KR101904971B1

KR101904971B1 - 괄루근 동충하초 고체 발효물 및 이를 포함하는 기능성 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101904971B1
Application number: KR1020160177420A
Authority: KR
Inventors: 김종명; 이원석; 김세영; 이수정; 이상한; 손형우; 김대익
Original assignee: (주)팜바이오스
Priority date: 2016-12-23
Filing date: 2016-12-23
Publication date: 2018-11-28
Anticipated expiration: 2036-12-23
Also published as: KR20180073899A

Abstract

본 발명은 괄루근(括樓根, Trichosanthis spp.)과 동충하초(冬蟲夏草, vegetable worms)의 고체 발효물 및 이를 포함하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 멸균된 괄루근에 동충하초를 접종하여 고체 발효시켜 수득되는 고체 발효물 및 이를 포함하는 항산화, 피부 노화 방지 및 피부 재생 촉진용 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 괄루근과 동충하초 고체 발효물은 세포 독성이 없는 천연물 유래의 조성물로서 항산화, 피부 노화 억제 및 피부 재생 촉진이 우수하여 항산화 작용 및 항노화 작용, 특히, 피부 재생 및 주름 개선용도의 기능성 화장료 조성물로서 적용가능하므로 화장품 산업상 매우 유용한 것이다.

Description

괄루근 동충하초 고체 발효물 및 이를 포함하는 기능성 화장료 조성물{A SOLID FERMENTATION COMPOSITION FROM TRICHOSANTHIS AND VEGETABLE WORMS AND A FUNCTIONAL COSMETIC COMPOSITION COMPRISING THE SAME}

본 발명은 괄루근(括樓根, Trichosanthis spp.)과 동충하초(冬蟲夏草, vegetable worms)의 고체 발효물 및 이를 포함하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 멸균된 괄루근에 동충하초를 접종하여 고체 발효시켜 수득되는 고체 발효물 및 이를 포함하는 항산화, 피부 노화 방지 및 피부 재생 촉진용 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 일상생활에서 햇빛 노출에 의한 자외선 조사, 황사나 자동차 매연 등에 의한 대기 오염 물질 및 각종 세균 등에 노출되어 피부 트러블 및 자극이 유발되며 이로 인해 정상적인 피부 노화를 가속화시키게 된다. 이러한 피부 노화는 피부 외관상으로 피부의 탄력을 저하시켜 주름을 형성하거나 기미 및 노인성 반점을 형성하여 피부의 색소 침착을 유발하게 된다.

일반적으로 피부 노화는 체세포 돌연변이, 자유 라디칼의 과도한 생성, 자가면역반응, 독성물질의 축적, 유전자 복제중 발생된 에러, 진피구성 단백질의 변형 등 여러 가지 학설이 제기되고 있으며, 이 중에서 노화(aging)와 성인병과 같은 각종 질환의 원인이 활성산소종(reactive oxygen species)에 기인된다는 학설이 인정받음에 따라 산소나 질소로부터 유래되는 활성 산소종을 조절할 수 있는 천연 항산화제를 개발하려는 연구가 활발히 진행되고 있다. 보통 유해산소로 알려져 있는 활성 산소종은 가장 안정한 형태인 삼중항 산소가 환원되면서 과산화물 음이온 라디칼, 과산화수소, 히드록시 라디칼, 과산화지질이나 여기서 발생되는 자유 라디칼 등의 과산화지질로서, 체내에는 이러한 활성산소종이 정상적인 상태에서도 발생을 하지만 항산화 효소인 슈퍼옥사이드디스뮤타아제(superoxide dismutase, SOD), 카탈라아제(catalase), 글루타치온 퍼옥시다아제(glutathion peroxidase, GPx) 등이 존재하여 과도한 활성 산소종의 생성을 억제하고 있다. 그러나, 이러한 활성산소종이 스트레스 및 외부 환경적인 요인에 의해 비정상적으로 과도하게 발생이 되어 소거되지 않고 체내에 존재하게 되면 자유 라디칼로 인한 산화적 스트레스(oxidative stress)가 생체에 가해져 DNA, RNA, 단백질, 세포막 및 세포구조 손상, 암, 조직 손상, 노화 등을 유발한다고 추측된다.

현대에 급증하는 다양한 질병 및 노화의 가속화를 억제하기 위하여 이러한 활성산소종을 조절하거나 제거할 수 있는 항산화제에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 대표적으로, 천연 항산화제인 토코페롤, 아스코르빈산, 카로테노이드, 플라보노이드, 글루타치온 등에 대한 효능 연구 및 이들의 안정화 기술에 대한 연구와 합성 항산화제인 부틸화된 히드록시 톨루엔(BHT), 부틸화된 히드록시 아니졸(BHA) 등 다양한 항산화제가 알려져 있고, 그 외 많은 항산화제에 관한 연구가 지속적으로 진행되고 있다. 이들 항산화제 중 토코페롤은 항산화 효과가 비교적 낮은 편이고, 효과가 우수한 BHA, BHT 등의 합성 항산화제가 의약품 및 식품분야 등에서 활용되고 있으나, 돌연변이원성 및 독성에 대한 지적이 있으며 아스코르빈산의 경우에는 안정성이 확보된 유도체 및 제형 개발이 진행되고 있어, 더욱 안정하고 효과가 우수한 천연 항산화 소재의 개발이 절실히 요구되고 있다.

이러한 문제를 해결하기 위하여, 최근 각광받고 있는 식물화학물질(phytochemical) 중에서 상대적으로 독성이 낮고 안전하며 피부에 유효한 효능을 나타내는 추출물을 이용한 화장료 조성물에 대한 많은 연구가 이루어지고 있으나 일반적인 추출 방법에 의해 수득된 성분은 그 효과가 미미한 한계점을 나타내어 효능을 극대화시킨 소재의 개발이 요구되고 있다.

한편, 발효를 통한 천연 추출물의 경우에는 인체에 유해한 유기용매를 사용하지 않고 천연물 내에 존재하는 당 성분을 미생물의 대사과정에서 탄소원으로 사용되어 알코올로 전환시키게 되므로, 천연물 내의 유효성분, 특히, 플라보노이드, 폴리페놀, 카테킨 등은 당화되어 안정한 화합물로 존재하게 되어 있어 발효를 통해 유효성분 함량 추출율을 증가시키고 당이 배제되어 활성화된 유효성분에 의해 우수한 피부 효능이 기대되고 있다.

동충하초란 겨울에는 벌레(蟲) 상태로 있다가 여름이 되면 버섯(草)이 된다는 뜻에서 나온 말로써 곰팡이의 일종인 동충하초균의 포자나 균사가 살아있는 곤충의 몸 속에 침입하여 겨울 동안에는 그대로 잠복해 있다가 여름이 되면 그 곤충을 죽게하고 기주안에 있는 물질을 영양원으로 이용하여 내생균핵을 만든다음 곤충의 몸밖으로 자실체를 형성하는 기이한 버섯이다.

동충하초의 종류는 지금까지 세계적으로 750여 종류가 발견되고 있으며, 코디셉스 속(Cordyceps spp.), 패실로마이세스 속(Paecilomyces spp), 이사리아 속(Isaria spp.) 등 100여 가지 속으로 구분된다.

중국의 고서들에 의하면 동충하초는 암질환, 간질환, 폐질환, 뇌질환, 순환기 질환, 심장병, 당뇨병 등에 탁월한 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 현대실용중약전에는 폐결핵, 노인쇠약성 만성결핵 빈혈, 허약체질 등을 치료한다고 나타나 있다. 최근에는 종양 억제율이 83%로 높은 항암효과 및 마약중독의 해독제로서도 효과가 있는 것으로 보고되고 있으며, 자연치유력을 가지고 있어 심한 운동으로 체력소모가 클 때 회복효과가 있다고 보고하고 있다.

또한, 괄루근은 하늘타리(Trichosanthis kirillowii Max.) 또는 노랑하늘타리(T. killillowii Max. var Japonicum KITAMURA)의 껍질을 벗긴 뿌리를 햇볕에 말린 것으로, 하늘타리 뿌리의 약명으로 사용된다.

하늘타리는 외과의 다년생 덩굴성 초본이며, 또는 동속 근연식물(박과)의 다년생 초본식물의 뿌리로서 우리나라에서는 대개 중남부 지방에서 자라는데, 특히 제주도와 중북부산지 또는 수림 아래에 야생으로 존재하고 있다. 성상은 고르지 않은 담황백색의 원주형으로 지름 3~5㎝, 길이 5~10㎝, 흔히 세로로 쪼개져 있으며, 불규칙한 황갈색의 유관속이 뻗어 있다. 냄새는 없고 맛은 약간 고미이다. 절단면은 담황색이고, 약간 섬유성이다. 횡단면을 확대경으로 보면 폭이 넓은 방사 조직과 황색의 반점 또는 작은 구멍(道管)이 있다.

괄루근은 해열, 거당, 배농 소독제, 황달, 당뇨병, 중풍 또는 살포약으로서 유아의 피부병에 쓰인다. 또한, 중국에서는 피임약으로도 쓰인다.

KR

10-2013-0149221

A

KR

10-2007-0038920

A

KR

10-2007-0091382

A

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 세포 독성이 없는 천연물 유래로서 항산화, 피부 노화 억제 및 피부 재생 촉진이 우수한 괄루근을 동충하초로 고체 발효시킨 고체 발효물 및 이를 이용한 기능성 화장료 조성물을 제공하고자 하는 것이다.

본 발명은 상기와 같은 과제를 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명은 동충하초 균사체를 멸균된 괄루근(括樓根)에 접종 및 배양하여 제조되는 괄루근과 동충하초의 고체 발효물을 제공한다.

상기 동충하초는 코디셉스 시넨시스(Cordyceps sinensis), 코디셉스 밀라타리스(Cordyceps militaris), 코디셉스 스카라베콜라(Cordyceps scarabaecola), 코디셉스 누탄스(Cordyceps nutans), 코디셉스 스페코세팔라(Cordyceps sphecocephala), 코디셉스 트리센트리(Cordyceps tricentri), 패실로마이세스 테누이페스(Paecilomyceps tenuipes) 및 패실로마이세스 자포니카(Paecilomyces japonica)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.

상기 배양은 온도 20~35℃, 상대습도 70~90% 및 배양 기간 7~45일의 조건인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 상기 본 발명의 괄루근과 동충하초의 고체 발효물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은 항산화, 피부 노화 방지 및 피부 재생 촉진으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 기능성을 갖는 것이 바람직하다.

상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 파우더, 팩트, 립글로즈, 립스틱, 섀도우, 샴푸 및 린스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형인 것이 바람직하다.

본 발명의 괄루근과 동충하초 고체 발효물은 세포 독성이 없는 천연물 유래의 조성물로서 항산화, 피부 노화 억제 및 피부 재생 촉진이 우수하여 항산화 작용 및 항노화 작용, 특히, 피부 재생 및 주름 개선용도의 기능성 화장료 조성물로서 적용가능하므로 화장품 산업상 매우 유용한 것이다.

도 1은 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물의 제조 공정을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물의 SOD 라디칼 소거 활성을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물의 Xanthine oxidase assay 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물의 SIRT1(Sirtuin1) 유전자 발현 양상을 northern blot으로 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물의 SIRT1(Sirtuin1) 유전자 발현 양상을 그래프로 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물의 피부 상처 재생 효과를 시간별로 나타낸 것이다.
도 7은 광독성 물질로 알려진 CPZ(chloropromazine)의 NRU 광독성 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물의 NRU 광독성 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물의 MTT assay 결과를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 발명자들은 천연물을 이용한 기능성 화장료 조성물의 소재를 개발하기 위하여 연구를 거듭한 결과, 괄루근에 동충하초 균사체를 접종하고, 이를 고체 배양법에 따라 배양하여 수득되는 괄루근 동충하초 고체 발효물이 우수한 항산화능, 피부 노화 방지 및 피부 재생 활성을 가짐을 확인하고 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물을 기능성 화장료 조성물로서 이용할 수 있음을 제안한다.

따라서, 본 발명은 동충하초 균사체를 멸균된 괄루근에 접종 및 배양하여 제조되는 괄루근과 동충하초의 고체 발효물을 제공한다.

본 발명의 동충하초는 자낭균류 맥각균목 동충하초과에 속하는 균류로서, 구체적으로는, 코디셉스 속(Cordyceps spp.), 패실로마이세스 속(Paecilomyces spp.), 이사리아 속(Isaria spp.), 파이토코디셉스 속(Phytocordyceps spp.) 등 100여 속으로 분류되고, 종류는 전 세계적으로 약 750여 종이 알려져 있다.

본 발명에서는, 이러한 모든 동충하초가 사용될 수 있으며, 바람직하게는, 코디셉스 시넨시스(Cordyceps sinensis), 코디셉스 밀라타리스(Cordyceps militaris), 코디셉스 스카라베콜라(Cordyceps scarabaecola), 코디셉스 누탄스(Cordyceps nutans), 코디셉스 스페코세팔라(Cordyceps sphecocephala), 코디셉스 트리센트리(Cordyceps tricentri), 패실로마이세스 테누이페스(Paecilomyceps tenuipes) 및 패실로마이세스 자포니카(Paecilomyces japonica)로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 보다 바람직하게는, 눈꽃동충하초로도 명명되는 패실로마이세스 자포니카(Paecilomyces japonica)이다.

본 발명의 동충하초 균사체는 동충하초 종균을 종배양시켜 제조될 수 있다.

상기 동충하초 종균은 사용시까지 주기적으로 계대 배양하여 유지할 수 있는데, 바람직한 구체예로서, PDA(Potato Dextrose Agar) 배지에 동충하초 균사체를 접종한 후 약 25℃ 정도의 온도에서 약 4주 간격으로 계대 배양하여 유지할 수 있다.

상기 종배양은 보관 중인 동충하초 균사체 종균을 본 배양에 앞서 배양하는 과정이다. 바람직한 구체예로서, 상기 종배양은 버섯 균사체용 배지에 종균, 즉 균사체를 접종한 후, 이를 회전 진탕 배양하여 액상의 배양물로서 수득할 수 있다.

본 발명의 괄루근은 피층을 벗긴 뿌리를 말한다. 본 발명에서 사용되는 괄루근은 트리초산디스 속(Trichosanthis spp.)의 식물이라면 그 종류를 불문하나, 예를 들어, 트리초산디스 키리로위(Trichosanthis kirilowii) 또는 트리초산디스 라딕스(T. radix)일 수 있다.

상기 괄루근의 멸균은 준비된 괄루근을 수세한 후, 이를 탈수 및 건조시키고, 공지된 다양한 멸균 방법을 적용할 수 있다. 바람직한 구체예로서, 상기 멸균은 121℃에서 30분 동안 고압멸균할 수 있다.

본 발명의 동충하초 균사체를 멸균된 괄루근에 접종하는 방법은 상기 설명된 동충하초 종배양에 의하여 수득된 액상의 배양물의 일정량을 멸균된 괄루근에 무균적으로 접종하는 것이다.

동충하초 균사체를 접종 한 후, 배양 과정을 거치는데, 상기 배양의 조건은 온도 20~35℃, 상대습도 70~90%, 배양 기간 7~45일인 것이 바람직하며, 바람직한 구체예로서, 25℃의 온도에서 상대습도 80%의 배양기에서 30일 동안 배양시킬 수 있다.

발효가 완성된 괄루근 동충하초 고체 발효물은 괄루근의 표면에 동충하초 균사체가 전체적으로 덮여 있는 형상이며, 이로부터 괄루근 동충하초 고체 발효물의 추출물을 제조할 수 있다.

추출에 사용되는 용매로는 물 또는 저급 에탄올일 수 있으나, 바람직하게는 열수 추출이다. 바람직한 구체예로서, 수득된 괄루근 동충하초 고체 발효물에 약 5~150배 부피의 열수를 가하고, 1~5시간 동안 진탕시키고, 원심분리하여 상등액을 취할 수 있다. 상기 과정은 1~5회 수행될 수 있으며, 바람직하게는 3회 반복 추출할 수 있다.

상기와 같은 구체적인 제조 공정에 의하여 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물 내지 이의 추출물을 제조할 수 있으며, 이를 아래에 설명되는 기능성 화장료 조성물의 소재로서 적용 가능하다.

따라서, 본 발명은 본 발명의 괄루근 동충하초 고체 발효물을 포함하는 기능성 화장료 조성물을 제공한다.

상기 기능성이라 함은 항산화, 피부 노화 방지 및 피부 재생 촉진으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 활성을 의미한다.

본 발명의 화장료 조성물의 주 성분인 괄루근 동충하초 고체 발효물은 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 50중량%로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.1 내지 20중량%, 더욱 바람직하게는 1 내지 10중량%이다. 이러한 함량 범위에서 적절한 제형 안정성을 확보할 수 있으며, 목적하는 항산화, 피부 노화 방지 및 피부 재생 촉진의 효과를 기대할 수 있다.

본 발명의 상기 조성물은 괄루근 동충하초 고체 발효물 외에도 본 발명의 유효 활성을 저해하지 않는 범위에서 항산화, 피부 노화 방지 및 피부 재생 촉진의 효과를 위한 공지의 천연물 추출물이나 기타 성분을 추가로 포함시켜 이용할 수 있다.

또한, 상기 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 첨가되는 성분들, 예를 들면, 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제와 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제나 담체를 포함하여 특정 제형으로 성형될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들면, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 팩, 비누, 계면활성제-함유 클린징, 오일 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 구체적으로는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 파우더, 팩트, 립글로즈, 립스틱, 섀도우, 샴푸 및 린스 등의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히, 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하에서는, 바람직한 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 일 구체예를 기재한 것이며, 하기 실시예에 의하여 본 발명의 권리범위가 한정되어 해석되는 것은 아니다.

[실시예]

1. 시료의 제조

1.1. 괄루근 동충하초 고체 발효물 열수 추출물의 제조

눈꽃동충하초(Paecilomyces Japonica)는 ㈜팜바이오스에서 계대중인 균주를 사용하여 25℃에서 PDA(Potato Dextrose Agar, Difco, Co., USA) 배지를 사용하여 배양하여, 4주 간격으로 계대배양하면서, 4℃에 보관하면서 사용하였다. 500ml 플라스크에 100ml 용량의 버섯 균사체 고체 배지(1 cm × 1 cm, 3개)에 계대 중인 눈꽃동충하초 균사체를 접종한 후, 회전 진탕 배양기(Daihan Labtech Co.Korea, 25±1℃, 130rpm)에서 7일간 배양하여 액체 종균으로 사용하였다.

괄루근은 대구 한약재 시장에서 구입하여, 괄루근을 사용 전 수세하여 불순물을 제거한 후 탈수 하였으며, 괄루근 500g을 3L 배양 용기에 넣고, 121℃에서 30분간 고압 멸균 후 상온에서 냉각하고, 상기 제조된 액체 종균 60ml을 멸균된 괄루근 500g에 무균적으로 접종하였다. 발효는 25℃, 상대습도 80%의 배양기에서 30일간 진행하였다. 발효 후 10배 부피의 열수를 첨가하여 2시간 동안 진탕 시킨 후, 72시간 침지하고, 10,000rpm으로 10분간 원심분리 후 상등액을 취하였으며, 이를 3회 반복 후 추출액을 감압 하에서 농축하여 분말로 조제하여 사용하였다.

1.2. 괄루근 상황버섯 고체 발효물 열수 추출물의 제조

눈꽃동충하초 대신 상황버섯을 사용한 것을 제외하고는 상기 항목 1.1의 괄루근 동충하초 고체 발효물 열수 추출물의 제조 방법과 동일한 방법으로 괄루근 상황버섯 고체 발효물 열수 추출물을 제조하였다.

1.3. 괄루근 영지버섯 고체 발효물 열수 추출물의 제조

눈꽃동충하초 대신 영지버섯을 사용한 것을 제외하고는 상기 항목 1.1의 괄루근 동충하초 고체 발효물 열수 추출물의 제조 방법과 동일한 방법으로 괄루근 영지버섯 고체 발효물 열수 추출물을 제조하였다.

2. 활성 평가

2.1. 항산화 활성 검증

상기 제조된 괄루근 동충하초/상황버섯/영지버섯 고체 발효물의 항산화 활성을 평가하였다. 제조된 괄루근 동충하초/상황버섯/영지버섯 고체 발효물(0.5mg/ml)을 대상으로 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) radical 소거능 및 FRAP 활성 측정에 의해 평가하였다.

DPPH 소거능의 경우, 다양한 농도로 희석한 시료 20μl에 99.5% 에탄올에 용해시킨 2x10^-4M DPPH 용액 380μl를 넣고 혼합하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후, 516nm에서 microplate reader(Asys Hitech, Expert96, Asys Co., Austria)를 사용하여 흡광도를 측정하였다. DPPH free radical 소거능은 아래 표 1에 나타낸 바와 같이 백분율로 표시하였다.

[표 1] DPPH 라디칼 소거 활성

FRAP 활성은 제조된 괄루근 동충하초/상황버섯/영지버섯 고체 발효물(0.5mg/ml)을 대상으로 공지된 방법에 따라 수행되었다.

[표 2] FRAP 활성

2.2. 세포재생/노화억제 시험

2.2.1. Elastase inhibitiory assay

제조된 괄루근 동충하초/상황버섯/영지버섯 고체 발효물에 대하여 elastase inhibitory activity(%)를 평가한 결과를 다음 표 3에 나타내었다.

[표 3] Elastase inhibitory assay

특히, 위의 결과를 토대로, 농도별(30, 100, 300 및 1,000μg/ml)로 elastase inhibitory activity(%)를 측정하였으며, positive control인 EGCG(epigallocatechin gallate)와 비교한 결과 유사한 저해 활성을 확인할 수 있었다.

2.2.2. Superoxide dismutase assay

DPPH 및 FRAP 등 항산화 시험과 Elastase inhibitiory assay를 수행한 3종의 고체 발효물의 SOD 저해 활성을 확인한 결과, 괄루근을 동충하초와 상황버섯으로 발효한 추출물에서 괄루근 300μg/ml 보다 SOD 저해 활성이 증가된 결과를 확인할 수 있었다(도 2).

2.2.3. Xanthine oxidase assay

3종의 고체 발효물의 xanthine oxidase assay를 실시한 결과, 괄루근 원물 추출물은 xanthine oxidase 활성이 농도에 따라 감소하는 경향을 나타내었다(도 3). 또한, 괄루근 고체 발효물에서도 원물과 유사한 xanthine oxidase 활성이 농도에 따라 감소하는 경향을 확인하였다. 이상의 결과로 미루어 괄루근 고체 발효에 의한 xanthine oxidase 저해 활성은 대체적으로 농도 의존적으로 감소함을 확인하였다.

2.2.4. SIRT1 유전자 발현 확인

SIRT1은 탈아세틸화 작용을 통해 세포사멸 및 증식을 억제시키면서 산화적 공격에 대한 저항성을 갖추고, DNA 손상을 회복시킬 수 있도록 전사활성을 변화시켜 증식상 노화를 늦춤으로써 수명을 증가하는 것으로 알려져 있다. SIRT1 유전자 발현 정도를 확인함으로써 괄루근 고체 발효물이 노화 작용에 효과가 있는지 확인하였다. Positive control은 SIRT1 유전자를 활성화시키는 것으로 알려진 레스베라트롤(Resveratrol)을 사용하였다.

도 4 및 도 5에 나타난 바와 같이, 괄루근 동충하초 고체 발효물의 SIRT1 유전자 발현 정도를 측정하였을 때, 레스베라트롤보다는 낮았지만 무처리군보다는 높게 나타났으며, 특히, 괄루근 원물 자체의 발현보다도 높은 발현 정도를 나타내었다. 이상의 결과에서 괄루근의 고체 발효에 의해 천연물 성분의 변화를 유도시켜 SIRT1 유전자의 발현을 증가시켜 항노화 효과가 있을 것으로 기대된다.

2.2.5. Wound healing assay

Human fibroblast 세포인 BJ cell에서의 wound healing assay를 진행하였다. BJ cell에 괄루근 원물 추출물을 처리한 후 14시간 이후 상처 치유가 완전하지는 않았지만 어느 정도의 치료 효과를 나타내었다. 반면, 괄루근 동충하초 고체 발효물은 괄루근 원물 추출물에 비해 상처 치유 정도가 증가된 모습을 확인할 수 있었다. 이상의 결과는 elastase 저해 활성 측정 결과에서 괄루근 동충하초 고체 발효물이 우수한 elastase 저해 활성 및 STIR1 유전자 발현에서 우수한 효과를 나타낸 것과 비슷한 경향을 보인 것으로 이러한 결과들은 서로 연관성이 있는 것으로 보인다(도 6).

2.3. 향장 소재 자극시험(3T3 NRU phototoxicity test)

NIH/3T3 cell를 이용하여 광독성 물질로 알려진 CPZ(chloropromazine)를 positive control로 괄루근 고체 발효물의 NRU phototoxicity를 측정하였다(도 7 및 도 8). 괄루근 원물 추출물의 MPE 값은 -0.069, PIF 값은 1.000으로 MPE < 0.1, PIF < 2의 범위에 속해 광독성이 없는 것으로 판단되며, 괄루근 발효 동충하초도 MPE 값이 0.059, PIF 값 1.000으로 광독성이 없는 것으로 판정되었다. 그러나, 괄루근 발효 상황버섯은 MPE 값 0.141, PIF 값 1.000로 나타났으며, 괄루근 발효 영지버섯은 MPE 값 0.127, PIF 값 1.000으로 MPE 값이 0.1 < MPE < 0.15의 범위에 속해 광독성 가능성이 있는 것으로 판정되었다. 이상의 결과는 동충하초를 사용한 고체 발효를 수행한 경우에도 동충하초를 사용하는 경우에는 광독성이 나타나지 않음을 확인한 것이다.

2.4. 세포독성시험(MTT assay)

괄루근 동충하초 고체 발효물의 세포 독성을 평가하기 위하여, BJ cell을 이용하여 MTT assay를 측정한 후, cell viability(%)를 측정하고, 그 결과를 도 9에 나타내었다. 괄루근은 농도가 300μg/ml 보다 높을 경우 cell viability가 80% 미만으로 감소하는 모습을 보였다. 고체 발효물의 경우 상황버섯 발효물의 경우 농도 증가에 따라 세포 생존율이 감소하는 경향이 뚜렸하였지만, 동충하초 발효물과 영지버섯 발효물의 경우 300μg/ml의 처리 농도에서도 80% 이상의 세포생존율을 확인할 수 있었다.

Claims

동충하초 균사체를 멸균된 괄루근(括樓根)에 접종 및 배양하여 제조되는 괄루근과 동충하초의 고체 발효물을 포함하는 피부 재생 촉진용 기능성 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 동충하초는 코디셉스 시넨시스(Cordyceps sinensis), 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris), 코디셉스 스카라베콜라(Cordyceps scarabaecola), 코디셉스 누탄스(Cordyceps nutans), 코디셉스 스페코세팔라(Cordyceps sphecocephala), 코디셉스 트리센트리(Cordyceps tricentri), 패실로마이세스 테누이페스(Paecilomyceps tenuipes) 및 패실로마이세스 자포니카(Paecilomyces japonica)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 기능성 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 배양은 온도 20~35℃, 상대습도 70~90% 및 배양 기간 7~45일의 조건인 것을 특징으로 하는 기능성 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 기능성 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 파우더, 팩트, 립글로즈, 립스틱, 섀도우, 샴푸 및 린스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형인 것을 특징으로 하는 기능성 화장료 조성물.
삭제
삭제