KR101228554B1 - The Fermentation Forming Method of Citrus Sunki And The Product thereof - Google Patents
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Abstract
본 발명은 진피발효물 생성방법 및 이에 따른 진피발효생성물을 개시한다. 구체적으로 본 발명은 쌀겨와 다시마 및 인삼 중 적어도 하나를 포함하는 혼합물을 젖산균 및 효모 중 적어도 하나에 의해 발효하여 발효물을 생성하는 단계; 상기 발효물을 살균시키는 단계; 상기 발효물과 진피를 혼합하여 발효시키는 단계를 포함하여 이루어진다.The present invention discloses a method for producing dermal fermentation products and thus dermal fermentation products. Specifically, the present invention comprises the steps of fermenting a mixture comprising at least one of rice bran and kelp and ginseng by at least one of lactic acid bacteria and yeast to produce a fermentation product; Sterilizing the fermentation product; It comprises the step of fermenting the fermented product and the dermis by mixing.
진피, 지방간 Dermis, fatty liver
Description
본 발명은 진피발효생성방법 및 이에 의한 진피발효생성물에 관한 것으로, 구체적으로는 진피 유래의 추출물 또는 발효물을 포함하는 지방간 개선, 고지혈 개선 및 숙취해소에 뛰어난 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing dermis fermentation and a dermal fermentation product thereby, and more particularly, to a composition excellent in fatty liver improvement, hyperlipidemia, and hangover relief including extracts or fermented products derived from dermis.
지방간이란 정상적인 지방대사가 이루어지지 못함으로써 간에 지질, 특히 중성지방(triglyceride)이 과도하게 축적되어 간세포 절반 이상에서 지방 공포(空胞)가 관찰되는 상태의 질환을 말한다. Fatty liver is a disease in which fat fear is observed in more than half of hepatocytes due to excessive accumulation of lipids, especially triglyceride, in the liver due to lack of normal fat metabolism.
임상적으로는 지방이 간 무게의 5%가 넘을 때를 지방간으로 분류한다.Clinically, fatty liver is classified as fatty liver when more than 5% of liver weight.
지방간의 원인으로서는 알코올, 당뇨, 비만, 영양불량증(장기간의 저단백식, 고지방식, 기아.비타민 부족, 과잉의 당질섭취), 약물의 남용(김성훈 외, "복부초음파로 진단된 지방간의 원인" 가정의학회지 175('95.12) pp.785-794) 등이 보고 되어 있다.The causes of fatty liver include alcohol, diabetes, obesity, malnutrition (long-term low-protein diet, high-fat diet, hunger and vitamin deficiency, excess sugar intake), drug abuse (Sung Hoon Kim et al., "Cause of fatty liver diagnosed by abdominal ultrasound") Korean Journal of Medicine 175 ('95 .12) pp. 785-794).
지방간은 크게 콜레스테롤 지방간과 중성지방 지방간으로 분류하는데, 가장 일반적인 지방간은 중성지방이 간 내에 비정상적으로 축적된 경우의 지방간이다.Fatty liver is classified into cholesterol fatty liver and triglyceride fatty liver. The most common fatty liver is fatty liver when triglyceride is abnormally accumulated in liver.
현재 시중에서 판매되고 있는 지방간 치료제로서는 레가론™(부광약품, 한국), 리카바™(유한양행, 한국), 헤파리겐™(보령제약, 한국), 헤파멜즈™(한화제약, 한국) 등이 예시될 수 있으며, 종래 기술로서는 지방간 치료에 제니스테인 등을 이용하는 대한민국 공개특허 제2006-0028561호, 자단향 추출물을 이용하는 대한민국 특허 제0756550호 등이 예시될 수 있다.Commercially available fatty liver treatments include Legaron ™ (Bugwang Pharm., Korea), Lycaba ™ (Yuhan, Korea), Heparin ™™ (Boryeong Pharm., Korea), Heparmels ™ (Hanhwa Pharmaceutical, Korea), etc. This may be exemplified, and as the prior art, Korean Patent Publication No. 2006-0028561 using Genistein and the like, and Korean Patent No. 0568550 using Rosewood Fragrance Extract may be exemplified.
한편, 진피는 제주 자생귤인 진귤(Citrus sunki)의 과피로서 항산화 활성, 항미생물 활성, 항염증 활성, 혈압 강하 활성 등이 보고되어 있다(Jeong WS, Park SW, Chung SK. Food Sci. Biotechnol. 6: 292~296(1997); Kim YC, Koh KS, Koh JS. Food Sci. Biotechnol. 10:483~487(2001); Cho C, Park BJ, Chung SH, Kim CB, Cha BS, Byun MW. Food Sci. Biotechnol. 13:384~386(2004); Murakami A, et al. Carcinogenesis 21:1843~1850(2000)).On the other hand, the dermis is the skin of the citrus sunki (Jeju's native tangerine) has been reported antioxidant activity, antimicrobial activity, anti-inflammatory activity, blood pressure lowering activity (Jeong WS, Park SW, Chung SK. Food Sci. Biotechnol. 6: 292-296 (1997); Kim YC, Koh KS, Koh JS.Food Sci. Biotechnol. 10: 483-487 (2001); Cho C, Park BJ, Chung SH, Kim CB, Cha BS, Byun MW. Food Sci. Biotechnol. 13: 384-386 (2004); Murakami A, et al. Carcinogenesis 21: 1843-1850 (2000)).
본 발명자들은 진피의 다른 생리 활성으로서 지방간 개선 활성 등을 개시한다.The present inventors disclose fatty liver improving activity and the like as other physiological activities of the dermis.
본 발명의 기술적 과제는 진피발효생성방법 및 이에 의한 진피발효생성물을 제공하여 지방간 개선을 수행하는 데 그 목적이 있다.The technical problem of the present invention is to provide a dermal fermentation production method and a dermal fermentation product thereby to perform fatty liver improvement.
본 발명의 다른 기술적 과제는 이하에서 제시될 것이다.Other technical problems of the present invention will be presented below.
본 발명은 일 측면에 있어서, 진피 유래의 추출물 또는 발효물을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선제 조성물에 관한 것이다.In one aspect, the present invention relates to a fatty liver improving composition comprising an dermis-derived extract or fermented product as an active ingredient.
본 발명자들은 진피가 가지는 다른 생리 활성으로서 지방간 억제 활성을 확인하기 위하여, 하기 실시예에서 확인되는 바와 같이 총 9 가지의 진피 유래 추출물 또는 발효물, 즉 진피의 에탄올 수용액 추출물, 진피의 에탄올 수용액 추출물의 물 분획물, 이 물 분획물의 젖산균 및 효모를 이용한 발효물, 진피의 자연 발효물, 젖산균 및 효모에 의한 쌀겨 발효물을 이용한 진피의 자연 발효물, 젖산균 및 효모에 의한 쌀겨 및 다시마 혼합물의 발효물을 이용한 진피의 자연 발효물, 젖산균 및 효모에 의한 쌀겨 및 인삼 혼합물의 발효물을 이용한 진피의 자연 발효물, 젖산균 및 효모에 의한 쌀겨, 다시마 및 인삼 혼합물의 발효물을 이용한 진피의 자연 발효물, 및 이 발효물의 열수 추출물을 제조하고, 하기 실험예에서 확인되는 바와 같이 상기 각 추출물 또는 발효물이 지방간 억제 활성을 가지는가를 확인한 결과 모두 지방간 억제 활성을 가짐을 확인할 수 있었다.In order to confirm fatty liver inhibitory activity as another physiological activity of the dermis, the inventors of the present invention identified a total of nine kinds of dermis-derived extracts or fermentations, that is, extracts of ethanol aqueous solution of dermis and extracts of ethanol aqueous solution of dermis, as confirmed in the following examples. Water fraction, fermented product using lactic acid bacteria and yeast of this water fraction, natural fermented product of dermis, natural fermented product of dermis using rice bran fermented product by lactic acid bacteria and yeast, fermented product of rice bran and kelp mixture by lactic acid bacteria and yeast Natural fermentation product of the dermis, natural fermentation product of the rice bran and ginseng mixture by lactic acid bacteria and yeast, natural fermentation product of the dermis using the fermentation product of rice bran, kelp and ginseng mixture by lactic acid bacteria and yeast, and Hydrothermal extract of this fermented product was prepared, and each extract or As a result of confirming that the fermented products have fatty liver inhibitory activity, all of them were confirmed to have fatty liver inhibitory activity.
본 발명의 지방간 개선제 조성물은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것이다.The fatty liver improver composition of the present invention is provided based on the results of these experiments.
따라서 본 발명의 지방간 개선제 조성물은 아래의 (I) 내지 (Ⅵ)의 진피 유래의 추출물 또는 발효물 중 어느 하나를 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.Therefore, the fatty liver improver composition of the present invention is characterized by including any one of the following dermal-derived extracts or fermented products of (I) to (VI) as an active ingredient.
(I) 진피의 에탄올, 물 또는 이들의 혼합 용매의 추출물 및 그 분획물(I) extracts of ethanol, water or mixed solvents of dermis and fractions thereof
(Ⅱ) 상기 추출물 또는 분획물의 젖산균 및 효모에 의한 발효물;(II) fermented product by lactic acid bacteria and yeast of said extract or fraction;
(Ⅲ) 진피를 자연 상태에서 발효시켜 얻어진 발효물; (III) fermented product obtained by fermenting the dermis in a natural state;
(Ⅳ) 젖산균 및 효모에 의한 쌀겨의 발효물을 살균시켜 진피에 첨가하고, 자연 상태에서 발효시켜 얻어진 발효물;(IV) fermented product obtained by sterilizing the fermented product of rice bran by lactic acid bacteria and yeast, adding to the dermis, and fermenting in natural state;
(Ⅴ) 쌀겨에 다시마 및 인삼 중 하나 이상을 첨가하여 얻어진 혼합물의 젖산균 및 효모에 의한 발효물을 살균시켜 진피에 첨가하고, 자연 상태에서 발효시켜 얻어진 발효물; 및(V) a fermentation product obtained by sterilizing the fermentation product by lactic acid bacteria and yeast of the mixture obtained by adding at least one of kelp and ginseng to rice bran, adding to the dermis and fermenting in a natural state; And
(Ⅵ) 상기 (Ⅳ)의 발효물 또는 상기 (Ⅴ)의 발효물의 물 추출물. (VI) the water extract of the fermentation of (IV) or the fermentation of (V).
본 명세서에서, "지방간"이란, 앞서 분류한 바의 두 가지의 유형 즉 콜레스테롤 지방간과 중성지방 지방간을 모두 포함하는 의미이며, 지방간의 원인에 따른 유형 즉 알콜성 지방간과 비알콜성 지방간을 모두 포함하는 의미이다. 그것은, 하기 실시예 및 실험예가 상기 진피 유래의 추출물 또는 발효물이 실험동물 간 또는 혈액의 총 콜레스테롤 함량, 중성지방의 함량 등을 낮추는 활성을 지니고 있음을 보여주고 있기 때문이다. 알콜성 지방간이든지과 비알콜성 지방간이든지를 불문하고 지방간은 간 내에 콜레스테롤 또는 중성지방의 축적으로 나타난다. In the present specification, "fatty liver" is meant to include both types of cholesterol fatty liver and triglyceride fatty liver as previously classified, and includes both types according to the cause of fatty liver, that is, alcoholic fatty liver and non-alcoholic fatty liver. I mean. This is because the following Examples and Experimental Examples show that the extract or fermented product derived from the dermis has an activity of lowering the total cholesterol content, triglyceride content, etc. in the liver or blood of the experimental animal. Fatty liver, whether alcoholic or non-alcoholic fatty, appears as an accumulation of cholesterol or triglycerides in the liver.
또한 본 명세서에서, 상기 "개선"이란 증상의 예방, 증상의 경감 및 증상의 제거를 포함하는 의미이다.In addition, in the present specification, the "improvement" is meant to include prevention of symptoms, alleviation of symptoms and removal of symptoms.
또한 본 명세서에서, 상기 "추출물의 분획물"이란 추출용매가 에탄올과 물의 혼합용매 즉 에탄올 수용액인 경우 이들 용매를 분리하여 얻어지는 각 용매의 분획물 즉 에탄올 분획물 또는 물 분획물을 의미한다. 하기 실시예 및 실험예에서는 물 분획물의 지방간 개선 활성만이 개시되어 있지만 하기 실시예 및 실험예가 에탄올 수용액 추출물이 지방간 개선 활성을 개시하고 있다는 점에서 에탄올 분획물 또한 지방간 개선 활성을 가질 것임은 자명하다. 그러므로 상기 추출물의 분획물의 의미에는 하기 실시예 및 실험예에서 직접적으로 그 활성이 확인된 물 분획물 뿐만 아니라 에탄올 분획물을 포함하는 것으서 이해되어야 한다.In addition, in the present specification, the "extract fraction" means a fraction of each solvent, that is, an ethanol fraction or water fraction obtained by separating these solvents when the extraction solvent is a mixed solvent of ethanol and water, that is, an ethanol aqueous solution. In the following examples and experimental examples, only the fatty liver improving activity of the water fraction is disclosed, it is apparent that the ethanol fraction will also have the fatty liver improving activity in that the following examples and experimental examples disclose the ethanol aqueous solution extract fatty liver improving activity. Therefore, the meaning of the fraction of the extract should be understood to include ethanol fractions as well as water fractions whose activity is directly confirmed in the following examples and experimental examples.
또한 본 명세서에서, 상기 "자연 상태"란 발효를 위하여 온도, 습도, CO2의 농도, 접종되는 미생물, 산소의 유무 등 발효 조건에 있어서 아무런 인위적인 조작을 가하지 않은 상태를 의미한다. 그러므로 자연상태에서 발효시킨다는 것은 어떠한 미생물도 인위적으로 접종됨이 없이 호기적 조건하에서 그리고 상온에서 발효가 진행됨을 의미한다.In addition, in the present specification, the "natural state" means a state in which no artificial manipulation is applied in fermentation conditions such as temperature, humidity, concentration of CO 2 , inoculated microorganisms, presence of oxygen, and the like. Therefore, fermentation in the natural state means that fermentation proceeds under aerobic conditions and at room temperature without artificially inoculating any microorganisms.
또한 본 명세서에서, 상기 "젖산균"이란 글루코스 등 당류를 분해하여 젖산을 생성하는 세균으로 이해될 수 있다. 젖산균은 락토바실루스속 젖산균(Lactobacillus sp.), 스트렙토코쿠스속 젖산균(Streptococcus sp.), 페디오코쿠스속 젖산균(Pediococcus sp.), 류코노스톡속 젖산균(Leuconostoc sp.) 및 비피도박테리움속 젖산균(Bifidobacterium sp.)으로 대별되는데, 상기 젖산균은 이러한 모든 젖산균을 모두 포함하는 의미이다. 다만, 하기 실시예에서 락토바실루스속 젖산균이 사용되었다는 점에서, 바람직하게는 상기 젖산균은 락토바실루스속 젖산균으로 이해될 수 있으며, 특히 락토바실루스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)으로 이해될 수 있다.In the present specification, the "lactic acid bacterium" may be understood as a bacterium that breaks down sugars such as glucose to produce lactic acid. Lactic acid bacteria are Lactobacillus sp. , Streptococcus sp. , Pediococcus sp. , Leuconostoc sp. And Bifidobacterium spp. The lactic acid bacteria ( Bifidobacterium sp. ) Is roughly classified, which means to include all of these lactic acid bacteria. However, in the following examples, Lactobacillus lactic acid bacteria were used, preferably, the lactic acid bacteria may be understood as Lactobacillus lactic acid bacteria, and in particular may be understood as Lactobacillus plantarum ( Lactobacillus plantarum ).
또한 본 명세서에서, 상기 "효모"란 사카로마이세스 속 효모를 의미하며, 예컨대 사카로마이세스 루시(Saccharomyces rouxii), 사카로마이세스 세레비시에( Sacharomyces cereviciae), 사카로마이세스 오비폴미스(Saccharomyces oviformis),사카로마이세스 스테이네리(Saccharomyces steineri) 등을 포함하는 의미이다.Also herein, the term “yeast” refers to Saccharomyces spp. Refers to yeast, for example Saccharomyces rouxii), saccharose in my process to the celebrity bicyclic (Sacharomyces cereviciae), access to the MY Ob pole miss Saccharomyces (Saccharomyces oviformis ), Saccharomyces steineri ), etc.
또한 본 명세서에서, 상기 "쌀겨"란 현미를 백미로 정미하는 과정에서 얻어지는 부산물로서, 쌀눈과 호분층을 포함하는 것을 말한다. 쌀눈과 호분층을 포함하는 한, 현미의 외부 껍질를 이루는 과피 및/또는 종피 그리고 외배유 및/또는 내배유를 추가적으로 포함하더라도 상기 쌀겨에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.In addition, in the present specification, the "rice bran" is a by-product obtained in the process of refining brown rice with white rice, and refers to rice rice and a whistle layer. It is to be understood that the rice bran is included in the rice bran as long as it includes the rice hull and the whistle layer, even though it additionally includes the outer skins and / or seedlings of the outer skin of brown rice and the endosperm and / or the endosperm.
또한 본 명세서에서, 상기 "인삼"이란 가공방법, 재배방법 및 재배지역을 불문하고 모든 인삼을 포함하는 의미로서 정의된다. 인삼은 가공방법에 따라 수확 직후의 생삼인 수삼과, 수삼에서 껍질을 벗겨낸 상태에서 자연 건조시키거나 인위적으로(예컨대, 가열, 가습, 열풍건조 등의 방법) 건조시켜 얻어지는 백삼, 그리고 수삼을 껍질을 벗겨내지 않은 상태에서 증숙, 건조시켜 얻어지는 홍삼으로 구분되고, 재배방법에 따라서는 인삼밭에서 인위적으로 재배하여 얻어지는 재배삼, 인삼씨를 산중에 뿌려 재배하여 얻어지는 장뇌삼, 그리고 산속에서 자생한 산삼으로 구분되며, 재배지역에 따라서는 한반도에서 생산되는 고려인삼과, 미국, 캐나다 등 북미지역에서 생산되는 화기삼, 중국에서 생산되는 전칠삼과 일본에서 생산되는 죽절삼 등으로 분류되는데, 본 발명에서는 이러한 모든 종류의 인삼이 사용될 수 있다. In the present specification, the "ginseng" is defined as a meaning including all ginseng regardless of the processing method, cultivation method and cultivation area. Ginseng is peeled from fresh ginseng immediately after harvest and white ginseng obtained by natural drying or peeling artificially (for example, heating, humidification, hot air drying, etc.) after peeling from fresh ginseng, depending on processing method. It is divided into red ginseng obtained by steaming and drying without peeling off. According to the cultivation method, it is divided into cultivated ginseng obtained by artificial cultivation in ginseng field, camphor ginseng obtained by spraying ginseng seed in the mountain, and wild ginseng grown in the mountain. Depending on the cultivation region, Korean ginseng produced in the Korean Peninsula, fire ginseng produced in North America such as the United States, Canada, ginseng ginseng produced in China, and bamboo ginseng produced in Japan are classified into all kinds of ginseng. This can be used.
또한 본 명세서에서, 상기 "다시마"는 라미나리아 속 해조류(Laminaria sp.)를 의미하며, 참다시마(L. japonica), 오호츠크다시마(L. ochotensis), 애기다시마(L. religiosa) 등을 포함하는 의미이다.In addition, in the present specification, the term "dashima" means Laminaria spp . ( Laminaria sp. ), And includes chamdashima ( L. japonica ), Okhotsk dashima ( L. ochotensis ), agida ( L. religiosa ), and the like. It means.
또한 본 명세서에서, 상기 "(Ⅳ)의 발효물 또는 (Ⅴ)의 발효물의 추출물"은 고형상 또는 액상의 (Ⅳ)의 발효물 또는 (Ⅴ)의 발효물을 추출방법을 불문하고 물(또는 증류수)로 추출하여 얻어진 추출물을 말한다. 추출 방법을 불문하므로, 추출 대상인 (Ⅳ)의 발효물 또는 (Ⅴ)의 발효물을 추출 용매인 물과 혼합하거나 또는 침지시키는 단계를 통하여 추출되는 한, 냉침, 환류, 가온, 초음파 등 임의의 추출 방식이 모두 적용될 수 있다. 다만 바람직하게는 열수 추출물인 경우이다. In the present specification, the "fermented product of (IV) or the extract of the fermented product of (V)" is a solid or liquid fermented product of (IV) or fermented product of (V) regardless of the extraction method regardless of the water (or Refers to an extract obtained by extraction with distilled water). Regardless of the extraction method, any extraction, such as cold soaking, refluxing, heating, or ultrasonic wave, is carried out as long as it is extracted through mixing or immersing the fermented product of (IV) or the fermented product of (V) as extraction solvent with water. Both methods can be applied. However, preferably it is the case of hot water extract.
또한 본 명세서에서, 상기 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.In addition, in the present specification, the "active ingredient" refers to a component that can exhibit the activity alone or in combination with a carrier having no activity in itself.
한편, 하기 실시예 및 실험예가 보여주듯이 본 발명의 지방간 개선제 조성물의 유효성분으로서 가장 활성이 높은 것은 젖산균 및 효모에 의한 쌀겨의 발효물 또는 쌀겨에 인삼 및/또는 다시마가 첨가된 혼합물의 발효물을 살균시켜 첨가하고 자연 상태에서 발효시켜 얻어진 발효물 및 그것의 물 추출물이다. Meanwhile, as shown in the following Examples and Experimental Examples, the most active ingredient of the fatty liver improver composition of the present invention is a fermented product of rice bran fermented by lactic acid bacteria and yeast or a mixture of ginseng and / or kelp added to rice bran. Fermented products obtained by sterilization and fermentation in nature and water extracts thereof.
이 발효물 및 그것의 물 추출물은 진피만을 자연상태에서 발효시켜 얻어진 발효물(Ⅲ)보다도 그 활성이 훨씬 높은데, 본 발명자들은 위 발효물이 이렇게 활성이 높은 이유를 쌀겨, 인삼 및/또는 다시마가 젖산균 및 효모에 의해 발효될 경우에 진피의 자연상태에서의 발효를 유용한 방향으로(즉 진피의 생리 활성을 높이는 방향으로) 촉진시키는 물질이 새롭게 생성되기 때문인 것으로 추측하고 있다.This fermented product and its water extract are much higher in activity than fermented product (III) obtained by fermenting only dermis in nature, and the present inventors have found that rice bran, ginseng and / or kelp When fermented by lactic acid bacteria and yeast, it is presumed that a new substance is produced which promotes the fermentation in the natural state of the dermis in a useful direction (ie, in the direction of increasing the physiological activity of the dermis).
상기 발효물을 얻기 위해서는 쌀겨 또는 쌀겨에 인삼 및/또는 다시마가 첨가된 혼합물의 젖산균 및 효모에 의한 발효가 선행되어야 하는데, 이 때 발효를 촉진시키기 위해서 물이나 글루코스, 슈크로오스 등 탄소원이 첨가되는 것이 일반적이나 이러한 물이나 탄소원의 첨가가 없더라도 쌀겨가 가지는 수분이나 쌀겨가 가지는 탄소원이 이용될 수 있기 때문에 적절한 발효 시간을 확보하는 한 위 물이나 탄소원의 첨가가 쌀겨의 젖산균 및 효모에 의한 발효에 반드시 필요한 것은 아니다.In order to obtain the fermented product, fermentation by lactic acid bacteria and yeast of rice bran or a mixture of ginseng and / or kelp added to rice bran should be preceded. In this case, carbon source such as water, glucose or sucrose is added to promote fermentation. In general, even if there is no addition of water or carbon source, the water or carbon source of rice bran can be used, so adding water or carbon source is essential for fermentation by lactic acid bacteria and yeast of rice bran as long as proper fermentation time is secured. It is not necessary.
그리고 상기 쌀겨의 발효물 또는 쌀겨에 인삼 및/또는 다시마가 첨가된 혼합물의 발효물이 진피에 첨가되기 전에 살균이 이루어져야 하는데, 이러한 살균은 비록 하기 실시예에서 소금 포화 용액을 사용하여 이루어졌다 하더라도 당업계에 공지된 임의의 살균 방법을 사용하여 이루어질 수 있다. And before the fermentation of the rice bran or the fermentation of the mixture of ginseng and / kelp added to the rice bran is added to the dermis, the sterilization should be performed, although this sterilization is performed using a saturated salt solution in the following examples It can be done using any sterilization method known in the art.
그리고 상기 쌀겨의 발효물 또는 쌀겨에 인삼 및/또는 다시마가 첨가된 혼합물의 발효물이 진피 분말에 첨가되는 양은 진피 100 중량부를 기준으로 할 때 0.5 중량부 내지 10 중량부인 것이 바람직하다. 0.5 중량부 이하일 경우에 상기 발효물에 의한 유용한 방향으로의 발효 촉진 효과가 미미할 것이고, 10 중량부 이상일 경우에 자연 상태에서의 발효가 본 발명자들이 의도하지 않은 방향으로(즉 진피의 생리 활성을 저하시키는 방향으로) 진행될 수 있기 때문이다. And the amount of the fermented product of the rice bran or the mixture of ginseng and / or kelp is added to the dermis powder is preferably 0.5 parts by weight to 10 parts by weight based on 100 parts by weight of the dermis. If it is 0.5 parts by weight or less, the effect of promoting fermentation in a useful direction by the fermentation will be insignificant, and when it is 10 parts by weight or more, fermentation in a natural state is not intended by the inventors (ie, lowers the physiological activity of the dermis). In the direction of
한편 본 발명의 지방간 개선제 조성물은 그 유효성분인 상기 여섯 가지 진피 유래 추출물 또는 발효물을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양으로 포함할 수 있는데, 통상적으로는 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 20 중량 %로 포함될 것이다.Meanwhile, the fatty liver improver composition of the present invention may include any of the six dermis-derived extracts or fermented products as an active ingredient in an arbitrary amount depending on the use, formulation, and blending purpose, and is generally based on the total weight of the composition. From 0.001% to 20% by weight.
한편, 지방간은 방치될 경우 간염, 간경변증, 간암 등으로 진행될 수 있다.On the other hand, fatty liver may progress to hepatitis, cirrhosis, liver cancer and the like if left untreated.
따라서 상기 여섯 가지의 진피 유래의 추출물 또는 발효물은 지방간이 원인이 되어 발생하는 질병인 간염, 간경병증 또는 간암의 예방 목적으로 유용하게 사용될 수도 있다.Therefore, the six dermis-derived extracts or fermented products may be useful for the purpose of preventing hepatitis, liver cirrhosis or liver cancer, which are diseases caused by fatty liver.
그러므로 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 여섯 가지의 진피 유래의 추출물 또는 발효물을 유효성분으로 포함하는 지방간이 원인이 되어 발생하는 질병의 예방을 위한 조성물로서도 파악될 수 있다.Therefore, in another aspect, the present invention can be understood as a composition for the prevention of diseases caused by fatty liver comprising the extract or fermented products of the six dermis derived as an active ingredient.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 여섯 가지의 진피 유래 추출물 또는 발효물을 유효성분으로 포함하는 비만 개선제 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to an obesity improving composition comprising the six dermis-derived extracts or fermented products as an active ingredient.
본 명세서에서, "비만"이란 그것이 유전적 요인에 의한 비만이든 또는 환경적 요인에 의한 비만이든 지방조직이 비정상적으로 증가된 상태를 의미하며 체질량지수(BMI)의 구분에 따른 비만(BMI이 30.0 이상인 경우)과 과체중(BMI이 25~30인 경우을 포함하는 의미이다. In the present specification, "obesity" means a state in which fat tissue is abnormally increased, whether it is caused by genetic factors or obesity due to environmental factors, and obesity according to the division of body mass index (BMI) (BMI of 30.0 or more). Case) and overweight (BMI is 25-30).
본 발명의 비만 개선제 조성물에 있어서, 그 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 전술한 바가 그대로 유효하다.In the obesity improver composition of the present invention, with respect to the preferred embodiment of the active ingredient, its content, and the like, the above-described bar is effective as it relates to the fatty liver improver composition of the present invention.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 여섯 가지의 진피 유래 추출물 또는 발효물을 유효성분으로 포함하는 다이어트용 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a diet composition comprising the six dermis-derived extracts or fermented products as an active ingredient.
본 명세서에서 "다이어트"란 체중 상태가 비만이나 과체중은 아니지만 미용이나 건강 목적으로 체중/체지방의 감소가 바람직하거나 필요한 상태로서 정의된다. 통상 본 발명의 다이어트용 조성물은 정상인의 미용이나 건강 목적으로 사용하기 위하여 제조될 것이다. As used herein, "diet" is defined as a condition in which a weight condition is not obese or overweight, but for which a reduction in weight / body fat is desirable or necessary for cosmetic or health purposes. Usually the composition for a diet of the present invention will be prepared for use for the beauty or health purposes of normal people.
본 발명의 다이어트용 조성물에 있어서, 그 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 전술한 바가 그대로 유효하다.In the diet composition of the present invention, in relation to the preferred embodiment of the active ingredient, its content and the like, the above-described bar is effective as it is with respect to the fatty liver improving composition of the present invention.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 여섯 가지 진피 유래의 추출물 또는 발효물을 유효성분으로 포함하는 간 세포 보호용 조성물로 파악할 수 있다.In another aspect, the present invention can be understood as a composition for protecting liver cells comprising the extract or fermented product derived from the six dermis as an active ingredient.
하기 실시예 및 실험예에서 확인되듯이, 상기 여섯 가지 진피 유래의 추출물 또는 발효물이 비만에 의해서 유발된 글루타민산피루브산트랜스아미나아제(이하 "GPT"), 글루타민산옥살로아세트산트랜스아미나아제(이하 "GOT") 및/또는 감마글루타밀트랜스펩티다제(gamma-glutamyl transpeptidase, 이하 "GGT")의 활성을 낮추는 활성을 지니고 있고 특히 알콜에 의해서 손상을 입은 간 세포인 HepG2의 보호 활성을 가진다는 점 등에서, 상기 여섯 가지 진피 유래의 추출물 또는 발효물은 간 세포 보호 용도로도 유용하게 사용될 수 있다. As confirmed in the following Examples and Experimental Examples, the six dermis-derived extracts or fermented products of glutamic acid pyruvate transaminase (hereinafter referred to as "GPT") and glutamate oxaloacetate transaminase (hereinafter referred to as "GOT") ") And / or lowers the activity of gamma-glutamyl transpeptidase (" GGT ") and in particular has the protective activity of HepG2, an alcohol damaged liver cell. In addition, the six dermis-derived extracts or ferments may be usefully used for liver cell protection.
상기에서 GPT, GOT 및 GGT는 간이 비만, 알콜 등이 원인이 되어 손상을 입을 경우 간으로부터 혈액 중으로 분비되기 때문에 간 기능 장애를 나타내는 일반적인 지표로서 사용되고 있는 효소이다. In the above, GPT, GOT and GGT are enzymes that are used as general indicators of liver dysfunction because the liver is secreted into the blood from the liver when damaged due to obesity, alcohol, and the like.
본 발명의 간 세포 보호용 조성물에 있어서도, 그것의 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 전술한 바의 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 설명한 바가 그대로 유효하다.Also in the composition for liver cell protection of this invention, what was described with respect to the fatty liver improver composition of this invention as mentioned above is effective as it is regarding the preferable aspect of its active ingredient, its content, etc. as it is.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 여섯 가지 진피 유래의 추출물 또는 발효물을 유효성분으로 포함하는 숙취 해소용 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a hangover relief composition comprising the extract or fermented products derived from the six dermis as an active ingredient.
과음 후 경험하게 되는 매스꺼움, 두통 등의 숙취(hangover) 현상은 알콜 대사 과정에서 발생하는 알데히드 때문에 나타나는 증상이다. 일반적으로 간에는 알콜분해효소(ADH)와 알데히드분해효소(ALDH)가 존재하여 알콜이 인체에 유입되면 인체에 무해한 아세테이트로 전환되게 된다.Hangovers, such as nausea and headaches after drinking too much, are caused by aldehydes in alcohol metabolism. Generally, alcoholase (ADH) and aldehydease (ALDH) are present in the liver, and when alcohol enters the body, it is converted into acetate, which is harmless to the body.
하기 실시에에서 확인되는 바와 같이 상기 여섯 가지 진피 유래 추출물 또는 발효물은 ADH 활성과 ALDH의 활성을 촉진시킨다는 점에서 숙취 해소 용도로도 유용하게 사용될 수 있다.As identified in the following examples, the six dermis-derived extracts or fermented products may be usefully used for hangover relief in that they promote ADH activity and ALDH activity.
본 발명의 숙취 해소용 조성물에 있어서도, 그것의 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 전술한 바의 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 설명한 바가 그대로 유효하다.In the hangover-relieving composition of the present invention, as described above with respect to the fatty liver improving composition of the present invention as described above in relation to the preferred embodiment of the active ingredient, its content and the like is effective as it is.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 여섯 가지 진피 유래의 추출물 또는 발효물을 유효성분으로 포함하는 고지혈증 개선제 조성물에 관한 것이다. In another aspect, the present invention relates to a hyperlipidemic improver composition comprising the extract or fermented product derived from the six dermis as an active ingredient.
고지혈증은 지방 대사가 원활하게 이루어지지 않아 혈액 내에 중성지방(Triglyceride), LDL 콜레스테롤, 인지질 등이 증가된 상태를 의미한다.Hyperlipidemia refers to a condition in which triglyceride, LDL cholesterol, and phospholipids are increased in the blood because fat metabolism is not smoothly performed.
고지혈증은 그 자체로 어떤 증상을 나타내는 것이 아니라 동맥 경화, 고혈압 등의 심혈관계 질환의 원인으로서 문제가 되기 때문에 본 발명의 고지혈증 개선제 조성물은 고지혈증이 원인이 되어 발생하는 상기 질환의 개선제로서도 유용하게 사용될 수 있다.Since hyperlipidemia does not show any symptoms by itself but is a problem as a cause of cardiovascular diseases such as atherosclerosis and hypertension, the hyperlipidemic composition of the present invention may be usefully used as an agent for improving the disease caused by hyperlipidemia. have.
본 발명의 고지혈증 개선제 조성물에 있어서도, 그것의 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 전술한 바의 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 설명한 바가 그대로 유효하다.Also in the hyperlipidemic improver composition of the present invention, as described above with respect to the fatty liver improver composition of the present invention as described above in relation to the preferred embodiment of the active ingredient, its content and the like is effective as it is.
한편, 본 발명의 지방간 개선제 조성물, 지방간이 원인이 되어 발생하는 질병의 예방용 조성물, 비만 개선제 조성물, 다이어트용 조성물, 숙취 해소용 조성물, 및 고지혈증 개선제 조성물(이하 통칭하여 "본 발명의 조성물")은 구체적인 양태에 있어서, 약제학적 조성물로 파악할 수 있다.Meanwhile, the fatty liver improving composition of the present invention, the composition for preventing diseases caused by fatty liver, obesity improving composition, diet composition, hangover relieving composition, and hyperlipidemic improving composition (hereinafter collectively referred to as "composition of the present invention") In a specific embodiment, can be understood as a pharmaceutical composition.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효 성분인 상기 여섯 가지의 진피 유래 추출물 또는 발효물 이외에 약제학적으로 허용되는 통상의 성분들을 포함할 수 있는데, 이러한 약제학적으로 허용되는 통상의 성분들이란 약품 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition of the present invention may include pharmaceutically acceptable conventional ingredients in addition to the six dermis-derived extracts or fermented ingredients, which are the active ingredients. As commonly used, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup , Methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil, and the like.
본 발명의 약제학적 조성물은 또한 첨가제로서 윤활제, 습윤제, 감미제, 향 미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 윤활제, 습윤제 등 각 용도에 적합한 성분들은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 성분들을 선택하여 사용할 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention may also further comprise lubricants, wetting agents, sweeteners, flavoring agents, emulsifiers, suspending agents, preservatives and the like as additives. Components suitable for each use such as lubricants, wetting agents, etc. are already known in the art, so those skilled in the art can select and use appropriate components.
상기 성분들은 본 발명의 약제학적 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 85 중량% 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다.Such ingredients may be included in the pharmaceutical composition of the present invention in an amount of from 85% to about 99.99% by weight, preferably from about 90% to about 99.99% by weight, based on the total weight thereof.
한편, 본 발명의 약제학적 조성물은 다양한 경로로 투여될 수 있는데, 예컨대 경구 또는 직장에의 직접 투여되거나, 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 등에의 주사 투여될 수 있다.On the other hand, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered by various routes, for example, orally or rectally, or by injection into veins, muscles, subcutaneous, intrauterine dura, and the like.
본 발명의 약제학적 조성물은 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엘렉시르제, 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 등의 형태일 수 있다.The pharmaceutical compositions of the invention may be prepared in unit dose form or may be prepared by incorporation into a multidose container. In this case, the formulation may be in the form of a solution, suspension, or emulsion, or may be in the form of an exerciser, extract, powder, granule, tablet, or the like.
본 발명의 약제학적 조성물은 인체에 독성을 미치지 않는 범위 내에서 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다. The pharmaceutical composition of the present invention is usually in the range of 0.001 to 150 mg / kg body weight within a range that does not toxic to the human body, it can be administered once or divided into several times. However, since the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is determined in view of various related factors such as route of administration, age, sex, weight, and patient's severity of the patient, the dose is limited in any aspect to the scope of the present invention Should not be understood to be.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서 식품 조성물로 파악될 수 있다.The composition of the present invention may be regarded as a food composition in specific embodiments.
본 발명의 식품 조성물은 껌류, 비타민 복합제, 건강 보조식품, 특수 영양 보충용 식품, 기능성 음료(특히 본 발명의 지방간 개선제 조성물, 숙취 해소용 조성물 또는 고지혈증 개선제 조성물의 경우) 등으로 제조될 수 있다.The food composition of the present invention may be prepared from gums, vitamin complexes, dietary supplements, special nutritional supplements, functional drinks (particularly in the case of the fatty liver improving composition, hangover relieving composition or hyperlipidemic improving composition).
본 발명의 식품 조성물에는 상기 여섯 가지의 진피 유래 추출물 또는 발효물이 포함되는 이외에, 포도당, 과당과 같은 단당류, 말토스, 슈크로스와 같은 이당류, 또는 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 다당류가 첨가될 수 있고, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알콜이 또한 첨가될 수 있고, 타우린, 스테비아 추출물과 같은 감미제 등이 또한 첨가될 수 있으며, 나아가 여타의 식품 첨가물이 첨가될 수 있다. In addition to the six dermal-derived extracts or fermented products, the food composition of the present invention may be added with monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, or polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin. Sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, erythritol and the like may also be added, sweeteners such as taurine, stevia extract and the like may also be added, and other food additives may also be added.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 지방간 개선제 조성물이 제공된다. 또한 본 발명에 따르면 다이어트용 조성물, 지방간 개선제 조성물, 간 세포 보호용 조성물, 숙취해소용 조성물 등도 제공된다.As mentioned above, according to the present invention there is provided a fatty liver improver composition. In addition, according to the present invention there is also provided a diet composition, fatty liver improver composition, liver cell protective composition, hangover composition and the like.
이하 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.It will be described below with reference to Examples and Experimental Examples. However, the scope of the present invention is not limited to these examples and experimental examples.
<< 실시예Example > > 진피 추출물, 진피 추출물의 Dermis extract, dermis extract 발효물Fermentation product 및 진피 And dermis 발효물의Fermented 제조 Produce
<실시예 1> 진피 추출물의 제조 Example 1 Preparation of Dermis Extract
진피를 상온에서 건조시키고 분쇄시켜 얻어진 진피 분말 100g에 80%의 에탄올 수용액 1L을 가하고 7일 동안 상온에서 추출한 후 여과(Whatman GF/C Fiter)시키고, 여과된 추출액을 감압농축 후 동결건조시켜 진피 추출물을 제조하였다. 이 추출물은 -20℃에서 저장되었다가 아래의 실험에 사용되었다.1L of 80% ethanol aqueous solution was added to 100 g of the dermis powder obtained by drying and pulverizing the dermis at room temperature, and extracted at room temperature for 7 days, followed by filtration (Whatman GF / C Fiter), and the filtered extract was concentrated under reduced pressure and lyophilized. Was prepared. This extract was stored at −20 ° C. and used in the experiments below.
<실시예 2> 진피 추출물의 제조 Example 2 Preparation of Dermis Extract
진피 분말 100g에 80%의 에탄올 수용액 1L을 가하고 7일 동안 상온에서 추출한 후 여과(Whatman GF/C Fiter)시키고 여과된 추출액을 회전식 농축기로 농축시켜, 상등액인 에탄올 분획을 제거하고 남은 물 분획을 동결건조시켜 진피 추출물을 제조하였다. 이 추출물은 -20℃에서 저장되었다가 아래의 실험에 사용되었다.1L of 80% ethanol aqueous solution was added to 100 g of dermis powder, and extracted at room temperature for 7 days. Dried to prepare a dermis extract. This extract was stored at −20 ° C. and used in the experiments below.
<실시예 3> 진피 추출물의 발효물 제조 <Example 3> Fermented product of dermis extract
상기 <실시예 2>에서 얻어진 진피 추출물을 고압 멸균시키고, 그 멸균된 진피 추출물 50%(w/w), 슈크로오스 5%(w/w) 및 물을 혼합한 혼합물에 5%(w/w)의 락토바실러스 플란타럼(ATCC 8014)(3X106 cells/mL) 및 5%(w/w)의 사카로마이세스 세레비제(IFO 0203) 8014)(4X106 cells/mL)를 접종시켜 38℃에서 7일 동안 혐기적으로 발효시키고 그 발효물을 동결건조시켜 진피 추출물의 발효물을 얻었다. 이 발효물은 -20℃에서 저장되었다가 아래의 실험에 사용되었다.The dermis extract obtained in <Example 2> was autoclaved, and the sterilized dermis extract 50% (w / w), sucrose 5% (w / w) and 5% (w / w) in a mixture of water w) inoculated with Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) (3X10 6 cells / mL) and 5% (w / w) Saccharomyces cerevises (IFO 0203) 8014) (4X10 6 cells / mL) Fermented anaerobicly at 38 ° C. for 7 days and lyophilized to obtain fermented product of dermis extract. This fermentation was stored at -20 ° C and used for the experiments below.
<실시예 4> 진피 발효물의 제조 Example 4 Preparation of Dermal Fermented Product
진피 분말 1kg에 물 0.1L를 가하고 2주 정도 자연 상태에서 발효시켜 최종적으로 수분 함량이 15%인 발효물을 얻었다. 이 발효물은 -20℃에서 저장되었다가 아 래의 실험에 사용되었다.0.1 L of water was added to 1 kg of dermis powder and fermented in a natural state for about 2 weeks to obtain a fermented product having a water content of 15%. This fermentation was stored at -20 ° C and used for the experiment below.
<실시예 5> 진피 발효물의 제조 <Example 5> The dermis fermentation preparation of
쌀겨 분말에 5%(w/w)의 락토바실러스 플란타럼(ATCC 8014)(3X106 cells/mL) 및 5%(w/w)의 사카로마이세스 세레비제(IFO 0203) 8014)(4X106 cells/mL)를 접종시켜 38℃에서 7일 동안 혐기적으로 발효시키고 이 발효액에 소금 포화 용액을 1:50 중량비(발효액:소금 포화 용액)로 혼합하고 소금에 의한 살균 후 여과(Whatman GF/C Fiter)시켰다. 다음으로 진피 분말 1kg에 물 0.1L를 가하고 여기에 상기 여과액을 1%(w/w) 첨가하여 상온에서 2주 정도 자연 발효시켜 최종적으로 수분 함량이 15%인 발효물을 얻었다. 이 발효물은 -20℃에서 저장되었다가 아래의 실험에 사용되었다.5% (w / w) Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) (3X10 6 cells / mL) and 5% (w / w) Saccharomyces cerevisiae (IFO 0203) 8014) in rice bran powder (4X10) 6 cells / mL) inoculated anaerobic fermentation for 7 days at 38 ℃ and mixed with a saturated salt solution 1:50 weight ratio (fermentation: saturated salt solution) and sterilized by salt and filtered (Whatman GF / C Fiter). Next, 0.1L of water was added to 1 kg of dermis powder, and 1% (w / w) of the filtrate was added thereto, followed by natural fermentation for about 2 weeks at room temperature, thereby finally obtaining a fermentation product having a water content of 15%. This fermentation was stored at -20 ° C and used for the experiments below.
<실시예 6> 진피 발효물의 제조 Example 6 Preparation of Dermal Fermented Product
다시마 분말 및 쌀겨 분말의 중량 비율 1:10 혼합물 배지에 5%(w/w)의 락토바실러스 플란타럼(ATCC 8014)(3X106 cells/mL) 및 5%(w/w)의 사카로마이세스 세레비제(IFO 0203) 8014)(4X106 cells/mL)를 접종시켜 38℃에서 7일 동안 혐기적으로 발효시키고 이 발효액에 소금 포화 용액을 1:50 중량비(발효액:소금 포화 용액)로 혼합하고 소금에 의한 살균 후 여과(Whatman GF/C Fiter)시켰다. 다음으로 진피 분말 1kg에 물 0.1L를 가하고 여기에 상기 여과액을 1%(w/w) 첨가하여 상온에서 2주 정도 자연 발효시켜 최종적으로 수분 함량이 15%인 발효물을 얻었다. 이 발효물은 -20℃에서 저장되었다가 아래의 실험에 사용되었다.5% (w / w) Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) (3X10 6 cells / mL) and 5% (w / w) Saccharomyces in 1:10 mixture medium of kelp powder and rice bran powder Inoculated with Seth cerevise (IFO 0203) 8014) (4X10 6 cells / mL) anaerobic fermentation for 7 days at 38 ℃ and mixed with a saturated salt solution 1:50 weight ratio (fermentation: saturated salt solution) After sterilization with salt and filtered (Whatman GF / C Fiter). Next, 0.1L of water was added to 1 kg of dermis powder, and 1% (w / w) of the filtrate was added thereto, followed by natural fermentation for about 2 weeks at room temperature, thereby finally obtaining a fermentation product having a water content of 15%. This fermentation was stored at -20 ° C and used for the experiments below.
<실시예 7> 진피 발효물의 제조 Example 7 Preparation of Dermal Fermented Product
인삼 분말 및 쌀겨 분말의 중량 비율 1:20 혼합물 배지에 5%(w/w)의 락토바실러스 플란타럼(ATCC 8014)(3X106 cells/mL) 및 5%(w/w)의 사카로마이세스 세레비제(IFO 0203) 8014)(4X106 cells/mL)를 접종시켜 38℃에서 7일 동안 혐기적으로 발효시키고 이 발효액에 소금 포화 용액을 1:50 중량비(발효액:소금 포화 용액)로 혼합하고 소금에 의한 살균 후 여과(Whatman GF/C Fiter)시켰다. 다음으로 진피 분말 1kg에 물 0.1L를 가하고 여기에 상기 여과액을 1%(w/w) 첨가하여 상온에서 2주 정도 자연 발효시켜 최종적으로 수분 함량이 15%인 발효물을 얻었다. 이 발효물은 -20℃에서 저장되었다가 아래의 실험에 사용되었다.5% (w / w) Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) (3X10 6 cells / mL) and 5% (w / w) Saccharomyces in a 1:20 mixture medium of ginseng powder and rice bran powder Inoculated with Seth cerevise (IFO 0203) 8014) (4X10 6 cells / mL) anaerobic fermentation for 7 days at 38 ℃ and mixed with a saturated salt solution 1:50 weight ratio (fermentation: saturated salt solution) After sterilization with salt and filtered (Whatman GF / C Fiter). Next, 0.1L of water was added to 1 kg of dermis powder, and 1% (w / w) of the filtrate was added thereto, followed by natural fermentation for about 2 weeks at room temperature, thereby finally obtaining a fermentation product having a water content of 15%. This fermentation was stored at -20 ° C and used for the experiments below.
<실시예 8> 진피 발효물의 제조 Example 8 Preparation of Dermal Fermented Product
인삼 분말, 다시마 분말 및 쌀겨 분말의 중량 비율 1:2:20 혼합물 배지에 5%(w/w)의 락토바실러스 플란타럼(ATCC 8014)(3X106 cells/mL) 및 5%(w/w)의 사카로마이세스 세레비제(IFO 0203) 8014)(4X106 cells/mL)를 접종시켜 38℃에서 7일 동안 혐기적으로 발효시키고 이 발효액에 소금 포화 용액을 1:50 중량비(발효액:소금 포화 용액)로 혼합하고 소금에 의한 살균 후 여과(Whatman GF/C Fiter)시켰다. 다음으로 진피 분말 1kg에 물 0.1L를 가하고 여기에 상기 여과액을 1%(w/w) 첨가하여 상온에서 2주 정도 자연 발효시켜 최종적으로 수분 함량이 15%인 발효물을 얻었다. 이 발효물은 -20℃에서 저장되었다가 아래의 실험에 사용되었다.5% (w / w) Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) (3X10 6 cells / mL) and 5% (w / w) in a 1: 2: 20 mixture medium of ginseng powder, kelp powder and rice bran powder ) Was inoculated anaerobic fermented with Saccharomyces cerevisiae (IFO 0203) 8014) (4X10 6 cells / mL) for 7 days at 38 ℃ and a saturated salt solution 1:50 weight ratio (fermented solution: salt) Saturated solution) and filtered after sterilization with salt (Whatman GF / C Fiter). Next, 0.1L of water was added to 1 kg of dermis powder, and 1% (w / w) of the filtrate was added thereto, followed by natural fermentation for about 2 weeks at room temperature, thereby finally obtaining a fermentation product having a water content of 15%. This fermentation was stored at -20 ° C and used for the experiments below.
<실시예 9> 진피 발효물의 추출물 제조 Example 9 Preparation of Extract of Dermal Fermentation
상기 <실시예 8>에서 얻어진 진피 발효물 12.43 kg에 250L의 물을 넣고 100℃의 온도에서 2시간 동안 열수추출한 후 그 추출물을 1㎛ 필터로 여과하고 동결건조시켜 분말 형태의 추출물을 얻었다. 이 추출물은 -20℃에서 저장되었다가 아래의 실험에 사용되었다.250L of water was added to 12.43 kg of the dermis fermented product obtained in <Example 8>, followed by hot water extraction at a temperature of 100 ° C. for 2 hours, and the extract was filtered through a 1 μm filter and lyophilized to obtain an extract in powder form. This extract was stored at −20 ° C. and used in the experiments below.
<실험예> <Experimental Example> 비만 개선 활성 등의 실험Experiments such as obesity improvement activity
<실험예 1> 비만 개선 활성 실험 Experimental Example 1 Obesity Improvement Activity Experiment
(주)대한바이오링크(서울, 대한민국)에 구입한 3주령 ICR 수컷 쥐를 고형사료와 물을 공급하면서 1주간 적응시킨 후, 체중이 비슷한 쥐를 무작위로 13 마리씩 8개의 군으로 나누었다. 정상군(Ⅰ)은 정상식이, 비만대조군(Ⅱ)은 고지방식이, 실험군(Ⅲ)은 고지방식이와 상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물의 혼합물(고지방식이 100중량부에 대해 각 실시예의 추출물 또는 발효물을 0.2중량부로 물에 용해시켜 혼합함)을 공급하면서 97일간 한 마리씩 분리·사육하였다. 사육환경은 온도 23±2℃, 습도 50±5%, 밤과 낮을 12시간 주기로 유지시켰다.Three-week-old ICR male rats purchased from Daehan Biolink Co., Ltd. (Seoul, South Korea) were acclimated for one week with solid feed and water, and randomly divided mice of similar weight into eight groups of 13 rats. The normal group (I) is a normal diet, the obesity control group (II) is a high fat diet, and the experimental group (III) is a high fat diet and an extract or a mixture of fermented products (the high fat diet is 100 parts by weight of each example extract) Or 0.2 parts by weight of the fermented product was dissolved in water and mixed). The breeding environment was maintained at a temperature of 23 ± 2 ° C., a humidity of 50 ± 5%, and a night and day cycle for 12 hours.
상기에서 정상식이는 Laboratory Rodent Diet 5001(PMI Nutrition International, United States) 사료를 사용하였고, 고지방식이는 Dyets#101556(>단백질 17.7%, 지방 40%, 탄수화물 31.4%)(Dyets Inc., United States) 사료를 사용하였다. In the above diet, Laboratory Rodent Diet 5001 (PMI Nutrition International, United States) diet was used, and the high-fat diet was Dyets # 101556 (> 17.7% protein, 40% fat, 31.4% carbohydrate) (Dyets Inc., United States). ) Feed was used.
체중은 실험 시작 시 및 97일간 사육이 끝난 후 동물체중계를 사용하여 측정하였다. 결과는 <표 1> 내지 <표 9>와 같다. Body weight was measured using an animal weight scale at the beginning of the experiment and after 97 days of breeding. The results are shown in <Table 1> to <Table 9>.
28.32±2.13
28.32 ± 2.13
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
26.59±3.25
26.59 ± 3.25
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
26.45±3.32
26.45 ± 3.32
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
27.48±2.52
27.48 ± 2.52
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
28.32±3.92
28.32 ± 3.92
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
27.21±2.14
27.21 ± 2.14
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
27.65±2.94
27.65 ± 2.94
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
27.53±2.85
27.53 ± 2.85
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
29.32±2.89
29.32 ± 2.89
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
상기 <실시예 1 및 2>의 추출물이 급여된 경우 실험군의 체중이 비만 대조군의 체중에 비하여 전체적으로 저하되기는 하였으나 유의차는 없었고, <실시예 3 내지 9>의 발효물이 급여된 경우에는 실험군의 체중이 비만 대조군의 체중에 비하여 유의차 있게 감소하였다. 특히 <실시예 5 내지 9>의 발효물 또는 추출물이 투여된 경우가 가장 체중 감소 효과가 높았다.When the extracts of Examples 1 and 2 were fed, the weight of the experimental group was lowered as compared to the weight of the obese control group, but there was no significant difference. When the fermented products of Examples 3 to 9 were fed, the weight of the experimental group was This obesity was significantly reduced compared to the body weight of the control group. In particular, when the fermentation product or the extract of <Examples 5 to 9> was administered, the weight loss effect was the highest.
<실험예 2> 숙취 해소 활성 실험 Experimental Example 2 Hangover Relief Activity Experiment
상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물이 숙취 해소 활성을 가지는가를 알콜탈수소화효소(ADH)와 알데히드탈수소화효소(ALDH) 활성을 통하여 측정하였다.Whether the extract or the fermented product of each of the above Examples had hangover elimination activity was measured by an alcohol dehydrogenase (ADH) and an aldehyde dehydrogenase (ALDH) activity.
ADH 및 ALDH의 활성은 보스티안 등의 방법(Bostian KA, et al. Biochem. J. 173:787-798(1978))을 약간 변형하여 실시하였다.The activity of ADH and ALDH was slightly modified by Bostian et al. (Bostian KA, et al. Biochem. J. 173: 787-798 (1978)).
먼저 ADH 분획 및 ALDH 분획을 S9 랫드 간 균질화물(Moltox Co., Boone, Nc, USA)로부터 얻었고, ADH 활성 분석을 위한 반응 혼합물은 1.4 ㎖의 증류수, 0.75 ㎖의 1M Tris-HCl(pH 8.8), 0.3 ㎖의 20mM NAD+, 0.3 ㎖의 에탄올, 0.15 ㎖의 ADH 분획, 및 시료 0.3㎖로 이루어져 있고, ALDH 활성 분석을 위한 반응 혼합물은 2.1 ㎖의 증류수, 0.3 ㎖의 1M Tris-HCl(pH 8.8), 0.1 ㎖의 20mM NAD+, 0.1 ㎖의 3M KCl, 0.1 ㎖의 0.33 M 2-머르캅토에탄올, 0.1 ㎖의 ALDH 분획, 및 시료 0.3㎖로 이루어져 있다. The ADH fraction and the ALDH fraction were first obtained from S9 rat liver homogenate (Moltox Co., Boone, Nc, USA), and the reaction mixture for ADH activity analysis was 1.4 ml of distilled water, 0.75 ml of 1M Tris-HCl (pH 8.8). , 0.3 ml 20 mM NAD +, 0.3 ml ethanol, 0.15 ml ADH fraction, and 0.3 ml sample, the reaction mixture for ALDH activity analysis was 2.1 ml distilled water, 0.3 ml 1M Tris-HCl (pH 8.8) , 0.1 ml 20 mM NAD +, 0.1 ml 3M KCl, 0.1 ml 0.33 M 2-mercaptoethanol, 0.1 ml ALDH fraction, and 0.3 ml sample.
활성의 측정은 30℃에서 5분간 반응시킨 후, NAD+로부터 NADH의 생성 비율을 340nm에서의 흡광도를 이용하여 측정하였고, 결과를 아래의 <표 10>에 나타내었다.The activity was measured for 5 minutes at 30 ° C., and then the production rate of NADH from NAD + was measured using absorbance at 340 nm. The results are shown in Table 10 below.
CTL은 무처리군으로서 음성 대조군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, negative control, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물 모두 유의차 있게 ADH 및 ALDH의 활성을 높였음을 알 수 있다. 특히 앞서 결과와 유사하게 <실시예 5 내지 9>의 발효물 또는 추출물이 ADH 및 ALDH의 활성을 가장 현저하게 높였음을 알 수 있다.It can be seen that the extract or fermented product of each of the above examples significantly increased the activity of ADH and ALDH. In particular, similar to the above results it can be seen that the fermentation or extracts of Examples 5 to 9 significantly increased the activity of ADH and ALDH.
<실험예 3> 간세포 HepG2의 보호 활성 실험 Experimental Example 3 Protective Activity of HepG2 Hepatocytes
상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물의 간세포 HepG2 보호 활성을 MTT assay로 측정하였다.Hepatocellular HepG2 protective activity of the extracts or fermentations of the above examples was measured by MTT assay.
HepG2 세포는 (주)대한바이오링크(서울, 대한민국)에서 구입하였으며, 세포는 10% FBS가 포함된 DMEM 배지를 사용하여 5% CO2가 유지되는 humidified incubator에서 배양하면서 실험에 사용하였다.HepG2 cells were purchased from Daehan Biolink Co., Ltd. (Seoul, South Korea), and the cells were used in the experiment while culturing in a humidified incubator maintained at 5% CO 2 using DMEM medium containing 10% FBS.
실험은 Parrizas 등의 방법(Parrizas M, et al. J. Biol. Chem. 272:154~161(1997))에 따랐는데, 먼저 24-well 배양 접시에 세포를 접종하고 상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물(무처리, 0.125mg/mL, 0.5mg/mL 및 1.0 mg/mL)을 농도별로 30분 동안 처리한 후 5% 에탄올을 처리하고 48시간 동안 배양하였다. 다음 배양액을 제거하고 200㎖의 MTT 시약(Sigma, St. Louis, MO, USA)를 처리하여 37℃에서 1시간 반응시킨 후 상기 MTT 시약과 동일 양의 2-프로판올을 첨가하여 세포를 용해시켜 발색 반응을 유도한 후 570nm에서 흡광도를 측정하였다.Experiments were carried out according to the method of Parrizas et al. (Parrizas M, et al. J. Biol. Chem. 272: 154-161 (1997)), first inoculating cells in a 24-well culture dish and extract or fermentation of each of the above examples. Water (untreated, 0.125 mg / mL, 0.5 mg / mL, and 1.0 mg / mL) was treated for 30 minutes by concentration, then treated with 5% ethanol and incubated for 48 hours. Next, the culture solution was removed and treated with 200 ml of MTT reagent (Sigma, St. Louis, MO, USA) for 1 hour at 37 ° C., and the same amount of 2-propanol as the MTT reagent was added to lyse the cells. After inducing the reaction, the absorbance at 570 nm was measured.
결과를 하기 <표 11> 내지 <표 19>에 나타내었다.The results are shown in Tables 11 to 19 below.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
CTL은 무처리군이고 *는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.CTL is untreated group, * is p <0.05 and ** is p <0.01.
상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물이 처리된 경우에 적어도 1mg/mL의 농도에서는 모두 유의차가 인정되었음을 알 수 있다. 여기서도 <실시예 5 내지 9>의 발효물 또는 추출물이 간 세포 보호 활성이 가장 높았다.When the extracts or fermented products of each of the above examples were treated, it can be seen that significant differences were recognized at all at least 1 mg / mL. Herein, the fermented products or extracts of Examples 5 to 9 had the highest hepatocellular protective activity.
<실험예 4> 지방간 개선 활성 실험 Experimental Example 4 Fatty Liver Improvement Activity Experiment
상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물을 두 그룹으로 나누어 지방간 개선 활성을 확인하였다. The extract or fermented product of each example was divided into two groups to confirm fatty liver improvement activity.
먼저 <실시예 1 내지 8>의 추출물 또는 발효물은 상기 <실험예 1>에서 사육이 종료된 실험쥐를 도살하여 간 조직의 지질 농도와 간 손상 지표 효소의 활성도를 측정하였고, <실시예 9>의 추출물에 대해서는 다른 실험동물을 사용하여 간 손상 지표 효소의 활성도, 혈중 지방 함량 및 간 조직 검사를 수행하였다.First, the extracts or fermented products of <Examples 1 to 8> were slaughtered in the experimentally terminated mice in <Experimental Example 1> to measure the lipid concentration of liver tissue and the activity of the indicator of liver damage indicator, <Example 9 For extracts of>, other laboratory animals were used for the activity of liver damage indicator enzymes, blood fat content and liver histology.
<실험예 4-1> <실시예 1 내지 8>의 추출물 또는 발효물의 지방간 개선 활성 실험 Experimental Example 4-1 Fatty liver improving activity experiment of extracts or fermentations of Examples 1 to 8
<1> 간 조직의 지질 농도 분석 <1> Lipid concentration analysis of liver tissue
실험물질 투여에 따른 간의 지질 농도 변화를 조사하기 위해, 상기 <실험예 1>에서 실험이 종료된 각 실험군의 쥐를 도살하여 간을 적출한 다음 상기 적출한 간을 생리식염수로 세척한 후, 폴치 등의 방법(Folch J. et al., J. Biol. Chem., 226:497-509, 1957)에 따라, 간을 곱게 갈아 균질용 튜브에 넣고 초음파 세포막 분쇄기로 세포막을 파괴하고 클로로포름과 메탄올(클로로포름:메탄올=2:1)의 혼합액으로 지질을 추출하였다. 그 다음 상기 추출액을 2000rpm에서 원심분리하여 상등액을 수득하고 상기 상등액을 시료로 하여 간에 함유된 총 콜레스테롤 및 중성지방 농도를 측정하였다. 총 콜레스테롤 함량은 시판 키트(AM202-K, 아산제약 (주))를 사용하여 분석하였으며, 500nm에서 흡광도를 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 ㎎/㎗로 표시하였다. 중성지방 함량도 시판 키트(AM 157S-K, 아산제약 (주))를 사용하여 분석하였으며, 550nm에서 흡광도를 측정하고 검량선에 준해 그 함량을 ㎎/㎗로 표시하였다.In order to investigate the change in the lipid concentration of the liver according to the administration of the test substance, the rats of each experimental group whose experiments were terminated in <Experimental Example 1> were extracted from the liver, and the washed liver was washed with physiological saline, and then (Folch J. et al., J. Biol. Chem., 226: 497-509, 1957), grind the liver finely, place it in a homogeneous tube, destroy the cell membrane with an ultrasonic cell membrane grinder, and remove chloroform and methanol ( Lipids were extracted with a mixture of chloroform: methanol = 2: 1). The extract was then centrifuged at 2000 rpm to obtain a supernatant and the supernatant as a sample to measure the total cholesterol and triglyceride levels in the liver. The total cholesterol content was analyzed using a commercial kit (AM202-K, Asan Pharmaceutical Co., Ltd.). The absorbance was measured at 500 nm and the content was expressed in mg / dl according to the calibration curve. The triglyceride content was also analyzed using a commercial kit (AM 157S-K, Asan Pharmaceutical Co., Ltd.). The absorbance was measured at 550 nm and the content was expressed in mg / dl according to the calibration curve.
실험 결과를 하기 <표 20> 내지 <표 28>에 나타내었다.The experimental results are shown in Tables 20 to 28 below.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
유의차가 인정되지 않는 것이 있었지만 상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물 모두 간 조직의 중성지방과 콜레스테롤 농도를 저하시키는 활성을 갖고 있다. 여기서도 가장 활성이 높은 것은 <실시예 5 내지 8>의 발효물 또는 추출물이다.Although no significant difference was recognized, all of the extracts or fermented products of the above examples had activity of lowering the concentration of triglyceride and cholesterol in liver tissue. Here, the highest activity is the fermented product or extract of <Examples 5 to 8>.
<2> 간 기능 지표 효소의 활성도 분석 <2> Activity analysis of liver function indicator enzyme
간 조직 손상 정도의 지표 효소로 이용되고 있는 GPT 및 GOT의 수치는 97일 간의 실험이 끝난 다음 혈장을 분리하여 분석용 키트(아산제약, 대한민국)를 이용하여 측정하였고, 실험 결과를 하기 <표 28> 내지 <표 35>에 나타내었다.GPT and GOT levels used as indicator enzymes of liver tissue damage were measured using an analysis kit (Asan Pharmaceutical, Korea) after separation of plasma after 97 days of experiment. > To <Table 35>.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
*는 p<0.05이고 **는 p<0.01임.* Is p <0.05 and ** is p <0.01.
상기 각 실시예의 추출물 또는 발효물 모두가 GPT 및 GOT 활성을 낮춤을 알 수 있다. 특히 <실시예 5 내지 8>의 발효물이 가장 효과가 높다.It can be seen that all of the extracts or fermentations of the above examples lower GPT and GOT activity. In particular, the fermented products of Examples 5 to 8 have the highest effect.
<실시예 4-2> <실시예 9>의 추출물의 지방간 개선 활성 실험 <Example 4-2> Experiment of fatty liver improvement activity of the extract of <Example 9>
<1> 혈액 분석을 통한 간 손상 지표 효소의 활성도 등의 측정 <1> Measurement of the activity of liver damage indicator enzymes through blood analysis
(주)오리엔트바이오(경기도, 대한민국)에서 5주령의 SD계 랫드를 구입하여 7일간 순화시킨 후 실험에 사용하였다. 실험동물을 8마리씩 4개의 군으로 나누어 정상군(Ⅰ)은 정상식이(FORMULA-M07, 서울 경기 소재 (주)피드랩), 비만대조군(Ⅱ)은 고지방식이(DYET #101836(Modified AIN-76A purified rodent dirt with 2% Cholesterol & 0.5% Cholic acid), 서울 경기 소재 (주)피드랩), 실험군(Ⅲ)은 고지방식이(DYET #101836)와 상기 <실시예 9>의 추출물 2g/kg, 양성대조군(Ⅳ)은 고지방식이(DYET #101836)와 지방간 치료 효능이 밝혀진 메트포민(Metformin) 350㎍/kg을 물과 함께 8주간 공급하면서 3~4마리씩 분리 사육하였다. 여기서 물과 사료는 자유 섭취시켰고, 시험물질인 상기 <실시예 9>의 추출물과 메트포민은 1일 1회 경구로 투여하였으며, 사육 환경은 온도 23±3℃, 습도 55±15%, 밤과 낮을 12시간 주기로 유지시켰다.A five-week-old SD rat was purchased from Orient Bio Co., Ltd. (Gyeonggi-do, South Korea), and then purified for 7 days and used for the experiment. The test animals were divided into 4 groups of 8 animals each, and the normal group (Ⅰ) was a normal diet (FORMULA-M07, Seoul, Gyeonggi-do), and the obese control group (II) was a high-fat diet (DYET # 101836 (Modified AIN-). 76A purified rodent dirt with 2% Cholesterol & 0.5% Cholic acid), Feedlab Co., Ltd., Seoul, Gyeonggi-do, Korea (Experimental group Ⅲ), high fat diet (DYET # 101836) and the extract of <Example 9> 2g / kg The positive control group (IV) was divided into three to four animals fed with high-fat diet (DYET # 101836) and metformin (350 mg / kg) of metformin for 8 weeks with water. Here, water and feed were freely ingested, and the test substance extract and metformin were administered orally once a day, and the breeding environment was 23 ± 3 ° C., 55 ± 15% humidity, night and day. It was kept in a 12 hour cycle.
실험 시작 8주 후 실험동물로부터 혈장을 분리하여 GOT(AST, aspartate amino-transferase) 활성도, GPT(ALT, alanine amino-transferase) 활성도, GGT 활성도, 총 콜레스테롤 함량, HDL 콜레스테롤 함량, 중성지방 함량, 지질 함량은 도시바 TBA-30R 혈장분석기기를 사용하였으며, 분석시약은 HamLap 제품을 사용하였으며, LDL 콜레스테롤 함량은 Fridwald 식([LDL-C = [Total C] - {[HDL-C] + [TG/5]})을 이용하여 측정하고 그 결과를 <도 1 내지 8>에 나타내었다.Eight weeks after the start of the experiment, plasma was isolated from the test animals to obtain GOT (AST, aspartate amino-transferase) activity, GPT (ALT, alanine amino-transferase) activity, GGT activity, total cholesterol content, HDL cholesterol content, triglyceride content, lipid Content was used toshiba TBA-30R plasma analyzer, the assay reagent was HamLap product, LDL cholesterol content was Fridwald equation ([LDL-C = [Total C]-{[HDL-C] + [TG / 5] ]}) And the results are shown in FIGS. 1 to 8.
<도 1 내지 8>을 참조하여 보면, 실험군의 경우 비만 대조군에 비하여 간 독성 지표 효소인 GOT, GPT 및 GGT 활성이 전체적으로 유의성 있게 감소되었음을 알 수 있으며, 총 콜레스테롤 함량, LDL 콜레스테롤 함량, 중성지방 함량 및 인지질 함량도 유의성 있게 감소되었음을 알 수 있다(HDL 콜레스테롤의 경우 비만대조군에 비하여 증가하기는 하였으나 유의성 있는 수치는 아니었다). 양성대조군(메트포민 투여군)의 경우와 비교하였을 때도 중성지방의 경우를 제외하고 실험군의 경우가 전체적으로 우수함을 보여준다.Referring to Figures 1 to 8, it can be seen that the GOT, GPT and GGT activities of liver toxicity indicator enzymes were significantly reduced in the experimental group as compared to the obese control group, and the total cholesterol content, LDL cholesterol content and triglyceride content And phospholipid content was also significantly decreased (HDL cholesterol was increased compared to the obese control group, but was not significant). Compared with the positive control group (methformin-administered group), the experimental group is excellent overall except for triglyceride.
<2> 간 조직 검사 <2> liver biopsy
8 주간 실험 종료 후 실험동물의 복부를 절개하고 간을 적출하여 10% 포르말린에 넣어 24시간 이상 고정시킨 다음, 흐르는 물로 충분히 수세하고 에탄올을 이용하여 탈수시킨 후 파라핀 투과 과정을 거쳐서 포매기를 이용하여 포매하였다. 포매된 조직을 박절편기로 약 4㎛의 두께로 조직절편을 제작하여 H-E(Hematoxylin & eosin) 염색을 하고 현미경으로 관찰하였으며, 중성 지방의 축적으로 나타날 수 있는 거대 공포(Macrovesicle)의 분포 비율 정도를 Brunt 등의 방법(Brunt EM, Janney CG, Di Bisceglie AM, Neuschwander-Tetri BA, Bacon BR. Nonalcoholic steatohepatitis: a proposal for grading and staging the histological lesions. Am J Gastroenterol 1999; 94:2467~2474)에 따라 0(None), 1(0~33%), 2(33~66%) 및 3(66~100%)로 분류하여 점수를 산정하고 평균한 후, 그 결과를 <도 9>에 나타내었다.After the end of the 8-week experiment, the abdomen of the experimental animal was incised, the liver was extracted, put in 10% formalin and fixed for at least 24 hours, washed with running water sufficiently, dehydrated with ethanol, and passed through paraffin. Embedded. Tissue sections were fabricated into thin sections with a thickness of about 4 μm, and then stained with HE (Hematoxylin & eosin) stained and examined under a microscope. The percentage of macrotropes that might appear in the accumulation of triglycerides was measured. 0 according to Brunt et al. (Brunt EM, Janney CG, Di Bisceglie AM, Neuschwander-Tetri BA, Bacon BR.Nonalcoholic steatohepatitis: a proposal for grading and staging the histological lesions. Am J Gastroenterol 1999; 94: 2467-2474) (None), 1 (0 to 33%), 2 (33 to 66%) and 3 (66 to 100%), the scores were calculated and averaged, and the results are shown in FIG. 9.
<도 9>를 참조하여 보면, 실험군의 경우 비만대조군에 비해서 미약한 공포화가 관찰되었음을 알 수 있으며, 또 상대적으로 양성대조군인 메트포민 투여군에 비해서도 공포화 정도가 낮음을 알 수 있다.Referring to FIG. 9, it can be seen that the experimental group has a weak phobia compared to the obese control group, and the degree of phobia is lower than that of the metformin administration group, which is a relatively positive control group.
통계 처리Statistical processing
모든 실험 결과는 Mean±SD 값으로 나타냈다. 상기 <실험예 4-2>를 제외한 상기 모든 실험에 대해서는 ANOVA 분석을 실시하고, Duncan 테스트로 유의차를 검증하였고, <실험예 4-2>에 대해서는 student's t- test를 사용하여 유의차를 검증하였다.All experimental results are expressed as Mean ± SD values. ANOVA analysis was performed on all the experiments except for Experimental Example 4-2, and the significant difference was verified by Duncan test, and the experimental difference was verified using Student's t- test for Experimental Example 4-2. It was.
도 1은 시험 종료 후의 실험동물의 혈액의 GOT(AST) 활성을 평가한 결과로서, 양성대조군(메트포민 투여군)은 GOT 평균값이 177.375 IU/L이며, 실험군은 GOT 평균값이 160.5 IU/L로 비만대조군 평균값인 321.375 IU/L과 비교 시 낮게 측정되었으며 유의성 있게 감소 하였다(P value 0.011, 0.002).1 is a result of evaluating the GOT (AST) activity of the blood of the experimental animals after the end of the test, the positive control group (methformin administration group) GOT average value 177.375 IU / L, experimental group GOT average value 160.5 IU / L, obesity control group Compared with the average value of 321.375 IU / L, it was low and significantly decreased (P value 0.011, 0.002).
도 2는 시험 종료 후의 실험동물의 혈액의 GPT(ALT) 활성을 평가한 결과로서, 양성대조군(메트포민 투여군)은 ALT 평균값이 62.75 IU/L으로 낮은 수치를 보였지만 유의성 있는 값은 아니며, 실험군은 ALT 평균값이 32.875 IU/L로 비만대조군 평균값인 124.875 IU/L과 비교 시 매우 낮은 측정되었으며 유의성 있게 감소 하였다(P value 0.005).2 is a result of evaluating the GPT (ALT) activity of the blood of the experimental animals after the end of the test, the positive control group (methformin administration group) showed a low ALT average value of 62.75 IU / L, but it is not significant, the experimental group ALT The mean value was 32.875 IU / L, which was very low compared to the 124.875 IU / L, which was significantly lower than the control group (P value 0.005).
도 3은 시험 종료 후의 실험동물의 혈액의 GGT 활성을 평가한 결과로서, 정상군을 제외한 약제를 투여한 그룹 중 실험군의 GGT 평균값이 0.750로 비만대조군 평균값인 2.75과 비교 시 낮게 측정되었으며 유의성 있게 감소 하였다(P value 0.024).3 is a result of evaluating the GGT activity of the blood of the experimental animals after the end of the test, the mean GGT of the experimental group of the group except the normal group was 0.750, which is low compared to the average of the obese control group 2.75 and significantly decreased. (P value 0.024).
도 4는 시험 종료 후의 실험동물의 혈액의 총 콜레스테롤 함량을 측정한 결과로서, 정상군을 제외한 약제를 투여한 그룹 중 양성대조군은 총 콜레스테롤 평균값이 84 mg/dL이며 실험군의 총 콜레스테롤 평균값이 73.75 mg/dL로 비만대조군 평균값인 180.75 mg/dL과 비교 시 낮은 수치를 나타냈으며 유의성 있게 감소 하였다(P value 0.0015,0.0004).4 is a result of measuring the total cholesterol content of the blood of the experimental animals after the end of the test, the positive control group of the group receiving the drug except the normal group has a total cholesterol average value of 84 mg / dL and an average value of the total cholesterol of the experimental group 73.75 mg / dL was lower than that of the obese control group (180.75 mg / dL) and decreased significantly (P value 0.0015,0.0004).
도 5는 시험 종료 후의 실험동물의 혈액의 HDL 콜레스테롤 함량을 측정한 결 과로서, 약제를 투여한 그룹 중 양성대조군(24.75 mg/dL)과 실험군(23 mg/dL)의 HDL 콜레스테롤 평균값이 비만대조군 평균값인 20.25 mg/dL보다는 증가하기는 했으나 유의성 있는 수치는 아니었다.Figure 5 is the result of measuring the HDL cholesterol content of the blood of the experimental animals after the end of the test, the HDL cholesterol average value of the positive control group (24.75 mg / dL) and the experimental group (23 mg / dL) of the group to which the drug was administered the obesity control group Although it increased from the average value of 20.25 mg / dL, it was not significant.
도 6은 시험 종료 후의 실험동물의 혈액의 LDL 콜레스테롤 함량을 측정한 결과로서, 정상군을 제외한 약제를 투여한 그룹 중 양성대조군은 LDL 콜레스테롤 평균값이 43.95 mg/dL, 실험군의 LDL 콜레스테롤 평균값이 33.525 mg/dL로 비만대조군 평균값인 136.825 mg/dL 과 비교 시 낮은 수치를 보였으며 유의성 있게 감소 하였다(P value 0.001, 0.0003).Figure 6 is the result of measuring the LDL cholesterol content of the blood of the experimental animals after the end of the test, the positive control group of the group receiving the drug except the normal group LDL cholesterol average value 43.95 mg / dL, experimental group LDL cholesterol average value 33.525 mg / dL was significantly lower than that of the control group (136.825 mg / dL) and significantly decreased (P value 0.001, 0.0003).
도 7은 시험 종료 후의 실험동물의 혈액의 중성지방(triglyceride) 함량을 측정한 결과로서, 정상군을 제외한 약제를 투여한 그룹 중 양성대조군은 중성지방 평균값이 76.50 mg/dL, 실험군은 중성지방 평균값이 86.125 mg/dL로 비만대조군 평균값인 118.375 mg/dL 과 비교 시 낮게 측정되었으며 유의성 있게 감소 하였다(P value 0.0002, 0.0071).7 is a result of measuring the triglyceride content of the blood of the experimental animals after the end of the test, the average of the triglyceride average value 76.50 mg / dL, triglyceride average value of the positive control group of the group except the normal group was administered drug The 86.125 mg / dL level was lower than the control group's average value of 118.375 mg / dL and decreased significantly (P value 0.0002, 0.0071).
도 8은 시험 종료 후의 실험동물의 혈액의 인지질(phospholipid) 함량을 측정한 결과로서 약제를 투여한 그룹 중 실험군은 인지질 평균값이 212.5 mg/dL,로 비만대조군 평균값인 247.875 mg/dL 과 비교 시 낮게 측정되었으며 유의성 있게 감소 하였다(P value 0.03). 8 is a result of measuring the phospholipid content of the blood of the experimental animals after the end of the test, the experimental group of the drug administration group was 212.5 mg / dL, the average value of the phospholipids compared to the average value of the obese control group 247.875 mg / dL It was measured and significantly decreased (P value 0.03).
도 9는 시험 종료 후의 실험동물의 간 조직의 조직 검사 결과이다.9 shows the results of histological examination of liver tissues of experimental animals after the end of the test.
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