KR100459265B1 - Culture media containing grinded jellyfish - Google Patents
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Abstract
본 발명은 해파리 분쇄물을 유효성분으로 포함하는 배양용 배지 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 배지는 미생물의 성장 및 대사를 조절하여 미생물의 생존력 및 활성을 증가시키므로, 미생물 농약 원제 및 제제의 제조를 위한 미생물 배양 및 동·식물의 조직배양에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a culture medium comprising the jellyfish pulverized product as an active ingredient and a method for producing the same. Since the medium of the present invention regulates the growth and metabolism of the microorganism to increase the viability and activity of the microorganism, it can be usefully used for culturing microorganisms and tissue culture of animals and plants for the preparation of microbial pesticide raw materials and preparations.
Description
본 발명은 해파리 분쇄물을 유효성분으로 포함하는 배양용 배지 및 그의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a culture medium comprising the jellyfish pulverized product as an active ingredient and a method for producing the same.
일반적으로, 배지는 미생물 또는 동·식물의 조직을 배양하기 위하여 배양체가 필요로 하는 영양물질을 주성분으로 포함하며, 배양목적에 따라 다양한 무기화합물 또는 유기화합물을 첨가하여 제조된다.In general, the medium contains a nutrient required by the culture to culture microorganisms or tissues of animals and plants as a main component, and is prepared by adding various inorganic compounds or organic compounds depending on the purpose of culture.
해파리는 동물분류학상 자포동물문(刺胞動物門) 또는 강장동물문(腔腸動物門)에 속한다. 해파리는 크게 히드로충강(ClassHydrozoa)과 해파리강(ClassScyphozoa)으로 분류된다. 히드로충강에 속하는 해파리는 다시 저서생활을 하는 각종 히드로충의 생활사 중 부유성 유생시기인 히드로메두사(Hydromedusae)와 관해파리(Siphonophores)로 나눌 수 있다. 해파리는 대부분 우산모양을 하고 있으며 둘레에 많은 촉수를 가지고 있다. 해파리의 몸은 투명한 젤리처럼 생겼고, 몸의 대부분이 물로 되어있어 아주 약하다. 해파리에는 100 g당 단백질 3.3 g, 회분 1.7 g, 칼슘 23 ㎎, 인 10 ㎎, 철분 5 ㎎, 지방 0.8 g의 영양성분이 함유되어 있다. 따라서, 가공처리 후 식용으로 많이 이용되고 있으며, 안전성에도 문제가 없는 것으로 알려져 있다.Jellyfish belong to the animal taxonomy of cryptic tonic or tonic animal portals. Jellyfish are largely hydroclamp (ClassHydrozoa) And Jellyfish River (ClassScyphozoaAre classified as). Jellyfish, belonging to the Heathentulum, are hydromedus, a floating larvae of the life cycles of the various Heathoptera lifeHydromedusae) And about Paris (SiphonophoresCan be divided into Most jellyfish are umbrella-shaped and have many tentacles around them. The jellyfish's body looks like a clear jelly, and most of it's water is very fragile. It is per 100 g of jellyfish It contains nutrients of 3.3 g protein, 1.7 g ash, 23 mg calcium, 10 mg phosphorus, 5 mg iron and 0.8 g fat. Therefore, it is widely used for food after processing, and it is known that there is no problem in safety.
한편, 농작물의 병·해충 방제를 위한 방법에는 재배환경을 개선해 주는 물리적 방법, 살균제를 이용한 화학적 방법 및 미생물을 이용한 미생물학적 방법 등이 있다. 그러나, 물리적 방제만으로는 큰 효과를 기대할 수 없으며, 화학적 방제는 최근 다제약물내성(multi drug resistance) 균의 출현으로 방제효과가 크게 저하되었을 뿐만 아니라, 화학농약의 다량 살포에 의한 인축에 대한 잔류 독성 및 잔류 농약에 의한 심각한 환경오염을 유발하고 있다. 이에 대한 대체 방안으로서, 미생물학적 방제에 관한 연구가 최근 활발하게 진행되어 오고 있으며, 환경친화적 농업을 위한 미생물농약에 관한 연구에 주목하고 있다.Meanwhile, methods for controlling diseases and pests of crops include physical methods for improving the cultivation environment, chemical methods using fungicides, and microbiological methods using microorganisms. However, physical control alone cannot be expected to have a great effect, and chemical control has not only significantly reduced the control effect due to the emergence of multi-drug resistance bacteria, but also residual toxicity and It causes serious environmental pollution caused by residual pesticides. As an alternative, the research on microbiological control has been actively conducted in recent years, and attention has been paid to research on microbial pesticides for environmentally friendly agriculture.
현재 미생물농약의 살균제용 미생물로서, 세균류에는 바실러스 속(Bacillussp. BS555, KCTC 8821P), 바실러스 폴리목사(Bacillus polymoxaB36, FERM BP-6068), 슈도모나스 오레오파시엔스(Pseudomonas aureofaciensB5, FERM BP-6067), 엔테로박터 크로아세(Enterobacter cloacaeB51, FERM BP-6069) 및 항진균 물질을 분비하는 방선균인 스트렙토마이세스 속의 Bom1(제KFCC 10992호), Bom2(제KFCC 10993호) 등이 있다. 또한, 병원성 진균에 대한 길항능력을 갖는 미생물로서, 알칼리제네스 파에칼리스(Alcaligenes faecalisKL1179, KCTC 8914P), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosaKL1121, KCTC 8915P), 슈도모나스 오란티에카(Pseudomonas aurantiacaKL1326, KCTC 8916P) 및 슈도모나스 플루오레슨스(Psedomonas fluorescens) 등이 있다. 또한, 방선균 스트렙토마이세스 속에 대한 길항능력을 갖는 균으로는 슈도모나스 플루오레슨스 바이오바 1(Psedomonas fluorescens biovar1)가 있고, 곰팡이류는 트리코델마 하지아늄(Trichoderma harzianum), 페니실리움 속(Penicillium sp.), 아스퍼질러스 속(Aspergillus sp.), 중복기생 곰팡이균인 아크레모니움 스트릭튬 BCP(Acremonium strictum, KCTC 0639BP) 등이 있다.As microorganisms for the disinfectant of the present microbial pesticides, bacteria include Bacillus (Bacillus sp. BS555, KCTC 8821P ), Bacillus poly Rev. (Bacillus polymoxa B36, FERM BP- 6068), Pseudomonas Oreo Pacific Enschede (Pseudomonas aureofaciens B5, FERM BP-6067 ), Enterobacter cloacae B51 (FERM BP-6069), Bom1 (St. KFCC 10992) and Bom2 (KFCC 10993) in Streptomyces, an actinomycetes that secrete antifungal substances. Also, as microorganisms having antagonistic ability of the pathogenic fungus, alkali jeneseu par faecalis (Alcaligenes faecalis KL1179, KCTC 8914P), Pseudomonas ah rugi labor (Pseudomonas aeruginosa KL1121, KCTC 8915P), Pseudomonas Oran thienyl car (Pseudomonas aurantiaca KL1326, KCTC 8916P) and Psedomonas fluorescens . In addition, bacteria having an antagonistic ability against Actinomycetes Streptomyces genus include Psedomonas fluorescens biovar 1, and fungi include Trichoderma harzianum and Penicillium sp. ), Aspergillus sp ., And Acremonium Strictium BCP ( Acremonium strictum, KCTC 0639BP).
상기와 같이 최근에 병원균에 대한 길항능력을 갖는 신규한 미생물을 선별하고, 이와 같은 미생물을 이용하여 미생물 제제를 제조하려는 많은 시도들이 이루어지고 있다. 미생물 제제를 제조하기 위해서는 길항능력을 갖는 미생물을 대량생산하여야 하는데, 이와 같이 미생물을 배양하는 과정에 일부 미생물들은 서로 체인(그룹)을 형성하면서 길어지는 특성이 있어 균의 생존력 및 활성이 급격히 떨어지게 된다. 또한, 자체 생산한 가스와 대사 생성물에 의한 성장저해가 발생하기도 하여 미생물 제제를 제조하는데 큰 어려움이 수반되게 된다. 따라서, 최근에 미생물제제를 용이하게 제조하기 위하여, 미생물의 배양시에 체인 형성과 발효 대사물(가스 등)을 억제하거나 쉽게 회수하려는 많은 시도들이 이루어지고 있으나 아직까지 효과적인 방법이 개발되지 않고 있는 실정이다.As described above, a number of attempts have recently been made to select novel microorganisms having antagonistic ability against pathogens and to prepare microbial preparations using such microorganisms. In order to prepare a microbial preparation, it is necessary to mass-produce microorganisms with antagonistic ability. As a result, some microorganisms grow in chains (groups) in the process of culturing the microorganisms, so the viability and activity of the microorganisms are drastically decreased. . In addition, growth inhibition by gas and metabolic products produced in-house may occur, resulting in great difficulty in preparing microbial preparations. Therefore, in recent years, in order to easily manufacture microbial preparations, many attempts have been made to suppress or easily recover chain formation and fermentation metabolites (gas, etc.) when culturing microorganisms, but an effective method has not been developed yet. to be.
이에, 본 발명자들은 배양을 목적으로 하는 일반적인 배지에 해파리 분쇄물을 첨가하여 배양배지를 제조하고, 상기 배지에서 성장한 미생물은 생존력이 증가할 뿐만 아니라 대사 생성물이 증가되었으며, 제제화 후 안정성이 높아 졌음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors prepared a culture medium by adding jellyfish pulverized to a general medium for cultivation, and the microorganisms grown in the medium not only increased viability but also increased metabolic products, and increased stability after formulation. The present invention was completed by confirming.
본 발명의 목적은 해양생물인 해파리 분쇄물을 첨가한 배양배지를 제조하여 영양공급원 및 미량성분의 첨가를 감소시키기 위한 것이며, 또한 일반적인 배지 성분에 해파리 분쇄물을 추가로 첨가한 배지를 이용하여 미생물 배양 및 안정된 물질생산을 제공하는 것이다.An object of the present invention is to reduce the addition of nutritional sources and trace components by preparing a culture medium containing jellyfish pulverized marine organisms, and also by using a medium in which jellyfish crushed is added to a general medium component. To provide culture and stable material production.
도 1은 해파리 분쇄물의 첨가율을 달리한 배지에서의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KBC1010의 생장을 24시간 동안 측정한 그래프이다. FIG. 1 is a graph measuring the growth of Bacillus subtilis KBC1010 in a medium having different addition rates of jellyfish pulverization for 24 hours.
도 2a는 해파리 분쇄물의 첨가율을 달리한 배지에서 스트렙토마이세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis)를 5일간 배양한 후, 배양된 균주의 건조균체량(g/ℓ)을 측정한 그래프이다. Figure 2a is a graph measuring the dry cell mass (g / ℓ) of the cultured strain after culturing Streptomyces natalensis for 5 days in a medium with a different rate of jellyfish pulverization.
도 2b는 해파리 분쇄물의 첨가율을 달리한 배지에서 슈도지마 플로큘로사(Pseudozyma flocculosa)를 5일간 배양한 후, 배양된 균주의 건조균체량(g/ℓ)을 측정한 그래프이다. Figure 2b is a graph measuring the dry cell mass (g / ℓ) of the culture strain after culturing Pseudozyma flocculosa in a medium of varying the rate of jellyfish pulverization ( Pseudozyma flocculosa ) for 5 days.
도 2c는 해파리 분쇄물의 첨가율을 달리한 배지에서 암펠로마이세스 퀴스콸리스(Ampelomyces quisqualis)를 5일간 배양한 후, 배양된 균주의 건조균체량(g/ℓ)을 측정한 그래프이다. Figure 2c is a graph measuring the dry cell mass (g / ℓ) of the cultured strains after incubating Ampelomyces quisqualis for 5 days in a medium with a different rate of jellyfish pulverization.
도 3은 영양 배지(A) 및 10 중량%의 해파리 분쇄물의 첨가된 배지(B)에서 배양된 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KBC1010의 체인형성 억제를 나타내는 현미경 사진이다. FIG. 3 is a micrograph showing the chain formation inhibition of Bacillus subtilis KBC1010 cultured in nutrient medium ( A ) and added medium ( B ) of 10% by weight jellyfish pulverization.
도 4는 영양 배지(A) 및 10 중량%의 해파리 분쇄물이 첨가된 배지(B)에서 성장한 스트렙토마이세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis)의 나타마이신(Natamycin) 생산량(g/ℓ)을 측정한 그래프이다. FIG. 4 shows Natamycin production (g / l) of Streptomyces natalensis grown in nutrient medium ( A ) and medium ( B ) to which 10% by weight of jellyfish pulverization was added. It is a graph.
도 5는 영양 배지(A) 및 10 중량%의 해파리 분쇄물이 첨가된 배지(B)에서 성장한 슈도지마 플로큘로사(Pseudozyma flocculosa)의 총지질 함량(건조중량%)을 측정한 그래프이다. 5 is a graph measuring total lipid content (dry weight%) of Pseudozyma flocculosa grown in nutrient medium ( A ) and medium ( B ) to which 10% by weight of jellyfish pulverization was added.
도 6은 10 중량%의 해파리 분쇄물이 첨가된 배지(A) 및 영양 배지(B) 및 에서 성장한 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KBC1121의 풋마름병 병원균인 랄스토니아 솔라나세아룸(Ralstonia solanacearum)에 대한 방제효과를 살펴본 페트리접시(petri dish)의 사진이다. FIG. 6 shows Ralstonia solanacearum , a foot blight pathogen of Bacillus subtilis KBC1121 grown in medium ( A ) and nutrient medium ( B ) and 10% by weight of jellyfish pulverized. This is a picture of a petri dish looking at the control effect on).
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 해파리 분쇄물을 유효성분으로 포함하는 배양용 배지를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a culture medium comprising the jellyfish pulverized product as an active ingredient.
또한, 본 발명은 (1) 해파리를 세척하는 단계; (2) 상기 단계 1의 세척된 해파리를 분쇄·탈수하여 해파리 분쇄물을 수득하는 단계; 및 (3) 상기 단계 2에서 수득한 해파리 분쇄물을 배지에 첨가하는 단계를 포함하는 배지의 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention (1) washing the jellyfish; (2) pulverizing and dehydrating the washed jellyfish of step 1 to obtain a jellyfish pulverized product; And (3) adding the jellyfish pulverized product obtained in step 2 to the medium.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 해파리 분쇄물을 유효성분으로 포함하는 배양용 배지를 제공하는 것이다.The present invention is to provide a culture medium comprising the jellyfish pulverized product as an active ingredient.
본 발명의 해파리는 특별히 제한되는 것은 아니나, 관해파리 목, 십자해파리 목, 입방해파리 목, 근구해파리 목 및 기구해파리 목으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 바람직하며, 기구해파리 목인 것이 더욱 바람직하다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 우리나라 연근해에 분포하는 기구해파리목인 물해파리를 사용하였다. 해파리의 주성분은 수분과 단백질(주로 젤라틴)이며 점액질(뮤신)을 가지고 있으며, 수분함량을 70%로 하였을 때 해파리의 영양분석표는 표 1과 같다.The jellyfish of the present invention is not particularly limited, but is preferably selected from the group consisting of remission fly neck, cruciform jellyfish neck, cubic jellyfish neck, near-mouth jellyfish neck, and balloon jellyfish neck, and more preferably, balloon jellyfish neck. In a preferred embodiment of the present invention, a water jellyfish, which is an instrumental jellyfish tree distributed in Korea near the sea, was used. Jellyfish's main components are water and protein (mainly gelatin) and mucus (mucin). When the water content is 70%, the nutritional analysis table of jellyfish is shown in Table 1.
본 발명의 해파리 분쇄물의 함수율은 배양배지의 질소원과 탄소원으로서의 역할과 더불어 배지에의 첨가시 물리적인 성질(분쇄 및 혼합)등에의 영향을 고려하여 50 내지 70%인 것이 바람직하나, 반드시 이에 한정하지 아니한다.The water content of the jellyfish pulverized product of the present invention is preferably 50 to 70% in consideration of the role of the nitrogen source and the carbon source of the culture medium and the effect on the physical properties (crushing and mixing) when added to the medium, but not necessarily limited thereto. No.
본 발명의 미생물 배양용 배지는 일반적인 미생물 성장을 위한 성분에 있어서 보조 미량성분을 대신해 해파리 분쇄물을 사용한 것으로, 사용되는 해파리분쇄물의 양은 특별히 제한되지는 않으나, 1 내지 90 중량%를 첨가하는 것이 바람직하고, 2 내지 20 중량%를 첨가하는 것이 더욱 바람직하며, 5 내지 15 중량%를 첨가하는 것이 가장 바람직하다(도 1및도 2참조).The microorganism culture medium of the present invention is a jellyfish pulverization in place of the auxiliary trace component in the component for general microbial growth, the amount of jellyfish pulverization used is not particularly limited, it is preferred to add 1 to 90% by weight More preferably, 2 to 20% by weight, most preferably 5 to 15% by weight (see FIGS . 1 and 2 ).
본 발명의 배지는 미생물 배양을 목적으로 하는 배지를 제공한다. 이때, 본 발명의 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 성장할 수 있는 미생물은 특별히 제한되지는 않으나, 바실러스(Bacillus)속, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 알칼리제네스(Alcaligenes)속, 엔테로박터(Enterobacter)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속, 암펠로마이세스(Ampelomyces)속, 슈도지마(Pseudozyma)속, 트리코델마(Trichoderma)속, 아스퍼질러스(Aspergillus)속, 페니실리움(Penicillium)속 및 아크레모니움(Acremonium)속으로 구성된 군으로부터선택되는 것이 바람직하며, 바실러스(Bacillus)속, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 스트렙토마이세스(Streptomyces)속, 암펠로마이세스(Ampelomyces)속 및 슈도지마(Pseudozyma)속으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 더욱 바람직하다. 이때, 상기 미생물은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 스트렙토마이세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis), 암펠로마이세스 퀴스콸리스(Ampelomyces quisqualis) 및 슈도지마 플로큘로사(Pseudozyma flocculosa)로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 바람직하며, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)인 것이 가장 바람직하다.The medium of the present invention provides a medium for the purpose of culturing microorganisms. In this case, the microorganism that can grow in containing the jellyfish pulverized product of the present invention the medium is not particularly limited, Bacillus (Bacillus) genus Lactobacillus bacteria (Lactobacillus) genus Pseudomonas (Pseudomonas) in the alkali jeneseu (Alcaligenes), A Genus Enterobacter , Genus Streptomyces , Genus Ampelomyces , Genus Pseudozyma , Genus Trichoderma , Genus Aspergillus, Genus Penicillium Penicillium) in and Acre monitor Titanium (Acremonium) are preferably selected from the group consisting of genus Bacillus (Bacillus) genus Lactobacillus bacteria (Lactobacillus) genus Streptomyces (Streptomyces), An arm Tupelo My process (Ampelomyces) in And Pseudozyma genus. At this time, the microorganism is from the group consisting of Bacillus subtilis , Streptomyces natalensis , Ampelomyces quisqualis and Pseudozyma flocculosa It is preferred to be selected, most preferably Bacillus subtilis .
또한, 본 발명의 배지는 식물 또는 동물의 조직배양을 목적으로 하는 배지를 제공하는 바, 배양목적에 따라 다양한 무기화합물 또는 유기화합물을 첨가하여 제조될 수 있다.In addition, the medium of the present invention provides a medium for the purpose of tissue culture of plants or animals, and may be prepared by adding various inorganic compounds or organic compounds according to the purpose of culture.
본 발명의 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 배양한 미생물은 일반적인 배지에서 배양한 미생물에 비하여 항균 활성이 증가할 뿐만 아니라 부형제에 대한 안정성도 증가한다(표 3및표 5참조). 따라서, 본 발명의 해파리가 포함된 배지에서는 항균활성이 우수한 미생물을 대량생산할 수 있으므로, 배양된 미생물을 이용하여 미생물 농약 및 미생물 제제의 제조시 유용하게 응용할 수 있다.The microorganisms cultured in the medium containing the jellyfish pulverized product of the present invention not only increase antimicrobial activity but also stability to excipients compared to microorganisms cultured in a general medium (see Table 3 and Table 5 ). Therefore, in the medium containing the jellyfish of the present invention can produce a large amount of microorganisms with excellent antimicrobial activity, it can be usefully applied in the production of microbial pesticides and microbial preparations using the cultured microorganisms.
구체적으로, 미생물 제제를 제조하기 위해서는 미생물 제제의 필수 성분인 높은 항균 활성을 갖는 미생물을 대량생산하여야 하는데, 일반적으로 사용되는 배지에서 미생물을 배양하는 경우에는 미생물의 발효과정에서 생성되는 발효취와 체인형성 및 대사 생성물로 인하여 미생물의 항균 활성이 감소하게 된다. 그러나,본 발명의 해파리가 포함된 배지에서 미생물을 배양하면 체인 형성이 억제될 뿐만 아니라 미생물의 항균 활성을 지속적으로 유지시킬 수 있기 때문에 높은 활성을 갖는 미생물 제제의 제조에 사용할 수 있다(도 3내지도 6참조).Specifically, in order to prepare a microbial preparation, it is necessary to mass-produce a microorganism having high antimicrobial activity, which is an essential component of the microbial preparation.In the case of culturing microorganisms in a commonly used medium, fermentation odors and chains generated during fermentation of microorganisms Formation and metabolic products reduce the antimicrobial activity of the microorganisms. However, when the microorganism is cultured in the medium containing the jellyfish of the present invention, not only the chain formation is suppressed, but also the antimicrobial activity of the microorganism can be continuously maintained, so that the microorganism preparation having high activity can be used ( Fig. 6 ).
또한, 본 발명은 (1) 해파리를 세척하는 단계; (2) 상기 단계 1의 세척된 해파리를 분쇄·탈수하여 해파리 분쇄물을 수득하는 단계; 및 (3) 상기 단계 2에서 수득한 해파리 분쇄물을 배양용 배지에 첨가하는 단계를 포함하는 배지의 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention (1) washing the jellyfish; (2) pulverizing and dehydrating the washed jellyfish of step 1 to obtain a jellyfish pulverized product; And (3) adding the jellyfish pulverized product obtained in step 2 to the culture medium.
본 발명의단계 1은 해파리를 세척하는 단계이다. 본 발명의 해파리 종은 특별히 제한되는 것은 아니나, 관해파리 목, 십자해파리 목, 입방해파리 목, 근구해파리 목 및 기구해파리 목으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 바람직하며, 기구해파리 목인 것이 더욱 바람직하다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 우리나라 연근해에 분포하는 기구해파리 목인 물해파리를 사용하였다. 그 후, 상기 해파리를 소금과 명반을 이용하여 체액 중 이물과 바닷물을 제거한 후, 깨끗한 담수로 세척하여 염분을 완전히 제거하였다. Step 1 of the present invention is to wash the jellyfish. The jellyfish species of the present invention is not particularly limited, but is preferably selected from the group consisting of remission fly neck, cruciform jellyfish neck, cubic jellyfish neck, near-mouth jellyfish neck, and balloon jellyfish neck, and more preferably, balloon jellyfish neck. In a preferred embodiment of the present invention, the water jellyfish, which is an instrumental jellyfish neck distributed in the near sea of Korea, was used. Thereafter, the jellyfish was removed using salt and alum to remove foreign substances and seawater from the body fluid, and then washed with clean fresh water to completely remove salts.
본 발명의단계 2는 상기 단계 1의 세척된 해파리를 분쇄·탈수하여 해파리 분쇄물을 수득하는 단계이다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 자연적 방법 또는 탈수기 등을 이용하여 함수율이 조정된 해파리 분쇄물을 수득하였는 바, 해파리 분쇄물의 함수율은 5 내지 98%인 것이 바람직하며, 50 내지 70%인 것이 더욱 바람직하다. Step 2 of the present invention is a step of obtaining a jellyfish pulverized by grinding and dehydrating the washed jellyfish of step 1. In a preferred embodiment of the present invention, the jellyfish pulverized product was adjusted by using a natural method or a dehydrator, the moisture content of the jellyfish pulverized is preferably 5 to 98%, more preferably 50 to 70%. .
본 발명의단계 3은 상기 단계 2에서 수득한 해파리 분쇄물을 배양용 배지에 첨가하는 단계이다. 이때, 해파리 분쇄물은 0.1 내지 99.9 중량%로 첨가될 수 있으며, 2 내지 20 중량%로 첨가되는 것이 바람직하며, 5 내지 15 중량%로 첨가되는 것이 더욱 바람직하다. 본 발명의 해파리 분쇄물이 첨가되는 배양용 배지의 종류에는 제한이 없다. Step 3 of the present invention is a step of adding the jellyfish pulverized product obtained in step 2 to the culture medium. At this time, the jellyfish pulverized may be added at 0.1 to 99.9% by weight, preferably added to 2 to 20% by weight, more preferably added to 5 to 15% by weight. There is no restriction | limiting in the kind of culture medium to which the jellyfish grind | pulverized product of this invention is added.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.
<실시예 1> 해파리 분쇄물이 포함된 배지의 제조Example 1 Preparation of Medium Containing Jellyfish Crushed
본 발명자들은 해파리를 배지로 이용하고자 전처리를 한 후, 전처리된 해파리를 이용하여 본 발명의 배양용 배지를 제조하였다.The present inventors pretreated to use jellyfish as a medium, and then prepared the culture medium of the present invention using the pretreated jellyfish.
구체적으로, 해양에 서식하는 해파리를 포획한 후, 소금과 명반을 처리하여 체내외에 부착된 이물과 바닷물을 분리하고 담수로 1시간 동안 세척하여 염분을 완전히 제거하였다. 이후, 세척한 해파리를 분쇄·균질화하고(Avestin사 A-001 Homogenizer), 수분함량을 함수율이 각각 5 ~ 15%, 15 ~ 30%, 30 ~ 50%, 50 ~ 70% 및 70 ~ 98%가 되도록 원심 탈수하여 전처리한 후 냉동보관하였다. 상기 함수율 조정은 배지제조시 해파리 분쇄물의 첨가량에 영향을 주는 바, 함수율이 높으면 상대적으로 고형분이 낮아 비례적으로 해파리 분쇄물의 첨가량을 높여주어야 한다.따라서, 배지제조의 경제성 및 편리성 등을 고려하여 50 내지 70% 범위의 함수율이 조정된 해파리 분쇄물이 바람직하다.Specifically, after trapping the jellyfish inhabiting the ocean, the salt and alum were treated to separate foreign bodies and seawater attached to the outside of the body and washed with fresh water for 1 hour to completely remove the salt. After that, the washed jellyfish were ground and homogenized (Avestin A-001 Homogenizer), and the water content was 5-15%, 15-30%, 30-50%, 50-70% and 70-98%, respectively. Pretreated by centrifugal dehydration as possible, and then stored frozen. The adjustment of the water content affects the amount of jellyfish pulverized product during the production of the medium, and if the moisture content is high, the solid content is relatively low, so that the amount of jellyfish pulverized should be proportionally increased. Preference is given to jellyfish mills having a water content adjusted in the range of 50 to 70%.
그 후, 함수율 67%가 되도록 전처리한 해파리 분쇄물을 영양 배지(쇠고기 추출물 3 g 및 펩톤 4 g을 증류수에 첨가하여 최종부피를 1 ℓ로 조정한 배지)에 조성비율이 각각 1, 5, 10, 15, 20, 30, 50, 75, 90 및 100 중량%가 되도록 첨가하여 배양용 배지를 제조하였다.Thereafter, the jellyfish pulverized pretreatment to a water content of 67% was added to the nutrient medium (medium medium containing 3 g of beef extract and 4 g of peptone) in distilled water to adjust the final volume to 1 L, respectively. , 15, 20, 30, 50, 75, 90 and 100% by weight was added to prepare a culture medium.
<실시예 2> 해파리 분쇄물의 포함량에 따른 미생물의 성장 분석Example 2 Growth Analysis of Microorganisms According to the Amount of Jellyfish Crushed
본 발명자들은 상기 실시예 1에서 제조한 배지를 이용하여 미생물을 배양하였는 바, 해파리 분쇄물의 포함량에 따른 미생물 성장을 분석하였다.The present inventors cultured microorganisms using the medium prepared in Example 1, and analyzed the growth of microorganisms according to the amount of jellyfish pulverized products.
구체적으로, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KBC1010(KCTC 10304), 스트렙토마이세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis)(KCCM 40720), 슈도지마 플로큘로사(Pseudozyma flocculosa)(JCM 10321), 암펠로마이세스퀴스콸리스(Ampelomyces quisqualis)(KCTC 8940P)를 각각 해파리 분쇄물이 첨가된 영양 배지에 접종하였다. 배양 온도를 30℃로 하여 배양한 후, 흡광도(550 ㎚) 및 건조균체량을 측정하여 세포증식 정도를 분석하였다. 이때, 건조균체량은 통상의 방법에 따라 배양액의 채취, 여과 또는 원심분리, 균체 분리, 세척 및 105℃에서 충분히 건조 등을 통해 건조 중량을 측정하였다.Specifically, Bacillus subtilis KBC1010 (KCTC 10304), Streptomyces natalensis (KCCM 40720), Pseudozyma flocculosa ( Pseudozyma flocculosa ) (JCM 10321 ), Amfelomyces Ampelomyces quisqualis (KCTC 8940P) was inoculated into nutrient medium to which jellyfish crushes were added, respectively. After culturing at 30 ° C., the absorbance (550 nm) and dry cell mass were measured to analyze the degree of cell proliferation. At this time, the dry cell weight was measured by the dry weight by collecting the culture, filtration or centrifugation, cell separation, washing and drying sufficiently at 105 ℃ according to a conventional method.
그 결과, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KBC1010, 스트렙토마이세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis), 슈도지마 플로큘로사(Pseudozyma flocculosa)의 경우, 10 중량%의 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 가장 효과적인 성장곡선을 보여 주었으며, 높은 농도를 첨가할수록 해파리에 포함된 단백질 등의 비율이 높아져 부(-)효과를 나타냈다. 암펠로마이세스 퀴스콸리스(Ampelomyces quisqualis)의 경우, 15 중량% 및 20 중량%의 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 효과적인 성장곡선을 나타났다(도 1및도 2).As a result, Bacillus subtilis KBC1010, Streptomyces natalensis , and Pseudozyma flocculosa were most effective in medium containing 10% by weight jellyfish pulverization. The growth curve was shown, and the higher the concentration was added, the higher the percentage of protein contained in the jellyfish. Ampelomyces quisqualis showed an effective growth curve in medium containing 15% and 20% by weight jellyfish pulverization ( FIGS. 1 and 2 ).
<실시예 3> 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 바실러스 서브틸리스(<Example 3> Bacillus subtilis in a medium containing jellyfish pulverization ( Bacillus subtilisBacillus subtilis ) KBC1010의 체인 형성 분석) Chain Formation Analysis of KBC1010
본 발명자들은 체인 형성을 억제하기 위한 배지를 제조하기 위하여, 실시예 1에서 제조된 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KBC1010을 배양하여 체인 형성여부를 분석하였다. 구체적으로, 해파리 분쇄물이 첨가되지 않은 영양 배지를 대조군으로 하고, 실험군으로서 영양 배지에 함수율 67%로 조정한 해파리 분쇄물 10 중량%가 포함된 배지를 제조하였다. 그후, 각각의 배지에서 바실러스 서브틸리스 KBC1010을 배양하여 체인 형성여부를 현미경으로 관찰하였다.In order to prepare a medium for inhibiting chain formation, the present inventors cultured Bacillus subtilis KBC1010 in a medium containing the jellyfish pulverized product prepared in Example 1 and analyzed whether the chain was formed. Specifically, as a control group, a medium containing 10% by weight of jellyfish ground product adjusted to a moisture content of 67% was prepared as a control group. Thereafter, Bacillus subtilis KBC1010 was cultured in each medium, and the formation of the chain was observed under a microscope.
그 결과, 대조군에서는 배양 4시간 경과후부터 체인을 형성하기 시작하여 24시간 이후에는 대부분의 균주가 체인을 형성하였지만, 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 배양한 균주는 70% 이상 체인을 형성하지 않았다(도 3).As a result, the control group began to form chains after 4 hours of cultivation, and after 24 hours, most strains formed chains, but strains cultured in a medium containing jellyfish pulverized did not form more than 70% of chains ( 3 ).
<실시예 4> 스트렙토마이세스 나탈렌시스의 나타마이신 생산량 분석Example 4 Analysis of Natamycin Production of Streptomyces Natalensis
본 발명자들은 상기 실시예 1에서 제조한 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 배양한 스트렙토마이세스 나탈렌리스(Streptomyces natalensis)가 생산한 나타마이신 함량을 알아보았다. 구체적으로, 해파리 분쇄물이 첨가되지 않은 영양 배지를 대조군으로 하고, 실험군으로서 영양배지에 함수율 67%로 조정한 해파리 분쇄물 10 중량%가 포함된 배지를 제조하였다. 이후, 각각의 배지에 스트렙토마이세스 나탈렌시스(Streptomyces natalensis)를 접종하고 30℃에서 4일간 배양하여 나타마이신 함량을 한천확산법(Egorov, N.S., et al., 1985. In Antibiotic, a Scientific Approach, English Edition. MIR Publisher, Moscow)으로 정량 분석하였다.The present inventors examined the content of natamycin produced by Streptomyces natalensis cultured in a medium containing the jellyfish pulverized powder prepared in Example 1. Specifically, a medium containing 10% by weight of jellyfish ground product adjusted to a moisture content of 67% in a nutrient medium was prepared as a control medium, and a nutrient medium without adding jellyfish ground product. Thereafter, each medium was inoculated with Streptomyces natalensis and incubated at 30 ° C. for 4 days to increase the natamycin content in the agar diffusion method (Egorov, NS, et al., 1985. In Antibiotic, a Scientific Approach, English Edition.MIR Publisher, Moscow).
그 결과, 대조군에서는 나타마이신의 함량이 0.23 g/ℓ이었으나, 해파리 분쇄물을 포함하는 배지에서 배양된 균주에서의 나타마이신의 함량은 0.34 g/ℓ로 높게 나타났다(도 4).As a result, the content of natamycin in the control group was 0.23 g / L, but the content of natamycin in the strain cultured in the medium containing jellyfish pulverized was 0.34 g / L ( Fig. 4 ).
<실시예 5> 슈도지마 플로큘로사의 총지질 생산량 분석Example 5 Analysis of Total Lipid Production of Pseudojima Floculosa
본 발명자들은 상기 실시예 1에서 제조한 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 배양한 슈도지마 플로큘로사(Pseudozyma flocculosa)가 생산한 총지질의 함량(%)을 알아보았다. 구체적으로, 해파리 분쇄물이 첨가되지 않은 영양 배지를 대조군으로 하고, 실험군으로서 영양 배지에 함수율 67%로 조정한 해파리 분쇄물 10 중량%가 포함된 배지를 제조하였다. 이후, 각각의 배지에 슈도지마 플로큘로사(Pseudozyma flocculosa)를 접종하고 30℃에서 4일간 배양하여 생물량(biomass) 중 총지질 함량(%)을 클로로포름-메탄올법(Folch, et al.,J. Biol. Chem., 226, 497-509, 1957)을 통해 분석하였다.The inventors examined the total lipid content (%) produced by Pseudozyma flocculosa cultured in a medium containing the jellyfish pulverized product prepared in Example 1. Specifically, as a control group, a medium containing 10% by weight of jellyfish ground product adjusted to a moisture content of 67% was prepared as a control group. Then, inoculated with Pseudozyma flocculosa in each medium and incubated at 30 ° C. for 4 days to determine the total lipid content (%) in the biomass by the chloroform-methanol method (Folch, et al., J. Biol. Chem. , 226, 497-509, 1957).
그 결과, 대조군에서는 총지질 함량이 24.3 g/ℓ이었으나, 해파리 분쇄물을 포함하는 배지에서 배양된 균주의 총지질 함량은 27.9 g/ℓ로서 높게 나타났다(도 5)As a result, in the control group, the total lipid content was 24.3 g / L, but the total lipid content of the strain cultured in the medium containing jellyfish pulverization was high as 27.9 g / L ( FIG. 5 ).
<실시예 6> 암펠로마이세스 퀴스콸리스(<Example 6> Ampelomyces quiscusis ( Ampelomyces quisqualisAmpelomyces quisqualis )의 오이 흰가루병 방제효과 분석Control Effect of Cucumber Powdery mildew
본 발명자들은 상기 실시예 1에서 제조한 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 배양한 암펠로마이세스 퀴스콸리스(Ampelomyces quisqualis)의 오이 흰가루병에 대한 방제효과를 살펴보았다. 구체적으로, 해파리 분쇄물이 첨가되지 않은 영양 배지 및 영양 배지에 함수율 67%로 조정한 해파리 분쇄물 10 중량%이 포함된 배지를 제조하였다. 이후, 각각의 배지에 암펠로마이세스 퀴스콸리스(Ampelomyces quisqualis)를 접종하고 30℃에서 4일간 배양하여 스포어(spore)를 회수하였다.한편, 봉선화로부터 분리한 흰가루병 곰팡이(스파에로데카;Sphaerotheca)를 오이 잎에 감염시켰다. 이후, 상기 회수한 스포어 상등액(106스포어/㎖)을 감염된 오이 잎에 처리하여 8일 경과후 흰가루병 병반면적율을 조사하였다.The present inventors examined the effect of controlling the cucumber powdery mildew of Ampelomyces quisqualis cultured in the medium containing the jellyfish pulverized product prepared in Example 1 above. Specifically, a medium containing 10% by weight of jellyfish pulverized powder adjusted to a moisture content of 67% in a nutrient medium and a nutrient medium not added jellyfish pulverized was prepared. Subsequently, each medium was inoculated with Ampelomyces quisqualis and incubated at 30 ° C. for 4 days to recover spores. Meanwhile, powdery mildew fungus ( Sphaerotheca) isolated from Balsam. ) Was infected with cucumber leaves. Thereafter, the recovered spore supernatant (10 6 spores / ml) was treated with infected cucumber leaves to investigate the powdered powder area ratio after 8 days.
그 결과, 오이 흰가루병 방제효과는 대조군(물처리) 및 해파리 분쇄물을 포함하지 않은 영양 배지에서 배양한 경우보다 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 배양한 암펠로마이세스 퀴스콸리스(Ampelomyces quisqualis)의 방제효과가 우수하였다(표 3).As a result, the control effect of cucumber powdery mildew was higher than that of Ampelomyces quisqualis cultured in a medium containing jellyfish pulverization than in the control (water treatment) and nutrient medium containing no jellyfish pulverization. The control effect was excellent ( Table 3 ).
<실시예 7> 바실러스 서브틸리스(<Example 7> Bacillus subtilis ( Bacillus subtilisBacillus subtilis ) KBC1121의 풋마름병에 대한 방제효과의 세포외 조건(Extracellular Conditions of Control Effects of KBC1121 on Foot Blight in vitroin vitro )에서의 시험Test in)
본 발명자들은 상기 실시예 1에서 제조한 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 배양한 바실러스 서브틸리스 KBC1121(KCTC 10411BP)의 풋마름병 병원균인 랄스토니아 솔라나세아룸(Ralstonia solanacearum)에 대한 방제효과를 살펴보았다. 구체적으로, 해파리 분쇄물이 첨가되지 않은 영양 배지를 대조군으로 하고, 실험군으로서 영양 배지에 함수율 67%로 조정한 해파리 분쇄물 10 중량%가 포함된 배지를 제조하였다. 그 후, 상기 각각의 배지에 바실러스 서브틸리스 KBC1121을 50℃에서 2일간 배양하였다. 상기 배양액 50㎕ 를 랄스토니아 솔라나세아룸이 접종되어 배양된 페트리접시(Petri dish)에 접종하여 저지환의 크기를 비교하였다.The present inventors have a control effect against Ralstonia solanacearum , a foot blight pathogen of Bacillus subtilis KBC1121 (KCTC 10411BP), cultured in a medium containing the jellyfish pulverized in Example 1 I looked at it. Specifically, as a control group, a medium containing 10% by weight of jellyfish ground product adjusted to a moisture content of 67% was prepared as a control group. Thereafter, Bacillus subtilis KBC1121 was incubated at 50 ° C. for 2 days in each medium. 50 μl of the culture solution was inoculated in Petri dish inoculated with Ralstonia Solanasearum to compare the size of the low-ring ring.
그 결과, 대조군에서는 저지환의 크기가 9 ㎜이었으며, 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서는 21 ㎜이었다. 즉, 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 배양한 바실러스 서브틸리스 KBC1121의 풋마름병 방제효과가 뛰어남을 확인하였다(도 6).As a result, the size of the ring was 9 mm in the control group, 21 mm in the medium containing jellyfish pulverization. That is, it was confirmed that Bacillus subtilis KBC1121 cultured in a medium containing jellyfish pulverization is excellent in controlling foot blight disease ( FIG. 6 ).
<실시예 8> 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 바실러스 서브틸리스 KBC1121의 발효취 분석Example 8 Fermentation Odor Analysis of Bacillus Subtilis KBC1121 in a Medium Containing Jellyfish Crushed
본 발명자들은 영양 배지에 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서의 배양물에 대한 발효취 생성 억제여부를 살펴보았다. 구체적으로, 해파리 분쇄물이 첨가되지 않은 영양 배지를 대조군으로 하고, 실험군으로서 영양 배지에 함수율을 67%로 조정한 10 ~ 50 중량%의 해파리 분쇄물이 포함된 배지를 제조하였다. 그 후, 상기 각각의 배지에서 바실러스 서브틸리스 KBC1121를 배양한 다음, 상기 배양액을 숙련된 조향사를 통해 향취에 대한 페널시험을 수행하였다.The present inventors examined whether the production of fermentation odor for the culture in the medium containing jellyfish crushed in the nutrient medium. Specifically, a medium containing the jellyfish pulverized powder, in which the jellyfish pulverized powder was not added, was used as a control and the moisture content was adjusted to 67% in the nutrient medium as the experimental group. Thereafter, Bacillus subtilis KBC1121 was incubated in each of the medium, and then the culture solution was subjected to a panel test for flavor through an experienced steering technician.
+ : 보통 ++ : 좋음 +++ : 매우 좋음+: Normal ++: good +++: very good
그 결과, 20 중량%의 해파리 분쇄물이 포함된 배지를 비롯하여 50 중량%의 해파리 분쇄물이 포함된 배지 모두에서 배양액의 발효취가 좋은 것으로 확인되었다(표 4).As a result, it was confirmed that the fermentation odor of the culture was good in both the medium containing 50% by weight jellyfish pulverization, including the medium containing 20% by weight jellyfish pulverization ( Table 4 ).
<실시예 9> 제제안정성 시험Example 9 Formulation Stability Test
본 발명자들은 본 발명의 해파리 분쇄물이 포함된 영양 배지가 시간이 경과되어도 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KBC1010 배양배지로서의 안정성을 유지하는지 확인하기 위해 제제 안정성을 시험하였다. 구체적으로, 0 내지 50 중량%의 해파리 분쇄물이 포함된 배지를 제조한 후, 5 중량%의 PPG(polypropylene glycol)를 부형제로 첨가하여 실온에서 병포장한 후 보관하였다. 그 후, 상기 배지에 바실러스 서브틸리스 KBC1010을 접종한 후, 배지 보관기간에 따른 배지내 잔존 콜로니 수(cfu/㎖)를 조사하였다.The inventors tested the formulation stability to confirm that the nutrient medium containing the jellyfish pulverization of the present invention maintains its stability as Bacillus subtilis KBC1010 culture medium over time. Specifically, after preparing a medium containing 0 to 50% by weight jellyfish pulverized, 5% by weight of polypropylene glycol (PPG) was added as an excipient and bottled and stored at room temperature. Then, after inoculating Bacillus subtilis KBC1010 in the medium, the number of colonies remaining in the medium (cfu / ㎖) according to the storage period of the medium was investigated.
그 결과, 30 중량% 까지는 해파리 분쇄물의 포함량이 높아질수록 대조군 대비 균의 생존력과 활성이 높게 유지되었다(표 5).As a result, up to 30% by weight of the jellyfish pulverized containing the higher the viability and activity of the bacteria compared to the control was maintained ( Table 5 ).
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 해파리 분쇄물이 포함된 배지는 미생물의 체인 형성을 억제하여 균주의 생존을 증가시킬 뿐만 아니라 발효취를 억제하여 미생물의 활성을 증가시키므로, 본 발명의 해파리 분쇄물이 포함된 배지에서 미생물을 배양하여 미생물 제제를 제조하면 제제의 안정성 및 항균력이 증가된다. 따라서, 본 발명의 해파리 분쇄물이 포함된 배지는 미생물 제제의 제조에 유용하게응용될 수 있다.As described above, the medium containing the jellyfish pulverized product of the present invention inhibits the formation of microorganism chains and increases the survival of the strain as well as inhibits the fermentation odor, thereby increasing the activity of the microorganisms, the jellyfish pulverized product of the present invention. When the microbial preparation is prepared by culturing the microorganisms in the medium, the stability and antimicrobial activity of the preparation is increased. Therefore, the medium containing the jellyfish pulverized product of the present invention can be usefully applied in the preparation of microbial preparations.
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CN118546822A (en) * | 2024-05-16 | 2024-08-27 | 烟台大学 | Paramygdalina with function of inhibiting apomictic reproduction of disaster jellyfish polyp and application of paraamygdalina |
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