 111In, 67Ga, 68Ga, 67Cu, 75Br, 77Br, 99mTc, 14C, 13N, 150, 32P, 33P, 및 18F를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.
형광 및 발광 모이어티는 "염료", "표지" 또는 "지시약"으로 통상적으로 지칭되는 다양한 상이한 유기 및 무기 소형 분자를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 예는 플루오레세인, 로다민, 아크리딘 염료, 알렉사 염료, 시아닌 염료 등을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 형광 및 발광 모이어티는 다양한 천연 발생 단백질 및 이의 유도체, 예를 들어 유전자 조작 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 형광 단백질은 녹색 형광 단백질 (GFP), 강화 GFP, 적색, 청색, 황색, 청록색 및 사파이어 형광 단백질, 산호초 형광 단백질 등을 포함한다. 발광 단백질은 루시페라제(luciferase), 에쿼린(aequorin) 및 이의 유도체를 포함한다. 다수의 형광 및 발광 염료 및 단백질이 업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 미국 특허 공개 2004/0067503; 문헌 [Valeur, B., "Molecular Fluorescence: Principles and Applications," John Wiley and Sons, 2002]; 및 [Handbook of Fluorescent Probes and Research Products, Molecular Probes, 9th edition, 2002] 참조).
본원에서 사용되는 경우에 "정제된"이라는 용어는 확인되어 이의 천연 환경의 성분으로부터 분리 및/또는 회수된 기타 분자, 예를 들어 폴리펩티드, 핵산 분자를 지칭한다. 따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 이들이 이들의 천연 환경의 하나 이상의 성분으로부터 분리된 경우에 정제된 항체이다.
본원에서 사용되는 경우에 "에피토프"라는 용어는 항체에 결합할 수 있는 단백질 결정인자를 지칭한다. 에피토프는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자들의 화학적으로 활성인 표면 배치로 이루어지고, 일반적으로 특이적인 3차원 구조 특성, 뿐만 아니라 특이적인 전하 특성을 지닌다. 형상 및 비-형상 에피토프는 전자에 대한 결합은 변성 용매의 존재 하에 상실되지만 후자는 그렇지 않다는 점에서 구별된다.
일부 예에서, 본 개시내용은 개시된 펩티드 (예를 들어, 표 1에 개시됨)에 상응하는 (예를 들어, 이를 코딩하는) 뉴클레오티드 서열을 제공한다. 이러한 서열들은 개시된 펩티드에 관련된 모든 축퇴성 서열, 즉 1개의 특정 펩티드를 코딩하는 서열을 갖는 모든 핵산 및 이의 변이체 및 유도체를 포함한다. 따라서, 각각의 특정 핵산 서열이 본원에서 기재되지 않을 수 있지만, 개시된 폴리펩티드 서열을 통해 각각의 모든 서열이 실제로는 본원에 개시되고 기술된 것으로 이해된다.
일부 예에서, 개시된 것들의 핵산은 발현 벡터를 포함할 수 있다. 적절한 벡터의 예는 플라스미드, 인공 염색체, 예컨대 BAC, YAC, 또는 PAC, 및 바이러스 벡터를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.
제공된 벡터는, 예를 들어 복제 기점 및/또는 마커를 또한 포함할 수 있다. 마커 유전자는 선별가능한 표현형, 예를 들어 항생제 저항성을 세포에 부여할 수 있다. 마커 생성물은 벡터가 세포에 전달되었는지, 그리고 전달되었으면 발현되고 있는지를 결정하는데 사용된다. 포유동물 세포에 대한 선별가능한 마커의 예는 디히드로폴레이트 리덕타제(reductase) (DHFR), 티미딘 키나제, 네오마이신, 네오마이신 유사체 G418, 히그로마이신, 퓨로마이신, 및 블라스티시딘이다. 이같은 선별가능한 마커가 포유동물 숙주 세포 내로 성공적으로 전달된 경우, 형질전환된 포유동물 숙주 세포는 선별 압력 하에 놓여도 생존할 수 있다. 기타 마커의 예는, 예를 들어 이. 콜라이(E. coli) lacZ 유전자, 녹색 형광 단백질 (GFP), 및 루시페라제를 포함한다. 또한, 발현 벡터는 발현된 폴리펩티드의 조작 또는 검출 (예를 들어, 정제 또는 국소화)을 용이하게 하도록 디자인된 태그 서열을 포함할 수 있다. 태그 서열, 예컨대 GFP, 글루타티온 S-트랜스퍼라제(transferase) (GST), 폴리히스티딘, c-myc, 헤마글루티닌, 또는 FLAG™ 태그 (코닥(Kodak); 코네티컷주 뉴헤이번) 서열은 전형적으로 코딩된 폴리펩티드와의 융합물로서 발현된다. 이같은 태그는 카르복실 또는 아미노 말단을 포함하여 폴리펩티드 내의 어느 곳에든 삽입될 수 있다.
일부 예에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 핵산 (예를 들어, 벡터) 및/또는 펩티드를 포함하는 세포를 포함한다. 세포는, 예를 들어 진핵생물 및/또는 원핵생물 세포를 포함할 수 있다. 일반적으로, 본원에서 사용될 수 있는 세포는, 예를 들어 아메리칸 타입 컬처 콜렉션 (ATCC: American Type Culture Collection) (미국 20108 버지니아주 머내서스 우편 사서함 1549)에서 시판된다. 문헌 [F. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, NY, (1998)]을 또한 참조한다. 본원에 개시된 세포의 생성에 유용한 형질전환 및 형질감염 방법이, 예를 들어 문헌 [F. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, NY, (1998)]에 기술되어 있다.
제약 제제
일부 예에서, 본원에 개시된 치료 조성물은 암 치료에서 사용되는 기타 화학물, 약물 및/또는 작용제를 포함할 수 있다. 이같은 화합물, 약물 및/또는 작용제는, 예를 들어 화학요법 약물, 소형 분자 약물, 또는 소정의 암에 대한 면역 반응을 자극하는 항체를 포함할 수 있다. 일부 예에서, 치료 조성물은, 예를 들어 하나 이상의 본원에서 개시된 펩티드, 및 항-CTLA-4 항체 또는 펩티드, 항-PD-1 항체 또는 펩티드, 및/또는 항-PDL-1 항체 또는 펩티드 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 예에서, 본원에 개시된 치료 조성물은 하나 이상 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 10개 미만)의 화합물과 조합될 수 있다.
일부 예에서, 본원에 개시된 치료 조성물은 히스톤 데아세틸라제 억제제 ("HDAC") 억제제를 포함하는 다른 화합물을 포함할 수 있다. HDAC 억제제의 예는, 예를 들어 히드록삼산, 보리노스타트(Vorinostat) (졸린자(Zolinza)); 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA) (머크(Merck)), 트리코스타틴(Trichostatin) A (TSA), LAQ824 (노파르티스(Novartis)), 파노비노스타트(Panobinostat) (LBH589) (노파르티스), 벨리노스타트(Belinostat) (PXD101) (큐라젠(CuraGen)), ITF2357 이탈파르마코(Italfarmaco) SpA (시니셀로(Cinisello)), 시클릭 테트라펩티드; 뎁시펩티드(Depsipeptide) (로미뎁신(romidepsin), FK228) (글로우세스터 파마슈티칼스(Gloucester Pharmaceuticals)), 벤즈아미드(Benzamide); 엔티노스타트(Entinostat) (SNDX-275/MS-275) (신닥스 파마슈티칼스(Syndax Pharmaceuticals)), MGCD0103 (셀진(Celgene)), 단쇄 지방족 산, 발프로산, 페닐 부티레이트, AN-9, 피바넥스(pivanex) (타이탄 파마슈티칼(Titan Pharmaceutical)), CHR-3996 (크로마 테라퓨틱스(Chroma Therapeutics)), 및 CHR-2845 (크로마 테라퓨틱스)를 포함한다.
일부 예에서, 본원에 개시된 치료 조성물은 보르테조밉(Bortezomib) (밀레니엄 파마슈티칼스(Millennium Pharmaceuticals)), NPI-0052 (네레우스 파마슈티칼스(Nereus Pharmaceuticals), 카르필조밉(Carfilzomib) (PR-171) (오닉스 파마슈티칼스(Onyx Pharmaceuticals)), CEP 18770, 및 MLN9708을 예를 들어 포함하는 프로테아솜 억제제를 포함하는 기타 화합물을 포함할 수 있다.
일부 예에서, 본원에 개시된 치료 조성물은 알킬화제 예컨대 멜팔란 및 토포이소머라제(topoisomerase) 억제제 예컨대 MICA 발현을 증가시키는 것으로 나타난 아드리아마이신 (독소루비신)을 포함할 수 있고, 이는 항-MICA 모노클로날 항체의 효능을 강화할 수 있다.
일부 예에서, 본원에 개시된 치료 조성물은 제약 조성물로서 또는 제약 조성물에서 사용하기 위해 제제화될 수 있다. 이같은 조성물은 임의의 경로, 예를 들어 미국 식품의약청 (FDA)가 승인한 임의의 경로를 통해 대상체에게 투여하기 위해 제제화 또는 개조될 수 있다. 예시적인 방법이 FDA의 [CDER Data Standards Manual, 버전 번호 004] (fda.give/cder/dsm/DRG/drg00301.htm에서 입수가능함)에 기술되어 있다.
일부 예에서, 제약 조성물은 유효량의 하나 이상의 펩티드를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 경우에, "유효량" 및 "치료에 효과적인"이라는 용어들은 이의 투여 정황에서 의도된 효과 또는 생리학적 결과를 야기하는데 효과적인 기간 (급성 또는 만성 투여 및 주기적 또는 연속 투여 포함) 동안의 하나 이상의 펩티드의 양 또는 농도를 지칭한다.
일부 예에서, 제약 조성물은 하나 이상의 펩티드 및 임의의 제약상 허용되는 담체, 아주반트(adjuvant) 및/또는 비히클(vehicle)을 포함할 수 있다. 일부 예에서, 제약은 하나 이상의 추가적인 치료제를 질환 또는 질환 증상의 조정을 달성하는데 효과적인 양으로 추가로 포함할 수 있다.
"제약상 허용되는 담체 또는 아주반트"라는 용어는 본 발명의 펩티드와 함께 환자에게 투여될수 있고, 이의 약리학적 활성을 파괴하지 않으며, 치료적인 양의 화합물을 전달하는데 충분한 용량으로 투여되었을 때 비-독성인 담체 또는 아주반트를 지칭한다.
본 발명의 제약 조성물에서 사용될 수 있는 제약상 허용되는 담체, 아주반트 및 비히클은 이온 교환제, 알루미나, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 자기-유화 약물 전달 시스템 (SEDDS) 예컨대 d-α-토코페롤 폴리에틸렌글리콜 1000 숙시네이트, 제약 투여 형태에서 사용되는 계면활성제 예컨대 트윈(Tween) 또는 기타 유사 중합체 전달 매트릭스, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 완충 물질 예컨대 포스페이트, 글리신, 소브르산, 소르브산칼슘, 포화 식물성 지방산의 부분적 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 프로타민 술페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 삼규산마그네슘, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스-기반 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양털 지방을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 시클로덱스트린 예컨대 α-, β- 및 γ-시클로덱스트린이 또한 본원에 기술된 제제의 화합물의 전달을 강화하기 위해 유리하게 사용될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 임의의 통상적인 비-독성의 제약상 허용되는 담체, 아주반트 또는 비히클을 함유할 수 있다. 일부 경우에, 제제화된 화합물 또는 이의 전달 형태의 안정성을 강화하기 위해 제제의 pH가 제약상 허용되는 산, 염기 또는 완충제로 조정될 수 있다. 본원에서 사용되는 경우의 비경구라는 용어는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 동맥내, 윤활막내, 흉골내, 경막내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함한다.
제약 조성물은 흡입 및/또는 코 투여를 위한 용액 또는 분말의 형태일 수 있다. 적절한 분산제 또는 습윤화제 (예를 들어, 트윈 80) 및 현탁제를 사용하여 업계에 공지된 기술에 따라 이같은 조성물을 제제화할 수 있다. 또한 멸균성 주사 제제는, 예를 들어 1,3-부탄디올 내의 용액으로서, 비경구용으로 허용되는 비-독성 희석제 또는 용매 내의 멸균성 주사 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매에는 만니톨, 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균성 고정유가 용매 또는 현탁 매질로서 관례적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드가 포함되는 임의의 무자극 고정유가 사용될 수 있다. 지방산, 예컨대 올레산 및 이의 글리세리드 유도체가 주사제의 제조에서 유용하고, 천연의 제약상 허용되는 오일, 예컨대 올리브유 또는 피마자유도 특히 이들의 폴리옥시에틸화 버전에서 그러하다. 이러한 오일 용액 또는 현탁액은 장쇄 알콜 희석제 또는 분산제, 또는 카르복시메틸 셀룰로스 또는 에멀젼 또는 현탁액과 같은 제약상 허용되는 투여 형태의 제제화에서 통상적으로 사용되는 유사한 분산제를 또한 함유할 수 있다. 기타 통상적으로 사용되는 계면활성제 예컨대 트윈 또는 스판(Span) 및/또는 제약상 허용되는 고체, 액체 또는 기타 투여 형태의 제작에서 통상적으로 사용되는 기타 유사한 유화제 또는 생체이용률 강화제가 제제화 목적으로 또한 사용될 수 있다.
제약 조성물은 캡슐, 정제, 에멀젼 및 수성 현탁액, 분산액 및 용액을 포함하지만 이에 한정되지 않는 임의의 경구용으로 허용되는 투여 형태로 경구 투여될 수 있다. 경구 사용하기 위한 정제의 경우, 통상적으로 사용되는 담체는 락토스 및 옥수수 전분을 포함한다. 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘이 또한 전형적으로 첨가된다. 캡슐 형태의 경구 투여를 위해, 유용한 희석제는 락토스 및 건조 옥수수 전분을 포함한다. 수성 현탁액 및/또는 에멀젼이 경구 투여되는 경우, 활성 성분이 유화제 및/또는 현탁제와 조합되어 유성 상 내에 현탁 또는 용해될 수 있다. 원한다면, 특정 감미제 및/또는 풍미제 및/또는 착색제가 첨가될 수 있다.
대안적으로 또는 추가적으로, 제약 조성물이 코 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 이같은 조성물은 제약 제제 업계에 주지된 기술에 따라 제조되고, 벤질 알콜 또는 기타 적절한 방부제, 생체이용률을 강화하기 위한 흡수 촉진제, 플루오로카본, 및/또는 업계에 공지된 기타 용해제 또는 분산제를 사용하여, 염수 내의 용액으로서 제조될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기의 방법에서 본원에 개시된 펩티드 또는 제약 조성물 (하기에서 'X'로 지시됨) 중 임의의 하나 이상을 사용하는 방법:
본원에 개시된 하나 이상의 질환 또는 병태 (예를 들어, 하기 예에서 'Y'로 지칭되는 암)의 치료에서 의약으로서 사용하기 위한 물질 X. Y의 치료를 위한 의약의 제작을 위한 물질 X의 용도; 및 Y의 치료에서 사용하기 위한 물질 X
를 제공한다.
일부 예에서, 본원에 개시된 치료 조성물은 미국에서의 판매, 미국으로의 수출 및/또는 미국으로부터의 수출을 위해 제제화될 수 있다.
방법
일부 예에서, 방법은 병태 또는 질환에 걸려 있거나 걸렸었고 이러한 병태 또는 질환에 대해 양성 면역 반응을 나타낸 인간 대상체의 선별을 포함할 수 있다. 일부 예에서, 적절한 대상체는, 예를 들어 병태 또는 질환에 걸려 있거나 걸렸었지만, 질환 또는 이의 측면이 해소되었고/되었거나, (예를 들어, 동일한 병태 또는 질환의 다른 대상체 (예를 들어, 대다수의 대상체)에 비해) 감소된 질환 증상을 나타내고/내거나, 예를 들어 (예를 들어, 동일한 병태 또는 질환의 다른 대상체 (예를 들어, 대다수의 대상체)에 비해) 무증상 상태로, (예를 들어, 동일한 병태 또는 질환의 다른 대상체 (예를 들어, 대다수의 대상체)에 비해) 병태 또는 질환이 있으면서 장기간 동안 생존하고 있는 대상체를 포함한다. 일부 예에서, 대상체가 병태 또는 질환에 대해 백신접종된 적이 있는 경우 (예를 들어, 기존에 백신접종되었고/되었거나 백신접종되고 재-백신접종됨 (예를 들어, 부스터(booster) 백신을 받음))에 대상체가 선별될 수 있다.
본원에서 사용되는 경우에, "대상체"라는 용어는 임의의 동물을 지칭한다. 일부 예에서, 대상체는 포유동물이다. 일부 예에서, 본원에서 사용되는 경우에, "대상체"라는 용어는 인간 (예를 들어, 남성, 여성, 또는 아동)을 지칭한다. 방법에서 사용하기 위한 샘플은 혈청 샘플, 예를 들어 선별된 대상으로부터 수득된 것을 포함할 수 있다.
일부 예에서, 대상체 선별은 대상체 (예를 들어, 후보 대상체)로부터 샘플을 수득하는 단계 및 대상체가 선별에 적절하다는 것의 지시에 대해 샘플을 테스트하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 예에서, 대상체는, 예를 들어 건강 관리 전문가에 의해, 병태 또는 질환에 걸렸었거나 걸려 있는 것으로 확증 또는 확인될 수 있다. 일부 예에서, 병태 또는 질환에 대한 양성 면역 반응의 표현이 환자 기록, 가족 이력, 및/또는 양성 면역 반응의 지시를 검출하는 것으로부터 이루어질 수 있다. 일부 예에서, 여러 관계자가 대상체 선별에 포함될 수 있다. 예를 들어, 제1 관계자가 후보 대상체로부터 샘플을 수득할 수 있고, 제2 관계자가 샘플을 테스트할 수 있다. 일부 예에서, 의사 (예를 들어, 일반의)가 대상체를 선별 및/또는 조회할 수 있다. 일부 예에서, 대상체 선별은 선별된 대상으로부터 샘플을 수득하는 단계 및 샘플을 보관하는 단계 및/또는 본원에 개시된 방법에서 사용하는 단계를 포함할 수 있다. 샘플은, 예를 들어 세포 또는 세포 집단을 포함할 수 있다.
일부 예에서, 면역 세포를 수득 또는 표적화하는 것은 예를 들어, 표적 면역 세포에 결합할 수 있는 (예를 들어, 특이적으로 결합할 수 있는) 사량체 면역원을 수득하거나 제공하는 단계; 사량체 면역원을 샘플과 접촉시키는 단계; 사량체 면역원을 검출하는 단계; 사량체 면역원이 표적 면역 세포에 결합되는지 여부를 결정하는 단계; 및 사량체 면역원이 표적 면역 세포에 결합되면, 표적 면역 세포를 수득하는 단계 중 하나 이상 및/또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
사량체 면역원은, 예를 들어 병태 또는 질환에 관련되고/되거나 표적 면역 세포에 결합하는 (예를 들어, 특이적으로 결합하는) 면역원을 포함할 수 있고, 이때 이러한 표적 면역 세포는 선택된 병태 또는 질환과 관련된다. 병태 또는 질환에 관련된 면역원 및 표적 면역 세포는, 예를 들어 특정 병태 또는 질환이 있는 대상에 존재하지만 이러한 병태 또는 질환이 없는 대상에는 존재하지 않는 면역원 또는 면역 세포; 및/또는 특정 병태 또는 질환이 있는 대상에서 이러한 병태 또는 질환이 없는 대상과 비교하여 변경된 수준 (예를 들어, 증가됨)으로 존재하는 면역원 또는 면역 세포를 포함한다. 일부 예에서, 면역원 또는 면역 세포는 암 특이적일 수 있다. 면역원은 가용성일 수 있다. 사량체 면역원은 사량체 (예를 들어, 사량체화된 단량체, 이량체 및/또는 삼량체 항원을 포함함)의 면역원 (예를 들어, 항원 및/또는 에피토프)을 포함할 수 있다. 일부 예에서, 사량체 면역원은 유사한 조건 하에 세포에 대한 비-사량체 형태의 면역원의 결합 수준과 비교하여 세포에 대한 결합이 증가된다. 일부 예에서, 사량체 항원은 검출가능한 모이어티, 예를 들어 스트렙타비딘 모이어티를 포함한다. 사량체화 방법이 업계에 공지되어 있고, 본원에서 개시된다.
업계에 공지되어 있고/있거나 본원에서 개시된 방법을 사용하여 사량체 면역원을 검출하는 것 및/또는 사량체 면역원이 표적 세포에 결합되는지 여부를 결정하는 것을 수행할 수 있다. 예를 들어, 방법은 유동 세포측정법을 포함할 수 있다. 분류 및 게이팅 방법을 포함하여, 유동 세포측정법에 대한 최적화 방법이 업계에 공지되어 있고/있거나 본원에서 개시된다. 일부 예에서, 방법은 표적 면역 세포에 결합된 사량체 면역원의 결합, 결합 친화력, 및/또는 결합 특이성의 수준의 분석을 포함할 수 있다. 예를 들어, 사량체 면역원과 표적 면역 세포 사이의 미리 정해진 수준의 결합이 결정되는 경우에 (예를 들어, 이러한 경우에만), 표적 면역 세포가 수득될 수 있다. 미리 정해진 결합 수준은 특정 수준일 수 있고/있거나 상대적인 수준일 수 있다. 표적 면역 세포를 수득하는 것은 표적 면역 세포의 수득, 제공, 확인, 선별, 정제 및/또는 단리를 포함할 수 있다. 이같은 방법은, 예를 들어 세포 분류 방법, 세포 강화, 및/또는 배경 감소를 포함할 수 있다.
일부 예에서, 자기 항원에 대해 지시된 면역 세포를 수득하는 것은, 예를 들어 자기 항원에 대한 양성 면역 반응을 나타내는 대상체를 확인하는 단계; 다량체 형태의 자기 항원을 수득하거나 제공하는 단계; 다량체 형태의 자기 항원을, 자기 항원에 대한 양성 면역 반응을 나타내는 대상체로부터의 샘플과 접촉시키는 단계; 다량체 형태의 자기 항원에 결합된 면역 세포를 수득하는 단계 중 하나 이상 및/또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
일부 예에서, 방법은 암 환자로부터 자기 항원에 대해 지시된 면역 세포를 수득하는 단계를 포함할 수 있고, 예를 들어 자기 항원에 대한 양성 면역 반응을 나타내는 대상체를 확인하는 단계; 다량체 형태의 자기 항원을 제공하는 단계; 다량체 형태의 자기 항원을, 자기 항원에 대한 양성 면역 반응을 나타내는 대상체로부터의 샘플과 접촉시키는 단계; 및 다량체 형태의 자기 항원에 결합된 면역 세포를 수득하는 단계 중 하나 이상 및/또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
다량체 형태의 자기 항원은, 예를 들어 병태 또는 질환에 관련되고/되거나 표적 면역 세포에 결합하는 (예를 들어, 특이적으로 결합하는) 자기 항원을 포함할 수 있고, 이때 이러한 표적 면역 세포는 선택된 병태 또는 질환과 관련된다. 병태 또는 질환에 관련된 자기 항원 및 표적 면역 세포는, 예를 들어 특정 병태 또는 질환이 있는 대상에 존재하지만 이러한 병태 또는 질환이 없는 대상에는 존재하지 않는 항원 또는 면역 세포; 및/또는 특정 병태 또는 질환이 있는 대상에서 이러한 병태 또는 질환이 없는 대상과 비교하여 변경된 수준 (예를 들어, 증가됨)으로 존재하는 면역원 또는 면역 세포를 포함한다. 일부 예에서, 병태 또는 질환은 암일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 폐, 유방, 신장, 난소, 전립선, 췌장, 위, 및 결장 암종, 림프종 또는 백혈병일 수 있다. 일부 예에서, 자기 항원 또는 면역 세포는 암 특이적일 수 있다. 자기 항원은 가용성일 수 있다. 다량체 형태의 자기 항원은 사량체 형태 (예를 들어, 사량체화된 단량체, 이량체 및/또는 삼량체 항원을 포함함)의 자기 항원 (예를 들어, 항원 및/또는 에피토프)을 포함할 수 있다. 일부 예에서, 다량체 형태의 자기 항원은 검출가능한 모이어티, 예를 들어 스트렙타비딘 모이어티를 포함한다. 다량체화 방법이 업계에 공지되어 있고, 본원에서 개시된다.
수득된 표적 면역 세포로부터 유전 물질 (예를 들어, DNA 및/또는 mRNA)을 단리 또는 정제하는 방법이 업계에 공지되어 있고, 본원에서 예시된다. 일단 이같은 유전 물질이 수득되었으면, 이를 사용하여 본원에 개시된 치료 조성물을 생산하는 방법은 주지되어 있고/있거나 하기에서 요약된다. 상기 논의된 바와 같이, 본원에 개시된 펩티드 변이체를 생성하기 위해 업계에 공지된 기술을 사용하여 유전 물질이 달라질 수 있다.
표적 세포 내에 함유되었거나 표적 세포로부터 수득된 핵산 (예를 들어, cDNA)으로부터 펩티드를 생성시키는 것은, 예를 들어 표적 면역 세포 (예를 들어, 단일한 또는 단리된 확인된 표적 면역 세포)로부터의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 분석, 예를 들어 서열분석을 포함할 수 있다. 일부 예에서, 방법은 완전히 인간형인 항체, 또는 이의 단편 (예를 들어, 상기 논의된 바와 같음)를 생성시키는 것, 및 비-인간 항체의 인간화를 포함할 수 있다. 통상적인 절차를 사용하여 (예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써), 수득된 면역 세포로부터 DNA를 쉽게 단리 및/또는 서열분석할 수 있다.
일단 단리되면, DNA를 발현 벡터 내에 놓을 수 있고, 그 후 이를 형질감염되지 않으면 항체 단백질을 생산하지 않는 숙주 세포 예컨대 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포 내로 형질감염시켜, 재조합 숙주 세포에서의 모노클로날 항체의 합성을 수득한다. 항체를 코딩하는 DNA의 박테리아에서의 재조합 발현에 대한 리뷰 논문은 문헌 [Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993)] 및 [Pluckthun, Immunol. Revs., 130:151-188 (1992)]을 포함한다.
항체 또는 이의 변이체의 재조합 발현은 일반적으로 이러한 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터의 구축을 필요로 한다. 따라서, 본 발명은 프로모터에 작동가능하게 연결된, 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 또는 이의 일부분, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복제가능한 벡터를 제공한다. 이같은 벡터가 항체 분자의 불변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,981,216; 5,591,639; 5,658,759 및 5,122,464 참조), 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄 양쪽 모두의 발현을 위해 항체의 가변 도메인이 이같은 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
일단 발현 벡터가 통상적인 기술에 의해 숙주 세포 내로 전달되면, 형질감염된 세포를 통상적인 기술에 의해 배양하여 항체가 생산된다. 따라서, 본 발명은 이종성 프로모터에 작동가능하게 연결된, 본 발명의 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 일부분, 또는 본 발명의 단일쇄 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 숙주 세포를 포함한다. 이중-쇄 항체의 발현을 위한 특정 실시양태에서, 하기에 상술된 바와 같이, 중쇄 및 경쇄 양쪽 모두를 코딩하는 벡터들이 전체 이뮤노글로불린 분자의 발현을 위해 숙주 세포 내에서 공동-발현될 수 있다.
재조합 항체의 발현을 위한 숙주로서 이용가능한 포유동물 세포주는 업계에 주지되어 있고, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장 (BHK) 세포, 원숭이 신장 세포 (COS), 인간 간세포 암종 세포 (예를 들어, Hep G2), 인간 상피 신장 293 세포, 및 다수의 기타 세포주를 포함하지만 이에 한정되지 않는, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC)으로부터 입수가능한 다수의 불멸화 세포주를 포함한다. 상이한 숙주 세포들은 단백질 및 유전자 생성물의 번역후 프로세싱 및 변형을 위한 특징적이고 특정한 메카니즘을 지닌다. 발현된 항체 또는 이의 일부분의 정확한 변형 및 프로세싱을 확실히 하기 위해 적합한 세포주 또는 숙주 시스템이 선택될 수 있다. 이를 위해, 1차 전사물의 적합한 프로세싱, 글리코실화, 및 유전자 생성물의 인산화를 위한 세포 기구를 보유하는 진핵생물 숙주 세포가 사용될 수 있다. 이같은 포유동물 숙주 세포는 CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0 (어떠한 기능성 이뮤노글로불린 쇄도 내인성으로 생산하지 않는 뮤린 골수종 세포주), SP20, CRL7O3O 및 HsS78Bst 세포를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 한 실시양태에서, 인간 림프구를 불멸화시킴으로써 개발된 인간 세포주를 사용하여 재조합에 의해 모노클로날 항체를 생산할 수 있다. 한 실시양태에서, 인간 세포주 PER.C6. (크루셀(Crucell), 네덜란드)을 사용하여 재조합에 의해 모노클로날 항체를 생산할 수 있다.
일부 예에서, 본원에서 개시된 펩티드가 합성으로 생성될 수 있다. 본원에서 기술된 펩티드를 합성하는데 유용한 합성 화학 변환 및 보호기 방법 (보호 및 탈보호)이 업계에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989)]; [T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3d. Ed., John Wiley and Sons (1999)]; [L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994)]; 및 [L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)] 및 이의 후속판에 기술된 것들을 포함한다.
당업자에게 주지된 화학 합성 방법에 의해 펩티드를 또한 제조할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Fields et al., Chapter 3 in Synthetic Peptides: A User's Guide, ed. Grant, W. H. Freeman & Co., New York, N.Y., 1992, p. 77] 참조. 따라서, 예를 들어 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems)의 펩티드 합성기 모델 430A 또는 431 상에서, 측쇄가 보호된 아미노산을 사용하여 t-Boc 또는 Fmoc 화학에 의해 α-NH2를 보호하면서, 고체 상 합성의 자동 메리필드(Merrifield) 기술을 사용하여 펩티드를 합성할 수 있다.
본원에 기술된 펩티드를 제조하는 한 방식은 고체 상 펩티드 합성 (SPPS)을 사용하는 것이다. 가교된 폴리스티렌 수지에 링커 분자와 함께 산에 불안정한 결합을 통해 C-말단 아미노산이 부착된다. 이러한 수지는 합성에 사용된 용매에 불용성이어서, 과량의 시약 및 부산물을 씻어내는 것을 비교적 간단하고 신속하게 한다. 산에서는 안정적이지만 염기에 의해 제거되는 Fmoc 기로 N-말단이 보호된다. 염기에 안정적이고 산에 불안정한 기로 임의의 측쇄 관능기가 보호된다.
천연 화학 라이게이션을 사용하여 개별적인 합성 펩티드들을 결합시킴으로써 더 긴 펩티드가 제조될 수 있다. 대안적으로, 더 긴 합성 펩티드가 주지된 재조합 DNA 기술에 의해 합성될 수 있다. 주지된 표준 안내서에서 이같은 기술이 상세한 프로토콜과 함께 제공된다. 본 발명의 펩티드를 코딩하는 유전자를 구축하기 위해, 바람직하게는 유전자가 발현될 생물에 대해 최적인 코돈으로, 아미노산 서열을 역-번역하여 이러한 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 수득한다. 다음으로, 전형적으로는 펩티드 및 필요하다면 임의의 조절 요소를 코딩하는 올리고뉴클레오티드를 합성하는 것에 의해, 합성 유전자를 제조한다. 이러한 합성 유전자를 적절한 클로닝 벡터 내에 삽입하고, 숙주 세포 내로 형질감염시킨다. 그 후, 선택된 발현 시스템 및 숙주에 적합한 적절한 조건 하에 펩티드를 발현시킨다. 펩티드를 정제하고, 표준 방법에 의해 특성화한다.
고-처리량의 조합형 방식으로, 예를 들어 어드밴스드 켐테크(Advanced Chemtech)로부터 입수가능한 고-처리량 다중 채널 조합형 합성기를 사용하여 펩티드를 제조할 수 있다.
예를 들어, 펩티드의 생리학적 안정성을 증가시키기 위해, 레트로-인버소(retro-inverso) 결합 (C(O)-NH); 환원된 아미드 결합 (NH-CH2); 티오메틸렌 결합 (S-CH2 또는 CH2-S); 옥소메틸렌 결합 (O-CH2 또는 CH2-O); 에틸렌 결합 (CH2-CH2); 티오아미드 결합 (C(S)-NH); 트랜스-올레핀 결합 (CH=CH); 플루오로로 치환된 트랜스-올레핀 결합 (CF=CH); 케토메틸렌 결합 (C(O)-CHR) 또는 CHR-C(O) [식 중, R은 H 또는 CH3이다]; 및 플루오로-케토메틸렌 결합 (C(O)-CFR 또는 CFR-C(O) [식 중, R은 H 또는 F 또는 CH3이다]로 펩티드 결합이 교체될 수 있다.
아세틸화, 아미드화, 비오티닐화, 신나모일화, 파르네실화, 플루오레세인화, 포르밀화, 미리스토일화, 팔미토일화, 인산화 (Ser, Tyr 또는 Thr), 스테아로일화, 숙시닐화 및 술푸릴화에 의해 펩티드가 추가로 변형될 수 있다. 상기 논의된 바와 같이, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG); 알킬 기 (예를 들어, C1-C20 직선형 또는 분지형 알킬 기); 지방산 라디칼; 및 이들의 조합물에 펩티드가 접합될 수 있다.
일부 예에서, 이뮤노글로불린 분자의 정제를 위해 업계에 공지되어 있는 임의의 방법에 의해, 예를 들어 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환, 친화력 (특히 특정 항원에 대한 친화력에 의한 것), 단백질 A 또는 단백질 G, 및 사이징(sizing) 칼럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 용해도에 의해, 또는 단백질 정제를 위한 임의의 기타 표준 기술에 의해 펩티드가 정제될 수 있다. 또한, 상기에서 기술되거나 그렇지 않으면 정제를 용이하게 하는 것으로 업계에 공지되어 있는 이종성 폴리펩티드 서열 (본원에서 "태그"로 지칭됨)에 본 발명의 항체 또는 이의 단편이 융합될 수 있다.
예시적이고 비-제한적인, 이러한 방법들의 개관이 도 21에서 제시된다. 순서는 함축되지 않는다.
사용 방법
일부 예에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공한다.
MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA)에 면역특이적으로 결합하는 펩티드를 포함하는 조성물을 치료 유효량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 펩티드는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VH의 상보성 결정 영역 (CDR) 3, 및 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 1, 6, 7, 8 또는 9의 VL의 CDR3을 포함하는 것인, 대상체에서 암 또는 암의 증상을 치료 및/또는 예방하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은 MICA의 과발현과 연관된 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 폐, 유방, 신장, 난소, 전립선, 췌장, 위 및 결장 암종, 림프종 또는 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 형질 세포 악성종양, 예를 들어 다발성 골수종 (MM) 또는 형질 세포의 전암성 병태이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암에 걸린 것으로 또는 암에 걸리기 쉬운 것으로 진단되었다.
일부 예에서, 본 개시내용은 MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA)에 면역특이적으로 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물을 치료 유효량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 항체는 서열 11, 149, 168, 186, 또는 204의 VH 서열에서 제시된 바와 같은 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열 4, 151, 170, 189, 또는 206의 경쇄 가변 영역 (VL) 서열을 포함하는 것인, 대상체에서 암 또는 암의 증상을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.
안지오포이에틴에 면역특이적으로 결합하는 치료 유효량의 펩티드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 펩티드는 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5 또는 10의 VH의 상보성 결정 영역 (CDR) 3, 및 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는, 표 1에 제시된 항체 ID 2, 3, 4 또는 5의 VL의 CDR3을 포함하는 것인, 대상체에서 암 또는 암의 증상을 치료 및/또는 예방하는 방법이 본원에서 또한 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은 MICA의 과발현과 연관된 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 폐, 유방, 신장, 난소, 전립선, 췌장, 위 및 결장 암종, 림프종 또는 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 형질 세포 악성종양, 예를 들어 다발성 골수종 (MM) 또는 형질 세포의 전암성 병태이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암에 걸린 것으로 또는 암에 걸리기 쉬운 것으로 진단되었다.
일부 예에서, 본 개시내용은 안지오포이에틴 (예를 들어, 안지오포이에틴-2)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 포함하는 조성물을 치료 유효량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 항체는 서열 20, 38, 56, 74, 222의 VH 서열에 제시된 바와 같은 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열 29, 47, 65, 83, 또는 224의 경쇄 가변 영역 (VL) 서열을 포함하는 것인, 대상체에서 암 또는 암의 증상을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.
암의 증상은 당업자에게 주지되어 있고, 비제한적으로, 일반적이지 않은 기태 특색, 비대칭, 경계, 색상 및/또는 직경이 포함되는 기태 외관의 변화, 새롭게 침착된 피부 구역, 비정상적인 기태, 손톱 밑의 거무스름한 구역, 유방 종괴, 유두 변화, 유방 낭, 유방 통증, 사멸, 체중 감소, 허약, 과도한 피로, 식사 곤란, 식욕 상실, 만성 기침, 호흡곤란 악화, 객혈, 혈뇨, 혈변, 오심, 구토, 간 전이, 폐 전이, 골 전이, 복부 포만감, 팽만감, 복강액, 질 출혈, 변비, 복부 팽창, 결장 천공, 급성 복막염 (감염, 열, 통증), 통증, 토혈, 다한, 열, 고혈압, 빈혈, 설사, 황달, 현기증, 오한, 근 경련, 결장 전이, 폐 전이, 방광 전이, 간 전이, 골 전이, 신장 전이, 및 췌장 전이, 삼키기 곤란 등을 포함한다.
본원에 개시된 방법은 광범위한 종, 예를 들어 인간, 비-인간 영장류 (예를 들어, 원숭이), 말, 소, 돼지, 양, 사슴, 엘크, 염소, 개, 고양이, 족제비, 토끼, 기니 피그, 햄스터, 래트, 및 마우스에 적용될 수 있다.
본원에서 사용되는 경우에, "치료하다" 또는 "치료하는"이라는 용어는 대상이 앓고 있는 질환 또는 병태를 부분적으로 또는 완전히 경감시키고/시키거나, 억제하고/하거나, 호전시키고/시키거나, 해소시키는 것을 지칭한다. 일부 예에서, 치료는 대상이 앓고 있는 질환 또는 병태의 계속된 부재를 초래할 수 있다.
일반적으로, 방법은 병태 또는 질환의 위험에 처한 또는 병태 또는 질환이 있는 대상체를 선별하는 단계를 포함한다. 일부 예에서, 대상체의 병태 또는 질환이 본원에 개시된 제약 조성물로 치료될 수 있다. 예를 들어, 일부 예에서, 방법은 예를 들어 암에 걸린 대상체를 선별하는 단계를 포함하고, 이때 대상체의 암은 MICA 및/또는 안지오포이에틴-2 중 하나 또는 양쪽 모두를 표적화하는 것에 의해 치료될 수 있다.
일부 예에서, 치료 방법은 대상이 앓고 있는 질환 또는 병태의 예방 또는 치료에 필요한 바와 같은 단일 투여, 다중 투여, 및 반복 투여를 포함할 수 있다. 일부 예에서, 치료 방법은 치료 전에, 치료 동안에, 및/또는 치료 후에 대상체에서 질환 수준을 평가하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 예에서, 대상체에서의 질환 수준의 감소가 검출될 때까지 치료가 계속될 수 있다.
본원에서 사용되는 경우에, "투여하다", "투여하는" 또는 "투여"라는 용어는 본 발명의 펩티드를, 형태와 관계없이, 이식하거나, 흡수하거나, 섭취하거나, 주사하거나, 또는 흡입하는 것을 지칭한다. 일부 예에서, 본원에 개시된 펩티드 중 하나 이상이 대상체에게 국소적으로 (예를 들어, 코로) 및/또는 경구적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 본원에서의 방법은 유효량의 화합물 또는 화합물 조성물을 투여하여 원하는 효과 또는 언급된 효과를 달성하는 것을 포함한다. 임의의 특정 환자에 대한 구체적인 투여량 및 치료 체계는 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 성별, 식이, 투여 시간, 배설 속도, 약물 조합, 질환의 중증도 및 경과, 병태 또는 증상, 질환에 대한 환자의 경향, 병태 또는 증상, 및 치료 의사의 판단이 포함되는 다양한 요인에 좌우될 것이다.
투여 후에, 대상체의 질환 수준을 검출하거나, 사정하거나 또는 결정하기 위해 대상체를 평가할 수 있다. 일부 예에서, 대상체에서의 질환 수준의 변화 (예를 들어, 감소)가 검출될 때까지 치료가 계속될 수 있다.
환자의 병태의 개선 (예를 들어, 대상체에서의 질환 수준의 변화 (예를 들어, 감소) 시, 필요하다면 유지 용량의 본 발명의 화합물, 조성물 또는 조합물이 투여될 수 있다. 이어서, 증상에 따라, 개선된 병태가 유지되는 수준으로 투여량 또는 투여 빈도, 또는 양쪽 모두가 감소될 수 있다. 그러나, 질환 증상의 임의의 재발 시 장기적으로 환자가 간헐적인 치료를 필요로 할 수 있다.
일부 예에서, 본 개시내용은 인간 대상체로부터 면역 세포, 예를 들어 B 세포 및/또는 기억 B 세포를 검출하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 이같은 방법은, 예를 들어 사례 후에, 인간 대상체에서 면역 세포, 예를 들어 B 세포 및/또는 기억 B 세포의 수준을 모니터링하는데 사용될 수 있다. 예시적인 사례는 질환 검출, 감염; 본원에 개시된 치료 조성물의 투여, 치료제 또는 치료 체계의 투여, 백신 투여, 면역 반응의 유도를 포함할 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다. 이같은 방법은 임상적으로 및/또는 연구용으로 사용될 수 있다.
실시예
하기의 실시예에서 본 발명이 추가로 설명되고, 이는 청구항에 기술된 본 발명의 범주를 제한하지 않는다.
한정된 양의 말초혈로부터 규정된 항원 특이성이 있는 희귀 기억 B 세포의 민감성이고, 특이적이며 신뢰할 수 있는 검출을 허용하는 방법이 본원에서 기술된다. 방법은 항원이 소거되고 나서 수 개월 내지 수 년 후에 기억 B 세포의 가시화 및 단리를 허용하였다.
문헌 [Franz et al. (Blood, 118(2):348-357 (2011)] (본원에 전문이 참조로 포함됨)에서 상세하게 보고된 바와 같이, 파상풍 독소 C-단편 (TTCF)의 사량체를 사용하여 본원에 기술된 방법에 대한 원리 증명이 확립되었다
대다수의 개체가 파상풍 톡소이드(toxoid) 백신접종을 받았고, 백신에 의해 지속적인 IgG 항체 역가가 유도되기 때문에, TTCF (즉, TTCF의 52 kDa의 비-독성 C-말단 단편)가 모델 항원으로서 선택되었다 (문헌 [Amanna et al., N. Engl. J. Med., 357:1903-1915, 2007]). 따라서, TTCF의 사용은 본원에 개시된 방법이 실증될 수 있는 대상체들의 대형 풀(pool)을 제공하였다. 그러나, 당업자는 본 방법이 일상적인 기술을 사용하여 임의의 질환-관련 항원을 포함하도록 개조될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 하기 실시예에서 입증된 바와 같이, 암-관련 항원인 MICA 및 안지오포이에틴-2에 대해 지시된 항체의 취득을 통해 이같은 개조가 제시되었다.
실시예 1: 항원 발현 및 사량체 형성
하기에 추가로 상세하게 기술된 바와 같이, TTCF를 에스케리키아 콜라이에서 발현시켰고, BirA 부위를 BirA 효소에 의한 부위-특이적 모노-비오티닐화를 위해 N-말단에 부착시켰다. 가요성 링커가 단백질과 비오티닐화 부위 사이에 놓여, 항체 결합의 입체 장애를 방지하였다. TTCF를 음이온-교환 크로마토그래피에 의해 정제하고, BirA로 비오티닐화시키고, 겔 여과 크로마토그래피에 의해 유리 비오틴 및 BirA로부터 분리하였다. 형광 표지된 스트렙타비딘을 1:4의 몰비로 비오티닐화 TTCF 항원과 함께 인큐베이션함으로써 TTCF 사량체가 생성되었다. 그 후, 이러한 사량체를 파상풍 톡소이드 특이적 기억 B 세포의 확인을 위해 mAb들의 패널과 함께 사용하였다.
pET-15b (노바젠(Novagen))에서 TTCF를 클로닝하였다. 1 mM 이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노시드 (IPTG)로 4시간 동안 28℃에서 BL21(DE3) 에스케리키아 콜라이에서 단백질 발현을 유도하였다. 세포를 세정하고, 용해시키고, 생성된 상청액을 수집하였다. HIS-셀렉트(HIS-Select) 친화력 칼럼 (시그마(Sigma))을 사용하여 TTCF를 정제하였다. 단백질분해로 His-태그를 제거하였다. 유사한 방법을 사용하여 뮤린 CD80 막 인접 도메인을 생산하였다. 단백질을 모노-비오티닐화시켰다. 특정 실험에 대해, 알렉사-488 염료 분자 (몰레큘러 프로브스(Molecular probes))를 비오티닐화 TTCF 또는 CD80 상의 1급 아민에 연결시켰다.
4:1의 몰비로 비오티닐화 항원을 프리미엄 등급의 PE 표지 스트렙타비딘 (몰레큘러 프로브스)과 함께 20분 이상 동안 얼음 상에서 인큐베이션함으로써 항원 사량체를 제조하였다. 사용 전에, 사량체 제제를 원심분리하여 응집물을 제거하였다. 일부 실험에서, 4:1 비의 알렉사-플루오르-488 태그가 부착된 항원 및 비-형광 스트렙타비딘으로 사량체가 형성되었다.
실시예 2: 확인 방법
문헌 [Franz et al., Blood, 118(2):348-357 (2011)]에 기술된 바와 같이 방법을 수행하였다.
BD FACS Aria II 세포 분류기에서 세포를 분류하였다. 세포를 단일-세포 분류하였다. 먼저 샘플을 배제 마커 (CD3, CD14, CD16, 7AAD)의 패널에 대해 음성인 CD19+ 세포에 대해 게이팅한 후, 높은 수준의 CD27 및 중간 수준의 CD19 발현으로 확인되는 형질모세포에 대해 게이팅하고, 마지막으로 사량체+ CD19+ 세포에 대해 게이팅하였다.
기억 B 세포의 낮은 빈도로 인해, 배경을 가능한 많이 주의하여 감소시키는 것이 필요하였다. 먼저 B 세포를 음성 선별 (CD2, CD3, CD14, CD16, CD56 및 글리코포린 A에 대한 항체들의 칵테일)에 의해 강화시켜, 사량체에 비-특이적으로 결합할 수 있는 대부분의 세포를 제거하였다. 강화된 세포를 균일하게 분할하고, TTCF 또는 대조군 사량체로 염색한 후, CD19, CD27 및 IgM으로 표지하여, 클래스-변환 기억 B 세포를 특이적으로 선별하였다. 이러한 게이팅 전략은 CD19 발현, 배제 마커 (CD3, CD14, CD16, 7AAD)의 패널로의 표지화의 결여, 기억 마커 CD27의 발현, 및 IgM 발현의 결여를 클래스 변환의 증거로 간주하였다. 관심 대상인 항원 특이성이 있는 기억 B 세포의 가시화를 위해 사량체 염색을 CD27 염색에 대해 플롯팅하였다. 사량체-양성 B 세포가 3 ㎕ mRNA 추출 완충제를 함유하는 PCR 스트립 내로 직접적으로 분류되었다.
분류하는 동안 튜브를 저온에서 유지시켰고, 분류된 세포를 동결시키고, -80℃에서 보관하였다. CD19+ CD27+ IgM- B 세포가 양성 대조군으로서 사용되었다.
기존에 보고된 네스트(nest) PCR 프로토콜을 사용하여 중쇄 및 경쇄 가변 절편을 증폭시켰다 (문헌 [Wang et al., J. Immunol. Methods., 244:217-225, 2000]). 오염을 최소화하는데 적절한 조건 하에 mRNA 증폭을 수행하였다. 사용된 프라이머는 하기를 포함하였다:
Figure 112014040993239-pct00009
네스티드(nested) RT-PCR을 문헌 [Franz et al., Blood, 118(2):348-357 (2011)]에 기술된 바와 같이 수행하였다.
오염에 대해 모니터링하고 경계하기 위해 음성 대조군이 포함되었다. TTCF 사량체로 표지된 총 35개의 단일 세포로부터, 32개의 중쇄 및 30개의 경쇄 절편이 증폭되었고, 겔-정제 PCR 생성물로부터 직접적으로 서열분석되었으며, 이는 89％의 전체적인 PCR 효율에 상응하였다. 서열 분석은 TTCF 사량체+ 세포가, 1개의 특정 유전자 절편이 우세하지 않으면서, 다양한 상이한 VHD-JH 유전자 절편을 사용하였음을 나타냈다. 관찰된 서열들은 클론들이 체세포 과다돌연변이에 의해 다양화된 세포들을 나타냈음을 지지하였다.
항체 생산 및 정제는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 DNA를 소 프로락틴 신호 펩티드 서열, 뿐만 아니라 전장 IgG1 중쇄 또는 카파 경쇄 불변 도메인을 함유하는 개별적인 pcDNA3.3 발현 벡터들 내로 클로닝하는 것을 포함하였다. 8％ CO2, 37℃의 100 ㎖ 스피너 플라스크에서 8 mM 글루타맥스(Glutamax) (깁코(Gibco))가 보충된 CHO-S 배지 (인비트로젠(Invitrogen))에서 항체가 발현되었다. 형질감염 1일 전에, 세포를 6×105개의 세포/㎖로 분할하였다. 형질감염일에, 세포를 1×106개의 세포/㎖로 조정할 필요가 있었다. 25 ㎍의 중쇄 및 경쇄 플라스미드 DNA를 MAX 형질감염 시약 (인비트로젠)을 사용하여 공동-형질감염시키고, 형질감염된 세포를 6-8일 동안 배양하였다. 단백질 G 세파로스 비드를 사용하여 단백질을 수득하고, 100 mM 글리신 pH 2.5를 사용하여 항체를 용출시키고, 스핀-X(Spin-X) 원심분리 튜브를 사용하여 비드로부터 분리하였다. 정제된 항체를 마이크로 바이오-스핀(Micro Bio-Spin) 칼럼 (바이오래드(BioRad))을 사용하여 포스페이트 완충 염수 (PBS) 내로 교환시켰다. 280 nm에서의 흡광도에 의해 단백질 농도를 평가하였다.
포화 결합 검정법을 위해, 비오티닐화되지 않은, MonoQ로 정제된 TTCF를 유로퓸으로 표지하고, 유리 유로퓸을 제거하였다. 96웰 편평 바닥 플레이트를 pH 9.6의 100 mM NaHCO3 완충제 내의 웰 당 20 ng의 항체로 밤새 코팅하였다. 소 혈청 알부민 (BSA) 및 소 감마 글로불린이 보충된 검정법 완충제로 차단을 수행하였다. TTCF-유로퓸을 검정법 완충제에서 희석하고 (100 nM 내지 4 pM), 웰 당 200 ㎕를 삼중으로 첨가하였다. 플레이트를 2시간 동안 37℃에서 인큐베이션하고, 200 ㎕ 세정 완충제 (50 mM 트리스(Tris) pH 8, 150 mM NaCl, 20 μM EDTA, 0.05％ 트윈)로 3회 세정하였다. 100 ㎕ 강화 용액을 각각의 웰에 첨가하였고, 615 nm에서 빅터3(Victor3) 플레이트 판독기를 사용하여 형광 카운트를 측정하였다.
중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 IMGT/V-Quest 및 JIONSOLVER 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 유동 세포측정법 데이터를 플로우조(FlowJo) 분석 소프트웨어를 사용하여 평가하였다. 비-쌍체(unpaired) t-테스트를 사용하여 그래프패드 프리즘 5(GraphPad Prism 5) 소프트웨어를 사용하여 통계 분석을 수행하였다. 항체 KD 값을 결정하기 위해, 비-선형 회귀 분석을 사용하여 그래프패드 프리즘 5 소프트웨어를 사용하여 포화 결합 데이터를 피팅(fitting)하였다.
실시예 3: 다량체화가 기억 B 세포의 확인을 강화한다
사량체 및 단량체 TTCF를 비교하였다. TTCF를 알렉사-488로 형광-표지한 후, 단량체 형태로 사용하거나, 또는 표지되지 않은 스트렙타비딘을 사용하여 사량체로 전환시켰다 (상기 참조). 그 후, 강화된 B 세포를 동일한 농도의 사량체 또는 단량체 TTCF-알렉사-488과 함께 인큐베이션하였다. 대조군 단백질 (CD80 막 인접 도메인)이 동일한 방식으로 표지되었고, 또한 사량체로서 사용되었다.
도 22a 및 22b에 나타난 바와 같이, TTCF가 일부 기억 B 세포를 표지하였지만, 3개의 공여자로부터의 세포를 사용하여 사량체로 확인된 빈도가 실질적으로 더 컸다 (1.6-7.3배). 3개의 공여자 중 하나에서, TTCF 특이적 기억 B 세포가 사량체로 검출될 수 있었지만, 단량체로는 그렇지 않았다.
이러한 결과들은 항원 사량체가 기억 B 세포들이 말초혈에서 매우 희귀함에도 불구하고, 이의 BCR의 항원 특이성을 기초로 기억 B 세포의 민감한 검출을 가능하게 한다는 것을 입증한다. TTCF에 대해 특이적인 클래스-변환 기억 B 세포가 적합한 사량체 TTCF 항원에 의해 밝게 표지된 반면, 대조군 사량체로의 배경 표지화는 일관적으로 낮았다.
실시예 4: 방법/항체 검증
중첩 PCR을 통해 IgG 중쇄 및 카파 쇄의 불변 영역을 단리된 가변 절편에 연결시킴으로써 완전히 인간형인 항체가 생성되었다. 6-8일의 기간 동안 CHO-S 세포를 사용하여 일시적인 무혈청 포유동물 발현 시스템에서 항체가 발현되었다. 단백질 G 및 겔 여과 크로마토그래피를 사용하여 항체를 정제하였다.
도 23에 제시된 바와 같이, TTCF-특이적 형질모세포로부터 단리된 항체들이 2.2 nM (TTCF Ab 1) 및 323 pM (TTCF Ab 2)의 K D로 TTCF 항원에 대한 높은 결합 친화력을 나타냈다 (도 23b). 기억 B 세포로부터 단리된 항체 또한 기타 항체들 (TTCF Ab 3, 4, 및 5)에 대해 382 pM, 228 pM, 및 1.4 nM의 K D로 높은 결합 친화력을 나타냈다 (도 23b).
이러한 데이터들은 본원에 개시된 방법의 특이성을 지지한다. 또한, 3개의 상이한 공여자로부터의 5개의 항-TTCF 항체의 구축에 의해 본원의 방법의 특이성이 입증되었고, 이들 모두 높은 친화력으로 TTCF에 결합하였다.
본원에서의 데이터는 항원 사량체가 숙주로부터 항원이 소거되고 나서 오래 후에 기억 B 세포의 민감한 검출을 가능하게 한다는 것을 또한 입증한다.
실시예 5: 항- MICA 항체의 수득
MICA에 면역특이적으로 결합하는 항체가 본원에서의 방법을 사용하여 개발되었다.
간략하게, MICA 항원 (UniGene Hs.130838)이 항원의 모노-비오티닐화를 가능하게 하는 C-말단 BirA 태그 (GLNDIFEAQKIEWHE (서열 238))와 함께 발현되었다. 항원을 R-피코에리트린 (PE)으로 표지된 스트렙타비딘 (SA)으로 4 MICA: 1 SA의 몰비로 사량체화시켰다. GM-CSF 발현 벡터가 형질도입된 자가 종양 세포 (GVAX)가 백신접종되었고 (문헌 [PNAS 103: 9190, 2006]), 이어서 항-CTLA-4 모노클로날 항체 이필리무맙(ipilimumab) (YERVOY™ (브리스톨 마이어스 스큅(Bristol Myers Squib)으로부터 입수가능함))으로 치료된 진행기 흑색종 환자로부터 말초혈 단핵 세포를 수득하였다. 말초혈 단핵 세포를 신속하게 해동시키고, 세정하고, 2％ 송아지 태아 혈청이 보충된 포스페이트 완충 염수 (pH 7.2)에 5×106개로 재현탁시키고, 30분 동안 얼음 상에서 약 0.1 ug/㎖ 사량체로 염색하였다. 클래스-변환, 기억 B-세포 (CD19+, CD27+, 및 IgM-)를 확인하기 위해 항체들을 첨가하였다. T-세포, 천연 킬러-세포, 대식세포 및 죽은 세포를 표지하는 배제 항체들의 패널이 배경 사량체 염색을 감소시키기 위해 포함되었다 (CD3, CD14, CD16, 7-AAD). MICA 사량체에 결합한 단일 B 세포가 BD FACS Aria II를 사용하여 8-튜브-PCR 스트립 내로 분류되었다. 하기에 제시된 유전자 특이적 프라이머를 사용하여 에피센터 바이오테크놀로지스(Epicentre Biotechnologies)로부터의 시판 키트 (카탈로그 번호: MBCL90310)를 사용하여 B-세포 수용체 (BCR) mRNA를 증폭시켰다:
mRNA 증폭
Figure 112014040993239-pct00010
PCR 1
Figure 112014040993239-pct00011
PCR 2
Figure 112014040993239-pct00012
문헌 [Wang and Stollar et al., journal of immunological methods 2000]으로부터 PCR 1 및 PCR 2에서 사용된 프라이머 및 PCR 사이클링 조건이 개조되었다.
잠재적으로 상기 프라이머 세트에 의해 충분히 포괄되지 않는 중쇄 가변 영역 서열을 포괄하기 위해 대안적인 중쇄 가변 영역 전방향 프라이머 세트가 개발되었다. 하기의 대안적인 프라이머들이 생성되었다:
PCR 1
Figure 112014040993239-pct00013
PCR 2
Figure 112014040993239-pct00014
간략하게, mRNA 증폭을 통해 생성된 2 ul cDNA가 하기의 사이클링 조건으로 제1 라운드 PCR을 위한 주형으로서 사용되었다: 3회의 사전 증폭 사이클 (94℃/45초, 45℃/45초, 72℃/105초); 30회의 증폭 사이클 (94℃/45초, 50℃/45초, 72℃/105초); 10분의 72℃에서의 최종 확장.
3 ul의 제1 라운드 PCR 생성물이 제2 라운드의 네스티드 PCR을 위한 주형으로서의 역할을 하였다. 제1 라운드의 PCR에 대한 것과 동일한 사이클링 조건이 사용되었지만, 3회의 사전 증폭 사이클이 생략되었다. 양쪽 모두의 PCR 단계를 클로닝된 Pfu 폴리머라제 AD (애질런트 테크놀로지스(Agilent Technologies))를 사용하여 수행하였다. PCR 생성물을 1％ 아가로스 겔 상에서 분리하였고, 뉴클레오티드 300-400개 크기의 생성물을 자이모클린(Zymoclean) DNA 겔 회수 키트 (자이모 리서치((Zymo Research))를 사용하여 단리하였다. 제2 라운드 네스티드 PCR에 사용된 전방향 및 역방향 프라이머를 사용하여 서열분석을 수행하였다. 2-단계 네스티드 PCR은 중쇄 및 경쇄의 BCR 가변 도메인을 증폭시킨다 (상기 참조). GM-CSF 발현 벡터가 형질도입된 자가 종양 세포 (GVAX)가 백신접종된 진행기 흑색종 환자로부터 말초혈 단핵 세포를 수득하였다 (문헌 [PNAS 103: 9190, 2006]). 일시적인 CHO-S 발현 시스템에서 전장 IgG1 항체로서 항체가 발현되었다.
항-MICA 항체가 MICA에 결합하는 것의 검증을 2개의 독립적인 비드-기반 검정법을 사용하여 수행하였다. 제1 검정법은 다양한 MICA 대립유전자에 대해 반응성인 항-MICA 항체의 검출을 위해 디자인된 시판되는 용액 기반 비드 검정법 키트를 사용하였다 (원 람다(One Lambda), 카탈로그 번호 LSMICA001). 다양한 농도의 MICA 항체를 비드와 함께 인큐베이션한 후, 세정하고, 피코에리트린과 접합된 항-인간 IgG 항체와 함께 인큐베이션하였다. 제2 세정 단계 후, 비드를 루미넥스 기계 상에서 분석하였다. 음성 대조군은 비드를 피코에리트린과 접합된 항-인간 IgG 항체 단독과 함께 인큐베이션하는 것으로 이루어졌다 (항-MICA 항체 없음). 양성 대조군은 비드를 피코에리트린에 직접적으로 접합된 시판되는 항-MICA/MICB 모노클로날 항체 (클론 6D4) (바이오레전드(BioLegend) 카탈로그 #320906)와 함께 인큐베이션하는 것으로 이루어졌다. 제2 검정법은 스트렙타비딘과 접합된 폴리스티렌 비드를 사용하여 내부적으로 개발되었다. 비드를 모노비오티닐화 MICA 단백질로 코팅하고, 다양한 농도의 항-MICA 항체, 항-TTCF 항체 (이소형 음성 대조군), 또는 피코에리트린에 직접적으로 접합된 바이오레전드 항-MICA/MICB 항체 (양성 대조군)와 함께 인큐베이션하였다. 항-MICA 항체 또는 항-TTCF 항체와 함께 인큐베이션된 비드를 세정한 후, 알렉사488와 접합된 항-인간 IgG 항체와 함께 인큐베이션하였다. 비드에 대한 배경 결합을 결정하기 위해, 비교용으로 MICA 단백질로 코팅되지 않은 스트렙타비딘-접합 비드를 사용하여 동일한 인큐베이션을 수행하였다. FACS 캘리버(Caliber) 유동 세포측정기 상에서 항체에 결합하는 것에 대해 비드를 분석하였다.
도 24 및 25에 제시된 바와 같이, 항-MICA 항체 (MICA-Ab12 및 MICA-Ab20)가 MICA에 높은 친화력으로 결합한다. MICA-Ab20은 표 1에 기술된 항-MICA 항체 ID 1에 상응한다.
실시예 6: 항- MICA 항체
임상적으로 관련된 생물학적 성질이 있는 추가적인 항-MICA 항체가 본원에서의 방법을 사용하여 개발되었다. 공통 대립유전자에 반응성인 MICA-특이적 항체가 세포성 암 백신 (GM-CSF 형질도입 암 세포, GVAX로 지칭됨) 및 T 세포 상의 억제성 CTLA-4 수용체를 차단하는 항체인 이필리무맙 (YERVOY™ (브리스톨 마이어스 스큅으로부터 입수가능함))을 받은 적이 있는 환자에서 확인되었다. 그 후, MICA 사량체를 사용하여, 혈청 MICA 반응성이 가장 높은 환자의 말초혈 단핵 세포로부터 B 세포를 단리하였다. 실시예 5에 개요된 바와 같이, 단일 세포 PCR에 의해 이러한 B 세포들로부터 중쇄 및 경쇄 서열을 결정하였다. 이러한 노력으로 북미인 집단에서 통상적인 대립유전자를 인식하는 항체가 확인되었다.
CM24002 Ab2 (표 1에 기술된 항-MICA 항체 ID 6)는 GVAX + 이플리무맙 조합 요법에 대해 유의한 임상 반응을 나타내었고 환자의 혈장이 MICA와 강하게 반응한 급성 골수성 백혈병 (AML) 환자로부터 단리된 항체이다. CM24002 Ab2 경쇄 (도 30 및 31) 및 중쇄 (도 28 및 29) 뉴클레오티드 및 아미노산 서열이 제시되고, 이때 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열에 밑줄이 그어진다. 강한 결합의 추가적인 항체가 동일한 환자로부터 수득되었고, 이는 CM24002 Ab4 (표 1에 기술된 항-MICA 항체 ID 7)로 표지된다. CM24002 Ab4 경쇄 (도 34 및 35) 및 중쇄 (도 23 및 32) 뉴클레오티드 및 아미노산 서열이 제시되고, 이때 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열에 밑줄이 그어진다.
CM33322 Ab11 (표 1에 기술된 항-MICA 항체 ID 8) 및 CM33322 Ab29 (표 1에 기술된 항-MICA 항체 ID 9)는 GVAX + 이플리무맙 조합 요법에 대한 장기 반응자 (>15년)인 전이성 흑색종 환자로부터 단리된 항체이다. CM33322 Ab11 경쇄 (도 38 및 39) 및 중쇄 (도 36 및 37) 뉴클레오티드 및 아미노산 서열이 제시되고, 이때 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열에 밑줄이 그어진다. CM33322 Ab29 경쇄 (도 42 및 43) 및 중쇄 (도 40 및 41) 뉴클레오티드 및 아미노산 서열이 제시되고, 이때 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열에 밑줄이 그어진다. 이러한 환자의 장기 임상 반응으로 인해, 이러한 항체들이 특히 흥미롭다.
관심 항체의 최초의 확인, 클로닝 및 발현 후, 상이한 MICA 대립유전자들에 대한 이러한 항체들의 특이성을 세포측정 비드 검정법으로 결정하였다. 간략하게, 단일 BirA 비오티닐화 부위가 있는 가용성 재조합 MICA 대립유전자 002, 008, 009 및 MICB를 발현시키고, 정제하고, 스트렙타비딘 비드 상에서 포획하였다. 그 후, 지시된 항-MICA 항체를 여러 농도로 재조합 MICA로 코팅된 비드와 함께 1시간 동안 인큐베이션하고, 세정하고, FITC-표지 항-인간 IgG 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 제2 세정 단계 후, 비드-결합 FITC 형광의 정량을 유동 세포측정법에 의해 달성하였다. MICA 대립유전자 002, 008, 009, 뿐만 아니라 관련된 MICB 단백질은 북미인 집단에서의 이들의 유병률을 기초로 선택되었다 (도 48). MICA 대립유전자 002, 008, 009, 뿐만 아니라 관련된 MICB 단백질은 전세계적인 이들의 일반적으로 높은 유병률을 기초로 또한 선택되었다. 중요하게, CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29가 모든 MICA 대립유전자, 뿐만 아니라 MICB에 강하게 결합하였다. 다른 2개의 항체는 대립유전자들의 하위 세트에 결합하였다: CM24002 Ab4는 MICA*009 및 MICB에 고도로 결합하였고, CM33322 Ab11은 MICA*002, MICA*008, 및 MICB에 고도로 결합하였다 (도 48a-f). 동일한 기술로 생성된 음성 인간 대조군 항체 (파상풍 톡소이드 C-말단 단편 (TTCF)에 대해 특이적임) 및 MICA에 대한 양성 대조군 항체 (MICA에 대해 지시된 바이오레전드로부터의 시판 뮤린 항체)를 사용하여 특이성이 기록되었다. 이러한 연구로, CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29가 임상 용도를 위한 잠재적인 후보로서 확인되었다.
실시예 7: 자가 종양 세포에 대한 항- MICA 항체의 결합
자가 종양 세포에 결합하는 단리된 항-MICA 항체 CM24002 Ab2의 능력을 유동 세포측정법으로 검사하였다 (도 49). 환자 CM24002로부터 골수를 수득하고, CM24002 Ab2에 의한 종양 세포에 대한 결합을 테스트하였다. 그 후, 종양 세포가 이러한 골수 샘플로부터 CD33+ CD34+ 세포로서 확인되었다. 그 후, 종양 세포를 10 ㎍/㎖의 항-MICA 항체 CM24002 Ab2, 양성 대조군인 시판 MICA 항체 (바이오레전드) 또는 음성 대조군 항체 (TTCF 특이적)로 염색하였다. 도 49에 제시된 바와 같이, CM24002 Ab2가 이러한 세포들에 강하게 결합하였다. CM24002 Ab2는 비-종양 세포 (CD16+ 및 CD3+ 세포)에 대한 결합을 나타내지 않았고, CD14+ 세포에 대해서는 오직 배경 결합만 있었으며, 이는 항-종양 특이성을 입증한다 (데이터는 제시되지 않음).
실시예 8. NK 세포 상의 NKG2D 수용체의 항- MICA 항체 억제.
동족 수용체인 NKG2D의 가용성 MICA-매개 하향-조절을 방지하는 단리된 항-MICA 항체 CM24002 Ab2의 능력을 시험하였다. 환자 CM24002로부터의 혈청을 1:10 희석으로 사용하였고, 48시간의 기간 동안 인간 NK 세포와 함께 인큐베이션하였다. CM24002 Ab2 (10 ㎍/㎖의 농도), 양성 대조군인 시판 MICA 항체 (바이오레전드) 또는 음성 대조군 항체 (TTCF 특이적)를 이러한 배양물에 첨가하였다. 48시에 유동 세포측정법에 의해 NKG2D 발현을 평가하였다 (도 50). 환자 CM24002로부터의 혈청은 NKG2D의 발현을 강하게 하향-조절하였다 (따라서, 이러한 수용체의 기능을 불가능하게 함). CM24002 Ab2 및 양성 대조군 MICA 항체는 NK 세포에 의한 NKG2D 표면 발현을 부분적으로 회복시켰다. 특이성을 입증하기 위해, 본 발명가들은 세포를 환자 혈청 대신 2 ng/㎖의 재조합 MICA와 함께 인큐베이션함으로써 상기 실험을 반복하였다 (도 51). CM24002 Ab2는 NKG2D 발현의 MICA-매개 하향-조절을 완전히 방지한 한편, 음성 대조군 항체 (TTCF에 대해 특이적)는 효과가 없었다 (도 51). 이러한 데이터는 인간 MICA 항체가 인간 NK 세포 상의 중요한 NKG2D 수용체의 억제를 방지할 수 있다는 것을 입증한다.
실시예 9: 항- MICA 항체 세포-매개 세포독성
CM24002 Ab2가 세포-매개 세포독성을 가능하게 하는지를 결정하기 위해, 인간 NK 세포 (이펙터 세포)를 CM24002 Ab2, 음성 대조군 항체 (TTCF 특이적) 또는 양성 대조군 항체 (바이오레전드) (모두 10 ㎍/㎖)의 존재 하에 48시간 동안 재조합 MICA (2 ng/㎖)와 함께 인큐베이션하였다. 48시간 후, 세포를 세정하고, 4시간 동안 20:1, 10:1, 및 5:1의 이펙터:표적 비로 K562 종양 세포와 함께 인큐베이션하였다. NK 세포에 의한 표적 세포의 특이적 용해를 K562 종양 세포로부터의 세포질 단백질 (LDH)의 방출에 의해 결정하였다. MICA 항체의 부재 하에서는, NK 세포에 의한 K562 종양 세포의 사멸이 없었다. 그러나, CM24002 Ab2는 K562 종양 세포의 NK 세포-매개 용해를 매우 강화하였고, 모든 이펙터:표적 비에서 양성 대조군인 뮤린 MICA 항체보다 더욱 효과적이었다 (도 52). K562 종양 세포의 사멸이 실제로 (Fc 수용체보다는) NKG2D 경로에 의해 매개되었다는 것이 추가로 입증되었다. 2개의 실험 군을 추가하여 상기 실험을 반복하였다: NKG2D에 대한 차단 항체 및 인간 Fc 차단. 또한, CM33322 Ab29도 테스트하였다. 데이터는 CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29의 첨가가 NK 세포-매개 세포독성을 가능하게 하였음을 나타낸다. 차단 NKG2D 항체가 첨가되었을 때 K562 세포의 사멸이 발생하지 않은 한편, Fc 차단 시약은 효과가 거의 없었다 (도 53). 이러한 데이터는 CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29가 NKG2D 경로의 항-종양 기능을 회복시킨다는 것을 나타낸다.
실시예 10: 알파 3 MICA 도메인에 대한 항- MICA 항체의 결합
NKG2D 수용체는 MICA의 상부의 알파 1 및 알파 2 도메인에 결합하고, 이와 동일한 부위에 결합하는 항체는 NKG2D 수용체와 경쟁할 수 있으며, 이에 의해 NK 세포에 의한 종양 세포의 사멸을 차단할 수 있다. 알파 3 도메인에 결합하는 항체는 이들이 NKG2D 수용체 결합을 차단할 수 없기 때문에 특히 흥미롭다. 동시에, 이같은 항체는 종양 세포 표면으로부터의 MICA의 단백질분해성 절단을 방해할 수 있다. MICA 알파 3 도메인에 대한 항-MICA 항체의 능력을 기존에 기술된 세포측정 비드 검정법을 사용하여 평가하였다. 비오티닐화 재조합 단백질을 스트렙타비딘 비드 상에서 포획시켰다. 그 후, 비드를 10 ㎍/㎖의 항체 CM24002 Ab2, CM24002 Ab4, CM33322 Ab11, CM33322 AB29, 음성 대조군 항체 (TTCF 특이적) 또는 양성 대조군 항체 (바이오레전드)와 함께 인큐베이션하였고, FITC-표지 항-인간 IgG 2차 항체, 및 유동 세포측정법에 의한 비드-결합 FITC 형광의 정량이 이어졌다 (도 54). 도 54에 제시된 바와 같이, CM33322 Ab29가 MICA 알파 3 도메인에 결합하였고, 따라서 치료 용도용으로 매우 흥미롭다.
실시예 11: 종양 세포에 대한 항- MICA 항체의 결합
광범위한 암을 표적화하는데 사용될 CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29의 잠재력을 평가하였다. 다발성 골수종 (RPMI 8226 및 Xg-1), 난소암 (OVCAR3), 급성 골수성 백혈병 (U937), 흑색종 (K028), 폐암 (1792 및 827), 및 유방암 (MCF7) 세포의 패널을 CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29에 의한 표지화에 대해 테스트하였다. 종양 세포들을 1×106개의 세포/㎖의 농도로 PBS + 1％ BSA에 재현탁시켰고, 1시간 동안 4℃에서 10 ㎍/㎖ 농도의 CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29, 뿐만 아니라 양성 및 음성 대조군 (각각 뮤린 MICA 항체 및 TTCF-특이적 항체) (직접적으로 접합됨)으로 염색하였다. 유동 세포측정법으로 표지화를 평가하였다 (도 55). CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29 양쪽 모두 테스트된 모든 종양 세포 유형에 결합하였고, 이때 테스트된 세포주 대다수에 대해 표지화가 시판 양성 대조군보다 더 컸다.
실시예 11: 항- MICA 항체의 MICA 대립유전자 특이성
CM33322 Ab29의 대립유전자 특이성을 시판되는 루미넥스 검정법을 사용하여 평가하였다. 시판 테스트 키트는 루미넥스 비드에 직접적으로 접합된 재조합 MICA 대립유전자 (MICA*001, *002, *007, *012, *017, *018, *027, *004, *009, 및 *015)를 함유하고, 이들 각각은 단일 샘플에서 결합이 평가될 수 있게 하는 고유의 형광 성질을 지닌다. 지시된 MICA 대립유전자로 코팅된 루미넥스 비드를 1시간 동안 10 ㎍/㎖의 CM33322 Ab29, 바이오레전드 양성 대조군, 및 음성 대조군 (TTCF)과 함께 인큐베이션하였고, 이어서 PE-접합 항-인간 IgG 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 지시된 항체와의 60분 동안의 인큐베이션 및 항-인간 PE-접합 2차 항체와의 후속 인큐베이션 후에 루미넥스 200 기구를 사용하여 형광을 결정하였다 (도 56). CM33322 Ab29는 시판 검정법에 존재하는 모든 대립유전자와 결합할 수 있었고, 이는 이것이 MICA 유전자형과 관계없이 환자에서 사용될 수 있음을 가리킨다.
이러한 데이터는 CM24002 Ab2 및 CM33322 Ab29의 높은 생물학적 활성 및 종양 세포의 NK 세포-매개 용해를 회복시키는 이들의 능력을 입증한다. 이러한 데이터는 면역요법에 반응한 암 환자가 NK 세포의 항-종양 활성을 회복시킨 MICA 항체를 생산하였음을 입증한다. 총괄적으로, 이러한 결과들은 암 환자에서 면역 억제를 극복하고 종양 파괴를 촉진하는 항-MICA 항체의 치료 잠재력을 강조한다.
실시예 12: 항- 안지오포이에틴 -2 항체의 수득
안지오포이에틴-2에 결합하는 항체가 본원에서의 방법을 사용하여 개발되었다. 간략하게, R&D 시스템즈(R&D Systems)에서 비오티닐화 안지오포이에틴-2 (UniGene Hs.583870)를 구입하였다. 말초혈 단핵 세포를 신속하게 해동시키고, 세정하고, 2％ 송아지 태아 혈청이 보충된 포스페이트 완충 염수 (pH 7.2)에 5×106개로 재현탁시키고, 30분 동안 얼음 상에서 약 0.5 ug/㎖ 안지오포이에틴-2로 염색하였다. 세포를 4 ㎖ PBS/2％ FCS로 2회 세정하였다. 그 후, 클래스-변환, 기억 B-세포 (CD19+, CD27+, 및 IgM-)를 확인하기 위해 항체들을 첨가하였고, 뿐만 아니라 표면 상에 비오티닐화 안지오포이에틴이 있는 B-세포를 표지하기 위해 SA-PE를 첨가하였다. T-세포, 천연 킬러-세포, 대식세포 및 죽은 세포를 표지하는 배제 항체들의 패널이 배경 사량체 염색을 감소시키기 위해 포함되었다 (CD3, CD14, CD16, 7-AAD). 안지오포이에틴-2에 결합한 단일 B 세포가 BD FACS Aria II를 사용하여 8-튜브-PCR 스트립 내로 분류되었다. 유전자 특이적 프라이머 (상기 참조)를 사용하여 에피센터 바이오테크놀로지스로부터의 시판 키트 (카탈로그 번호: MBCL90310)를 사용하여 B-세포 수용체 (BCR) mRNA를 증폭시켰다. 2-단계 네스티드 PCR은 중쇄 및 경쇄의 BCR 가변 도메인을 증폭시킨다 (상기 참조). GM-CSF 발현 벡터가 형질도입된 자가 종양 세포 (GVAX)가 백신접종된 악성 비-소세포 폐 암종 환자로부터 말초혈 단핵 세포를 수득하였다 (문헌 [Cancer Res. 70: 10150, 2010]). 일시적인 CHO-S 발현 시스템에서 전장 IgG1 항체로서 항체가 발현되었다.
항-안지오포이에틴-2 항체가 안지오포이에틴-2에 결합하는 것의 검증을 ELISA 검정법을 사용하여 수행하였다. 간략하게, 4℃에서 96웰 편평 바닥 플레이트 (퍼킨엘머((PerkinElmer)) 내에 100 mM 탄산수소나트륨 완충제 pH 9.6 내의 4 ㎍/㎖으로 안지오포이에틴-2를 밤새 코팅하였다. 실온에서 3시간 동안 소 혈청 알부민 (BSA) 및 소 감마 글로불린을 함유하는 검정법 완충제 (퍼킨엘머)로 플레이트를 차단하였다. 항체를 검정법 완충제에서 20 ug/㎖ - 0.16 ug/㎖로 희석하고, 1시간 동안 4℃에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 200 ㎕ 세정 완충제 (50 mM 트리스 pH 8, 150 mM NaCl, 20 mM EDTA, 0.05％ 트윈)로 3회 세정하였다. 100 ㎕ 강화 용액 (퍼킨엘머)을 각각의 웰에 첨가하였고, 615 nm의 파장에서 빅터3 플레이트 판독기 (퍼킨엘머)를 사용하여 형광 카운트를 측정하였다. 인간 안지오포이에틴-1 및 -4가 결합에 대해 또한 테스트되었고, 유사한 반응성을 나타냈다.
관련 데이터가 도 27a-27c에서 제시되고, 이는 폐암 환자로부터의 안지오포이에틴-특이적 항체의 단리에 관한 그래프 및 겔을 제공한다. (A) ELISA에 의해 결정된 폐암 환자 (L19) 혈청 (1:1000 희석됨)의 안지오포이에틴-2 반응성. 혈청 수집 날짜가 X축에 제시된다. 대조군 단백질인 소 혈청 알부민 (BSA)이 음성 대조군으로서 포함되었다. (B) X축의 CD19 및 Y축의 형광-태그 안지오포이에틴-2로 CD19+, CD27+ IgM-B 세포에 대해 게이팅된 PBMC 샘플 (시점- 10/98)을 나타내는 FACS 플롯. 이러한 게이트는 분류 컷-오프(cut-off)가 이루어진 곳을 대략적으로 가리킨다. 10개의 B-세포가 이러한 샘플로부터 분류되었다. (C) 환자 L19로부터 단리된 10개의 안지오포이에틴-2 반응성 기억 B-세포로부터의 중쇄, 경쇄, 및 힌지 영역 PCR 생성물. 염기쌍 약 350개의 2회의 네스티드 PCR 라운드 후의 중쇄 (상부) 및 경쇄 (하부) PCR 생성물.
실시예 13: 인간 재조합 안지오포이에틴 패밀리 구성원에 대한 항- 안지오포이에틴 -2 항체의 결합
96웰 플레이트를 pH 9.6의 탄산수소나트륨 내의 4 ㎍/㎖ 재조합 안지오포이에틴-1, -2, 및 -4 (R&D 시스템즈)로 밤새 코팅하였다. 이어서, 실온에서 3시간 동안 소 혈청 알부민 (BSA) 및 소 감마 글로불린을 함유하는 검정법 완충제 (퍼킨엘머)로 플레이트를 차단하였다. 20 ㎍/㎖-0.16 ㎍/㎖로 희석된 항체 ID 2, 3, 4, 및 5 (표 1 참조)를 플레이트 상에서 1시간 동안 4℃에서 회전시키면서 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트를 세정한 후, 항-인간 IgG-유로퓸 항체 (퍼킨엘머)와 함께 인큐베이션하였다. 615 nm에서의 형광 카운트를 플레이트 판독기를 통해 수득하였다. 음성 대조군 항체 (클론 8.18.C5)를 사용하여 특이성을 결정하였다. 데이터를 2중으로 결정하였다.
도 26a-26c에 제시된 바와 같이, 항체 ID 2, 3, 4, 및 5 (표 1 참조)는 높은 특이성으로 안지오포이에틴-1 -2, 및 -4에 결합한다. 항체들은 구조적으로 관련된 단백질인 Ang-유사-3에 결합하지 않는다 (도 26d 참조).
임상적으로 관련된 생물학적 활성이 있는, 항-Ang2 Ab6로 지정된 추가적인 항-안지오포이에틴 항체 (표 1에 기술된 항-MICA 항체 ID 10)가 본원에서의 방법을 사용하여 개발되었다. 인간 재조합 안지오포이에틴 패밀리 구성원에 대한 항-Ang2 Ab6의 결합을 상기 기술된 바와 같이 분석하였다. 간략하게, ELISA 플레이트를 4 ㎍/㎖의 안지오포이에틴 Ang-1, Ang-2, Ang4, 및 Ang-유사-3 결합으로 코팅하고, 항-Ang2 Ab6에 의한 검출을 20 ㎍/㎖. 4 ㎍/㎖, 0.8 ㎍/㎖, 및 0.16 ㎍/㎖에서 테스트하였다. 유로퓸이 접합된 항-인간 IgG 2차를 사용하였고, 45분 후에 유로퓸 카운트를 측정하였다. 도 57에 제시된 바와 같이, 항-Ang2 Ab6은 모든 안지오포이에틴에 용량 의존적 방식으로 결합한다.
기타 실시양태
본 발명이 이의 상세한 설명과 함께 기술되었지만, 상기의 기술은 첨부된 청구항의 범주에 의해 정의되는 본 발명의 범주를 설명하도록 의도되고 이를 한정하도록 의도되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 기타 측면, 장점 및 변형이 하기의 청구항의 범주 내에 속한다.
SEQUENCE LISTING <110> DANA-FARBER CANCER INSTITUTE, INC. <120> THERAPEUTIC PEPTIDES <130> 00530-0293001 <150> PCT/US2012/057839 <151> 2012-09-28 <150> 61/541,921 <151> 2011-09-30 <160> 238 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 384 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 1 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctggccctc 60 acctgcgctg tctctggtgg gtccttcact gatcattact ggagttggat ccgtcaggcc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggagaa atcaatcata gtggagtcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgact caccatatca gtagacacgt ccaagagcca gttctccctg 240 aggctgacct ctgtgaccgc cgcggacacg gctctgtact actgtgcgaa aactggcctg 300 tattatgatg acgtttgggg gacttttcgt ccacggggcg ggttcgactc ctggggccag 360 ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 384 <210> 2 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 2 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ala Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Phe Thr Asp His 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Val Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Ser Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Arg Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Thr Gly Leu Tyr Tyr Asp Asp Val Trp Gly Thr Phe Arg Pro Arg 100 105 110 Gly Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 3 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ala Leu Thr Cys Ala Val Ser 20 25 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Gly Gly Ser Phe Thr Asp His Tyr 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 5 Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 15 Glu <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Ile Asn His Ser Gly Val Thr 1 5 <210> 7 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 7 Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Val Asp Thr 1 5 10 15 Ser Lys Ser Gln Phe Ser Leu Arg Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp 20 25 30 Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 35 <210> 8 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 8 Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Tyr Asp Asp Val Trp Gly Thr Phe Arg Pro 1 5 10 15 Arg Gly Gly Phe Asp Ser 20 <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 9 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 10 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 10 gacatcgtga tgacccagtc tccggactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtatttta tatagctccg acaataagaa ttacttagct 120 tggtaccagc acaagccagg acagcctcct aagctcctct tttactgggc atctatccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc ggcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagtc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtcct 300 ccttgcagtt ttggccaggg gaccaagctg gagatccaa 339 <210> 11 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 11 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asp Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Phe Tyr Trp Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Pro Pro Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Gln <210> 12 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 12 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser 20 25 <210> 13 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 13 Gln Ser Ile Leu Tyr Ser Ser Asp Asn Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 14 Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Phe 1 5 10 15 Tyr <210> 15 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 15 Trp Ala Ser 1 <210> 16 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 16 Ile Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala 20 25 30 Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 17 Gln Gln Tyr Tyr Ser Pro Pro Cys Ser 1 5 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 18 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Gln 1 5 10 <210> 19 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 19 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agttatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt atttattgga gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca tatccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgacgac acggccgtgt attactgtgc gagaggcgat 300 tactatggtt cgggggctca ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 20 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 20 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Tyr Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ala His Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 21 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 21 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 22 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 23 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 24 Ile Tyr Trp Ser Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 25 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 25 Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile 1 5 10 15 Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp 20 25 30 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 26 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ala His Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 28 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 28 gatattgtga tgacccagac tccactctcc tcacctgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagcca aagcctcgta cacagtgatg gaaacaccta cttgagttgg 120 cttcagcaga ggccaggcca gcctccaaga ctcctaattt atcagatttc taaccggttc 180 tctggggtcc cagacagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aagctgagga tgtcggggtt tactactgca tgcaaggtac acaatttcct 300 cggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaa 336 <210> 29 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 29 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gln Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Thr Gln Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 30 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser 20 25 <210> 31 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 33 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Gln Ile Ser 1 <210> 34 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 34 Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly 20 25 30 Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 Met Gln Gly Thr Gln Phe Pro Arg Thr 1 5 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 37 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 37 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctgggggatc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctcagggtt cacctttagt aataactgga tgcactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg gatctcagag attagaagtg atgggaattt cacaaggtac 180 gcggactcca tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagag cacactgtat 240 ttgcaaatga acagtctgag agtcgaggac acgggtctgt attactgtgc aagagactac 300 ccctatagca ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351 <210> 38 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 38 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Asn 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ser Glu Ile Arg Ser Asp Gly Asn Phe Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Met 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Gly Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Pro Tyr Ser Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 39 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 39 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 40 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Asn Trp 1 5 <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 41 Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Glu <210> 42 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 42 Ile Arg Ser Asp Gly Asn Phe Thr 1 5 <210> 43 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 43 Arg Tyr Ala Asp Ser Met Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn 1 5 10 15 Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp 20 25 30 Thr Gly Leu Tyr Tyr Cys 35 <210> 44 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 44 Ala Arg Asp Tyr Pro Tyr Ser Ile Asp Tyr 1 5 10 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 45 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 46 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 46 gatattgtga tgacccagac tccactctcc tcacctgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca catctagtca aagcctcgta cacagtaatg gaaacaccta cttgagttgg 120 cttcagcaga ggccaggcca gcccccaaga ctcctaattt atgagatttc taagcgggtc 180 tctggggtcc cagacagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aagctgagga tgtcggggtt tattactgca tgcaaggtaa acaacttcgg 300 acttttggcc aggggaccaa gctggagatc aaa 333 <210> 47 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 47 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Thr Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Glu Ile Ser Lys Arg Val Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Lys Gln Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 48 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Thr Ser Ser 20 25 <210> 49 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 49 Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 50 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 51 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 51 Glu Ile Ser 1 <210> 52 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 52 Lys Arg Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly 20 25 30 Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Met Gln Gly Lys Gln Leu Arg Thr 1 5 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 55 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 55 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctgggggctc cgtgagactg 60 tcttgtgcgg cctcaggctt cattcttagc aactttgcca tgagttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggactg ggtctcaggt aattttggtg gtcgtgaaaa tacatattac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca gttccaagag cacactgtat 240 ctgcaaatga acaatttgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgaggcgat 300 taccatggtt cgggggctca ctttgactac tggggccagg gaatactggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 56 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 56 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Val Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Leu Ser Asn Phe 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Gly Asn Phe Gly Gly Arg Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr His Gly Ser Gly Ala His Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 57 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 57 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Val Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 58 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 58 Gly Phe Ile Leu Ser Asn Phe Ala 1 5 <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 59 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val Ser 1 5 10 15 Gly <210> 60 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 60 Asn Phe Gly Gly Arg Glu Asn Thr 1 5 <210> 61 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 61 Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser 1 5 10 15 Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp 20 25 30 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 62 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 62 Ala Arg Gly Asp Tyr His Gly Ser Gly Ala His Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 63 Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 64 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 64 gatattgtga tgacccagag tccactctcc tcacctgtca tccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca aagcctccta cacagtgatg gaaacaccta cttgagttgg 120 cttcaccaga ggccaggcca gcctcctaga ctcctaattt atcagatttc taaccggttc 180 tctggggtcc cagacagatt cagtggcagt gggacaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aagctgagga tgccgggatt tattactgca tgcaaggtac agaatttcct 300 cggacgttcg gccaagggac caaggtggaa atcaaa 336 <210> 65 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 65 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Ser Pro Val Ile Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu His Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gln Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Thr Glu Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 66 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 66 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Ser Pro Val Ile Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser 20 25 <210> 67 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 67 Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 68 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 68 Leu Ser Trp Leu His Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 69 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 69 Gln Ile Ser 1 <210> 70 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 70 Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Thr Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Gly 20 25 30 Ile Tyr Tyr Cys 35 <210> 71 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 71 Met Gln Gly Thr Glu Phe Pro Arg Thr 1 5 <210> 72 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 72 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 73 <211> 384 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 73 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttgatacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcaa cctctggatt cacctttaga acttcttcca tgagttgggt ccgtcgggct 120 ccagggaagg ggctggaatg ggtctcagct attggtgctg aaagtcatga cacgcactac 180 acagactccg cggagggccg gttcaccatc tccaaagact attcaaagaa cacagtatat 240 ctgcagatga acggcctgag agtcgacgac acggccatat attattgtgc ccatcactat 300 tactatggct cgcggcagaa acccaaagat tggggagatg cttttgatat gtggggccag 360 gggacaatgg tctccgtctc ttca 384 <210> 74 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 74 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Ser 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Ala Glu Ser His Asp Thr His Tyr Thr Asp Ser Ala 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Tyr Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Val Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala His His Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Gln Lys Pro Lys Asp Trp Gly 100 105 110 Asp Ala Phe Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Ser Val Ser Ser 115 120 125 <210> 75 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 75 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser 20 25 <210> 76 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 76 Gly Phe Thr Phe Arg Thr Ser Ser 1 5 <210> 77 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 77 Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 15 Ala <210> 78 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 78 Ile Gly Ala Glu Ser His Asp Thr 1 5 <210> 79 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 79 His Tyr Thr Asp Ser Ala Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Tyr 1 5 10 15 Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Val Asp Asp 20 25 30 Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 35 <210> 80 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 80 Ala His His Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Gln Lys Pro Lys Asp Trp Gly 1 5 10 15 Asp Ala Phe Asp Met 20 <210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 81 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Ser Val Ser Ser 1 5 10 <210> 82 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 82 gacatccaga tgacccagtc tccatcttct gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca ggatattagc acctggttaa cctggtatca gcagagagca 120 gggaaggccc ctaacctcct gatctatggt gcatccactt tggaagatgg ggtcccatcc 180 aggttcagcg gcagtggatc cgggacagat ttcactctca ctatcgacag cctgcagcct 240 gacgattttg caacttacta ttgtcaacag tctcacagtt tcccctacac ttttggccag 300 gggacccagc tggggatctc a 321 <210> 83 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 83 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Thr Trp 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Arg Ala Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Gln Leu Gly Ile Ser 100 105 <210> 84 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 84 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 20 25 <210> 85 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 85 Gln Asp Ile Ser Thr Trp 1 5 <210> 86 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 86 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Arg Ala Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 87 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 87 Gly Ala Ser 1 <210> 88 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 88 Thr Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala 20 25 30 Thr Tyr Tyr Cys 35 <210> 89 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 89 Gln Gln Ser His Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 90 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 90 Phe Gly Gln Gly Thr Gln Leu Gly Ile Ser 1 5 10 <210> 91 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 91 taatacgact cactataggt tcggggaagt agtccttgac cagg 44 <210> 92 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 92 taatacgact cactataggg atagaagtta ttcagcaggc acac 44 <210> 93 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 93 taatacgact cactataggc gtcaggctca grtagctgct ggccgc 46 <210> 94 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 94 aatacgactc actataggtt cggggaagta gtccttgacc agg 43 <210> 95 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 95 taatacgact cactataggg atagaagtta ttcagcaggc acac 44 <210> 96 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 96 taatacgact cactataggc gtcaggctca 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Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 103 gctcagctcc tggggctcct g 21 <210> 104 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 104 ctggggctgc taatgctctg g 21 <210> 105 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 105 ttcctcctgc tactctggct c 21 <210> 106 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 106 cagacccagg tcttcatttc t 21 <210> 107 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 107 cctctcctcc tcaccctcct 20 <210> 108 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 108 ctcctcactc agggcaca 18 <210> 109 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 109 atggcctgga ycsctctcc 19 <210> 110 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 110 gccaggggga agacsgatg 19 <210> 111 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 111 tttcaactgc tcatcagatg gcgg 24 <210> 112 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 112 agctcctcag aggagggygg 20 <210> 113 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 113 caggtscagc tggtrcagtc 20 <210> 114 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 114 cagrtcacct tgaaggagtc 20 <210> 115 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 115 saggtgcagc tggtggagtc 20 <210> 116 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 116 caggtgcagc tgcaggagtc 20 <210> 117 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 117 gargtgcagc tggtgcagtc 20 <210> 118 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 118 caggtacagc tgcagcagtc 20 <210> 119 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 119 cgmcatccrg wtgacccagt 20 <210> 120 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 120 cgatrttgtg atgacycag 19 <210> 121 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 121 cgaaatwgtg wtgacrcagt ct 22 <210> 122 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 122 cgacatcgtg atgacccagt 20 <210> 123 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 123 ccagtctgtg ctgactcagc 20 <210> 124 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 124 ccagtctgcc ctgactcagc 20 <210> 125 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 125 ctcctatgag ctgacwcagc 20 <210> 126 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 126 gacsgatggg cccttggtgg a 21 <210> 127 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 127 aagatgaaga cagatggtgc 20 <210> 128 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 128 gggaacagag tgaccg 16 <210> 129 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 129 tcactatgga ctggatttgg a 21 <210> 130 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 130 ccatggacay actttgytcc ac 22 <210> 131 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 131 gtaggagaca tgcaaatagg gcc 23 <210> 132 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 132 aacaaagcta tgacatatag atc 23 <210> 133 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 133 atggagttgg ggctgagctg ggtt 24 <210> 134 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 134 agttgttaaa tgtttatcgc aga 23 <210> 135 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 135 aggtaattca tggagaaata gaa 23 <210> 136 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 136 agaacatgaa gcayctgtgg ttctt 25 <210> 137 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 137 atggactgga cctggagcat c 21 <210> 138 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 138 cctctgctga tgaaaaccag ccc 23 <210> 139 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 139 caggtycagc tkgtgcagtc 20 <210> 140 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 140 caratgcagc tggtgcagtc 20 <210> 141 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 141 cagrtcacct tgarggagtc tggt 24 <210> 142 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 142 gargtgcagc tgktggagtc 20 <210> 143 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 143 gaggtacaac tggtggagtc 20 <210> 144 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 144 gaggatcagc tggtggagtc 20 <210> 145 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 145 caggtgcagc tacagcagtg 20 <210> 146 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 146 cagctgcagc tgcaggagtc 20 <210> 147 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 147 caggtgcagc tggtgcaatc 20 <210> 148 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 148 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtggagc cttcggggac cctgtccctc 60 acctgcactg tgtctggtgg ctccatcagc aggagtaact ggtggagttg ggtccgccag 120 cccccagggg aggggctgga atggattgga gaaatccatc acattgggag gtccagctac 180 aatccgtccc tcaagagtcg agtcaccatg tctgtagaca agtcccagaa ccagttctcc 240 ctgaggctga cctctgtgac cgccgcggac acggccgtgt attactgtgc gaaaaatggc 300 tactacgcta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc g 351 <210> 149 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 149 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Glu Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Arg Ser 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile His His Ile Gly Arg Ser Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser 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Synthetic peptide <400> 154 Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 15 Glu <210> 155 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 155 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 156 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 156 Ile His His Ile Gly Arg Ser 1 5 <210> 157 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 157 Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys 1 5 10 15 Ser Gln Asn Gln Phe Ser Leu Arg Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp 20 25 30 Thr Ala Val Tyr Tyr 35 <210> 158 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 158 Cys Ala Lys Asn Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp 1 5 10 <210> 159 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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35 <210> 164 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 164 Cys Gln His Tyr Arg Ser Ser Pro Pro Trp Tyr Thr Phe 1 5 10 <210> 165 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 165 Ala Gln Gly Thr Lys Leu Asp Met Arg Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser 1 5 10 15 Val <210> 166 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 166 Asn Ser Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Ile Ile Ser Val Asp Lys 1 5 10 15 Ser Lys Asn His Phe Ser Leu Thr Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp 20 25 30 Thr Ala Val Tyr Tyr 35 <210> 167 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 167 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggggac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctctggtgc ctccattacc aatggtgcct ggtggagttg ggtccgccag 120 cccccaggga 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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 169 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gactgttagc agcccctacg tagcctggta ccagcagaaa 120 cgtggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca ccagggccac cggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatgata gatcatacta ttacactttt 300 ggccagggga ccaagctgga gatcaaa 327 <210> 170 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 170 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Pro 20 25 30 Tyr Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Arg Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 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peptide <400> 175 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 1 5 10 <210> 176 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 176 Cys Ala Lys Asn Ala Ala Tyr Asn Leu Glu Phe Trp 1 5 10 <210> 177 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 177 Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 178 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 178 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser 20 25 <210> 179 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 179 Gln Thr Val Ser Ser Pro Tyr 1 5 <210> 180 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 180 Val Ala Trp 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185 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagaa cctgtcgctc 60 acctgcactg tctctgatgc ctccatgagt gattatcact ggagctggat ccggcaggcc 120 gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atgtacagca ctgggagtcc ctactacaaa 180 ccctccctca aaggtcgggt caccatgtca atagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctggcct ctgtgaccgc cgcagacacg gccatctatt attgtgcgag cggacaacat 300 attggtggct gggtcccccc tgacttctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 186 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 186 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Asn Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Ala Ser Met Ser Asp Tyr 20 25 30 His Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ala Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Met Tyr Ser Thr Gly Ser Pro Tyr Tyr Lys Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Gly Arg Val Thr Met Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ala Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 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Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 192 Met Tyr Ser Thr Gly Ser Pro 1 5 <210> 193 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 193 Tyr Tyr Lys Pro Ser Leu Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Ile Asp Thr 1 5 10 15 Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ala Ser Val Thr Ala Ala Asp 20 25 30 Thr Ala Ile Tyr Tyr 35 <210> 194 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 194 Cys Ala Ser Gly Gln His Ile Gly Gly Trp Val Pro Pro Asp Phe Trp 1 5 10 15 <210> 195 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 195 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 196 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 196 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala 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Met Gln Ala Thr His Phe Pro Trp Thr Phe 1 5 10 <210> 202 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 202 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg 1 5 10 <210> 203 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 203 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt tcatatggct tgacctggat acgccaggct 120 ccggggaagg gcctggagtg ggtctcaagt atcagtggca gtggcaataa cacatactac 180 gcagactctg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca aagtcaagaa gacactatat 240 ctacaaatgg acagcctgac agtcggagac acggccgtct attactgctt aggagtcggt 300 cagggccacg gaattccggt catcgtctcc tca 333 <210> 204 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 204 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 206 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ala 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Thr Gln Ile Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 207 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 207 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 208 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 208 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 209 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 209 Leu Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 15 Ser <210> 210 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 210 Ile Ser Gly Ser Gly Asn Asn Thr 1 5 <210> 211 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 211 Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys 1 5 10 15 Val Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Thr Val Gly Asp 20 25 30 Thr Ala Val Tyr Tyr 35 <210> 212 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 212 Cys Leu Gly Val Gly Gln 1 5 <210> 213 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 213 Gly His Gly Ile Pro Val Ile Val Ser Ser 1 5 10 <210> 214 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 214 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser 20 25 <210> 215 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 215 Gln Ser Leu Val His Arg Asp Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 216 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 216 Leu Ser Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 217 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 217 Arg Ile Ser 1 <210> 218 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 218 Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly 20 25 30 Val Tyr Tyr 35 <210> 219 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 219 Cys Met Gln Ala Thr Gln Ile Pro Asn Thr Phe 1 5 10 <210> 220 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 220 Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 <210> 221 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 221 gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttaatccagc cgggggggtc cctaagactc 60 tcctgtgcag cctcgggctt cctcatcagt agttatttca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggccggagtg ggtctcagtt atttatagcg atggtagtac atattacgta 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc acagacaatt ccaagaacac actatatctt 240 cagatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gcccgatatt actgtgcgac acggcatttg 300 aattatgacg gtgaccactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 360 aag 363 <210> 222 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 222 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Leu Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Phe Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Thr Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Thr Arg His Leu Asn Tyr Asp Gly Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 <210> 223 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 223 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta cacagtgacg gaaacaccta cttgaattgg 120 tttcaccaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt ataaggtttc taagcgggac 180 tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggta gtgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aggctgagga tgttggaatt tattactgca tgcaaggtac acattggccg 300 acgttcggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaacgaactg tggctgca 348 <210> 224 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 224 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe His Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Thr His Trp Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala 115 <210> 225 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 225 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 226 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 226 Gly Phe Leu Ile Ser Ser Tyr Phe 1 5 <210> 227 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 227 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ser 1 5 10 15 Val <210> 228 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 228 Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Thr 1 5 <210> 229 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 229 Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Thr Asp Asn 1 5 10 15 Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 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Lys Val Ser 1 <210> 235 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 235 Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 10 15 Ser Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly 20 25 30 Ile Tyr Tyr 35 <210> 236 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 236 Cys Met Gln Gly Thr His Trp Pro Thr Phe 1 5 10 <210> 237 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 237 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 1 5 10 <210> 238 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 238 Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu 1 5 10 15

Claims (47)

  1. MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A (MICA)에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는, 암을 치료하기 위한 조성물이며,
    상기 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서
    (1) VH의 상보성 결정 영역 1 (CDR1)은 서열 153의 아미노산 서열을 포함하고,
    VH의 CDR2는 서열 156의 아미노산 서열을 포함하고,
    VH의 CDR3는 서열 158의 아미노산 서열을 포함하고;
    VL의 CDR1은 서열 160의 아미노산 서열을 포함하고,
    VL의 CDR2는 서열 162의 아미노산 서열을 포함하고,
    VL의 CDR3은 서열 164의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (2) VH의 CDR1은 서열 208의 아미노산 서열을 포함하고,
    VH의 CDR2는 서열 210의 아미노산 서열을 포함하고,
    VH의 CDR3은 서열 212의 아미노산 서열을 포함하고;
    VL의 CDR1은 서열 215의 아미노산 서열을 포함하고,
    VL의 CDR2는 서열 217의 아미노산 서열을 포함하고,
    VL의 CDR3은 서열 219의 아미노산 서열을 포함
    하는 것인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이
    서열 149의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 서열 151의 아미노산 서열을 포함하는 VL 쇄, 또는
    서열 204의 아미노산 서열을 포함하는 VH 쇄 및 서열 206의 아미노산 서열을 포함하는 VL 쇄를 포함
    하는 것인 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 항암 치료제를 추가로 포함하는 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 제약 조성물로서 제제화된 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 히드록삼산, 보리노스타트, 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA), 트리코스타틴 A (TSA), LAQ824, 파노비노스타트 (LBH589), 벨리노스타트 (PXD101), ITF2357 이탈파르마코 SpA, 시클릭 테트라펩티드, 뎁시펩티드 (로미뎁신, FK228), 벤즈아미드; 엔티노스타트 (SNDX-275/MS-275), MGCD0103, 단쇄 지방족 산, 발프로산, 페닐 부티레이트, AN-9, 피바넥스, CHR-3996, 및 CHR-2845로 이루어진 군으로부터 선택된 히스톤 데아세틸라제(deacetylase) 억제제 (HDAC)를 추가로 포함하는 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 보르테조밉, NPI-0052, 카르필조밉 (PR-171), CEP 18770, 및 MLN9708로 이루어진 군으로부터 선택된 프로테아솜 억제제를 추가로 포함하는 조성물.
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Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100111973A1 (en) * 2006-09-22 2010-05-06 Glenn Dranoff Methods for treating mica-related disorders
EP3210625B1 (en) 2011-09-30 2019-08-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Therapeutic peptides comprising antibodies binding to mhc class 1 polypeptide related sequence a (mica)
US10577416B2 (en) 2012-02-07 2020-03-03 Innate Pharma, S.A. Mica binding agents
NZ629816A (en) * 2013-03-15 2017-07-28 Dana Farber Cancer Inst Inc Therapeutic peptides
AU2014229476B2 (en) 2013-03-15 2019-07-11 Novelogics Biotechnology, Inc. Antibodies to MICA and MICB proteins
EP3708189B1 (en) 2013-07-05 2023-11-29 University of Washington through its Center for Commercialization Soluble mic neutralizing monoclonal antibody for treating cancer
EP3077504B1 (en) 2013-12-06 2019-08-14 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Therapeutic peptides
CA3124243A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Vaccine compositions and methods for restoring nkg2d pathway function against cancers
WO2015179627A1 (en) 2014-05-21 2015-11-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for treating cancer with anti bip or anti mica antibodies
WO2016154585A1 (en) 2015-03-26 2016-09-29 Charles Sentman Anti-mica antigen binding fragments, fusion molecules, cells which express and methods of using
US10993971B2 (en) 2015-12-04 2021-05-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Vaccination with MICA/B alpha 3 domain for the treatment of cancer
EP3430047A1 (en) * 2016-03-15 2019-01-23 Innate Pharma Anti-mica antibodies
US10448746B2 (en) * 2016-03-15 2019-10-22 Nadia Galloway Bed sheet with an integrated body positioner
TWI808055B (zh) 2016-05-11 2023-07-11 美商滬亞生物國際有限公司 Hdac 抑制劑與 pd-1 抑制劑之組合治療
TWI794171B (zh) 2016-05-11 2023-03-01 美商滬亞生物國際有限公司 Ｈｄａｃ抑制劑與ｐｄ-ｌ１抑制劑之組合治療
US20190185571A1 (en) * 2016-07-28 2019-06-20 Musc Foundation For Research Development Methods and compositions for the treatment of cancer combining an anti-smic antibody and immune checkpoint inhibitors
US11066471B2 (en) 2016-10-19 2021-07-20 Novelogics Biotechnology Inc. Antibodies to MICA and MICB proteins
US11555076B2 (en) * 2016-10-29 2023-01-17 Genentech, Inc. Anti-MIC antibodies and methods of use
WO2018183928A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
EP3694884A1 (en) 2017-10-15 2020-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
CA3089478A1 (en) * 2018-01-25 2019-08-01 Pdi Therapeutics, Inc. Mica/b antibodies and methods of use
CA3093407A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against mica and/or micb and uses thereof
CN111971306A (zh) 2018-03-30 2020-11-20 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
KR102832008B1 (ko) 2018-07-31 2025-07-10 컬리난 미카 코퍼레이션 Mica/b 유출을 차단하는 항-mica/b 항체 및 사용 방법
WO2020035345A1 (en) * 2018-08-14 2020-02-20 Innate Pharma Treatment of colorectal cancer by a combination of an anti-mica antibody and an anti-nkg2a antibody
WO2021072211A1 (en) * 2019-10-09 2021-04-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for treating cytotoxic t cell resistant tumors
JP2023532852A (ja) 2020-07-07 2023-08-01 キャンキュア， エルエルシー Ｍｉｃ抗体及び結合剤ならびにそれらの使用方法
CN113637077B (zh) * 2021-10-14 2021-12-24 尚健单抗（北京）生物技术有限公司 一种抗mica的抗体及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003089616A2 (en) * 2002-04-22 2003-10-30 Fred Hutchinson Cancer Research Center Soluble mic polypeptides as markers for diagnosis, prognosis and treatment of cancer and autoimmune diseases or conditions

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DE3572982D1 (en) 1984-03-06 1989-10-19 Takeda Chemical Industries Ltd Chemically modified lymphokine and production thereof
US5981216A (en) 1985-04-01 1999-11-09 Alusuisse Holdings A.G. Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
EP0351410A1 (en) 1987-03-18 1990-01-24 3i RESEARCH EXPLOITATION LIMITED Complement-binding peptide
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
GB8709290D0 (en) 1987-04-16 1987-05-20 Secretary Trade Ind Brit Precision motion slideways
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
ATE135370T1 (de) 1988-12-22 1996-03-15 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
AU633698B2 (en) 1990-01-12 1993-02-04 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
DK0814159T3 (da) 1990-08-29 2005-10-24 Genpharm Int Transgene, ikke-humane dyr, der er i stand til at danne heterologe antistoffer
GB9022543D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Antibody production
ATE249840T1 (de) 1991-12-13 2003-10-15 Xoma Corp Verfahren und materialien zur herstellung von modifizierten variablen antikörperdomänen und ihre therapeutische verwendung
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
WO1993022332A2 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
NZ255101A (en) 1992-07-24 1997-08-22 Cell Genesys Inc A yeast artificial chromosome (yac) vector containing an hprt minigene expressible in murine stem cells and genetically modified rodent therefor
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US6091001A (en) 1995-03-29 2000-07-18 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
ES2304786T3 (es) 1995-04-27 2008-10-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos anti-il-8 humanos, derivados a partir de xenoratones inmunizados.
AUPN568095A0 (en) 1995-09-27 1995-10-26 Austin Research Institute, The Anti-Galalpha(1,3)Gal antibody binding peptides
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
WO1998019167A2 (en) * 1996-10-29 1998-05-07 Fred Hutchinson Cancer Research Center, Inc. Cell stress regulated human mhc class i gene
ATE549918T1 (de) 1996-12-03 2012-04-15 Amgen Fremont Inc Menschliche antikörper, die ausdrücklich menschliches tnf alpha binden
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US5830698A (en) 1997-03-14 1998-11-03 Idec Pharmaceuticals Corporation Method for integrating genes at specific sites in mammalian cells via homologous recombination and vectors for accomplishing the same
AU736549B2 (en) 1997-05-21 2001-08-02 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung Method for the production of non-immunogenic proteins
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
EP1068241B1 (en) 1998-04-02 2007-10-10 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
JP4334141B2 (ja) 1998-04-20 2009-09-30 グリカート バイオテクノロジー アクチェンゲゼルシャフト 抗体依存性細胞傷害性を改善するための抗体のグリコシル化操作
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2000042072A2 (en) 1999-01-15 2000-07-20 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2000061739A1 (en) 1999-04-09 2000-10-19 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
US20090175821A1 (en) 1999-05-17 2009-07-09 Bridon Dominique P Modified therapeutic peptides with extended half-lives in vivo
US6475220B1 (en) 1999-10-15 2002-11-05 Whiteside Biomechanics, Inc. Spinal cable system
EP1252192B1 (en) 2000-02-11 2006-08-16 MERCK PATENT GmbH Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
US6725230B2 (en) 2000-07-18 2004-04-20 Aegis Analytical Corporation System, method and computer program for assembling process data of multi-database origins using a hierarchical display
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
WO2002068615A2 (en) 2001-02-28 2002-09-06 Fred Hutchinson Cancer Research Center, Inc. Activation of lymphocyte populations expressing nkg2d using anti-nkg2d antibodies and ligand derivatives
US20040115198A1 (en) 2001-02-28 2004-06-17 Fred Hutchinson Cancer Research Center Activation of lymphocyte populations expressing NKG2D using anti-NKG2D antibodies and ligand derivatives
US6566208B2 (en) 2001-07-25 2003-05-20 Chartered Semiconductor Manufacturing Ltd. Method to form elevated source/drain using poly spacer
US7084257B2 (en) * 2001-10-05 2006-08-01 Amgen Inc. Fully human antibody Fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity
JP2005532253A (ja) 2001-10-25 2005-10-27 ジェネンテック・インコーポレーテッド 糖タンパク質組成物
US7745140B2 (en) 2002-01-03 2010-06-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Activation and expansion of T-cells using an engineered multivalent signaling platform as a research tool
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040110226A1 (en) 2002-03-01 2004-06-10 Xencor Antibody optimization
US7524630B2 (en) 2002-04-22 2009-04-28 University Of Florida Research Foundation, Inc. Functionalized nanoparticles and methods of use
DK1534335T4 (en) 2002-08-14 2015-10-05 Macrogenics Inc FCGAMMARIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
AU2003279719B8 (en) 2002-09-27 2009-01-08 Xencor Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
WO2004035752A2 (en) 2002-10-15 2004-04-29 Protein Design Labs, Inc. ALTERATION OF FcRn BINDING AFFINITIES OR SERUM HALF-LIVES OF ANTIBODIES BY MUTAGENESIS
EP1587540B1 (en) 2003-01-09 2021-09-15 MacroGenics, Inc. IDENTIFICATION AND ENGINEERING OF ANTIBODIES WITH VARIANT Fc REGIONS AND METHODS OF USING SAME
US7666417B2 (en) 2003-04-22 2010-02-23 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions for treating autoimmune diseases or conditions
US20100069614A1 (en) * 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
KR20140033239A (ko) 2003-06-27 2014-03-17 암젠 프레몬트 인코포레이티드 상피 성장 인자 수용체의 결실 돌연변이체 지향 항체 및 그 용도
US7871610B2 (en) * 2003-08-12 2011-01-18 Dyax Corp. Antibodies to Tie1 ectodomain
US8101720B2 (en) 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
KR101149242B1 (ko) 2004-01-12 2012-05-25 어플라이드 몰리큘라 에볼류션, 인코포레이티드 Ｆｃ 영역 변이체
EP1737890A2 (en) 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
ATE435656T1 (de) * 2004-04-05 2009-07-15 Univ California Nkg2d modulation
BR122018016031B8 (pt) 2004-08-04 2021-07-27 Applied Molecular Evolution Inc processo para produzir um anticorpo monoclonal variante com resposta de adcc realçada
JP2008520188A (ja) * 2004-10-19 2008-06-19 アムジエン・インコーポレーテツド アンジオポエチン−２特異的結合物質
AU2005306997B2 (en) 2004-10-25 2012-07-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-ADDL antibodies and uses thereof
US20080148432A1 (en) * 2005-12-21 2008-06-19 Mark Scott Abad Transgenic plants with enhanced agronomic traits
EP3699191A1 (en) * 2004-12-21 2020-08-26 MedImmune Limited Antibodies directed to angiopoietin-2 and uses thereof
HUE030877T2 (en) 2005-06-08 2017-06-28 Dana Farber Cancer Inst Inc Methods and Compositions for the Treatment of Permanent Infections and Cancer by Inhibition of Programmed Cell Death (PD-1) Synthesis
EP1928872B1 (en) * 2005-09-21 2012-03-14 4Sc Ag Novel sulphonylpyrroles as inhibitors of hdac
US8248965B2 (en) 2005-11-03 2012-08-21 Motorola Solutions, Inc. Method and apparatus regarding use of a service convergence fabric
JP2009514528A (ja) 2005-11-03 2009-04-09 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター Ｎｋｇ２ｄ陽性ｃｄ４＋細胞による免疫応答の負の免疫調節法
CN101370519B (zh) * 2005-12-15 2013-07-24 阿斯利康(瑞典)有限公司 治疗癌症的促血管生成素-2拮抗剂和VEGF-A、KDR和/或Flt1拮抗剂的组合
DE102006009847A1 (de) 2006-03-01 2007-09-06 Sweredjuk, Robert, Dr. Verfahren von Absorbieren von Schadstoffen und Gerüchen
EP3260134A1 (en) 2006-08-07 2017-12-27 President and Fellows of Harvard College Protein matrix vaccines and methods of making and administering such vaccines
US20110060120A1 (en) 2006-09-08 2011-03-10 Obeid Michel Sarkis Immunogenic treatment of cancer by peptides inducing the plasma membrane exposure of erp57
US20100111973A1 (en) 2006-09-22 2010-05-06 Glenn Dranoff Methods for treating mica-related disorders
US9492518B2 (en) * 2006-10-04 2016-11-15 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Tumor immunity
EP1944611A1 (en) * 2007-01-11 2008-07-16 Université de la Méditerranée Biomarker for the medicine and the biology of the reproduction
CA2900172C (en) 2007-04-23 2018-08-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center Negative immunomodulation of immune responses by erp5
WO2008143954A2 (en) * 2007-05-14 2008-11-27 Biogen Idec Ma Inc. Single-chain fc (scfc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto
US9370558B2 (en) 2008-02-13 2016-06-21 President And Fellows Of Harvard College Controlled delivery of TLR agonists in structural polymeric devices
US10328133B2 (en) 2008-02-13 2019-06-25 President And Fellows Of Harvard College Continuous cell programming devices
WO2011063336A2 (en) 2009-11-20 2011-05-26 President And Fellows Of Harvard College Secondary site of antigen stimulation for therapeutic vaccination
JO2913B1 (en) * 2008-02-20 2015-09-15 امجين إنك, Antibodies directed towards angiopoietin-1 and angiopoietin-2 proteins and their uses
WO2010011242A2 (en) * 2008-03-24 2010-01-28 Beth Israel Deaconess Medical Center Methods and compositions for the treatment and diagnoisis of systemic anthrax infection
US8182809B1 (en) 2008-09-08 2012-05-22 University Of Washington Methods for treating cancer by inhibiting MIC shedding
US8133979B2 (en) 2008-12-16 2012-03-13 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies against human angiopoietin 2
US8207497B2 (en) 2009-05-08 2012-06-26 Ionsense, Inc. Sampling of confined spaces
JO3182B1 (ar) 2009-07-29 2018-03-08 Regeneron Pharma مضادات حيوية بشرية عالية الالفة مع تولد الاوعية البشرية - 2
KR101688522B1 (ko) 2009-12-15 2016-12-21 삼성전자주식회사 안지오포이에틴-2에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
US8796420B2 (en) 2009-12-31 2014-08-05 Avidbiotics Corp. Non-natural MIC proteins
US10143186B2 (en) * 2010-02-08 2018-12-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common light chain mouse
US8753640B2 (en) 2011-05-31 2014-06-17 University Of Washington Through Its Center For Commercialization MIC-binding antibodies and methods of use thereof
CN102911270A (zh) * 2011-08-05 2013-02-06 浙江大学 一种抑制移植器官慢性排斥反应的抗体的制备及纯化方法
EP3210625B1 (en) * 2011-09-30 2019-08-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Therapeutic peptides comprising antibodies binding to mhc class 1 polypeptide related sequence a (mica)
US10577416B2 (en) * 2012-02-07 2020-03-03 Innate Pharma, S.A. Mica binding agents
NZ629816A (en) 2013-03-15 2017-07-28 Dana Farber Cancer Inst Inc Therapeutic peptides
WO2014157322A1 (ja) 2013-03-28 2014-10-02 本田技研工業株式会社 報知システム、電子装置、報知方法、およびプログラム
US9572898B2 (en) 2013-09-09 2017-02-21 Seton Hall University Functionalized fluorine containing phthalocyanine molecules
EP3077504B1 (en) 2013-12-06 2019-08-14 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Therapeutic peptides
CA3124243A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Vaccine compositions and methods for restoring nkg2d pathway function against cancers
WO2015179627A1 (en) 2014-05-21 2015-11-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for treating cancer with anti bip or anti mica antibodies

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003089616A2 (en) * 2002-04-22 2003-10-30 Fred Hutchinson Cancer Research Center Soluble mic polypeptides as markers for diagnosis, prognosis and treatment of cancer and autoimmune diseases or conditions

Also Published As

Publication number Publication date
US20140004112A1 (en) 2014-01-02
CA2850542A1 (en) 2013-04-04
HRP20170494T1 (hr) 2017-06-02
CN103958543A (zh) 2014-07-30
KR20190112756A (ko) 2019-10-07
BR112014007487A2 (pt) 2017-04-04
AU2012315792A1 (en) 2014-04-17
CN107098967A (zh) 2017-08-29
MX355877B (es) 2018-05-03
WO2013049517A3 (en) 2014-05-08
ES2619707T3 (es) 2017-06-26
WO2013049517A2 (en) 2013-04-04
US10793633B2 (en) 2020-10-06
EP3210625B1 (en) 2019-08-28
EP2760471A4 (en) 2015-06-03
MX2014003601A (es) 2014-05-28
KR20140076600A (ko) 2014-06-20
AU2012315792B2 (en) 2017-09-07
JP2018048139A (ja) 2018-03-29
EP2760471B1 (en) 2017-02-01
US9402905B2 (en) 2016-08-02
CY1119567T1 (el) 2018-03-07
KR102225422B1 (ko) 2021-03-08
EP3210625A2 (en) 2017-08-30
EP3628329B1 (en) 2022-08-10
SI2760471T1 (sl) 2017-04-26
EA201490644A1 (ru) 2014-09-30
NZ721184A (en) 2018-08-31
CN103958543B (zh) 2016-12-14
ES2925654T3 (es) 2022-10-19
PH12014500635A1 (en) 2014-05-05
ES2757473T3 (es) 2020-04-29
PL2760471T3 (pl) 2017-07-31
DK2760471T3 (en) 2017-05-08
JP2014532053A (ja) 2014-12-04
EP3628329A1 (en) 2020-04-01
PE20142361A1 (es) 2015-01-16
EP2760471A2 (en) 2014-08-06
PT2760471T (pt) 2017-03-22
IL231604B (en) 2018-08-30
NZ623086A (en) 2016-08-26
IL231604A0 (en) 2014-05-28
EP3210625A3 (en) 2017-10-25
EP2760471B9 (en) 2017-07-19
HK1243427A1 (zh) 2018-07-13
SG11201401104WA (en) 2014-09-26
SMT201700221T1 (it) 2017-05-08
CL2014000786A1 (es) 2014-11-14
CO7020866A2 (es) 2014-08-11
HUE034044T2 (en) 2018-01-29
LT2760471T (lt) 2017-04-25
RS55822B1 (sr) 2017-08-31
US20170008962A1 (en) 2017-01-12
HK1199835A1 (en) 2015-07-24
PH12014500635B1 (en) 2018-10-31
TN2014000134A1 (en) 2015-07-01

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