KR100855621B1

KR100855621B1 - 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치 및 방법

Info

Publication number: KR100855621B1
Application number: KR1020060057186A
Authority: KR
Inventors: 최병호
Original assignee: 연세대학교 산학협력단
Priority date: 2006-06-26
Filing date: 2006-06-26
Publication date: 2008-09-01
Anticipated expiration: 2026-06-26
Also published as: KR20080000004A

Abstract

본 발명은 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치 및 방법에 관한 것으로서, 임상 전문가가 일일이 자가 혈액에서 상기 트롬빈과 피브리노겐을 추출하여 자가 혈액젤을 제조하는 공정을 배제하고, 대신에 원심분리기에 탈,장착되며 회전 중심축을 중심으로 좌우 동일한 챔버를 갖는 회전구동체로 이루어지며, 자가 혈액의 일정량을 투입,저장하는 상태에서 원심분리하여 그 혈액에서 쉽게 여액(餘液)을 제거하거나 그 혈액에 첨가제를 용이하게 혼합할 수 있도록 임시 저장하는 저장수단과, 상기 저장수단의 외측에 장착되어 상기 원심 분리 후 혈액에서 필요없는 여액(혈구세포층, 상층액)을 여과할 수 있도록 하는 여과수단과, 상기 여과수단에 의해 분리된 혈액에서 각각의 트롬빈과 피브리노겐을 추출할 수 있도록 첨가제를 자동으로 제어하여 첨가시키는 첨가수단을 포함하여 구성함으로써, 환자 자신의 혈액을 이용하여 자가 트롬빈 및 피브리노겐을 동시에 간단하면서도 용이하게 제조할 수 있는 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치 및 방법에 관한 것이다.

트롬빈 용액, 피브리노겐 용액, 제조장치, 제조방법

Description

자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치 및 방법{Apparatus and method manufacturing autologous thrombin and fibrinogen simultaneously}

도 1은 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치를 나타내는 단면도,

도 2는 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치를 나타내는 평면도,

도 3은 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐으로 만든 젤을 나타내는 사진,

도 4는 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐으로 만든 젤을 이용하여 찢어진 상악동점막을 붙여 재료의 부착성능을 보여주는 사진,

도 5는 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐으로 만든 젤을 타이타늄 인공치아 표면에 적용하여 재료의 부착성을 보여주는 사진,

도 6은 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐으로 만든 젤 및 혈소판풍부혈장의 골조직재생능력을 나타내는 사진이다.

<도면의 주요 부분에 대한 부호의 설명>

10 : 회전구동체 11 : 구동축

12a,12b : 투입부 13a,13b : 제1저장부

14a,14b : 혈장액분리부 15a,15b : 이송부

16a,16b : 제2저장부 17a,17b : 시약첨가부

18a,18b : 용액분리부 19a,19b : 용액흡입부

20a,20b : 배출부

본 발명은 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치 및 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 환자 자신의 혈액을 이용하여 자가 혈액젤을 간단하게 자동화 시스템을 이용하여 제조할 수 있도록 함으로써, 작업 공수 및 공정 시간을 절감하며, 이를 토대로 자가 혈액젤의 대량 생산이 가능한 새로운 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치 및 방법에 관한 것이다.

일반적으로, 외과적인 시술에서 흔히 순간접착제로 사용되는 합성재료인 시아노아크릴레이트(cyanoacrylate)를 사용하여 조직을 재생시키는 방법이 있다.

그러나, 상기 재료는 신체 조직 내에 잘 흡수되지 않고, 영구적으로 조직 내에 남아 있기 때문에 신체의 외부 즉 피부에서는 많이 사용되어 왔으나, 인체 내부에서는 널리 사용되지 않고 있다.

최근 인간의 혈액에서 채취한 피브리노겐으로 만든 피브린 젤이 상기한 재료 에 비해 널리 사용되고 있다.

이는 상기 피브린 젤이 상기 시아노아크릴레이트보다 조직적합성, 생분해성, 지혈능력 면에서 우수하기 때문이다.

현재 상품화되어 판매되고 있는 피브린 젤로는 TISSEEL(Baxter AG, Austria), TISSUCOL(Baxter AG, Austria), BERIPLAST(Behring, Germany), GREENPLAST(녹십자, 한국) 등이 있다.

그러나, 이러한 피브린 젤은 여러 사람에서 얻어진 혈액을 재료로 하여 만들어지기 때문에 감염이나 후천성면역결핍증(AIDS)과 같은 전염성 질환의 전이에 대한 우려가 있고, 또한 소의 트롬빈을 사용하므로 응고장애와 같은 과민반응 등이 발생될 수 있는 위험이 있으며, 광우병 발생시에 전면적으로 사용이 중단되는 어려움이 있다.

이러한 이유로 미국에서는 피브린 젤이 FDA 승인을 받지 못하고 있다.

따라서, 자가혈액을 이용하여 젤을 개발하여야 할 필요성이 끊임없이 대두되고 있으며, 이에 자가혈액에서 고농도의 성장인자와 고농도의 피브리노겐을 함유하는 피브린과 트롬빈을 추출하여 자가 혈액젤을 제조하는 기술이 개발되었으며, 이들을 이용하여 조직 재생이 타생체 재료나 기존의 혈소판풍부혈장보다 더 효과적으로 이루어지는 것을 확인하였다.

그런데, 이러한 자가 혈액젤을 제조시 임상 전문가가 일일이 자가 혈액에서 상기 트롬빈과 피브리노겐을 추출하게 되는 바, 그 공정이 복잡하고, 공정 시간이 오래 걸리는 문제점이 있으며, 제조된 혈액젤의 양이 소량으로 한정되어 경제적으 로 불리한 문제점이 있다.

따라서, 본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 발명한 것으로서, 환자 자신의 혈액을 이용하여 자가 혈액젤을 제조할 수 있는 트롬빈 및 피브리노겐을 동시에 자동화 시스템을 이용하여 간단하게 제조할 수 있도록 함으로써, 작업 공수 및 공정 시간을 절감하며, 이를 토대로 자가 혈액젤의 대량 생산을 구현할 수 있는 새로운 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치 및 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

이하, 상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 특징에 대해 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치는, 원심분리기에 탈,장착되며 회전 중심축을 중심으로 좌우 대칭인 2개로 분리된 챔버를 갖는 회전구동체로 이루어지며,

자가 혈액의 일정량이 투입되어 여액을 분리하거나 첨가제를 혼합할 수 있도록 임시 저장하는 저장수단과;

상기 저장수단의 외측에 장착되어 상기 원심 분리 후 혈액에서 필요없는 여액(혈구세포층, 상층액)을 여과할 수 있도록 하는 여과수단과:

상기 여과수단에 의해 분리된 혈액에서 각각의 트롬빈과 피브리노겐을 추출할 수 있도록 첨가제를 자동으로 제어하여 첨가시키는 첨가수단을 포함하여 구성된 것을 특징으로 한다.

특히, 상기 혈액을 회전구동체 내에 투입할 수 있도록 형성된 투입부와;

상기 혈액에서 추출된 트롬빈과 피브리노겐을 외부로 뽑아낼 수 있도록 형성된 용액흡입부가 더 포함되고, 상기 여과수단인 혈장액분리부에서 분리된 혈장액이 중력을 통해 하방으로 흘러 제2저장부로 이송되도록 깔때기 형태의 이송부가 더 포함된 것을 특징으로 한다.

또한, 회전구동체의 일측 투입부를 통하여 혈액 5ml를 주사하여 일측의 제1저장부에 넣는 동시에, 타측 투입부를 통하여 혈액 15ml를 주사하여 타측의 제1저장부에 넣은 후 외부로부터의 오염을 방지하기 위하여 양쪽 투입부를 밀봉하는 제1단계와;

상기 회전구동체를 온도, 속도, 회전시간 및 회전방향의 조절이 가능한 원심분리기 내에 위치시키고, 상기 원심분리기를 작동하여 필요없는 여액이 분리된 혈장액을 얻고 이 혈장액을 제2저장부에 저장하는 제2단계와;

상기 제2저장부에 저장되는 혈장액에 안정화제 및 응고제를 첨가하는 제3단계와;

상기 원심분리기가 회전하지 않도록 정지상태를 유지한 다음, 동일한 온도에서 작동하여 침전물 위의 상층액을 분리하는 제4단계와;

상기 원심분리기가 정지하게 되면 제2저장부 일측의 침전물에 용해제를 첨가 하는 제5단계와;

일측의 트롬빈 용액에 pH조절 용액을 첨가하는 제6단계와;

제조된 트롬빈 용액과 피브리노겐 용액을 주사기를 사용하여 용액흡입부를 통해 뽑아내는 제7단계를 포함하여 이루어진 것을 특징으로 한다.

이하, 첨부도면을 참조하여 본 발명의 구성에 대해 상세하게 설명하면 다음과 같다.

첨부한 도 1 및 도 2는 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치를 나타내는 각각의 단면도 및 평면도이다.

본 발명은 자가 트롬빈 및 자가 피브리노겐을 동시에 제조할 수 있는 장치로서, 도 1에 도시된 바와 같이, 상기 장치는 원심분리기(미도시)에 탈,장착 가능한 형태로서, 그 중심에 회전하는 구동축(11)이 설치되어 좌우 양쪽이 동일하게 회전 가능하도록 되어 있는 회전구동체(10)이다.

이와 같은 원심분리기에 탈,장착되는 회전구동체(10)는 통상의 원심분리기의 작동 환경인 온도, 속도, 회전시간 및 회전 방향의 제어를 통해 동일하게 작용할 수 있도록 이루어져 있다.

상기 회전구동체(10)의 내부 구성에 대해 살펴보면, 그 내부는 상기 자가 혈액에서 각각 트롬빈과 피브리노겐을 추출할 수 있도록 2개로 분리된 좌우 대칭인 챔버로 구성되어 있으며, 그 중심에는 구동축(11)이 형성되어 있다.

이때, 상기 챔버의 좌우 구성은 동일하므로 일측의 구성만을 상세하게 설명하기로 한다.

먼저, 상기 회전구동체(10) 상부의 임의의 위치에는 환자 자신의 혈액을 일정량 투입할 수 있는 일정한 직경을 갖는 홀형태의 투입부(12a,12b)가 형성되어 있으며, 그 바로 아래에는 투입된 혈액이 임시 저장되는 제1저장부(13a,13b)가 형성되어 있다.

상기 제1저장부(13a,13b)에서 일정 거리의 외측에는 상기 제1저장부(13a,13b)에 저장되어 있는 혈액에서 원심분리를 통해 혈구세포층과, 혈소판층 및 혈장층을 분리할 수 있도록 여과기(filter)로 이루어진 혈장액분리부(14a,14b)가 구비되어 있다.

상기 혈장액분리부(14a,14b)는 상기 혈구세포층인 적혈구와 백혈구만이 흡수되도록 하고, 혈소판층 및 혈장층으로 이루어진 혈소판농축혈장은 그 하단부의 제2저장부(16a,16b)로 흐르도록 되어 있다.

이때 상기 혈장액분리부(14a,14b)에서 분리된 혈소판농축혈장은 중력을 통해 깔때기 형태의 이송부(15a,15b)를 따라 하방으로 흘러 제2저장부(16a,16b)로 이송된다.

이렇게 제2저장부(16a,16b)로 이송된 혈장액에는 안정화제, 응고제, 그리고 용해제 등으로 이루어진 첨가제가 자동으로 분사되도록 상기 제2저장부(16a,16b)의 상측에 분사노즐 형태의 시약첨가부(17a,17b)가 구비되어 있다.

이때, 그 시약첨가부(17a,17b)에서 제2저장부(16a,16b)로 첨가제가 일정하게 첨가되도록 하는 제어로직은 장치의 제어부에 설정되어 상기 제2저장부(16a,16b)에 혈장액이 투입될 경우 바로 구현 가능하도록 되어 있다.

이때, 상기 시약첨가부(17a,17b)는 외부 인터페이스와 접촉하여 제어신호를 부여하도록 형성되어 있는 바, 상기 시약첨가부(17a,17b)의 제어로직은 트롬빈이 제조되는 제2저장부(16a)에는 일정량의 응고제인 시트르산(citric acid)이, 피브리노겐이 제조되는 제2저장부(16b)에는 일정량의 안정화제인 트랜자믹산(tranexamic acid)과 응고제인 에탄올이 혼합되도록 설정되어 있으며, 이어서 상기 트롬빈이 제조되는 제2저장부(16a)에 다시 용해제인 염화칼슘(CaCl₂)과, pH를 중성(pH7)으로 조절하는 탄산수소나트륨(NaHCO₃)이 혼합되도록 설정되어 있다.

한편, 상기 시약첨가부(17a,17b)에서 1차로 응고제와 안정화제를 상기 혈장액에 첨가한 다음 원심분리하여 최종 침전물과 상층액을 분리하고, 분리된 상층액만을 배출부(20a,20b)로 흘려 보낼 수 있도록 상기 제2저장부(16a,16b)의 외측에는 여과기(filter)로 이루어진 용액분리부(18a,18b)가 구비되어 있다.

이와 같이 상층액이 분리된 최종 침전물은 트롬빈 용액과 피브리노겐 용액으로 구분되는 바, 상기 일측의 트롬빈 용액에 탄산수소나트륨을 일정량 첨가할 경우, pH가 중성으로 조절되어 최종 트롬빈 용액이 제조되는 것이다.

상기 제2저장부(16a,16b)에 최종적으로 남아 있는 트롬빈 용액과 피브리노겐 용액을 흡입구인 용액흡입부(19a,19b)를 통해 주사기를 이용하여 각각 뽑아내어 저장하게 되고, 이를 혼합하게 될 경우, 젤 형태의 자가 혈액젤이 완성되는 것이다.

이와 같이 구성되는 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치를 이용하여 자가 트롬빈과 피브리노겐의 제조방법을 단계별로 상세하게 설명하면 다음과 같다.

1. 환자에서 혈액응고제(10% sodium citrate)를 함유한 주사기를 사용하여 혈액 20ml를 채취한다.
2. 회전구동체(10)의 왼쪽(도 1에서 구동축을 기준으로 왼쪽) 투입부(12a)를 통해 혈액 15ml를 주사하여 왼쪽의 제1저장부(13a)에 넣고, 회전구동체(10)의 오른쪽(도 1에서 구동축을 기준으로 오른쪽) 투입부(12b)를 통해 혈액 5ml를 주사하여 오른쪽의 제1저장부(13b)에 넣은 후, 외부로부터의 오염을 방지하기 위하여 양쪽 투입부(12a,12b)를 밀봉한다.
3. 상기 회전구동체(10)를 온도, 속도, 회전시간 및 회전방향의 조절이 가능한 원심분리기 내에 위치시키고, 작동 버튼을 눌러 원심분리기를 작동시킨다.
이후, 트롬빈과 피브리노겐이 얻어질 때까지 모든 과정이 자동으로 작동되도록 조절하는 것이 바람직하다.
4. 상기 원심분리기를 37℃, 1200rpm 속도로 15분간 작동시켜 혈장액인 혈소판농축혈장을 얻는다.
이때, 상기 회전구동체(10) 내의 혈액은 제1저장부(13a,13b)의 출구를 통해 빠져나가 혈장액분리부(14a,14b)를 통과하고, 혈구세포층인 적혈구와 백혈구들만이 상기 혈장액분리부(14a,14b)에 흡수된다.
5. 상기 원심분리기가 정지하면 혈액의 혈소판층과 혈장층으로 이루어진 혈소판농축혈장이 이송부(15a,15b)를 따라 왼쪽과 오른쪽의 제2저장부(16a,16b)에 저장된다.
다음, 시약첨가부(17a,17b)로부터 오른쪽의 제2저장부(16b)에는 2.85 mM 시트르산(citric acid) 22.5ml가 혈소판농축혈장에 첨가되고, 왼쪽의 제2저장부(16a)에는 100 mg/ml 트랜자믹산(tranexamic acid) 240 ml와, 99% 에탄올(ethanol) 0.75 ml가 첨가된다.
6. 상기 원심분리기는 상기 혈소판농축혈장과 첨가제가 작용할 수 있도록 온도 0 ~ 4℃에서 30분 ~ 2시간 동안 정지상태를 유지한다.
7. 상기 원심분리기를 생성된 침전물이 그 형상을 유지할 수 있는 온도인 0 ~ 4℃에서 2000 ~ 3000rpm 속도로 5 ~ 15분간 작동시켜 침전물 위의 상층액을 배출부(20a,20b)로 흘려 보낸다.
8. 상기 원심분리기가 정지하게 되면 오른쪽의 제2저장부(16b)에 있는 침전물에 0.1M 염화칼슘(CaCl₂)150 ml를 첨가한다.
9. 상기 침전물이 염화칼슘과 작용하여 용해될 수 있도록 상기 원심분리기는 온도 37℃, 100rpm 속도로 좌우 방향을 바꾸어 가면서 10분간 작동한다.
이와 같이 회전 작동된 양쪽의 침전물은 용해되어 오른쪽에는 트롬빈 용액, 왼쪽에는 피브리노겐 용액이 얻어진다.
10. 상기 오른쪽의 트롬빈 용액에는 75 mM 탄산수소나트륨(NaHCO₃) 100ml가 첨가되어 pH7로 조절된다.

삭제

11. 이와 같이 제조된 트롬빈 용액과 피브리노겐 용액을 주사기를 사용하여 용액흡입부(19a,19b)를 통해 뽑아낸다.

상기한 제조방법을 통해 제조된 자가 트롬빈 용액 및 피브리노겐 용액을 혼합하여 혈액젤로 제조하는 바, 도 3에 환자의 혈액 30ml을 이용하여 자가 트롬빈 용액 및 자가 피브리노겐 용액을 각각 제조하고, 이를 혼합하여 젤 형상을 보이는 것을 확인할 수 있다.

한편, 첨부한 도 4는 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐으로 만든 젤을 이용하여 찢어진 상악동점막을 붙여 재료의 부착성능을 보여주는 사진으로서, 제조된 자가 혈액젤을 이용하여 찢어진 상악동점막을 다시 붙여서 점막의 치유에 미치는 효과를 확인할 수 있다.

또한, 첨부한 도 5는 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐으로 만든 젤을 타이타늄 인공치아 표면에 적용한 것으로서, 자가 혈액젤의 부착성을 확인할 수 있다.

첨부한 도 6은 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐으로 만든 혈액젤(A) 및 혈소판풍부혈장(B)의 골조직재생능력을 나타내는 사진으로서, 자가 혈액젤의 골조직재생능력이 혈소판풍부혈장보다 형성된 골의 크기와 골주의 양에 있어 더 효과적으로 이루어지는 것을 확인할 수 있다.

따라서, 본 발명은 임상 전문가가 일일이 자가 혈액에서 상기 트롬빈과 피브리노겐을 추출하여 자가 혈액젤을 제조하는 기존의 공정과 비교하여 쉽고 간단하면서 신속하게 자동화 시스템을 이용하여 자가 트롬빈 용액과 피브리노겐 용액을 제조할 수 있게 된다.

상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치 및 방법에 의하면, 환자 자신의 혈액을 이용하여 자가 트롬빈과 자가 피브리노겐을 동시에 자동화 시스템을 이용하여 간단하게 제조하게 되므로 면역반응 문제를 방지할 수 있으며, 조직재생을 돕는 성장인자가 다량 포함되어 있어 창상부위에 적용할 경우, 조직재생의 치유기간을 단축시킬 수 있다.

또한, 우수한 친수성, 점착성, 부착성 등과 같은 물리적 특성을 갖고 있어 다양한 형태의 골파괴된 부위에 효과적으로 충전 가능하며, 인체 적용시 주사기를 이용하여 용이하게 주입 가능하여 조직절개 및 박리를 최소한으로 하거나 하지 않고도 골결손 부위에 충전하여 골재생을 유도할 수 있는 효과가 있다.

Claims

원심분리기에 탈,장착되며 회전 중심축을 중심으로 좌우 대칭인 2개로 분리된 저장부를 갖는 회전구동체를 포함하는 한편,

상기 회전구동체의 양쪽에 위치되며, 투입된 혈액이 원심분리되어 그 혈액에서 여액(餘液)을 쉽게 제거 가능하도록 상기 혈액을 임시 저장하는 제1저장부 및 상기 여액이 제거된 상태의 혈액에 첨가제를 용이하게 혼합할 수 있도록 임시 저장하는 제2저장부로 이루어져, 자가 혈액이 투입되어 여액을 분리하거나 첨가제를 혼합할 수 있도록 임시 저장하는 저장수단;

상기 저장수단의 외측에 장착되며, 상기 제1저장부에 저장되어 있는 혈액에서 원심분리를 통해 혈구세포층과, 혈소판층 및 혈장층을 분리하는 여과기로 구성된 혈장액분리부 및 상기 제2저장부에 저장되어 있는 혈액에서 원심분리를 통해 최종 침전물과 상층액을 분리하는 여과기로 구성된 용액분리부로 이루어져, 원심 분리 후 혈구세포층 및 상층액을 여과할 수 있도록 하는 여과수단:

상기 제2저장부의 상부에 위치하며, 트롬빈 용액이 제조 가능한 제2저장부의 혈장액에는 일정량의 응고제인 시트르산(citric acid)이, 피브리노겐이 제조되는 제2저장부에는 일정량의 안정화제인 트랜자믹산(tranexamic acid)과, 응고제인 에탄올이 첨가되도록 형성되고, 이어서 상기 트롬빈이 제조되는 제2저장부에 다시 용해제인 염화칼슘(CaCl₂)과, pH를 pH7로 조절하는 탄산수소나트륨(NaHCO₃)이 첨가되도록 형성되며, 상기 여과수단에 의해 분리된 혈액에서 각각의 트롬빈과 피브리노겐을 추출할 수 있도록 첨가제를 자동으로 제어하여 첨가시키는 첨가수단;

을 포함하여 구성된 것을 특징으로 하는 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치.
삭제
삭제
삭제
청구항 1에 있어서,

상기 혈액을 회전구동체 내에 투입할 수 있도록 형성된 투입부와;

상기 혈액에서 추출된 트롬빈과 피브리노겐을 외부로 뽑아낼 수 있도록 형성된 용액흡입부가 더 포함된 것을 특징으로 하는 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치.
청구항 1에 있어서,

상기 여과수단인 혈장액분리부에서 분리된 혈장액이 중력을 통해 하방으로 흘러 제2저장부로 이송되도록 깔때기 형태의 이송부가 더 포함된 것을 특징으로 하는 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조장치.
회전구동체의 왼쪽 투입부를 통해 혈액 15ml를 주사하여 왼쪽의 제1저장부에 넣고, 회전구동체의 오른쪽 투입부를 통해 혈액 5ml를 주사하여 오른쪽의 제1저장부에 넣은 후, 외부로부터의 오염을 방지하기 위하여 양쪽 투입부를 밀봉하는 제1단계;

상기 회전구동체를 온도, 속도, 회전시간 및 회전방향의 조절이 가능한 원심분리기 내에 위치시키고, 상기 원심분리기를 작동시켜 혈구세포층이 분리된 혈소판농충혈장을 왼쪽과 오른쪽의 제2저장부에 저장하는 제2단계;

상기 제2저장부에 저장되어 있는 혈소판농축혈장에 안정화제 및 응고제를 첨가하는 제3단계;

상기 원심분리기를 0 ~ 4℃에서 30분 ~ 2시간 동안 정지시킨 상태를 유지한 다음, 다시 원심분리기를 0 ~ 4℃에서 5 ~ 15분간 작동시켜 침전물 위의 상층액을 분리하는 제4단계;

상기 원심분리기가 정지하게 되면 오른쪽의 제2저장부에 있는 침전물에 용해제를 첨가하는 제5단계;

상기 침전물이 용해제와 작용하여 용해될 수 있도록 원심불리기를 작동시켜 오른쪽에는 트롬빈 용액, 왼쪽에는 피브리노겐 용액을 얻는 제6단계;

위와 같이 얻은 트롬빈 용액과 피브리노겐 용액을 주사기를 사용하여 용액흡입부를 통해 뽑아내는 제7단계;

를 포함하여 이루어진 것을 특징으로 하는 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조방법.
청구항 7에 있어서,

상기 제3단계에서, 시약첨가부로부터 오른쪽 제2저장부의 혈소판농축혈장에는 2.85 mM 시트르산(citric acid) 22.5ml가 첨가되고, 왼쪽 제2저장부의 혈소판농축혈장에는 100 mg/ml 트랜자믹산(tranexamic acid) 240 ml 및 99% 에탄올(ethanol) 0.75 ml가 첨가되는 것을 특징으로 하는 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조방법.
청구항 7에 있어서,

상기 제5단계에서, 오른쪽의 제2저장부에 있는 침전물에 0.1M 염화칼슘(CaCl₂)150 ml가 첨가되는 것을 특징으로 하는 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조방법.
청구항 7에 있어서,

상기 제6단계에서, 오른쪽의 트롬빈 용액에는 75 mM 탄산수소나트륨(NaHCO₃) 100ml가 첨가되어 pH7로 조절되는 것을 특징으로 하는 자가 트롬빈 및 피브리노겐의 제조방법.