KR100559192B1

KR100559192B1 - 혈관신생 촉진제 및 혈관신생 작용증강제

Info

Publication number: KR100559192B1
Application number: KR1020007001968A
Authority: KR
Inventors: 에기야스히로; 기도히데아키; 하야시가즈타카; 구보요시지; 나카무라노리후미
Original assignee: 닛산 가가쿠 고교 가부시키 가이샤
Priority date: 1997-08-28
Filing date: 1998-08-26
Publication date: 2006-03-13
Anticipated expiration: 2018-08-26
Also published as: EP1025847A1; CN1142779C; KR20010023331A; CA2301852C; DK1025847T3; DE69832089D1; US6284758B1; DE69832089T2; JP4352613B2; AU8886298A; CA2301852A1; ES2247716T3; TW490303B; CN1277553A; WO1999011268A1; ATE307584T1; EP1025847A4; EP1025847B1

Abstract

활성 성분으로서 화학식(I)의 피리다지논 화합물, 또는 그의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는 혈관신생 촉진제 및 혈관신생 작용증강제:

상기 식에서,

각 심볼은 명세서에서 정의된 바와 같다.

본 발명의 피리다지논 화합물(I) 및 그의 약리학적으로 허용되는 염은 혈관신생을 촉진시키고 혈관신생 작용을 갖는 약제의 작용을 증강시키며, 혈관신생 촉진제 및 혈관신생 작용증강제로서 유용하다.

Description

혈관신생 촉진제 및 혈관신생 작용증강제{Neovascularization promoters and neovascularization potentiators}

본 발명은 활성 성분으로서 특정의 피리다지논 화합물 또는 그의 약리학적으로 허용되는 염을 함유하는 혈관신생 촉진제 및 혈관신생 작용증강제에 관한 것이다.

본 발명에서 하기의 특정한 피리다지논 화합물은 우수한 혈소판 응집 억제작용, 강심성 작용, 혈관확장 작용, 항-SRS-A(아나필락시스의 느린 반응 물질) 작용, 트롬복산 A₂ 합성제 억제 작용등(JP-B-7-107055, JP-A-7-285869)을 갖는 것으로 알려져 있고, 항혈소판제등인 것으로 기대되는 약제이다.

그러나, 혈관신생에 대한 피리다지논 화합물의 작용에 대해 어떠한 것도 보고되지 않았다.

본 발명은 혈관신생에 대한 피리다지논 화합물의 작용에 대해 다양한 연구를 수행하여 피리다지논 화합물이 혈관신생을 촉진시키고, 혈관신생 작용을 갖는 약제의 작용을 증강시킨다는 것을 밝혀내어, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 다음의 것을 제공한다.

활성 성분으로서, 화학식(I)의 피리다지논 화합물, 또는 그의 약리학적으로 허용되는 염(이하, 피리다지논 화합물이라고 언급함)을 함유하는 혈관신생 촉진제.

상기 식에서,

R¹, R² 및 R³는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 저급알킬이고,

X는 할로겐 원자, 시아노 또는 수소 원자이며,

Y는 할로겐 원자, 트리플루오로메틸 또는 수소 원자이고,

A는 하이드록실 그룹으로 임의로 치환된 C₁-C₈ 알킬렌이다.

피리다지논 화합물을 투여하는 것을 포함하는 혈관신생 촉진 방법.

혈관신생 촉진제의 제조를 위한 피리다지논 화합물의 용도.

피리다지논 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 혈관신생을 촉진하기 위한 약제학적 조성물.

상기-언급된 약제학적 조성물, 및 약제학적 조성물은 혈관신생을 촉진시키는 는데 사용될 수 있거나 사용되어야 한다는 그와 관련된 문구를 포함하는 시판 패키지.

활성 성분으로서 피리다지논 화합물을 함유하는, 혈관신생 작용을 갖는 약제 의 작용증강제.

피리다지논 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 혈관신생 작용을 갖는 약제의 작용증강 방법.

혈관신생 작용을 갖는 약제의 작용증강제를 제조하기 위한 피리다지논 화합물의 용도.

피리다지논 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 혈관신생 작용을 갖는 약제의 작용증강용 약제학적 조성물.

상기 언급된 약제학적 조성물, 및 약제학적 조성물이 혈관신생 작용을 갖는 약제의 작용증강용으로 사용될 수 있고, 사용되어야 한다는 그와 관련된 문구를 포함하는 시판 패키지.

본 발명에 있어서, 피리다지논 화합물은 바람직하게는 R¹ 및 R²가 각각 수소 원자이고, R³은 수소 원자이거나 탄소원자 1 내지 4개를 갖는 알킬이며, X는 할로겐 원자이고, Y는 할로겐 원자 또는 수소 원자이며, A는 하이드록실 그룹에 의해 임의로 치환된 C₁-C₅알킬렌인 화학식(I)의 화합물이다.

특히 바람직한 화학식(I)의 피리다지논 화합물(이하, 피리다지논 화합물(I)이라 언급함)은 예를들어 4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)-프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3-(2H)-피리다지논이다.

혈관신생은 내피(endotherial) 세포가 기존의 혈관으로부터 출아하여 새로운 혈관을 형성함을 의미한다. 형성 과정은 복잡하고, 발달 및 성장을 위한 혈관신 생, 병리학적 혈관신생(예로, 종양의 성장, 당뇨병성 망막증)등과 같은 생체에서 다양한 면에서 관찰되는 중요한 현상이다.

암 또는 당뇨병성 망막증을 앓는 환자에게 혈관신생 촉진제를 투여하는 것은 병리학적 혈관신생을 촉진하기 때문에 금지된다.

그러나, 혈관신생 촉진제는, 주요 발병 동맥과 관계없이 측부(collateral) 혈행로를 형성하기 때문에, 주요 발병 동맥(질병을 주로 일으키는 동맥)에 직접적으로 작용하는 약제의 효능을 보완하고 증강시킨다는 점에서 유용하다.

본 명세서에서 사용된 심볼을 하기에서 설명한다.

R¹, R²및 R³에서의 저급 알킬은 탄소원자 1 내지 6개를 갖고, 직쇄 또는 측쇄일 수 있다. 그의 예에는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 2급-부틸, t-부틸, 펜틸, 헥실등이 있다.

R¹ 및 R²는 바람직하게는 각각 수소 원자이고, R³는 바람직하게는 수소 원자 또는 탄소원자 1 내지 4개를 갖는 알킬이다.

R³에서의 탄소원자 1 내지 4개를 갖는 알킬을 예시하면 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 2급-부틸, t-부틸등이다.

X 및 Y에서의 할로겐 원자는 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자 또는 요오드 원자를 의미한다.

바람직한 X는 할로겐 원자이고, 바람직한 Y는 할로겐 원자 및 수소 원자이다.

A에서 하이드록실 그룹에 위해 임의로 치환되는 C₁-C₈ 알킬렌은 직쇄 또는 측쇄일 수 있고, 예시하면 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 부틸렌, 펜틸렌, 헥실렌, 헵틸렌, 옥틸렌, 2,2-디메틸에틸렌, 2,2-디에틸에틸렌, 2,2-디-n-프로필에틸렌, 하이드록시메틸렌, 1-하이드록시에틸렌, 2-하이드록시에틸렌, 3-하이드록시프로필렌등이다.

바람직한 A는 하이드록실 그룹에 의해 임의로 치환된 C₁-C₅ 알킬렌이다.

화학식(I)에서, 메틸렌 그룹 및 피리딘 환은 어느 위치에서도 결합될 수 있으나, 바람직하게는 피리딘 환의 질소 원자에 대해 3-위치에서 결합된다.

Y는 벤젠의 어느 위치에서도 치환될 수 있으나, 바람직하게는 4-위치에서 치환된다.

특히, R¹ 및 R²가 수소 원자이고, R³가 수소 원자 또는 탄소원자 1 내지 4개를 갖는 알킬이며, X가 할로겐 원자이고, Y가 할로겐 원자 또는 수소 원자이며, A가 하이드록실 그룹에 의해 임의로 치환된 C₁-C₅인 화학식 (I)의 피리다지논 화합물이 바람직하다.

보다 바람직한 피리다지논 화합물(I)에는 4-브로모-6-(3-페닐프로폭시)-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-클로로-6-(3-페닐프로폭시)-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-클로로-6-[3-(4-클로로페닐)프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-브로모-6-(2,2-디메틸-3-페닐프로폭시)-5- (3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-클로로-6-(2,2-디메틸-3-페닐프로폭시)-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)-2,2-디메틸프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-클로로-6-[3-(4-클로로페닐)-2,2-디메틸프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)-3-하이드록시프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-클로로-6-[3-(4-클로로페닐)-3-하이드록시프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논, 4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)-2-하이드록시프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논 및 4-클로로-6-[3-(4-클로로페닐) -2-하이드록시프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3(2H)-피리다지논이 있다.

본 발명에서 피리다지논 화합물(I)은 입체이성체 및 광학적 이성체를 포함한다.

피리다지논 화합물(I)은 예를들어 JP-B-7-107055, US-A-5314883, EP-A-482208, JP-A-252237, US-A-5750523 및 EP-A-742211에 개시되어 있는 방법에 의해 제조할 수 있다.

피리다지논 화합물(I)의 약리학적으로 허용되는 염에는 무기산과의 염(예를들어 염산염, 브롬화수소산염, 인산염, 황산염등), 유기산과의 염(예를들어, 아세테이트, 숙신네이트, 말레에이트, 푸마레이트, 말레이트, 타르트레이트등)이 있다.

피리다지논 화합물(I)은 공지된 방법에 의해 상기-언급된 염으로 전환시킬 수 있다.

피리다지논 화합물(I) 및 그의 약리학적으로 허용되는 염은 그자체로서 혈관 신생 촉진제로서 사용될 수 있다. 이들은 또한 혈관신생 작용을 갖는 약제와 동시에 사용하여 약제의 혈관신생 작용의 작용증강제로서 사용될 수 있다.

혈관신생 작용을 갖는 약제는 염기성(basic) 섬유아세포 증식 인자; b-FGF, 내피세포 증식 인자;ECGF, 표피증식인자; EGF, 트랜스포밍(transforming) 증식 인자-β; TGF-β, 혈소판-유래 내피세포 증식 인자;PDGF, 혈관 내피 증식 인자;VEGF, 혈관 투과성 인자;VPF등과 같은 성장 인자, 헤파린, 아데노신등일 수 있다.

피리다지논 화합물(I) 및 그의 약리학적으로 허용되는 염은 증식 인자, 특히 b-FGF의 혈관신생 작용의 작용증강제로서 우수하다.

본 발명의 작용은 제한이 없는 어떠한 공지된 방법에 의해서도 확인될 수 있다.

본 발명에서 활성 성분인 피리다지논 화합물(I) 및 그의 약리학적으로 허용되는 염은 독성이 매우 낮고, 인간, 개, 소, 말, 토끼, 마우스, 래트등과 같은 포유동물에서 혈관신생-촉진 작용, 및 약제의 혈관신생 작용을 증강하는 작용을 나타낸다.

피리다지논 화합물(I) 및 그의 약리학적으로 허용되는 염은 주사제(피하, 정맥내, 근육내, 복강내 주사), 연고, 좌약, 에어로졸제등의 형태로 비경구적으로, 또는 정제, 캡슐, 과립, 환제, 시럽, 액체, 유제등의 형태로 경구적으로 투여될 수 있다.

피리다지논 화합물(I) 및 그의 염은 약제 제조의 통상적인 방법에 따라 투여용 제제로 제형화시킬 수 있다.

경구 투여용 정제, 캡슐, 과립 및 환제는 부형제(예, 슈크로즈, 락토즈, 글루코즈, 전분, 만니톨등), 결합제(예, 시럽, 아카시아, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트, 메틸셀루로즈, 폴리비닐피롤리돈등), 붕해제(예, 전분, 카복시메틸셀루로즈 또는 그의 칼슘염, 미세결정성 셀루로즈, 폴리에틸렌글리콜등), 윤활제(예, 활석, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 실리카등), 활주제(예, 나트륨 라우릴 설페이트, 글리세롤등)등을 사용하여 제조할 수 있다.

주사제, 에어로졸제, 시럽, 액체, 유제 및 현탁제는 활성성분을 위한 용매(예, 물, 에틸알콜, 이소프로필 알콜, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜등), 계면활성제(예, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 수소화된 피마자유의 폴리옥시에틸렌 에테르, 레시틴등), 현탁화제(예, 카복시메틸셀루로즈 나트륨 염, 메틸셀루로즈등과 같은 셀루로즈 유도체, 트라가칸트, 아카시아등과 같은 천연 검), 방부제(예, p-하이드록시벤조에이트, 벤즈알코늄 클로라이드, 소르베이트등)을 사용하여 제조할 수 있다. 좌약은 예를들어 폴리에틸렌 글리콜, 라놀린, 땅콩유등을 사용하여 제조할 수 있다.

피리다지논 화합물(I) 및 그의 염의 투여량은 환자의 연령, 체중, 질병 상태등에 따라 적절하게 결정될 수 있다. 투여량은 일반적으로, 성인(인간)경우 1일 0.001 mg - 5 g, 바람직하게는 0.005 - 1000 mg이고, 이는 하루에 1회 내지 수회 투여량으로 투여된다.

피리다지논 화합물(I) 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이 혈관신생 작용 을 갖는 약제의 작용증강제로서 사용될 때, 본 발명의 피리다지논 화합물 및 혈관신생 작용을 갖는 약제는 그들이 동일한 기간 동안 체내에 함께 존재하는 방법으로 투여된다. 혈관신생 작용을 갖는 약제의 용법 및 투여량은 공지된 범위인 한 제한이 없다. 이들은 단일 약제학적 제제 또는 별개로 개개의 제제로 제조될 수 있다. 이들이 별개의 제제일 때, 투여 경로 및 투여량은 동일하거나 상이할 수 있다.

도 1은 비히클이 투여된 래트 스폰지 모델 그룹에서 시험 7 일후의 혈관신생된 혈관을 보여주는 사진이다.

도 2는 화합물 A가 투여된 래트 스폰지 모델 그룹에서 시험 7일후의 혈관신생된 혈관을 보여주는 사진이다.

도 3은 화합물 A의 혈관신생-촉진 작용을 나타내는, 래트 스폰지 모델에서 스폰지중의 헤모글로빈의 양을 나타내는 도면이다.

도 4는 BSA-생리 염수 용액이 투여된 래트 스폰지 모델 그룹 1에서 시험 4일후, 혈관신생된 혈관을 보여주는 사진이다.

도 5는 염기성 섬유아세포 증식 인자(b-FGF)가 단독으로 투여된 래트 스폰지 모델 그룹 2에서의 시험 4일후 혈관신생된 혈관을 보여주는 사진이다.

도 6은 b-FGF 및 화합물 A가 함께 투여된 래트 스폰지 모델 그룹 3에서 시험 4일후 혈관신생된 혈관을 보여주는 사진이다.

도 7은 b-FCF의 혈관신생 작용이 화합물 A에 의해 증강되는 것을 나타내는, 래트 스폰지 모델에서 스폰지에서의 헤모글로빈의 양을 나타낸다.

도 8은 래트 스폰지 모델에서의 화합물 A의 투여량과 혈관신생 작용사이의 관계를 나타낸다.

본 발명은 하기 실시예 및 실험 실시예에서 상세히 설명된다. 본 발명은 어떠한 방법으로도 이들 실시예로 한정되지 않는다.

실험 실시예 1: 화합물 A에 의한 혈관신생 촉진

방법

래트에 소듐 펜토바르비탈 (50 mg/kg)을 복강내 투여하여 혈관신생시키고, 약 1 cm의 등쪽 중앙선을 절개하고, 코체(Kocher) 클램프로 꼬리쪽으로 약 2.5 cm에서 피하에 공기 포켓을 만들었다. 생리 염수를 흡수시킨 지혈 젤라틴 스폰지(Sponge^Ｒ, 10 mm x 10 mm x 7 mm, Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. 제조)를 그안에 끼워넣었다. 개구를 봉합하고 살균처리하여 시험 동물 모델을 만들었다.

시약으로서, 통상적인 방법으로 제조된 화합물 A (4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)-프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3-(2H)-피리다지논 하이드로클로라이드, 100 mg)을 모르타르에서 0.5% 메틸셀루로즈 용액(100 ml)에 현탁시켜 사용하였다.

대조군으로서, 비히클(0.5% 메틸셀루로즈 용액)을 사용하였다. 비히클은 메틸셀루로즈(5 g, Kashida Chemical Industries, Ltd. 제조)를 증류수(1000 ml)에 용해시켜 수득하였다.

시약(화합물 A) 및 비히클을 스폰지를 끼워넣은 날로부터 하루에 1회 10 ml/kg의 투여량으로 4 일 또는 7일 동안 반복적으로 경구 투여하였다. 끼워넣은 바로 그날 동물을 마취시키기 30 분전에 투여를 하고, 스폰지를 최종 투여 다음날 제거하였다.

끼워넣은지 4일 또는 7일후, 과량의 펜토바르비탈을 안락사시키기위해 동물의 정맥내로 주사하였다. 등을 열고, 끼워넣은 스폰지 주변의 조직을 제거하고 스폰지의 표면을 사진찍었다. 스폰지를 꺼내어 0.1 M 수성 암모니아 (2 ml)에 넣고, 이를 스폰지중의 헤모글로빈을 추출하기 위하여 4시간 동안 정치시켰다. 추출물(100 ㎕)을 취하여, 헤모글로빈을 분석 키트(헤모글로빈 B-TESTWAKO; WAKO Pure Chemical Industries, Ltd. 제조)를 사용하여 정량화하고, 혈관신생의 지수로서 사용하였다. 스폰지중의 헤모글로빈의 양은 다음식에 의해 계산하였다.

스폰지중의 헤모글로빈의 양(mg/스폰지)=추출물(100 ㎕)중의 헤모글로빈(mg) x 20(총 추출액 2 ml)

수득된 데이타를 평균치±표준 오차로 표현했다. 혈관신생 작용의 평가를 위해, 약제를 4일 또는 7일 동안 투여한 동물과 대조군으로서 각각의 비히클 그룹을 사용하여 유의적인 차를 조사함으로써 대응되지 않는 (unpaired) t-시험을 수행하였다. 위험율이 5% 미만인 것을 유의성이 있는 것으로 하였다.

결과:

1. 사진의 관찰

시약(화합물 A) 투여 그룹과 비히클 투여 그룹 모두는 시험의 개시로부터 경과된 날수에 비례하여 시험 4일후 및 7일후에서 스폰지 표면에 혈관신생된 혈관의 증가를 보였다. 시험 7일후, 시약 (화합물 A) 투여 그룹(도 2)은 비히클 투여 그룹(도 1)보다 많은 혈관신생된 혈관을 나타냈다.

2. 스폰지에서의 헤모글로빈의 양

결과가 표 1 및 도 3에 나타나있다. 시약(화합물 A) 투여 그룹 및 비히클 투여 그룹은 모두 시험 4 일후 및 7 일후 시험의 개시로부터 경과된 날수에 비례하여 스폰지중의 헤모글로빈의 양에 있어서 증가를 나타냈다. 시험 7 일후, 시약(화합물 A) 투여 그룹은 비히클 투여 그룹에 비교해서 유의적인 증가를 나타냈다.

표 1

약제	스폰지중의 헤모글로빈(mg/스폰지)
약제	끼워넣고 4일후	끼워넣고 7일후
비히클	6.216 ±0.903 (9)	9.585 ±0.774 (10)
시약(화합물 A)	6.255 ±0.807 (10)	16.351 ±1.836 ** (9)

( ): 동물의 수

**: 비히클 투여 그룹에 대해 p ＜ 0.01, 대응되지 않는 t-시험

실험 실시예 2:

화합물 A에 의한 b-FGF의 혈관신생 작용의 증강작용

방법:

시험 동물 모델을 실험 실시예 1에서와 같은 방법으로 제조하였다.

시약으로서, 통상의 방법으로 제조된 화합물 A (4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)-프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3-(2H)-피리다지논 하이드로클로라이드, 50 mg)을 모르타르에서 0.5% 메틸셀루로즈 용액(100 ml)중에 현탁시키고 사용하였다.

비히클(0.5% 메틸셀루로즈 용액)을 메틸셀루로즈(5 g, Kishida Chemical Industries, Ltd.)를 증류수(1000 ml)에 용해시켜 수득하였다.

0.1% 소 혈청 알부민(BSA)-생리 염수 용액을 생리 염수(100 ml)중에 BSA(0.1 g, Sigma)를 용해시켜 제조하였다.

b-FGF 용액을 재조합 b-FGF(20 ㎍, BTI 제조)을 0.1% BSA-생리 염수 용액(2 ml)에 용해시켜 제조하였다.

지혈 젤라틴 스폰지는 실험 실시예 1에서 사용된 것과 동일한 것이었다.

시험 그룹을 3 그룹으로 분리했다. 100 ㎕의 0.1% BSA-생리 염수 용액으로 습윤된 스폰지를 그룹 1에 끼워넣었다. b-FGF 용액(100 ㎕)으로 습윤된 스폰지(1 ㎍ b-FGF/스폰지)를 그룹 2 및 그룹 3에 끼워넣었다.

비히클을 그룹 1 및 그룹 2에 경구적으로 투여하고, 시약(화합물 A)를 하루에 2회씩 4일 동안 10 ml/kg의 투여량으로 스폰지를 끼워넣은 날로부터 반복하여 그룹 3에 경구적으로 투여하였다.

모든 시험 그룹에서, 투여는 끼워넣은 날의 저녁(단일 투여)으로부터 시작하였다. 약제의 투여 시간은 1차 투여 경우 오전 9시 경이고, 2차 투여는 오후 7시경이다. 약제의 효과를 고려하여, 약제는 스폰지를 제거하는 날에는 투여하지 않았다(총 7회 투여).

끼워넣고 4일후, 안락사를 위하여 동물에 과량의 펜토바르비탈을 정맥내 주사하였다. 등을 개봉하고, 끼워넣은 스폰지 주변의 조직을 제거하여 스폰지의 표면을 사진찍었다. 스폰지를 꺼내어 스폰지중의 헤모글로빈을 실험 실시예 1과 같은 방법으로 계산하였다.

수득된 데이타를 평균치±평균오차로 표현했다. 혈관신생 작용의 평가경우, 유의적인 차이를 조사하기 위해서 터키(Turkey) 방법에 의한 다중 비교 시험을 행하였다. 위험률이 5% 미만의 것을 유의성이 있다고 했다.

결과:

1. 사진의 관찰

결과를 도 4, 도 5 및 도 6에 나타내었다. 시험 4일후, 그룹 2(b-FGF 단일 투여 그룹)는 시각적으로 그룹 1(0.1% BSA-생리 염수 용액 그룹)보다 많은 혈관신생된 혈관을 나타냈고, 그룹 3(b-FGF 및 시약(화합물 A, 5 mg/kg) 공동 투여 그룹)은 그룹 2에서보다 많은 혈관신생된 혈관을 나타냈다.

2. 스폰지중의 헤모글로빈의 양

결과를 표 2 및 도 7에 나타냈다. 그룹 3(b-FGF 및 시약(화합물 A, 5 mg/kg) 공동 투여 그룹)은 그룹 1(0.1% BSA-생리 염수 용액 그룹) 및 그룹 2(b-FGF 단일 투여 그룹)에 비교해서 헤모글로빈 함량에 있어서 유의적인 증가를 나타냈다.

표 2

시험 그룹	약제		끼워넣고 4일후 스폰지중의 헤모글로빈(mg/스폰지)
시험 그룹	경구 투여	스폰지내 투여	끼워넣고 4일후 스폰지중의 헤모글로빈(mg/스폰지)
그룹 1	비히클	BSA-생리 염수	5.503 ±0.562 (10)
그룹 2	비히클	b-FGF	7.285 ±0.715 (10)
그룹 3	시약(화합물 A)	b-FGF	14.995 ±2.307 ++, ** (10)

( ): 동물의 수

++: 그룹 1에 대해 p＜0.01,

**: 그룹 2에 대해 p＜0.01(터키 방법)

실험 실시예 3 :

화합물 A에 의한 투여량과 혈관신생 촉진사이의 관계

방법:

시험 동물 모델을 실험 실시에 1에서와 같은 방법으로 제조하였다.

시약으로서, 통상의 방법으로 제조된 화합물 A (4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)-프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3-(2H)-피리다지논 하이드로클로라이드, 35 mg)를 모르타르에서 0.5% 메틸셀루로즈 용액(70 ml)중에 현탁시키고, 5 mg/kg의 투여 시약으로서 사용하였다.

이 현탁액을 비히클(0.5% 메틸셀루로즈 용액)으로 2배 및 5배로 희석시켜, 2.5 mg/kg 투여 시약 및 1 mg/kg 투여 시약(각각의 투여량 10 ml/kg)을 제조하였다. 비히클(0.5% 메틸셀루로즈 용액)을 대조군으로서 사용하였다. 비히클을 메틸틸셀루로즈(5 g, Kishida Chemical Industries, Ltd.)를 증류수(1000 ml)에 용해시켜 수득하였다.

각 시약 (화합물 A) 및 비히클을 스폰지 끼워넣은 날로부터 하루에 2회 10 ml/kg의 투여량으로 4일 동안 반복적으로(총 7회) 경구 투여하였다. 스폰지를 최종 투여 다음날 제거하고, 스폰지중의 헤모글로빈을 실험 실시예 1에서와 같은 방법으로 계산하였다.

각 그룹은 8-9 마리의 동물을 포함하고, 수득된 데이타는 평균치±표준오차로 표현했다. 혈관신생 작용의 평가경우, 유의적인 차이를 조사하기 위하여 대조군으로서 비히클 투여 그룹을 사용하여 듀네트(Dunnett) 시험을 수행하였다. 위험 율이 5% 미만인 것을 유의성이 있다고 했다.

결과:

결과를 도 8에 나타냈다. 비히클 그룹에 비교하여, 2.5 mg/kg 투여 그룹 및 5 mg/kg 투여 그룹은 헤모글로빈 양에 있어서 유의적인 증가를 나타냈다.

5 mg/kg 투여 그룹에서, 유의적인 차이가 발견되지만, 작용이 약해지는 경향이 있다. 이는 화합물 A의 투여량(5 mg/kg)이 혈관확장 작용에 기초해서 래트에서 저혈압 작용을 일으키기 때문에 저혈압 작용에 기인한 혈류에서의 감소에 기인할 수 있다고 가정된다.

이는 화합물 A가 실질적으로 저혈압 작용이 실질적으로 없는 투여량에서 우수한 혈관신생 촉진 작용을 나타낸다는 것을 명확히 해준다.

실험 실시예 4 : 독성

화합물 A의 급성 독성(LD₅₀)은 래트 또는 개에 경구 투여에 의해 2 g/kg이상이었고, 화합물은 매우 낮은 독성인 것으로 밝혀졌다.

상기 시험 결과로 부터, 피리다지논 화합물(I) 및 그의 염은 우수한 혈관신생-촉진 작용을 나타내고 혈관신생 작용을 갖는 약제의 작용을 증강시키고, 독성이 낮다는 것이 명백하다.

실시예 1 (정제)

하기 성분들을 통상의 방법에 의해 혼합하여 정제로서 활성 성분 50 mg을 함유하는 슈가-코팅된 정제로 제조하였다.

화합물 A 10 g

락토즈 20 g

전분 5 g

마그네슘 스테아레이트 0.1 g

칼슘 카복시메틸셀루로즈 7 g

총 42.1 g

실시예 2 (캡슐)

하기 성분들을 통상적인 방법으로 혼합하고 젤라틴 캡슐에 채워 캡슐당 50 mg의 활성 성분을 함유하는 캡슐을 얻었다.

화합물 A 10 g

락토즈 20 g

미세결정성 셀루로즈 10 g

마그네슘 스테아레이트 1 g

총 41 g

실시예 3 (연고)

하기 성분들을 통상적인 방법에 의해 혼합하여 1 wt%의 연고를 얻었다.

화합물 A 1 g

올리브유 20 g

백색 광유 79 g

총 100 g

실시예 4 (에어로졸 현탁제)

하기 성분들(A)들을 혼합하고, 수득된 혼합된 용액을 밸브가 장치된 용기에 충전시켰다. 추진제(B)를 20℃에서 약 2.46 - 2.81 mg/cm² 게이지 압력으로 그안에 가압시켜 에어로졸 현탁액을 얻었다.

(A) 화합물 A 0.25 wt%

이소프로필 미리스테이트 0.10 wt%

에탄올 26.40 wt%

(B) 1,2-디클로로테트라플루오로에탄 및

1-클로로펜타플루오로에탄(60-40 wt%) 73.25 wt%

본 발명에서의 피리다지논 화합물(I) 및 그의 약리학적으로 허용되는 염은 혈관신생을 촉진시키고, 혈관신생 작용을 갖는 약제의 작용을 증강시키며, 혈관신생 촉진제 및 작용증강제 로서 유용하다. 그러므로, 이들은 상처 치유의 촉진, 피부 이식후 접착의 촉진, 사지절단시 재봉합후의 치유의 촉진, 발모 촉진등과 같은 혈관신생이 중요한 역할을 하는 다양한 질병의 치유의 촉진에 효과적이다.

본 출원은 일본국에 출원된 특허출원 제 232644/1997 호에 기초하고, 이의 내용은 본 명세서에 참고로 인용된다.

Claims

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화학식(I)의 피리다지논 화합물 또는 그의 약리학적으로 허용되는 염, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 상처 치유의 촉진, 피부이식후 접착의 촉진, 사지절단시 재봉합후의 치유의 촉진, 또는 발모의 촉진을 위한 약제학적 조성물:

상기 식에서,

R¹, R² 및 R³는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 C_1-6알킬이고,

X는 할로겐 원자, 시아노 또는 수소 원자이며,

Y는 할로겐 원자, 트리플루오로메틸 또는 수소 원자이고,

A는 하이드록실 그룹으로 치환되거나 비치환된 C₁-C₈ 알킬렌이다.
제 10 항에 있어서, 피리다지논 화합물이 R¹ 및 R²가 각각 수소 원자이고, R³은 수소 원자이거나 탄소원자 1 내지 4개를 갖는 알킬이며, X는 할로겐 원자이고, Y는 할로겐 원자 또는 수소 원자이며, A는 하이드록실 그룹에 의해 치환되거나 비치환된 C₁-C₅알킬렌인 화학식(I)의 화합물인 약제학적 조성물.
제 10 항 또는 제 11 항에 있어서, 화학식(I)의 피리다지논 화합물이 4-브로모-6-[3-(4-클로로페닐)-프로폭시]-5-(3-피리딜메틸아미노)-3-(2H)-피리다지논인 약제학적 조성물.
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