KR101244543B1 - 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용판단용 유전자 마커군, 마이크로어레이 칩 및 이를 이용한 판단 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 판단하기 위한 유전자 마커군, 상기 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 마이크로어레이 칩, 및 상기 마이크로어레이 칩을 이용한 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 유전자 마커군은 실제 17-β 에스트라디올의 독성과 높은 연관성을 갖는 유전자 마커군으로서, 이를 이용하면 피검체의 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 보다 정확하게 우수한 검출 감도로 판단할 수 있으며, 환경 시료에서 17-β 에스트라디올에 의한 오염을 모니터링 하거나 위해성을 평가하는데 유용하게 사용될 수 있고, 17-β 에스트라디올에 노출시 유발되는 각종 질병이나 건강에 미치는 영향 등을 규명하는 도구로 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명에 따른 유전자 마커군은 실제 17-β 에스트라디올의 독성과 높은 연관성을 갖는 유전자 마커군으로서, 이를 이용하면 피검체의 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 보다 정확하게 우수한 검출 감도로 판단할 수 있으며, 환경 시료에서 17-β 에스트라디올에 의한 오염을 모니터링 하거나 위해성을 평가하는데 유용하게 사용될 수 있고, 17-β 에스트라디올에 노출시 유발되는 각종 질병이나 건강에 미치는 영향 등을 규명하는 도구로 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 판단하기 위한 유전자 마커군, 상기 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용판단용 마이크로어레이 칩, 및 상기 마이크로어레이 칩을 이용한 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단 방법에 관한 것이다.
과거 수십년 동안 환경계에서 생식 호르몬에 대한 관심이 증가하여 왔다. 특히 에스트로겐성 화학물질이 남성의 생식력에 미치는 잠재적인 위험성은 널리 연구되어 왔다. 에스트로겐은 여성 스테로이드 호르몬으로 여겨져 왔지만, 최근에는 에스트로겐 계열 화합물들이 태아의 발달, 특히 성 분화 및 생물학적 생식 시스템의 생성에 영향을 미치는 것으로 알려지고 있다. 에스트로겐은 또한 림프성 세포의 성장과 분화, 활성과 증식, 사이토카인 분비 및 항체 생산을 조절함으로써 면역 기능에도 중요한 영향을 미친다. 최근의 연구들은 에스트로겐의 일종인 17-β 에스트라디올과 세포 표면 에스트로겐 수용체(ERα 및 ERβ)의 상호작용이 세포 성장 및 악성 변이에 중요한 에스트로겐-반응성 유전자들의 전사를 조절함을 밝혔다.
이러한 최근의 다양한 연구들이 인간의 건강에 영향을 미치는 내분비계 장애물질인 환경호르몬의 일종인 17-β 에스트라디올의 인체 위해성에 대한 많은 정보들을 제공하고 있으나 생체내에서 17-β 에스트라디올의 작용 메커니즘은 여전히 명확히 규명되지 않고 있다. DNA 마이크로어레이를 이용한 유전체의 분석기법은 17-β 에스트라디올의 생체내 역할 및 작용 메커니즘에 대한 정보를 제공할 뿐 아니라, 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 판단할 수 있는 바이오마커를 제공할 수 있음으로 인하여 최근 들어 매우 중요한 실험 방법으로 대두되고 있다. 마이크로어레이를 이용한 유전체 분석은 생물학의 다양한 분야에서 영향력 있는 분석 방법으로 자리잡고 있으며 퍼블릭 마이크로어레이 데이터베이스는 매년 급속히 증가하고 있다.
퍼블릭 마이크로어레이 데이터베이스와 함께 바이오인포메틱스의 급격한 성장은 신호에 의해 조절된 전사 반응 및 전사체 변화의 조사에 대한 큰 가능성을 열어주고 있다. 급속히 성장하는 퍼블릭 데이터베이스, 예를 들면 gene expression omnibus (GEO)는 다양한 생물학적 이슈를 보여주는 넓은 범위의 발현 프로파일에 대한 수천의 마이크로어레이 데이터를 포함함으로써 전체 유전체의 상호작용에 대한 실마리를 제공해준다. 대규모의 데이터 세트 및 바이오인포메틱스 방법의 이러한 종합적인 이용은 목적 유전자의 중심이 되는 역할을 동시에 모니터 할 수 있도록 해준다. 대량의 실험 마이크로어레이 데이터 세트 내에서 발현 프로파일링을 수행함에 있어서 GEO 데이터에 적용되는 전형적인 첫번째 전환은은 평준화라 불리는 것으로서, 발현 데이터를 전환하여 의미 있는 생물학적인 비교가 만들어질 수 있도록 하는 것이다. 리니어 리그레션 분석, 로그 센터링, 랭크 인베리언트법과 같이 발현 비율의 평준화를 위한 몇몇 대안적인 방법들이 있다.
본 연구에는 개별 실험(GSEs)으로부터 differentially expressed genes(DEGs)를 규명하기 위하여 RankProd algorithm을 사용하여 17-β 에스트라디올 노출군과 대조군의 마이크로어레이 데이터세트를 분석하였다. 각 GSEs 로부터 규명된 DEGs들을 RankProd 방법을 사용하여 처리함으로써 서로 다른 조건에서 수행된 여러 개의 실험결과로부터 공통적으로 그 발현량이 변화되는 유전자들을 선택해 낼 수 있다. 이러한 실험적 방법은 생물학적으로 사용하기 쉬운 fold-change(FC) 기준 방법에 비해 더 적은 가공이 필요하고 노이지(noisy) 데이터와 함께 사용되었을 때 오류 배제 성능이 향상되는 등 여러 장점을 제공한다.
각 개별 실험에 의해 얻어진 DEGs는 각 실험이 수행된 환경조건에 의해 발현량이 변화된 유전자들을 포함하기 때문에 17-β 에스트라디올 노출 여부를 판단하는 바이오마커로써의 유효성이 떨어진다. 그러나 본 연구에서는 서로 완전히 다른 환경조건에서 생성된 다량의 마이크로어레이로부터 공통적으로 발현량이 변화되는 유전자 세트를 선정해 냄으로써 기존의 DEGs에 비해 향상된 정확도를 갖는 17-β 에스트라디올 노출 평가용 바이오마커 세트를 선정하였다.
본 발명은 환경호르몬의 하나인 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 판단함에 있어서 정확도가 높고 검출 감도가 우수한 유전자 마커군과 이를 포함하는 마이크로어레이 칩을 제공하고, 이를 이용하여 피검체의 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 판단하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 과제의 해결을 위해, 본 발명은 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004725, NM_000269, NM_005956, AF141349, NM_001071, BC001002, BC005838, AF081496, NM_004219, NM_000194 및 AF352832인 유전자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군 및 유전자 등록번호(GenBank)가 AF279900, D55716, NM_002388, BC000149, BC001721, NM_003094 및 AL049650인 유전자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군을 제공한다.
또한 본 발명은 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004725, NM_000269, NM_005956, AF141349, NM_001071, BC001002, BC005838, AF081496, NM_004219, NM_000194 및 AF352832인 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 마이크로어레이 칩 및 유전자 등록번호(GenBank)가 AF279900, D55716, NM_002388, BC000149, BC001721, NM_003094 및 AL049650인 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 DNA 마이크로어레이 칩을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 유전자 마커군의 유전자의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 프로브로 하여 피검체의 세포 내에서 상기 마커 유전자들의 발현 변화를 분석하는 단계를 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군은 독성유전체(toxicogenomics) 및 단백질체(proteomics) 관련 마이크로어레이 데이터베이스로부터 RankProd algorithm을 이용하여 공통으로 발현되는 유전자군 내에서 실제 17-β 에스트라디올과의 상관관계를 검증하고 연구로 얻어진 결과들을 통합하여 분석하는 통계적 기법을 개발·이용하여 선별한 것이다. 17-β 에스트라디올 이외에 유전자 발현에 영향을 미칠 만한 다른 반응 조건들을 최대한 차단함으로써 다양한 환경과 실험 조건에서도 17-β 에스트라디올에의 노출에 반응하여 일관되게 발현 조절되는 유전자들로 이루어진 유전자 마커군을 선별하였으며, 이들은 실제 17-β 에스트라디올의 독성과 높은 연관성을 갖는 유전자 마커군이다. 따라서 피검체의 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 보다 정확하게 우수한 검출 감도로 판단할 수 있으며, 이를 이용하여 환경 시료에서 17-β 에스트라디올에 의한 오염을 모니터링 하거나 위해성을 평가하는데 유용하게 사용될 수 있고, 17-β 에스트라디올에 노출시 유발되는 각종 질병이나 건강에 미치는 영향 등을 규명하는 도구로 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 KEGG 경로 데이터베이스를 이용한 DEG들의 과표현 분석(over-representation analysis) 결과를 나타낸 도면이다.
본 발명은 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004725, NM_000269, NM_005956, AF141349, NM_001071, BC001002, BC005838, AF081496, NM_004219, NM_000194 및 AF352832인 유전자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군을 제공한다.
또한 본 발명은 유전자 등록번호(GenBank)가 AF279900, D55716, NM_002388, BC000149, BC001721, NM_003094 및 AL049650인 유전자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군을 제공한다.
본 발명의 구체예에서, 상기 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군은, 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004551, NM_004328, NM_002876, NM_001469, NM_004708, NM_002466, NM_007019, BG105365, U87954, AA205834, NM_003016, BC002411, AI857639, NM_005381, NM_004526, NM_001552, NM_006708, NM_004960, U90223, NM_001255, D88357, NM_001786, NM_017975, NM_007057, NM_017528, BF975273, BF975273, NM_006784, NM_024006, AK002064, NM_014501, NM_003969, NM_014847, AW245400, BC002654, BC004188, BC004949, BC005946, AL581768, BC006379, BC006481, BE300252, NM_006082, AI307759, BE779865, NM_004237, NM_030810, NM_016283, NM_007192, NM_005496, NM_018976, AF105230, NM_003096, NM_003095, AJ130972, AF033111, BC002488, BC000941, NM_006666, NM_003707, NM_016125, AW024383, AK000822, BC001886, NM_006638, AF054183, NM_002882, U49245, BF686442, AF348514, NM_003981, BC001312, AK027737, NM_006109, NM_002794, NM_002792, NM_002812, BC003005, AL560017, X62006, NM_002696, NM_006230, NM_000819, NM_006452, NM_004461, BE869583, L19184, BC005020, NM_005729, NM_017952, NM_020143, AA191576, NM_006392, D21262, NM_004741, AF241788, NM_002482, NM_002482, NM_022346, NM_003905, NM_004546, AI671747, NM_016034, BC003375, NM_014180, NM_014175, AA604621, NM_006636, AF067173, NM_017522, U63743, BC005978, BG249565, L38951, NM_013417, NM_004515, BC000947, BE314601, NM_016391, AW592266, NM_005340, U27143, AA664258, NM_004499, NM_004494, AF028832, BG420237, BC000478, AB023420, BE256479, BG403660, NM_018072, NM_004832, AA133341, NM_000402, NM_021067, NM_000143, BC000323, NM_004111, BG537190, AI984005, M75715, NM_015904, NM_001970, NM_004094, NM_004280, NM_020189, AB002282, U72514, AL136939, AJ010395, NM_001363, U59151, NM_014280, NM_014750, NM_016448, NM_019082, NM_016355, NM_005804, BG530850, NM_001916, BC005299, AF213033, BE407516, NM_001905, AF053640, NM_001316, BC002342, BC003090, NM_003653, L04636, BG397444, NM_031210, NM_001274, NM_006429, AF275798, NM_006430, AK025647, NM_001827, NM_001826, BC000278, BC001012, BF752277, NM_001218, AF057356, AF044773, NM_017900, NM_014109, BC006301, NM_001605, NM_007002, U39945, NM_001283, NM_006401, BF224073, AF237813, AA393940, AA515698, AL050025, AV712577, BE966236, BE966374, M30448, R01140, X03363, NM_001982, M81635, NM_002979, NM_005902, AL523310, NM_001769, BC001288, NM_004360, NM_003453, NM_016061, AK021433, BF131791, BG169673, NM_003761, NM_016208, NM_016079, J04152, U42349, NM_021137, NM_020127, NM_004872, NM_018247, AB020980, NM_006283, AI885338, D83077, NM_003316, AF133425, NM_002999, AI628605, NM_006416, NM_015677, NM_003710, AA885297, D84109, NM_005667, NM_022450, BC000232, NM_004251, AL136727, BC003617, AF267863, NM_030981, NM_004663, NM_006423, AI762627, NM_002840, AL050038, NM_015366, NM_006622, AI983043, NM_000291, NM_002651, Z83838, NM_003634, AL157398, NM_006393, AI934569, NM_004999, NM_021970, NM_014045, NM_018368, AB034747, N66633, NM_016357, AL031427, NM_014774, NM_014734, NM_021991, NM_006618, AF092128, AF019214, AI701949, NM_006402, NM_005345, BG110532, AK023348, BC000324, NM_002087, AF035737, NM_001518, AF154005, AL137725, NM_004428, L20817, BF697964, NM_004415, NM_016243, NM_005213, AF135162, AW134535, L49506, NM_004354, D88435, NM_020990, AV751709, AA143765, NM_001780, AL570661, BG327863, L33930, M58664, X69397, NM_004390, NM_001749, AI653730, NM_006384, AL133228, NM_001197, AL535380, NM_001731, BE043477, NM_003945, AF113129, AF077614, AB014511, NM_024320, NM_006886, NM_020987, BC002515, AF033026, AA761181, AK000168, BG468434 및 BG530368 인 유전자들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자를 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 유전자 마커군이란 다수의 마커 유전자들을 포함하는 유전자 세트를 의미한다.
본 발명자들은 독성유전체(toxicogenomics) 및 단백질체(proteomics) 관련 마이크로어레이 데이터세트(GEO 데이터세트)로부터 RankProd algorithm을 이용하여 공통으로 발현되는 유전자군 내에서 실제 17-β 에스트라디올과 상관관계가 있는 유전자군을 선별하였다. 하기 실시예를 통해 알 수 있는 바와 같이, GEO(gene expression omnibus)에 저장된 Affymetrix Gene-Chip을 이용하여 얻은 마이크로어레이 데이터 세트를 이용하였다. 이 방법은 17-β 에스트라디올 노출에 반응한 DEGs를 규명한 기존의 마이크로어레이 데이터베이스의 이용을 가능하게 하였다. 17-β 에스트라디올 처리 샘플로부터 얻은 유전자 발현 프로파일링 데이터를 포함하는 GEO 데이터세트(GSEs) 내에서 DEG 분석을 통해 fold change 값을 구하였고, 이를 순위 값으로 변환하였다. RankProd algorithm을 이용하여 Fold change의 순위가 상위에 배치되는 유전자를 공통으로 발현되는 유전자로 선정하였다. 이를 통하여 17-β 에스트라디올에 반응한 DEGs와 보통 발현된 유전자들을 구별하여, 다양한 실험적 조건이나 환경의 영향을 받지 않고 일관되게 공통적으로 과발현 혹은 저발현되는, 17-β 에스트라디올과 상관관계가 높은 348개의 유전자들을 선별하였다(표 2 내지 표 8 참조). 이 중 222개는 과발현 유전자들이었으며, 126개는 저발현 유전자들이었다.
상기 348개의 유전자 중에서 질병, 생체대사 기작과 관련 있는 유전자들을 선발하고 그 중 과발현되는 11개의 유전자들을 선발하였는데, 이들이 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004725, NM_000269, NM_005956, AF141349, NM_001071, BC001002, BC005838, AF081496, NM_004219, NM_000194 및 AF352832인 유전자들이다.
또한 상기 348개의 유전자 중에서 17- β 에스트라디올에 가장 민감하게 반응 하는 것으로 판단되는 유전자들을 선발하였는데, 이들이 유전자 등록번호(GenBank)가 AF279900, D55716, NM_002388, BC000149, BC001721, NM_003094 및 AL049650인 유전자들이다.
따라서 상기 유전자들을 포함하는 유전자 마커군을 프로브로 이용하여 피검체와 대조군의 세포 내에서 상기 마커 유전자들의 발현 변화를 비교분석함으로써, 피검체가 17-β 에스트라디올에 노출되었는지 여부를 판단할 수 있다. 즉, 만약 피검체가 17-β 에스트라디올에 노출되었다면, 표 2 내지 표 6에서 과발현(up-regulation)되는 것으로 나타난 유전자들의 발현량이 대조군에 비해 피검체의 세포 내에서 증가한 것으로 나타날 것이고, 표 6 내지 표 8에서 저발현(down-regulation)되는 것으로 나타난 유전자들의 발현량은 대조군에 비해 피검체의 세포 내에서 감소한 것으로 나타날 것이므로, 이를 이용하여 피검체의 17-β 에스트라디올에의 노출 여부를 판단할 수 있다.
또한 본 발명은 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004725, NM_000269, NM_005956, AF141349, NM_001071, BC001002, BC005838, AF081496, NM_004219, NM_000194 및 AF352832인 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 마이크로어레이 칩을 제공한다.
또한 본 발명은 유전자 등록번호(GenBank)가 AF279900, D55716, NM_002388, BC000149, BC001721, NM_003094 및 AL049650인 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 마이크로어레이 칩을 제공한다.
본 발명의 구체예에서, 상기 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 마이크로어레이 칩은 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004551, NM_004328, NM_002876, NM_001469, NM_004708, NM_002466, NM_007019, BG105365, U87954, AA205834, NM_003016, BC002411, AI857639, NM_005381, NM_002388, NM_004526, NM_001552, NM_006708, NM_004960, U90223, NM_001255, D88357, NM_001786, NM_017975, NM_007057, NM_017528, BF975273, BF975273, NM_006784, NM_024006, AK002064, NM_014501, NM_003969, NM_014847, AW245400, BC002654, BC004188, BC004949, BC005946, AL581768, BC006379, BC006481, BE300252, NM_006082, AI307759, BE779865, NM_004237, NM_030810, NM_016283, NM_007192, NM_005496, NM_018976, AF105230, NM_003096, NM_003095, AJ130972, AF033111, BC002488, BC000941, NM_006666, NM_003707, NM_016125, AW024383, AK000822, BC001886, NM_006638, AF054183, NM_002882, U49245, BF686442, AF348514, NM_003981, BC001312, AK027737, NM_006109, NM_002794, NM_002792, NM_002812, BC003005, AL560017, X62006, NM_002696, NM_006230, NM_000819, NM_006452, NM_004461, BE869583, L19184, BC005020, NM_005729, NM_017952, NM_020143, AA191576, NM_006392, D21262, NM_004741, AF241788, NM_002482, NM_002482, NM_022346, NM_003905, NM_004546, AI671747, NM_016034, BC003375, NM_014180, NM_014175, AA604621, NM_006636, AF067173, NM_017522, U63743, BC005978, BG249565, L38951, NM_013417, NM_004515, BC000947, BE314601, NM_016391, AW592266, NM_005340, U27143, AA664258, NM_004499, NM_004494, AF028832, BG420237, BC000478, AB023420, BE256479, BG403660, NM_018072, NM_004832, AA133341, NM_000402, NM_021067, NM_000143, BC000323, NM_004111, BG537190, AI984005, M75715, NM_015904, NM_001970, NM_004094, NM_004280, NM_020189, AB002282, U72514, AL136939, AJ010395, NM_001363, U59151, NM_014280, NM_014750, NM_016448, NM_019082, NM_016355, NM_005804, BG530850, NM_001916, BC005299, AF213033, BE407516, NM_001905, AF053640, NM_001316, BC002342, BC003090, NM_003653, L04636, BG397444, NM_031210, NM_001274, NM_006429, AF275798, NM_006430, AK025647, NM_001827, NM_001826, BC000278, BC001012, BF752277, NM_001218, AF057356, AF044773, NM_017900, NM_014109, BC006301, NM_001605, NM_007002, U39945, NM_001283, NM_006401, BF224073, AF237813, AA393940, AA515698, AL050025, AV712577, BE966236, BE966374, M30448, R01140, X03363, NM_001982, M81635, NM_002979, NM_005902, AL523310, NM_001769, BC001288, NM_004360, NM_003453, NM_016061, AK021433, BF131791, BG169673, NM_003761, NM_016208, NM_016079, J04152, U42349, NM_021137, NM_020127, NM_004872, NM_018247, AB020980, NM_006283, AI885338, D83077, NM_003316, AF133425, NM_002999, AI628605, NM_006416, NM_015677, NM_003710, AA885297, D84109, NM_005667, NM_022450, BC000232, NM_004251, AL136727, BC003617, AF267863, NM_030981, NM_004663, NM_006423, AI762627, NM_002840, AL050038, NM_015366, NM_006622, AI983043, NM_000291, NM_002651, Z83838, NM_003634, AL157398, NM_006393, AI934569, NM_004999, NM_021970, NM_014045, NM_018368, AB034747, N66633, NM_016357, AL031427, NM_014774, NM_014734, NM_021991, NM_006618, AF092128, AF019214, AI701949, NM_006402, NM_005345, BG110532, AK023348, BC000324, NM_002087, AF035737, NM_001518, AF154005, AL137725, NM_004428, L20817, BF697964, NM_004415, NM_016243, NM_005213, AF135162, AW134535, L49506, NM_004354, D88435, NM_020990, AV751709, AA143765, NM_001780, AL570661, BG327863, L33930, M58664, X69397, NM_004390, NM_001749, AI653730, NM_006384, AL133228, NM_001197, AL535380, NM_001731, BE043477, NM_003945, AF113129, AF077614, AB014511, NM_024320, NM_006886, NM_020987, BC002515, AF033026, AA761181, AK000168, BG468434 및 BG530368 인 유전자들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 마이크로어레이 칩에 있어서 상기 유전자 마커군에 포함되는 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 프로브(probe)로 사용할 수 있으며, 상기 프로브는 유전자 서열의 전부 또는 일부를 모두 포함하는 것으로 본다.
본 발명의 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 마이크로어레이 칩은 당업자에게 알려진 방법으로 제작할 수 있다. 상기 마이크로어레이 칩을 제작하는 방법은 하기와 같다. 상기 탐색된 유전자 마커를 프로브로 이용하여 마이크로어레이 칩의 기판상에 고정화시키기 위해 파이조일렉트릭(piezoelectric) 방식을 이용한 마이크로피펫팅(micropipetting)법 또는 핀(pin) 형태의 스폿터(spotter)를 이용한 방법 등을 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 마이크로어레이 칩의 기판은 아미노-실란(amino-silane), 폴리-L-라이신(poly-L-lysine) 및 알데히드(aldehyde)로 이루어진 군에서 선택되는 하나의 활성기가 코팅된 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 기판은 슬라이드 글라스, 플라스틱, 금속, 실리콘, 나일론 막, 및 니트로셀룰로스 막으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 유전자 서열의 전부 또는 일부를 포함하는 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 프로브로 하는 마이크로어레이 칩을 이용하여 피검체와 대조군의 세포 내에서 상기 마커 유전자들의 발현 변화를 비교분석함으로써, 피검체가 17-β 에스트라디올에 노출되었는지 여부를 판단할 수 있다.
또한 본 발명은 본 발명에 따른 유전자 마커군의 유전자의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 프로브로 하여 피검체의 세포 내에서 상기 마커 유전자들의 발현 변화를 분석하는 단계를 포함하는 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단 방법을 제공한다. 즉 전술한 바와 같이 피검체의 세포 내에서 상기 마커 유전자들이 과발현 또는 저발현 되었는지 그 발현 변화를 분석함으로써, 피검체가 17-β 에스트라디올에 노출되었는지 여부를 판단할 수 있다.
본 발명의 한 구체예에 따르면, 1) 실험군으로서 피검체의 체세포와 대조군의 체세포에서 RNA를 분리하는 단계; 2) 단계 1)의 실험군 및 대조군의 RNA를 cDNA로 합성하면서 실험군과 대조군을 각기 다른 형광물질로 표지하는 단계; 3) 단계 2)의 각기 다른 형광물질로 표지된 cDNA를 본 발명에 따른 DNA 마이크로어레이 칩과 혼성화시키는 단계; 4) 단계 3)에서 반응한 DNA 마이크로어레이 칩을 분석하는 단계; 및 5) 단계 4)에서 분석한 데이터에서 실험군의 유전자 마커의 발현 정도를 대조군과 비교하여 확인하는 단계를 거쳐 피검체의 17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부를 판단할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
실시예
1: 17-β
에스트라디올에의
노출 여부 판단용 유전자
마커군
발굴
실시예
1-1: 데이터세트
하기 실시예에서 사용된 모든 마이크로어레이 유전자 발현 데이터세트는 GEO(Gene Expression Omnibus, NCBI)의 퍼블릭 마이크로어레이 데이터베이스로부터 얻었다. cross platform variation으로부터 발생하는 잠재적인 에러를 제거하기 위하여, 1) 어세이 플랫폼으로서 Affymetrix Gene-Chip, 2) 타겟 시스템으로서 Homo Sapience 유래 샘플을 사용하여 발생하는 데이터세트로 한정하였다. 대조군 어세이와 함께 17-β 에스트라디올 처리 샘플로부터 얻은 유전자 발현 프로파일링 데이터를 포함하는 GEO 데이터세트(GSEs)를 모아서 수동으로 필터링 하였다. 다른 화학물질로 처리된 샘플로부터 얻은 GEO 샘플(GSM)은 제거하였다. 상기 처리군 및 대조군 어세이로부터 얻은 데이터세트를 이후 분석에 사용하였다.
실시예
1-1: 데이터세트마다
일관되게
조절되는 유전자 규명
다양한 환경과 실험 조건에서 17-β 에스트라디올에의 노출에 반응하여 일관되게 조절되는 유전자들을 규명하기 위하여, 17-β 에스트라디올 처리된 모든 유전자 발현 데이터세트를 조합하였고 이들을 함께 처리하였다. 이 과정에 있어서 다른 종류의(heterogeneous) 실험 조건과 수집된 데이터세트를 생성하는데 사용되는 마이크로어레이 플랫폼 유형 때문에 RankProd algorithm을 사용하였다. RankProd 스코어링을 위해서, 먼저 각 데이터세트에서 모든 쌍의 처리군 대 대조군 어레이에 대한 fold change 값을 하기 식에 의하여 계산하였다.
그리고 나서 각 처리군 대 대조군 쌍 내의 유전자들의 fold change 프로파일이, 상응하는 fold change 값에 따라 반응성이 높은 유전자들이 높은 순위를 얻도록 정렬하였다. 마지막으로, 유전자의 순위 결과물을 만들기 위하여 모든 쌍의 프로파일의 유전자 순위를 모든 유전자에서 증가시켰다. 다시, 데이터세트에 따라 좀더 과발현된 유전자들에는 좀더 높은 순위를 주었다. 순위에 따라 17-β 에스트라디올에 반응하여 가장 일관되게 조절된 유전자들 중 높은 순위에 있는 유전자들을 선별하였다.
실시예
1-3: 17-β
에스트라디올
관련 유전자를 규명하기 위한
PubMed
마이닝
마이크로어레이 데이터 분석과 동시에 PubMed를 이용하여 17-β 에스트라디올 관련 유전자를 규명하기 위한 데이터마이닝을 수행하였다. 이 분석을 위해 17-β 에스트라디올 관련 용어 및 HUGO에 의해 정의된 30,500 인간 유전자 심볼을 모두 포함하는 기사를 찾았다. 각 카테고리 내의 기사 수를 세었다. 그리고 나서 각 유전자와 17-β 에스트라디올의 관계의 중요성을 Chi-square 테스트로 다음과 같이 평가하였다;
카이스퀘어 테스트 p값이 0.01 미만인 유전자들은 에스트라디올과 연관된 것으로 간주하였다.
실시예
1-4: 유전자
맵핑
유전자 맵핑을 통하여 규명된 유전자들의 네트워크 위상을 밝혔다. 규명된 유전자들은 유전자 심볼을 UniProt ID로 맵핑함으로써 12D 데이터베이스로부터 제공된 단백질 상호작용 네트워크로 맵핑되었다. 유전자 심볼을 UniProt ID로 맵핑하기 위하여 NCBI 유전자 데이터베이스를 이용하였다. 그리고 나서 상응하는 단백질-단밸질 상호작용에 근거하여 각 유전자의 상호작용 정도, 상호작용 파트너의 수에 대하여 설명하였다.
실시예
1-5: 기능 분석 (
DAVID
)
선별된 DEG 세트의 주요한 기능(enriched function)을 규명하기 위하여 log-odd 비율 및 초기하급수 테스트(hypergenometric test)를 이용하였다. 선별된 유전자 세트에서 각 GO 용어에 대한 log-odd 비율은 다음과 같이 계산되었다. 상당히 과-표현된(over-represented) GO 생물학적 프로세스를 결정하기 위하여, 디폴트 옵션을 선택함으로써 DAVID functional annotation clustering tool을 사용하였다. Enrichment 스코어의 한계치는 1.3 대신 1.0으로 설정하여 가치 있는 정보의 손실을 피하였다. 상기 절차에 의하여 이러한 처리가 GO 분석의 타당성에 영향을 미칠 수 있는지를 평가하기 위하여 이들의 상응하는 유전자들을 분석하였다. 상당히 과-표현된 생물학적 프로세스 그룹으로 분류된 유전자들은 코딩된 단백질들의 세포내 분포에 따라 분류하였다.
실시예
1-6:
Enrichment
분석
Enrichment pie chart는 Bindea et al.에 의해 개발된 ClueGO version 1.2.2로 불리는 플러그인을 사용하여 만들었다. 초기하 분포(hypergeometric distribution)에 기반한 Enrichment 테스트는 각 단백질 절편에 대해 수행하였다. ClueGO에 의해 생성된 용어 및 그룹의 P값을 보정하기 위하여 Bonferroni adjustment를 수행하였다. 유사한 연관 유전자를 갖는 관련된 용어에는 fusion criteria를 사용하였다. 용어들의 세포 구성을 그룹화하기 위해 0.5 카파 스코어를 사용하였다. 더 높은 카파 스코어는 밀접하게 관련된 용어들과 유사한 연관 유전자들 사이의 높은 연결성을 의미한다. 또한 산출된 카파 스코어는 기능군을 정의하는 데에도 사용하였다.
결과
데이터세트
인실리코 분석방법을 이용하여 퍼블릭 유전자 발현 데이터세트에 기초하여 17-β 에스트라디올에의 노출에 의해 공통으로 발현되는 유전자를 찾았다. in vivo에서 유전자 선택의 유사한 분석들이 보고되어 왔으나, 각 연구마다 상이한 생물학적 조건 및 조직 타입을 이용하여 분석하였다. 그러나 본 실시예에 따르면 상이한 조건으로부터 얻은 모든 샘플을 분석하였고 각 데이터세트들의 조합을 통하여 일관되게 조절되는 유전자들을 찾았다. Rankprod algorithm을 이용하여 상이한 데이터 시리즈들의 유전자 발현 샘플을 분석하여 에러 가능성 및 불분명한 결과를 걸러냈다. 결과 데이터는 affymetrix GeneChip을 이용하여 얻은 Homo sapience의 유전자 발현 프로파일에 한정되었다. 17-β 에스트라디올 처리된 샘플들의 데이터세트로부터 복제수변이(copy number variation) 및 게놈 변이 프로파일을 걸러냈다. 3 Affymetrix GEO 플랫폼의 8 GSE로부터 총 117 GSM을 얻었다. 8 GSE 중 4개는 유방암 세포를 이용하였으며, 8 GSE 중 두 개는 에스트로겐이 17-β 에스트라디올로서 세포내 에스트로겐 수용체에 결합함을 보였다. 이러한 마이크로어레이 데이터의 분석 결과는, 단지 GEO에만 있던 GSE5102를 제외하고는, 각 저자에 의해 공개되었다(표 1). 이러한 마이크로어레이 데이터세트는 17-β 에스트라디올에 반응하여 일관되게 조절되는 유전자를 규명하기 위하여 RankProd algorithm을 이용하여 분석하였다.
17-β
에스트라디올에
반응하여
일관되게
조절되는 유전자들의 규명 및 기능 분석
Fold change 및 T-test를 이용하여 상당한 유전자 세트를 규명하였으며, 이러한 유전자들은 117 GSM으로부터 RankProd값을 생성하기 위한 과정을 거쳤다. Affymetrix probe ID를 상응하는 NCBI ID로 변환하였다(Unigene, Bene ID, GI). 하나 이상의 유전자를 타겟으로 하는 프로브들은 걸러냈다. 각 데이터세트에서 가장 과발현 및 저발현된 상위 10%의 유전자들을 선택하여 RankProd algorithm 분석하였다. 각각 다른 조건의 실험 마이크로어레이를 이용하여 DEG를 분석하였고 이를 통한 DEG의 값을 Rankprod algorithm을 이용하여 우선 순위를 도출 하였다. 개별적으로 진행 된 실험의 결과를 도출하여 각 실험의 Rankprod 값에서 상하위 5%의 유전자들이 공통적으로 출현 하였을 때 이는 17-β 에스트라디올에 일정하게 반응하는 것으로 기준을 정립하였다.
그 결과 표 2 내지 표 8 에 나타낸 바와 같이 348개의 유전자를 얻을 수 있었다. 공통으로 발현되는 총 348 유전자들이 규명되었고, 이 중 222개는 과발현된 유전자들이었으며, 126개는 저발현된 유전자들이었다. 주석을 이용할 수 없는 12 DEG 유전자들을 제외한 대부분의 유전자들에 대해서는 주석을 붙였다.
또한 상기 348개의 유전자 중에서 질병, 생체대사 기작과 관련 있는 유전자를 선택하여 분석한 결과 선발된 유전자 중 과발현되는 유전자를 선발한 결과, 다음과 같이 11개의 유전자를 얻었다: 유전자 등록번호(GenBank) NM_004725, NM_000269, NM_005956, AF141349, NM_001071, BC001002, BC005838, AF081496, NM_004219, NM_000194 및 AF352832.
또한 단백질 도메인 중 17-β 에스트라디올에 가장 민감하게 반응 하는 것으로 판단되는 유전자 군을 선발한 결과 다음과 같이 7개의 유전자를 얻었다: 유전자 등록번호(GenBank) AF279900, D55716, NM_002388, BC000149, BC001721, NM_003094 및 AL049650.
DEG 유전자들이 다양한 조건의 유전자 발현 데이터세트에 기초하여 선택되었기 때문에, 이들은 실험 조건에 상관없이 17-β 에스트라디올에 일정하게 반응하는 것으로 볼 수 있다. 규명된 DEG들은 상이한 실험 조건에서도 일정하게 조절되어 17-β 에스트라디올 처리에 일정한 반응을 보이며, 17-β 에스트라디올 노출의 위해성을 조사하는 데에 사용될 수 있다.
17-β 에스트라디올 DEG들을 기능적 카테고리별로 분류하기 위하여, 각 유전자들을 그 일차적인 기능을 나타내는 주요 카테고리에 배치하였다. 17-β 에스트라디올 DEG 단백질들은 기능적 카테고리와 연관되어 있으며 각 카테고리의 주요 명칭은 다음과 같다: 단백질 결합 (61.22%, Gene Ontology, Molecular Function), 세포 주기 (17.31%, Gene Ontology, Biological Process), 세포내 일부분 (74.68%, Gene Ontology, CellularComponent), 직접 단백질 시퀀싱 (33.65%, SP_PIR_KEYWORDS), 핵산 결합, OB-fold (3.21%, INTERPRO), 및 세포 주기 (4.14%, KEGG pathway). 이전 연구에서, 17-β 에스트라디올 타겟 유전자들의 마이크로어레이 분석은 다양한 세포주를 이용하여 수행되어 왔다. 그러나 단지 제한된 수의 유전자들만이 공통으로 조절되는 것으로 발견되었다. 본 실시예에서 규명된 DEG들은 이전에 보고된 에스트로겐-조절 유전자들과 많이 오버랩된다.
5개의 상당히 과-표현된 KEGG 경로를 규명하기 위해 ClueGO로써 Cytoscape 글러그인이 적용되었다(도 1). DEG 유전자군에서 상응하는 주요한 경로 중 하나에 있는 유전자들은 대개 지방산 대사에 기여한다. 5 표현된 경로 중에서 2 개의 DEG 유전자군은 감염과 관련 있다. 또한 종양 관련 유전자들은 adherent junction 과 관련 있다. DNA 복제 경로와 관련 있는 것으로 규명된 DEG 유전자군은 DNA 복구 기능과 관련 있다(표 9 및 표 10).
교차실험으로 규명된 유전자들과
PubMed
마이닝의 비교
PubMed 데이터마이닝으로 17-β 에스트라디올과 연관된 323 유전자들을 찾았다. PubMed 마이닝으로 찾은 유전자들 중 단지 5개의 유전자들만이 MCM7, MYBL2, SKP2 PA2G4 및 CDH1을 포함하는 유전자 발현 데이터세트의 교차실험에서 규명한 DEG들과 오버랩되었다. GO 기능성 카테고리 중 어떤 것도 상당한 PubMed 마이닝 스코어(연관성이 평균 p값)를 갖는 일반적으로 규명된 유전자 세트와 연관되지 않았다. PubMed 마이닝은 마이크로어레이 분석에 의해 무시될 수 있는 작은 발현 변화를 보이는 연관 유전자들을 규명하는 마이크로어레이 분석에 장점이 있다.
상이한 유전자 발현 데이터세트들에서 일관되게 17-β 에스트라디올에의 노출에 의해 조절되는 유전자들을 규명하고 분석함으로써, 이러한 DEG들이 지방산 대사, 감염 반응과 같은 특정 세포 기능에 관련 있음을 밝혔다. 이러한 기능들은 조직이나 환경 조건에 특이성을 갖지 않기 때문에, 본 교차실험으로부터 규명한 유전자들은 단백질 상호작용 네트워크의 중심에 자리잡고 있는 것으로 볼 수 있다. 이를 확인하기 위하여 교차실험 또는 PubMed 마이닝으로부터 얻은 DEG들의 상호작용 파트너의 평균 수를 비교하여 보았다. 교차실험에 의해 규명된 DEG들의 평균 상호작용 파트너의 수(33.78)가 PubMed 마이닝에 의한 DEG들(25.88)보다 많았다. 교차실험 및 PubMed 모두에 의해 규명된 5개의 유전자들은 가장 많은 평균 상호작용 수를 보였다(43.5). 다수의 마이크로어레이 데이터세트의 교차실험은 상이한 실험 조건 및 환경을 망라하는 raw 마이크로어레이 데이터를 기반으로 하기 때문에 연관된 에러 가능성을 낮추며 PubMed 데이터마이닝의 문제를 극복할 수 있다.
Claims (8)
- 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004725, NM_000269, NM_005956, AF141349, NM_001071, BC001002, BC005838, AF081496, NM_004219, NM_000194 및 AF352832인 유전자들을 포함하는
17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군. - 유전자 등록번호(GenBank)가 AF279900, D55716, NM_002388, BC000149, BC001721, NM_003094 및 AL049650인 유전자들을 포함하는
17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004551, NM_004328, NM_002876, NM_001469, NM_004708, NM_002466, NM_007019, BG105365, U87954, AA205834, NM_003016, BC002411, AI857639, NM_005381, NM_004526, NM_001552, NM_006708, NM_004960, U90223, NM_001255, D88357, NM_001786, NM_017975, NM_007057, NM_017528, BF975273, BF975273, NM_006784, NM_024006, AK002064, NM_014501, NM_003969, NM_014847, AW245400, BC002654, BC004188, BC004949, BC005946, AL581768, BC006379, BC006481, BE300252, NM_006082, AI307759, BE779865, NM_004237, NM_030810, NM_016283, NM_007192, NM_005496, NM_018976, AF105230, NM_003096, NM_003095, AJ130972, AF033111, BC002488, BC000941, NM_006666, NM_003707, NM_016125, AW024383, AK000822, BC001886, NM_006638, AF054183, NM_002882, U49245, BF686442, AF348514, NM_003981, BC001312, AK027737, NM_006109, NM_002794, NM_002792, NM_002812, BC003005, AL560017, X62006, NM_002696, NM_006230, NM_000819, NM_006452, NM_004461, BE869583, L19184, BC005020, NM_005729, NM_017952, NM_020143, AA191576, NM_006392, D21262, NM_004741, AF241788, NM_002482, NM_002482, NM_022346, NM_003905, NM_004546, AI671747, NM_016034, BC003375, NM_014180, NM_014175, AA604621, NM_006636, AF067173, NM_017522, U63743, BC005978, BG249565, L38951, NM_013417, NM_004515, BC000947, BE314601, NM_016391, AW592266, NM_005340, U27143, AA664258, NM_004499, NM_004494, AF028832, BG420237, BC000478, AB023420, BE256479, BG403660, NM_018072, NM_004832, AA133341, NM_000402, NM_021067, NM_000143, BC000323, NM_004111, BG537190, AI984005, M75715, NM_015904, NM_001970, NM_004094, NM_004280, NM_020189, AB002282, U72514, AL136939, AJ010395, NM_001363, U59151, NM_014280, NM_014750, NM_016448, NM_019082, NM_016355, NM_005804, BG530850, NM_001916, BC005299, AF213033, BE407516, NM_001905, AF053640, NM_001316, BC002342, BC003090, NM_003653, L04636, BG397444, NM_031210, NM_001274, NM_006429, AF275798, NM_006430, AK025647, NM_001827, NM_001826, BC000278, BC001012, BF752277, NM_001218, AF057356, AF044773, NM_017900, NM_014109, BC006301, NM_001605, NM_007002, U39945, NM_001283, NM_006401, BF224073, AF237813, AA393940, AA515698, AL050025, AV712577, BE966236, BE966374, M30448, R01140, X03363, NM_001982, M81635, NM_002979, NM_005902, AL523310, NM_001769, BC001288, NM_004360, NM_003453, NM_016061, AK021433, BF131791, BG169673, NM_003761, NM_016208, NM_016079, J04152, U42349, NM_021137, NM_020127, NM_004872, NM_018247, AB020980, NM_006283, AI885338, D83077, NM_003316, AF133425, NM_002999, AI628605, NM_006416, NM_015677, NM_003710, AA885297, D84109, NM_005667, NM_022450, BC000232, NM_004251, AL136727, BC003617, AF267863, NM_030981, NM_004663, NM_006423, AI762627, NM_002840, AL050038, NM_015366, NM_006622, AI983043, NM_000291, NM_002651, Z83838, NM_003634, AL157398, NM_006393, AI934569, NM_004999, NM_021970, NM_014045, NM_018368, AB034747, N66633, NM_016357, AL031427, NM_014774, NM_014734, NM_021991, NM_006618, AF092128, AF019214, AI701949, NM_006402, NM_005345, BG110532, AK023348, BC000324, NM_002087, AF035737, NM_001518, AF154005, AL137725, NM_004428, L20817, BF697964, NM_004415, NM_016243, NM_005213, AF135162, AW134535, L49506, NM_004354, D88435, NM_020990, AV751709, AA143765, NM_001780, AL570661, BG327863, L33930, M58664, X69397, NM_004390, NM_001749, AI653730, NM_006384, AL133228, NM_001197, AL535380, NM_001731, BE043477, NM_003945, AF113129, AF077614, AB014511, NM_024320, NM_006886, NM_020987, BC002515, AF033026, AA761181, AK000168, BG468434 및 BG530368 인 유전자들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자를 추가로 포함하는
17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 유전자 마커군. - 유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004725, NM_000269, NM_005956, AF141349, NM_001071, BC001002, BC005838, AF081496, NM_004219, NM_000194 및 AF352832인 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 포함하는
17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 마이크로어레이 칩. - 유전자 등록번호(GenBank)가 AF279900, D55716, NM_002388, BC000149, BC001721, NM_003094 및 AL049650인 유전자들의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 포함하는
17-β 에스트라디올에 대한 노출 여부 판단용 마이크로어레이 칩. - 제4항 또는 제5항에 있어서,
유전자 등록번호(GenBank)가 NM_004551, NM_004328, NM_002876, NM_001469, NM_004708, NM_002466, NM_007019, BG105365, U87954, AA205834, NM_003016, BC002411, AI857639, NM_005381, NM_004526, NM_001552, NM_006708, NM_004960, U90223, NM_001255, D88357, NM_001786, NM_017975, NM_007057, NM_017528, BF975273, BF975273, NM_006784, NM_024006, AK002064, NM_014501, NM_003969, NM_014847, AW245400, BC002654, BC004188, BC004949, BC005946, AL581768, BC006379, BC006481, BE300252, NM_006082, AI307759, BE779865, NM_004237, NM_030810, NM_016283, NM_007192, NM_005496, NM_018976, AF105230, NM_003096, NM_003095, AJ130972, AF033111, BC002488, BC000941, NM_006666, NM_003707, NM_016125, AW024383, AK000822, BC001886, NM_006638, AF054183, NM_002882, U49245, BF686442, AF348514, NM_003981, BC001312, AK027737, NM_006109, NM_002794, NM_002792, NM_002812, BC003005, AL560017, X62006, NM_002696, NM_006230, NM_000819, NM_006452, NM_004461, BE869583, L19184, BC005020, NM_005729, NM_017952, NM_020143, AA191576, NM_006392, D21262, NM_004741, AF241788, NM_002482, NM_002482, NM_022346, NM_003905, NM_004546, AI671747, NM_016034, BC003375, NM_014180, NM_014175, AA604621, NM_006636, AF067173, NM_017522, U63743, BC005978, BG249565, L38951, NM_013417, NM_004515, BC000947, BE314601, NM_016391, AW592266, NM_005340, U27143, AA664258, NM_004499, NM_004494, AF028832, BG420237, BC000478, AB023420, BE256479, BG403660, NM_018072, NM_004832, AA133341, NM_000402, NM_021067, NM_000143, BC000323, NM_004111, BG537190, AI984005, M75715, NM_015904, NM_001970, NM_004094, NM_004280, NM_020189, AB002282, U72514, AL136939, AJ010395, NM_001363, U59151, NM_014280, NM_014750, NM_016448, NM_019082, NM_016355, NM_005804, BG530850, NM_001916, BC005299, AF213033, BE407516, NM_001905, AF053640, NM_001316, BC002342, BC003090, NM_003653, L04636, BG397444, NM_031210, NM_001274, NM_006429, AF275798, NM_006430, AK025647, NM_001827, NM_001826, BC000278, BC001012, BF752277, NM_001218, AF057356, AF044773, NM_017900, NM_014109, BC006301, NM_001605, NM_007002, U39945, NM_001283, NM_006401, BF224073, AF237813, AA393940, AA515698, AL050025, AV712577, BE966236, BE966374, M30448, R01140, X03363, NM_001982, M81635, NM_002979, NM_005902, AL523310, NM_001769, BC001288, NM_004360, NM_003453, NM_016061, AK021433, BF131791, BG169673, NM_003761, NM_016208, NM_016079, J04152, U42349, NM_021137, NM_020127, NM_004872, NM_018247, AB020980, NM_006283, AI885338, D83077, NM_003316, AF133425, NM_002999, AI628605, NM_006416, NM_015677, NM_003710, AA885297, D84109, NM_005667, NM_022450, BC000232, NM_004251, AL136727, BC003617, AF267863, NM_030981, NM_004663, NM_006423, AI762627, NM_002840, AL050038, NM_015366, NM_006622, AI983043, NM_000291, NM_002651, Z83838, NM_003634, AL157398, NM_006393, AI934569, NM_004999, NM_021970, NM_014045, NM_018368, AB034747, N66633, NM_016357, AL031427, NM_014774, NM_014734, NM_021991, NM_006618, AF092128, AF019214, AI701949, NM_006402, NM_005345, BG110532, AK023348, BC000324, NM_002087, AF035737, NM_001518, AF154005, AL137725, NM_004428, L20817, BF697964, NM_004415, NM_016243, NM_005213, AF135162, AW134535, L49506, NM_004354, D88435, NM_020990, AV751709, AA143765, NM_001780, AL570661, BG327863, L33930, M58664, X69397, NM_004390, NM_001749, AI653730, NM_006384, AL133228, NM_001197, AL535380, NM_001731, BE043477, NM_003945, AF113129, AF077614, AB014511, NM_024320, NM_006886, NM_020987, BC002515, AF033026, AA761181, AK000168, BG468434 및 BG530368 인 유전자들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 DNA, cDNA, RNA 및 이들의 상보가닥 분자들을 추가로 포함하는
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| Cardiovasc Res. 2002 Feb 15;53(3):642-9. * |
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| KR20120021823A (ko) | 2012-03-09 |
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