KR101899790B1 - 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α 활성 저해용 조성물 - Google Patents
클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α 활성 저해용 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101899790B1 KR101899790B1 KR1020170137107A KR20170137107A KR101899790B1 KR 101899790 B1 KR101899790 B1 KR 101899790B1 KR 1020170137107 A KR1020170137107 A KR 1020170137107A KR 20170137107 A KR20170137107 A KR 20170137107A KR 101899790 B1 KR101899790 B1 KR 101899790B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- malaria
- lys
- activity
- plasmodium
- gly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 title claims abstract description 64
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 title claims abstract description 64
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 title claims abstract description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 31
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 12
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 title abstract description 9
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 title description 13
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 title description 13
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 13
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 claims description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 241000223821 Plasmodium malariae Species 0.000 claims description 3
- 241000223810 Plasmodium vivax Species 0.000 claims description 3
- 229940118768 plasmodium malariae Drugs 0.000 claims description 3
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 claims 1
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 abstract description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- -1 (7-chloroquinolin-4-yl) amino Chemical group 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 102000013446 GTP Phosphohydrolases Human genes 0.000 description 18
- 108091006109 GTPases Proteins 0.000 description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 14
- 101100118093 Drosophila melanogaster eEF1alpha2 gene Proteins 0.000 description 11
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000001563 schizont Anatomy 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- WOGWYSWDBYCVDY-UHFFFAOYSA-N 2-chlorocyclohexa-2,5-diene-1,4-dione Chemical compound ClC1=CC(=O)C=CC1=O WOGWYSWDBYCVDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930101531 artemisinin Natural products 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- MZDYAVCNKNXCIS-UHFFFAOYSA-N pent-2-enamide Chemical compound CCC=CC(N)=O MZDYAVCNKNXCIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006303 immediate early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 2
- 150000005663 7-chloroquinolines Chemical class 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N Glu-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 2
- ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N Lys-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- JACAKCWAOHKQBV-UWVGGRQHSA-N Met-Gly-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JACAKCWAOHKQBV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 241001505293 Plasmodium ovale Species 0.000 description 2
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 2
- NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N Val-Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229940033495 antimalarials Drugs 0.000 description 2
- 229960004191 artemisinin Drugs 0.000 description 2
- BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N artemisinin Chemical compound C([C@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2OC(=O)[C@@H]4C BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 2
- 229930013356 epothilone Natural products 0.000 description 2
- 150000003883 epothilone derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000011537 solubilization buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000539 two dimensional gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- JNTMAZFVYNDPLB-PEDHHIEDSA-N (2S,3S)-2-[[[(2S)-1-[(2S,3S)-2-amino-3-methyl-1-oxopentyl]-2-pyrrolidinyl]-oxomethyl]amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JNTMAZFVYNDPLB-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LUBUTTBEBGYNJN-UHFFFAOYSA-N 4-amino-n-(5,6-dimethoxypyrimidin-4-yl)benzenesulfonamide;5-(4-chlorophenyl)-6-ethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCC1=NC(N)=NC(N)=C1C1=CC=C(Cl)C=C1.COC1=NC=NC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1OC LUBUTTBEBGYNJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004860 4-ethylphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N Ala-Asp-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- IKKVASZHTMKJIR-ZKWXMUAHSA-N Ala-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IKKVASZHTMKJIR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- NWVVKQZOVSTDBQ-CIUDSAMLSA-N Ala-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NWVVKQZOVSTDBQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OMMDTNGURYRDAC-NRPADANISA-N Ala-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OMMDTNGURYRDAC-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- CWEAKSWWKHGTRJ-BQBZGAKWSA-N Ala-Gly-Met Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O CWEAKSWWKHGTRJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Lys Natural products NCCCCC(NC(=O)C(N)C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYBJZLQSUJEMAS-LFSVMHDDSA-N Ala-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](C)N)O CYBJZLQSUJEMAS-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N Ala-Val-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N Arg-Arg-Thr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- RRGPUNYIPJXJBU-GUBZILKMSA-N Arg-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O RRGPUNYIPJXJBU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZZZWQALDSQQBEW-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZZZWQALDSQQBEW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N Arg-Pro-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- RYQSYXFGFOTJDJ-RHYQMDGZSA-N Arg-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RYQSYXFGFOTJDJ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- PJOPLXOCKACMLK-KKUMJFAQSA-N Arg-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PJOPLXOCKACMLK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LFWOQHSQNCKXRU-UFYCRDLUSA-N Arg-Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LFWOQHSQNCKXRU-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- BKDDABUWNKGZCK-XHNCKOQMSA-N Asn-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O BKDDABUWNKGZCK-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- BUVNWKQBMZLCDW-UGYAYLCHSA-N Asp-Asn-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BUVNWKQBMZLCDW-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 1
- KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N Asp-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- GKWFMNNNYZHJHV-SRVKXCTJSA-N Asp-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GKWFMNNNYZHJHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PCJOFZYFFMBZKC-PCBIJLKTSA-N Asp-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PCJOFZYFFMBZKC-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 1
- KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N Asp-Ser-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- VNXQRBXEQXLERQ-CIUDSAMLSA-N Asp-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VNXQRBXEQXLERQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NAAAPCLFJPURAM-HJGDQZAQSA-N Asp-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O NAAAPCLFJPURAM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- ZVRJBBFYAGQQPF-PPYMECGQSA-N ClC1=CC=C2C(=CC=NC2=C1)N[C@H](/C=C/C(=O)N(C(C)C)C(C)C)C Chemical compound ClC1=CC=C2C(=CC=NC2=C1)N[C@H](/C=C/C(=O)N(C(C)C)C(C)C)C ZVRJBBFYAGQQPF-PPYMECGQSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- NLDWTJBJFVWBDQ-KKUMJFAQSA-N Cys-Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 NLDWTJBJFVWBDQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 1
- ORYMMTRPKVTGSJ-XVKPBYJWSA-N Gln-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ORYMMTRPKVTGSJ-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- UEILCTONAMOGBR-RWRJDSDZSA-N Gln-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O UEILCTONAMOGBR-RWRJDSDZSA-N 0.000 description 1
- OUBUHIODTNUUTC-WDCWCFNPSA-N Gln-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O OUBUHIODTNUUTC-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- NLKVNZUFDPWPNL-YUMQZZPRSA-N Glu-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O NLKVNZUFDPWPNL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N Glu-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- VXQOONWNIWFOCS-HGNGGELXSA-N Glu-His-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VXQOONWNIWFOCS-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N Glu-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- BHXSLRDWXIFKTP-SRVKXCTJSA-N Glu-Met-His Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N BHXSLRDWXIFKTP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BFEZQZKEPRKKHV-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O BFEZQZKEPRKKHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BPLNJYHNAJVLRT-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BPLNJYHNAJVLRT-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- GPSHCSTUYOQPAI-JHEQGTHGSA-N Glu-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O GPSHCSTUYOQPAI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- UMZHHILWZBFPGL-LOKLDPHHSA-N Glu-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O UMZHHILWZBFPGL-LOKLDPHHSA-N 0.000 description 1
- JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N Gly-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- WKJKBELXHCTHIJ-WPRPVWTQSA-N Gly-Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N WKJKBELXHCTHIJ-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XQHSBNVACKQWAV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- STVHDEHTKFXBJQ-LAEOZQHASA-N Gly-Glu-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O STVHDEHTKFXBJQ-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- KAJAOGBVWCYGHZ-JTQLQIEISA-N Gly-Gly-Phe Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 KAJAOGBVWCYGHZ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N Gly-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- HMHRTKOWRUPPNU-RCOVLWMOSA-N Gly-Ile-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O HMHRTKOWRUPPNU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- MTBIKIMYHUWBRX-QWRGUYRKSA-N Gly-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN MTBIKIMYHUWBRX-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- WZSHYFGOLPXPLL-RYUDHWBXSA-N Gly-Phe-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WZSHYFGOLPXPLL-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- JSLVAHYTAJJEQH-QWRGUYRKSA-N Gly-Ser-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JSLVAHYTAJJEQH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NWOSHVVPKDQKKT-RYUDHWBXSA-N Gly-Tyr-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O NWOSHVVPKDQKKT-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- YDIDLLVFCYSXNY-RCOVLWMOSA-N Gly-Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN YDIDLLVFCYSXNY-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- VJJSDSNFXCWCEJ-DJFWLOJKSA-N His-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VJJSDSNFXCWCEJ-DJFWLOJKSA-N 0.000 description 1
- MLZVJIREOKTDAR-SIGLWIIPSA-N His-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MLZVJIREOKTDAR-SIGLWIIPSA-N 0.000 description 1
- ORERHHPZDDEMSC-VGDYDELISA-N His-Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N ORERHHPZDDEMSC-VGDYDELISA-N 0.000 description 1
- UWSMZKRTOZEGDD-CUJWVEQBSA-N His-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UWSMZKRTOZEGDD-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RPZFUIQVAPZLRH-GHCJXIJMSA-N Ile-Asp-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N RPZFUIQVAPZLRH-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- QSPLUJGYOPZINY-ZPFDUUQYSA-N Ile-Asp-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N QSPLUJGYOPZINY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- WZDCVAWMBUNDDY-KBIXCLLPSA-N Ile-Glu-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N WZDCVAWMBUNDDY-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- DFJJAVZIHDFOGQ-MNXVOIDGSA-N Ile-Glu-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N DFJJAVZIHDFOGQ-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- CSQNHSGHAPRGPQ-YTFOTSKYSA-N Ile-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N CSQNHSGHAPRGPQ-YTFOTSKYSA-N 0.000 description 1
- TVYWVSJGSHQWMT-AJNGGQMLSA-N Ile-Leu-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N TVYWVSJGSHQWMT-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- IVXJIMGDOYRLQU-XUXIUFHCSA-N Ile-Pro-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IVXJIMGDOYRLQU-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- HJDZMPFEXINXLO-QPHKQPEJSA-N Ile-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N HJDZMPFEXINXLO-QPHKQPEJSA-N 0.000 description 1
- YHFPHRUWZMEOIX-CYDGBPFRSA-N Ile-Val-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N YHFPHRUWZMEOIX-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N L-isoleucyl-L-alanine Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VIWUBXKCYJGNCL-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 VIWUBXKCYJGNCL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- OXKYZSRZKBTVEY-ZPFDUUQYSA-N Leu-Asn-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O OXKYZSRZKBTVEY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- FGNQZXKVAZIMCI-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N FGNQZXKVAZIMCI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CLVUXCBGKUECIT-HJGDQZAQSA-N Leu-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CLVUXCBGKUECIT-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N Leu-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- HGFGEMSVBMCFKK-MNXVOIDGSA-N Leu-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HGFGEMSVBMCFKK-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- ZGGVHTQAPHVMKM-IHPCNDPISA-N Leu-Trp-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZGGVHTQAPHVMKM-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- NFLFJGGKOHYZJF-BJDJZHNGSA-N Lys-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN NFLFJGGKOHYZJF-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- FUKDBQGFSJUXGX-RWMBFGLXSA-N Lys-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O FUKDBQGFSJUXGX-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N Lys-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HGZHSNBZDOLMLH-DCAQKATOSA-N Lys-Asn-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N HGZHSNBZDOLMLH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N Lys-Glu-Gly Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)NCC([O-])=O GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IVFUVMSKSFSFBT-NHCYSSNCSA-N Lys-Ile-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN IVFUVMSKSFSFBT-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- UQRZFMQQXXJTTF-AVGNSLFASA-N Lys-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UQRZFMQQXXJTTF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- QQPSCXKFDSORFT-IHRRRGAJSA-N Lys-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QQPSCXKFDSORFT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- GZGWILAQHOVXTD-DCAQKATOSA-N Lys-Met-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GZGWILAQHOVXTD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CRIODIGWCUPXKU-AVGNSLFASA-N Lys-Pro-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O CRIODIGWCUPXKU-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- MGKFCQFVPKOWOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N MGKFCQFVPKOWOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SBQDRNOLGSYHQA-YUMQZZPRSA-N Lys-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SBQDRNOLGSYHQA-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MIFFFXHMAHFACR-KATARQTJSA-N Lys-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN MIFFFXHMAHFACR-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- MEQLGHAMAUPOSJ-DCAQKATOSA-N Lys-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MEQLGHAMAUPOSJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BDFHWFUAQLIMJO-KXNHARMFSA-N Lys-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O BDFHWFUAQLIMJO-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- SUZVLFWOCKHWET-CQDKDKBSSA-N Lys-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SUZVLFWOCKHWET-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- OGAZPKJHHZPYFK-GARJFASQSA-N Met-Glu-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OGAZPKJHHZPYFK-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- DFEVBOYEUQJGER-JURCDPSOSA-N Phe-Ala-Ile Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O DFEVBOYEUQJGER-JURCDPSOSA-N 0.000 description 1
- QMMRHASQEVCJGR-UBHSHLNASA-N Phe-Ala-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 QMMRHASQEVCJGR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N Phe-Glu-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PSKRILMFHNIUAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XNQMZHLAYFWSGJ-HTUGSXCWSA-N Phe-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XNQMZHLAYFWSGJ-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N Phe-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- WSRWHZRUOCACLJ-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-His Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CN=CN1 WSRWHZRUOCACLJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- YXHYJEPDKSYPSQ-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 YXHYJEPDKSYPSQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HBZBPFLJNDXRAY-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HBZBPFLJNDXRAY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HJEBZBMOTCQYDN-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HJEBZBMOTCQYDN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- GYXVUTAOICLGKJ-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GYXVUTAOICLGKJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)N WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N Ser-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- DDPVJPIGACCMEH-XQXXSGGOSA-N Thr-Ala-Gln Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O DDPVJPIGACCMEH-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- ZUXQFMVPAYGPFJ-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN ZUXQFMVPAYGPFJ-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- DOBIBIXIHJKVJF-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Gln Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O DOBIBIXIHJKVJF-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N Thr-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- PWONLXBUSVIZPH-RHYQMDGZSA-N Thr-Val-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O PWONLXBUSVIZPH-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- NMOIRIIIUVELLY-WDSOQIARSA-N Trp-Val-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C(C)C)=CNC2=C1 NMOIRIIIUVELLY-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- VTCKHZJKWQENKX-KBPBESRZSA-N Tyr-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O VTCKHZJKWQENKX-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- VXFXIBCCVLJCJT-JYJNAYRXSA-N Tyr-Pro-Pro Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VXFXIBCCVLJCJT-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N Tyr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N 0.000 description 1
- AZSHAZJLOZQYAY-FXQIFTODSA-N Val-Ala-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZSHAZJLOZQYAY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HHSILIQTHXABKM-YDHLFZDLSA-N Val-Asp-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O HHSILIQTHXABKM-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- UKEVLVBHRKWECS-LSJOCFKGSA-N Val-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N UKEVLVBHRKWECS-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- VHRLUTIMTDOVCG-PEDHHIEDSA-N Val-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VHRLUTIMTDOVCG-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- FEXILLGKGGTLRI-NHCYSSNCSA-N Val-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N FEXILLGKGGTLRI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- XXWBHOWRARMUOC-NHCYSSNCSA-N Val-Lys-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N XXWBHOWRARMUOC-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- WBAJDGWKRIHOAC-GVXVVHGQSA-N Val-Lys-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O WBAJDGWKRIHOAC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N Val-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JSOXWWFKRJKTMT-WOPDTQHZSA-N Val-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N JSOXWWFKRJKTMT-WOPDTQHZSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 108010054812 diprotin A Proteins 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 108010037389 glutamyl-cysteinyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010075431 glycyl-alanyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010027668 glycyl-alanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 210000003677 hemocyte Anatomy 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229940124735 malaria vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 108010025488 pinealon Proteins 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108010025826 prolyl-leucyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y10S514/895—
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
본 발명은 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α(Elongation Factor-1α) 활성 저해용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에서는 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물이 말라리아 플라즈모디움 팔시파룸의 EF-1α의 발현 및 활성을 억제하여 항말라리아 효과를 보이는 점을 확인하였다. 이러한 사실을 토대로 페닐알라닌-클로로퀸 유도체 화합물의 항말라리아 작용기작에 대한 중요한 정보를 제공할 수 있어 관련 산업에 매우 유용하다.
Description
본 발명은 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α(Elongation Factor-1α) 활성 저해용 조성물에 관한 것이다.
말라리아는 실질적으로 공적 보건 및 재정적 부담을 야기한다. 2011년 한해에 약 20억불이 말라리아 방제에 사용되었다. 전세계적인 말라리아 조절 부담에도 불구하고, 수세기간의 연구 후에, 많은 연구자들은 온도 및 말리리아 발병율간의 환경적 변수사이의 기전적인 연계성을 충분히 밝히지 못한 실정이다. 말라리아는 한해에 백만명 이상의 사상자를 발생시키는 전계계적으로 심각한 건강 문제를 야기한다. 말라리아 환자수는 지난 세기에 43개국에서 50% 이상 감소하였다. 약 300-500 백만 환자 발생 및 2-3 백만 환자사망이 해마다 발생되었다. 말라리아 퇴치를 위한 기금이 2003년 약 US$100 백만불에서 2010년 US$1.6 십억불로 15배 정도 증가하였다. 말라리아는 플라즈모디움 속 (genus Plasmodium) 유래 유기체 및 플라즈모디움 팔시파룸 (Plasmodium falciparum)에 의한 것이고 이는 인체에 말라리아 주요 원인 기생충이며, 해마다 약 200만명을 감염시키고 600,000명의 사상자를 발생케 한다.
말라리아 백신이 유효하지 않아 화학요법제(Chemotherapy)가 주치료법이다. 수세기 동안 말라리아 치료법의 주요 약물로서 클로로퀸(Chloroquine; CQ)을 사용하여 왔다. 그러나, 클로로퀸 약물의 급속한 약물 내성 균주의 발생으로 그 효력을 상실하여 온 바, 아테미시닌(artemisinin) 기반 조합 치료법이 현재 전세계적 표준 치료법으로 제공되고 있다. 최근 들어, 아테미시닌(artemisinins)에 대한 내성 출현으로 새로운 항-말리리아제 개발에 대한 연구가 진행되어 왔다. 아테미시닌(artemisinin) 기반 조합 치료법은 일선의 치료제로서 사용되어 온 클로로퀸 및 설파독신(sulfadoxine)/피리메타민 (pyrimethamine)에 내성을 나타내는 플라즈모디움 속 기생충(genus Plasmodium)이 전세계적으로 급증하고 있다. 그러나, 아르테미신(artemisinins)에 대한 내성 문제가 증가하고 있으며 상이한 작용기전을 갖는 새로운 항-말라이아제 개발이 요구되고 있다.
한편, 한국등록특허 제1653677호에는 '클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아 감염 질환의 예방 또는 치료용 조성물'이 개시되어 있으나, 본 발명에서와 같이 '클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α 활성 저해용 조성물'에 대해서는 밝혀진 바가 전혀 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물(본 발명에서 SKM13로 기재된 (S,E)-4-((7-클로로퀸 유도체놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide))을 말라리아 플라즈모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum)에 처리하고, 비처리 대조구 말라리아와 비교하여 분비량이 줄어든 특정 단백질을 분석한 결과, EF-1α(Elongation Factor-1α)임을 확인하였다.
이를 토대로 말라리아 플라즈모디움 팔시파룸으로부터 EF-1α 코딩 유전자를 분리하고, 이를 이용하여 재조합 EF-1α를 제조하여 정제된 EF-1α의 농도에 따른 GTPase 활성 분석 및 GTPase 활성에 대한 SKM13의 유효성을 평가한 결과, GTPase 활성을 가지는 EF-1α는 SKM13에 의해 발현이 억제되어 결국 항말라리아 효과를 가지는 점을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide) 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 말라리아에 처리하는 단계를 포함하는 EF-1α(Elongation Factor-1α)의 활성을 저해하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide) 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α(Elongation Factor-1α) 활성 저해용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 EF-1α(Elongation Factor-1α)의 활성 저해용 물질을 유효성분으로 함유하는 항말라리아용 조성물을 제공한다.
본 발명에서는 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물이 말라리아 플라즈모디움 팔시파룸 (Plasmodium falciparum)의 EF-1α(Elongation Factor-1α)의 발현 및 활성을 억제하여 항말라리아 효과를 보이는 점을 확인하였다. 이러한 사실을 토대로 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물의 항말라리아 작용기작에 대한 중요한 정보를 제공할 수 있어 관련 산업에 매우 유용하다.
도 1은 클로로퀴논-내성의 말라리아 균주인 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum) FCR-3에 SKM13을 IC50 농도 370nM을 6시간 처리한 뒤 2D를 수행한 후 분석 결과(A), 감소된 단백질 스팟(spot)을 잘라서 in-gel 상태에서 LC-MS를 통해 분석(B)한 후 protein ID 분석 결과 EF-1a(Elongation factor 1-alpha)와 같은 서열로 확인되었다(C).
도 2는 본 발명에서 얻은 FCR-3 EF-1a 염기서열(비공개 서열, (3D7 EF-1a와 두 개의 염기서열 (노란색 highlight) 다름))(A). 클로닝을 위해 사용한 프라이머(B), FCR-3 EF-1a 아미노산 서열(3D7 EF-1a와 아미노산 서열 동일)(C), pET21b에 EF-a를 클로닝한 뒤, 대장균에서 발현하여 52kDa 단백질을 정제한 결과(D)이다.
도 3은 본 발명의 정제된 EF-1α(신장 인자 1-알파)의 상이한 농도에서의 GTP 잔존량을 분석한 결과(A) 및 EF-1α의 GTPase 활성에 대한 SKM13의 유효성(B)을 나타낸다.
도 4a는 SKM13 처리가 Schizont 단계가 아닌 Ring 단계에서 5시간 동안 EF-1a의 발현을 억제하는 것을 나타낸다. (상) 비처리 5시간, FCR-3의 Ring 단계, (하) SKM13 처리 5시간, FCR-3의 Ring 단계.
도 4b는 SKM13 처리가 Schizont 단계가 아닌 Ring 단계에서 5시간 동안 EF-1a의 발현을 억제하는 것을 나타낸다. (상) 비처리 5시간, FCR-3의 Schizont 단계, (하) SKM13 처리 5시간, FCR-3의 Schizont 단계.
도 5는 SKM13 처리가 Schizont 단계가 아닌 Ring 단계에서 5시간 동안 플라스모디움 팔시파룸 EF-1a가 감소하는 것을 나타내며(A), 대조구로 플라스모디움 팔시파룸 GAPDH는 Ring 단계 또는 Schizont 단계에서 감소하지 않았다. *는 A에서 플라스모디움 팔시파룸 EF-1a, B에서 플라스모디움 팔시파룸 GAPDH.
도 2는 본 발명에서 얻은 FCR-3 EF-1a 염기서열(비공개 서열, (3D7 EF-1a와 두 개의 염기서열 (노란색 highlight) 다름))(A). 클로닝을 위해 사용한 프라이머(B), FCR-3 EF-1a 아미노산 서열(3D7 EF-1a와 아미노산 서열 동일)(C), pET21b에 EF-a를 클로닝한 뒤, 대장균에서 발현하여 52kDa 단백질을 정제한 결과(D)이다.
도 3은 본 발명의 정제된 EF-1α(신장 인자 1-알파)의 상이한 농도에서의 GTP 잔존량을 분석한 결과(A) 및 EF-1α의 GTPase 활성에 대한 SKM13의 유효성(B)을 나타낸다.
도 4a는 SKM13 처리가 Schizont 단계가 아닌 Ring 단계에서 5시간 동안 EF-1a의 발현을 억제하는 것을 나타낸다. (상) 비처리 5시간, FCR-3의 Ring 단계, (하) SKM13 처리 5시간, FCR-3의 Ring 단계.
도 4b는 SKM13 처리가 Schizont 단계가 아닌 Ring 단계에서 5시간 동안 EF-1a의 발현을 억제하는 것을 나타낸다. (상) 비처리 5시간, FCR-3의 Schizont 단계, (하) SKM13 처리 5시간, FCR-3의 Schizont 단계.
도 5는 SKM13 처리가 Schizont 단계가 아닌 Ring 단계에서 5시간 동안 플라스모디움 팔시파룸 EF-1a가 감소하는 것을 나타내며(A), 대조구로 플라스모디움 팔시파룸 GAPDH는 Ring 단계 또는 Schizont 단계에서 감소하지 않았다. *는 A에서 플라스모디움 팔시파룸 EF-1a, B에서 플라스모디움 팔시파룸 GAPDH.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide) 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 말라리아에 처리하는 단계를 포함하는 EF-1α(Elongation Factor-1α)의 활성을 저해하는 방법을 제공한다.
본 발명에서, 상기 (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드는 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물로, 이 외에도 (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N,N-디이소프로필펜트-2-에나미드{(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N,N-diisopropylpent-2-enamide}, (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-이소프로필펜트-2-에나미드{(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-isopropylpent-2-enamide}, (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-에틸펜트-2-에나미드{(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-ethylpent-2-enamide}, (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-1-(피페리딘-1-일)펜트-2-엔-1-온{(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-1-(piperidin-1-yl)pent-2-en-1-one}, (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-1-모르폴리노펜트-2-엔-1-온 {(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-1-morpholinopent-2-en-1-one), (S,E)-N-벤질-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)펜트-2-에나미드((S,E)-N-benzyl-4-{(7-chloroquinolin-4-yl)amino)pent-2-enamide}, (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide), (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-페닐펜트-2-에나미드{(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-phenylpent-2-enamide}, (S,E)-N-(4-부톡시페닐)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)펜트-2-에나미드{(S,E)-N-(4-butoxyphenyl)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)pent-2-enamide}, (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(4-에틸페닐)펜트-2-에나미드 {(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(4-ethylphenyl)pent-2-enamide}, (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(4-(헥실옥시)페닐)펜트-2-에나미드 {(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(4-(hexyloxy)phenyl)pent-2-enamide}, (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(4-이소프로필페닐)펜트-2-에나미드 {(S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(4-isopropylphenyl)pent-2-enamide}이 가능할 수 있다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 EF-1α은 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 EF-1α 단백질의 범위는 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 단백질 및 상기 단백질의 기능적 동등물을 포함한다. "기능적 동등물"이란 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 서열번호 2의 아미노산 서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 단백질과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 단백질을 말한다. "실질적으로 동질의 생리활성"이란 GTPase 활성을 의미한다.
또한, 본 발명은 상기 EF-1α 단백질을 코딩하는 유전자를 제공한다. 본 발명의 상기 EF-1α 단백질을 코딩하는 유전자는 서열번호 1의 염기서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 염기서열의 상동체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 구체적으로, 상기 유전자는 서열번호 1의 염기 서열과 각각 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 "서열 상동성의 %"는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 말라리아는 열대열 말라리아(Plasmodium falciparum), 삼일열 말라리아(Plasmodium vivax), 난원형 말라리아(Plasmodium ovale) 또는 사일열 말라리아(Plasmodium malariae)일 수 있고, 바람직하게는 열대열 말라리아(Plasmodium falciparum)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide)를 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α(Elongation Factor-1α) 활성 저해용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 EF-1α은 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 말라리아는 열대열 말라리아(Plasmodium falciparum), 삼일열 말라리아(Plasmodium vivax), 난원형 말라리아(Plasmodium ovale) 또는 사일열 말라리아(Plasmodium malariae)일 수 있고, 바람직하게는 열대열 말라리아(Plasmodium falciparum)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 EF-1α(Elongation Factor-1α)의 활성 저해용 물질을 유효성분으로 함유하는 항말라리아용 조성물을 제공한다. 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물이 EF-1α의 발현 또는 활성을 저해함으로써 항말라리아 효과를 가지므로, EF-1α의 발현 또는 활성 저해용 물질은 항말라리아 효과를 가질 수 있는 것이다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 물질은 (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
재료 및 방법
1.
SKM13
(
IC
50
) 처리 후 2D 전기영동
말라리아의 배양
혈액 단계의 실험실 클론 클로로퀴논-내성의 말라리아 균주인 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum) FCR-3를 24mM 중탄산나트륨, 25mM HEPES, 0.8% 하이포크산틴, 0.9% Albumax, 25㎍/mL 젠타마이신을 보충한 RPMI 1640 배지에 현탁시킨 O형 인간 적혈구 세포의 5% 헤마토크릿을 이용한 연속 배양에서 유지하며 시험관내 배양했다. 배양물을 37℃ CO2-O2-N2 인큐베이터(5% CO2, 5% O2 및 90% N2로 이루어진 대기)에서 배양하고, 배지는 매일 교환했다. 배양을 상기 얇은 얼룩의 Giemsa 염색을 통해 일과로 모니터링했다. 기생체 배양은 5%(w/v) D-소르비톨을 이용한 처리에 의해 링 스테이지(ring stage)와 동시에 발생하도록 했다.
약물의 처리
SKM13((S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide))를 디메틸술폭시드(DMSO)에 용해시키고, 추가로 배양 배지를 이용해 희석해 원하는 농도를 수득했다. FCR-3을 수집하고, RPM 1500/5분으로 원심분리해 가라앉혔으며, 상층 신규 배지를 따라 내어 제거하고, SKM13를 플레이트에 첨가하고, CO2-O2-N2 다중-기체 인큐베이터에서 6h 동안 37℃에서 배양했다.
단백질 추출
6시간 후, 기생체를 수집하고, 800g/5분으로 원심분리해 가라앉혔으며, 상층액을 따라 내어 제거했다. 냉온 PBS 800g/5분 4℃로 3회 세척했다. 0.05% 사포닌 용액(펠렛:사포닌=1:4)을 첨가하고, 10분 동안 얼음 위에서 배양했다. 용액을 17000rpm/10분으로 원심분리해 가라앉히고, 무색이 될 때까지 10mM Tris-완충액(pH7.4)으로 여러번 세척했다(-80℃에서 원액저장). 펠렛을 가용화 완충액[9.8M 우레아, 2M 티오우레아, 4% CHAPS, 100mM DTT, 2% IPG 완충액(pH3-10)] 및 프로테아제 저해제로 현탁시켰다. 가용화 용액을 40% Amp, 8s/20s, 20회 초음파처리하고, 17000rpm/1h로 20℃에서 원심분리해 가라앉혔다. 2D quant Kit로 단백질의 농도를 측정하고, 단백질을 -20℃에서 저장했다. 시험관마다 500㎍를 2D clear up Kit로 정제하고, 단백질의 펠렛은 가용화 완충액으로 현탁시키고, 17000rpm/20분 및 20℃로 원심분리해 가라앉혔다. 농도를 다시 측정하고, 2D에 이용했다.
단백질의 2D 겔 분리
IPG 스트립(PH3-10, 17cm)을 총 단백질을 1000㎍로 포함하는 재수화 완충액[9M 우레아, 0.5% CHAPS, 2% IPG 완충액(PH3-10), 60mM DTT, 및 0.003% 브로모페놀 블루]에 재수화시켰다. IPG 스트립을 50V, 9h, 20C에서 재수화시켰다. 제1차원 분리를 위해서는, IEF에 대한 전압 설정이 30분 동안 200V, 1분 동안 500V, 및 45분 동안 8,000V, 이어서 최종 9시간 동안 8,000V였다. 이어서, 스트립을 평형화 용액[6M 우레아, 50mM Tris-HCl, pH 6.8, 30% 글리세롤, 2% 소듐 도데실 설페이트(SDS), 및 0.001% 브로모페놀 블루]에서 2회 연속하여 평형화시켰는데, 여기서 최초 평형화는 1% DTT를 포함했고, 두번째는 2.5% 요오도아세트아미드를 포함했다. 제2차원 전개를 위해, 2-DE를 10% SDS-폴리아크릴아미드 겔 상에서 전개시켰다. 전개 조건은 15W/겔로 30분 수행하였으며, 35W/겔로 6시간 수행하였다. 젤은 CBB(Coomassie brilliant blue) 방법으로 염색하였다. 이후 eMass 센터에 분석을 의뢰하여 단백질을 동정하였다.
2.
rEF
-
1α
: 재조합 항원 발현
클로로퀸-내성 균주 P.f FCR - 3를 Mini Kit를 mRNA 추출에 이용했다. PCR은 프라이머 5'-GGA TCC AAT GGG TAA GGA AAA AAC AC-3'(정방향, 서열번호 3) 및 5'-CTC GAG TTT TTT GGC TGG TGC T-3'(역방향, 서열번호 4)를 이용해 실행했다. PCR 조건은 하기와 같았다: 95℃에서 5분; 이어서, 95℃에서 30초, 56℃에서 45초 및 72℃에서 1분을 30회 순환; 최종 단계로는 72℃에서 5분. PCR은 CFX96 Touch™Real-Time PCR Detection System(Bio-RAD #1845096)을 이용해 실시했다. PCR 산물을 pGEM-T 벡터에 라이게이션하고, DH5a 컴피턴트 세포에 형질전환했으며, EF1a의 클로닝 플라스미드는 DH5a로부터 추출했고, pET21b 벡터와의 라이게이션을 위해 효소 BamHI/XhoI로 절단한 후, PET21b-EF1a 전장 플라스미드를 BL21DE3 컴피턴트 세포에 추가로 형질전환했다.
재조합체 BL21-pET21b-EF1a를 앰피실린(100㎍/ml)을 함유하는 LB 아가 플레이트 상에서 37℃에서 밤새 배양했다. 선별 콜로니를 접종하고, 앰피실린(100㎍/ml) 및 3% 에탄올을 함유하는 250ml LB 배지 중에 37℃에서 OD 값이 0.5 내지 0.6에 도달할 때까지 진탕하며 희석(1:100)했고, 이어서 0.5mM 이소프로필 β-d-1-티오갈락토피라노시드(IPTG)와 함께 22℃에서 18시간 동안 진탕하면서 유도했다. 세포를 8000rpm로 4℃에서 10분 동안 원심분리하고, 결합 완충액(20mM Tris PH7.5, 300mM NaCl 25mM 이미다졸)으로 세척하고, 프로테아제 저해제 칵테일(complete™ULTRA Tablets, Roche사, 독일)을 함유하는 결합 완충액에 재현탁시켜 40% AMP(15초 펄스, 15초 휴지)로 15분 동안 얼음 위에서 초음파처리했다. 원심분리는 17000rpm로 4℃에서 15분 동안 실시하고, 상층액을 NI-NTA 친화성 컬럼에 이용하고, 세척용 완충액(20mM 이미다졸, 300mM NaCl, 20mM Tris-HCl pH7.5)으로 세척했다. 재조합체 EF1a 단백질을 용리 완충액(250mM의 이미다졸, 300mM NaCl, 20mM Tris-Cl pH 7.5)으로 용리하고, 단백질 순도를 SDS-PAGE로 체크했다.
3.
rEF
-
1α의
GTPase
효소 검정
재조합체 EF1a 단백질을 GTPase-Glo™Assay Kit을 이용한 GTPase 효소 검정에 이용했다. EF1a 단백질을 각 웰에 GTPase 완충액을 이용해 1, 4, 7, 10, 24㎍로 희석하고, 30분 동안 37℃에서 배양했다. GTPase 완충액 및 GAPDH은 양성 대조군이었다. 2X GTP 용액을 각 웰에 첨가함으로써 60분 동안의 실온에서의 GTPase 반응을 개시했다. 재건된 GTPase-Glo™ Reagent(ADP 10mM, GTPase-Glo™ 완충액 및 GTPase-Glo™ Reagent, 500X)를 완료된 GTPase 반응에 첨가하고, 간단히 혼합하고 30분 동안 실온에서 진탕하면서 배양했다. 검출 시약을 첨가하고, 플레이트를 5 내지 10분 동안 실온에 배양한 후, 발광을 측정했다. GraphPad Prism 소프트웨어로 결과를 산출했으며, 6㎍이 재조합체 EF1a 단백질의 50% 효소 활성 값이라는 점을 알았다. 후속 단계로, 항-말라리아 약물 SKM13를 최적 농도로 희석하여, EF1a 단백질을 30분 동안 37℃에서 처리했다. 상기 방법에 따라 GTPase reaction:GTPase-Glo™ Reagent:Detection Reagent에 대해 1:1:2 부피 비율을 유지했으며, 발광을 측정했다.
4.
SKM13
존재 하의
말라리아 균주인
플라스모디움
팔시파룸
(
Plasmodium falciparum
) EF-1α의 IFA 검정
클로로퀴논-내성 균주 P.f FCR-3을 항-말라리아 약물 SKM13로 5시간 동안 처리했다. 감염된 RBC를 커버슬립에 스미도록 하고, 밤새 건조시켰다. 감염된 RBC를 4% 파라포름알데히드로 1시간 동안 고정시킨 후, 0.1% Triton 완충액에서 40분 동안 배양하고, 2% BSA로 2시간 동안 블로킹했다. 플라스모디움 EF1a 폴리클로날 항체(1:1000 희석)를 사용해 EF1a 단백질을 4℃에서 밤새 시험했다. 이어서, 혈구들을 AF488 컨쥬게이션된 항 마우스 HRP 2차 항체(1:10000 희석)와 함께 1시간 동안 배양했다. 단계 사이사이에서 PBS로 3회 세척했다. 커버슬립을 DAPI을 포함하는 마운팅 매질로 마운팅했다. 형광 영상은 레이저 스캐닝 공초점 현미경(LSCM) USING A 1000X 유침 대물렌즈로 가시화했다.
5.
SKM13
존재 하의
말라리아 균주인
플라스모디움
팔시파룸
(
Plasmodium falciparum
) EF-1α의 웨스턴 블랏 검정
EF1a 단백질을 웨스턴 블랏 분석으로 확인했다. 클로로퀴논-내성 균주 P.fFCR-3를 항-말라리아 약물 SKM13로 3 및 5시간 동안 처리했다. 전체 단백질을 RIPA 용해 완충액(50mM Tris PH7.5, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1% NP-40, 0.1% SDS, 1% 소듐 데옥시콜레이트) 및 프로테아제 저해제 칵테일을 이용해 1시간 동안 얼음 위에서 수집한 후, 17000rpm로 30분 동안 4℃에서 원심분리했다. 전체 단백질의 농도를 측정하고, 각 레인에서 SDS-PAGE 겔 상에 10㎍로 로딩해 60V로 전개시켰다. 이어서, 단백질을 PVDF 멤브레인으로 옮겼다. 멤브레인을 5% 탈지유로 2시간 동안 블로킹하고, 플라스모디움 EF1a 폴리클로날 항체(1:5000 희석) 또는 플라스모디움 GAPDH와 함께 밤새 4℃에서 배양했다. 이후, 토끼 항-마우스 IgG H&L(HRP) 2차 항체(1:200000)를 이용해, 1시간 동안 실온에서 검사했다. 멤브레인을 PBS로 세척한 후, 기판에서 배양하고, Bio-Rad ChemiDoc XRS+를 이용해 결과를 체크했다.
실시예
1.
SKM13
처리에 따른 말라리아 균주인
플라스모디움
팔시파
룸(
Plasmodium
falciparum
)
FCR
-3에서의 특이적으로 발현이 변화된 단백질의 분리 동정
클로로퀴논-내성의 말라리아 균주인 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum) FCR-3에 SKM13((S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide))을 IC50 농도 370nM을 6시간 처리한 뒤 2D를 수행한 결과(도 1A), 50kDa 크기의 감소된 spot이 발견되었고, 감소된 단백질 스팟(spot)을 잘라서 in-gel 상태에서 LC-MS를 통해 분석한 후(도 1B) protein ID 분석 결과 EF-1a(Elongation factor 1-alpha)와 같은 서열로 확인되었다(도 1C). 도 2에 기재한 바와 같이, FCR-3 EF-1a 염기서열(비공개 서열, (3D7 EF-1a와 두 개의 염기서열 (노란색 highlight) 다름))(도 2A)은 서열번호 1로 기재하였으며, FCR-3 EF-1a 아미노산 서열(3D7 EF-1a와 아미노산 서열 동일)(도 2C)은 서열번호 2로 기재하였다. 또한 pET21b에 FCR-3 EF-1a를 클로닝한 뒤, 대장균에서 발현하여 52kDa 단백질을 정제하였다(도 2D).
실시예
2. 본 발명의 정제된 EF-1α
의
농도에 따른
GTPase
활성 분석 및 GTPase 활성에 대한
SKM13의
유효성 평가
본 발명에서 정제된 EF-1α는 내생 GTPase 활성을 보유하는지 조사하였다. EF-1α의 상이한 농도에서의 GTPase 활성을 분석한 결과, 증가된 농도의 EF-1α는 농도 의존적으로 감소된 GTP 잔존량을 나타냈다(도 3A). 왜냐하면, EF-1α는 GTP 기질을 촉매하기 때문에, 잔존하는 GTP의 양은 감소했다. 따라서, 발광은 EF-1α 존재하에서 낮았다. EF-1α에 대한 활성의 EC50은 6㎍으로 측정되었다.
GTPase 활성에 대한 SKM13의 유효성을 분석하고자, 총 6㎍의 EF-1α에 상이한 농도의 SKM13로 처리했고, 그 결과로부터 SKM13가 EF-1α의 활성을 억제하며, 따라서 GTPase 활성을 감소시킨다는 점을 확인하였다(도 3B). 또한, SKM13는 EF-1α의 효소 활성을 투여량에 좌우해 억제했다. 효소 활성의 EC50은 SKM13은 5.47nM, CQ는 66.32nM로 측정되었다. 따라서, SKM13는 EF-1α의 효소 활성을 억제함에 있어서 클로로퀸보다 더욱 효율적이었다.
실시예
3.
SKM13
처리에 따른 말라리아 균주인
플라스모디움
팔시파
룸(
Plasmodium falciparum
) FCR-3의 분열 단계별 영향 평가
본 발명에서 SKM13 처리가 말라리아 균주인 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum)의 Schizont 단계가 아닌 Ring 단계에서 5시간 동안 EF-1a의 발현을 억제하는 것을 확인하였다(도 4). 또한, SKM13 처리는 Schizont 단계가 아닌 Ring 단계에서 5시간 동안 플라스모디움 팔시파룸 EF-1a을 감소시키는 것을 확인하였으며, 대조구로 플라스모디움 팔시파룸 GAPDH는 SKM13 처리구에서 Ring 단계 또는 Schizont 단계에서 감소하지 않았다(도 5).
<110> Wonkwang University Center for Industry-Academy Cooperation
<120> Composition for inhibiting malaria EF-1alpha activity comprising a
chloroquine-based alpha, beta-unsaturated amide derivative compound as an active ingredient
<130> PN17394
<160> 4
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 1332
<212> DNA
<213> Plasmodium falciparum
<400> 1
atgggtaagg aaaaaacaca tattaactta gttgttattg gtcacgtcga tagtggaaaa 60
tcaaccacta caggtcacat tatttacaaa ttaggaggta tagatagaag aactattgaa 120
aaatttgaga aagaatctgc tgaaatgggt aagggtagtt ttaaatatgc atgggtttta 180
gataaactta aggcagaaag agaaagaggt attaccattg atattgcctt atggaaattt 240
gaaaccccaa ggtatttctt tactgtcatt gatgcaccag gtcacaagga ttttattaaa 300
aatatgatta caggtacatc acaagcagat gttgctttat tagttgtccc agctgaagta 360
ggtggtttcg aaggtgcctt ttcaaaggaa ggtcaaacaa aggaacacgc tttattagca 420
tttaccttag gtgtaaaaca aattgttgtc ggtgttaaca agatggatac tgtcaaatat 480
tctgaagaca gatatgaaga aattaaaaaa gaagttaagg attacttgaa gaaagtagga 540
taccaagctg ataaagttga ttttattcca atttctggtt ttgaaggtga taatttaatc 600
gaaaaatcag ataaaacacc atggtataaa ggaagaacct taatagaagc ccttgatact 660
atggaaccac caaagagacc ttacgacaag ccattaagaa ttccacttca aggtgtttac 720
aaaatcggtg gtattggtac cgtccctgtt ggtcgtgttg aaacaggtat cttaaaagcc 780
ggtatggttt taaacttcgc tccatcagct gttgtgtctg aatgtaaatc agttgaaatg 840
cacaaggaag ttttggaaga agctagacca ggagacaaca ttggttttaa cgtaaagaat 900
gtttctgtta aagaaatcaa gagaggttac gttgcttcag atactaaaaa tgaaccagca 960
aaaggatgct ccaaatttac tgctcaagtt attatattga accaccctgg tgaaatcaaa 1020
aatggttata ccccagtttt ggattgtcac acatctcaca tttcatgtaa atttttaaac 1080
attgattcca agatcgacaa acgttcaggt aaagttgttg aagaaaatcc aaaagctatc 1140
aaatcaggag attcagcttt agttagtttg gaacctaaga aacctatggt tgttgaaacc 1200
tttactgaat atccaccatt aggaagattc gctattcgtg atatgagaca aaccattgct 1260
gtcggtatca ttaaatcagt tgaaaagaaa gaacctggag ctgttacagc taaagcacca 1320
gccaaaaaat aa 1332
<210> 2
<211> 443
<212> PRT
<213> Plasmodium falciparum
<400> 2
Met Gly Lys Glu Lys Thr His Ile Asn Leu Val Val Ile Gly His Val
1 5 10 15
Asp Ser Gly Lys Ser Thr Thr Thr Gly His Ile Ile Tyr Lys Leu Gly
20 25 30
Gly Ile Asp Arg Arg Thr Ile Glu Lys Phe Glu Lys Glu Ser Ala Glu
35 40 45
Met Gly Lys Gly Ser Phe Lys Tyr Ala Trp Val Leu Asp Lys Leu Lys
50 55 60
Ala Glu Arg Glu Arg Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ala Leu Trp Lys Phe
65 70 75 80
Glu Thr Pro Arg Tyr Phe Phe Thr Val Ile Asp Ala Pro Gly His Lys
85 90 95
Asp Phe Ile Lys Asn Met Ile Thr Gly Thr Ser Gln Ala Asp Val Ala
100 105 110
Leu Leu Val Val Pro Ala Glu Val Gly Gly Phe Glu Gly Ala Phe Ser
115 120 125
Lys Glu Gly Gln Thr Lys Glu His Ala Leu Leu Ala Phe Thr Leu Gly
130 135 140
Val Lys Gln Ile Val Val Gly Val Asn Lys Met Asp Thr Val Lys Tyr
145 150 155 160
Ser Glu Asp Arg Tyr Glu Glu Ile Lys Lys Glu Val Lys Asp Tyr Leu
165 170 175
Lys Lys Val Gly Tyr Gln Ala Asp Lys Val Asp Phe Ile Pro Ile Ser
180 185 190
Gly Phe Glu Gly Asp Asn Leu Ile Glu Lys Ser Asp Lys Thr Pro Trp
195 200 205
Tyr Lys Gly Arg Thr Leu Ile Glu Ala Leu Asp Thr Met Glu Pro Pro
210 215 220
Lys Arg Pro Tyr Asp Lys Pro Leu Arg Ile Pro Leu Gln Gly Val Tyr
225 230 235 240
Lys Ile Gly Gly Ile Gly Thr Val Pro Val Gly Arg Val Glu Thr Gly
245 250 255
Ile Leu Lys Ala Gly Met Val Leu Asn Phe Ala Pro Ser Ala Val Val
260 265 270
Ser Glu Cys Lys Ser Val Glu Met His Lys Glu Val Leu Glu Glu Ala
275 280 285
Arg Pro Gly Asp Asn Ile Gly Phe Asn Val Lys Asn Val Ser Val Lys
290 295 300
Glu Ile Lys Arg Gly Tyr Val Ala Ser Asp Thr Lys Asn Glu Pro Ala
305 310 315 320
Lys Gly Cys Ser Lys Phe Thr Ala Gln Val Ile Ile Leu Asn His Pro
325 330 335
Gly Glu Ile Lys Asn Gly Tyr Thr Pro Val Leu Asp Cys His Thr Ser
340 345 350
His Ile Ser Cys Lys Phe Leu Asn Ile Asp Ser Lys Ile Asp Lys Arg
355 360 365
Ser Gly Lys Val Val Glu Glu Asn Pro Lys Ala Ile Lys Ser Gly Asp
370 375 380
Ser Ala Leu Val Ser Leu Glu Pro Lys Lys Pro Met Val Val Glu Thr
385 390 395 400
Phe Thr Glu Tyr Pro Pro Leu Gly Arg Phe Ala Ile Arg Asp Met Arg
405 410 415
Gln Thr Ile Ala Val Gly Ile Ile Lys Ser Val Glu Lys Lys Glu Pro
420 425 430
Gly Ala Val Thr Ala Lys Ala Pro Ala Lys Lys
435 440
<210> 3
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 3
ggatccaatg ggtaaggaaa aaacac 26
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 4
ctcgagtttt ttggctggtg ct 22
Claims (8)
- (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide) 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 인체 외의 말라리아에 처리하는 단계를 포함하는 EF-1α(Elongation Factor-1α)의 활성을 저해하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 EF-1α은 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 말라리아는 열대열 말라리아(Plasmodium falciparum), 삼일열 말라리아(Plasmodium vivax), 난원형 말라리아(Plasmodium ovale) 또는 사일열 말라리아(Plasmodium malariae)인 것을 특징으로 하는 방법.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- (S,E)-4-((7-클로로퀴놀린-4-일)아미노)-N-(2-디메틸아미노)에틸)-5-페닐펜트-2-에나미드((S,E)-4-((7-chloroquinolin-4-yl)amino)-N-(2-dimethylamino)ethyl)-5-phenylpent-2-enamide) 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항말라리아용 조성물.
- 삭제
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170137107A KR101899790B1 (ko) | 2017-10-23 | 2017-10-23 | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α 활성 저해용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170137107A KR101899790B1 (ko) | 2017-10-23 | 2017-10-23 | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α 활성 저해용 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR101899790B1 true KR101899790B1 (ko) | 2018-09-20 |
Family
ID=63719849
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020170137107A Active KR101899790B1 (ko) | 2017-10-23 | 2017-10-23 | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α 활성 저해용 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101899790B1 (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20200104066A (ko) * | 2019-02-26 | 2020-09-03 | 원광대학교산학협력단 | 열대열말라리아원충 유래의 EF-1α 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 말라리아 예방용 백신 조성물 |
| KR20230114570A (ko) * | 2022-01-25 | 2023-08-01 | 원광대학교산학협력단 | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 2HCl 염 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아 감염 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101653677B1 (ko) | 2015-04-29 | 2016-09-05 | 원광대학교산학협력단 | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아 감염 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
-
2017
- 2017-10-23 KR KR1020170137107A patent/KR101899790B1/ko active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101653677B1 (ko) | 2015-04-29 | 2016-09-05 | 원광대학교산학협력단 | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아 감염 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20200104066A (ko) * | 2019-02-26 | 2020-09-03 | 원광대학교산학협력단 | 열대열말라리아원충 유래의 EF-1α 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 말라리아 예방용 백신 조성물 |
| KR102169664B1 (ko) | 2019-02-26 | 2020-10-23 | 원광대학교산학협력단 | 열대열말라리아원충 유래의 EF-1α 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 말라리아 예방용 백신 조성물 |
| KR20230114570A (ko) * | 2022-01-25 | 2023-08-01 | 원광대학교산학협력단 | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 2HCl 염 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아 감염 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR102767473B1 (ko) | 2022-01-25 | 2025-02-14 | 원광대학교산학협력단 | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 2HCl 염 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아 감염 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pandey et al. | Bacterially expressed and refolded receptor binding domain of Plasmodium falciparum EBA-175 elicits invasion inhibitory antibodies | |
| Guevara Patiño et al. | Antibodies that inhibit malaria merozoite surface protein–1 processing and erythrocyte invasion are blocked by naturally acquired human antibodies | |
| Kaneko et al. | The high molecular mass rhoptry protein, RhopH1, is encoded by members of the clag multigene family in Plasmodium falciparum and Plasmodium yoelii | |
| Lubega et al. | Immunization with a tubulin-rich preparation from Trypanosoma brucei confers broad protection against African trypanosomosis | |
| Selvapandiyan et al. | Expression of a mutant form of Leishmania donovani centrin reduces the growth of the parasite | |
| Fréville et al. | Plasmodium falciparum encodes a conserved active inhibitor-2 for Protein Phosphatase type 1: perspectives for novel anti-plasmodial therapy | |
| HOLDER et al. | Immunization against Plasmodium falciparum with recombinant polypeptides produced in Escherichia coli | |
| Allen et al. | Cloning and characterization of actin depolymerizing factor from Toxoplasma gondii | |
| Wickramarachchi et al. | Identification and characterization of a novel Plasmodium falciparum merozoite apical protein involved in erythrocyte binding and invasion | |
| AU2020201140B2 (en) | Plasmodial surface anion channel inhibitors for the treatment or prevention of malaria | |
| WO2002011756A2 (en) | Anti-plasmodium compositions and methods of use | |
| KR101899790B1 (ko) | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아의 EF-1α 활성 저해용 조성물 | |
| CA2153494C (en) | Novel parasitic helminth proteins | |
| Paul et al. | A novel Pfs38 protein complex on the surface of Plasmodium falciparum blood-stage merozoites | |
| Cheong et al. | Immunogenicity of bacterial-expressed recombinant Plasmodium knowlesi merozoite surface protein-142 (MSP-142) | |
| Nikodem et al. | Identification of a novel antigenic domain of Plasmodium falciparum merozoite surface protein-1 that specifically binds to human erythrocytes and inhibits parasite invasion, in vitro | |
| Devi et al. | Immunogenicity of Plasmodium vivax combination subunit vaccine formulated with human compatible adjuvants in mice | |
| BRPI0203949B1 (pt) | Polipeptídeo se36, processo para purificação do polipeptídeo se36, vacina para malária, agente de diagnóstico para malária e fragmento de dna sintético | |
| Matesanz et al. | The C-terminal domain of the Plasmodium falciparum acyl-CoA synthetases PfACS1 and PfACS3 functions as ligand for ankyrin | |
| Liu et al. | Characterization of the molecular mechanism of the autophagy-related Atg8–Atg3 protein interaction in Toxoplasma gondii | |
| Mehrizi et al. | IgG subclasses pattern and high-avidity antibody to the C-terminal region of merozoite surface protein 1 of Plasmodium vivax in an unstable hypoendemic region in Iran | |
| JP7286112B2 (ja) | Ｅｆハンドカルシウム結合モチーフに由来するカルシウムキレート化ペプチド | |
| CN108218986A (zh) | 一种人源抗恶性疟原虫抗体及其用途 | |
| US8252293B2 (en) | Binding domain of Plasmodium reticulocyte binding proteins | |
| US12036274B2 (en) | Recombinant MPT protein derived from MPT63 and MPT64 and use thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20171023 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20180709 Patent event code: PE09021S01D |
|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20180910 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20180912 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20180913 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20220818 Start annual number: 5 End annual number: 5 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20230727 Start annual number: 6 End annual number: 6 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20240829 Start annual number: 7 End annual number: 7 |