KR101624752B1 - Ａｋｔ 단백질 키나제 저해물질로써의 수산화된 피리미딜 시클로펜탄 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 제공한다:

또한, 본 발명은 AKT 단백질 키나제 저해물질로써 본 발명의 화합물를 이용하는 방법 및 암과 같은 과다증식성 질환 치료용으로 본 발명의 화합물을 이용하는 방법도 제공한다.

Description

ＡＫＴ 단백질 키나제 저해물질로써의 수산화된 피리미딜 시클로펜탄{HYDROXYLATED PYRIMIDYL CYCLOPENTANE AS AKT PROTEIN KINASE INHIBITOR}

본 발명은 세린/트레오닌 단백질 키나제(가령, AKT 및 관련된 키나제)의 신규한 저해물질, 이 저해물질을 함유하는 약학 조성물 그리고 이 저해물질를 준비하는 방법에 관한 것이다. 이 저해물질은 포유류에서 암과 염증과 같은 과다증식성 질환의 치료에 유용하다.

단백질 키나제 (PK)는 ATP로부터 말단(감마) 인산염의 전달에 의해 단백질의 티로신, 세린 및 트레오닌 잔기의 히드록시기의 인산화(phosphorylation)를 촉매하는 효소다. 시그날 변환 경로를 통하여, 이들 효소들은 세포 생장, 분화, 증식, 가령, PK 활성 의존성 방식 또는 다른 방식으로 세포 일생의 실질적인 모든 면을 조절한다. (Hardie , G. and Hanks , S. (1995) The Protein Kinase Facts Book . I and II , Academic Press , San Diego , CA). 더욱이 비정상적인 PK 활성은 건선과 같은 상대적으로 생명을 위협하지 않는 질환에서부터 교아종(뇌 암)과 같은 극도의 악성 질환까지 숙주 질환과 연관이 있었다. 단백질 키나제는 치료요법적 조정에 중요한 표적이 되는 부류다(Cohen , P. (2002) Nature Rev . Drug Discovery 1 :309).

중요한 것은, 비정형적 단백질 인산화 및/또는 발현은 암에서 비정상적인 세포 증식, 전이 및 세포 생존의 원인적 효과중에 하나로 보고되기도 한다. 여러 다양한 키나제중에 Akt, VEGF, ILK, ROCK, p70S6K, BcI, PKA, PKC, Raf, Src, PDKl, ErbB2, MEK, IKK, Cdk, EGFR, BAD, CHKl, CHK2 및 GSK3을 포함한 키나제의 비정상적 조절 및/또는 발현은 암에 특이하게 연루되어 있다.

단백질 키나제에는 두 가지 부류가 포함되는데, 단백질 티로신 키나제 (PTK) 및 세린-트레오닌 키나제 (STK)가 된다. 단백질 키나제 B/Akt 효소는 다양한 인간 종양에서 과다발현되는 세린/트레오닌 키나제 부류다. PI3K 지질 산물의 가장 잘 특징화된 표적 중에 하나가 시그날 변환 경로에서 PI3K의 하류에 있는 57 KD 세린/트레오닌 단백질 키나제 Akt이다(Hemmings , B.A. (1997) Science 275:628; Hay N. (2005) Cancer cell 8:179-183). Akt는 급성적으로 형질변환되는 레트로바이러스 AKT8의 프로토온코겐(protooncogene) v-akt의 인간 상동체다. 단백질 키나제 A 및 C에 매우 높은 서열 상동성으로 인하여, Akt는 단백질 키나제 B (PKB) 및 A와 C에 관련됨(RAC)이라고 부르기도 한다. Akt의 세 가지 아이소형이 존재하는 것으로 알려져 있는데, 즉, Aktl, Akt2 및 Akt3, 이들은 80% 전체 상동성을 보인다. (Staal , S.P. (1987) Proc . Natl . Acad . Sci . 84:5034; Nakatani , K. (1999) Biochem . Biophys . Res . Commun . 257:906; Li et al (2002) Current Topics in Med . Chem . 2:939-971; WO 2005/113762). Akt 아이소형은 N-말단에서 플렉스트린(pleckstrin) 상동체, 키나제 촉매 도메인, C-말단의 짧은 조절 부위로 구성된 공통 도메인 조직을 공유한다. 추가로 Akt2 및 Akt3는 모두 접목 변이체(splice variants)를 나타낸다. PtdInd(3,4,5)P₃에 의한 세포 막으로의 보충시, Akt는 아이소형 Aktl (PKBα), Akt2 (PKBβ) 및 Akt3 (PKBγ)의 경우 각각 T308, T309 및 T305에서 그리고, 아이소형 Aktl, Akt2 및 Akt3의 경우에 각각 S473, S474 및 S472에서 PDK1에 의해 인산화(활성화)된다. 이와 같은 인산화는 PDKl (Balendran , A., (1999) Curr . Biol . 9:393), 자동인산화 (Toker , A. (2000) J. Biol . Chem . 275:8271) 및 인테그린-연결된 키나제 (ILK) (Delcommenne, M. (1998) Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 95:11211)가 이 과정에 연루되어 있지만, 아직 밝혀지지 않은 키나제(가상적으로 PDK2라고 명명함)에 의해 일어난다. Akt 활성화는 C-말단 소수성 모티프에서 잔기 Ser 473상에 인산화를 요구한다.(Brodbeck et al (1999) J. Biol . Chem . 274:9133-9136; Coffer et al (1991) Eur . J. Biochem . 201:475-481; Alessi et al (1997) Curr . Biol. 7:261-269). Akt의 단일 인산화가 키나제를 활성화시키지만, 최대의 키나제 활성을 위해서는 비스(인산화)를 요구한다.

Akt는 아팝토시스의 억제 및 맥관형성 및 증식 모두를 강화시킴으로써 암에 이들 효과를 나타내는 것으로 보여진다. (Toker et al . (2006) Cancer Res . 66(8):3963-3966). Akt는 결장암(Zinda et al (2001) Clin . Cancer Res . 7:2475), 난소암(Cheng et al (1992) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 89:9267), 뇌암(Haas Kogan et al (1998) Curr . Biol . 8:1195), 폐암(Brognard et al (2001) Cancer Res. 61 :3986), 췌장암(Bellacosa et al (1995) Int . J. Cancer 64:280-285; Cheng et al (1996) Proc. Natl . Acad . Sci . 93:3636-3641), 전립선암(Graff et al (2000) J. Biol . Chem . 275:24500) 및 위장 암종(Staal et al (1987) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 84:5034-5037)을 포함하나 이에 국한되지 않는 많은 형태의 인간암에서 발현된다.

표적화된 소분자 저해물질 치료법에서 라파마이신의 PI3K/Akt/포유류 표적(mTOR) 경로가 연구되었다. (Georgakis , G. and Younes , A. (2006) Expert Rev . Anticancer Ther . 6(l):131-140; Granville et al (2006) Clin . Cancer Res . 12(3):679- 689). PBK/ Akt 시그날링의 저해로 아팝토시스가 유도되고, 상승된 Akt 수준을 가지는 종양 세포의 생장이 저해된다. (Kim et al (2005) Current Opinion in Investig . Drugs 6(12): 1250- 1258; Luo et al (2005) Molecular Cancer Ther. 4(6):977-986).

비정상적으로 조절된 경로를 표적으로 하고, 궁극적으로는 질병이 되는 키나제 저해물질의 발달은 의학 및 약학 분야에 상당한 도덕적 그리고 상업적 관심 대상이 된다. (1) 세포 막으로 Akt가 모이는 것을 저해하고, (2) PDK1 또는 PDK2에 의한 활성화, (3) 기질 인산화, 또는 (4) Akt의 하류 표적중 하나를 저해시키는 화합물이 표준 단독 요법 또는 다른 수용가능한 과정과 함께 가치있는 항암제가 될 수 있다.

미국 특허 출원 공개 2005/0130954는 AKT 저해물질로 작용하는 다양한 화합물을 개시한다. 이들 화합물은 암과 같은 과다증식성 질환 치료에 유용하다고 한다.

발명의 요약

본 발명은 AKT 단백질 키나제를 저해하는 신규한 화합물을 제공한다.

본 발명의 화합물은 Akt 단백질 키나제의 저해로 치료될 수 있는 질환 및 상태에 대한 치료요법제로 유용하다.

좀더 특별하게는, 본 발명은 다음의 화합물 I을 가지는 화합물 및 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 포함한다:

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

추가 측면에서, 본 발명은 AKT 단백질 키나제에 의해 중재되는 포유류의 질환 및 의학적 상태를 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 상기에서 언급된 질환을 치료하거나 예방하는데 효과적인 양으로 화학식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 포유류에 투여하는 것을 포함한다. 본 발명에 따라 치료될 수 있는 AKT 단백질 키나제 중재된 질환은 염증, 과다증식성, 심혈관, 신경퇴행성, 부인과, 및 피부과 질환 및 질병을 포함하나 이에 국한되지 않는다.

추가 측면에서, 본 발명은 포유류에서 AKT 단백질 생산을 저해하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 AKT 단백질 키나제 생산을 저해시키는데 효과적인 양으로 포유류에 투여하는 것을 포함한다.

추가 측면에서, 본 발명은 AKT 단백질 키나제의 활성을 저해하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 키나제를 화학식 I의 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다.

본 발명의 화합물은 다른 공지의 치료요법제와 복합시켜 유리하게 이용될 수도 있다. 따라서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 수용가능한 염과, 제2의 치료요법제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 AKT 단백질 키나제-매개된 질환의 치료용 약물로 이용하기 위한 화학식I의 화합물 및 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 제공한다.

본 발명의 추가 측면은 치료법에 화학식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 이용하는 것이다. 한 구체예에서, 치료법은 AKT 단백질 키나제-매개된 질환의 치료를 포함한다.

본 발명은 AKT 단백질 키나제-매개된 질환 또는 장애 치료용 키트를 제공하는 것인데, 이 키트는 화학식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 수용가능한 염, 용기 및 선택적으로 패키지 삽입물 또는 치료를 나타내는 라벨을 포함한다. 키트는 질환 또는 장애를 치료하는데 유용한 제 2의 약리학적으로 물질을 포함하는 제2화합물 또는 조제물을 포함할 수 있다.

본 발명의 추가 측면은 과다증식성 질환의 치료에 이용되는 화학식의 화합물의 용도를 제공한다. 본 발명의 추가 측면에서, 과다증식성 질환은 암이다.

본 발명은 본 발명에 따른 화합물을 준비하는 방법, 분리시키는 방법, 정제시키는 방법들도 포함한다.

본 발명의 추가 장점 및 신규한 특징들은 다음의 설명의 일부로 제공되고, 일부는 당업자에 의해 다음의 설명서를 검토할 때 명백하게 인지될 것이며 또는 본 발명의 실시에 의해 습득될 수 있다. 본 발명의 장점들은 첨부된 청구범위에서 특히 지적하고 있는 수단, 복합물, 조성물 및 방법에 의해 실현되고 획득될 수 있다.

본 발명의 특정 구체예에 참고문헌이 상세하게 언급될 것이며, 이들의 실시예는 첨부 구조 및 식에서 설명된다. 본 발명은 다수의 구체예와 함께 설명되며, 본 발명을 이들 구체예에 한정시키려는 의도가 아님을 인지할 것이다. 반대로, 본 발명은 대안, 변형 및 등가물을 모두 포함하며, 이는 청구범위에 의해 한정되는 본 발명의 범위내에 포함될 것이다. 당업자는 여기에서 설명된 것에 등가의 또는 유사한 많은 방법 및 재료들이 본 발명의 실시에 이용될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 본 발명은 어떠한 방식으로든 설명된 방법 및 재료들로 제한시키지 않는다. 첨부된 문헌 및 유사한 재료들중 하나 또는 그 이상이 정의된 용어, 사용된 용어, 설명된 기술 또는 이와 유사한 것들을 포함하나 이에 한정되지 않는 것들이 본 발명과 상충되거나 상이할 경우, 본 출원이 통제한다.

정의

여기에서 사용된 단수:부정관사("a")는 하나 또는 그 이상을 의미한다.

여기에서 사용된 바와 같이, 용어 "본 발명의 화합물", "본 화합물" 및 "화학식 I의 화합물"에는 화학식 I의 화합물 및 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 포함한다.

"효과량"은 치료를 요하는 포유류에 투여되었을 때, (i)하나 또는 그 이상의 AKT 단백질 키나제, 티로신 키나제, 추가적 세린/트레오닌 키나제, 및/또는 이중 특이적 키나제의 활성에 의해 매개된 특정 질환, 상태 또는 장애를 치료; (ii) 특정 질환, 상태 또는 장애의 하나 또는 그 이상의 증상을 감쇠, 경감 또는 제거: 또는 (iii) 여기에서 설명된 특정 질환, 상태 또는 장애의 하나 또는 그 이상의 증상 개시를 저지 또는 지연시키는데 충분한 화합물의 양을 말한다. 암의 경우, 약물의 효과량은 암세포 수를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키고, 주변 기관으로 암세포의 침윤을 저해시키고(가령, 어느 정도로 느리게 하거나 바람직하게는 중단시키고); 종양 전이를 저해시키고(가령, 어느 정도로 느리게 하거나 바람직하게는 중단시키고); 어느 정도로 종양 생장을 저해시키고; 암과 연관된 하나 또는 그 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 약물이 기존의 암세포 생장을 어느 정도 저해시키거나 또는 죽이는 경우, 이는 세포증식억제성(cytostatic) 및/또는 세포독성(cytotoxic)일 수 있다. 암 요법의 경우, 효과는 질환 진행까지의 시간(TTP)을 평가하거나 또는 반응속도(RR)를 결정함으로써 측정될 수 있다.

"치료"는 AKT 단백질 키나제, 티로신 키나제, 추가적 세린/트레오닌 키나제, 및/또는 이중 특이성 키나제에 의해 최소 부분적으로 영향을 받은 인간과 같은 포유류에서 질환 상태를 최소한 완화시키는 것을 의미한다. 용어 "치료하다" 및 "치료"는 모두 치료요법 치료 및 예방학적 또는 방지 수단을 말하며, 여기서 목적은 원하지 않는 생리학적 변화 또는 장애를 예방하거나 또는 지연(감소)시키는 것이다. 본 발명의 목적을 위해, 유익한 또는 원하는 임상적 결과에는 감지가능하거나 감지되지 않는, 증상의 경감, 질환 정도의 감소, 안정화된 상태(가령, 악화되지 않는), 질환 진행의 지연 또는 느림, 질환 상태의 개선 또는 일시적 완화, 그리고 누그러짐(부분적이거나 전체적으로)을 포함하나 이에 국한되지 않는 것을 포함한다. "치료"는 또한 치료를 받지 않는 경우와 비교하였을 때, 예측되는 생존과 비교하여, 생존이 연장되는 것을 의미할 수도 있다. 이와 같은 치료를 요하는 개체에는 이와 같은 상태 또는 장애가 있는 개체 또는 이와 같은 질환에 걸리기 쉬운 성향으로 밝혀졌으나 아직 이 질환이 있다고 진단을 받지 않은 개체가 포함된다; 질환의 조절 및/또는 저해. 용어 "치료하는", "치료하다", 또는 "치료"에는 예방 가령, 보호적 그리고 완화치료를 모두 포함한다.

여기에서 사용된 바와 같이, 용어 "포유류"는 여기에서 설명된 질환을 가지거나, 이 질환이 발생될 위험에 처한 온혈 동물을 말하는데, 기니아 피그, 개, 고양이, 쥐, 헴스터, 그리고 인간을 포함하는 영장류가 포함되나 이에 국한되지 않는다.

"화학요법제"는 작용기전에는 상관없이 암을 치료하는데 유용한 화합물이다. 화학적 요법제에는 표적 요법 및 통상적 화학요법에 이용되는 화합물이 포함된다.

화학요법제의 예로는 에르로티니브(TARCEV A®,Genentech/OSI Pharm.), 보르테조미브(VELCADE®, Millennium Pharm.), 풀베스트란트(FASLODEX®, AstraZeneca), 수텐트(SUl 1248, Pfizer), 레트라졸(FEMARA®, Novartis), 이마티니브 메실레이트(GLEEVEC®, Novartis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), 옥살리플라틴(Eloxatin®, Sanofi), 5-FU (5-플로오러우라실), 루코보린(Leucovorin), 라파마이신(Sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), 라파티니브(TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), Lonafamib (SCH 66336), 소라페니브(BAY43-9006, Bayer Labs), 이리노테칸(CAMPTOSAR®, Pfizer) 그리고 제피티니브(IRESSA®, AstraZeneca), AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), 티오테파와 같은 알킬화 물질 및 CYTOXAN® 시클로포스파미드; 알킬 설포네이트 가령, 부술판(busulfan), 임프로술판(improsulfan), 그리고 피포술판(piposulfan); 이지리딘(aziridines) 가령, 벤조도파(benzodopa), 카르보퀘논(carboquone), 메투레도파(meturedopa) 그리고 우레도파(uredopa); 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스파라미드 그리고 트리메틸로멜라민을 포함한 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토게닌(특히, 불라타신(bullatacin) 및 불라타시논(bullatacinone)); 캄토테신(합성 유사체 토포테탄을 포함); 브리오스타틴(bryostatin); 칼리스타틴(callystatin); CC-1065 (이의 알도제레신, 카르제레신 및 비제레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌아스타틴(dolastatin); 듀오카르마이신(duocarmycin) (합성 유사체, KW-2189 및 CBl-TML을 포함); 에루테로빈(eleutherobin); 판크라티스타틴(pancratistatin); 사르코딕틴(sarcodictyin); 스폰지스타틴(spongistatin); 크로람부칠, 클로로나파진, 클로로포스파미드, 에스타라무스틴, 이포스파미드, 메클로로에타민, 메클로로에타민 옥시드 하이드로클로라이드, 멜파란, 노벰비친, 페네스테린, 프레디니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 무스타드와 같은 질소 무스타드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴과 같은 니트로조우레아; 에네디네 항생제(가령, 칼케아미신, 특히 칼테아미신 감마 II 및 칼체아미신 오메가 I1 과 같은 항생제(Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); 다이네미신A를 포함하는 다이네미신; 비스포스포네이트 가령, 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 색소포(chromophores) 및 관련 크로모단백질 네에디네 항생제 색소포), 아클라시노미신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로로마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르루이신, ADRIAMYCIN® (독소부리신), 몰포리노-독소루비신, 시아노모르포리노-독소루비신, 2-피로리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르세로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 푸로마이신, 퀼라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조이신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물질 가령, 메토트렉세이트 및 5-플로오로우라실(5-FU); 엽산 유사체 예를 들면, 데노프레틴, 메토트렉세이트, 트페로프테인, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예를 들면, 플루다라빈, 6-멀캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예를 들면, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 엔시타빈, 플옥스우리딘; 칼루스테론, 그로모스타노론 프로피오네이트, 이피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄과 같은 항-아드레날; 엽산 보충제 예를 들면, 프로린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜친; 디아지퀴논; 엘포르니틴; 엘리피티니움 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈리움 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 마이탄시노이드 가령, 마이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미토산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로소산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체(JHS Natural Products, Eugene, OR); 로조산; 리조신; 시조피란; 스피로게르마니움; 테누아존산; 트리아지퀴논; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 톡신, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 가령, TAXOL® (파클리탁셀; Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ (크레모포어-프리), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 조제물(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois), 그리고 TAXOTERE® (독세타셀; Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로람부칠; GEMZAR® (젬시타빈); 6-티오구아닌; 멀캅토퓨린; 메토트렉세이트; 플라티늄 유사체 가령, 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미토산트론; 빈크리스틴; NAVELBINE® (비노렐빈); 노반트론; 테니포시드; 에다트레세이트; 도노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈(XELOD A®); 이반드로네이트; CPT-1l; 토포이소메라제 저해물질 RFS 2000; 디플로로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드 가령, 레티논산; 및 상기 언급된 임의의 약리학적으로 수용가능한 염, 산 및 유도체를 포함한다.

“화학요법제”의 정의에는 (i) 종양에서 호르몬 작용을 조절하거나 저해시키는 작용을 하는 항-호르몬제, 예를 들면, 항-에스테로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절물질(SERMs), 가령, 타목시펜(NOLVADEX®; 타목시펜 시트레이트 포함), 라록시펜, 드로옥시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LYl 17018, 오나프리스톤, 그리고 FARESTON® (토르미프메 시트레이트); (ii) 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 오로마타제를 저해시키는 아로마타제 저해물질, 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티이미드, MEGASE® (메게스트롤 아세테이트), AROMASIN® (엑세메스탄; Pfizer), 포르메스타니, 화드로졸, RTVISOR® (보로졸), FEMARA® (레트로졸; Novartis), 그리고 ARIMIDEX® (아나스트로졸; AstraZeneca); (iii) 플루타미드, 니루타미드, 비칼루타미드, 루프로라이드 및 고세레린 뿐만 아니라 트록사시타빈(1,3-디옥소란 뉴클레오시드 시토신 유도체)과 같은 항-안드로겐; (iv) 단백질 키나제 저해물질; (v) 지질 키나제 저해물질; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 비정상적인 세포 증식에 연루된 시그날 경로에서 유전자 발현을 저해시키는 안티센스 올리고뉴클레오티드 예를 들면, PKC-alpha, Ralf 및 H-Ras; (vii) VEGF 발현 저해물질 (가령, ANGIOZYME®) 및 HER2 발현 저해물질과 같은 리보자임; (viii) 유전자 요법 백신과 같은 백신, 예를 들면, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN®, 그리고 VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; 토포이소메라제 1 저해물질 가령, LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) 베바시주마브와 같은 항-맥관형성물질(AVASTIN®, Genentech); 그리고 (x) 상기의 언급된 것들중 임의의 약리학적으로 수용가능한 염, 산 그리고 유도체도 포함된다.

“화학요법제” 정의에는 아렘투주마브(Campath), 베카시주마브 (AVASTIN®, Genentech); 세투시마브(ERBITUX®, Imclone); 파니투무마브 (VECTIBIX®, Amgen), 리투시마브(RITUXAN®, Genentech/Biogen Idee), 페르투주마브(OMNITARG®, 2C4, Genentech), 트라스투주마브(HERCEPTIN®, Genentech), 토시투모마브(Bexxar, Corixia)와 같은 치료요법적 항체 및 항체 약물 콘쥬게이트, 젬투주마브 오조가미신(MYLOTARG®, Wyeth).

본 발명의 PI3K 저해물질과 복합하여 화학요법제로써 치료 효력을 가지는 인화 단클론 항체에는 다음이 포함된다: 알렘투주마브, 아포리주마브, 아세리주마브, 아클리주마브, 바피네우주마브, 베카시주마브, 비바투주마브 메르탄신, 칸투주마브 메르탄신, 쎄겔리주마브, 쎄르토리주마브 페골, 씨드후시투주마브, 시드투주마브, 다클리주마브, 에쿨리주마브, 에팔리주마브, 에프라투주마브, 에르리주마브, 펠비주마브, 폰토리주마브, 젬투주마브 오조가미신, 이노투주마브 오조가미신, 이피리무마브, 라베투주마브, 린투주마브, 마투주마브, 메폴리주마브, 모타비주마브, 모토비주마브, 나탈리주마브, 미모투주마브, 노로비주마브, 누마비주마브, 오크레리주마브, 오말리주마브, 팔리비주마브, 파스코리주마브, 펙푸시투주마브, 펙투주마브, 페르투주마브, 페셀리주마브, 라리비주마브, 라니비주마브, 레실리비주마브, 레실리주마브, 레시비주마브, 로벨리주마브, 루플리주마브, 시브로투주마브, 시플리주마브, 손투주마브, 타카투주마브 테트라세탄, 타도시주마브, 탈리주마브, 테피바주마브, 토실리주마브, 토라리주마브, 트라스투주마브, 투코투주마브 셀몰루킨, 투쿠시투주마브, 우마비주마브, 우르토사주마브, 그리고 비실리주마브.

AKT 저해물질

본 발명의 화학식 I의 화합물은 AKT 단백질 키나제를 저해시키는데 유용하다. 이 화합물은 AKT 단백질 키나제 시그날링경로 그리고 티로신 및 세린/트레오닌 키나제 수용체 경로의 저해로 치료될 수 있는 질환의 치료요법제의 용도를 가진다.

특히, 시클로펜타[d]피리미딘 상에 7-히드록시를 가지는 화학식 I의 화합물들은 단백질 키나제 A (PKA)에 대해 AKT 에 최소 50배 이상의 선택성을 가지는 것으로 밝혀졌다. 예를 들면, 최소 100-배, 그리고 추가 예로써, PKA보다 최소 150-배 이상의 AKT 선택성을 가진다. PKA가 많은 세포 형태의 정상적 기능 및 생리에 중요한 세포 공정에 관여하기 때문에 PKA 이상의 선택성이 바람직하다. 추가로, PKA의 저해가 AKT 저해의 항-증식 및 아포톱시스-전 효과(pro-apoptotic effect)에 기여하는 것으로 보지는 않는다. 따라서, PDK의 저해는 AKT 저해의 질환 변형 장점에 기여함 없이 AKT 저해와 연관되지 않은 불리한 사건으로 유도될 것이다.

화학식 I의 화합물은 AKT에 추가하여, 티로신 키나제의 저해물질 뿐만 아니라 세린 및 트레오닌 키나제의 저해물질로 유용할 수도 있다.

일반적으로, 본 발명의 한 측면은 화학식 I의 화합물 및 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 포함한다:

화학식 I의 화합물은 화합물의 약리학적으로 수용가능한 염을 포함한다.

"약리학적으로 수용가능한"이란 물질 또는 조성물이 다른 성분들을 포함하는 조제물 또는 이것으로 치료를 받은 포유류와 화학적으로 및/또는 독성학적으로 양립가능하다는 것을 나타낸다.

추가적으로, 본 발명의 화합물은 염의 형태가 될 수 있다. 염의 예로는 본 발명의 화합물들을 미네랄 또는 유기산 또는 무기 염기와 반응시켜 만든 염이 포함되고, 이와 같은 염으로는 황산염, 피로설페이트, 중황산염, 아황산염, 중아황산염, 인산염, 모노하이드로겐포스페이트, 디하이드로겐포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 이소부티레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 숙시네이트, 수베르에이트, 세바케이트, 퓨마라에트, 말레이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥신-l,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 술포네이트, 실렌술포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, γ-히드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트, 메탄술포네이트, 프로판술포네이트, 나프탈렌-1-술포네이트, 나프탈렌-2-술포네이트, 그리고 만델레이트가 포함하나 이에 국한되지 않는다.

본 발명의 단일 화합물은 하나 이상의 산성 또는 염기성 모이어티를 포함할 수 있기 때문에, 본 발명의 화합물은 단일 화합물에 하나, 둘- 또는 세 개 염을 포함할 수 있다.

특정 구체예에서, 염은 다른 언급이 없는 한, “약리학적으로 수용가능한 염”이며, 특정 화합물의 상응하는 자유 산 또는 염기의 생물학적 효과를 보유하며, 그리고 생물학적이 아닌 또는 바람직하지 못한 염도 포함된다.

화학식 I의 화합물에는 또한 필수적이지 않은 약리학적으로 수용가능한 그리고, 화학식 I의 화합물을 준비 및/또는 정제 그리고 화학식 I의 화합물의 분리를 위한 중간 생성물로 유용한 기타 염도 포함된다.

본 발명은 또한 여기에서 언급된 것과 동일한, 그러나 하나 또는 그 이상의 원자들이 원자량이 상이한 또는 자연상태에서 흔히 발견되는 원자량 또는 원자번호와 상이한 원자 번호 또는 원자량을 가지는 원자로 대체된 동위원소-라벨된 화합물도 포함한다. 명시된 임의 특정 원자 또는 원소의 모든 동위원소 및 이들의 용도는 본 발명의 범위내에 속한다. 본 발명의 화합물에 결합될 수 있는 예시적인 동위원소에는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 플로오르, 염소 및 요오드의 동위원소, 예를 들면, ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷0, ¹⁸0, ³²P, ³³P, ³⁵S, ¹⁸F, ³⁶Cl, ¹²³I 그리고 ¹²⁵I가 포함된다. 본 발명의 특정 동위원소-라벨된 화합물(가령, ³H, ¹⁴C 라벨된 화합물)은 화합물 및/또는 기질 조직 분포 분석에 유용하다. 삼중화된(Tritiated)(가령, ³H) 및 탄소-14 (가령, ¹⁴C) 동위원소들은 용이한 제조 및 탐지성으로 유용하다. 더욱이, 중수소(가령, ²H)와 같은 더 무거운 동위원소로의 치환으로 더 큰 대사 안정성(가령, in vivo 반감기의 증가 또는 약량 요구량의 감소)으로 인한 치료 장점을 제공해줄 수 있으며, 따라서, 일부 환경에서는 선호될 수 있다. 양전자 방출 동위원소 예를 들면, ¹⁵O, ¹³N, ¹¹C 그리고 ¹⁸F는 기질 수용체 점유를 검사하기 위한 양전자 방사 단층 촬영술(PET)에 유용하다. 본 발명의 동위원소 라벨된 화합물은 하기 실시예 및/또는 반응식에서 설명된 것과 유사한 과정에 따라, 동위원소 라벨안된 시약을 동위원소 라벨된 시약으로 대체시켜 일반적으로 준비될 수 있다.

화학식 I의 화합물들의 합성

본 발명의 화합물은 화학분야, 특히 여기에 포함된 설명에 근거하여 공지된 것과 유사한 과정을 포함하는 합성 경로에 의해 합성될 수 있다. 출발 물질은 일반적으로 Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI)와 같은 상업적 소스로부터 이용하거나 또는 당분야에 공지된 방법을 이용하여 바로 준비될 수 있다(가령, Louis F. Fieser and Mary Fieser , Reagents for Organic Synthesis , v. 1-19, Wiley , N. Y. (1967- 1999 ed .), 또는 Beilsteins Handbuch der organischen Chemie , 4, Aufl . ed . Springer- Verlag , Berlin , including supplements에서 설명된 내용에 따라).

개별 반응 단계의 좀더 상세한 설명은 하기 실시예들을 참고한다. 당업자는 본 발명의 화합물을 합성하는데 다른 합성 경로들이 이용될 수 있다는 것도 인지할 것이다. 실시예에서 특정 출발 물질 및 시약들이 명시되고 논의되지만, 다른 출발 물질 및 시약이 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공하기 위하여 용이하게 대체될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 또한, 하기에서 설명되는 방법에 의해 준비되는 많은 화합물들은 당분야에 공지된 통상의 화학물을 이용하여 본 내용에 근거하여 추가 수정될 수 있다.

화학식 I의 화합물을 준비함에 있어서, 중간생성물의 관계없는 기능성(가령, 1차 또는 2차 아민, 등)을 보호하는 것도 필수적일 수 있다. 이와 같은 보호의 필요성은 관계가 먼 기능의 성질 및 준비 방법의 조건 등에 따라 달라질 것이다. 적절한 아미노-보호기(NH-Pg)에는 아세틸, 트리플로오르아세틸, t-부톡시카르보닐(BOC), 벤질옥시카르보닐(CBz) 및 9-플루오레닐메틸렌카르보닐(Fmoc)이 포함된다. 이와 같은 보호에 대한 필요는 당업자에 의해 바로 결정된다. 보호기 및 이들의 용도에 대한 전반적인 설명은 T. W. Greene , Protective Groups in Organic Synthesis , John Wiley & Sons, New York , 1991을 참고한다.

분리 방법

화학식 I의 화합물을 분비하는 임의 합성 방법에서, 하나의 다른 및/또는 출발물질로부터 반응 산물을 분리시키는 것이 유익할 수 있다. 각 단계 또는 일련의 단계의 원하는 산물은 당업계 공통적 기술에 의해 원하는 수준의 균일성으로 분리 및/또는 정제된다. 전형적으로, 이와 같은 분리는 다중상 추출, 용매 또는 용매 혼합물로부터 결정화, 증류, 승화 또는 크로마토그래피가 연관된다. 크로마토그래피는 몇가지 방법이 관련되는데, 예를 들면, 역상 및 보통 상: 크기 압출; 이온교환; 고압, 중간압 및 저압 액체 크로마토그래피 방법 및 장비; 소규모 분석; 가상 이동 상("SMB") 및 예비 박층(thin layer) 또는 후층(thick layer) 크로마토그래피 뿐만 아니라 소규모 박층 및 플래쉬 크로마토그래피 기술이 포함된다.

또 다른 부류의 분리 방법은 분리가능한 원하는 산물, 반응하지 않은 출발 물질, 산물에 의한 반응 또는 이와 유사한 것이 분리가능하게 하거나 원하는 산물에 결합되는 선택된 시약으로 반응 혼합물을 처리하는 것과 연관된다. 이와 같은 시약은 활성 탄소, 분자체, 이온교환 매질 또는 이와 유사한 것과 같은 흡착제 또는 흡수제를 포함한다. 대안으로, 시약은 염기성 물질의 경우에 산이 되며, 산성 물질인 경우 염기가 되고, 항체, 결합 단백질과 같은 결합 시약, 크라운 에테르와 같은 선택성 킬레이트, 액체/액체 이온 추출 시약("LIX"), 또는 이와 유사한 것이 된다.

적절한 분리 방법의 선택은 관련 물질의 성질에 따라 달라진다. 예를 들면, 증류 및 승화에서 끓는 점 및 분자량, 크로마토그래피에서 극성 기능기의 존부, 다중상 추출에서 산성 및 염기성 매질에서 물질의 안정성, 및 이와 유사한 것들이다. 당업자는 원하는 분리를 하기 위해 가장 가능한 기술을 적용시킬 수 있을 것이다.

부분입체이성질체(diastereomeric) 혼합물은 당분야에 공지된 방법 가령, 크로마토그래피 및 분별 결정화에 의해 이들의 물리적, 화학적 차이에 기초하여 개별적 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 거울상체(Enantiomers)는 적절한 광학적으로 활성 화합물(예를 들면, 키랄 알코올과 같은 키랄 보조제 또는 Mosher 염소산)과의 반응에 의해 거울상체가 부분입체이성질체로 전환되고, 부분입체이성질체를 분리시키고, 그리고 개별 부분입체이성질체를 이에 상응하는 순수 거울상체로 전환시켜(가수분해 등), 분리될 수 있다. 또한, 본 발명의 일부 화합물들은 회전억제이성질체(atropisomer)(가령, 치환된 바이아릴)이며, 이 또한 본 발명의 일부분으로 간주된다. 거울상체는 키랄 HPLC 컬럼으로 분리될 수도 있다.

단일 입체이성체(stereoisomer), 가령, 실질적으로 입체이성질체가 없는 거울상체는 광학적 활성 해리 물질을 이용하여 부분입체이성질체 형성과 같은 방법으로 라셈체 혼합물의 분해를 통하여 수득될 수 있다(Eliel , E. and Wilen , S. " Stereochemistry of Organic Compounds ," John Wiley & Sons, Inc ., New York , 1994; Lochmuller , C. H., J. Chromatogr ., (1975) 113(3):283-302). 본 발명의 키랄 화합물의 라셈체 혼합물은 임의 적절한 방법으로 구별 및 분리되는데, 여기서 방법은 (1) 키랄 화합물과 이온, 입체이성질체 염을 형성하고, 분별 결정 및 기타 방법으로 분리, (2) 키를 유도체 시약으로 부분입체이성질체 화합물의 형성, 부분입체이성질체의 분리, 순수한 입체이성질체로 전환, 그리고 (3) 키랄 조건하에 바로 실질적으로 순수한 또는 풍부한 입체이성질체의 분리. "Drug Stereochemistry , Analytical Methods and Pharmacology ," Irving W. Wainer , Ed ., Marcel Dekker , Inc ., New York (1993) 참고.

방법 (1)의 경우, 부분입체이성질체 염은 부루신, 퀴닌, 에페드린, 스트리키닌, α-메틸-β-페닐에틸아민(암페타민), 및 이와 유사한 것과 같은 입체이성질적으로 순수한 키랄 염기와 카르복실산 및 술폰산과 같은 산성 기능기를 보유하는 비대칭 화합물과 반응시켜 만들 수도 있다. 부분입체이성질체 염은 분별 결정 또는 이온 크로마토그래피에 의해 분리되도록 유도될 수 있다. 아미노 화합물의 광학 이성질체 분리를 위하여, 키랄 카르복실산 또는 술폰산 가령, 캄포르술폰산, 타르타르산, 만델산 또는 락트산을 첨가하면 부분입체이성질체 염이 형성될 수 있다.

대안으로, 방법(2)에 의해 분해되는 기질은 하나의 거울상체와 반응되어 부분입체이성질체 쌍을 형성한다(E. and Wilen , S. " Stereochemistry of Organic Compounds ", John Wiley & Sons , Inc ., 1994, p. 322). 부분입체이성질체 화합물들은 비대칭 화합물과 거울상으로 순수한 키랄 유도화 시약, 예를 들면 멘틸 유도체와 반응으로 형성된 후, 부분입체이성질체를 분리하고, 가수분해하여 순수한 또는 풍부한 거울상체를 만든다. 광학적 순도를 결정하는 방법은 염기 존재하에 멘틸 에테르, 가령, (-)멘틸 클로로포르메이트와 같은 키랄 에스테르, 또는 Mosher 에스테르, 라셈체 혼합물의 α-메톡시-α-(트리플로오르메틸)페닐 아세테이트(Jacob III . J. Org . Chem ., (1982) 47:4165)를 만들고, 두 가지 회전억제이성질체(atropisomeric) 거울상체 또는 부분입체이성질체의 존재에 대해 ¹H NMR 스펙트럼을 분석하는 것이 관련된다. 회전억제이성질체 화합물의 안정한 부분입체이성질체는 회전억제이성질체 나프틸-이소퀴놀린의 분리를 위한 방법에 따라 정상-상 및 역상 크로마토그래피에 의해 구별 및 분리될 수 있다(WO 96/15111). 방법 (3)에 의해, 두 가지 거울상체의 라셈체 혼합물은 키랄 정지 상을 이용한 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다(" Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough , Ed ., Chapman and Hall , New York ; Okamoto , J. of Chromatogr., (1990) 513:375-378). 풍부한 또는 순수분리된 거울상체는 비대칭 탄소원자를 가진 다른 키랄 분자를 구별하는데 이용되는 방법, 가령, 광학적 회전 및 원편광 이색성과 같은 방법으로 구별될 수 있다.

화학식 I의 화합물로 처리 방법

본 발명의 화합물은 AKT 단백질 키나제, 티로신 키나제, 추가 세린/트레오닌 키나제, 및/또는 이중 특이성 키나제의 조절 또는 제어에 의해 중재된 질환 또는 장애를 치료하기 위한 예방 또는 치료제로써 이용될 수 있다. 본 발명에 따라 치료될 수 있는 AKT 단백질 키나제 매개된 질환에는 염증, 과다증식성 심혈관 질환 및 장애, 신경퇴행성 질환 및 장애, 부인과 질환 및 장애 그리고 피부 질환 및 장애를 포함하나 이에 한정되지 않는다.

한 구체예에서, 상기 약학 조성물은 다음의 나열된 범주의 암을 포함하는 과다증식성 장애 치료를 위한 것이다: (1) 심장: 육종(혈관육종, 섬유육종, 횡문근육종, 지방육종), 점액종, 횡문근종, 섬유종, 지방종 및 기형종; (2) 폐: 기관지 암종(편평상피세포, 미분화 소(small) 세포, 미분화 거대 세포, 선암), 폐포(세관지) 암종, 기관지선종, 육종, 림프종, 연골성 과오종, 중피종, 비-소 세포 폐, 소 세포 폐; (3) 위장: 식도(편평상피 세포 암종, 선종, 평활근육종, 림프종), 위(암종, 림프종, 평활근육종), 췌장(도관 선종, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트리노마, 암양종 종양, vip종), 소장(선종, 림프종, 암양종 종양, Karposi 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경섬유종, 섬유종), 대장(선종, 관 선종, 융모 선종, 과오종, 평활근종); (4) 비뇨생식기관: 신장(선종, Wilm 종양[신아세포종], 림프종, 백혈병), 방광 및 요도(평편상피 세포 암종, 일과성 세포 암종, 선종), 전립선(선종, 육종), 고환 (고환종, 기형종, 배 암종, 기형암종, 융모막암종, 육종, 간질 세포 암종, 섬유종, 섬유선종, 유선종, 지방종); (5) 간: 간암(간세포암종), 담관암, 간모세포종, 혈관육종, 간세포선종, 혈관종; (6) 뼈: 골원성 육종(골육종), 섬유육종, 악성 섬유성조직구종, 연골육종, Ewing 육종, 악성 림프종(망상 세포 육종), 다발성 골수종, 악성 거대 세포 종양 척색종, 골연골종(골연골 외골증), 양성 연골종, 연골모세포종, 연골점액섬유종, 골의 골종 및 거대 세포 종양; (7) 신경계: 두개골(골종, 혈관종, 과립종, 황색종, 변성형 골염), 뇌막(뇌막종, 뇌막육종, 다형성아교모세포종), 뇌(성상세포종, 수질아세포종, 신경교종, 상의세포종, 생식세포종양 [송과선종양], 교아종 다중형(multifonn). 핍지교종, 신경초종, 망막아종, 선천성 종양), 척추신경섬유종, 수막종, 신경교종, 육종); (8) 부인과: 자궁(내피 암종), 경부(경부 암종, 전암 경부 형성장애), 난소(난소 암종[장액성 낭선암종, 점액성 낭선암종, 미분류 암종], 과립막·난포막 세포종양, Sertoli-Leydig 세포 종양, 미분화세포종, 악성 기형종), 음문(평편세포암종, 상피세포내암종, 선종, 섬유육종, 흑색종), 질 (투명세포 암종, 평편세포암종, 포도송이형 육종(배아 횡문근육종), 나팔관(암종); (9) 혈관: 혈액(골수성 백혈병[급성 및 만성], 급성 림프모세포 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 척수증식성 질환, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군), Hodgkin's 질환, 비-호지킨 림프종[악성 림프종]; (10) 피부: 진행성 흑색종, 악성 흑색종, 기저 세포 암종, 평편 세포 암종, Karposi 육종, 이상한 모양의 사마귀점, 지방종, 혈관종, 피부섬유종, 켈로이드, 건선; (11) 부신: 신경모세포종; (12) 유방: 전이성 유방; 유방 선종; (13) 결장; (14) 구강; (15) 모(Hairy) 세포 백혈병; (16) 머리 및 목; (17) 그리고 난치성 전이 질환을 포함하는 기타 질환: Kaposi 육종; Bannayan-Zonana 증후군; 그리고 다른 종류의 과다증식성 장애중 Cowden 질환 또는 Lhermitte-Duclos 질환.

본 발명의 화합물 및 방법은 류마티스 관절염, 골관절염, Chron 질환, 혈관 섬유정, 안과 질환(가령, 망막 혈관형성(vascularisation), 당뇨성 망막증, 노인성 시력감퇴, 시력감퇴 등), 다발성 경색, 비만, 알츠하이머 질환, 재협착증, 자가면역 질환, 알레르기, 천식, 자궁내막증, 아테롬성 동맥경화증, 정맥 접합 협착, peri-문합성 보철 접합 협착증, 전립선 비대, 만성 폐색성 폐 질환, 건선, 조직 손상으로 인한 신경 손상 저해, 반흔 조직 형성(상처 치유에 도움이 됨), 다발성 경색, 염증 장 질환, 감염, 특정 세균, 바이러스, 레트로바이러스 또는 기생충 감염(아포톱시스 증가에 의한), 폐질환, 신생물, 파킨슨 질환, 이식 거부(면역억제제로써), 폐혈증 등의 질환 및 상태 치료에도 이용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 다른 측면은 AKT 단백질 키나제에의해 중재된 포유류내 질환 또는 의학적 상태를 치료하는 방법을 제공하는데, 이 방법은 상기 장애의 치료 또는 예방에 효과적인 양의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 포유류에 투여하는 것을 포함한다.

이와 같은 양에 상응하는 화학식 I의 화합물의 양은 특정 화합물, 질환 상태 및 이의 심각성, 치료를 요하는 포유류의 실체(가령, 체중)과 같은 인자들에 따라 다양할 수 있지만, 당업자에 의해 일상적으로 결정될 수 있다.

본 발명은 AKT 단백질 키나제-매개된 질환의 치료에 이용되는 화학식 I의 화합물을 제공한다.

본 발명의 추가 측면은 치료법 가령, AKT 단백질 키나제-매개된 질환의 치료 또는 예방을 위한 약물 제조에 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다.

복합요법( COMBINATION THERAPY )

본 발명의 화합물은 하기에서 설명되는 것과 같이, 하나 또는 그 이상의 추가 약물과 복합되어 이용될 수 있다. 제 2 약물의 약량은 임상적으로 이용되는 약량에 근거하여 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 화합물과 제 2 약물의 비율은 투여 개체, 투여 경로, 표적 질환, 임상적 상태, 복합 및 기타 인자들에 따라 적절하게 결정될 것이다. 투여 개체가 인간인 경우, 제 2 약물은 본 발명의 화합물 중량에 0.01 내지 100 중량부의 양으로 이용될 수 있다.

약학적 복합 조제물의 제 2 화합물 또는 약량 섭생은 본 발명의 화합물과 서로 역효과를 가지지 않도록 본 발명의 화합물에 보완적 활성을 가진다. 이와 같은 약물은 의도된 목적에 효과적인 양으로 복합되어 적절하게 존재한다. 따라서, 본 발명의 또 다른 측면은 여기에서 설명된 것과 같이 제 2 약물과 복합하여 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물과 추가 약리학적 활성 약물은 하나의 약학 조성물로 함께 투여되거나 별도로 투여될 수 있는데, 별도로 투여되는 경우, 각각 동시에 또는 연속적으로 투여될 수 있다. 이와 같은 연속 투여는 근접한 시간내 또는 시간을 두고 일어날 수 있다. 본 발명의 화합물과 제 2 약물의 양 및 상대적인 투여 시기는 원하는 복합 치료요법적 효과를 얻을 수 있도록 선택될 수 있다.

복합 요법은 “시너지”를 제공하고, “시너지”를 증명할 수 있는데, 가령, 활성 성분들이 함께 투여되었을 때 수득되는 효과는 화합물들이 별도로 이용되었을 때 얻어지는 효과의 합보다 크다. 활성 성분들이: (1) 함께 조제되어 투여되거나 복합된 단위 약형 조제몰내 동시에 운반될 때; (2) 별도 조제물이 번갈아 또는 나란이 제공될 때; 또는 (3) 일부 다른 섭생에 의해 제공될 때, 시너지 효과가 수득될 수 있다. 대체 요법으로 제공되는 경우, 화합물이 연속적으로 운반 투여될 때 가령, 별도의 주사기로 상이한 주사에 의해 제공될 때, 시너지 효과가 얻어질 수도 있다. 일반적으로, 대체 요법동안, 각 활성 성분의 효과적인 약량은 순차적으로 가령, 연속적으로 투여되나, 복합 요법에서, 두 개 또는 그 이상의 활성 성분의 효과적인 약량은 함께 투여된다.

투여 경로

본 발명의 화합물은 치료될 상태에 적절한 임의 경로에 의해 투여될 수 있다. 적절한 경로는 경구, 장관외(피하, 근육내, 정맥, 동맥내, 뇌척수강내 그리고 경막포함), 경피, 직장, 비강, 국소(협측 및 설하를 포함), 질, 복막내, 폐 그리고 비강을 포함한다. 적절한 경로는 수용자의 상태에 따라 다양할 수 있다. 화합물이 경구로 투여될 때, 화합물은 약리학적으로 수용가능한 캐리어 또는 부형제와 함께 알약, 캡슐, 정제 등 조제될 수 있다. 화합물이 장관외로 투여되는 경우, 약리학적으로 수용가능한 장관외 비이클과 단위약형 주사형으로 조제될 수 있다.

약학 조제물( PHARMACEUTICAL FORMULATIONS )

인간을 포함하는 포유류의 치료요법 처리(예방적 치료 포함)를 위하여 본 발명의 화합물을 이용하기 위하여, 약학 조성물로 표준 약전에 따라 정상적으로 조제된다. 본발명의 이와 같은 측면에 따르면, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 특정 구체예에서, 약학 조성물은 화학식 I의 화합물과 약리학적으로 수용가능한 희석제 또는 캐리어을 포함한다.

본 발명의 약학 조성물은 양호한 의학적 실시에 일치하게 양, 농도, 과정, 경로, 비이클, 투여 경로에 따라 조제되고, 약량을 정하여 투여된다. 본 내용에서 이와 같은 고려를 위한 인자들에는 치료될 특정 장애, 치료된 특정 포유류, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 물질 제공 부위, 투여 방법, 투여 일정, 그리고 의료진에 공지된 기타 인자들이 포함된다. 투여되는 화합물의 치료요법적 효과량은 이와 같은 요인에 의해 조절되며, 장애의 예방, 경감 또는 치료를 위한 최소의 필요양이 된다. 본 발명의 화합물은 약물의 용이한 제어가능한 약형을 제공하고 처방된 섭생에 환자가 적응하도록 전형적인 약형으로 조제된다.

여기에서 이용되는 조성물은 멸균되는 것이 바람직하다. 특히, in vivo 투여용으로 이용되는 조제물은 반드시 멸균되어야 한다. 이와 같은 멸균은 멸균 여과 막을 통하여 여과시켜면 바로 실시된다. 통상적으로 화합물은 고형 조성물, 동결건조된 조제물 또는 수용액으로 보관될 수 있다.

본 발명의 화합물의 약학 조제물은 다양한 경로 및 투여 타입에 따라 준비될 수 있다. 예를 들면, 원하는 순도를 가지는 본 발명의 화합물은 동결건조된 조제물, 빻은 분말 또는 수용성 용액내에서 약리학적으로 수용가능한 희석제, 캐리어, 부형제 또는 안정화제로 선택적으로 혼합될 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16 th edition , Osol , A. Ed .). 실온에서, 적정 pH, 적정 순도에서 이용되는 약형 및 농도에서 수용자에 비-독성이 되는 캐리어, 생리학적으로 수용가능한 캐리어로 혼합되어 조제될 수 있다. 조제물의 pH는 특정 용도, 화합물의 농도에 따라 주로 달라지나, 약 3 내지 약 8의 범위가 될 수 있다. 적절한 구체예는 pH 5에서 아세테이트내 조제물이다. 조제물은 통상의 용해 및 혼합 과정을 이용하여 만들어질 수 있다. 예를 들면, 벌크 약물(가령, 본 발명의 화합물 또는 화합물의 안정화된 형, 가령, 시클로덱스트린 유도체 또는 다른 공지의 복합화 물질과 복합)은 하나 또는 그 이상의 부형제 존재하에 적절한 용매에 용해된다.

이용되는 특정 캐리어, 희석제 또는 부형제는 본 발명의 화합물이 적용될 수 있는 수단 및 목적에 따라 달라질 것이다. 용매는 일반적으로 포유류에 투여되는 안정성(GRAS)으로 당업자에 의해 인지되는 용매에 근거하여 선택된다. 일반적으로 안전한 용매는 물과 같은 비-독성 수용성 용매 및 물에 용해되거나 혼합될 수 있는 다른 비-독성 용매다. 적절한 수용성 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜(가령, PEG 400, PEG 300), 등 및 이의 혼합물을 포함한다. 수용가능한 희석제, 캐리어, 및 안정화제는 이용되는 약량 및 농도에서 수용자에 비독성이어야 하고, 여기에는 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(가령, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이); 헥사메토니움 클로라이드; 벤잘코니움 클로라이드, 벤즈테오니움 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예를 들면, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 그리고 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 가령, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로블린; 친수성 폴리머, 가령, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 가령, 글리신, 글루타민, 아스파라진, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드 및 포도당, 만노즈 또는 덱스트린을 포함하는 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 슈크로즈, 만나톨, 트레할로즈 또는 소르비톨과 같은 슈가; 나트륨과 같은 염-형성 카운트 이온; 금속 복합체(가령, Zn-단백질 복합체); 및/또는 TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비-이온성 계면활성제가 포함된다. 조제물에는 또한 하나 또는 그 이상의 안정화제, 계면활성제, 습식화제, 윤활제, 에멸젼화제, 현탁제, 보존제, 항산화제, 불투명 물질, 활택제, 프로세싱 보존제, 발색제, 감미제, 향료, 풍미제 및 품위있는 약물의 제공(가령, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물)하기 위해 또는 약학 산물(가령, 의약)의 제조에 도움이 되는 기타 공지의 첨가제로 포함된다. 활성 약학 성분은 준비된 마이크로캡슐내 포집될 수도 있는데, 예를 들면, 코아세르베이션(coacervation) 기술 또는 콜로이드성 약물 운반 시스템(예를 들면, 리포좀, 알부민 미소구, 마이크로에멸젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멸젼내에서 계면중합 가령, 차례로 히드록시메틸셀룰로오즈 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타아크릴레이트) 마이크로캡슐에 의해 포집될 수 있다. 이와 같은 기술은 Remington's Pharmaceutical Sciences 16 th edition , Osol , A. Ed . (1980)에 설명되어 있다. "리포좀"은 다양한 타입의 지질, 인지질 및/또는 약물(화학식I의 화합물, 선택적으로 추가 치료요법제와 함께)을 포유류로 제공하는데 유용한 계면활성제로 구성된 소포다. 리포좀 성분들은 생물학적 막의 지질 배열과 유사한 이중층 형태로 통상 배열된다.

본 발명의 지속-방출 조제물이 준비될 수 있다. 지속-방출 조제물의 적절한 예로써 화학식 I의 화합물을 포함하는 고형 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스가 포함되는데, 이 매트릭스는 형태를 갖춘 물품 가령, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태가 된다. 지속-방출 매트릭스의 예로는 폴리에스테르, 하이드로겔(가령, 폴리(2-히드록시에틸-메타아크릴레이트), 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락티드(U.S. 특허 3,773,919), L-글루탐산 및 감마-에틸-L-글루타메이트의 코폴리머, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해가능한 락트산-글리콜산 코폴리머, 가령, LUPRON DEPOT™(락트산-글리콜산 코폴리머 및 루프로리드 아세테이트로 구성된 주사가능한 마이크로스페어) 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산이 포함된다.

본 발명의 화합물의 약학 조성물은 멸균 주사용 수용성 또는 유질성(oleaginous) 현탁액과 같은 멸균된 주사가능한 조제물의 형태가 될 수 있다. 이와 같은 현탁액은 적절한 상기에서 언급된 분산액 또는 습윤제를 이용하여 당분야에 공지된 방법에 따라 조제될 수 있다. 멸균된 주사가능한 조제물은 1,3-부텐디올내 용액과 같이, 비-독성 장관외 수용가능한 희석액 또는 용매에 멸균된 주사용 용액 또는 현탁액이거나 동결건조된 분말로 준비된다. 이용될 수 있는 수용가능한 비이클 및 용매는 물, 링거 용액 및 등장성 염화나트륨 용액이다. 추가로, 멸균된 고정 오일이 용매 또는 현탁 매질로 통상적으로 이용될 수 있다. 이와 같은 목적을 위하여, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함하는 임의의 부드러운 고정된 오일이 이용될 수 있다. 추가로, 올레산과 같은 지방산이 주사용 준비물에 이용될 수도 있다.

장관외 투여에 적절한 조제물에는 항산화제, 완충제, 세균발육억제제 및 조제물이 수용체의 혈액과 등장성을 이루도록 만드는 용질이 포함된 수용성 및 비수용성 멸균 주사용액; 그리고 현택제 및 농후제를 포함할 수 있는 수용성 및 비-수용성 멸균 현탁액이 포함된다.

본 발명의 조성물은 경구 용도에 적합한 형태(예를 들면, 정제, 로젠지, 경질 또는 연질 캡슐, 수용성 또는 오일 현탁액, 에멸젼, 분산가능한 분말 또는 과립, 시럽 또는 엘륵시르), 국소용에 적합한 형태(예를 들면, 크림, 연고, 젤 또는 수용성 또는 오일성 용액 또는 현탁액), 흡입(inhalation) 투여에 적합한 형태(예를 들면, 미세하게 분할된 분말 또는 액체 에어로졸), 통기(insufflation)에 의한 투여에 적절한 형태(예를 들면, 분할된 분말)가 될 수 있다.

정제 조제물에 적절한 약리학적으로 수용가능한 부형제에는 예를 들면, 락토즈, 탄산나트륨염, 인산칼슘 또는 탄산칼륨염과 같은 비활성 희석제; 옥수수 전분 또는 알제닌산과 같은 과립화 및 붕해제; 전분과 같은 결합제; 스테아레이트 마그네슘, 스테아린 산 또는 활석과 같은 윤활제; 에틸 또는 프로필 p-히드록시벤조산염과 같은 보존제; 아스코르브산과 같은 항-산화제가 포함된다. 정제 조제물은 피복되지 않거나, 또는 조제물의 붕해 및 위장관내에서 활성 성분의 연속적인 흡수를 변형시키거나 또는 조제물의 안정성 및/또는 외양을 개선시키기 위하여, 당분야에 공지된 과정 및 통상의 피복제를 이용하여 피복될 수 있다.

경구로 이용을 하기 위한 조성물은 경질 젤라틴 캡슐의 형태가 될 수 있는데, 이때 활성 성분은 비활성 고체 희석제 예를 들면, 탄산칼슘, 인산칼륨 또는 카올린과 혼합되거나 경질 젤라틴 캡슐 형태가 될 수 있는데, 이때 활성 성분은 물과 혼합되거나 또는 땅콩 오일, 액체 파라핀 또는 올리브 오일과 같은 오일과 혼합된다.

수용성 현탁액은 일반적으로 하나 또는 그 이상의 현탁제와 함께 미세하게 분말화된 형태의 활성 성분을 포함하는데, 이때 현탁제는 카르복시메틸셀룰로오즈 나트륨, 메틸셀룰로오즈, 히드록시프로필메틸셀룰로오즈, 알지네이트 나트륨염, 폴리비닐-피롤리돈, 트라가탄 검, 아카시아 검; 레시틴 또는 지방산과 알킬렌 산화물의 응축 산물(가령, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트) 또는 에틸렌 산화물과 장쇄 지방족 알코올의 응축 산물, 가령, 헵타데카에틸렌옥시세탄올, 또는 폴리옥시에틸렌 솔비톨 모노올레이트와 같은 헥시톨과 지방산으로부터 유도된 부분적 에스테르와 에틸렌 산화물의 응축 산물, 또는 지방산과 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르와 에틸렌 산화물의 응축 산물, 예를 들면 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레이트와 같은 분산 또는 흡윤제를 포함한다. 수용성 현탁액은 또한 하나 또는 그 이상의 보존제(가령, 에틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트), 항산화제(아스코르브산과 같은), 발색제, 풍미제 및/또는 감미제(슈크로즈, 사카린 또는 아스파르탐)을 포함할수도 있다.

오일 현탁액은 활성 성분을 식물성 오일(에피토프 아라키스 오일, 올리브 오일, 참깨오일 또는 코코넛 오일) 또는 미네랄 오일(예를 들면, 액체 파라틴)에 현탁시켜 조제될 수 있다. 오일 현탁액에는 밀납, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올과 같은 농후제가 포함될 수도 있다. 상기에서 언급된 감미제 및 풍미제가 첨가되어 맛이 좋은 경구 조제물이 제공될 수도 있다. 이들 조성물에는 아스코르브산과 같은 항-산화제가 추가되어 보존될 수도 있다.

물의 첨가에 의한 수용성 현탁액에 적절한 분산가능한 분말 및 과립에는 활성 성분과, 분산 또는 습윤제, 현탁제 및 하나 또는 그 이상의 보존제가 함께 포함된다. 적절한 분산 또는 습윤제 및 현탁제에 대해서는 이미 상기에서 예를 제시하였다. 감미제, 풍미제, 그리고 발색제와 같은 추가 부형제가 존제할 수도 있다.

본 발명의 약학 조성물은 친수성(oil-in-water) 에멸젼 형태가 될 수 있다. 오일상은 식물성 오일, 에피토프 올리브 오일 또는 아라키스 오일 또는 액체 파라핀과 같은 미네랄 오일 또는 이들의 혼합물이 될 수도 있다. 적절한 에멸젼화 물질은 에를 들면 자연적으로 생성되는 검 예를 들면, 아카시아 또는 트라가탄 검, 자연적으로 생성되는 포스파티드 가령, 소이빈, 레시틴, 에스테르 또는 지방산과 헥시톨 무수물(예를 들면, 모노올레이트 소르비탄)로부터 유도된 부분 에스테르 및 이와 같은 부분적 에스테르와 에틸렌 산화물과의 응축 산물, 가령, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트가 될 수 있다. 에멸젼에는 감미제, 풍미제 및 보존제가 포함될 수도 있다.

시럽 및 엘륵시르는 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 아스파르탐 또는 슈크로즈와 같은 감미제로 조제될 수 있으며, 그리고 자극완화제, 보존제, 풍미제 및/또는 발색제를 포함할 수 있다.

좌약 조제물은 활성 성분을 실온에서는 고체가 되나 직장 온도에서 액체가 되어, 직장에서 약물이 방출되도록 용해되는 적절한 비-자극 부형제와 혼합시켜 만들 수 있다. 적절한 부형제에는 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜이 포함된다. 질 투여에 적절한 조제물은 당분야에 공지된 적절한 캐리어에 활성 성분이 포함된, 질 좌약, 탐폰, 크림, 겔, 고약(pastes), 포상(foam) 형태 또는 스프레이 조제물로 제공될 수도 있다.

예를 들면, 크림, 연고, 겔 및 수용성 또는 오일 용액 또는 현탁액과 같은 국소용 조제물은 당분야에 공지된 통상적인 과정을 이용하여 통상의, 국소적으로 수용가능한 비이클 또는 희석제로 활성 성분을 조제하여 수득되는 것이 일반적이다.

경피 투여를 위한 조성물은 당분야에 공지된 경피 피부 패취형태가 될 수 있다.

폐내로 또는 비강 투여에 적절한 조제물은 0.1 내지 500 미크론(0.1 내지 500 미크론 범위에서 0.5 미크론, 1 미크론, 30 미크론, 35 미크론, 및 기타 미크론씩 증가된 입자 크기 포함) 범위의 입자 크기를 가지는데, 이 조제물은 비강 통로를 통한 빠른 흡입에 의해 또는 입을 통한 흡입에 의해 폐포에 도달되도록 투여된다. 적절한 조제물에는 활성 성분의 수용성 또는 오일 용액이 포함된다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적합한 조제물은 통상의 방법에 따라 조제되고, 그리고 하기에서 설명된 것과 같이 장애의 치료 또는 예방을 위해 이용되는 화합물과 같은 기타 치료요법제와 함께 운반될 수 있다.

사용을 위한 약학 조성물(또는 조제물)은 약물을 투여하는데 이용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 예를 들면, 배포용 물건에는 적절한 형태의 약학 조제물이 배치되도록 용기를 포함할 수 있다. 적절한 용기는 당분야에 공지되어 있으며, 병(플라스틱 및 유리), 사세, 앰플, 플라스틱 주머니, 금속 실린더 및 이와 유사한 재료가 포함된다. 또한 용기에는 포장 내용물에 부주의한 접근을 차단하기 위하여 위조 방지 조립이 포함된다. 추가로, 용기에는 용기 내용물을 설명하는 라벨이 부착된다. 라벨에는 적절한 경고문이 포함될 수도 있다. 조제물은 단위-약량 또는 다중-약량 용기로 포장될 수 있는데, 예를 들면, 밀봉된 앰플 및 바이알이 되며, 그리고 멸균 액체 캐리어 예를 들면, 사용직전 주사용 물의 추가를 요구하는 냉동-건조된(동결건조된) 상태로 보관될 수 있다. 즉석 주사용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 이미 설명된 종류의 정제로부터 준비된다. 적절한 단위 약형 조제물에는 상기에서 언급된 활성 성분의 일일 약량 또는 단위 일일 하위 약량이 포함되거나 이의 적절한 분량이 포함된다.

본 발명은 추가로 상기에서 정의된 최소 한 가지 활성 성분과 수의학적 캐리어를 함께 포함하는 수의학적 조성물을 제공한다. 수의학적 캐리어는 수의학 분야에 수용가능한 또는 비활성의 고체, 액체 또는 기체 물질이 되며, 조성물의 투여 목적에 유용하고, 활성 성분과 양립가능한 물질을 말한다. 이와 같은 수의학적 조성물은 장관외, 경구 또는 임의의 기타 원하는 경로를 통하여 투여될 수 있다.

단일 약형을 만들기 위하여, 하나 또는 그 이상의 부형제와 복합되는 본 발명의 화합물의 양은 치료될 개체, 장애 또는 질환의 중증도, 투여 경로, 화합물의 성질 및 처방의사의 판단에 따라 필수적으로 달라질 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명의 화합물의 적정양이 이를 요하는 포유류에 투여된다. 한 구체예에서, 투여는 일일 체중 kg당 약 0.001 mg/kg 내지 약 60 mg/kg 사이에서 실시된다. 또 다른 구체예에서, 투여는 일일 체중 kg당 0.5 mg/kg 내지 약 40 mg/kg 범위에서 실시된다. 일부 경우에, 상기 범위 하한 아래의 약량 수준이 더 적합하며, 다른 경우에는 임의 유해한 부작용이 없다면 더 높은 약량이 이용되며, 이 경우, 더 높은 약량은 하루를 통하여 몇 번의 작은 약량으로 나누어 투여될 수 있다. 투여 경로 및 투약 섭생에 대한 추가 정보는 Chapter 25.3 in Volume 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry ( Corwin Hansen ; Chairman of Editorial Board ), Pergamon Press 1990을 참고하며, 이 내용은 참고문헌으로 첨부된다.

제조 제품( ARTICLES OF MANUFACTURE )

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기에서 언급된 장애 치료를 위해 유용한 물질들이 포함된 제조품 또는“키트”가 제공된다. 한 구체예에서, 키트는 본 발명의 화합물을 포함하는 용기를 포함한다. 적절한 용기는 예를 들면, 병, 바이알, 주사기, 블리스터 팩 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재질로 만들어질 수 있다. 용기는 질환을 치료하는데 효과적인 본 발명의 화합물 또는 이의 조제물을 담고 있으며, 멸균된 접근 포트(가령, 용기는 피하 주사 바늘로 찌를 수 있는 마개를 가진 정맥용 주머니 또는 바이알이 될 수 있음)를 가진다.

키트는 또한 용기와 연합된 또는 용기위에 라벨 또는 포장 삽입물을 더 포함할 수 있다. “포장 삽입물(package insert)”이란 치료산물의 상업적 포장에 통상적으로 포함된 도구를 말하는데, 여기에는 이와 같은 치료산물의 이용과 연관된 지시내용, 용도, 약량, 투여, 금기 및/또는 경고에 대한 정보가 포함된다. 한 구체예에서, 라벨 또는 포장 삽입물에는 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물이 예를 들면, AKT 키나제에 의해 중재되는 장애를 치료하는데 이용될 수 있다고 명시되어 있다. 라벨 또는 포장 삽입물에는 또한 기타 장애를 치료하는데 이 조성물이 이용될 수 있다고 명시될 수도 있다.

특정 구체예에서, 키트는 본 발명의 화합물의 고체 경구 형, 예를 들면, 정제 또는 캡슐의 운반에 적절하다. 이와 같은 키트는 바람직하게는 다수의 단위 약형을 포함한다. 이와 같은 키트에는 의도된 용도의 순서대로 정렬된 약형을 가지는 카드가 포함될 수 있다. 이와 같은 키트의 예로 “블리스트 팩(blister pack)”이 된다. 블리스트 팩은 포장 분야에 잘 공지된 것이며, 약물 단위 약형 포장에 널리 이용된다. 원하는 경우, 메모리 보조물 가령, 숫자, 메모 또는 다른 표시 및 약형의 투여가 기록된 처리 일정의 날짜를 표시하는 달력와 함께 제공될 수 있다.

또 다른 구체예에 따라, 키트는 (a) 본 발명의 화합물이 포함된 제 1 용기; 그리고 (b) 제 2 약학 조제물이 포함된 제 2 용기를 포함하며, 이때 제 2 약학 조세물은 AKT 키나제에 의해 중재되는 장애를 치료하는데 유용한 제 2 화합물을 포함한다. 대안으로 또는 추가적으로, 키트는 약리학적으로 수용가능한 완충액, 가령, 주사용 세균발육억제수(BWFI), 인산완충염, 링거용액 및 덱스트로스 용액을 포함한 제 3 용기를 더 포함한다. 키트는 추가로 기타 완충액, 희석제, 충진제, 바늘 및 주사기를 포함하는, 사업자 및 사용자 견지에서 바람직한 기타 물질들이 포함될 수 있다.

키트에는 추가로 본 발명의 화합물 그리고 제2 약학 조성물(존재한다면) 투여를 위한 설명서가 포함된다. 예를 들면, 키트가 본 발명의 화합물을 포함하는 제 1 조성물 및 제 2 약학 조성물을 포함한다면, 키트에는 제 1과 제 2 약학 조성물의 투여를 요하는 환자에게 이들 투여가 동시, 연속 또는 별도로 실시되어야 하는지에 대한 설명서가 더 포함된다.

키트에 본 발명의 조성물 및 제 2 치료요법제가 포함된 특정 기타 구체예에서, 키트는 분할된 병 또는 분할된 포일 주머니와 같은 조성물을 따로 보관하는 용기를 포함할 수 있는데, 그러나 별도 조성물이 하나의, 분할안된 용기내에 포함될 수도 있다. 특정 구체예에서, 키트는 별도 성분들의 투여에 대한 설명서를 포함한다. 별도 성분들이 상이한 약형(가령, 경구 및 장관외)으로, 상이한 약량 투여간격으로 투여될 때, 또는 처방의사가 복합물의 개별 성분들의 적정이 바람직하다고 생각될 때 키트 형태가 특히 유익하다.

따라서, 본 발명의 추가 측면은 Akt 키나제에 의해 중재된 장애 또는 질환 치료를 위한 키트를 제공하며, 이때 키트는 a) 본 발명의 화합물 또는 이의 약리학적으로 수용가능한 염을 포함하는 제 1 약학 조성물; 그리고 b) 이의 사용 설명서를 포함한다.

특정 구체예에서, 키트는 (c) 제 2 약학 조성물을 더 포함하며, 이때 제 2 약학 조성물은 Akt 키나제에 의해 중재되는 장애 또는 질환 치료에 적절한 제 2 화합물을 포함한다. 제 2 약학 조성물을 포함하는 특정 구체예에서, 키트는 이를 요하는 환자에게 제 1과 제 2 약학 조성물의 동시, 연속 또는 별도 투여를 위한 사용설명서를 더 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 제 1 약학 조성물과 제 2 약학 조성물은 동일한 용기내에 포함된다.

화학식 I의 화합물이 포유류에 사용하는데 치료요법제로 1차적인 가치가 있지만, AKT 단백질 키나제, 티로신 키나제, 추가 세린/트레오닌 키나제, 및/또는 이중 특이성 키나제를 조절하기 위해 요구될 때마다 유용할 수 있다. 따라서, 새로운 생물학적 테스트 및 신규한 약물의 연구에 이용될 수 있는 약학적 표준으로 유용하다.

in vitro, in vivo 또는 세포주내에서 AKT 단백질 키나제, 티로신 키나제, 추가적인 세린/트레오닌 키나제, 및/또는 이중 특이성 키나제에 대하여 본 발명의 화합물의 활성이 분석될 수 있다. In vitro 분석은 키나제 활성의 저해를 결정하는 분석을 포함한다. 또 다른 in vitro 분석은 키나제에 저해물질이 결합하는 능력을 정량화하고, 그리고 결합전에 저해물질을 방사능라벨링하고, 저해물질/키나제 복합체를 분리시키고, 결합된 방사능라벨의 양을 측정함으로써 측정되거나 신규한 저해물질과 공지의 방사능리간드를 함께 항온처리하는 경쟁 실험으로 측정될 수 있다. 이와 같은 또는 다른 유용한 in vitro 및 세포 배양 분석은 당업자에 잘 알려져 있다.

본 발명은 어느 정도 특정하게 설명되고 기술되었지만, 본 내용은 예시일 뿐이며, 여기에서 청구된 본 발명의 범위 및 정신을 벗어나지 않고 당업자는 일부분의 복합 및 배열에서 상당한 변화를 재분류할 수 있다는 것을 이해해야 한다.

생물학적 실시예

AKT -1 키나제 분석

본 발명에서 설명되는 화합물의 활성은 다음의 키나제 분석에 의해 측정될 수 있는데, 이 분석은 시판되는 IMAP 키트를 이용한 형광 편광에 의해 인간 재조합 활성있는 전장 AKT-1의 형광-라벨된 펩티드의 인산화를 측정한다.

이 분석 물질들은 IMAP AKT Assay Bulk Kit, product#R8059, Molecular Devices, Sunnyvale, CA으로부터 구하였다. 키트 재료들에는 IMAP 반응 완충액(5x)이 포함된다. 희석된 1x IMAP 반응 완충액에는 10 mM Tris-HCl, pH 7.2, 10 mM MgCl₂, 0.1% BSA, 0.05% NaN₃이 포함된다. DTT는 사용직전에 최종 농도가 1mM이 되도록 통상적으로 첨가된다. IMAP 결합 완충액(5x), 및 IMAP 결합 시약도 포함된다. 결합 용액은 IMAP 결합 시약을 1x IMAP 결합 완충액 1:400 희석물로 준비될 수 있다.

형광-라벨된 AKT 기질(Crosstide)은 서열 (Fl)-GRPRTSSFAEG을 가진다. 20 μM의 저장용액(stock solution)은 1x IMAP 반응 완충액내에서 만들어진다.

이용된 플레이트는 Costar 3657 (폴리프로필렌으로 만들어지고, 흰색, v-자형 바닥을 가지는)을 포함하고, 이는 화합물 희석 및 화합물-ATP 혼합물을 준비하는데 이용된다. 분석 플레이트는 Packard ProxyPlate™-384 F이다.

이용된 AKT-1은 전장의, 인간 재조합 AKT-1으로, PDKl 및 MAP 키나제 2에 의해 활성화된 것으로 만든다.

분석을 실행하기 위해, 디메틸술폭시드(DMSO)에서 10mM의 화합물 저장용액을 준비하였다. 저장용액과 기준 화합물을 DMSO로 1:2로 9회 연속적으로 희석하여(10 ㎕ 화합물 + 10 ㎕ DMSO), 원하는 약량 범위에 대해 50x 희석물을 제공한다. 그 다음, 2.1-㎕ 화합물 DMSO 분취물을 Costar 3657 플레이트로 옮겼고, 이 플레이트는 1mM DTT가 포함된 1x IMAP 반응 완충액내 10.4 μM ATP 50㎕을 포함한다. 완전하게 혼합시킨 후, 2.5-㎕ 분취액을 ProxyPlate™-384 F 플레이트로 옮겼다.

200 nM의 형광-라벨된 펩티드 기질과 4 nM AKT-1을 포함하는 용액 2.5㎕ 분취물을 첨가함으로써 분석이 시작된다. 플레이트는 1000g에서 1분간 원심분리시키고, 실온에서 60분간 항온처리된다. 15 ㎕의 결합 용액을 첨가하여 반응을 중단시키고, 다시 원심분리시키고, 실온에서 추가 30분 항온처리한 후에 Victor 1420 상에서 판독한다. 다중라벨 HTS 카운터는 형광 편광을 측정하도록 형성되었다.

실시예 1의 화합물을 상기 테스트에서 검사하였고, 500 nM 미만의 IC₅₀ 값을 가진다는 것이 밝혀졌다.

예비 실시예

본 발명을 설명하기 위하여, 다음의 실시예가 포함된다. 그러나, 이 실시예는 본 발명을 제한시키는 것이 아니며, 단지 본 발명의 실시 방법을 제안하기 위한 의도라는 것을 이해할 것이다. 당업자는 설명된 화학 반응은 본 발명의 화합물을 준비하기 위한 대체 방법에 바로 적용시킬 수 있으며, 이 또한 본 발명의 범주내에 속한다는 것을 인지할 것이다. 예를 들면, 본 발명의 화합물의 합성은 당업자에 명백한 변형에 의해 성공적으로 준비될 수 있는데, 예를 들면, 여기에서 설명된 것 이외에 당분야에 공지된 임의의 적절한 시약들을 이용하거나 및/또는 반응 조건의 일상적인 변형에 의해 준비될 수 있다. 대안으로, 당분야에 공지된 다른 반응들도 본 발명의 화합물을 준비하는데 이용될 수 있다는 것을 인지할 것이다.

하기에서 설명된 실시예에서, 다른 언급이 없는 한, 모든 온도는 섭씨를 말한다. 시약들은 Aldrich Chemical Company, Lancaster, TCI 또는 Maybridge와 같은 시판 회사로부터 구입하고, 다른 명시가 없는 한, 추가 정제없이 이용되었다. 테트라하이드로퓨란("THF"), 디클로로메탄("DCM"), 톨루엔 및 디옥산은 완전히 밀봉된 병으로 Aldrich사로부터 구입한 것이며, 받은 그대로 이용되었다.

하기에서 설정된 반응은 일반적으로 질소 또는 아르곤의 양성 압력하에, 또는 무수 용매내 건조 튜브(다른 언급이 없는 한)에서 실행되었으며, 반응 플라스크는 전형적으로 기질 및 시약들을 주사기를 통하여 투입하기 위해 고무 격막이 고정되어 있다. 유리그릇들은 오븐 건조 또는 열 건조시켰다.

¹H NMR 스펙트럼은 400 MHz에서 작용되는 Varian 기구상에서 기록되었다.

기준 표준으로 테트라메틸실란(0.00ppm) 또는 잔류 용액(CDCl₃,7.25 ppm; CD₃OD, 3.31 ppm; D₂O 4.79 ppm; d₆-DMSO 2.50 ppm)을 이용하여, CDCl₃, CD₃OD, D₂O 또는 d₆-DMSO 용액(ppm으로 기록)으로 ¹H NMR 스펙트럼을 수득하였다. 피크 다중성이 기록되는 경우, 다음의 약어들이 이용된다: s (일중항), d (이중항), t (삼중항), m (다중항), br (확장된), dd (이중항의 이중항), dt (삼중항의 이중항). 결합 상수는 제공되는 경우 Hertz (Hz)로 기록된다.

실시예 1

(S)-2-(4- 클로로 -3- 플로오르페닐 )-1-(4-((5R,7R)-7- 하이드록시 -5- 메틸 -6.7-디하이드로-5H- 시클로펜타[d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-일)-3-((1r,4S)-4- 메톡시시클로헥실아미노 )프로판-1-온

단계 1 : 에틸 푸레게네이트(130 g, 662 mmol)에틸 아세테이트 ("EtOAc"; 900 ㎖) 용액은 건조 얼음냉각 이소프로판올 조를 이용하여 -78℃로 냉각되었다. 이 혼합물은 반응물이 퍼플색으로 변할 때 까지 오존 분해를 받았다. 이때, 오존 생성이 중단되고, 반응물을 드라이-아이스 조에서 빼내었다. 황색으로 변할 때까지 반응 혼합물에 산소 버블이 제공되었다. 반응 혼합물은 진공하에 농축되었으며, 생성된 잔기는 빙초산(400 ㎖)에 용해되었다. 용액은 0℃로 냉각되었고, Zn 분진(65 g, 993 mmol)이 30분간에 걸쳐 일부분씩(portionwise) 첨가되었다. 그 다음 반응물은 2시간동안 교반되도록 하였고, 이때 아연 분진을 제거하기 위하여 반응물은 셀라이트 패트를 통하여 여과되었다. 아세트산은 수용성 NaOH와 NaHCO₃를 이용하여 pH7로 중화되었고, 에테르(3 X 800 ㎖)로 추출되었다. 복합된 유기물은 소금물, MgSO₄로 건조되었고, 농축시키면, 액체로된 (2R)-에틸 2-메틸-5-옥소시클로펜탄카르복실레이트(107 g, 95%)를 얻었다.

단계 2 : KOH (8.3 g, 147.9 mmol)의 물(60 ㎖)을 (2R)-에틸 2-메틸-5-옥소시클로펜탄카르복실레이트(20 g, 117.5 mmol) 및 티오우레아 (9.2 g, 120.9 mmol)의 혼합물 에탄올 (100 ㎖) 용액에 첨가하였다. 혼합물은 10시간 동안 재환류되었다. 냉각 후, 용매는 제거되었다. 생성된 잔기는 0℃에서 농축 HCl(12 ㎖)로 중화되었고, DCM (3 X 150 ㎖)로 추출되었다. 용매는 제거되었고, 생성된 잔기는 헥산/에틸 아세테이트 (2:1)로 용출시켜, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제되면, (R)-2-멀캅토-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-올(12g,56%)을 얻었다. MS (APCI+) [M+H] +183.

단계 3 : 라니-니켈(15 g) 과 NH₄OH (20 ㎖)를 (R)-2-멀캅토-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-올(12 g, 65.8 mmol) 증류수(100 ㎖) 현탁액에 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 재환류시키고, 그 다음 여과시켰다. 여과물을 농축시키면, (R)-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-올(9.89g, 99%)이 제공된다. MS (APCI+) [M+H] +151.

단계 4와 5는 (R)-에틸 2-메틸-5-옥소시클로펜탄카르복실레이트를 출발물질로 하는 (R)-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-올의 대체 합성법을 설명한다.

단계 4 : 암모니움 아세테이트 (240 g, 3114 mmol)를 (R)-에틸 2-메틸-5-옥소시클로펜탄카르복실레이트 (106.0 g, 622.8 mmol)의 MeOH (1.2 L) 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물은 질소하에 20시간 동안 실온에서 교반되었고, 그리고 tlc 및 hplc로 반응이 완료되었음을 결정하였다. 반응 혼합물을 농축시켜, MeOH를 제거하였다. 생성 잔기는 DCM에 용해시키고, H₂O (2 X), 소금물(1X)로 세척시킨 후, 건조시키고(Na₂SO₄), 여과시키고, 농축시켜, 오일로 된 (R)-에틸 2-아미노-5-메틸시클로펜트-l-텐 카르복실레이트 (102 g, 97% 수율)을 얻었다. LC/MS (APCI+) m/z 170 [M+H]+.

단계 5 : (R)-에틸 2-아미노-5-메틸시클로펜트-1-엔 카르복실레이트 (161.6 g, 955 mmol) 및 암모니움 포름산염(90.3 g, 1433 mmol) 포름아미드(303.5 ㎖, 7640 mmol)를 포함하는 용액을 내부 온도 150℃까지 가열시키고, 17시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물은 냉각되고, 2L 단일 nextracted 플라스크로 옮겼다. 그 다음 과량의 포름아미딘은 고진공 증류를 통하여 제거되었다. 포름아미딘이 나오는 것이 중단되면, 증류 포트안에 남아있는 오일은 DCM에 용해시키고, 소금물(3 X 200 ㎖)로 세척시켰다. 복합된 수용성 세척물은 DCM으로 추출하였다. 복합된 유기 추출물을 건조시키고(Na₂SO₄), 여과시키고, 그리고 농축시켰다. 생성된 오일을 최소 DCM에 용해시키고, 이 용액은 분리 펀넬을 이용하여 교반된 에테르 용액(약 5 용적의 에테르 vs. DCM 용액)에 첨가되면, 약간의 침전물이 형성되게 된다. 이 침전물은 중간 프릿 펀넬(frit funnel)을 통하여 여과에 의해 제거되고, 이를 에테르로 세척하고 처리된다. 여과물을 농축시키고, 에테트로 2회이상 반복 분쇄하였다. 산물을 고진공 라인에서 건조시키면, 풀같은 고체로 된 (R)-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-올(93.23 g, 65.0% 수율)을 얻는다. LC/MS (APCI-) m/z 149.2.

단계 6 : 순수 POCl₃ (463.9 ㎖, 5067 mmol)을 (R)-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-올(152.2 g, 1013 mmol)의 DCE (1.2 L) 0℃ 용액에 펀낼을 이용하여 서서히 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 데우고, 그 다음 70분간 교반하에 재환류까지 가열시켰다. HPLC에 의해 반응이 완료되었음을 결정하였다. 반응 혼합물은 실온으로 냉각시키고, 과량의 POCl₃는 다음과 같이 4부분으로 담금질되었다: 반응 혼합물을 분별 펀넬로 옮기고, 그리고 얼음조에서 냉각된 포화 NaHCO₃ 용액과 얼음이 포함된 비이커내로 드립시켰다. 반응 혼합물의 각 부분의 첨가가 완료되면, 담금질된 혼합물은 30분간 교반시켜, 분별 펀넬로 이동되기 전에 POCl₃가 완전하게 분해되도록 하였다. 혼합물을 분별 펀넬로 옮기고, DCM (2X)로 추출하였다. 복합된 추출물은 건조되고(Na₂SO₄), 여과되고, 농축되었다. 정제안된 산물은 다음과 같이 실리카겔 상에서 정제되었다: 실리카겔 (1 kg)을 상부에 모래가 얹힌, 진공하에 고정된 실리카, 3L 프릿 펀넬상에서 9:1 헥산:에틸 아세테이트로 슬러리화되었다. 정제안된 물질은 DCM/헥산 혼합물과 함께 로딩되고, 화합물은 진공하에 1L 사이드암 플라스크를 이용하여 용출되었다. 고(high) Rf 부산물이 우선적으로 용출되고, 그 다음 오일로된 (R)-4-클로로-5-메틸- 6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘(104.4 g, 61.09% 수율)가 용출되었다. 트리에틸아민(93.0 ㎖, 534 mmol)과 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (34.8 g, 187 mmol)가 (R)-4-클로로-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘(30.0 g, 178 mmol)의 n-BuOH (250 ㎖) 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 질소하에 재환류까지 가열되고, 하룻밤(17시간)동안 교반된 후, 로타배프(rotavap)상에서 농축되었다. 생성된 오일은 DCM에 용해시키고, H₂O으로 세척한 후, 건조시키고(Na₂SO₄), 여과시키고, 농축되었다. 생성된 오일은 실리카겔 상에서 우선 2:1 헥산으로 용출시키고: 산물이 깨끗하게 용출될 때까지 에틸 아세테이트로 용출시키고, 그 다음 1:1 내지 1:5의 농도차 DCM:에틸 아세테이트로 용출시켜 정제시키면, 분말형태의 (R)-tert-부틸 4-(5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (42.0 g, 74.1% 수율)이 수득된다. LC/MS (APCI+) m/z 319.1 [M+H]+.

단계 7 : 고체 77% max. m-클로로퍼벤조산("m-CPBA"; 23.9 g, 107 mmol)을 (R)-tert-부틸 4-(5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (20.0 g, 62.8 mmol)의 CHCl₃ (310 ㎖) 0℃ 냉각 용액에 일부분씩(portionwise) 첨가하였다. 반응 혼합물은 5분간 교반되고, 그 다음 실온으로 데우고, 추가 90분간 교반되었다. 7.5시간 후에 HPLC 는 유사하게 보였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰고, 그 다음 NaHCO₃ (13.2 g, 157 mmol) 및 0.5 당량의 m-CPBA가 첨가되었다. 반응 혼합물은 하룻밤(14시간) 교반되었다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, Na₂S₂O₃ (29.8 g, 188 mmol)의 H₂O (50 ㎖)용액을 첨가 펀넬을 통하여 점적하였다. 그 다음 Na₂S₂O₃ (24.6 g, 232 mmol)의 H₂O(70 ㎖) 용액이 첨가 펀넬을 통하여 점적되었다(혼합물이 균질하게 변한다). 반응 혼합물은 30분간 교반되었고, 그 다음, 혼합물은 CHCl₃ (3 X 150 ㎖)로 추출되었다. 복합된 추출물은 건조되고(Na₂SO₄), 여과되고, 농축되어, (R)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘 1-옥시드 (21.0 g, 100%)을 얻었다. LC/MS (APCI+) m/z 335.1 [M+H]+.

단계 8 : Ac₂O (77.0 ㎖, 816 mmol)를 (R)-4-(4-(tert-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘 1-옥시드 (21.0 g, 62.8 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물은 90℃ 모래 조에서 질소하에 가열되었고, 100분간 교반되었다. 반응 혼합물은 실온으로 냉각되었고, 과량의 아세트 무수물은 회전 증발을 통하여 제거되었다. 생성된 오일은 DCM에 용해되고, 그다음 얼음 포화된 Na₂CO₃에 조심스럽게 부었다. 혼합물은 DCM으로 추출하고, 그리고 복합된 추출물은 건조되고(Na₂SO₄), 여과되고, 농축되어, 포상(foam) 형태의 (5R)-tert-부틸 4-(7-아세톡시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (23.6 g, 100%)를 얻었다. LC/MS (APCI+) m/z 377.1 [M+H]+.

단계 9 : LiOH-H₂O (6.58 g, 157 mmol)를 (5R)-tert-부틸 4-(7-아세톡시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (23.6 g, 62.69 mmol)의 2:1 THF:H₂O (320 ㎖) 0℃ 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분간 교반시키고, 그 다음 실온으로 데웠다. 3시간과 4.5시간에서 LC/MS는 동일하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰고, 그 다음 포화된 NH₄Cl을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물은 5분간 교반되었고, 대부분의 THF는 회전 증발에 의해 제거되었다. 혼합물은 EtOAc (3 X 250 ㎖)로 추출되었고, 복합된 추출물은 건조되고(Na₂SO₄), 여과되고, 그리고 농축되었다. 정제안된 산물은 Biotage 65M: 4:1 DCM:에틸 아세테이트, 그 다음 1:1 내지 1:4의 그라디언트 DCM:에틸 아세테이트 상에서 플래쉬(flash)되었다. 산물이 용출되면, 그 다음 에틸 아세테이트를 컬럼을 통하여 흘려 보냈다. 그 다음 30:1 DCM:MeOH로 산물의 나머지(8.83 g)를 용출시켰다. 혼합된 분취물을 동일한 조건에서 다시-플래쉬되어 또 다른 일부분(2.99g)이 제공되었고, 이는 포상(foam) 형태의 (5R)-tert-부틸 4-(7-히드록시-5 -메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (11.82 g, 56.38% 수율)의 복합 수율을 제공하였다. LC/MS (APCI+) m/z 335.1 [M+H]+.

단계 10 : DMSO (5.45 ㎖, 76.8 mmol)의 DCM (50 ㎖) 용액을 첨가 펀넬을 통하여 염화 옥살일(3.35 ㎖, 38.4 mmol)의 DCM (150 ㎖) -78℃ 용액으로 점적하였다. 반응 혼합물은 35분간 교반되고, 그 다음 (5R)-tert-부틸 4-(7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (9.17 g, 27.4 mmol)의 DCM (80 ㎖) 용액이 첨가 펀넬을 통하여 서서히 첨가되었다. 반응 혼합물이 -78℃에서 추가 1시간 동안 교반되고, 그 다음 순수 트리에틸아민 (18.0 ㎖, 129 mmol)은 이 혼합물에 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온이 되도록 두고, 30분간 교반시켰다. H₂O가 첨가되었다. 혼합물은 DCM (3 X 200 ㎖)로 추출되고, 복합 추출물은 건조되고(Na₂SO₄), 여과되고, 진공에서 농축되었다. 정제안된 산물은 실리카겔 (Biotage 65M)상에서 정제되었다: 컬럼은 ca. 800 ㎖ 4:1 DCM:EtOAc을 흘려보내고, 그 다음 산물이 용출될 때까지 1:1 DCM:에틸 아세테이트, 그 다음 1 :4 DCM:EtOAc로 용출시켜, 포상(foam) 형태의 (R)-tert-부틸 4-(5-메틸-7-옥소-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트(7.5 g, 82.3% 수율)을 얻었다. 포상(foam)은 DCM/헥산(3 X)으로 농축시키면, 포상(foam) 이 수득되었다. HPLC >95% area. LC/MS (APCI+) m/z 333 [M+H]+.

단계 11 : 트리에틸아민(4.33 ㎖, 31.1 mmol; 사용전 30분간 질소로 가스를 뺌)과 포름산 (1.36 ㎖, 36.1 mmol; 사용전 30분간 질소로 가스를 뺌)을 (R)-tert-부틸 4-(5-메틸-7-옥소-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (9.75 g, 29.3 mmol)의 DCM (210 ㎖; 사용전 30분간 질소로 가스를 뺌) 용액에 첨가하였다. 혼합물은 5분간 교반되었고, Ru 촉매 (0.0933 g, 0.147 mmol)가 첨가되었다. 반응물은 양성 질소 압력하에 하룻밤동안(18 시간) 교반되었다. 반응 혼합물은 농축시켜 건조되고, 고 진공에서 건조되었다. 불순물은 1:1 DCM:에틸 아세테이트 500㎖가 적하된 Biotage 65M상에서 플래쉬되었고, 그 다음, 산물(두번째 스팟)까지 1:4 DCM:에틸 아세테이트로 흘러내렸고, 그 다음 순수 에틸 아세테이트까지의 그라디언트, 그 다음 25:1 DCM:MeOH로 산물의 나머지를 용출시켰다. 분취물을 복합하고, 회전 증발기상에서 농축시켰다. DCM/헥산으로부터 잔기를 다시 농축시켜, 포상(foam) 형태의 tert-부틸 4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (대부분) 및 tert-부틸 4-((5R,7S)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (소량) (9.35 g, 95.3% 수율)을 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 335 [M+H]+. ¹H NMR (CDCl₃)에서 카르비놀 메틴의 결합에 의해 88% 부분이성선택성(diastereoselectivity)이 나타났다.

단계 12 : 4-니트로벤조일 클로라이드 (4.27 g, 23.0 mmol)를 tert-부틸 4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트(7.0 g, 20.9 mmol) 및 트리에틸아민(4.38 ㎖, 31.4 mmol)의 DCM (110 ㎖) 0℃ 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤동안 교반시키고, 포화 NaHCO₃를 첨가하였다. 혼합물은 10분간 교반되고, 그 다음, DCM으로 추출되었다. 복합된 추출물은 건조되고(Na₂SO₄), 여과되고, 농축되었다. 정제안된 산물은 Biotage 65M (정제안된 산물에 적하된 3:1 헥산:에틸 아세테이트, 그 다음 2:1 헥산:에틸 아세테이트로 tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 및 일부 혼합된 분취물을 용출시켰다)상에 플래쉬되었다. 그 다음, 1:2 헥산:에틸 아세테이트을 이용하여, tert-부틸 4-((5R,7S)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트가 용출되었다. 산물을 가진 분취물은 회전 증발기에 의해 농축되어, 포상형태의 tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (8.55 g, 84.5% 수율)이 수득되었다. LC/MS (APCI+) m/z 484 [M+H]+. ¹H NMR (CDCl₃)에서 하나의 부분입체이성질체가 나타났다). 다른 부분입체이성질체를 가진 분취물을 회전 증발기로 농축시키면, 포상형태의 tert-부틸 4-((5R,7S)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.356 g, 3.52% 수율)을 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 484 [M+H]+.

단계 13에서는 (5R)-tert-부틸 4-(7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (단계 9)로부터 tert-부틸 4-((5R,7S)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트와 tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트의 또 다른 제법을 설명한다.

단계 13 : 4-니트로벤조일 클로라이드 (15.78 g, 85.03 mmol)는 (R)-tert-부틸 4-(7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (25.85 g, 77.30 mmol) 및 NEt₃ (11.73 g, 16.16 ㎖, 115.9 mmol)의 DCM (400 ㎖) 0℃ 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 5분간 교반되었다. 그 다음 혼합물을 실온으로 데우고, 하룻밤동안(17시간) 교반되었고, 그 다음 포화 NaHCO₃가 첨가되었다. 반응 혼합물은 10분간 교반되고, 분리 펀넬로 옮겨졌다. 유기 층들을 수거하고, 수용성 추출물은 DCM (2 X)으로 세척되었다. 복합된 유기 추출물은 건조되고(Na₂SO₄), 여과되고, 농축되었다. 정제안된 산물은 7:1 헥산: 에틸 아세테이트 ( 5:1 헥산: 에틸 아세테이트에서 2:1 헥산:에틸 아세테이트 내지 1 :1 헥산:에틸 아세테이트의 그라디언트)가 적하된 실리카 상에서 플레쉬되었다. 일부 맑은 tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트, 일부 맑은 tert-부틸 4-((5R,7S)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트과 일부 혼합된 분취물들이 분리되었다. 혼합된 분취물을 다시 컬럼에 얹고, 기존에 분리된 물질과 복합시켜, tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (14.27 g, 38%) 및 tert-부틸 4- ((5R,7S)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (12.58 g, 34%)을 얻었다. 4-브로모벤조일 클로라이드의 이용으로 이성질체가 약간 더 잘 분리되는 것으로 나타났다.

단계 14 : LiOH-H₂O (0.499 g, 11.9 mmol)는 tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2.30 g, 4.76 mmol)의 2:1 THF:H₂O (40 ㎖), 0℃ 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온으로 데우고, 1시간 동안 교반되었다. THF는 회전 증발에 의해 제거되었다. 포화된 NaHCO₃가 첨가되었고, 그리고 혼합물은 에틸 아세테이트로 추출되었다. 복합된 추출물을 포화된 NaHCO₃로 세척하고(1X), 건조시키고(Na₂SO₄), 여과시키고, 그리고 농축시키면 포상 형태의 tert-부틸 4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-SH-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.59 g, 100.0% 수율)을 수득한다. 워크업후 생성물의 HPLC에서 98%이상의 지역 순도가 제공되었다. LC/MS (APCI+) m/z 335 [M+H]+.

단계 15 : 4M HCl/디옥산 (11.2 ㎖, 44.9 mmol)은 tert-부틸 4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.600 g, 1.79 mmol)의 디옥산 (15 ㎖) 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 질소하에 하룻밤동안(20시간) 실온에서 교반되었다. 혼합물은 건조시키기 위해 농축되고, 고 진공 라인상에서 건조되었다. 정제안된 산물을 에테르에 현탁시키고, 초음파분쇄시키고, 5분간 교반시켰다. 질소 압력과 함께 중간 프릿 펀넬을 통하여 여과시킴으로써 고체가 분리되었고, 에테르로 헹구고, 질소 압력하에 건조시키고, 고 진공 라인상에서 추가 건조시키면, 분말로 된 (5R,7R)-5-메틸-4-(피페라진-l-일)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-7-올 디하이드로클로라이드(0.440 g, 79.8% 수율)이 수득되었다. LC/MS (APCI+) m/z 235.

단계 16 : 트리메틸아세틸 클로라이드 (1.68 g, 13.9 mmol)은 0℃에서 2-(4-클로로-3-플로오르페닐)아세트산 (2.50 g, 13.3 mmol) 및 TEA (d. 0.726; 2.00 ㎖, 14.3 mmol)의 건 THF (100 ㎖) 용액에 첨가되고, 실온에서 교반되었다. 별도 플라스크에서, n-BuLi (6.424㎖, 14.58mmol)은 -78℃에서 (R)-4-벤질옥사졸리딘-2-온 (2.47 g, 13.9 mmol)의 건 THF (100 ㎖) 용액에 첨가되었다. 반응물은 -78℃에서 20분간 교반되었고, 그 다음, (R)-4-벤질옥사졸리딘-2-온 용액은 0℃의 혼합된 무수 용액에 점적되었다. 반응물은 실온에서 하룻밤동안 교반되도록 두었다. 반응은 물로 중단시키고(100 ㎖), 에틸 아세테이트 (100 ㎖)로 희석시켰다. 층들이 분리되었고, 유기층은 소금물로 세척되고, 건조되어 (MgSO₄), 잔기로 농축되었다. 생성 잔기는 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제되어, (R)-4-벤질-3-(2-(4-클로로-3-플로오르페닐)아세틸)옥사졸리딘-2-온 (2.79 g, 8.02 mmol, 60.5% 수율)이 수득되었다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 7.37 (t, J= 8.2Hz, IH), 7.33-7.26 (m, 3H), 7.18-7.12 (m, 3H), 7.07 (d, J= 8.2Hz, IH), 4.73-4.65 (m, IH), 4.33-4.18 (m, 4H), 3.27 (dd, Jl= 3.5Hz, J2= 13.3Hz, ,1H), 2.77 (dd, Jl= 9.4Hz, J2= 13.7Hz, IH).

단계 17 : (1r,4r)-4-아미노시클로헥사놀 히드로클로라이드 (6.67 g, 44 mmol)는 DCM (100 ㎖)에 현탁되었다. Huning 염기(15 ㎖)가 첨가되었고, 촉매 4-디메틸아미노피리딘 ("DMAP")이 첨가되었다. 반응물은 5분간 교반되며, 그 다음 TBoC₂O (10.2 g, 47 mmol)이 10분에 걸쳐 일부분씩(portionwise) 첨가되었다. 반응물은 실온에서 하룻밤동안 교반되도록 두었다. 반응은 1N HCl을 첨가하여 중단시키고, 10분간 교반되도록 두었다. 유기층이 분리되었고, 수용성 층은 DCM (2 X)으로 세척되었다. 복합된 유기물은 소금물과 MgSO₄ 로 건조되고, 농축되었다. 생성된 잔기는 헥산에 현탁되고(임의 과량의 BoC₂O 제거), 여과되었다. 원하는 물질은 고체 형태의 tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥실카르바메이트 (5.1 g, 54% 수율)로 수득되었다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 4.35 (br s, 1H), 3.65-3.52 (m, 1H), 3.43 (br s, 1H), 1.99 (apparent triplet, Jl= 17.2Hz, J2= 12.1Hz, 4H), 1.49- 1.30 (m, 12H), 1.4-1.08 (m, 2H).

단계 18 : NEt₃ (d. 0.726; 4.95 ㎖, 35.5 mmol)은 실온에서 tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥실카르바메이트 (5.1 g, 23.7 mmol)의 DCM (100 ㎖) 용액으로 첨가되고, 현탁액으로 교반되었다. 반응물은 10분간 교반되고, tert-부틸디메틸실일 트리플로오르메탄술포네이트 (6.52 ㎖, 26.1 mmol)가 첨가되었고, 이때 반응물은 균질 용액이 되었고, 2시간 동안 교반되었다. 반응물은 물(50㎖)로 희석되었고, 층들은 분리되었다. 유기물은 1N HCl (2 X 50 ㎖)으로 세척되고, 건조되고 (MgSO₄), 고체로 농축되었다. 고체는 플레쉬 크로마토그래피에 의해 정제되어, (5% 에틸 아세테이트/헥산) tert-부틸 (1r,4r)-4-(tert-부틸디메틸실일옥시)시클로헥실카르바메이트 (6.54 g, 19.8 mmol, 83.8% 수율)가 수득되었다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 4.34 (br s, IH), 3.61-3.50 (m, IH), 3.4 (br s, IH), 1.97 (d, J= 12.9Hz, 2H), 1.82 (d, J= 13.7Hz, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.43-1.30 (m, 2H), 1.21-1.05 (m, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.04 (s, 6H).

단계 19 : tert-부틸 (1r,4r)-4-(tert-부틸디메틸실일옥시)시클로헥실카르바메이트 (1.00 g, 3.03 mmol)의 건 THF (50 ㎖)용액을 -78℃로 냉각시켰다. 그 다음, n-BuLi (1.27 ㎖, 3.19 mmol)이 첨가되었다. 반응물은 -40℃로 온도를 올리면서 20분간 교반되었다. 그 다음 클로로메틸 메틸 에테르 (d=1.060; 0.254 ㎖, 3.34 mmol)가 신속하고 점적되었다. 차가운 조(bath)가 제거되고, 반응물은 질소하에 데우면서 교반되었다. 반응은 물로 중단되고, 추출 작업과 플래쉬 크로마토그래피에 의해 (5% 에틸 아세테이트/헥산), tert-부틸 (1r,4r)-4-(tert-부틸디메틸실일옥시)시클로헥실(메톡시메틸)카르바메이트 (0.957 g, 2.36 mmol, 84% 수율)이 제공되었다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 4.69 (br s, 1H), 3.85-3.47 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 1.90 (d, J= 10.5Hz, 2H), 1.79 (d, J= 12.9Hz, 2H), 1.67-1.50 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.46-1.30 (m, 4H), 0.88 (s, 9H), 0.04 (s, 6H).

단계 20 : 테트라부틸암모니움 플루오르화물 (8.94 ㎖, 8.94 mmol)은 tert-부틸 (1r,4r)-4-(tert-부틸디메틸실일옥시)시클로헥실카르바메이트 (1.97g, 5.96 mmol)의 THF (50 ㎖) 용액에 첨가되었고, 하룻밤동안 40℃로 가열되었다. 반응물은 물(100 ㎖)과 에틸 아세테이트 (100 ㎖)로 희석되었다. 그 다음 층들이 분리되고, 유기물은 건조되고(MgSO₄), 오일로 농축되었다. 오일은 플레쉬 크로마토그래피에 의해 정제되어(25% 에틸 아세테이트/헥산), tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥실(메톡시메틸)카르바메이트 (1.32 g, 5.09 mmol, 85% 수율)가 수득되었다.

단계 21 : NaH (오일내에서 60%; 0.563 g, 14.07 mmol)는 tert-부틸 (1r,4r)-4-히드록시시클로헥실(메톡시메틸)카르바메이트 (3.65 g, 14.07 mmol)의 THF (50 ㎖) 용액에 첨가되고, 40℃로 가열되었다. 메틸 요오드화물 (0.878 ㎖, 14.07 mmol)은 따뜻한 교반 용액으로 첨가되었고, 하룻밤동안 60℃로 가열되었다. 반응은 물(100 ㎖)로 중단되고, 에틸 아세테이트 (100 ㎖)로 희석되었다. 그 다음 층들이 분리되었다. 유기물은 건조되고(MgSO₄), 농축되었다. 생성 잔기는 플레쉬 크로마토그래피(10% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제되어, tert-부틸 (1r,4r)-4- 메톡시시클로헥실(메톡시메틸)카르바메이트(3.51 g, 12.8 mmol, 91% 수율)가 수득되었다.

단계 22 : TiCl₄(0.207 g, 1.09 mmol)는 -78℃로 냉각된 (R)-4-벤질-3-(2-(4-클로로-3-플로오르페닐)아세틸)옥사졸리딘-2-온 (0.362 g, 1.04 mmol)과 (1r,4r)-4-메톡시시클로헥실(메톡시메틸)카르바메이트 (0.55 g, 2.01 mmol)의 건 DCM (20 ㎖) 용액에 첨가되었다. 디이소프로필에틸아민 ("DIEA"; d 0.742; 0.199 ㎖, 1.15 mmol)이 냉각 교반되는 용액에 첨가되었다. 반응물은 -78℃에서 15분간 교반되었고, 그 다음 -10℃로 데워진 후, 3시간동안 교반되었다. 반응은 NH₄Cl로 식혔다. 반응물은 DCM (50 ㎖) 및 물(50 ㎖)로 희석되었다. 그 다음 층들이 분리되었다. 수용성 층은 DCM (25 ㎖)로 추출되었고, 건조되고(MgSO₄) 그리고 오일로 농축되었다. 오일은 컬럼 크로마토그래피(10% Et₂O/헥산 내지 30% Et₂O/헥산)에 의해 정제되어, tert-부틸 (S)-3-((R)-4-벤질-2-옥소옥사졸리딘-3-일)-2-(4-클로로-3-플로오르페닐)-3-옥소프로필((1r,4S)-4- 메톡시시클로헥실)카르바메이트(0.610 g, 1.04 mmol, 99.5% 수율)이 수득되었다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 7.38-7.28 (m, 4H), 7.25-7.15 (m, 3H), 7.10 (d, J= 8.6Hz, IH), 4.65-4.56 (m, 1H), 4.15- 4.03 (m, 2H), 3.60-3.36 (m, 2H), 3.31 (s, 3H), 3.15-2.95 (m, 1H), 2.12-1.97 (m, 3H), 1.69-1.57 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.46-1.37 (m, 3H), 1.37-1.07 (m, 4H).

단계 23 : H₂O₂(0.294 ㎖, 3.06 mmol)은 LiOH-H₂O(0.0855 g, 2.04 mmol)의 THF/물(2:1, 83 ㎖) 용액에 첨가되었다. 용액은 10분간 실온에서 교반되었다. 용액은 0℃로 냉각되고, tert-부틸 (S)-3-((R)-4-벤질-2-옥소옥사졸리딘-3-일)-2-(4-클로로-3-플로오르페닐)-3-옥소프로필((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)카르바메이트 (0.600 g, 1.019 mmol)의 THF (10 ㎖) 용액으로 처리되었다. 반응물은 0℃에서 2시간 동안 교반되었고, 실온으로 데워지도록 한 후, 하룻밤동안 교반되었다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 1M Na₂SO₃ (10 ㎖)로 처리하고, 10분간 교반되었다. 반응물은 실온으로 데운 후, 10분간 교반되었다. 반응물은 농축시키고, 에틸 아세테이트 (2 X 2O㎖)로 추출되었다. 수용성 부분은 HSO₄ (s)을 이용하여 pH를 약 1 내지 약 2로 산성화시키고, 그 다음 DCM (2 X 20 ㎖)으로 추출하였다. 유기물은 복합되어, 건조되고(HSO₄), 농축되었다. 생성된 잔기는 (S)-3-(tert-부톡시카르보닐((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)아미노)-2-(4-클로로-3-플로오르페닐)프로파논산 (0.312 g, 0.726 mmol, 71% 수율)으로 제공된다. LC/MS >95% 순도, r.t. = 3.25 분, (APCI+) m/z = 430 [M+H]+.

단계 24 : (5R,7R)-5-메틸-4-(피페라진-1-일)-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-7-올 디하이드로클로라이드(0.236g, 0.768mmol), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로니움헥사플로오르포스페이트("HATU"; 0.265 g, 0.698 mmol) 및 콜리딘(0.369 ㎖, 2.79 mmol)은 (S)-3-(tert-부톡시카르보닐((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)아미노)-2-(4-클로로-3-플로오르페닐)프로파논산 (0.300 g, 0.698 mmol)의 DCM/DMF (15 ㎖, 2:1) 용액에 첨가되고, 반응물은 실온에서 하룻밤동안 교반되었다. 반응물은 물(20 ㎖)과 DCM (50 ㎖) 사이에 분할되었고, 층들은 분리되었다. 유기층은 물(2 X 10 ㎖)로 세척되었다. 수용층은 DCM (25 ㎖)으로 역 추출되었고, 건조되고(HSO₄) 그리고 오일로 농축되었다. 오일은 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어(5% MeOH/DCM), tert-부틸 (S)-2-(4-클로로-3-플로오르페닐)-3-(4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-옥소프로필((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)카르바메이트 (0.394 g, 0.610 mmol, 87.4% 수율)이 수득되었다. LC/MS > 95% 순도, r.t. = 3.83 분, (APCI+) m/z = 646.

단계 25 : 4N HCl의 디옥산 (4 ㎖, 16 mmol)은 tert-부틸 (S)-2-(4-클로로-3-플로오르페닐)-3-(4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-옥소프로필((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)카르바메이트 (0.370 g, 0.573 mmol)의 DCM (10 ㎖) 용액에 첨가되었고, 반응물은 3시간 동안 실온에서 교반되었다. 반응 내용물은 Et₂O/헥산(75 ㎖, 3:1)의 왕성하게 교반된 혼합물로 점적되어, 미세 입자의 고체가 제공되었다. 입자들은 여과되고, 건조되어 (S)-2-(4-클로로-3-플로오르페닐)-1-(4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디하이드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실아미노)프로판-1-온 디하이드로클로라이드 (0.325 g, 0.525 mmol, 91.7% 수율)가 제공되었다. LC/MS > 95% 순도, r.t. = 2.52 분, (APCI+) m/z = 546.

전술한 설명은 본 발명의 원리를 설명하기 위한 의도로만 간주된다. 더욱이, 당업자에게 수많은 변형 및 수정이 명백할 것이기 때문에, 본 발명을 상기에서 설명된 정확한 구성 및 공정에 한정되는 것은 바람직하기 않다. 따라서, 모든 적절한 변형 및 이에 등가의 것들은 다음의 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 영역에 속하는 것으로 간주될 것이다.

명세서 및 청구범위에 사용된 단어, 구성하다("comprise,"), 구성한("comprising,"), 포함하다( "include," ), 포함하는("including," 및 "includes") 는 명시된 특징, 수, 성분들 또는 단계를 명시하는 의도이나, 하나 또는 그 이상의 다른 특징, 수, 성분, 단계 또는 기들의 존재 또는 추가를 배제하는 것은 아니다.

Claims (12)

1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
   

   
2. 제1항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는, 암의 치료를 위한 약학 조성물.
3. 제1항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 치료요법적 효과량을 포함하는, 포유류에서의 염증성 질환 또는 장애, 심혈관 질환 또는 장애, 또는 신경퇴행성 질환 또는 장애의 치료를 위한 약학 조성물.
4. a) 제1항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 제1 약학 조성물; 및 b) 선택적으로 사용 설명서를 포함하는, 암, 염증성 질환, 심혈관 질환 또는 신경퇴행성 질환의 치료를 위한 키트.
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