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KR101563644B1 - Streptomyces griseus KR-CS7 as a novel strain with antifungal and enzyme activity - Google Patents

Streptomyces griseus KR-CS7 as a novel strain with antifungal and enzyme activity Download PDF

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KR101563644B1
KR101563644B1 KR1020140013773A KR20140013773A KR101563644B1 KR 101563644 B1 KR101563644 B1 KR 101563644B1 KR 1020140013773 A KR1020140013773 A KR 1020140013773A KR 20140013773 A KR20140013773 A KR 20140013773A KR 101563644 B1 KR101563644 B1 KR 101563644B1
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blight
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Abstract

본 발명은 식물 병원균에 대하여 항균 활성과 효소 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 수탁번호 KCTC18238P인 신규한 스트렙토마이세스 그리세우스(streptomyces griseus) 균주 및 이의 용도에 관한 것이다. The invention which is characterized by having antimicrobial activity and activity against phytopathogenic fungi, accession No. KCTC18238P a novel Streptomyces draw three-house (streptomyces griseus ) and uses thereof.

Description

식물 병원균에 대하여 항균 활성과 효소 활성을 갖는 신규한 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7 균주{Streptomyces griseus KR-CS7 as a novel strain with antifungal and enzyme activity}Streptomyces griseus KR-CS7 as a novel strain with antifungal and enzyme activity, which has antibacterial activity and enzyme activity against plant pathogenic bacteria,

본 발명은 식물 병원균에 대하여 항균 활성과 효소 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 수탁번호 KCTC18238P인 신규한 스트렙토마이세스 그리세우스(streptomyces griseus) 균주 및 이의 용도에 관한 것이다.
The invention which is characterized by having antimicrobial activity and activity against phytopathogenic fungi, accession No. KCTC18238P a novel Streptomyces draw three-house (streptomyces griseus ) and uses thereof.

세계적인 인구증가와 더불어 식량확보라는 문제를 해결하기 위해 농작물의 재배환경도 비약적으로 발전을 하였다. 그러나 농작물 재배시 야생동물, 해충 및 식물성 병원균 등이 생산량에 영향을 미쳐서 세계적으로 220조원에 달할 만큼 경제적으로 손실을 준다. 이 중 우리나라는 3면이 바다로 둘러싸여 있으며 국토의 65%가 산지로서 인구에 비해 땅이 좁고, 최근에는 시설재배를 이용해 원예작물의 재배 면적이 점차 증가하고 있는 추세로서, 주로 재배하는 작물은 수박, 오이, 가지, 고추, 딸기, 참외, 토마토, 멜론, 상추, 부추 등을 재배하며, 병해충에 대한 구제방법으로 유기합성 농약과 생물학적 제제(생물 농약 또는 미생물 농약)를 사용한다. 이 중 유기합성 농약은 1900년대 초에 개발된 것으로, 단기간에 작물의 생산 증대, 안정 공급, 노동력의 경감 등 효과를 볼 수 있다. 그러나 토양오염, 지하수 오염, 농산에 대한 농약축적, 저항성 병원균의 출현 등 부작용을 초래하여, 근년에 들어 선진국을 중심으로 안전 지향, 건강 지향, 자연 지향이라는 사회적 요구가 높아지고 있어 사용에 제한이 많아졌다.
In order to solve the problem of food security along with the global population increase, the cultivation environment of the crop has also developed remarkably. However, crops such as wild animals, pests, and plant pathogens affect production, resulting in economic losses of up to 220 trillion won worldwide. In Korea, the three sides are surrounded by the sea. 65% of the country is a mountainous region and the land is narrow compared with the population. Recently, the cultivation area of horticultural crops has been gradually increasing by using the cultivation of facilities. , Cucumber, eggplant, pepper, strawberry, melon, tomato, melon, lettuce and leek. Organic synthetic pesticides and biological agents (biopesticides or microbial pesticides) are used as remedies for pests. Of these, organic synthetic pesticides were developed in the early 1900s and can be used to increase crop production, stabilize supply, and reduce labor force in a short period of time. However, due to the adverse effects such as soil pollution, groundwater pollution, accumulation of pesticides on agricultural products, and the emergence of resistant pathogens, the social demands of safety oriented, health oriented, and natural oriented are increasing in advanced countries in recent years, .

그리하여, UN 환경개발회의의 리오 선언 이후 지구환경 보호를 위해 화학농약의 남용을 제한하고, 이를 대체하기 위하여 미생물 자체 또는 그 기능을 이용한 생물농약이 주목 받고 있다. 생물농약이란 미생물 자체를 직접 이용하거나 함유된 제제를 이용하여 병해충을 방제하는데 사용되는 농약이라 할 수 있다. 이러한 생물농약은 지금까지 알려진 종류로는 크게 미생물 살충제, 미생물 살균제, 미생물 제초제 등으로 구별되며, 독성이 거의 없고, 생태계에 영향이 적고, 약효가 지속 가능하며, 투자비용이 적은 장점이 있다. 그러나 약효 발현이 늦고 제품의 안정성 및 생산 방법상의 난점이 문제가 되고 있다. Therefore, since the Rio Declaration of the United Nations Conference on Environment and Development, in order to protect the global environment, abuse of chemical pesticides has been restricted and replaced with microorganisms themselves or biologically active pesticides using their functions. Biological pesticides are pesticides that are used to directly control microbes themselves or to control pests by using formulations containing them. These types of pesticides are classified into microbial insecticides, microbial fungicides and microbial herbicides. There are few toxicities, few effects on ecosystems, sustainable effects, and low investment costs. However, the efficacy of the drug is delayed, and the stability of the product and the difficulty in the production method become problems.

이때 개발되는 생물농약 중 미생물제제는 길항 미생물에 의한 생물학적 방제효과와 각종 효소활성에 따른 토양 부숙능을 나타낸다. 이러한 미생물제제의 원리는 이들이 생산하는 항생물질 의한 항생작용, 각종 분해효소에 의한 토양 내 잔류물질 분리를 통한 부숙작용 등에 주된 작용기작을 두고 있다.
The microorganism preparation of the pesticide which is developed at this time shows the biological control effect by the antagonistic microorganism and the soil composting ability according to various enzyme activities. The principle of these microbial preparations has the main mechanism of action such as antibiotic action by antibiotics produced by them, and compaction through separation of residues in soil by various degrading enzymes.

현재 미생물제제로 사용가능하게 등록된 대표적인 미생물로는 바실러스 속(Bacillus sp.), 캔디다 속(Candida sp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 락토코쿠스 속(Lactococcus sp.), 로도박터 속(Rhodobacter sp.), 슈도모나스 속(Pseudomonas sp.) 등이 있다. 그리고 유용미생물에 대한 연구가 지속되면서 매년 더욱 많은 미생물이 사용 가능 미생물로 등록되고 있는 실정이고 2000년대 초기까지 약 2조원의 시장을 형성할 정도로 매년 1520%의 고도성장을 유지할 것으로 예측되고 있다. 제품으로 개발 가능한 균주의 대부분이 토양전염에 의해 발생하는 Fusarium solani(모잘록병, 뿌리썩음병), Botrytis cinerea(잿빛 곰팡이병), Rhizoctonia solani(잘록병), Stemphylium herbarum(썩음병, 잎마름병), Diaporthe ambigua(줄기마름병), Colletotrichum acutatum(탄저병), Phytophthora cactorum(역병), Phytophthora capsici(역병), Didymella bryoniae(덩굴마름병) 등에 대한 식물병 방제용으로 제품으로 개발되어 시판되지만, 아직 큰 시장을 점유하지 못하고 있는 실정이다. 상기한 바와 같이, 친환경농업을 위해 생물농약의 사용으로 갈 추세이고, 그 중 식물성 병원균에 대한 피해를 줄이기 위해 길항 작용을 갖는 다양한 미생물이 연구되었지만, 각종 작물의 병해를 유발하는 다양한 병원성 균에 대해 효과적으로 방제할 수 있는 우수한 길항작용을 갖는 미생물은 보고되지 않았다.
Representative microbes currently registered for use as microbial agents include Bacillus sp., Candida sp., Lactobacillus sp., Lactococcus sp., Rhodobacter sp. Rhodobacter sp., Pseudomonas sp., And the like. As research on useful microorganisms continues, more and more microorganisms are registered as usable microorganisms every year. It is predicted that the annual growth rate will be maintained at 1520%, which is about 2 trillion won market until the early 2000s. Most of the strains that can be developed as a product are Fusarium solani ( Botrytis spp.), Botrytis cinerea (gray mold), Rhizoctonia solani ( constellation ), Stemphylium herbarum (rot, leaf blight), Diaporthe ambigua (stem blight), Colletotrichum acutatum (anthrax), Phytophthora cactorum (Plague), Phytophthora capsici (plague), Didymella bryoniae (vine blight disease) and the like, but it has not yet occupied a large market. As mentioned above, there is a tendency to use biopesticides for environmentally friendly agriculture. Among them, various microorganisms having antagonistic action have been studied in order to reduce damage to plant pathogens. However, various pathogenic microorganisms Microorganisms having excellent antagonistic action that can be effectively controlled have not been reported.

이러한 배경 하에 본 발명자들은 각종 작물의 병해를 유발하는 다양한 병원성균에 대하여 효과적으로 방제할 수 있는 우수한 길항작용을 가지는 미생물을 개발하고자 예의 노력한 결과, 다양한 병원균, 특히 역병, 잘록병, 잿빛 곰팡이병, 줄기마름병, 잎마름병, 썩음병, 모잘록병, 탄저병 및 덩굴마름병에 탁월한 길항활성과 프로테아제(protease), 셀룰라아제(cellulase) 및 α-아밀라아제(α-amylase) 효소활성을 모두 보이는 균주를 개발하고, 본 발명을 완성하였다.
Under these circumstances, the present inventors have made intensive efforts to develop a microorganism having an excellent antagonistic action that can effectively control various pathogenic bacteria causing various diseases of crops. As a result, it has been found that various pathogens, especially plague, melancholic, gray mold, , The present inventors have developed a strain having excellent antagonistic activity and protease, cellulase, and? -Amylase enzyme activity in leaf blight, rot, sickle cell disease, anthrax and vine blight, and completed the present invention .

본 발명의 하나의 목적은 잘록병, 잿빛 곰팡이병, 모잘록병, 뿌리 썩음병, 줄기마름병, 탄저병, 역병, 덩굴마름병, 썩음병 또는 잎마름병을 일으키는 병원균에 대하여 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 수탁번호 KCTC18238P인 스트렙토마이세스 그리세우스(streptomyces griseus) 균주를 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a process for the production of an antimicrobial agent having an antimicrobial activity against a pathogenic bacterium causing erosion, gray mold disease, root rot, root blight, anthrax, plague, vine blight, rot, Streptomyces three very funny (streptomyces griseus ).

본 발명의 다른 목적은 상기 균주, 상기 균주의 포자, 상기 균주의 배양물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 식물병 방제용 미생물 제제를 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a microorganism preparation for controlling plant diseases, comprising the strain, the spore of the strain, the culture of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 미생물 제제를 이용하여 식물병을 방제하는 방법을 제공하는 것이다.
It is another object of the present invention to provide a method for controlling plant diseases using the microbial agent.

상기의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 잘록병, 잿빛 곰팡이병, 모잘록병, 뿌리 썩음병, 줄기마름병, 탄저병, 역병, 덩굴마름병, 썩음병 또는 잎마름병을 일으키는 병원균에 대하여 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 수탁번호 KCTC18238P인 스트렙토마이세스 그리세우스(streptomyces griseus) 균주를 제공한다.
As one embodiment for achieving the above object, the present invention provides an antimicrobial agent having antimicrobial activity against a pathogenic bacterium which causes melancholia, gray mold, root rot, root blight, anthrax, plague, vine blight, rot or leaf blight characterized, accession No. KCTC18238P of Streptomyces draw three-house (streptomyces griseus ).

본 발명에서의 용어, "스트렙토마이세스"는 토양 방선균의 대표적인 속(屬)으로 항생물질을 생산하며, 방선균 스트렙토마이세스 과(科)에 속하는 균류로서 기균사에 연쇄상의 분생자를 형성하는 특징을 가진 한 무리의 총칭이다. The term "Streptomyces" in the present invention is a representative strain of soil actinomycetes and produces antibiotics. Streptomyces belonging to the actinomycetes belong to the family Streptomyces, It is a collective term for a group of people who have.

본 발명에서 용어, "스트렙토마이세스 그리세우스"는 스트렙토마이세스 속에 속하는 종으로서, 알칼리성 pH에서 가장 잘 자라며, 군집을 형성하는 경우, 회색-노란색 전환 색소를 생산하고 회색 기본체(spore masses)를 나타내는 형태학적 및 생리학적 특성을 지니는 종이다. The term "Streptomyces griseus" in the present invention refers to a species belonging to the genus Streptomyces, which grows best at alkaline pH, produces gray-yellow converted pigment and forms grayish yellow spores when forming colonies. Which is a species with morphological and physiological characteristics.

본 발명에서는 항균 활성 및 효소 활성이 우수하여 생물 농약으로 사용할 수 있는 미생물을 규명하기 위하여 전북 정읍시 내장산에서 부숙능이 좋은 토양을 채취해 100℃에서 1시간 전처리를 하고, 0.85% NaCl를 사용해 105까지 희석하여 본 실험실에서 개발한 방선균 선택배지인 항생제가 첨가된 오트밀 배지를 사용하여 균주를 분리하였다. 이 후 bennett's 배지에 순수 분리하여 -80℃ 냉동고에서 보관하였다. 그 후 GSS 배지를 사용해 7일간 배양하여 10,000 rpm, 15 분간 원심분리하여 상등액을 0.25㎛ 필터로 여과하여 배양액과 균체를 분리하였다. 그 후 PDA 배지에 구멍을 뚫고, 정제된 배양액을 100㎕씩 분주한 후 푸사리움 솔라니, 보트리티스 시네레아, 라이족토니아 솔라니, 스템필리움 허바룸, 디아포더 암비구아, 콜레토르리쿰 아쿠타툼, 파이토프소라 캑토룸과 파이토프소라 캡시사이 그리고 디디멜라 브리오니에 균주를 배양시켜 상기 균 모두에 대하여 항균활성이 우수한 균주를 분리하였다. 최종적으로 LB 배지에 탈지분유, 카르복시-메틸-셀루로오스, 솔로블 스타치를 사용하여 프로테아제, 셀룰레아제, 알파-아밀라아제활성이 우수한 균주를 최종선택하였고, 이 균주를 동정한 결과 스트렙토마이세스 그리세우스에 속하는 신규 균주로 규명되었다. 이에 본 발명자들은 상기 균주를 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7으로 명명하고, 이를 부다페스트 조약 하의 국제기탁기관인 한국생명공학연구원 생명자원센터(Korea Collection for Type Culture; KCTC)에 2013년 1월 30일자로 기탁하여, 수탁번호로 KCTC18238P를 부여받았다.
In the present invention, using the JEONBUK Jeongeup for 1 hour pre-treatment at 100 ℃ to collect good soil ability decomposed in Naejangsan and, 0.85% NaCl in order to identify a microorganism that is excellent in antibacterial activity and the enzyme activity used as a biological pesticide to 10. 5 The strains were isolated using an oatmeal medium supplemented with antibiotics, a selective actinomycete culture medium developed by our laboratory. After that, pure water was separated from bennett's medium and stored at -80 ° C freezer. Then, the cells were cultured for 7 days using GSS medium, centrifuged at 10,000 rpm for 15 minutes, and the supernatant was filtered with a 0.25 μm filter to separate the culture medium and cells. Thereafter, a hole was drilled in the PDA medium, and the purified culture was dispensed in an amount of 100 쨉 l each. After that, 100 쨉 l of the purified culture was dispensed, and the mixture was subjected to centrifugation at 50 르 / The strain was cultivated in Riccum aquatum, P. thophilus, Tomato, Phytophthora capsidis and D. melanifolia to isolate strains having excellent antimicrobial activity against all of the strains. Finally, strains superior in protease, cellulase, and alpha-amylase activity were finally selected for LB medium using skimmed milk powder, carboxy-methyl-celluloses and Soloblastase. Streptomyces strains Were identified as new strains belonging to Suse. Therefore, the present inventors named the strain as Streptomyces griseus KR-CS7 and submitted it to the Korea Collection for Type Culture (KCTC), an international depository institution under the Budapest Treaty, on Jan. 30, 2013 And received KCTC18238P as a trust number.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명의 상기 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7 균주는 푸사리움 솔라니(Fusarium solani), 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani), 스템필리움 허바룸(Stemphylium herbarum), 디아포더 암비구아(Diaporthe ambigua), 콜레토르리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 파이토프소라 캑토룸(Phytophthora cactorum), 파이토프소라 캡시사이(Phytophthora capsici) 및 디디멜라 브리오니에(Didymella bryoniae) 균주 모두에 대하여 항균 활성을 가진다(도 1 내지 9). In accordance with one aspect of the present invention, the Streptomyces draw three mouse KR-CS7 strain of the present invention is Fusarium solani (Fusarium solani , Botrytis < RTI ID = 0.0 > cinerea , Rhizoctonia solani , Stemphylium herbarum), Deirdre O Bhikkhus podeo cancer (Diaporthe ambigua , Colletotrichum between acutatum), pie Saratov seashell kaek torum (Phytophthora cactorum), pie Saratov seashell kaepsi (Phytophthora capsici and Didymella < RTI ID = 0.0 > bryoniae strains (Figures 1 to 9).

상기 푸사리움 솔라니는 모잘록병과 뿌리썩음병의 원인균이며, 보트리티스 시네레아는 잿빛 곰팡이병의 원인균이며, 라이족토니아 솔라니는 잘록병과 뿌리썩음병의 원인균이고, 스템필리움 허바룸은 썩음병과 잎마름병의 원인균이며, 디아포더 암비구아는 줄기마름병의 원인균이며, 콜레토르리쿰 아쿠타툼은 탄저병의 원인균이며, 파이토프소라 캑토룸과 파이토프소라 캡시사이는 역병의 원인균이고, 디디멜라 브리오니에는 덩굴마름병의 원인균이므로, 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7 균주는 잘록병, 잿빛 곰팡이병, 모잘록병, 뿌리 썩음병, 줄기마름병, 탄저병, 역병, 덩굴마름병, 썩음병 또는 잎마름병에 대한 생물학적 방제제로 유용성을 지닌다.
The Fusarium solani is a causative organism of mosaic disease and root rot disease. Bortritis cinerea is a causative organism of gray mold, Riyotonia solanii is a causative agent of drowning and root rot, and Stempylium herbarum is a causative organism of rot and leaf Diaphora amibigua is a causative organism of the stalks, Colletoricum acutatum is a causative organism of anthracnose, Pitostaras chamomile and Phytophthora capsaceae are causative bacteria of the plague, The strain Streptomyces griseus strain KR-CS7 of the present invention is useful as a biological control agent against drowning, gray mold, pollinosis, root rot, stem blight, anthracnose, plague, vine blight, rot or leaf blight I have.

또한, 본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명의 상기 균주는 생물 방제 효과뿐만 아니라, 단백질 분해효소인 프로테아제, 섬유소 분해효소인 셀룰레아제 그리고 전분 분해효소인 알파-아밀라아제를 생산한다(도 10). In addition, according to one embodiment of the present invention, the strain of the present invention produces a protease that is a protease, a cellulase that is a fibrinolytic enzyme, and an alpha-amylase that is a starchase, as well as a biocontroling effect (FIG. 10) .

따라서, 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7 균주는 생물학적 방제 효과와 효소 활성을 통한 토양 부숙 효과를 모두 지녀, 친환경 농업을 위한 생물 농약으로서 유용하게 사용될 수 있는 균주이다. Therefore, the Streptomyces griseus strain KR-CS7 of the present invention is a strain that can be usefully used as a biocidal pesticide for environmentally friendly agriculture, having both a biological control effect and soil composting effect through enzyme activity.

여기서, 생물 농약이란 농작물의 식물 병원균을 방제하기 위해 자연환경에서 분리 채집된 미생물을 제품화한 것으로 정의될 수 있다.
Here, the biological pesticide is defined as a commercial product of microorganisms isolated and collected in a natural environment in order to control plant pathogenic bacteria of crops.

한편, 모잘록병, 뿌리썩음병, 잿빛 곰팡이병, 잘록병, 썩음병, 잎마름병, 줄기마름병, 탄저병, 역병 및 덩굴마름병은 농작물의 수확에 있어서 막대한 피해를 초래하는 대표적인 병해이다. On the other hand, peach blight, root rot, gray mold, melancholy, rot, leaf blight, stem blight, anthrax, plague and vine blight are the major diseases causing crop damage.

그 중 역병은 농작물의 전 생육기간에 걸쳐 뿌리, 줄기, 잎, 열매 등 모든 부위에 발병하는 주요 병해로서, 이의 병원균인 파이토프소라 캑토룸(Phytophthora cactorum), 파이토프소라 캡시사이(Phytophthora capsici)은 병원성이 매우 강하여 비가 오면 단시간 내에 농 작물에 침입하여 많은 피해를 낸다 (Kang H. J. et al., Res. Plant Dis. (2011) 17(1), 1-12. Lim Y. S. et al., Korean J. Plant Pathol. (1998) 14(6), 735-737). Plague is a major disease that affects all parts of the crop, such as roots, stems, leaves, and fruits, throughout its entire life cycle. Phytophthora ( Phytophthora) cactorum ), Phytophthora capsici) is so strong that when the pathogenic ratio produces a lot of damage and breaking on agricultural crops in a short period of time (Kang HJ et al., Res . Plant Dis. (2011) 17 (1), 1-12. Lim YS et al., Korean J. Plant Pathol. (1998) 14 (6), 735-737).

또한, 식물의 탄저병은 콜레토트리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum)에 의해 일어나며, 농작물의 잎, 줄기, 과일, 꽃 등을 가리지 않고 파괴하는데, 우리나라 음식에서 빼놓을 수 없는 양념 채소인 고추 작물에서 특히 심한 병해 중의 하나이다(Han K. S. et al., Res. Plant Dis. (2009) 15(2), 88-93). In addition, the anthrax of the plant is caused by Colletotrichum acutatum , and it destroys the leaves, stems, fruits, flowers and so on of the crops. In the case of pepper crops, which is an indispensable seasoning vegetable in Korean food, (Han KS et al., Res. Plant Dis. (2009) 15 (2), 88-93).

뿌리 썩음병은 식물체의 뿌리의 일부 또는 전부가 분해되거나 썩는 증상으로, 이의 병원균인 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani) 및 푸사리움 솔라니(Fusarium solani)에 감염되면 뿌리의 내부 조직이 파괴되고 검게 썩을 뿐만 아니라 뿌리의 흡수 능력이 떨어지므로 잎이 떨어지고 결실률이 현저하게 떨어지는 피해를 입힌다(Kim W. G., Korean J. Plant Pathol. (1996) 12(1), 21-32, Jeon H. M., 지치 뿌리썩음병균의 분리동정 및 발생실태조사 (2012) 순천대학교 농학석사학위논문). Root rot disease is a symptom in which part or all of the roots of a plant are decomposed or rotted, and its pathogen Rhizoctonia solani and Fusarium solani are damaged not only because the internal structure of the root is destroyed, but also because it is low in the ability of the root to absorb the root, so that the leaf is dropped and the fertilization rate is remarkably lowered (Kim WG, Korean J Plant Pathol. (1996) 12 (1), 21-32, Jeon HM, Isolation and Identification of Sickle Root Rot of Plants (2012) Master's Thesis, Sunchon National University).

잿빛 곰팡이병은 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)에 의해 일어나며 시설재배에서 많이 발생하는 병으로, 일반적으로 농작물 중 과채류의 경우 개화 후 꽃 부분에서 흔히 발병되기 때문에 열매의 피해가 크다(Cheong S. S. et al., Kor. J. Mycol. (2013) 41(1) 38-41). Gray mold fungus is caused by Botrytis cinerea . It is a common disease occurring in the cultivation of plants. Generally, fruits and vegetables among crops are often caused by flower part after flowering, resulting in a great loss of fruit (Cheong SS et al., Kor J. Mycol. (2013) 41 (1) 38-41).

잘록병은, 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani)에 의해 발병될 수 있는 토양 전염성 질병으로서, 식물의 일부분, 예컨대 줄기 부분이 잘록하게 마른 증상을 나타낸다. Aphrodisiac is a soilborne disease that can be caused by Rhizoctonia solani , in which part of the plant, for example the stem part, is constricted.

모잘록병은, 거의 모든 작물에 발생할 수 있는 병으로서 특히 발아하여 얼마되지 않은 어린 묘나 가식한 묘의 줄기 밑둥이 잘록해지면서 쓰러져 죽는 병으로 알려져 있다. 모잘록병은 푸사리움 솔라니(Fusarium solani)가 대표적인 원인균으로 알려져 있다. It is known to be a disease that can occur in almost all crops, especially in young seedlings that have germinated and have fallen to the root of the trunk of the edible grave. Fusarium solani ( Fusarium solani ) is known as a causative organism.

줄기 마름병은, 나무의 원줄기나 가지 등에 발생하는 병으로, 처음에는 표면에 암갈색의 병반이 생겨 점차 부정형이 되며, 병이 걸린 부위는 움푹해이거나 부풀어 터져 가지가 죽게되는 병으로, 동고병으로도 불린다. 줄기 마름병은 디아포더 암비구아(Diaporthe ambigua) 등의 기생으로 발병하는 것으로 알려져 있다. Stem blight disease is a disease that occurs in the main stem or branch of a tree and gradually becomes irregular with a dark brown lesion on the surface at first. The diseased part is depressed or swollen and the branch is dead. It is called. Staphylococcus is a diaphora ambigua ) are known to cause parasitism.

덩굴 마름병은, 자낭균에 의한 식물병으로서, 수박, 참외, 멜론, 오이, 박, 수세미 등의 잎, 줄기, 열매 또는 열매자루에 발생하는 병이다. 잎에는 처음 소형의 갈색 반점이 생기고, 진전되면 부정형의 대형 갈색병반(1~2cm)으로 확대된다. 줄기와 과경에는 회백색의 작은 반점이 나타나고, 진전되면 줄기를 따라 상하로 병반이 확대되며, 심하면 줄기 전체가 고사하고, 병반상에는 작은 흑색점(병자각, 자낭각)이 많이 형성된다. 상기 덩굴 마름병의 대표적인 병원균으로 디디멜라 브리오니에(Didymella bryoniae)가 알려져 있다. 썩음병은, 병든 부분이 불규칙하게 썩으면서 변색하는 병으로, 스템필리움 허바룸(Stemphylium herbarum)의 기생으로 발생할 수 있다. 잎 마름병은, 잎이 시들어가는 증상을 나타내는 식물의 병으로, 스템필리움 허바룸(Stemphylium herbarum)에 의해 양파, 마늘, 파 등에 특히 나타날 수 있다. Vine blight disease is a plant disease caused by acanthosis, and occurs in leaves, stems, fruits, or fruits of watermelons, melons, melons, cucumbers, The leaves initially have small brown spots, and when they develop, they are enlarged to a large brown lesion (1 to 2 cm) of irregular shape. Small white spots appear on the stems and stomachs. When the stems grow, the lesions are enlarged along the stems. Severe stems all over and lesions form small black spots. As a representative pathogenic bacterium of the vine blight disease , Didymella bryoniae is known. A rot disease is an irregular rotting discoloration of a diseased part, which can occur as parasitism of Stemphylium herbarum . Leaf blight is a botanical disease that manifests as a wilting symptom of the leaf, and may appear particularly in onion, garlic, and onion by Stemphylium herbarum .

이와 같이, 본 발명의 균주가 역병, 탄저병 및 뿌리썩음병을 비롯한 다양한 식물병을 일으키는 병원균에 대하여 강한 길항작용을 나타내기 때문에, 상기 균주를 친환경적인 무공해 생물농약으로 사용할 경우, 유기합성 농약에 의한 생태계 파괴 및 독성 문제 해소에 유용할 수 있으며, 각 농가의 금전적 부담을 줄일 수 있다. 또한 미생물의 특성상 지속가능하여 향후 장기적인 이익을 볼 수 있다.
As described above, since the strain of the present invention exhibits a strong antagonistic action against pathogenic bacteria causing various plant diseases including plague, anthracnose and root rot disease, when the strain is used as an environmentally friendly non-pesticide biological pesticide, Destruction and toxicity problems, and can reduce the financial burden on each farm. In addition, due to the nature of the microorganism, it can be sustained and its long-term benefits can be seen in the future.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 수탁번호 KCTC18238P인 스트렙토마이세스 그리세우스 균주, 상기 균주의 포자, 상기 균주의 배양물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 식물병 방제용 미생물 제제를 제공한다.
In another embodiment, the present invention relates to a microbial agent for controlling plant diseases, comprising the strains Streptomyces griseus, Accession No. KCTC18238P, the spore of the strain, the culture of the strain, or a mixture thereof as an active ingredient to provide.

상기 수탁번호 KCTC18238P인 스트렙토마이세스 그리세우스 균주에 대해서는 앞서 설명한 바와 같으며, 상기 균주는 푸사리움 솔라니(Fusarium solani), 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani), 스템필리움 허바룸(Stemphylium herbarum), 디아포더 암비구아(Diaporthe ambigua), 콜레토르리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 파이토프소라 캑토룸(Phytophthora cactorum), 파이토프소라 캡시사이(Phytophthora capsici) 및 디디멜라 브리오니에(Didymella bryoniae) 균주 모두에 대하여 우수한 항균 활성을 나타내므로, 상기 균에 의해 야기되는 식물병 방제용으로 사용될 수 있다. 또한 상기 미생물제제는 식물병 방제제로서 사용되는 것 이외에도, 토양 개량제 등의 전반적인 미생물제제로서 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. The strain No. KCTC18238P having the above-mentioned Streptomyces griseus strain is as described above, and the strain is Fusarium solani solani , Botrytis < RTI ID = 0.0 > cinerea , Rhizoctonia solani , Stemphylium herbarum), Deirdre O Bhikkhus podeo cancer (Diaporthe ambigua , Colletotrichum acutatum ), Phytophthora ( Phytophthora cactorum ), Phytophthora capsici and Didymella < RTI ID = 0.0 > bryoniae ), it can be used for the control of plant diseases caused by the bacterium. In addition, the microbial agent may be used as an overall microbial agent such as soil improving agent, but is not limited thereto, in addition to being used as a plant disease controlling agent.

특히, 본 발명에 따른 방선균 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7는 농작물의 경작시 문제를 일으키는 식물병원균의 오염에 따른 피해를 줄일 수 있고, 여러 효소활성을 가지므로 이에 따른 토양개선효과를 보는데 적합하다.In particular, the actinomycetes Streptomyces griseus KR-CS7 according to the present invention can reduce damages caused by contamination of plant pathogens that cause problems in cultivation of crops, and has various enzyme activities, Do.

상기 식물병원균의 오염에 따른 피해는 푸사리움 솔라니, 보트리티스 시네레아, 라이족토니아 솔라니, 스템필리움 허바룸, 디아포더 암비구아, 콜레토르리쿰 아쿠타툼, 파이토프소라 캑토룸과 파이토프소라 캡시사이 그리고 디디멜라 브리오니에의 생육을 포함한다.
The damage caused by the contamination of the plant pathogenic bacterium is caused by the fungus such as Fusarium solani, Borotitis cinerea, Raietonia solani, Stempylium herbarium, Diaphora ambuchea, Colletorum acutumum, Lt; RTI ID = 0.0 > Diatomella < / RTI >

또한, 상기 균에 대한 항균 활성을 나타내는 한, 상기 균주뿐만 아니라, 상기 균주의 포자, 상기 균주의 배양물 또는 이들의 혼합물 역시 상기 미생물 제제에 포함될 수 있다. In addition, as long as the antibiotic activity against the microorganism is exhibited, not only the microorganism but also the spore of the microorganism, the culture of the microorganism, or a mixture thereof may be included in the microorganism preparation.

또한, 본 발명에서 용어, "포자"는 세균 등의 번식세포를 말하며, 본 발명의 목적상 상기 포자는 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 번식세포를 의미한다. 본 발명에서 상기 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 포자는 푸사리움 솔라니, 보트리티스 시네레아, 라이족토니아 솔라니, 스템필리움 허바룸, 디아포더 암비구아, 콜레토르리쿰 아쿠타툼, 파이토프소라 캑토룸과 파이토프소라 캡시사이 그리고 디디멜라 브리오니에에 대한 항균 활성을 나타내어 식물병 방제용 미생물 제제에 포함되어 사용될 수 있다. In the present invention, the term "spore" refers to a reproductive cell such as a bacterium. For the purpose of the present invention, the spore refers to a reproductive cell of Streptomyces griseus KR-CS7. In the present invention, the sporozoites of Streptomyces griseus KR-CS7 are selected from the group consisting of fusarium solani, botrytis cinerea, ryotonia solani, stamphylium herbarum, diaphora ambugua, , Phytosphaerosomes, pyothorosaccharide capsicum, and didymela bryoniae, and can be used as a microbial agent for plant disease control.

본 발명에서 용어, "배양물"은 상기 균주를 배양한 다음 수득한 산물을 의미하며, 배양된 균주를 포함하거나, 배양된 균주가 제거된 형태 모두 포함한다. In the present invention, the term "culture product" means a product obtained by culturing the strain, and includes cultured strains or both cultured strains.

한편, 본 발명의 상기 균주는 생균제로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 액상 생균제, 생균분말의 형태로 사용할 수 있다.On the other hand, the strain of the present invention can be used as a probiotic agent, preferably in the form of a liquid probiotic agent or a live bacterial powder.

이때, 본 발명의 방선균 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7를 포함하는 생균제 및 생균 분말은 부형제, 희석제를 더 포함할 수 있으며, 방선균 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7 균주는 단독으로 또는 다른 추출물, 부산물과 함께 사용될 수 있다.At this time, the probiotic and live bacterial powder containing the actinomycetes Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention may further include an excipient and a diluent. Streptomyces griseus strain KR-CS7 may be used alone or in combination with another extract , Can be used together with by-products.

본 발명에 따른 방선균 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7 균주는, 각각 통상의 방법에 따라 배양액, 분말의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에서, 방선균 스트렙토마이세스 그리세우스 균주에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 스테비아 추출물, 광물유 및 천연소재 추출물 등을 들 수 있다.Streptomyces Streptomyces griseus strain KR-CS7 according to the present invention may be formulated in the form of a culture solution or powder according to a conventional method. In the present invention, excipients and diluents that may be contained in Streptomyces strains are lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, Such as calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, microcrystalline cellulose, methylcellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, stevia extract, mineral oil and natural material extract .

이러한 본 발명의 미생물 제제는 사용할 때 물에 1,000~2,000배 희석해서 옆면 살포 및 뿌리에 관주하는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
The microbial formulation according to the present invention is preferably diluted 1,000 to 2,000 times with water to be sprayed on the side surface and rooted, but not limited thereto.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 미생물 제제를 이용하여 식물병을 방제하는 방법을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 상기 미생물 제제를 식물 또는 상기 식물의 생육 환경에 유입시키는 단계를 포함하는, 식물의 방제 방법을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a method for controlling a plant disease using the microbial agent. Specifically, the present invention provides a method of controlling a plant, comprising introducing the microbial agent into a plant or a growth environment of the plant.

상기 미생물 제제 및 방제에 대해서는 앞서 설명한 바와 같다. The above microbial preparation and control are as described above.

바람직하게, 상기 식물병은 역병, 탄저병, 잘록병, 모잘록병, 잎마름병, 덩굴마름병, 줄기마름병, 썩음병, 잿빛 곰팡이병 또는 뿌리썩음병일 수 있다. Preferably, the plant disease may be plague, anthracnose, melancholia, pollen, leaf blight, vine blight, stem blight, rot, gray fungus or root rot.

상기의 미생물제제는 작물을 정식하기 전 토양을 개간할 때, 정식한 후 15일부터 또는 장마철과 발병직전 시기에 식물체 지상부에 경엽처리 방법과 식물체 뿌리부분에 관주를 이용해 살포하는 것이 바람직하다.
It is preferable that the above-mentioned microorganism preparation is sprayed by using the foliar treatment method and the root of the plant roots at the ground surface of the plant at the time of clearing the soil before the preparation of the crop, 15 days after the planting, or just before the rainy season and the onset of the rainy season.

본 발명은 역병, 탄저병, 잘록병, 모잘록병, 잎마름병, 덩굴마름병, 줄기마름병, 썩음병, 잿빛 곰팡이병 또는 뿌리썩음병의 원인이 되는 식물병원균에 대하여 우수한 항균활성 및 생육 억제 효과를 보이고, 프로테아제와 셀룰라아제, 알파-아밀라아제의 효소활성이 우수하여 토양부숙능에 영향을 미친다. 상기 방선균 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7 균주는 생균제 및 생균 분말로 사용되어, 생태계 파괴를 막을 수 있는 친환경적인 미생물 제제로 매우 유용하다.
The present invention shows excellent antimicrobial activity and growth inhibitory effect on plant pathogenic microorganisms which cause plague, anthracnose, melancholia, moss green leaf, leaf blight, vine blight, stem blight, rot disease, gray mold disease or root rot disease, The enzyme activity of alpha-amylase is excellent and affects soil composting ability. The Streptomyces strain Streptomyces griseus strain KR-CS7 is useful as a prophylactic and live bacterial powder, and is useful as an environmentally friendly microorganism preparation capable of preventing destruction of ecosystems.

도 1은 푸사리움 솔라니(Fusarium solani)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 2는 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 3은 보트리티스 시네리아(Botritis cinerea)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 4는 스템필리움 허바룸(Stemphylium herbarum)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 5는 디아포더 암비구아(Diaporthe ambigua)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 6은 콜레토르리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 7은 파이토프소라 캑토룸(Phytophthora cactorum)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 8은 파이토프소라 캡시사이(Phytophthora capsici)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 9는 디디멜라 브리오니에(Didymella bryoniae)에 대한 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성을 나타낸 것이다.
도 10은 본 발명의 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 프로테아제, 셀룰라아제, 알파-아밀라아제에 대한 효소활성을 나타낸 것이다.
Figure 1 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Fusarium solani .
Figure 2 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Rhizoctonia solani .
Figure 3 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Botritis cinerea .
Figure 4 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Stemphylium herbarum .
Figure 5 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Diaporthe ambigua .
Figure 6 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Colletotrichum acutatum .
Figure 7 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Phytophthora cactorum .
Figure 8 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Phytophthora capsici .
Figure 9 shows the antimicrobial activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention against Didymella bryoniae .
Fig. 10 shows the enzymatic activity of Streptomyces griseus KR-CS7 of the present invention on protease, cellulase, and alpha-amylase.

이하 본 발명을 하기 예에 의해 상세히 설명한다. 다만, 하기 예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 하기 예에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited by the following examples.

실시예Example 1: 사용 균주의 분리 1: Isolation of strains used

본 실험예에서는 푸사리움 솔라니, 보트리티스 시네레아, 라이족토니아 솔라니, 스템필리움 허바룸, 디아포더 암비구아, 콜레토르리쿰 아쿠타툼, 파이토프소라 캑토룸과 파이토프소라 캡시사이 그리고 디디멜라 브리오니에를 시험균주로 하고, 이에 항균력을 갖는 미생물을 분리하기 위하여 전북 정읍시에 위치한 내장산에서 토양 시료를 수거하여 하였다. 시료 채취는 표토층의 15 센티미터 전후의 깊이를 선정하여 채취하였으며, 잡초, 낙엽 등의 이물질을 제거하였다. 이를 지퍼백에 담아 밀봉한 후, 0 ~ 4℃의 상태로 실험실에 운반하였다. 채취한 시료 1 g을 100℃에서 1시간 동안 처리한 후, 토양 희석 한천평판법으로 105 배까지 희석하여 희석액 0.1 mL를 실험실에서 개발한 방선균 선택배지인 항생제가 첨가된 오트밀(Oat meal) 배지에 분주하여 배지 전면에 골고루 편 다음, 28℃ 배양기에서 7일간 배양 후 생성되는 콜로니를 순수 분리하여 Bennett's 고체배지(하기 표 1)에 옮겨 -80℃에서 보관하면서 사용하였다. 시험균주는 푸사리움 솔라니, 보트리티스 시네레아, 라이족토니아 솔라니, 스템필리움 허바룸, 디아포더 암비구아, 콜레토르리쿰 아쿠타툼, 파이토프소라 캑토룸과 파이토프소라 캡시사이 그리고 디디멜라 브리오니에를 사용하였으며, 9 균주에 공통적으로 강한 항균력을 나타내는 가장 우수한 한 균주를 선별하였다. 상기 선별된 균주의 균총은 bennett's 고체 배지에서 원형의 콜로니를 형성하며, 흰색에서 시간이 지나면 옅은 붉은 색소를 내면서 나타났다. In the present experiment, an example of the present invention is shown in Table 1. In the present experiment, there was shown a case in which, in the case of Fusarium solani, Bortithis cinerea, Raiotonia solani, Stempylium herbarum, Diaphora ambuchea, Colletorum acutum, Soil samples were collected from Busan, Jeongeup, Jeonbuk Province to isolate microorganisms having antimicrobial activity. Samples were collected at depths of about 15 centimeters from the topsoil, and weeds and dead leaves were removed. This was sealed in a zipper bag and then transported to the laboratory at 0 to 4 ° C. 1 g of the sample was treated at 100 ° C for 1 hour and then diluted to 10 5 times with the diluted soil agar plate method. 0.1 ml of the diluted solution was added to an oat meal medium supplemented with antibiotics, The colonies were cultured in a 28 ° C incubator for 7 days, and the resulting colonies were transferred to Bennett's solid medium (Table 1) and stored at -80 ° C. The test strains were selected from the group consisting of Fusarium solani, Botrytis cinerea, Riyotonia solani, Stempylium herbarium, Diaphora ambugua, Colletorum acacutum, Ddimmela bryoniae were used and the most excellent strain showing strong antibacterial activity was selected in 9 strains. The strains of the selected strains formed circular colonies in bennett's solid medium and appeared white to light red pigment over time.

배지 성분Medium component 농도(g/L)Concentration (g / L) Beef ExtractBeef Extract 1.01.0 효모추출물(Yeast Extract)Yeast Extract 1.01.0 글루코오스(Glucose) Glucose 20.020.0 PeptonePeptone 2.02.0 한천(Agar)Agar 15.015.0

실시예Example 2: 분리한 균주 동정 2: Identification of isolated strains

상기 실시예 1에서 선별한 균주의 계통분류학적인 위치를 확인하기 위하여 16S ribosomal RNA의 염기서열을 분석하였다. 선별한 균주를 변형된 colony PCR법을 사용하여 PCR 증폭하였다. 16S rRNA 증폭에 사용된 프라이머(primer)는 27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3', 서열번호 1), 1492R(5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3', 서열번호 2)로 증폭한 후 PCR 산물 정제 키트(Qiagen)을 사용하여 증폭산물을 정제하여 DNA sequencer 3730xl(applied biosystems)를 사용하여 염기서열을 분석하였다.
The nucleotide sequence of 16S ribosomal RNA was analyzed to confirm the phylogenetic location of the strains selected in Example 1 above. The selected strains were PCR amplified using modified colony PCR method. The primers used for 16S rRNA amplification were amplified with 27F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ', SEQ ID NO: 1), 1492R (5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3', SEQ ID NO: 2), and then PCR product purification kit ) Was used to purify the amplified product and the nucleotide sequence was analyzed using a DNA sequencer 3730xl (applied biosystems).

최종 선별한 균주의 16S rDNA를 DDBJ/NCBI/Genebank와 Ribosomal database project의 database에서 상동성을 분석한 결과 표준균주인 스트렙토마이세스 그리세우스(Streptomyces griseus)와 높은 상동성을 확인하였다. 또한 균체 지방산조성을 분석한 결과, 균체 지방산 조성은 C16 :1 w7c (32.88%), C16 :0 (22.44%) 그리고 C18 :1 w7c (17.69%)를 나타내었으며, C10 :0 3OH, C12 :0 2OH, C12 :0 3OH와 같은 다양한 Hydroxy 지방산을 함유하는 특징을 나타내고, 표준균주와 유사한 균체 지방산 조성을 나타내어 스트렙토마이세스 그리세우스 균주임을 나타내었다.
The 16S rDNA of the final selected strain was analyzed for homology in the databases of DDBJ / NCBI / Genebank and Ribosomal database project. As a result, high homology with Streptomyces griseus was confirmed. In addition, the results, the cell fatty acid composition was analyzed cells fatty acid composition was C 16: exhibited a 1 w7c (17.69%), C 10:: 1 w7c (32.88%), C 16: 0 (22.44%) and C 18 0 3OH, C 12 : 0 2OH, C 12 : 0 3OH, and exhibited a folate composition similar to that of the standard strain, indicating that the strain was a Streptomyces griseus strain.

이와 같은 서열 및 생리학적 특성 분석 결과를 기초로 본 발명의 균주는 스트렙토마이세스 그리세우스와 높은 상동성을 가지는 신규 균주임을 규명하고, 이를 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7 명명하였으며, 이를 부다페스트 조약 하의 국제기탁기관인 대전광역시 유성구 과학로 125에 위치한 한국생명공학연구원 생명자원센터(Korea Collection for Type Culture; KCTC)에 2013년 1월 30일자로 기탁완료하고, 수탁번호로 KCTC18238P를 부여받았다.
Based on the results of analysis of the sequence and physiological characteristics, the strain of the present invention was identified as a novel strain having high homology with Streptomyces griseus, which was named Streptomyces cerevisia KR-CS7, (KCTC) on January 30, 2013, and received KCTC18238P as a deposit number. KCTC18238P has been deposited with the Korea Collection for Type Culture (KCTC) on November 1, 2013, located in Science Route 125, Yuseong-Gu, Daejeon.

실시예Example 3: 각종 식물 병원균에 대한 항균활성 측정 3: Antimicrobial activity measurement against various plant pathogenic bacteria

식물병원균으로는 식물에 막대한 피해를 야기하는 다양한 병원균인 Rhizoctonia solani AG-2-1 KACC 40123(잘록병), Botrytis cinerea KACC 40573(잿빛 곰팡이병), Fusarium solani KACC 40384(모잘록병, 뿌리 썩음병), Diaporthe ambigua KACC 41219(줄기마름병), Colletotrichum acutatum KACC 40689(탄저병), Phytophthora cactorum KACC 40166(역병), Didymella brtoniae KACC 40669 (덩굴마름병), Phytophthora capsici KACC 40475 (역병), Stemphylium herbarum(썩음병, 잎마름병), 총 9종의 시험균을 한국농업미생물자원센터에서 분양받아 스트렙토마이세스 그리세우스 KR-CS7의 항균활성 범위를 조사하였다.
Plant pathogens include, but are not limited to, Rhizoctonia solani AG-2-1 KACC 40123 (constipation), Botrytis cinerea KACC 40573 (gray mold), Fusarium solani KACC 40384 (rootstock, root rot), Diaporthe ambigua KACC 41219 (Stalks blight), Colletotrichum acutatum KACC 40689 (anthrax), Phytophthora cactorum KACC 40166 (Plague), Didymella brtoniae KACC 40669 (vine blight), Phytophthora capsici KACC 40475 (Plague), Stemphylium herbarum (rot, leaf blight), take pre-sale test bacteria of a total of nine species in the Microbiological Resource Center South Korea Agriculture investigated the antibacterial activity of a range of Streptomyces three very funny KR-CS7.

구체적으로, 감자한천배지(PDA, Difco)에 각 병원균을 배양하여 종균으로 사용하고, GSS배지(하기 '표 2')에서 생육시킨 분리 균주의 배양액을 원심분리 후 0.25㎛ 필터로 걸러 시료로 사용하였다. 그 다음, 먼저 굳힌 감자 한천배지에 직경 5 mm의 구멍을 뚫어 전처리가 된 배양액을 넣어 흡습시켰고, 그 가운데 각 병원균을 배양하여 25℃에서 3 내지 7일간 배양했다. 이때, 길항미생물이 각종 병원균에 미치는 영향을 저지원의 유무로 조사하였고, 그 결과를 하기 표 3 및 도 1 내지 9에 나타내었다. Specifically, each pathogenic bacterium was cultured in a potato agar medium (PDA, Difco) and used as a seed bacterium. The culture of the isolated strain grown in the GSS medium (Table 2 below) was centrifuged and filtered with a 0.25 μm filter Respectively. Then, a pre-treated culture broth was poured into a hardened potato agar broth with a diameter of 5 mm, and each pathogenic bacterium was cultured and cultured at 25 ° C for 3 to 7 days. At this time, the effect of the antagonistic microorganism on various pathogens was examined with or without support, and the results are shown in Table 3 and FIGS. 1 to 9.

배지 성분Medium component 농도(g/L)Concentration (g / L) Soluble starchSoluble starch 10.010.0 글루코오스(Glucose)Glucose 20.020.0 효모추출물(Yeast Extract)Yeast Extract 4.04.0 Beef ExtractBeef Extract 1.01.0 NaClNaCl 2.02.0 K2HPO4 K 2 HPO 4 0.250.25 CaCO3 CaCO 3 2.02.0 Soy beanSoy bean 25.025.0 한천(Agar)Agar 15.015.0

Figure 112014011932038-pat00001
Figure 112014011932038-pat00001

그 결과, 상기 표 3 및 도 1 내지 9에 나타낸 바와 같이 본 발명의 균주는 시험한 9종 균주 모두에 우수한 항균 활성을 나타내었고, 특히 Fusarium solani KACC 40384(모잘록병, 뿌리 썩음병), Diaporthe ambigua KACC 41219(줄기마름병), Colletotrichum acutatum KACC 40689(탄저병), Phytophthora capsici KACC 40475 (역병) 및 Stemphylium herbarum(썩음병, 잎마름병) 균에 대하여 항균 활성이 특히 더 우수한 결과를 나타내었다.
As a result, as shown in Table 3 and FIG. 1 to FIG. 9, the strain of the present invention showed excellent antibacterial activity against all of the tested nine strains, and Fusarium solani KACC 40384 (rootstock, root rot), Diaporthe ambigua KACC 41219 (stem blight), Colletotrichum acutatum KACC 40689 (anthrax), Phytophthora The antimicrobial activity of the capsici KACC 40475 ( pest ) and Stemphylium herbarum (rot, blight) was particularly excellent.

실시예Example 4:  4: 분리균주의Isolate 효소활성 측정 Enzyme activity measurement

분리균주의 효소활성 측정은 LB 배지에 1% 스킴 밀크(skim milk)를 첨가하여 투명환의 크기를 측정하여 프로테아제 활성을 측정하고, 셀룰라아제 활성은 LB 배지에 CMC를 0.5%를 첨가하여 24시간 배양 후 0.2% Congo-red로 15분간 염색하여 1M NaCl로 탈색(destaining)하는 과정을 거쳐 노란환의 크기를 측정하였다. α-아밀라아제 활성은 1% soluble starch를 넣은 배지에 24시간 배양 후 Rugol's 용액을 떨어뜨려 주위에 생성되는 노란환의 크기를 측정하였고, 그 결과를 하기 표 4 및 도 10에 나타내었다. The enzymatic activity of the isolated strain was measured by measuring the size of the transparent ring by adding 1% skim milk to the LB medium and measuring the protease activity. Cellulase activity was measured by adding 0.5% of CMC to the LB medium for 24 hours After staining with 0.2% Congo-red for 15 min and destaining with 1 M NaCl, the size of the yellow ring was measured. The α-amylase activity was determined by measuring the size of the yellow circle formed by dropping Rugol's solution for 24 hours in a medium containing 1% soluble starch. The results are shown in Tables 4 and 10 below.

균주Strain 효소활성 (mm)Enzyme activity (mm) ProteaseProtease CellulaseCellulase α-amylaseα-amylase 분리균주Isolated strain 1212 1313 88

그 결과, 본 발명의 균주는 프로테아제, 셀룰라아제, 및 아밀라아제 활성이 우수한 결과를 나타내었다.
As a result, the strain of the present invention showed excellent results in protease, cellulase, and amylase activity.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
From the above description, it will be understood by those skilled in the art that the present invention may be embodied in other specific forms without departing from the spirit or essential characteristics thereof. In this regard, it should be understood that the above-described embodiments are to be considered in all respects as illustrative and not restrictive. The scope of the present invention should be construed as being included in the scope of the present invention without departing from the scope of the present invention as defined by the appended claims.

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC18238PKCTC18238P 2013013020130130

<110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> Streptomyces griseus KR-CS7 as a novel strain with antifungal and enzyme activity <130> PA131318KR <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 27F Primer <400> 1 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1492R Primer <400> 2 ggttaccttg ttacgactt 19 <110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> Streptomyces griseus KR-CS7 as a novel strain with antifungal and          enzice activity <130> PA131318KR <160> 2 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 27F Primer <400> 1 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1492R Primer <400> 2 ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (8)

푸사리움 솔라니(Fusarium solani), 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani), 스템필리움 허바룸(Stemphylium herbarum), 디아포더 암비구아(Diaporthe ambigua), 콜레토르리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 파이토프소라 캑토룸(Phytophthora cactorum), 파이토프소라 캡시사이(Phytophthora capsici) 및 디디멜라 브리오니에(Didymella bryoniae)로 이루어진 모든 병원균에 대하여 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 수탁번호 KCTC18238P인 스트렙토마이세스 그리세우스(streptomyces griseus) 균주.
Fusarium solani , Botrytis cinerea , Rhizoctonia solani , Stemphylium herbarum , Diaporthe ambigua , Cholerae , It has an antimicrobial activity against all pathogenic bacteria consisting of Colletotrichum acutatum , Phytophthora cactorum , Phytophthora capsici and Didymella bryoniae . Accession No. KCTC18238P Streptomyces griseus strain.
제1항에 있어서, 상기 균주는 잘록병, 잿빛 곰팡이병, 모잘록병, 뿌리 썩음병, 줄기마름병, 탄저병, 역병, 덩굴마름병, 썩음병 또는 잎마름병에 대하여 방제 효과를 가지는 것이 특징인 균주.
The strain according to claim 1, wherein the strain has a controlling effect against drought, gray mold, root rot, root blight, anthracnose, plague, vine blight, rot or leaf blight.
제1항에 있어서, 상기 균주는 프로테아제, 셀룰라아제 및 아밀라아제 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 균주.
The strain of claim 1, wherein the strain exhibits protease, cellulase, and amylase activity.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 균주, 상기 균주의 포자, 상기 균주의 배양물 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는, 푸사리움 솔라니(Fusarium solani), 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani), 스템필리움 허바룸(Stemphylium herbarum), 디아포더 암비구아(Diaporthe ambigua), 콜레토르리쿰 아쿠타툼(Colletotrichum acutatum), 파이토프소라 캑토룸(Phytophthora cactorum), 파이토프소라 캡시사이(Phytophthora capsici) 및 디디멜라 브리오니에(Didymella brioniae)로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 병원균에 의해 야기되는 식물병 방제용 미생물 제제.
A fusarium solani ( Fusarium solani ), a Botrytis cinerea ( Bacterium sp. ) Containing the strain of any one of claims 1 to 3, a spore of the strain, a culture of the strain, cinerea , Rhizoctonia solani , Stemphylium herbarum , Diaporthe ambigua , Colletotrichum acutatum , Phytophthora ( Phytophthora bacterium ), Rhizoctonia solani , a microbial agent for controlling plant diseases caused by one or more pathogens selected from the group consisting of cactorum , Phytophthora capsici , and Didymella brioniae .
삭제delete 제4항에 있어서, 상기 식물병은 잘록병, 잿빛 곰팡이병, 모잘록병, 뿌리 썩음병, 줄기마름병, 탄저병, 역병, 덩굴마름병, 썩음병 및 잎마름병으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것인 미생물 제제.
5. The microbial formulation according to claim 4, wherein the plant disease is at least one selected from the group consisting of melancholia, gray mold, root rot, root blight, anthracnose, plague, vine blight, rot, and leaf blight.
제4항에 있어서, 상기 미생물 제제는 토양 부숙 효과를 나타내는 것인 미생물 제제.
The microbial formulation according to claim 4, wherein the microbial agent exhibits a soil compaction effect.
제4항의 미생물 제제를 식물 또는 상기 식물의 생육 환경에 유입시키는 단계를 포함하는, 식물병의 방제 방법.


A method for controlling a plant disease, comprising introducing the microorganism preparation of claim 4 into the plant or the growth environment of the plant.


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