KR100510987B1 - 음료조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 주성분으로서 ⒜ 구연산 및/또는 ⒝ 아연과 L-아르기닌을 포함하고, 보조 성분으로서 강화제; 감미제; 산미제; 교미제; 보존제; 착향제 및 천연과즙으로 이루어진 그룹 중에서 2종 이상을 함유함을 특징으로 하는 음료조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 음료조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 보다 자세하게는, 본 발명의 주성분으로서 ⒜ 구연산(Citric acid) 및/또는 ⒝ 아연(Zinc)과 L-아르기닌(L-Arginine)을 포함하고, 보조성분으로서 강화제; 감미제; 산미제; 교미제; 보존제; 착향제 및 천연과즙으로 이루어진 그룹 중에서 2종 이상을 함유함을 특징으로 하는 음료조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
구연산은 많은 식물의 씨나 과즙 속에 유리상태의 산으로 함유되어 있는 것으로 레몬, 매실, 감귤류의 과일에 특히 많이 함유되어 있는 물질로서 염기성의 유기산으로 이것을 과일로부터 추출하여 청량음료나 식품첨가제로 사용해 왔으나, 근래에는 당류(예, 전분이나 전분박)를 기질로 하여 미생물을 이용한 발효로 만들어내고 있다. 일반적으로, 구연산은 결정성의 백색 가루로 되어 있고 물에 잘 녹으며 이것을 청량음료 등에 첨가하면 상쾌한 맛을 낸다. 또한 구연산은 생체내에서는 TCA(Tricarboxylic acid) 회로를 구성하는 한 요소로서 고등동물의 물질대사에서 중요한 구실을 한다. 이 밖에도 체내의 칼슘흡수를 촉진시키는 작용 및 살균효과를 나타내는 것으로 알려져 있다. 용도로는 과즙, 청량음료, 이뇨성 음료에 신맛을 내 식품첨가제로서 주로 사용되고, 의약품, 분석시약, 화장품원료로 널리 쓰이고 있다.
아연은 생체내 모든 체세포에 존재하며, 200개가 넘는 효소들의 구성 성분 중 하나이다. 실제로, 아연은 효소 반응에서 다른 어떤 무기질보다도 많은 기능을 한다. 또한 갑상선 호르몬, 인슐린 성장 호르몬 및 성호르몬을 포함한 많은 인체 호르몬들의 적절한 활동에도 필요하다. 보통 성인의 인체에는 총 1.4 내지 2.5g의 아연이 들어 있는데, 주로 근육내에 저장되어 있으며, 적혈구와 백혈구 내에도 높게 농축되어 있다. 아연 농도가 특히 높은 조직들로는 뼈, 피부, 신장, 간, 췌장, 망막 및 전립선 등이 있다. 아연의 일일 표준 섭취량은 1 내지 15㎎이고, 공급원으로 잘 알려져 있는 것은 굴이지만, 다른 갑각류들과 생선, 붉은 고기 등에도 비교적 높은 농도로 들어있다. 알곡과 콩류, 견과류, 씨앗류 같은 여러 가지 식물성 식품에도 아연이 충분한 농도로 들어 있다. 그러나, 이들 식품에 들어 있는 아연은 피틴(섬유 화합물)산과 결합해서, 흡수되지 않는 불용성의 아연 피틴산염 복합체를 형성하기 때문에 이용도가 떨어진다. 선택할 수 있는 아연 형태는 아주 많다. 대부분의 임상 연구들에서는 황산염 아연을 사용해 왔지만, 인체는 다른 여러 형태들을 더 잘 흡수하고 이용한다. 피콜리네이트(picolinate)와 아세테이트, 구연산염, 글리세린산염 또는 모노메티오닌과 아연과의 결합 형태들이 그 예이다.
L-아르기닌은 세포 재생, 면역 기능, 호르몬 정상화 및 단백질 대사에 있어 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있으며, 특히 세포독성 T세포와 자연살해 세포의 항암 작용을 항진시켜 종양과 암세포의 성장, 전이 등을 지연시킨다는 결과가 보고된 바 있다(Novaes et al. Arch. Latinoam. Nutr., 49(4), pp301-8, 1999). 또한, L-아르기닌은 간의 해독 작용 보조 역할을 통해 간 경화, 지방간 같은 간 질환에 효과를 나타내며, 정자 생산의 활성화를 높이는 주된 성분이기도 하다. 따라서, L-아르기닌은 많은 의약품, 건강보조식품 등에 유용한 성분으로 쓰이고 있다.
상기 열거한 바와 같이, 본 발명의 주성분으로 쓰이는 구연산, 아연 및 L-아르기닌은 단독으로 또는 다른 성분들과 혼합물의 형태로 분말이나 킬레이트 화합물 형태 또는 캡슐제 등으로 시중에 많이 시판되고 있지만 그 제조과정에서 유효성분의 활성이 상당 정도 소실될 우려가 있고, 복용 후 흡수효율측면에서도 효과적이지 못한 문제점이 있다.
따라서, 본 발명자들은 구연산, 아연 및 L-아르기닌의 각각 알려진 생체에 대한 효과와 특히, 연구 결과로서 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 주성분으로 함유한 조성물을 암세포에 처리하면 암세포의 사멸을 유도한다는 것을 발견함으로써(대한민국특허출원 제 2002-67291호 및 대한민국 특허출원 제 2002-67293 참조) 인체에 유익한 작용을 나타내는 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 주성분으로 함유하는 음료조성물을 제공하여, 체내에 쉽게 흡수되며, 간편하게 복용할 수 있도록 하였다.
본 발명자들은 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 포함하는 조성물이 인체에 유익한 효능, 특히 항암효과가 있다는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명은 주성분으로서 ⒜ 구연산 및/또는 ⒝ 아연과 L-아르기닌을 포함하고, 보조 성분으로서 강화제; 감미제; 산미제; 교미제; 보존제; 착향제 및 천연과즙으로 이루어진 그룹 중에서 2종 이상을 함유함을 특징으로 하는 음료조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 a) 열정제수를 교반하면서 1 내지 20중량%의 구연산 및/또는 0.001 내지 5중량%의 아연과 0.003 내지 60중량%의 L-아르기닌을 혼화시킨 다음, 1 내지 30중량%의 감미제를 넣고 용해시킨 후, 0.05 내지 1중량%의 산미제를 첨가하여 시럽을 조제하는 단계;
b) 정제수에 강화제 0.001 내지 0.3중량%를 첨가하여 용해시키는 단계;
c) a)의 액에 b)의 액을 가하고 교반시키는 단계;
d) 열정제수에 교미제 0.01 내지 3중량%를 용해시키는 단계;
e) 열정제수에 교반하면서 보존제 0.001 내지 0.1중량%를 넣어 용해시키는 단계;
f) c)의 액에 d), e)의 액을 혼화하여 완전히 용해시킨 다음, 착향제, 천연과즙을 가하여 서서히 교반하면서 충분히 균질화시킨 후, 정제수 적량을 첨가하여 음료조성물을 수득하는 단계로 이루어진 음료조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 ⒜ 구연산 및/또는 ⒝ 아연과 L-아르기닌을 주성분으로 하고, 이에 보조제로서 각종 강화제, 감미제, 산미제, 교미제, 보존제, 착향제, 천연과즙 등을 함께 첨가하여 생체내 흡수가 용이하고 높은 생리활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 액제 형태의 음료조성물을 제공한다.
본 발명의 주성분으로서 구연산은 생체내에서 TCA 회로를 구성하는 요소로서 고등동물의 신진대사를 높여 피로회복 효과를 나타내며, 생체내의 칼슘흡수 촉진 및 살균효과를 나타낸다. 본 발명의 또 다른 주성분으로서 아연은 그 효과가 매우 광범위하다. 그 이유는 아연이 많은 효소들과 인체의 기능에 관여하고 있기 때문이다. 그 중 아연의 대표적인 효과는 면역 기능, 상처 치유, 감각 기능 및 성 기능 등의 활성을 높여준다는 것이다.
본 발명의 주성분으로 상기 구연산 및/또는 아연과 같이 함유되는 L-아르기닌은 세포 재생, 면역 기능, 호르몬 정상화, 단백질 대사 및 항암 작용 등의 활성을 높이는 아미노산으로 생체내에서 중요한 역할을 한다.
상기에 나타낸 바와 같이, 인체에 유익한 효능을 나타내는 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 함유하여 제조한 조성물이 특히, 항암 효과를 나타낸다는 것을 증명하기 위해 본 발명자들은 상피성 난소암을 대상으로 설명하고자 한다. 그러나, 당업자라면 본원에 예시적으로 기재된 상피성 난소암에 대한 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 함유하여 제조한 조성물의 효과를 보고 다른 유형의 암에 대해서도 동일하게 적용할 수 있음을 인식할 것이다.
상피성 난소암은 난소암중 가장 흔한 유형일 뿐만 아니라 부인과의학에서 악성에 의한 주된 사망 원인이다. 상피성 난소암 환자의 치사율이 가장 높게 나타나는 이유는 상피성 난소암의 잠행성 진행으로 인해 암이 상당히 진행된 단계에서 환자가 진단되는 것이 대부분이기 때문이다(Ozols, R. F., Semin. Oncol., vol. 22, pp61-66, (1995)). 비록 종양을 수술로 제거하거나 적극적인 화학요법으로 난소암을 치료하지만 난소암 환자의 생존율은 약물 내성으로 인하여 단지 20 내지 30%에 불과하다.
현재까지도 상피성 난소암의 위험 요소와 원인에 관하여 잘 알려져 있지 않다. 그러나 많은 연구들은 배란의 빈도와 상피성 난소암의 발전 사이에 밀접한 관계가 있음을 공통적으로 보여주고 있는데, 이러한 관계는 상피성 난소암의 발생률이 젊은 여성과 나이든 여성(이른 초경과 늦은 폐경기), 미혼 및 미출산 여성에서 증가한다는 것으로 알 수 있다(Franceshi et al., Int. J. Cancer, vol. 49, pp57-60, (1991); Taylor et al., Cancer, vol. 12, p1207-, (1959); Fraumeni et al., J. Natl. Cancer Inst., vol. 42, p455-, (1969); Dorn et al., Public Health Monogr. 56, PHS Publication No. 590, (1959); Weiss et al., J. Natl. Cancer Inst., vol. 58, p913-, (1977); (Nergri et al., Int. J. Cancer, vol. 49, pp50-56, (1991)). 따라서, 경구용 피임약은 상피성 난소암의 발전에 대해 방어 효과를 나타내는 것으로 일반적으로 알려져 있다(Stanford, J.L., Contraception 43, pp543-556, (1991); Negri et al., Int. J. Cancer, vol. 49, pp50-56, (1991); Franceshi et al., Int. J. Cancer, vol. 49, pp61-65, (1991)). 상피성 난소암의 발병을 설명하는 유력한 학설은 배란 동안 난소 상피 표면이 반복적으로 분열하고 회복하기 때문이라는 것이다(Fathalla, M.F., Lancet., vol. 2, p163-, (1971)). 상피 표면이 회복되는 과정에 변형된 상피 세포는 자발적으로 돌연변이되고, 종양 억제 유전자가 불활성화되며 발암물질에 의해 종양 유전자(oncogene)가 활성화되기 쉽다.
한편, 알려진 정액의 기능 및 항암효과로서, 사람 정액은 림프구의 세포독성으로 인한 성교 후 정자의 면역학적 손상을 정액의 정장(seminal plasma)성분이 보호한다고 알려져 있으며(Stities et al., Nature, vol. 253, pp727-729, (1975); James et al., Immunol., vol. 6, pp61-70, (1985)), 체액성 면역의 발달과 생체내 종양 성장을 억제시킬 수 있다고 보고되어 있다(Anderson et al., Immunol., vol. 128, pp535-539, (1985); Michaelis et al., Anticancer Drugs, vol. 11, pp369-376, (2000)), 또한 자궁경부 상피성 암종세포에서 메탈로프로테이나제(metalloproteinase; MMP)-2 및 MMP-9의 mRNA가 생성되는 것에 영향을 미치므로 성행위시 정액으로 인해 자궁경부암의 진행에 영향을 미칠 수 있다고 알려져 있다(Jeremias et al., Am. J. Obstet. Gynecol., vol. 181, pp591-595, (1999)). 최근에는 소의 정액 성분 중 리보뉴클레아제(BS-RNase)가 사람 림프구와 사람 종양세포에 노출되는 시간과 농도에 따라 세포사멸을 유도하는 능력이 있다고 밝혀졌다. BN-RNase는 화학치료 약물에 대한 내성적인 신경아(neuroblastoma; NB)세포에 대하여 높은 효능을 나타내는 물질이다(Cinatl et al., Anticancer Res., vol. 20, pp853-859, (2000); Cinatl et al., Int. J. Oncol., vol 15, pp1001-1009, (1999)).
또한, 생태학적 연구를 통한 정액의 항암효과를 조르고브(Gjorgov)는 다양한 사례-대조 연구를 실시하여 사람 정액의 감소된 노출과 유방암 발생사이의 상호관계를 조사하였다. 예를 들면, 차단피임방법(콘돔)을 사용한 여성과 비차단 피임방법(피임약, 자궁내장치(Intra Uterine Device; IUD), 리듬 또는 난관 결찰)을 사용한 여성을 대상으로 유방암 발생 위험도를 비교한 결과, 차단피임방법(콘돔)을 사용한 여성이 유방암 발생 위험도가 5.2배 더 높다는 결과를 얻을 수 있었다(Gjorgov et al., Folia Med., vol. 40, pp17-23, (1998)).
상기 제시된 항암효과를 나타내는 정액의 주요성분은 알부민(albumin), 락토페린(lactoferrin), 전달요소(transferring factors), 면역글로불린, 산 포스파타제(acid phosphatase), L-카르니틴(L-carnitine), L-아르기닌, L-히스티딘(L-Histidine), 구연산(citric acid), 프락토즈(fructose), 마그네슘(magnesium), 아연(zinc), 프로스타글란딘(prostaglandin) 및 글리세로포스포콜린(glycerophosphocholine) 등이다.
상술한 바와 같이, 상피성 난소암 및 정액의 항암효과에 관한 종래 지식으로부터 본 발명자들은 상피성 난소암에 있어서, 배란기간동안 사람 정액에 대한 감소된 노출이 상피성 난소암 진행에 병인학적 위험요소 중 하나가 될 것이라고 판단하였다. 따라서, 사람 정액 성분들이 악성형질전환된 상피 세포를 제거하는데 기여할 수 있을 것이다.
이와 관련하여, 본 발명자들은 생체 외(in vitro)에서 암세포에 영향을 미치는 사람 정액 성분을 연구한 결과, 사람 정액 성분 중 구연산이 암세포의 미토콘드리아에 작용하여 미토콘드리아를 깨뜨린다는 것과 아연이 정상세포를 암세포보다 더 많이 보호하고 암세포의 사멸을 유도한다는 것을 발견하였으며, 구연산 및/또는 아연과 종래 암치료에서 세포독성 T세포와 자연살해세포의 항암작용을 항진시켜 종양과 암세포의 성장, 전이 등을 지연시킨다고 알려진 L-아르기닌을 함께 혼합할 경우 항암효과가 높아진다는 것을 발견하였다(대한민국특허출원 제 2002-67291호 및 대한민국 특허출원 제 2002-67293 참조). 이에 본 발명자들은 구연산 및 L-아르기닌을 함유하는 조성물을 제조하여 사람 난소 아데노암종인 SKOV-3 및 사람 뇌 교모세포종인 U87에 처리한 결과, 세포사멸을 유도하여 암세포를 사멸시키는 효과가 높다는 것을 확인하였고, 아연 및 L-아르기닌을 함유하는 조성물을 제조하여 SKOV-3 및 U87에 처리한 결과, 세포사멸을 유도하여 암세포를 사멸시키는 효과가 높다는 것을 확인하였다(하기 도면 참조). 즉, 암세포주인 SKOV-3 및 U87를 대상으로 구연산 및 L-아르기닌 또는 아연 및 L-아르기닌을 함유하는 조성물을 처리한 결과로 볼 때, 본 발명의 주성분인 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 함유하는 조성물이 암세포의 세포사멸을 유도하는 항암작용을 나타낸다는 것을 알 수 있다.
상술한 바와 같이 구연산, 아연 및 L-아르기닌 각각의 알려진 효과 및 특히, 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 함유한 조성물의 항암효과 등은 본 발명의 음료조성물이 인체에 유익한 효과를 나타낸다는 것을 보여주는 것이다.
따라서, 본 발명은 주성분으로서 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 균질하게 용해시킨 정제수에 보조 성분으로서 강화제, 감미제, 산미제, 교미제, 보존제, 착향제, 천연과즙류 중 2종 이상을 함유하여 액제화된 음료조성물 및 이를 제조하는 방법을 제공한다.
한 양태로서, 본 발명의 음료조성물을 제조하는 방법은 다음과 같다.
⒜ 열정제수를 교반하면서 1 내지 20중량%의 구연산 및/또는 0.001 내지 5중량%의 아연과 0.003 내지 60중량%의 L-아르기닌을 혼화시킨 다음, 여기에 1 내지 30중량%의 감미제를 넣고 용해시킨 후, 0.05 내지 1중량%의 산미제를 첨가하여 시럽을 조제한다.
⒝ 별도로 정제수에 0.001 내지 0.3중량%의 강화제를 가하여 용해시킨다.
⒞ 상기에서 제조한 ⒜의 시럽에 ⒝의 액을 가하여 교반시킨 후 여기에 추가적인 첨가제로서 무수 카페인 0.01 내지 1중량% 혹은 착향제 0.1 내지 1중량%를 가할 수 있다.
⒟ 별도로 열정제수에 교미제 0.01 내지 3중량%를 가하여 용해시킨다.
⒠ 또한 보존제 0.001 내지 0.1중량%를 따로 열정제수에 넣어 용해시킨다.
⒡ 상기에서 제조된 ⒞의 액에 ⒟, ⒠의 액을 혼화하여 완전히 용해시킨 다음, 착향제 또는 천연과즙을 가하여 서서히 교반시키고 호모게나이저(Homogenizer, NISSEI)로 통과시켜 충분히 균질화시킨 후, 100 메쉬(mesh)로 여과하고 정제수 적량을 첨가한 후 순간멸균기(Miura, Japan)로 멸균시킨 다음 100㎖ 음료조성물을 수득하는 단계로 본 발명의 음료조성물을 제조한다.
본 발명에서 주성분으로 사용되는 아연은 이들로 한정되는 것은 아니지만 염화아연, 황산아연 및 아세트산아연 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 염화아연을 사용할 수 있다.
또한. 본 발명에서 보조 성분은 이들로 한정되는 것은 아니지만 강화제, 감미제, 산미제, 교미제, 보존제, 착향제 및 천연과즙류로 각 제제에 따라 하기 열거된 성분들을 사용할 수 있다.
본 발명에 사용되는 강화제로서 비타민류로는 비타민 A, B1, B2, C, D2, B3, E, 엽산 등 식품 공전 및 식품첨가물공전에 수재된 모든 비타민류를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 비타민 B2 또는 비타민 C 등을 혼합하여 사용한다. 아미노산류로는 L-라이신, DL-메치오닌, L-발린, 비오틴, L-시스테인, L-시스틴, L-트립토판, L-트레오닌, L-페닐알라닌, L-글리신 등을 사용할 수 있다. 칼슘염류로는 판토텐산칼슘, 글루콘산칼슘, 탄산칼슘, 구연산칼슘, 식물성칼슘, 동물성칼슘, 오이스터쉘파우더칼슘 등을 사용할 수 있다.
본 발명에 사용되는 감미제는 고과당, 백당, 포도당, 아스파탐, 스테비오사이드, D-솔비톨, 글리실리진산 염류 등 식품공전 및 식품첨가물 공전에 수재된 모든 감미제를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 포도당 또는 백당 등을 2종 이상 혼합하여 사용한다.
본 발명에 사용되는 산미제는 DL-사과산, 호박산, D-주석산, 아디핀산등 식품공전 및 식품첨가물공전에 수재된 모든 산미제를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 DL-사과산 또는 D-주석산 등을 사용한다.
본 발명에 사용되는 교미제는 식품공전 및 식품첨가물공전에 수재된 모든 교미제를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 염화나트륨, 호박산이나트륨 또는 L-글루타민산나트륨 등을 2종 이상 혼합하여 사용하며, 그 양은 음료의 양, 종류 및 각 주성분의 사용량에 따라서 가감될 수 있다.
본 발명에 사용되는 보존제는 안식향산 및 그의 유도체(예, 안식향산나트륨), 데히드로초산 및 그의 염류(예, 데히드로초산나트륨), 솔빈산 및 그의 염류(예, 솔빈산칼슘)등 식품공전 및 식품첨가물공전에 수재된 모든 보존제를 단독 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명에 사용되는 착향제는 천연 또는 인공향료로서 사과향, 딸기향, 오렌지향, 혼합과일향, 요구르트 향, 드링크향중 단독 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명에 사용되는 천연과즙류로는 사과, 배, 파인애플, 귤, 그레이프후르츠, 복숭아, 살구, 딸기, 레몬, 자두, 메론 등의 천연과즙농축액을 단독 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.
상기 제조방법에 따라 제조된 본 발명의 음료조성물은 예시적으로 각 성분이 다음과 같은 조성으로 이루어진다. 주성분으로서 1 내지 20중량%의 구연산 및/또는 0.001 내지 5중량%의 아연과 0.003 내지 60중량%의 L-아르기닌을 함유한다. 또한 보조 성분으로서, 강화제인 비타민류는 0.001 내지 0.1중량%의 비타민 B2 또는 0.001 내지 0.1중량%의 비타민 C를 함유하며, 강화제인 칼슘염류는 0.001 내지 0.1중량%의 글루콘산칼슘 또는 0.001 내지 0.1중량%의 판토텐산칼슘을 함유한다. 감미제로는 1.0 내지 20중량%의 백당 및 1.0 내지 10.0중량%의 포도당을 함유하며, 산미제로는 0.05 내지 1중량%의 DL-사과산을 함유한다. 교미제로는 0.01 내지 1.0중량%의 L-글루타민산나트륨 또는 0.01 내지 1.5중량%의 염화나트륨 또는 0.01 내지 1.0중량%의 호박산이나트륨을 함유한다. 보존제로는 0.05 내지 0.1중량%의 안식향산나트륨 및 0.05 내지 0.1중량%의 솔빈산을 함유하며, 필요시 0.01 내지 1.0중량%의 무수 카페인 또는 0.1 내지 1중량%의 착향제 또는 천연과즙을 첨가할 수 있다.
본 발명은 하기 실험예 및 실시예로서 보다 구체적으로 예시될 것이다. 그러나, 이들 실험예 및 실시예는 단지 본 발명의 구현예이며 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.
<실시예 1>
본 발명의 음료조성물 제조
⑴
100㎖(100g) 중
구연산 10g
L-아르기닌 30g
백 당 10g
포도당 2.5g
DL-사과산 0.3g
비타민 B2 0.005g
비타민 C 0.005g
글루콘산칼슘 0.015g
L-글루타민산 나트륨 0.055g
염화나트륨 0.035g
안식향산나트륨 0.06g
솔빈산 0.01g
정제수 100% 조성량
본 발명의 음료조성물 제조방법은 1) 열정제수 30ℓ에 교반하면서 구연산 10㎏(Sigma. U.S.A.), L-아르기닌 30㎏(Ajinomoto, Japan)을 혼화시킨 다음, 백당 10㎏, 포도당 2.5kg을 넣고 용해시킨 후, DL-사과산 0.3㎏을 첨가하여 90℃를 유지하면서 15분간 시럽을 조제하였다.
2) 1)과는 별도로, 정제수 5ℓ에 비타민 B2 5g, 비타민 C 5g 및 글루콘산칼슘 15g를 순차적으로 첨가하여 50 내지 60℃를 유지하면서 용해시켰다.
3) 1)의 액에 2)의 액을 가하고 계속해서 50 내지 60℃를 유지하면서 1시간동안 교반시켰다.
4) 열정제수 10ℓ에 L-글루타민산나트륨 55g, 염화나트륨 35g을 용해시켰다.
5) 미리 준비한 열정제수 5ℓ에 교반하면서 솔빈산 10g, 안식향산나트륨 60g을 넣어 용해시켰다(보존제).
6) 3)의 액에 4), 5)의 액을 혼화하여 완전히 용해시킨 다음, 서서히 교반하면서 충분히 균질화시킨 후, 100 메쉬(mesh)로 여과하고 정제수 적량을 넣어 전체량을 100ℓ로 맞춘 다음 순간멸균기를 통해 95℃에서 30초 동안 순간 멸균시킨 다음 자동충전기를 이용하여 100㎖ 병에 충전하였다.
⑵
100㎖(100g) 중
염화아연 1g
L-아르기닌 3g
백 당 15g
포도당 3.0g
D-주석산 0.3g
비타민 B2 0.01g
비타민 C 0.01g
판토텐산칼슘 0.02g
무수 카페인 0.03g
L-글루타민산 나트륨 0.055g
호박산이나트륨 0.04g
안식향산나트륨 0.055g
솔빈산 0.01g
정제수 100% 조성량
1) 열정제수 30ℓ에 교반하면서 염화아연 1㎏(Sigma. U.S.A.), L-아르기닌 3㎏(Ajinomoto, Japan)을 혼화시킨 다음, 백당 15㎏, 포도당 3kg을 넣고 용해시킨 후, D-주석산 0.3㎏을 첨가하여 90℃를 유지하면서 15분간 시럽을 조제하였다.
2) 1)과는 별도로, 정제수 5ℓ에 비타민 B2 10g, 비타민 C 10g 및 판토텐산칼슘 20g을 순차적으로 첨가하여 50 내지 60℃를 유지하면서 용해시켰다.
3) 1)의 액에 2)의 액을 가하고 계속해서 50 내지 60℃를 유지하면서 1시간동안 교반시켰다.
4) 열정제수 10ℓ에 L-글루타민산나트륨 55g, 호박산이나트륨 40g을 용해시켰다.
5) 열정제수 5ℓ에 무수카페인 30g을 넣어 용해시켰다.
6) 미리 준비한 열정제수 5ℓ에 교반하면서 안식향산나트륨 55g, 솔빈산 10g을 넣어 용해시켰다(보존제).
7) 3)의 액에 4), 5)및 6)의 액을 혼화하여 완전히 용해시킨 다음, 서서히 교반하면서 충분히 균질화시킨 후, 100 메쉬(mesh)로 여과하고 정제수 적량을 넣어 전체량을 100ℓ로 맞춘 다음 순간멸균기를 통해 95℃에서 30초 동안 순간 멸균시킨 다음 자동충전기를 이용하여 100㎖ 병에 충전하였다.
⑶
100㎖(100g) 중
구연산 15g
염화아연 3g
L-아르기닌 45g
백 당 10g
포도당 2.5g
DL-사과산 0.3g
비타민 B2 0.005g
비타민 C 0.005g
글루콘산칼슘 0.015g
L-글루타민산 나트륨 0.055g
염화나트륨 0.035g
안식향산나트륨 0.06g
솔빈산 0.01g
정제수 100% 조성량
1) 열정제수 30ℓ에 교반하면서 구연산 15㎏(Sigma. U.S.A.), 염화아연(Sigma, U.S.A.) 3㎏ 및 L-아르기닌 45㎏(Ajinomoto, Japan)을 혼화시킨 다음, 백당 10㎏, 포도당 2.5kg을 넣고 용해시킨 후, DL-사과산 0.3㎏을 첨가하여 90℃를 유지하면서 15분간 시럽을 조제하였다.
2) 1)과는 별도로, 정제수 5ℓ에 비타민 B2 5g, 비타민 C 5g 및 글루콘산칼슘 15g를 순차적으로 첨가하여 50 내지 60℃를 유지하면서 용해시켰다.
3) 1)의 액에 2)의 액을 가하고 계속해서 50 내지 60℃를 유지하면서 1시간동안 교반시켰다.
4) 열정제수 10ℓ에 L-글루타민산나트륨 55g, 염화나트륨 35g을 용해시켰다.
5) 미리 준비한 열정제수 5ℓ에 교반하면서 솔빈산 10g, 안식향산나트륨 60g을 넣어 용해시켰다(보존제).
6) 3)의 액에 4), 5)의 액을 혼화하여 완전히 용해시킨 다음, 서서히 교반하면서 충분히 균질화시킨 후, 100 메쉬(mesh)로 여과하고 정제수 적량을 넣어 전체량을 100ℓ로 맞춘 다음 순간멸균기를 통해 95℃에서 30초 동안 순간 멸균시킨 다음 자동충전기를 이용하여 100㎖ 병에 충전하였다.
<실시예 2>
본 발명의 음료조성물에 대한 관능검사
상기와 같이 제조한 실시예 1의 ⑴, ⑵ 및 ⑶의 음료조성물에 대하여 관능검사요원 30명을 대상으로 기호도에 대한 관능검사를 3회 반복 실시한 결과를 표 1에 나타내었다.
| 검사항목 | 실시예 1의 ⑴ | 실시예 1의 ⑵ | 실시예 1의 ⑶ |
| 색상 | 4.0 | 4.1 | 4.2 |
| 맛 | 4.1 | 4.0 | 3.9 |
| 향 | 3.8 | 3.9 | 4.0 |
| 감촉(mouth feel) | 4.0 | 4.1 | 4.1 |
| 전체적인 기호도 | 4.2 | 4.0 | 4.1 |
*관능검사인원 30명
**검사방법 : 5점 척도법
***1 : 아주 싫다. 2 : 싫다. 3 : 보통이다. 4 : 좋다. 5 : 아주 좋다.
상기 표 1의 실험결과는 본 발명의 음료조성물이 관능적 측면에서 선호할 수 있는 음료로서 유용하게 사용될 수 있음을 보여준다.
<실험예>
⑴ 구연산 및 L-아르기닌을 함유하는 조성물 처리에 따른 세포 생존율 측정.
본 발명의 주성분으로서 구연산 및 L-아르기닌을 함유하는 조성물이 암세포의 성장과 생존에 미치는 영향을 조사하기 위해 주성분의 함량을 달리하여 제조한 조성물을 암세포주에 처리하여 세포 생존율을 측정하였다. 세포주로는 SKOV-3(사람 난소 아데노암종, ATCC 번호: HTB-77), OVCAR-3(사람 난소 아데노암종, ATCC 번호: HTB-161) 및 U87(사람 뇌 교모세포종, ATCC 번호: HTB-14)을 사용하였다.
상기 세포를 3×103 세포/웰(well)이 되도록 96-웰 평판에 넣은 다음 12시간 배양하였다. 배양 배지로는 열불활성화 FBS(fetal bovine serum, 소 태반 혈청) 10% (v/v), 스트렙토마이신 100㎍/㎖, 페니실린 100U/㎖ 및 L-글루타민 100㎍/㎖을 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium, Life Technology, Inc., USA)를 사용하였다. 배양한 각각의 세포주에 구연산 및 L-아르기닌의 함량을 달리하여 제조한 조성물을 처리하고 분류한 후, 이를 37℃에서 이산화탄소 5% 및 산소 95%가 공급되는 상태에서 24시간 동안 배양한 다음 세포 생존율을 측정하였다.
세포 생존율은 공지된 MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-yl)2,5-디페닐-2H-테트라조리움 브로미딘)검정법으로 측정하였다(Hansen, M.B. et al., J. Immunol. Methods, 172, 203-210 (1989)). 20㎕ MTT 용액[PBS(phosphate buffered saline, 인산염 완충 염수)중 10㎎/㎖인 MTT]을 각각의 웰에 첨가하였고, 평판을 37℃에서 4시간 배양하였다. 배지를 제거한 후, DMSO(dimethyl sufoxide, 디메틸 설폭시드) 200㎕에 포마잔(formazan) 결정을 용해시켜 각각의 웰에 첨가하였다. 이를 10분 동안 실온에서 흔들어 혼합하고, Bio-Rad 모델 3550 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader, Richmond, CA.)를 사용하여 540㎚에서 측정하였다. 이때, DMEM-FBS와 MTT가 첨가되고 상기 조성물을 첨가하지 않은 웰을 대조군으로 사용하였다. 실험결과는 도 1 및 도 2에 나타내었다.
도 1 및 2로부터 알 수 있는 바와 같이, 구연산 및 L-아르기닌을 주성분으로 함유한 조성물을 처리한 세포주 SKOV-3 및 U87의 생존율은 구연산 및 L-아르기닌의 함량을 증가시켜 처리함에 따라 감소하였다. 특히, 구연산 및 L-아르기닌의 함량이 0.3중량% 이상인 경우에 생존율이 50% 이하로 감소하였고 구연산 및 L-아르기닌의 함량이 0.8중량% 이상인 경우에 생존율은 20% 이하로 감소하였다.
⑵ 아연 및 L-아르기닌을 함유하는 조성물 처리에 따른 세포 생존율의 측정
본 발명의 또 다른 주성분으로서 아연 및 L-아르기닌을 함유하는 조성물이 암세포의 성장과 생존에 미치는 영향을 조사하기 위해 주성분의 함량을 달리하여 제조한 조성물을 암세포주에 처리하여 세포 생존율을 측정하였다. 세포주로는 SKOV-3 및 U87을 사용하였다.
상기 세포를 3×103 세포/웰(well)이 되도록 96-웰 평판에 넣은 다음 12시간 배양하였다. 배양 배지로는 열불활성화 FBS(fetal bovine serum, 소 태반 혈청) 10% (v/v), 스트렙토마이신 100㎍/㎖, 페니실린 100U/㎖ 및 L-글루타민 100㎍/㎖을 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium, Life Technology, Inc., USA)를 사용하였다. 배양한 각각의 세포주에 아연 및 L-아르기닌의 함량을 달리하여 제조한 조성물을 처리하고 분류한 후, 이를 37℃에서 이산화탄소 5% 및 산소 95%가 공급되는 상태에서 24시간 동안 배양한 다음 세포 생존율을 측정하였다.
세포 생존율은 공지된 MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-yl)2,5-디페닐-2H-테트라조리움 브로미딘)검정법으로 측정하였다(Hansen, M.B. et al., J. Immunol. Methods, 172, 203-210 (1989)). 20㎕ MTT 용액[(PBS(phosphate buffered saline, 인산염 완충 염수)]중 10㎎/㎖인 MTT)을 각각의 웰에 첨가하였고, 평판을 37℃에서 4시간 배양하였다. 배지를 제거한 후, DMSO(dimethyl sufoxide, 디메틸 설폭시드) 200㎕에 포마잔(formazan) 결정을 용해시켜 각각의 웰에 첨가하였다. 이를 10분 동안 실온에서 흔들어 혼합하고, Bio-Rad 모델 3550 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader, Richmond, CA.)를 사용하여 540㎚에서 측정하였다. 이때, DMEM-FBS와 MTT가 첨가되고 상기 조성물을 첨가하지 않은 웰을 대조군으로 사용하였다. 실험결과는 도 3 및 도 4에 나타내었다.
도 3 및 도 4로부터 알 수 있는 바와 같이, 아연 및 L-아르기닌을 함유한 조성물을 처리한 세포주 SKOV-3 및 U87의 생존율은 활성 성분인 아연 및 L-아르기닌의 함량을 증가시켜 처리함에 따라 감소하였다. 도 3에서는 염화아연 및 L-아르기닌을 함유한 조성물 중 상기 성분의 함량이 약 0.008중량% 이상인 경우에 생존율이 50% 이하로 감소하였고, 상기 성분의 함량이 약 0.01중량% 이상인 경우에 생존율은 20% 이하로 감소하였다. 또한 황산아연 및 L-아르기닌을 함유한 조성물 중 상기 성분의 함량이 약 0.004중량% 이상인 경우에 생존율이 50% 이하로 감소하였고, 상기 성분의 함량이 약 0.01중량% 이상인 경우에 생존율은 20% 이하로 감소하였다. 도 4에서는 염화아연 및 L-아르기닌을 함유한 조성물 중 상기 성분의 함량이 약 0.005중량% 이상인 경우에 생존율이 50% 이하로 감소하였고, 상기 성분의 함량이 약 0.008중량% 이상인 경우에 생존율이 20% 이하로 감소하였다.
본 발명은 구연산 및/또는 아연과 L-아르기닌을 주성분으로 하고, 보조 성분으로서 강화제, 감미제, 산미제, 교미제, 보존제, 착향제 및 천연과즙 등을 함유함을 특징으로 하는 음료조성물 및 그의 제조방법으로서 체내에 쉽게 흡수되며, 간편하게 복용할 수 있도록 하여 인체에 유익한 효과를 주는데 유용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 주성분으로 구연산 및 L-아르기닌을 함유한 조성물이 사람 난소 아데노암종 SKOV-3에 미치는 영향을 MTT 검정을 통한 세포 생존율로 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 주성분으로 구연산 및 L-아르기닌을 함유한 조성물이 사람 뇌 교모세포종 U87에 미치는 영향을 MTT 검정을 통한 세포 생존율로 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 주성분으로 아연 및 L-아르기닌을 함유한 조성물이 사람 난소 아데노암종 SKOV-3에 미치는 영향을 MTT 검정을 통한 세포 생존율로 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 주성분으로 아연 및 L-아르기닌을 함유한 조성물이 사람 뇌 교모세포종 U87에 미치는 영향을 MTT 검정을 통한 세포 생존율로 나타낸 것이다.
Claims (11)
- 주성분으로서 1 내지 20중량%의 구연산, 0.001 내지 5중량%의 아연 및 0.003 내지 60중량%의 L-아르기닌을 포함하고, 보조 성분으로서 강화제; 감미제; 산미제; 교미제; 보존제; 착향제 및 천연과즙으로 이루어진 그룹 중에서 2종 이상을 100% 조성량으로 함유함을 특징으로 하는 음료조성물.
- 삭제
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 보조 성분인 강화제는 비타민류; 아미노산류 및 칼슘염류로 이루어진 그룹 중에서 2종 이상을 선택하여 함유함을 특징으로 하는 음료조성물.
- 제 1항에 있어서, 보조 성분인 감미제는 고과당; 백당; 포도당; 아스파람; 스테비오사이드; D-솔비톨 및 글리실리진산 염류로 이루어진 그룹 중에서 2종 이상을 선택하여 혼합하고, 이를 함유함을 특징으로 하는 음료조성물.
- 제 1항에 있어서, 보조 성분인 산미제는 DL-사과산; 호박산; D-주석산 및 아디핀산으로 이루어진 그룹 중에서 1종 이상을 선택하여 함유함을 특징으로 하는 음료조성물.
- 제 1항에 있어서, 보조 성분인 교미제는 염화나트륨; 호박산이나트륨 및 L-글루타민산나트륨으로 이루어진 그룹 중에서 단독 또는 2종 이상을 선택하여 혼합하고, 이를 함유함을 특징으로 하는 음료조성물.
- 제 1항에 있어서, 보조 성분인 보존제는 안식향산나트륨; 솔빈산; 솔빈산칼슘 및 데히트로초산나트륨으로 이루어진 그룹 중에서 단독 또는 2종 이상을 선택하여 혼합하고, 이를 함유함을 특징으로 하는 음료조성물.
- 제 1항에 있어서 보조 성분인 착향제는 사과향; 딸기향; 오렌지향; 혼합과일향; 요구르트 향 및 드링크향으로 이루어진 그룹 중에서 단독 또는 2종 이상을 선택하여 함유함을 특징으로 하는 음료조성물.
- 제 1항에 있어서, 보조 성분인 천연과즙은 사과; 배; 파인애플; 귤; 그래이후르츠; 복숭아; 살구 및 레몬으로 이루어진 그룹 중에서 단독 또는 2종 이상을 선택하여 함유함을 특징으로 하는 음료조성물.
- a) 열정제수를 교반하면서 1 내지 20중량%의 구연산, 0.001 내지 5중량%의 아연 및 0.003 내지 60중량%의 L-아르기닌을 혼화시킨 다음, 1 내지 30중량%의 감미제를 넣고 용해시킨 후, 0.05 내지 1중량%의 산미제를 첨가하여 시럽을 조제하는 단계;b) 정제수에 강화제 0.001 내지 0.3중량%를 첨가하여 용해시키는 단계;c) a)의 액에 b)의 액을 가하고 교반시키는 단계;d) 열정제수에 교미제 0.01 내지 3중량%를 용해시키는 단계;e) 열정제수에 교반하면서 보존제 0.001 내지 0.1중량%를 넣어 용해시키는 단계;f) c)의 액에 d), e)의 액을 혼화하여 완전히 용해시킨 다음, 착향제, 천연과즙을 가하여 서서히 교반하면서 충분히 균질화시킨 후, 정제수 적량을 첨가하여 음료조성물을 수득하는 단계로 이루어진 음료조성물을 제조하는 방법.
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