KR101512811B1 - 붉은호장근 추출물을 포함하는 미백 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 박태기나무(Cercischinensis) 또는 붉은호장근(Reynoutria japonica for . elata) 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장용 조성물은 멜라닌 생성 기작에 중요한 효소인 티로시나제 효소를 억제하고, 멜라닌 생성량을 억제하여 현저한 미백 효과를 나타낸다.

Description

붉은호장근 추출물을 포함하는 미백 화장료 조성물{Cosmetic Composition Comprising Reynoutria japonica for. elata Extract for Skin Whitening}

본 발명은 미백 활성을 갖는 식물 추출물 및 이를 함유한 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 상기 미백 활성을 갖는 박태기나무 또는 붉은호장근 추출물은 상기 박태기나무 또는 붉은호장근에 여러 용매를 가하여 추출한, 높은 멜라닌 억제효과를 가지는 유효성분들을 함유한 추출물이고, 상기 화장료 조성물은 상기 박태기나무 또는 붉은호장근 중, 1종 이상의 추출물을 단독 또는 혼합하여 0.00001 내지 30 중량%의 양으로 통상의 화장료 베이스에 첨가하여, 미백 효과를 월등히 나타내는 미백 활성을 갖는 상기 식물 추출물 및 이를 함유한 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부, 모발, 눈 등에서 발현하는 색은 멜라닌, 카로틴 및 헤모글로빈에 의해 결정되어지며 특히 피부에 있어 색깔을 결정하는 가장 중요한 요인은 멜라닌으로, 멜라닌의 양과 성질 그리고 분포의 정도에 따라 피부색이 결정된다.

멜라닌의 주요한 기능은 이러한 유해 라디칼을 제거함으로써, 유해 라디칼에 의한 손상으로부터 피부를 보호하는 것이다. 따라서, 멜라닌이 많다는 것은 물리적, 화학적 독성물질로부터 피부를 보호하기 위한 효과적인 대응체계를 가지고 있다는 것을 의미한다. 이러한 멜라닌의 생성을 촉진하는 요인들로서는 햇빛 (자외선) 뿐만 아니라 에스트로겐, 프로스타글라딘 등과 같은 호르몬이 있다.

멜라닌은 햇빛 (자외선)에 의해 멜라노사이트 (melanocyte)에서 티로신이 티로시나제라는 효소에 의해 도파와 도파크롬으로 변환된 뒤 복잡한 산화와 축합 반응을 거쳐 생성된다. 생성된 멜라닌은 피부 세포에 전달되고 표피 박리와 함께 멜라닌이 상실되어 소멸되는 순환 작용을 한다. 멜라닌 생성 메카니즘의 특징은 티로시나제라는 단 한개의 효소가 관여하는 것이기 때문에 티로시나제 활성을 억제하여 멜라닌 생성을 막아줌으로서 미백 효과를 기대할 수 있다.

미백 화장품에 있어 멜라닌 생성을 억제하는 방법은 크게 다음과 같이 나눌 수 있다. 첫번째 방법은 멜라닌 생성의 주원인인 자외선을 차단하여 제거하는 것으로써, 이 방법은 화장품 조성물에 광 산란제 또는 광 차단제를 함유시킴으로써 효과적으로 멜라닌 생성을 억제할 수 있다. 두 번째 방법은 글루코사민과 같이 티로시나제가 활성을 나타내기 위해 필요한 코어 탄수화물의 합성을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제시키는 것이다. 세 번째 방법은 효소산 (코직산) 또는 알부틴과 같이 멜라닌 생성에 관여하는 티로시나제의 기능을 방해하는 것이다. 네 번째 방법은 하이드로퀴논과 같이 멜라닌을 생성하는 세포인 멜라노사이트에 대하여 특이적인 독성을 가지고 있어 세포 분열을 방해하는 것이다. 다섯 번째 방법은 비타민 C와 같이 티로신이 도파와 도파크롬을 거쳐 복잡한 산화와 축합반응을 거치는 동안에 강한 항산화 효과를 발휘함으로써 미백효과를 기대하는 것이다.

최근들어 가장 이상적으로 여겨지는 미백 화장료는 일차적으로 자외선을 차단해주고, 체내에 생성되는 라디칼을 소거해주면서 자외선 등에 의해 발생할 수 있는 염증 유발 물질 생성을 억제해주며 궁극적으로는 멜라닌 생합성을 억제하는 효과를 갖는 물질들을 복합적으로 사용하는 것으로 알려져 있다.

그렇지만 천연 식물들은 많은 양을 사용하는 경우에는 오히려 피부에 자극을 주어 피부색소 침착을 야기하는 등의 부작용을 야기시킬 수 있으므로 낮은 농도에서도 미백 효과를 극대화 시켜 줄 수 있는 물질 및 방법의 개발이 요구되고 있다.

한편, 대한민국 특허등록 제 230130 호는 상지 추출물을 함유하는 미백 화장료를 개시하고 있고, 대한민국 특허출원 제 1999-17810 호는 상지 추출물 및 비타민 C를 포함하는 미백 화장료 조성물을 개시하고 있다. 그러나, 현재까지 개발된 미백제들은 미백 효과가 미약한 측면이 있고, 피부 자극과 같은 부작용을 개선하여야 하는 과제를 갖고 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 종래의 미백 화장료와 비교하여 미백 효과가 매우 우수하면서도, 피부 자극도가 낮은 미백 화장료를 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 박태기나무(Cercischinensis) 또는 붉은호장근(Reynoutria japonica for.elata) 식물 추출물을 사용하는 경우에는 멜라닌 생성 기작에 중요한 효소인 티로시나제 효소를 억제하고, 멜라닌 생성량을 억제하여 미백 효과를 나타낸다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 박태기나무(Cercischinensis) 또는 붉은호장근(Reynoutria japonica for.elata) 식물 추출물을 포함하는 미백 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 식물 추출물을 포함하는 미백 활성 식품 조성물 또는 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명은 미백 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 종래의 미백 화장료와 비교하여 미백 효과가 매우 우수하면서도, 피부 자극도가 낮은 미백 화장료를 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 박태기나무(Cercischinensis) 또는 붉은호장근(Reynoutria japonica for.elata)을 포함하는 군으로부터 선택된 식물 추출물을 사용하는 경우에는 멜라닌 생성 기작에 중요한 효소인 티로시나제 효소를 억제하고, 멜라닌 생성량을 억제하여 미백 효과를 나타낸다는 것을 확인하였다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 박태기나무(Cercischinensis) 또는 붉은호장근(Reynoutria japonica for.elata)을 포함하는 군으로부터 선택된 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백 화장료 조성물을 제공한다.

박태기나무(Cercis chinensis)는 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 낙엽관목으로 중국 원산이며, 관상용으로 흔히 심는다. 높이 3-5 m로 자라고 가지는 흰빛이 돈다. 잎은 길이 5-8 cm, 넓이 4-8 cm로 어긋나고 심장형이며 밑에서 5개의 커다란 잎맥이 발달한다. 꽃은 홍색을 띈 자주색으로 이른 봄 잎이 피기 전에 피고 7-8 개 또는 20-30 개씩 한 군데 모여 달린다. 열매는 협과로서 꼬투리는 길이 7-12 cm이고 편평한 줄 모양 타원형으로 8-9월에 익으며 2-5개의 종자가 들어 있다. 목재는 연한 녹색이고, 수피를 통경·중풍·대하증에 이용한다.

붉은호장근(Reynoutria japonica for. elata)은 쌍떡잎식물 마디풀목 마디풀과의 여러해살이풀로 해발고도 1,500-2,000 m의 햇볕이 잘 드는 산지에서 자란다. 높이가 1-1.5 m이며, 땅속줄기가 옆으로 뻗으며 자란다. 줄기는 속이 비어 있고 털이 없으며, 어린 가지에는 자주색 반점이 있는데, 그 모습이 마치 호피(虎皮) 같다 하여 호장근이라는 이름이 붙었다. 잎은 어긋나며 길이 5-6 cm의 넓은 바소꼴이고 잎자루가 있다. 꽃은 암수딴그루이며, 6-8월에 붉은 꽃이 수상꽃차례로 달린다. 열매는 수과(瘦果)로 삼각형 모양이며, 꽃받침에 싸여 있는데, 9-10월에 붉은색으로 익고 윤기가 난다. 붉은호장근은 특히 지하부의 뿌리가 크고 강건하므로 절개지 토양고정용으로 많이 심으며, 척박한 지역의 녹화에도 이용된다. 어린 줄기는 나물로 먹고, 땅속줄기는 완화제·이뇨제·통경제·진정제 등의 약재로도 사용되며, 제주도에 분포한다.

붉은호장근은 아토피 피부개선과 피부세포의 콜라겐 생성을 증가시켜 주름개선에 도움이 될 수 있으나 미백용 화장품으로서 사용될 수 있음을 보고한 사례가 없다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 식물은 바람직하게는 식물의 꽃, 잎, 줄기, 열매, 종자, 뿌리 및 전초를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있고, 보다 바람직하게는 상기 식물의 잎, 줄기, 열매, 뿌리 및 전초를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있으며, 가장 바람직하게는 상기 식물의 줄기, 뿌리 및 전초를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 본 명세서에서 상기 식물의 가장 바람직한 추출부위가 줄기, 뿌리 또는 전초인 이유는 상기 식물의 효능에 대해 아직 명확하게 대중에게 인식되지 않았으나, 후술하는 실시예를 통해 상기 식물의 줄기, 뿌리 또는 전초가 미백효과에 탁월하다는 것을 입증하였기 때문이다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 식물 추출물은 당업계에 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는, (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 메틸렌클로라이드 또는 (h) 1,3-부틸렌글리콜을 추출 용매로 하여 수득할 수 있다. 보다 바람직하게는, 메탄올 및 에탄올 수용액을 이용하여 추출하고, 가장 바람직하게는, 메탄올 수용액을 이용하여 추출할 수 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 식물 추출물의 양은 미백 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.00002-30 중량%, 보다 바람직하게는 0.0001-0.1 중량%, 가장 바람직하게는 0.0025-0.01 중량%일 수 있다.

본 발명의 조성물에서, 상기 식물 추출물의 가장 바람직한 양이 0.0025-0.01 중량%인 이유는 상기 식물 추출물의 함량이 0.0025 중량% 미만인 경우에는 피부 미백 화장료로서의 발명의 효과를 충분이 얻을 수 없는 문제점이 있고, 0.01 중량%를 초과하는 경우에는 세포 독성에 의한 안전성의 문제점이 있기 때문이다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 미백 활성을 나타내는 상기 식물 추출물은 바람직하게는 화장료 조성물, 약제학적 조성물 및 식품 조성물을 포함하는 군으로부터 선택된 조성물에 포함될 수 있으며, 가장 바람직하게는 화장료 조성물에 이용될 수 있다. 상기 식물은 KFDA 식품원재료 검색(http://fse.foodnara.go.kr) 결과 법적으로 약제학적 조성물 또는 식품 조성물로 사용하는데 문제가 없고, 또한 예로부터 아토피 또는 당뇨 등에 탁월한 효과가 있는 식물로 알려진 점에 비추어 미백 효과를 나타내는 식품 또는 약제학적 조성물에 이용될 수 있다고 판단된다.

본 발명의 화장료 조성물은 상술한 식물 추출물 이외에 다른 성분들을 포함할 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 본 발명의 화장료 조성물은 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인으로 포함된 군으로부터 선택되는 최소 하나의 보조성분을 추가적으로 포함하며, 보다 바람직하게는 글리세린, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 스쿠알란 및 소듐 시트레이트을 추가적으로 포함하고, 부틸렌 글라이콜, 시트릭산, 판테놀 및 알란토인으로 구성된 군으로부터 선택되는 최소 하나의 성분을 포함하며, 가장 바람직하게는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인 모두를 추가적으로 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 제공될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 미백 효과가 탁월한 약제학적 조성물일 수 있다.

본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 경구 또는 비경구 등의 다양한 경로로 투여할 수 있으며, 예컨대 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여할 수 있다. 바람직하게는 비경구 투여 중 경피투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여(topical application) 방식으로 적용된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은, 경구형 제형인 경우 성인 기준으로 0.1-100 ㎎/kg 의 양을 1일 1회 내지 수회 투여할 수 있으며, 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1일당 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다. 다만, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 산제, 과립제, 정제, 캅셀제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 사용할 수 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 미백 효과가 탁월한 식품 조성물일 수 있다.

본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.

예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 유효성분 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

한편, 본 발명의 구체적 실시예에서 본 발명 조성물의 유효성분에 대한 세포 생존율 분석 결과 본 발명 조성물의 유효성분은 천연물질로서 인체에 무해한 물질임이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 유효성분은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같은 화장료, 약제학적 및 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(a) 본 발명은 박태기나무(Cercischinensis) 또는 붉은호장근(Reynoutria japonica for.elata) 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백 화장료 조성물을 제공한다.

(b) 본 발명의 화장료 조성물은 피부자극이 없으면서, 현저한 미백 효과를 나타낸다.

(c) 본 발명의 화장용 조성물은 멜라닌 생성 기작에 중요한 효소인 티로시나제 효소를 억제하고, 멜라닌 생성량을 억제하여 현저한 미백 효과를 나타낸다.

(d) 본 발명의 유효성분인 식물 추출물의 경우 상술한 미백 화장료 조성물뿐만 아니라, 약제학적 조성물 및 식품 조성물로 이용이 가능하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 “%“는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.

실시예 1 : 물 추출물의 제조

우선, 박태기나무 외 2종(Cercischinensis, VitisflexuosaThunb, and Reynoutriajaponicafor.Elata)을 각각 그 부위별로 전초, 지상부, 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 열매, 종자 시료로 각각 0.1 kg 준비하였다. 박태기나무 외 2종 시료를 중량대비 5배의 정제수에 넣고 105℃에서 5시간 가온 추출하였다. 추출공정이 종료되면 거름종이(Whatman paper No. 1)로 거르고, 0.45 ㎛의 멤브레인 필터(TF-450, 60173, PALL Life Sciences)로 재여과한 후 다음으로 물을 제거하기 위해 우선 회전 진공 증발기(Rotary vacuum evaporator)로 농축하고 이어서 동결 건조하는 방법을 사용하였다. 이로써 박태기나무 전초의 물 추출물 건조중량 9.78 g, 지상부 9.49 g, 꽃 8.62 g, 잎 7.99 g, 줄기 10.28 g, 뿌리 9.49 g, 열매 8.25 g, 종자 8.09 g, 새머루 전초의 물 추출물 건조중량 7.39 g, 지상부 8.39 g, 꽃 9.90 g, 잎 8.89 g, 줄기 12.08 g, 뿌리 11.21 g, 열매 10.00 g, 종자 9.88 g, 붉은호장근 전초의 물 추출물 건조중량 8.53 g, 지상부 8.99 g, 꽃 8.42 g, 잎 8.21 g, 줄기 9.40 g, 뿌리 9.31 g, 열매 9.83 g, 종자 8.77 g을 수득하였다.

실시예 2 : 메탄올 추출물의 제조

우선, 박태기나무 외 2종(Cercischinensis, VitisflexuosaThunb, and Reynoutriajaponicafor.Elata)을 각각 그 부위별로 전초, 지상부, 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 열매, 종자 시료로 각각 0.1 kg 준비하였다. 박태기나무 외 2종 시료 0.1 kg에 대한 3배의 추출용매(메탄올)를 가하여 25℃에서 72시간 동안 진탕 추출하는 공정을 3회 진행한 뒤 추출액을 거름종이로 여과하고 0.45 ㎛의 멤브레인 필터(Supor, 60173, PALL Life Sciences)로 재여과한 후, 회전 진공 증발기(rotary vacuum evaporator)로 농축하고 동결 건조하여 박태기나무 전초의 메탄올 건조중량 8.83 g, 지상부 7.94 g, 꽃 6.02 g, 잎 6.48 g, 줄기 8.39 g, 뿌리 9.01 g, 열매 8.33 g, 종자 9.12 g, 새머루 전초의 메탄올 추출물 건조중량 10.10 g, 지상부 9.23 g, 꽃 9.54 g, 잎 8.17 g, 줄기 8.56 g, 뿌리 9.02 g, 열매 10.46 g, 종자 9.82 g, 붉은호장근 전초의 메탄올 추출물 건조중량 11.55 g, 지상부 12.83 g, 꽃 9.49 g, 잎 9.29 g, 줄기 10.04 g, 뿌리 9.30 g, 열매 9.55 g, 종자 8.21 g을 수득하였다.

실시예 3 : 헥산 추출물의 제조

우선, 박태기나무 외 2종(Cercischinensis, VitisflexuosaThunb, and Reynoutriajaponicafor.Elata)을 각각 그 부위별로 전초, 지상부, 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 열매, 종자 시료로 각각 0.1 kg 준비하였다. 박태기나무 외 2종 시료 0.1 kg에 대한 50배의 추출용매(헥산)를 가하여 25℃에서 5일 동안 진탕 추출하는 공정을 1회 진행한 뒤 추출액을 거름종이로 여과하고 0.45 ㎛의 멤브레인 필터(Supor, 60173, PALL Life Sciences)로 재여과한 후, 회전 진공 증발기(rotary vacuum evaporator)로 농축하고 동결 건조하여 박태기나무 전초의 헥산 건조중량 9.23 g, 지상부 8.88 g, 꽃 7.24 g, 잎 8.49 g, 줄기 9.12 g, 뿌리 7.56 g, 열매 8.38 g, 종자 7.72 g, 새머루 전초의 헥산 추출물 건조중량 8.56 g, 지상부 7.80 g, 꽃 7.67 g, 잎 8.36 g, 줄기 6.85 g, 뿌리 8.54 g, 열매 7.92 g, 종자 7.66 g, 붉은호장근 전초의 헥산 추출물 건조중량 9.31 g, 지상부 8.66 g, 꽃 7.82 g, 잎 8.60 g, 줄기 9.11 g, 뿌리 8.57 g, 열매 8.69 g, 종자 8.07 g을 수득하였다.

실시예 4 : 부틸렌글리콜 추출물의 제조

박태기나무 외 2종(Cercischinensis, VitisflexuosaThunb, and Reynoutriajaponicafor.Elata)을 각각 그 부위별로 전초, 지상부, 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 열매, 종자 시료로 각각 0.1kg 준비하였다. 박태기나무 외 2종 시료 0.1 kg에 대한 10배의 추출용매(부틸렌글리콜)를 가하여 25℃에서 5일 동안 진탕 추출하는 공정을 1회 진행한 뒤 추출액을 거름종이와 멤브레인 필터(TF-450, 60173, PALL Life Sciences)로 여과하여 박태기나무 전초의 부틸렌글리콜 추출물 0.785 kg(고형분 약 2.2%), 지상부 0.731 kg(고형분 약 2.5%), 꽃 0.556 kg(고형분 약 2.2%), 잎 0.517 kg(고형분 약 2.1%), 줄기 0.705 kg(고형분 약 2.3%), 뿌리 0.747 kg(고형분 약 3.6%), 열매 0.521 kg(고형분 약 2.2%), 종자 0.709 kg(고형분 약 3.1%), 새머루 전초의 부틸렌글리콜 추출물 0.710 kg(고형분 약 2.3%), 지상부 0.890 kg(고형분 약 2.8%), 꽃 0.563 kg(고형분 약 2.8%), 잎 0.559 kg(고형분 약 2.1%), 줄기 0.712 kg(고형분 약 2.0%), 뿌리 0.760 kg(고형분 약 3.0%), 열매 0.780 kg(고형분 약 2.7%), 종자 0.797 kg(고형분 약 1.8%), 붉은호장근 전초의 부틸렌글리콜 추출물 0.733 kg(고형분 약 2.2%), 지상부 0.787 kg(고형분 약 2.3%), 꽃 0.501 kg(고형분 약 2.9%), 잎 0.558 kg(고형분 약 1.6%), 줄기 0.776 kg(고형분 약 2.2%), 뿌리 0.769 kg(고형분 약 1.7%), 열매 0.804 kg(고형분 약 2.0%), 종자 0.777 kg(고형분 약 2.4%)을 수득하였다.

실험예 1 : 세포독성 측정

상기 실시예의 방법으로 얻어진 추출물의 세포독성을 측정하였다. 본 발명에 따른 상기 추출물들에 대한 세포독성을 알아보기 위하여, B16F1(Mouse Melanoma cell)을 5x10⁴ cells/㎖ 농도로 하여 96-well plate에 200 ㎕씩 분주하여 37℃, CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다. 이때 배지는 소혈청 10%와 항생제 1%가 포함된 DMEM/high glucose(Dulbeco's Modified Eagle Medium, Hyclone)를 이용하였다. 배양한 후 상기 박태기나무 외 2종 추출물을 각각 농도별로 처리한 후 같은 배양 조건에서 72시간 배양하였다. 배양이 끝난 후 배양액을 제거하고 5 ㎎/㎖ Neutral red 시약을 첨가한 배양액을 넣고 37℃에서 2시간 동안 배양하였다. 그 후 배양액을 제거하고 1% CaCl₂ & Formaldehyde를 처리하고 1분간 400-500 rpm으로 흔들어 준 뒤 이를 다시 제거하였다. 그리고 1% Acetic acid & 50% Ethanol을 각 well에 처리하고 10분간 잘 흔들어 준 다음 마이크로플레이트계수기(Micro plate reader)를 이용하여 570 nm/655 nm의 흡광도 측정으로 결과를 측정하였으며, 그 값은 표 1 및 표 2 같다.

여기서, 세포독성실험에서의 대조구는 상기 추출물을 넣지 않은 blank를 의미한다.

시료(㎍/㎖)	부위	대조구	1	5	10	25	50	75	100
박태기나무 실시예 1 증식률(%)	전초	100	95.44	94.13	93.57	90.04	78.69	-	-
	지상부	100	99.11	97.36	98.57	90.35	85.34	-	-
	꽃	100	102.34	98.56	96.34	92.14	86.34	82.31	-
	잎	100	99.53	96.34	95.78	91.11	85.39	81.03	-
	줄기	100	98.28	95.34	95.16	92.01	88.88	86.31	82.24
	뿌리	100	99.31	99.78	93.03	91.28	90.06	89.37	85.66
	열매	100	96.64	97.50	95.30	92.36	91.73	88.64	86.38
	종자	100	97.77	96.91	92.04	88.67	86.38	81.44	-
박태기나무 실시예 2 증식률(%)	전초	100	99.52	97.63	95.32	91.05	86.33	-	-
	지상부	100	97.23	96.17	92.35	88.73	82.01	-	-
	꽃	100	99.36	97.82	94.11	92.32	88.56	82.31	-
	잎	100	96.70	95.55	92.01	89.88	81.34	-	-
	줄기	100	94.45	95.00	94.20	92.64	91.57	87.76	85.52
	뿌리	100	97.08	95.32	91.34	88.55	87.27	81.28	-
	열매	100	97.56	96.78	94.21	91.05	89.79	85.32	81.24
	종자	100	99.30	97.36	98.66	94.57	95.00	92.39	93.86
박태기나무 실시예 3 증식률(%)	전초	100	101.01	103.27	96.63	96.22	97.03	95.64	94.00
	지상부	100	96.37	97.58	95.50	92.48	91.85	90.33	85.29
	꽃	100	97.77	98.80	97.63	96.21	96.73	91.03	86.68
	잎	100	97.80	93.36	92.14	88.07	85.64	81.03	-
	줄기	100	98.26	97.54	93.99	91.20	88.80	83.47	-
	뿌리	100	98.03	96.45	92.34	90.77	86.45	81.03	-
	열매	100	97.08	96.67	95.01	95.44	92.67	91.07	90.06
	종자	100	95.12	92.31	91.08	88.75	82.34	-	-
박태기나무 실시예 4 증식률(%)	전초	100	99.84	96.34	95.37	92.13	94.36	90.04	88.64
	지상부	100	97.78	98.31	97.06	97.32	95.87	94.20	94.64
	꽃	100	98.87	97.69	96.85	95.30	91.00	86.61	85.85
	잎	100	98.04	96.66	96.13	93.49	90.77	82.63	-
	줄기	100	99.19	96.37	93.31	90.74	85.34	-	-
	뿌리	100	97.25	96.05	96.33	92.58	87.21	83.91	-
	열매	100	98.88	96.62	97.22	95.39	92.12	89.44	86.60
	종자	100	99.42	98.44	94.68	95.57	94.08	91.28	88.85
새머루 실시예 1 증식률(%)	전초	100	97.86	96.62	95.04	95.88	92.36	89.66	86.34
	지상부	100	99.00	97.66	95.75	93.72	90.11	88.88	89.24
	꽃	100	102.35	100.67	98.63	97.37	98.60	95.30	94.16
	잎	100	97.77	95.62	91.03	86.22	81.45	-	-
	줄기	100	98.03	95.15	91.24	90.37	87.60	-	-
	뿌리	100	99.57	98.90	98.24	97.77	95.01	96.24	93.09
	열매	100	98.44	93.32	90.08	87.02	82.22	-	-
	종자	100	97.01	95.55	92.31	88.44	84.36	80.05	-
새머루 실시예 2 증식률(%)	전초	100	98.04	99.63	97.52	96.38	94.46	95.39	96.67
	지상부	100	96.66	97.20	95.37	92.08	90.67	85.36	81.07
	꽃	100	95.87	95.04	94.25	91.08	88.66	82.64	-
	잎	100	96.66	95.93	92.70	90.00	84.63	-	-
	줄기	100	98.32	96.48	92.11	89.28	84.34	80.68	-
	뿌리	100	97.69	98.82	96.60	95.57	92.63	90.78	90.05
	열매	100	97.52	97.13	96.29	91.07	87.39	82.33	-
	종자	100	99.30	97.38	92.26	89.67	84.67	81.26	-

시료(㎍/㎖)	부위	대조구	1	5	10	25	50	75	100
새머루 실시예 3 증식률(%)	전초	100	98.86	98.71	92.36	85.70	-	-	-
	지상부	100	97.59	95.37	93.05	91.11	86.45	82.17	-
	꽃	100	98.27	96.36	95.04	89.53	82.37	-	-
	잎	100	97.79	98.20	96.95	94.08	92.35	90.28	82.26
	줄기	100	99.03	97.25	95.33	91.28	87.06	82.39	-
	뿌리	100	97.80	96.64	92.07	87.65	81.11	-	-
	열매	100	97.84	95.02	93.26	88.48	82.00	-	-
	종자	100	95.34	92.08	86.24	84.11	80.16	-	-
새머루 실시예 4 증식률(%)	전초	100	98.78	96.55	93.36	90.28	85.38	81.29	-
	지상부	100	97.39	95.85	94.07	91.28	85.36	-	-
	꽃	100	99.07	95.51	97.63	93.77	89.28	85.36	82.07
	잎	100	97.97	98.86	97.05	95.72	91.44	88.68	86.39
	줄기	100	98.05	96.55	92.17	91.50	87.63	82.04	-
	뿌리	100	97.10	98.23	95.01	92.18	90.19	83.25	-
	열매	100	96.33	95.17	93.28	90.34	85.76	81.81	-
	종자	100	99.56	95.34	92.08	88.27	86.35	82.00	-
붉은호장근 실시예 1 증식률(%)	전초	100	96.34	97.50	98.55	97.21	96.66	96.89	95.01
	지상부	100	98.82	96.34	99.62	97.77	99.02	102.31	96.52
	꽃	100	94.36	95.87	92.38	90.04	87.77	83.34	-
	잎	100	92.34	95.44	91.05	88.76	86.54	81.39	-
	줄기	100	96.66	94.68	92.22	90.17	86.22	83.54	80.92
	뿌리	100	100.65	96.91	97.20	94.82	90.64	83.77	-
	열매	100	99.99	93.67	93.04	91.04	84.70	-	-
	종자	100	96.21	95.49	95.60	92.88	85.36	81.64	-
붉은호장근 실시예 2 증식률(%)	전초	100	96.88	97.36	94.38	91.07	87.55	85.07	-
	지상부	100	97.77	95.08	95.47	92.34	90.07	85.35	-
	꽃	100	97.08	95.96	92.10	89.45	84.24	81.00	-
	잎	100	96.67	97.28	97.01	95.36	91.21	87.28	85.39
	줄기	100	98.59	96.39	94.01	91.21	86.44	82.00	-
	뿌리	100	96.55	94.51	92.09	87.22	81.90	-	-
	열매	100	97.90	95.00	94.47	93.36	91.25	88.28	84.36
	종자	100	98.31	96.11	91.26	88.88	85.58	80.03	-
붉은호장근 실시예 3 증식률(%)	전초	100	96.67	94.08	91.11	87.38	85.25	81.04	-
	지상부	100	95.52	94.24	92.92	90.73	91.21	86.09	85.25
	꽃	100	97.48	96.31	94.20	91.55	86.37	82.00	-
	잎	100	95.67	91.20	94.57	86.36	81.09	-	-
	줄기	100	99.80	97.50	93.68	90.97	92.31	84.11	81.33
	뿌리	100	94.36	91.11	86.59	85.47	82.36	-	-
	열매	100	96.67	95.10	93.25	91.21	86.47	82.97	-
	종자	100	95.51	93.21	91.11	86.37	82.65	-	-
붉은호장근 실시예 4 증식률(%)	전초	100	101.34	100.77	95.36	91.64	85.54	81.19	-
	지상부	100	99.85	93.01	86.79	82.00	-	-	-
	꽃	100	96.77	97.14	95.03	91.09	85.65	81.24	-
	잎	100	97.03	96.64	94.21	91.07	87.99	84.36	80.29
	줄기	100	95.27	92.67	89.38	86.50	81.11	-	-
	뿌리	100	97.01	97.39	95.24	89.59	83.12	-	-
	열매	100	96.67	96.00	94.85	89.66	84.83	-	-
	종자	100	98.12	99.73	94.30	90.90	88.88	81.00	-

-; 세포 독성을 나타냄

상기 표 1 및 표 2에 나타난 바와 같이 박태기나무 추출물에서 50 ㎍/㎖, 새머루 추출물에서 25㎍/㎖, 붉은호장근 추출물에서 25㎍/㎖ 이하의 농도를 세포에 처리하였을 경우 독성을 나타나지 않음을 확인할 수 있었다.

실험예 2 : 타이로시네이즈 억제 효과 측정

상기 실시예의 방법으로 얻어진 추출물의 타이로시네이즈(Tyrosinase) 억제 효과를 측정하였다. 타이로시네이즈 저해 활성 측정은 타이로시네이즈의 작용 결과 생성되는 도파크롬(DOPA chrome)을 비색법에 의해 측정하는 야기(Yagi) 등의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉, 반응구는 96-well plate 내 0.1 M 인산완충액(phosphate buffer(pH6.5)) 100 ㎕에 1.5 mM 엘-타이로신(L-Tyrosine) 용액(in 0.1 M 인산완충액 (pH 6.5)) 60 ㎕ 및 시료용액 20 ㎕를 넣은 후, 머쉬룸 타이로시네이즈(mushroom tyrosinase) (2000 unit/㎖)를 0.1 M 인산완충액으로 40배 희석하여 20 ㎕씩 넣고 37℃에서 1시간 반응시켜, 반응액 중에 생성된 도파크롬을 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 490 nm에서 측정하였다. 또한 시험결과의 비교를 위해 양성대조구로 500 ㎍/㎖ 농도의 알부틴(Arbutin)을 사용하였다. 결과는 하기 표 3에 기재하였다.

시료(100㎍/㎖)			대조구	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4
타이로시네이즈 저해능	박태기나무	전초	48%	20%	44%	45%	38%
		지상부	48%	18%	13%	22%	30%
		꽃	48%	29%	45%	34%	29%
		잎	48%	13%	23%	22%	11%
		줄기	48%	25%	36%	27%	27%
		뿌리	48%	29%	62%	39%	33%
		열매	48%	13%	20%	8%	18%
		종자	48%	19%	18%	23%	29%
	새머루	전초	48%	22%	42%	28%	30%
		지상부	48%	28%	33%	30%	34%
		꽃	48%	12%	27%	20%	13%
		잎	48%	27%	23%	10%	16%
		줄기	48%	37%	58%	42%	33%
		뿌리	48%	31%	38%	18%	17%
		열매	48%	12%	12%	6%	7%
		종자	48%	21%	20%	14%	10%
	붉은호장근	전초	48%	44%	66%	50%	41%
		지상부	48%	18%	25%	26%	29%
		꽃	48%	7%	2%	8%	4%
		잎	48%	17%	22%	17%	20%
		줄기	48%	18%	38%	14%	16%
		뿌리	48%	6%	17%	18%	3%
		열매	48%	15%	22%	9%	14%
		종자	48%	22%	36%	21%	30%

표 3의 결과에 따라 가장 우수한 타이로시네이즈 저해 활성을 나타낸 실시예 2를 기준으로 하여 농도별 타이로시네이즈 저해 활성을 측정하였으며, 그 값은 표 4과 같다.

시료(㎍/㎖)		대조구	100	75	50	25
박태기나무 실시예 2	전초	52%	48%	26%	21%	19%
	지상부	52%	19%	17%	9%	6%
	꽃	52%	42%	28%	17%	6%
	잎	52%	25%	29%	24%	19%
	줄기	52%	39%	18%	20%	11%
	뿌리	52%	63%	47%	31%	15%
	열매	52%	15%	13%	10%	7%
	종자	52%	22%	17%	11%	4%
새머루 실시예 2	전초	52%	46%	33%	20%	14%
	지상부	52%	34%	19%	13%	7%
	꽃	52%	25%	18%	13%	6%
	잎	52%	28%	22%	17%	10%
	줄기	52%	61%	41%	34%	13%
	뿌리	52%	44%	35%	24%	16%
	열매	52%	12%	10%	6%	2%
	종자	52%	25%	24%	21%	15%
붉은호장근 실시예 2	전초	52%	64%	50%	37%	16%
	지상부	52%	29%	21%	14%	9%
	꽃	52%	10%	6%	3%	1%
	잎	52%	29%	21%	16%	9%
	줄기	52%	39%	16%	10%	7%
	뿌리	52%	25%	18%	12%	4%
	열매	52%	21%	16%	9%	3%
	종자	52%	31%	22%	14%	6%

상기 표 3 및 표 4에 나타난 바와 같이, 실시예 2의 경우, 타이로시네이즈 유사활성이 농도 유의적으로 증가함으로써 실시예 1, 3, 4에 비하여 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었으며, 그 효능 또한 농도별로 유의성 있는 결과를 나타냄을 알 수 있었다. 표 4에서 비교구인 알부틴(500 ㎍/㎖)의 경우, 52%의 활성을 나타내었다.

실험예 3 : 멜라닌 합성 억제 효과 측정

마우스 유래 B16F1 멜라노마(melanoma) 내 멜라닌(melanin) 생합성을 억제하는 효과를 측정하기 위해 다음과 같이 실험을 진행하였다. B16F1(melanoma) 세포를 소혈청 10%와 항생제 1%가 포함된 DMEM/high glucose(Dulbeco's Modified Eagle Medium, Hyclone)에서 배양한 후, 이를 취하여 세포 농도를 5x10⁴ cells/㎖로 조정한 세포액을 조제하고, 이를 지름 60 mm의 plate에 분주한 다음, 37℃, 5% CO₂ 조건에서 24시간 배양하였다. 그 후, 배양액을 제거하고 0.2 μM α-MSH(Melanocyte-stimulating hormone)를 배지에 혼입하여 대조구를 제외한 각 well에 첨가하고 농도별 추출시료도 함께 첨가하였다. 이때 양성대조구는 500 ㎍/㎖ 농도의 알부틴을 사용하였다. 72시간 배양한 후 각 plate 내의 세포 내 멜라닌 생성량을 측정하기 위해 우선 plate 내 나머지 배양액을 제거하고, 1xPBS(Phosphate buffered saline)로 1회 세척하였다. Trypsin을 각 well에 처리하고 5분간 37℃의 CO₂ 배양기에서 배양하여 세포를 떼어낸 후, 각 well에 배양액을 처리하고 2 ㎖ 마이크로튜브(microtube)로 옮겼다. 이를 10,000 rpm에 10분간 원심분리한 후 튜브 안의 배양액을 제거하고 PBS를 1 ㎖씩 처리하고, 다시 원심분리와 제거를 통해 세척하였다. 그 후 PBS를 제거하고 70℃의 건조기에서 튜브의 뚜껑을 연 채로 1시간 보관하였다. 건조기에서 꺼낸 튜브에 각각 1 N NaOH(10% DMSO)를 400 ㎕씩 처리하고, 다시 70℃ 건조기에서 10분간 튜브의 뚜껑을 닫은 채 반응시켰다. 반응 후 1,000 rpm에 약 10분간 흔들어주고, 96-well plate로 각각 100 ㎕씩 옮겨 분주한 후, 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 490 ㎚/655 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 가장 우수한 타이로시네이즈 저해 효능을 나타내는 실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 추출물을 기준으로, 멜라닌 생합성 억제 효능을 분석한 결과는 하기 표 5에 기재하였다.

시료		Arbutin (500㎍/㎖)	실시예 2 (75㎍/㎖)	실시예 2 (37.5㎍/㎖)	실시예 2 (18.75㎍/㎖)
박태기나무 뿌리	저해율 (%)	43%	72%	48%	25%
새머루 줄기	저해율 (%)	43%	66%	32%	14%
붉은호장근 전초	저해율 (%)	43%	64%	28%	13%

상기 표 5에 나타난 바와 같이, 실시예 2의 경우 B16F1 멜라노마 세포 내 멜라닌 생합성을 농도 의존적으로 억제하는 유의성을 나타내어 미백 효과가 우수함을 알 수 있었다.

이하는 각 화장품 제형에 있어서 박태기나무, 새머루, 붉은호장근 추출물을 함유하여 미백 효과를 갖는 제형으로서의 화장료 조성예를 보여주며 처방예는 다음과 같다. 여기서, 추출물은 효과가 가장 좋은 실시예 2의 추출물을 사용하였다.

처방예 1 : 유연화장수의 제조

실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 추출물을 하나 이상 함유한 화장료 중 유연화장수의 처방예는 하기 표 6과 같다. 실시예 2의 성분에 따른 함량은 상기 표 1 및 표 2에서 나타난 바와 같이 세포 독성을 나타내지 않는 최대 농도를 기준으로 한다. 하기 표 6에서 실시예 2의 성분은 박태기나무 뿌리에 한정되지 않는다.

구체적인 제조방법은 다음과 같다. 소듐히아루로네이트는 정제수에 프로펠러믹서 3000 rpm으로 분산하여 1% solution 으로 준비하였다. 수상 용해조에 원료 1-8을 프로펠러믹서 500 rpm으로 균일화 및 75℃ 가온 하여 완전 용해 한 후, 실온으로 냉각하였다. 별도 용해조에 원료 9-11을 완전 용해하여 상기 수상 용해조에 투입 한 후, 교반 혼합하였다. 여기에 실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 중 하나 이상의 추출물을 투입하여 충분히 교반 혼합하여, 실시예 2의 추출물을 함유한 유연화장수를 제조 하였다.

성분	함량(중량%)
박태기나무 뿌리(실시예 2)	0.0075
폴리옥시에칠렌경화피마자유	0.5
글리신	3.0
디포타슘글리시리제이트	0.1
1,3-부틸렌 글리콜	3.0
소듐히아루로네이트	0.1
에탄올	5.0
항산화제	0.1
트리에탄올아민	0.1
EDTA	0.1
방부제	0.05
정제수	To 100

처방예 2 : 영양화장수의 제조

실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 추출물을 하나 이상 함유한 화장료 중 영양화장수의 처방예는 하기 표 7과 같다. 실시예 2의 성분에 따른 함량은 상기 표 1 및 표 2에서 나타난 바와 같이 세포 독성을 나타내지 않는 최대 농도를 기준으로 한다. 하기 표 6에서 실시예 2의 성분은 박태기나무 뿌리에 한정되지 않는다.

구체적인 제조방법은 다음과 같다. 카보머는 정제수에 프로펠러믹서 4000 rpm으로 분산하여 2% solution으로 준비하였다. 수상용해조에 원료 1-6을 투입하여 호모 2000 rpm으로 교반하여 분산 후, 75℃까지 가온하였다. 유상 용해조에 원료 7-13을 투입하여 75℃까지 가온 용해하였다. 수상 용해조에 용해된 유상을 투입하여 유화(3000 rpm/5분) 시킨 후, 실온으로 냉각하였다. 여기에 실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 중 하나 이상의 추출물을 투입하여 충분히 교반 혼합하여, 실시예 2의 추출물을 함유한 영양화장수를 제조 하였다.

성분	함량(중량%)
박태기나무 뿌리(실시예 2)	0.0075
글리세린	7.0
소르비탄스테아레이트 슈크로오즈코코에이트	2.0
미네랄 오일	4.0
트리옥타노인	1.0
스테아릭에씨드	1.0
글리세릴 스테아레이트	0.5
소르비탄모노스테아레이트	1.0
디메치콘	0.5
항산화제	0.3
트리에탄올아민	0.1
카보머	0.2
EDTA	0.1
방부제	0.05
정제수	To 100

처방예 3 : 에센스의 제조

실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 추출물을 하나 이상 함유한 화장료 중 에센스의 처방에는 하기 표 8과 같다. 실시예 2의 성분에 따른 함량은 상기 표 1 및 표 2에서 나타난 바와 같이 세포 독성을 나타내지 않는 최대 농도를 기준으로 한다. 하기 표 8에서 실시예 2의 성분은 박태기나무 뿌리에 한정되지 않는다.

구체적인 제조방법은 다음과 같다. 소듐히아루로네이트, 히드록시에칠셀룰로이즈는 각각 정제수에 프로펠러믹서 2000 rpm으로 분산하여 1% solution으로 준비하였다. 카보머는 정제수에 프로펠러믹서 4000 rpm으로 분산하여 2% solution으로 준비하였다. 수상 용해조에 원료 1-12를 투입하여, 호모 2000 rpm으로 교반하여 분산 후, 75℃까지 가온하였다. 가온 된 수상을 실온으로 냉각하였다. 별도의 용해조에 원료 13-15를 완전 용해 시킨 후, 상기 수상 용해조에 투입하여 교반 혼합하였다. 여기에 실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 중 하나 이상의 추출물을 투입하여 충분히 교반 혼합하여, 실시예 2의 추출물을 함유한 에센스를 제조 하였다.

성분	함량(중량%)
박태기나무 뿌리(실시예 2)	0.0075
글리세린	5.0
1,3-부틸렌 글리콜	2.0
폴리에칠렌 글리콜	2.0
카보머	1.0
소듐히아루로네이트	0.1
글리신	3.0
폴리아크릴아마이드	2.0
히드록시에칠셀룰로이즈	0.2
에탄올	3.0
항산화제	0.3
트리에탄올아민	0.1
폴리옥시에칠렌경화피마자유	1.0
EDTA	0.1
방부제	0.05
정제수	To 100

처방예 4 : 영양크림의 제조

실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 추출물을 하나 이상 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 하기 표 9와 같다. 실시예 2의 성분에 따른 함량은 상기 표 1 및 표 2에서 나타난 바와 같이 세포 독성을 나타내지 않는 최대 농도를 기준으로 한다. 하기 표 9에서 실시예 2의 성분은 박태기나무 뿌리에 한정되지 않는다.

구체적인 제조방법은 다음과 같다. 수상용해조에 원료 1-8을 투입하여 호모 2000 rpm으로 교반하여 분산 후, 75℃까지 가온하였다. 유상 용해조에 원료 9-16을 투입하여 80℃까지 가온 용해하였다. 수상 용해조에 용해된 유상을 투입하여 유화(3000 rpm/10분) 시킨 후, 실온으로 냉각하였다. 여기에 실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 중 하나 이상의 추출물을 투입하여 충분히 교반 혼합하여, 실시예 2의 추출물을 함유한 영양크림을 제조 하였다.

성분	함량(중량%)
박태기나무 뿌리(실시예 2)	0.0075
1,3-부틸렌글리콜	3.0
글리세린	3.0
하이드로제네이티드 레시친	1.0
옥틸도데카놀	3.0
트리옥타노인	2.0
스테아릭에씨드	1.5
세토스테아릴알콜	2.0
폴리솔베이트60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	2.0
디메치콘	3.0
항산화제	0.3
산탄검	0.2
트리에탄올아민	0.1
EDTA	0.1
방부제	0.05
정제수	To 100

실험예 4 : 미백효과 실험

앞 실험에서 나타난 미백 효과가 실제적으로 사람의 피부 미백에 도움을 주는 지 확인하기 위하여 실시예 2의 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초 중 하나 이상의 추출물이 함유된 크림에 대하여 인체 적용시험을 실시하였다. 로보스킨 분석기(Roboskin analyser) 장비를 이용한 피부 미백 시험은 피시험자의 얼굴 부위에 시료 또는 제품을 적용하면서 주기적으로 색소 침착 및 피부톤(밝기)의 개선 효과를 평가하였다. 시험은 역시 피부 탄력 개선 시험과 동일하게 수행되었으며 따라서, 피시험자 10명(대조구 5명, 시험구 5명)으로 진행되었으며 모두 여성으로 연령은 평균 34세로 구성되었다. 역시 사용 전, 사용 후 1주, 2주, 4주, 6주의 총 5회 측정을 실시하여 평균값을 구하였으며 모든 시험은 20-24℃, 습도 45-55%인 항온항습실에서 진행되었고 세안 후 항온항습실에서 최소 1시간 이상 적응 시킨 후 측정하였다.

실시예 2 (박태기나무)		사용전		1주		2주		4주		6주
		대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구
전초	색소침착(소)	9.7	9.4	9.3	9.2	9.4	9.1	9.2	8.8	9.2	8.6
	색소침착(대)	35.0	35.5	34.7	34.3	33.3	32.8	33.8	31.4	34.0	32.2
	밝기	62.7	63.9	62.5	64.0	63.1	64.4	63.8	64.5	64.5	65.0
지상부	색소침착(소)	9.3	9.4	9.3	9.0	8.9	8.6	9.0	8.8	9.2	9.1
	색소침착(대)	38.1	36.6	37.8	35.9	38.2	36.2	38.5	36.0	38.5	35.8
	밝기	65.1	64.6	64.8	66.7	64.9	66.9	65.1	67.3	65.5	67.4
꽃	색소침착(소)	8.8	9.0	8.7	8.5	8.5	8.4	8.8	8.2	8.9	7.9
	색소침착(대)	37.4	36.2	37.1	34.8	37.6	34.1	37.0	33.1	36.4	31.6
	밝기	66.0	64.1	67.3	64.7	68.1	65.8	66.3	67.2	66.2	70.1
잎	색소침착(소)	8.6	8.7	8.5	8.8	8.7	8.4	8.8	8.2	9.1	7.9
	색소침착(대)	36.7	36.4	36.5	35.9	35.9	35.2	36.1	34.9	35.8	34.8
	밝기	68.3	65.8	67.8	65.2	68.2	68.5	69.3	69.1	68.7	69.3
줄기	색소침착(소)	9.0	9.2	9.1	9.3	9.3	8.9	9.1	8.7	8.8	8.5
	색소침착(대)	35.8	35.5	36.1	35.1	34.8	34.8	34.6	34.2	35.1	33.9
	밝기	63.7	65.5	64.0	66.1	64.2	66.7	64.1	67.1	64.4	67.7
뿌리	색소침착(소)	9.1	9.4	9.1	9.5	8.8	9.0	8.7	8.1	9.0	7.6
	색소침착(대)	36.2	37.1	36.5	37.0	36.1	36.2	35.8	34.3	35.7	32.0
	밝기	64.0	63.4	64.5	63.8	64.2	65.3	64.3	67.8	64.8	71.2
열매	색소침착(소)	8.4	8.3	8.6	8.1	8.4	8.0	8.5	8.1	8.6	8.2
	색소침착(대)	32.8	33.6	33.0	33.3	33.4	33.4	33.5	33.1	32.9	33.2
	밝기	69.3	68.5	69.0	69.6	70.1	70.0	69.1	70.3	68.5	69.9
종자	색소침착(소)	8.6	8.7	8.5	8.6	8.8	8.4	8.9	8.2	8.6	8.0
	색소침착(대)	33.5	33.8	33.1	34.0	33.2	33.6	33.3	33.1	32.9	32.7
	밝기	67.9	67.7	67.5	67.9	67.7	68.5	68.2	68.9	68.0	68.8

박태기나무의 부위별 처방예 4에 대한 피부 미백 효과 측정 결과, 가장 우수한 효능을 나타낸 박태기나무 뿌리의 경우, 2주차부터 색소침착(대, 소)이 감소되는 경향을 나타내었으며 피부 밝기 또한 밝아지는 것을 알 수 있어 피부 미백에 도움을 주는 것을 알 수 있었다.

실시예 2 (새머루)		사용전		1주		2주		4주		6주
		대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구
새머루 전초	색소침착(소)	8.9	8.8	9.1	8.6	9.2	8.5	8.8	8.2	8.9	7.9
	색소침착(대)	35.7	36.7	36.1	36.3	35.9	35.7	35.7	35.2	35.3	33.4
	밝기	66.2	67.8	65.7	67.5	66.0	68.2	66.3	68.8	66.5	69.3
새머루 지상부	색소침착(소)	8.5	8.4	8.5	8.1	8.4	8.0	8.1	7.7	8.0	7.3
	색소침착(대)	36.6	35.6	36.3	35.2	35.9	33.6	35.7	33.1	36.2	31.4
	밝기	67.1	66.8	67.5	67.2	67.3	67.7	67.5	68.3	67.9	69.0
새머루 꽃	색소침착(소)	8.5	8.6	8.4	8.7	8.2	8.4	8.3	8.1	8.0	7.8
	색소침착(대)	38.0	37.5	38.2	37.9	38.8	36.8	39.1	35.9	38.5	35.1
	밝기	64.1	65.3	63.8	65.9	64.3	67.2	65.4	67.5	65.2	69.6
새머루 잎	색소침착(소)	8.4	8.6	8.2	8.1	8.4	7.9	8.5	7.7	8.7	7.6
	색소침착(대)	34.2	35.6	34.0	35.7	34.3	34.9	34.7	34.1	34.8	32.8
	밝기	68.1	68.9	68.5	69.3	68.5	69.9	70.0	71.2	70.8	71.9
새머루 줄기	색소침착(소)	8.8	8.5	8.7	8.4	8.7	8.0	8.3	7.4	8.8	6.8
	색소침착(대)	36.5	38.0	36.1	37.8	35.8	36.9	36.2	33.1	36.4	32.6
	밝기	65.7	66.4	66.1	66.4	66.3	68.4	66.4	70.1	66.6	73.3
새머루 뿌리	색소침착(소)	8.2	8.4	8.4	8.1	8.5	8.0	8.4	7.8	8.1	7.5
	색소침착(대)	33.6	34.5	33.2	34.2	33.1	33.8	32.8	33.7	32.2	30.2
	밝기	68.8	68.4	69.2	68.2	69.3	68.9	68.7	70.5	68.8	72.9
새머루 열매	색소침착(소)	8.1	8.3	8.0	8.0	8.3	7.9	8.4	7.6	8.2	7.7
	색소침착(대)	35.3	35.9	35.1	35.2	34.4	34.0	34.1	32.7	33.3	31.0
	밝기	67.2	67.9	66.8	68.0	66.9	68.6	68.1	68.9	69.6	69.3
새머루 종자	색소침착(소)	8.6	8.6	8.4	8.5	8.3	8.2	8.5	7.9	8.8	7.9
	색소침착(대)	34.7	34.4	35.1	33.2	34.9	32.9	34.7	33.1	34.6	31.4
	밝기	66.8	65.9	67.1	66.6	67.2	68.2	66.6	68.7	67.5	69.3

새머루의 처방예 4에 대한 피부 미백 효과 측정 결과, 가장 우수한 효능을 나타낸 새머루 줄기의 경우, 2주차부터 색소침착(대, 소)이 감소되는 경향을 나타내었으며 피부 밝기 또한 밝아지는 것을 알 수 있어 피부 미백에 도움을 주는 것을 알 수 있었다.

실시예 2 (붉은호장근)		사용전		1주		2주		4주		6주
		대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구	대조구	시험구
붉은호장근 전초	색소침착(소)	8.2	8.1	8.0	7.9	7.9	7.5	7.8	6.9	8.1	6.2
	색소침착(대)	32.0	31.3	31.1	30.7	31.4	29.8	30.7	27.6	30.6	25.4
	밝기	68.3	69.0	68.7	71.3	69.1	73.3	68.5	75.4	68.4	77.9
붉은호장근 지상부	색소침착(소)	8.3	8.3	8.4	8.6	8.2	8.4	8.4	8.1	8.5	7.8
	색소침착(대)	33.1	33.5	33.4	32.8	33.5	32.1	32.7	31.0	32.1	30.0
	밝기	68.5	68.1	67.9	68.8	68.6	69.6	69.2	70.0	68.7	70.6
붉은호장근 꽃	색소침착(소)	8.5	8.5	8.5	8.4	8.3	8.2	8.2	8.1	8.2	8.0
	색소침착(대)	35.3	34.8	35.7	33.5	35.8	33.8	35.1	34.2	35.2	34.5
	밝기	65.0	66.3	66.2	68.9	65.9	67.8	65.2	66.4	65.0	65.9
붉은호장근 잎	색소침착(소)	8.6	8.4	8.5	8.2	8.3	8.0	8.4	7.7	8.6	7.5
	색소침착(대)	35.5	35.8	35.1	35.1	34.8	34.7	35.0	34.1	35.3	33.2
	밝기	64.6	65.3	64.9	65.9	65.2	67.1	65.0	67.8	64.4	68.6
붉은호장근 줄기	색소침착(소)	7.9	8.2	8.1	8.0	7.8	7.5	7.7	7.2	7.5	7.0
	색소침착(대)	32.4	32.6	32.1	32.2	32.0	31.4	32.2	30.5	31.8	29.1
	밝기	68.1	66.1	68.4	67.3	68.5	68.3	68.9	68.7	68.3	69.3
붉은호장근 뿌리	색소침착(소)	8.2	8.1	8.3	8.0	8.1	7.8	8.0	7.9	7.8	7.6
	색소침착(대)	33.7	32.0	33.1	32.2	32.8	31.7	33.2	31.3	33.5	30.1
	밝기	64.8	65.1	65.2	66.2	65.5	67.0	64.9	67.5	65.6	67.8
붉은호장근 열매	색소침착(소)	8.3	8.3	8.5	8.0	8.5	8.1	8.2	7.8	8.4	7.7
	색소침착(대)	36.0	35.4	35.5	35.6	35.9	34.1	36.3	32.0	36.8	32.9
	밝기	65.7	66.3	66.9	67.4	66.4	68.2	65.3	69.2	62.0	68.4
붉은호장근 종자	색소침착(소)	8.4	8.6	8.2	8.2	8.1	7.8	8.0	7.5	8.3	7.1
	색소침착(대)	34.8	34.1	34.6	33.0	34.1	32.1	33.4	31.4	33.8	30.0
	밝기	67.0	68.2	66.5	68.6	66.6	70.2	64.3	70.6	67.8	71.8

붉은호장근의 처방예 4에 대한 피부 미백 효과 측정 결과, 가장 우수한 효능을 나타낸 붉은호장근 전초의 경우, 1주차부터 색소침착(대, 소)이 감소되는 경향을 나타내었으며 피부 밝기 또한 밝아지는 것을 알 수 있어 피부 미백에 도움을 주는 것을 알 수 있었다.

이상 실험예에서 확인된 바와 같이, 본 발명에 따른 박태기나무, 새머루, 붉은호장근 추출물은 미백 효과를 지니고 있으며, 특히 박태기나무 뿌리, 새머루 줄기, 붉은호장근 전초는 우수한 미백 효과를 지니고 있다. 또한, 본 발명의 추출물을 1종 이상 혼합 첨가하여 제조한 화장료 조성물 역시 미백 효과를 가진다.

따라서 본 발명은 피부 세포 내 멜라닌의 생성을 억제하여 미백에 도움을 주는 박태기나무, 새머루, 붉은호장근 추출물과 이 중, 1종 이상 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 효과가 있다.

Claims (6)

1. 붉은호장근(Reynoutria japonica for.elata) 식물 추출물을 유효성분으로 포함하고,
   상기 식물 추출물이 식물의 잎, 줄기, 열매, 종자, 및 뿌리를 포함하는 군으로부터 선택되는 부위로부터 추출되며,
   추출용매가 메탄올인, 미백 화장료 조성물.
   
2. 삭제
3. 삭제
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 식물 추출물의 양은 미백 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.00002-30 중량%인 것을 특징으로 하는 미백 화장료 조성물.
   
5. 붉은호장근(Reynoutria japonica for.elata) 식물 추출물을 유효성분으로 포함하고,
   상기 식물 추출물이 식물의 잎, 줄기, 열매, 종자, 및 뿌리를 포함하는 군으로부터 선택되는 부위로부터 추출되며,
   추출용매가 메탄올인, 미백 활성 약제학적 조성물.
   
6. 붉은호장근(Reynoutria japonica for.elata) 식물 추출물을 유효성분으로 포함하고,
   상기 식물 추출물이 식물의 잎, 줄기, 열매, 종자, 및 뿌리를 포함하는 군으로부터 선택되는 부위로부터 추출되며,
   추출용매가 메탄올인, 미백 활성 식품 조성물.