KR100221981B1

KR100221981B1 - 뉴클레오티드의 신규 제조방법

Info

Publication number: KR100221981B1
Application number: KR1019930700374A
Authority: KR
Inventors: 베미쉐터 푸루쇼탐; 알.브로드퓨어러 파울; 지.호웰 헨리; 사피노 쥬니어 체스터
Original assignee: 안토닌 포레이트; 인스티튜트오브오르가닉케미스트리앤드바이오케미스트리아케더미오브사이언시스오브더체크리퍼블릭
Priority date: 1990-08-10
Filing date: 1991-08-06
Publication date: 1999-09-15
Anticipated expiration: 2011-08-06
Also published as: ES2149157T3; DE69132276D1; US5476938A; KR930702349A; DE69132276T2; FI930552A0; EP0574386B1; JPH06503807A; CA2088363A1; ATE194142T1; EP0574386A1; FI930552A7; JP3116079B2; US5591852A; AU8492891A; EP0574386A4; CA2088363C; WO1992002511A1; FI930552L; AU653552B2

Abstract

본 발명은 HPMP-치환 뉴클레오티드 항비루스 화합물의 합성에 대한 신규의 경제적인 방법에 관한 것이다. 또한 HPMPC 의 제조를 위한 본 방법에서 생성된 신규의 중간체가 개시된다.

Description

뉴클레오티드의 신규 제조방법

본 발명은 히드록시포스포닐메톡시프로필 뉴클레오시드의 제조방법 및 생성된 중간체에 관한 것이다.

3-히드록시-2-(포스포닐메톡시)프로필(HPMP) 측쇄를 가진 뉴클레오시드 동족체는 광범위한 스펙트럼의 활성을 가진 강력한 항비루스 화합물로서 보고된 바 있다. 이 클래스에 속한 화합물의 실예는 HPMP-아데닌(HPMPA), HPMP-구아닌(HPMPG) 및 HPMP-시토신 (HPMPC)을 포함한다. HPMP-치환 뉴클레오시드는 키랄 중심 (chiral center)을 포함하며 생물학적 활성이 한가지 에난시오머(enantiomer)에 존재하나 다른 것에는 존재하지 않을 수 있다고 가정된 바 있다. 따라서 쉽게 이용될 수 있고 저렴한 출발 물질을 사용하여 활성 에난시오머를 우세하게 얻는 합성 방법을 개발하는 것이 요망된다.

Bronson 외 그의 공동저자(J. Med. Chem. , 1989, 32: 1475)는 3-0-벤질-2-0-[(디에틸-포스포닐)메틸]-3-0(메틸술포닐)글리세롤로서 시토신을 커플링(coupling)하고, 이어서 후속 탈보호반응시켜 생서물을 얻는 것을 포함하는 (S)-HPMPC 의 합성을 보고하였다. 글리세롤 출발물질은 키랄(R)-글리세롤 아세토니드로부터 유도된다.

Holy 외 그의 공동저자 (Coll. Czech. Chem. Comm., 1989, 54: 2470)는 (R)-글리세롤 아세토니드 토실레이트를 4-메톡시-2-피리미디논과 반응시키는 (S)-HPMPC 의 합성을 보고하였고, 얻어진 생성물은 그 후1-[(2, 3-디히드록시)프로필]시토신으로 전환된다. 후자의 화합물을 클로로메틸포스포릴 디클로라이드와 반응시키고, 생성물을 염기 촉매-전위 반응에 의해 (S)-HPMPC 로 전환시킨다.

글리세롤 아세토니드는 또한 (S)-HPMPA(Webb, Nucleosides and Nucleotides, 1989, 8: 619) 및 HPMPG (Terry 외 그의 공동 저자, Antiviral Res., 1988, 10: 235)의 합성에 사용되었다. 이들 방법은 모두 출발 물질로서 비싼 키랄 글리세롤 아세토니드의 사용을 필요로 하며, 중간체 화합물의 크로마토그래피 정제를 필요로 하는 다단계 방법을 포함한다.

2,3-디히드록시프로필 치환 뉴클레오시드를 형성하는 글리시돌의 아데닌, 시토신 또는 우라실과의 반응은 Ueda 외 그의 공동 저자(J. Heterocyclic Chem., 1971, 8: 827)에 의해 보고되었다. (±)-글리세롤의 티민 또는 5-플루오로우라실과의 반응은 Seiter 외 그의 공동저자(Bull. Chem. Soc. Jpn., 1973, 46: 1572)에 의해 보고 되었다. 선행 기술에서는 이전에 알려진 방법에 비해 상당히 개선시키는 HPMP-뉴클레오티드의 제조에 대한 본 발명의 방법을 기재하거나 제시하고 있지 않다.

본 발명은 히드록시포스포노메톡시프로필(HPMP) 뉴클레오시드 항비루스 화합물의 신규한 개선된 제조방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 임의로 치환된 푸린 또는 피리미딘 염기를 임의로 치환된 글리시돌과 반응시키고; 글리시돌이 이전 단계에서 사용된다면, 이와 같이 형성된 중간체의 일차 히드록시기를 보호하고; 이 생성물을 메탄포스포네이트와 반응시킨 다음; 여러 가지 보호기를 제거하여 최종 생성물을 제공하는 단계로 이루어진다.

본 방법은 쉽게 이용될 수 있는 푸린과 피리미딘 염기, 및 글리시돌로서 출발한다. 본 방법은 이성체 분리 및 후속 크로마토그래피 정제에 대한 필요성이 제거됨으로서 재료비 및 노동비 모두의 절약면에서 장점이 있고; 선행기술과 달리, 본 방법은 최종 생성물의 대규모 합성에 적합하다. 또한. 본 방법은 입체특이적이며, 키랄 글리시돌로서 출발하면, 라세미화 없이 생성물을 제조한다.

본 발명의 HPMP-형 뉴클레오시드 항비루스 화합물의 제조방법은 반응식(I)으로 제시된다.

반응식 (I)에서, B는 푸린 또는 피리미딘 염기이며; B'은 푸린 또는 피리미딘 염기 또는 보호된 푸린 또는 피리미딘 염기 이며; L은 종래의 이탈기이고; R₁은 히드록시 보호기이며; R₂는 1-5개의 탄소원자를 가진 알킬기이다.

"푸린 또는 피리미딘 염기"는 아데닌, 구아닌, 티민, 우라실, 시토신, 크산틴, 히포크산틴, 8-브로모구아닌, 8-클로로구아닌, 8-아미노구아닌, 8-히드라지노구아닌, 8-히드록시구아닌, 8-메틸구아닌, 8-티오구아닌, 2-아미노푸린, 2,6-디아미노푸린, 5-에틸시토신, 5-메틸시토신, 5-브로모우라실, 5-요오도우라실, 5-에틸우라실, 5-프로필우라실, 5-비닐우라실, 및 5-브로모비닐우라실을 포함하나, 이들에 국한하지 않는다.

"보호된 푸린 또는 피리미딘"은 원하는 반응이 방해될 수 있는 작용기가 염기성 조건하에 안정한 기에 의해 차단된 푸린 또는 피리미딘 염기를 뜻한다. 예를 들어, 시토신의 4-아미노기가 벤조일기에 의해 차단될 수 있다.

"이탈기"는 클로라이드, 브로마이드, 및 요오다이드와 같은 할라이드; 및 토실레이트를 포한하나, 이들에 국한하지 않는다. "알킬"은 직쇄 및 측쇄 탄소사슬 모두를 포함한다. "히드록시 보호기"는 예를 들어 트리틸, 알리, 및 벤질기를 포함한다.

반응식 (I)에서, 제1단계는 식 (IIIb)의 화합물의 제조를 포함한다. 상응하는 음이온을 생성하기 위하여 푸린 또는 피리미딘 염기 B'를 처음에 염기로서 처리한다. 염기는 구체적으로 한정되지 않으며 나트륨 및 칼륨 히드라이드와 같은 금속 히드라이드, 나트륨 및 칼륨 카르보네이트와 같은 금속 카르보네이트, 및 칼륨 t-부톡시드와 같은 금속 알콕시드중에서 선택될 수 있으며; 바람직하게는 염기가 촉매량으로 사용된다.

푸린 또는 피리미딘 염기가 본 방법의 반응조건하에 원하지 않는 생성물을 형성하도록 반응성이 있을 수 있는 한가지 또는 그 이상의 작용기, 예를 들어 시토신 및 아데닌의 4-아미노기 및 구아닌의 2-아미노 및 4-옥소기를 함유하는 경우에, 이러한 작용기는 뉴클레오시드 화학에서 통상적으로 사용된 보호기를 이용하여 차단될 수 있다. 예를 들어, 아데닌 및 시토신의 4-아미노기는 벤조일에 의해 보호될 수 있으며; 구아닌의 4-옥소 및 2-아미노기는 트리페닐메틸기에 의해 보호될 수 있다. 이러한 보호기의 도입 및 후속 제거 방법의 선택은 관련 기술에서 통상의 숙련자에게 잘알려져 있다.

제자리 생성된 음이온 B'-를 글리시돌(IIa)과 반응시켜 식(IIa)의 2, 3-디히드록시 뉴클레오시드를 생성한다. 식(IIIa) 화합물의 일차 알코올은 포스포네이트기의 첨가전에 차단된다. 그러나, 본 방법에 대해, 글리시돌 반응물이 일차 알코올이 보호된 것, 즉 식(IIb)의 화합물인 것이 바람직하다. 보호된 글리시돌을 B'와 반응시키면 확실히 탈보호된 글리시돌이 사용되는 반응 보다 높은 수율로 상응하는 식 (IIIb)의 생성물을 제공한다. 히드록시 보호기는 예를 들어 페닐기가 미치환되거나 한가지 또는 그 이상의 페닐기가 메톡시; 또는 알릴, 벤질 등과 치환되는 트리페닐메틸-형일 수 있다. 바람직하게도, 히드록시 보호기는 트르페닐메틸형 화합물의 기에서 선택된 것이다.

반응은 원하는 생성물의 형성에 바람직한 온도에서 디메틸포름아미드, N-메틸-2-피롤리디논(NMPO), 디메틸 술폭시드, 및 헥사메틸 포스포아미드와 같은 불활성 이극성 비양성자성 유기 용매에서 수행되며, 반응 온도는 상승되며 약 50℃-약 150℃일 수 있다. 바람직하게도, 반응은 약 100℃-약 120℃에서 수행된다. 출발물질 B' 및 글리시돌이 몰당량으로 사용되거나 한가지 또는 다른 반응물이 약간 과량으로, 예를 들어 다른 것에 비해 약 2당량까지 사용될 수 있다. 바람직하게도, B'는 글리시돌의 약 1.3당량까지의 양의 과량으로 사용된다.

본 방법의 제2단계는 식(IIIb)의 화합물의 이차 히드록시기에 메탄포스포네이트 성분을 도입하는 것을 포함한다. 이 단계를 수행하기전에, B'가 비보호 작용기를 함유한다면, 이것은 임의로 보호될 수 있다. 예를 들어, 시토신의 4-아미노기는 N,N-디메틸포름아미드 또는 그의 아세탈로서 처리시 상응하는 디메틸포름아미디노 유도체로 전환될 수 있다.

따라서, 식(IIIb)의 화합물은 처음에 염기로서 처리되어 상응하는 알콕시드 음이온을 생성한다. 염기는 금속 히드라이드, 예를 들어 나트륨 히드라이드, 칼륨 히드라이드 또는 리튬 히드라이드; 및 금속 알콕시드, 예를 들어 칼륨 t-부톡시드 또는 나트륨 메톡시드 등일 수 있다. 그후 알콕시드 음이온을 함유한 반응 혼합물을 L이 이탈기이고 가 이전에 정의된 바와 같이 1-5개의 탄소원자를 함유한 알킬기인 메탄포스포네이트 (IV)로서 처리하여 식 (V)의 보호된 HPMP 뉴클레오시드를 제공한다. L은 바람직하게도 p-톨루엔술포네이트(토실레이트), 메탄술포네이트(메실레이트), 및 트리플루오로메탄술포네이트(트리플레이트)중에서 선택되며; R₂는 바람직하게도 1-3개의 탄소원자를 가진 알킬기, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 및 이소프로필이다.

본 방법의 제3단계는 포스포닉 보호기, 즉 , R₂히드록시 보호기, 및 현재는 푸린 또는 피리미딘 염기위 어떤한 보호기를 제거하는 것을 포함한다. 포스포네이트는 트리메틸실릴 브로마이드 또는 트리메틸실릴 요오다이드와 같은 트리알킬실릴 할라이드로서 처리하고, 이어서 임의로 물을 첨가하여 모체 산으로 전환될 수 있다. 히드록시 보호기, 및 현재는 푸린 또는 피리미딘 염기위 보호기의 제거에 사용되는 방법은 물론 보호기의 특성에 따를 것이며; 전형적인 탈보호반응의 실예는 산 또는 염기 촉매 가수분해, 수소화반응, 또는 금속 매개 탈보호반응을 포함한다.

본 방법의 바람직한 일예에서, 편리하게도 반응 시퀀스가 형성된 중간체 화합물을 분리하고 정제함이 없이 출발물질에서 최종 생성물까지 수행된다. 중간체의 비싸고 노동 집약적인 분리 및 정제에 대한 불필요성으로 선행 방법에 비해 놀라운 개선을 재현한다. 본 발명의 또다른 장점은 글리시돌 반응물의 입체화학이 원하는 입체 형태를 가진 최종 생성물이 라세미화없이 얻어지도록 공정을 통해 유지된다는 것이다.

본 발명의 방법은 광범위한 HPMP 치환 푸린 및 피리미딘 염기의 합성에 적용될 수 있지만 특히 히드록시포스포노메톡시프로필 시토신 (HPMPC); 구체적으로 (S)-HPMPC의 합성에 이용될 수 있다.(S)-HPMPC 의 제조에 적합한 본 방법의 바람직한 일예가 반응식(II)에 예시된다.

반응식(II)에서, Tr은 트리페닐메틸이며 Ts는 토실이다. N⁴-벤조일시토신(VI)을 상승온도에서 비양성자성 이극성 유기 용매내 염기로서 처리하여 음이온 형태로 전환시키며; 적합한 염기는 예를 들어 나트륨 히드라이드, 칼륨 t-부톡시드, 칼륨 또는 나트륨 카르보네이트, 등이고; 적합한 용매는 예를 들어 디메틸포름아미드, N-메틸-2-피롤리디논, 디메틸 술폭시드, 헥사메틸포스포아미드, 등이고; 전형적인 반응온도는 약 70℃-약 150℃이다. 다음에, (S)-[(트리페닐메톡시)메틸]옥시란을 상기의 반응 용액에 첨가하고 용액을 상승온도에서 유지시켜 (S)-N⁴- 벤조일-N¹-[(2-히드록시-3-트리페닐메틸)프로필]시토신(VII)을 형성한다.

상기에서 얻어진 이보호된 (2,3-디히드록시)-프로필 시토신을 금속히드라이드, 예를 들어 나트륨 히드라이드로서, 얼음조 온도에서 처리한 다음, 디에틸 토실록시메틸포스포네이트로서 처리하여 화합물 (S)-N⁴-벤조일-N¹-[[(2-디에틸-포스포닐메톡시)-3-트리페닐메틸]프로필]시토신을 제공한다.

다음에, 상기에서 얻어진 화합물(VIII)을 산성 매질, 예를 들어 염산으로서 약 0-5℃에서 처리함으로서 트리틸 보호기를 제거하여 식(IX)의 화합물을 제공한다. 이 단계를 성취하는데 광범위한 다른 산이 사용될 수 있으면, 실예는 초산, 포름산, 트리플루오로아세트산, 아연 브로마이드, 산성 이온 교환수지를 들 수 있으나, 이들은 약간만을 제시한 것이다. 적합한 반응온도, 및 시간은 본 기술에 숙련된 자에게 쉽게 확인될 것이다.

탈트리틸화반은(detritylation)에 따라, 얻어진 화합물(X)을 트리메틸실릴 브로마이드와 같은 트리알킬실릴 할라이드로서 상온에서 처리하여 디에틸 포스포네이트를 포스폰산으로 전환시킨다. 이러한 후자의 화합물을 그후 암모늄 히드록시드와 같은 염기로서 처리하여 벤조일 보호기를 제거하고 원하는 최종 생성물 (S)-HPMPC를 제공한다.

(S)-HPMPC의 제조를 위한 다른 바람직한 방법을 반응식(III)으로 예시한다.

반응식(III)에서, 시토신은 이전에 열거된 것과 같은 염기의 존재하에 (S)-[(트리페닐메톡시)메틸]옥란과 결합되어 식(XI)의 시토신유도체를 제공한다. 화합물(XI)의 4-아미노기는 디메틸포름아미드 또는 그의 아세탈로서 처리시 상응하는 디메틸 포름아미딘 유도체(XII)로 전환된다. 화합물(XII)을 이전에 기재된 바와 같이 디에틸 토실록시메틸포스포네이트와 염기 촉진 알킬화반응시켜 식(XIII)의 화합물을 제공한다. 화합물(XIII)을 산성 매질에서 탈보호시키며 그의 생성물을 예를 들어 트리메틸실릴 브로마이드로서 처리시켜 (S)-HPMPC를 얻는다.

(S)-HPMPC의 또다른 바람직한 제조방법은 반응식(IV)에 예시된 바와 같이, 식(XI)의 시토신 유도체를 염기, 이어서 디에틸 토실메틸포스포네이트로서 처리하여 식(XV)의 화합물을 제공한다. 후자의 화합물을 산으로서 처리하여 트리틸 보호기를 제거하고 식(XIV)의 화합물을 얻고 이것은 이전에 기재된 바와 같이 (S)-HPMPC로 전환된다.

본 발명의 또다른 일예는 (S)-HPMPC의 합성에서 신규한 중간체에 관한 것이다. 이들은 식(VII, VIII, IX, X, XII, XIII, 및 XV)의 화합물을 포함한다.

본 발명의 방법은 다음의 실시예에 의해 보다 상세히 예시되며 이들은 본 발명의 범위를 국한하는 것으로 의도되지 않는다.

[제조예 1]

(±)-트리페닐메톡시메틸옥시란

트리틸 클로라이드(18.816g, 0.067mol)를 무수 메틸렌 클로라이드 (54ml)내 (±)-글리시돌(5g , 0.067mol) 및 트리에틸아민 (13.84g, 0.137mol)의 교반 용액에 첨가하였다. 상온에서 15시간 교반한후, 반응 용액을 물 (2×10ml) 및 염수 (20 ml)로서 세척하였다. 유기상을 무수Na₂So₄에서 건조시킨후에 증발시켜 황색 발포체를 얻고 실리카 겔 (헥산내 5% EtOAc)에서 정제하여 고체로서 표제의 화합물(17.64g, 82.6%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCl₃) : 2.62(dd, J = 2.4및 5.2㎐, 1H), 2.77(t, J=4.5㎐, 1H), 3.08-3.18(m, 2H), 3.29-3.80(m, 1H), 7,20-7.38(m, 3H), 7.45-7.52(m, 2H).

[제조예 2]

(s)-트리페닐메톡시메틸옥시란

5L 3-목 둥근 밑면 플라스크에 트리틸 클로라이드 (133.8g, 0.48mol) 및 메틸렌 클로라이드(400ml)를 채웠다. 그것을 N₂하에 0℃에서 냉각시킨다음 트리에틸아민 (70.7g, 0.70mol)으로서 처리하였다. 0℃에서 1시간 교반한후, 메틸렌 클로라이드 (100ml)내 (R)-글리시돌(88% ee, 37.03g, 0.5mol)의 용액을 0.75시간에 걸쳐 첨가하였다. 얻어진 용액을 상온으로 가열하고 3시간 교반하였다. 그후 여과하고, 여과액을 물 (2×500ml) 및 염수 (2×500ml)로서 세척하였다. 유기상을 MgSo₄에서 건조시키고 발포체로 농축하였고, 이소프로필 알코올에서 결정화하면 회백색 분말로서 표제의 화합물(116.2g, 76.5%)을 제공하였다.

[α]_D=-6.01(C =1,MeOH).

(±)-N¹-[(2, 3-디히드록시)프로필]-시토신의 제조

건조 DMF(6ml)내 시토신(0.55g, 4.95mmol), (±)-글리시돌(0.404g, 5.45mmol), 및 무수 포타슘 카르보네이트(5mg, 0.04mmol)를 71℃에서 3시간 교반하였다. 글리시돌(4)을 전체적으로 반응 혼합물의 TLC에 따라 반응시켰다. DMF를 고진공하에 증류시키고, 얻어진 황색 점성 액체를 실리카 겔(3g)에서 흡수하였다. 이것을 실리카 겔 컬럼의 상단에 위치시키고, 에킬 아세테이트내 20% MeOH 로서 용출하여 표제의 화합물과 글리시돌에서 유도된 폴리머의 혼합물(0.540g)을 제공하였다. 에탄올에서 결정화는 고체로서 표제의 화합물(0.44g, 52.3%)을 얻었다.

MP : 169-71℃.

UV : λ_max274nm (ε=8,803)

¹H NMR(DMSO-d₆) : 3.11-3.47(m, 3H), 3.55-3.75(m, 1H), 3. 88(dd, J = 3.3및 13.3㎐, 1H), 4.71(t, J = 5.8㎐, 1H), 4.95(d, J = 5.3㎐, 1H), 5.61(d, J = 7.1㎐, 1H), 7.00(bd, J = 23.7㎐, 2H), 7.44(d, J = 7.1㎐, 1H).

C₇H₁₁N₃O₃·0.5H₂O에 대한

분석 계산치 : C, 43.30; H, 6.23 N, 21.63

실측치 : C, 43.33; H, 5.95 N, 21.38

[실시예 2]

(S)-N¹- [(2,3-디히드록시)프로필]시토신

건조 DMF(20ml)내 무수 칼륨 카르보네이트 (40mg, 0.289mmol)의 존재하에 (R)-글리시돌(88% ee, 1.51ml, 22.8mmol)과 시토신(2.2g, 19.8mmol)을 72℃에서 5시간 실시예 1에 기재된 바와 같이, 반응시키면 43.1%의 수율로 표제의 화합물 (88% ee)을 얻었다.

[실시예 3]

(±)-N¹-[(2,3-디히드록시)프로필]시토신의 트리틸화반응에 의한 (±)-N¹-[(2-히드록시-3-트리페닐메톡시)프로필]시토신의 제조

(a) 글리시돌 1.1당량을 사용

건조 DMF(5ml)내 시토신(0.55g, 4.95mmol), (±)-글리시돌(0.362ml, 5.46mol), 및 무수 칼륨 카르보네이트 (5mg)의 혼합물을 71℃에서 3시간 교반하였다. 그것을 상온으로 냉각시키고 DMAP(0.031g, 0.25mmol), 건조 피리딘(0.783g, 9.9mmol), 및 트리틸 클로라이드(1.48g, 5.2mmol)로서 처리하였다. 얻어진 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 및 상온에서 17시간동안 교반하엿다. 그것을 에틸 아세테이트(60ml)로서 희석하고, 포화 중탄산 나트륨(2×15ml), 물(15ml), 및 염수 (15ml)로서 세척하고, MgSo₄에서 건조하였다. 에틸 아세테이트를 증발하여 바삭바삭한 발포체(1.98g)를 얻고, 실리카 겔(에틸아세테이트내 10-15% 메탄올) 위에서 크로마토그래피에 의해 정제하면 결정 고체(0.74g, 35%)로서 표제의 화합물을 얻었다.

MP : 227-228℃

UV : λ_max274nm(ε=7,149).

¹H NMR (DMSO-d₆): 2.81-2.98(m, 2H), 3.26-3.42(m, 1H), 3.85-3.97(m, 1H), 4.02(dd, J = 4.7및 14.2Hz, 1H), 5.23(d, J = 5.8Hz, 1H), 5.54(d, J = 7.1Hz, 1H), 7.93(bd, 2H), 7.1-7.29(m, 16H).

(b) 글리시돌 1.5당량을 사용

건조 DMF (2.5ml)내 시토신 (0.275g, 2.48mmol), (±)-글리시돌 (0.281g, 3.7mmol), 및 무수 칼륨 카르보네이드(2.5mg, 0.018mmol)를 70℃에서 1.5시간 교반하였다. DMF를 감압하에 증류하였다. 얻어진 고체의 PMR은 (±)-N¹-[2,3-디히드록시)프로필]-시토신과 시토신을 89:11의 비율로 함유하였다는 것을 보여주었다.

상기의 고체를 건조 피리딘 (4ml)에 용해시키고 트리틸 클로라이드(0.602g, 2.14mmol) 및 DMAP(13mg)를 상온에서 연속으로 첨가하였다. 85℃에서 3시간 교반한후, 이어서 실시예 3(a) 에 기재된 바와 같이 수행하여 발포성 고체(0.88g)를 얻었다. 메틸렌 클로라이드와 톨루엔에서 결정화하면 표제의 화합물(0.360g, 34%)를 제공하였다. 모액을 농축하고 실리카 겔 크로마토그래피(에틸 아세테이트내 10% 메탄올)에 의해 정제하여 표제의 화합물(70mg, 5.7%)과 (±)-N¹-[(2-히드록시-3-트리페닐메톡시)프로필록시]-3-트리페닐메톡시]프로필]시토신(이후 다이머로서 지칭됨) (10mg, 0.8%)를 제공하였다.

(c) 글리시돌 2당량을 사용

(±)-글리시돌 2당량을 사용하여 상기의 실험을 반복하여 표제의 화합물을 39.6%의 수율로 다이머를 1.6%의 수율로 얻었다.

[실시예 4]

시토신과 (±)-트리페닐메톡시메틸옥시란의 반응에 의한(±)-N¹[(2-히드록시-3-트리페닐메톡시)프로필]시토신의 제조

(a) 촉매량의 NaH를 사용

시토신(80mg, 0.72mmol)을 건조 DMF(3ml)내 80% NaH(4mg, 0.13mmol)의 교반 분산액에 첨가하였다. 상온에서 한시간후에, (±)-트리틸록시메틸-옥시란(0.19g, 0.6mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였고, 106℃에서 5시간 계속 교반하였다. 제시된 대로 반응 혼합물의 TLC에 의해 반응을 완성하였다. 그것을 냉각시키고, DMF를 진공하에 증류하였다. 얻어진 에틸 아세테이트(20ml)와 물(2ml)사이에 분배하였다. 유기상을 분리하고, 물(5ml)로서 다시 한 번 세척한다음, Na₂SO₄에서 건조하였다. 에틸 아세테이트를 증발하면 갈색 고체(0.28g)를 얻고 메틸렌 클로라이드-톨루엔(2ml 및 30ml)에서 결정화하여 표제의 화합물(0.21g)을 81.7%의 수율로 얻었다.

(b) NaH 일당량을 사용

무수 DMF(4ml)내 (±)-트리틸록시메틸옥시란(0.190 g, 0.6mmol), 시토신(67mg, 0.6mmol), 및 나트륨 히드라이드(80%, 18mg, 0.6mmol)를 사용하여 상기의 반응을 수행하면 표제의 화합물(60mg)을 23.3%의 수율로 얻었다.

(c) NaH 대신에 K₂CO₃를 사용

상기에 기재된 방법에 따라, 무수 DMF(3ml)내 칼륨 카르보네이트(10mg, 0.072mmol)의 존재하에(±)-트리틸록시메틸옥시란(0.19g, 0.6mmol) 및 시토신 (0.08g, 0.72mmol)으로 부터 표제의 화합물을 82%의 수율로 얻었다.

[실시예 5]

(±)-N⁴-벤조일-N¹-[(2-히드록시-3-트리페닐메톡시)프로필]

시토신의 제조

(a) N⁴-벤조일시토신 1당량 사용

실시예 4(a)의 방법에 따라, N⁴-벤조일시토신(0.388g, 1.803mmol)을 80% 나트륨 히드리드(12mg, 0.4mmol)의 존재하에 (±)-트리틸록시메틸옥시란(0.571g, 1.805mmol)으로서 처리하면 헥산-EtOAc(1:3)를 사용하여 실리카 겔위에서 크로마토그래피한후 결정 고체로서 72.9%의 수율로 표제의 화합물을 얻었다.

MP : 105-107℃.

UV : λ_max259nm(ε=23,500), 306nm(ε=10,380)

¹H NMR (CDC1₃): 3.05-3.18(m, 1H), 3.21-3.33(m, 1H), 3.66-3.90(m, 1H), 4.2(bs, 1H)4.35(d, J= 13.6Hz, 1H), 7.13-7.72(m, 15H), 7.88(d, J=7.5hZ, 1H), 8.73(bs, 1H).

C₃₃H₂₉N₃O₄에 대한 분석

계산치 : C, 74.56: H, 5.50 : N, 7.90

실측치 : C, 74.02: H, 5.67: N, 7.63

(b) N⁴- 벤조일시토신 1.2당량을 사용

(±)트리틸록시메틸옥시란(0.762g, 2.41mmol)을 N⁴-벤조일시토신(0.621g, 2.89mmol)과 상기에 기재된 바와 같이 건조 DMF내 80% 나트륨 히드라이드(16mg, 0.53mmol)의 존재하에 반응시켜 표제의 화합물을 85%의 수율로 얻었다.

[실시예 6]

(S)-N⁴-벤조일-N¹-[(3-알릴록시-2-히드록시)프로필]시토신의 제조

N⁴-벤조일시토신(0.466g, 2.17mmol)을 무수 DMF(4.5ml)에서 상온에 교반하면서 나트륨 히드라이드(80%, 12MG, 0.4mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 한시간 교반하고 (S)-알릴록시메틸-옥시란(0.206g, 1.8mmol)으로서 처리하였다. 그후 105℃에서 6시간 가열하고, 냉각한 다음, 진공 농축하였다. 얻어진 붉은 오렌지색 검 물질을 물(5ml)과 에틸 아세테이트(20ml)로서 처리하였다. 5분간 교반하고, 불용성 고체(0.145g, 회수율 31.1%)를 여과에 의해 수집하고 N⁴-벤조일시토신으로서 확인하였다. 여과액을 분리 깔때기에 전달하고, 에틸아세테이트 층을 분리하였다. 물(43×5ml)로서 세척하고, Na₂SO₄위에서 위에서 건조시키고 증발하여 엷은 황색 고체 0.423g을 얻었다. 디에틸 에테르에서 이물질을 슬러리화하면 표제의 화합물(0.331g)을 55.7%의 수율로 얻었다. 에테르 여과액을 증발시키고, 얻어진 밝은 녹색 검 물질을 실리카 겔(EtOAc내 0-5% MeOH)에서 섬광 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제의 화합물(20mg)을 3.6%의 수율로 얻었다.

MP : 139-141℃

[α]_D: -55.06(C=1.155, MeOH).

UV : λ_max259nm(ε=21,500), 305nm(ε=10,120).

¹H NMR(CDCI₃): 3.4-3.56(m.2H), 3.77(dd, J=7.6및 13.5Hz, 1H), 3.98(d, J = 5.7Hz, 3H), 4.16-4.25(m,1H), 4.28(dd, J= 2.7) 및 13.5Hz, 1H), 5.10-5.25(m, 2H), 5.70-5.92(m, 1H), 7.39-7.62(m,4H).

C₁₇H₁₉N₃O₄에 대한 분석

계산치 : C, 61.97: H, 5.85: N, 12.79

실측치 : C, 61.82: H, 6.05: N, 12.77

[실시예 7]

(±)-N⁴-벤조일-N¹-[(3-알릴록시-2-히드록시)프로필]시토신의 제조

실시예 6의 방법에 따라, 건조 DMF(241ml)내 (±)-알릴록시메틸옥시란(9.02g, 0.079mol), N⁴-벤조일시토신(20.40g, 0.095mol), 및 80% 나트륨 히드라이드(0.526g, 0.018mol)로부터 표제의 화합물을 39.5%의 수율로 제조하였다.

[실시예 8]

(S)-N⁴-벤조일-N¹-[(3-벤질록시-2-히드록시)프로필]시토신의 제조

건조 DMF (0.5ml)내(R)-벤질록시메틸옥시란(0.296g, 1.8mmol)을 상온에서 1시간동안 건조 DMF(4ml)so N⁴-벤조일시토신(0.388g, 1.8mmol)로부터 제조된, N4-벤조일시토신의 나트륨 염에 첨가하고, 110℃에서 6시간 교반하였다. HPLC에 의해 반응을 확인함으로서 반응을 완성하였다. 감압하에 대부분의 DMF를 증류하였다. 얻어진 검 생성물을 에틸 아세테이트(20ml)와 물(5ml)사이에 분배하였다. 에틸 아세테이트 층을 분리하고, 물(3×10ml)로서 세척하고, Na₂SO₄에서 건조시키고, 증발하여 황색 생성물(0.595g)을 얻었다. 에틸 아세테이트로서 분쇄는 표제의 화합물(0.392g)을 57.3%의 수율로 제공하였다. 모액을 농축하고 실리카 겔(에틸 아세테이트)에서 크로마토그래피하여 표제의 화합물(50mg, 7.3%)을 제공하였다.

MP : 138℃

[α]_D: -49.19(C=1.425, MeOH).

UV : λmax 259nm(ε=22,440), 306nm(ε=10,220).

¹H NMR(CDCI₃): 3.45-3.58(m, 3H), 3.79(dd, J = 7.1및 13.3Hz, 2H), 4.16-4.33(m, 2H), 4.51(s, 2H), 7.2-7.6(m, 8H), 7.69(d, J=7.2Hz, 1H), 7.89(d, J=7.4Hz, 2H), 8.91(bs, 1H).

C₂₁H₂₁N₃O₄·0.9H₂O에대한 분석

계산치 : C, 63.76: H, 5.81: N, 10.62

실측치 : C, 63.97: H, 5.50: N, 10.63

[실시예 9]

(±)-N⁴-벤조일-N¹-[(3-벤질록시-2-히드록시)프로필]시토신의 제조

실시예 8의 방법에 따라, 건조 DMF(85ml)내 나트륨 히드라이드 (80% 순수, 0.263g, 8.1mmol)의 존재하에 (±)-벤질록시메틸옥시란(6.0g, 0.0365mol)을 N⁴-벤조일시토신(9.446g, 0.0439mol)으로서 처리하여 표제의 화합물(8.2g)을 59.2%의 수율로 얻었다.

MP : 144-146℃

[실시예 10]

(±)-N¹-[(2-디에틸-포스포닐메톡시-3-트리페닐메톡시)-프로필] 시토신의 제조

일 포트(pot) 합성 : 무스 DMF (3ml)내 시토신(0.134g, 1.21mmol) 및 80% 나트륨 히드리드(8mg, 0.27mmol)의 혼합물을 상온에서 교반하였다. 1시간 후에, (±)-트리틸록시메틸옥시란(0.38g, 1.2mmol)을 1부분(portion) 첨가하고, 105℃에서 5시간 계속 교반하였다. (±)-N¹-[(2-히드록시-3-트리틸록시)프로필]시토신의 형성을 HPLC에 의해 알았다.

상기의 균질 반응 용액을 얼음조에서 냉각하고 80% 나트륨 히드라이드(0.100g, 3.3mmol)와 디에틸 토실록시메틸포스포네이트(85% 순수, 0.682g, 1.8mmol)로서 연속 처리하였다. 0℃에서 0.5시간 및 상온에서 15시간 교반한후, 몇방울의 에탄올을 첨가하여 과량의 나트륨의 히드라이드를 냉각하여. 용매를 감압하에 제거하고, 얻어진 오렌지색 잔류물을 에틸 아세테이트(30ml)와 물(5ml)사이에 분배하였다. 유기상을 분리하고 포화 중탄산 나트륨 (10ml) 및 염수(10ml)로 세척하였다. Na₂SO₄에서 건조한후, 에틸 아세테이트를 증발하여 오렌지색 생성물(0.550g)을 얻고, 실리카 겔(CH₂CI₂내 10-15% MeOH)에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 발포성 고체로서 표제의 화합물(0.26g, 37.4%)을 얻었다.

¹H NMR(CDCI₃): 1.25(t, J = 7Hz, 6H), 2.97-3.12(m,1H), 3.33(dd, J=3및 10.5Hz, 1H), 3.55-3.68(m, 2H), 3.84-3.96(m, 2H), 3.96-4.24(m, 5H), 5.63(d, J=6.9Hz, 1H), 7.0-7.6(m, 18H).

[실시예 11]

(±)-N¹-[(2-디메틸포스포닐메톡시-3-트리페닐메톡시)프로필]시토신의 제조

디에틸포스포네이트 대신에 디메틸 토실록시메틸포스포네이트를 사용하여, 실시예 10의 실험을 반복함으로서 표제의 화합물을 15.6% 의 수율로 얻었다.

¹H NMR(CDCI₃): 3.0-3.1(m,1H), 3.27(dd, J=2.8및 10.5Hz, 1H), 3.51-4.26(m, 1OH), 4.17(dd, J=3.0 및 13.6Hz, 1H), 5.69(d, J=6.9Hz, 1H), 7.0-7.66(m, 18H).

[실시예 12]

(±)-N¹-[(2-디메틸포스포닐메톡시-3-히드톡시)프로필]시토신의 제조

실시예 10의 방법에 따라, 촉매량의 80% 나트륨 히드라이드(13mg, 0.44mmol)의 존재하에 시토신(0.249g, 2.24mmol)을 (±)-트리틸록시메틸옥시란(0.590g, 1.87mmol)로서 처리하고, 이어서 80% 나트륨 히드라이드(0.099g, 3.3mmol)의 존재하에 중간체를 디에틸 토실록시메틸포스포네이트(85.1% 순도, 1.06g, 2.80mmol)로서 제자리 알킬화반응시키면 원화합물(±)-N¹-[(2-디에틸포스포닐메톡시-3-트리틸록시)프로필]시토신(1.267g)을 얻었다.

상기의 뉴클레오티드에 80% 초산(20mll)을 첨가하고 95℃에서 3시간 교반하였다. 물 (20ml)을 첨가하고 반응물을 0℃로 냉각하였다. 침전된 트리틸 알코올을 여과에 의해 수집하였다. 여과액을 증발시키고, 얻어진 점성 생성물을 물(3×30ml)과 톨루엔(3×30ml)으로서 동시 증류하여 초산을 제거하였다. 그후 실리카 겔 컬럼에 넣고, CH₂CI₂내 15% MeOH로서 용출하여 검 물질로서 표제의 화합물(0.147g, 23.5%)을 얻었다. CH₂CI₂내 20% MeOH로서 추가로 용출하면 (±)-N¹-[(2,3-디히드록시)프로필]시토신의(20.2mg, 6%)을 얻었다.

¹H NMR(MeOH-d₄): 1.30(t, J = 7.1Hz, 3H), 1.31(t, J = 7.1Hz, 3H), 3.5-3.63(m,1H), 3.67-3.92(m, 4H), 3.97-4.22(m, 6H), 5,85(d, J = 7.2Hz, 1H), 7.53(d, J=7.2Hz, 1H).

[실시예 13]

포름아미딘 방법에 의한 (±)-N¹-[(2-디메틸포스포닐메톡시-3-히드톡시)프로필]시토신의 제조

상온에서 1시간동안 건조 DMF(3ml)내 시토신(0.134g, 1.21mol) 및 80% 나트륨 히드리드(8mg, 0.27mmol)에서 얻어진, 시토신의 나트륨염, 및 (±)-트리틸록시메틸-옥시란(0.38g, 1.2mol)의 혼합물을 110℃에서 5시간 교반하였다. 얻어진 용액 용액(12)을 상온으로 냉각하고, DMF 디메틸 아세탈(0.286g, 2.4mmol)을 1부분 첨가하였다. 그후 85℃에서 1.5시간 교반하고 감압하에 원화합물 디메틸포름아미딘 유도체(11) 약 1ml로 농축하였다. 무수 DMF(3ml)내 이것과 디에틸 토실록시메틸-포스포네이트(0.909g, 2.4mmol)를 0℃에 냉각하고 80% 나트륨 히드리드(64mg, 2.13mmol)로서 처리하였다. 얻어진 황색 반응 혼합물을 0℃에서 1.5시간 및 상온에서 14시간 교반하였다. 공정진행후에 얻어진 원생성물은 (±)-N¹-[(2-디메틸포스포닐메톡시-3-트리틸톡시)프로필]시토신과 그의 N⁴-디메틸포름아미딘 유도체의 혼합물이다.

이 혼합물을 80% 초산(11ml)에 용해하고 3시간 환류하였다. 공정진행후에, 황색 검 생성물(0.693g)을 얻었고, 실리카 겔(EtOAc 내 15% MeOH)위 크로마토그래피에 의해 정제시 표제의 화합물(0.175g)을 43.6%의 수율로 얻었다.

[실시예 14]

(±)-N¹-[(2-에틸히드로겐포스포닐메톡시-3-히드톡시)프로필]시토신의 제조

2N 나트륨 히드록시드 용액(4.5ml)을 (±)-N¹-[(2-디메틸포스포닐메톡시-3-히드톡시)프로필]시토신(0.230g, 0.69mmol)에 첨가하였다. 상온에서 1.25시간후에 반응물의 TLC는 출발물질이 완전히 소모되었다는 것을 나타냈다. 반응물을 Dowex 50×8(H⁺) 로서 산성화하고 여과하였다. 수지를 물 20ml로서 세척하였다. 결합된 여과액을 증발시켜 표제의 화합물(0.163g)을 77.3%의 수율로 제공하였다.

¹H NMR(D₂O): 1.26(t, J = 7.1Hz, 3H), 2.52-2.68(m,2H), 3.75-4.0(m, 6H), 4.21(dd, J=2.8 및 14.1Hz, 1H), 6.19(d, J=7.6Hz, 1H), 7.88(d, J=7.6Hz, 1H)

MS : C₁₀H₁₈N₃0₆P에 대한 분자 이온(m/e), 308.1011:

실측치 : 308.1009

[실시예 15]

(S)-N⁴-벤조일-N¹-[(2-히드록시-3-트리페닐메톡시)프로필]시토신의 제조

(a) N₂하에 100℃에서 건조 DMF(1,000ml)내 N⁴-벤조일시토신(100.1g, 0.47mol)에 80% 나트륨 히드라이드(3.0g, 0.10mol)를 1부분 첨가하였고, 슬러리를 0.25시간 교반하였다. (S)-트리틸록시-메틸옥시란(88% ee, 125,1g, 0.40mol)을 첨가하고 추가로 110℃에서 4시간 교반하였다. 반응을 그의 HPLC에 의해 확인하여 완성하였다. 반응 혼합물을 여과하고 추가로 정제없이 후속 반응에 사용하였다. 여과액은 HPLC를 기초로 표제의 화합물을 용액 수율로 90% 함유하였다.

(b) 별도의 실험에서, 상기의 반응에서 얻어진 원생성물을 실리카 겔(CH₂CI₂내 3-5% MeOH)에서 크로마토그래피에 의해 정제하고 분석적으로 순수한 표제의 화합물을 제공하였다.

MP : 105-107℃

UV: λmax 259nm(1ε=23,500), 306nm(1ε=10,380).

¹H NMR(CDCl₃): 3.05-3.18(m, 1H), 3.21(m, 1H), 3.66-3.90(m.1H), 4.2(bs, 1H), 4.35(d, J=13.6Hz, 1H), 7.13-7.72(m, 15H), 7.88(d, J = 7.5Hz, 1H), 8.73(bs, 1H).

C₃₃H₂₉0N₃O₄에 대한 분석 계산치 : C, 74.56: H, 5.50: N,7.90

실측치 : C, 74.02: H, 5.67: N, 7.63

(c) 상기의 9a)에서 기재된 반응을 다음 용매와 조건을 사용하여 반복하였고 표제의 화합물을 제공하였다.

(1) NaH, NMPO, 70-80℃에서 2시간 이어서 100-104℃에서 3.5시간.

(2) NaH, 18-crown-6, DMF, 103℃, 5시간.

(3) NaH, 벤질트리에틸암모늄 클로라이드, DMF, 70℃에서 6시간, 105℃에서 4시간.

(4) KOC(CH₃)₃, DMF, 70℃에서 16시간 이어서 105℃에서 8시간.

[실시예 16]

((S)-N⁴-벤조일[(2-디에틸포스포닐메톡시-3-트리페닐메톡시)프로필]시토신의 제조

(a) 실시예 15(a)에서 얻어진, DMF내 원화합물(S)-N⁴-벤조일-N¹-[(2-히드록시-3-트리페닐메톡시)프로필]시토신의 용액을 53-목 둥근 밑면 플라스크에 넣고 0℃로 냉각하였다. 80% 나트륨 히드라이드 (32.4g, 1.06mol)를 2부분으로 첨가하였고 8℃의 발열이 알려졌다.

즉시, 디에틸 토실록시메틸포스포네이트(80% 순수, 215.6g, 0.54mol)를 첨가하고 교반 6시간 후에 반응을 완성하였다. 반응물을 에틸아세테이트(2L)로서 희석하고, 물로서 냉각시키고, 물(2×1L) 및 포화 NaHCO₃(1L)로서 세척하며, MgSO₄위에서 건조시킨다음, 농축하여 양성자 NMR 스펙트럼에서 확인된 바와 같이, (S)-트리틸록시메틸옥시란 2%를 가진 표제의 원화합물을 얻었다. 이 원생성물을 다음 과정에 추가의 정제없이 사용하였다.

(b) 별도의 실험에서, 소량의 원생성물을 실리카 겔(CH₂CI₂내1-3% MeOH)에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 포제화합물의 분석 시료를 얻었다.

¹H NMR(DMSO-d₆): 1.14(t, J - 7Hz, 3H), 1.16(t, J=Hz, 3H), 2.94-2.98(m, 1H), 3.24-3.31(m,1H), 3.58-4.09(m,9H), 7.23-7.63(m,19H), 7.98(d, J=7Hz, 3H), 11.19(bs, 1H).

C₃₈H₄₀N₃O₇P·0.5H₂O에 대한 분석

계산치 : C, 66.07: H, 5.98: N, 6.08

실측치 : C,65.96 : H, 5.84 : N, 6.09

[실시예 17]

(S)-N⁴- 벤조일-N¹-[(2-디에틸포스포닐메톡시-3-히드록시)프로필]시토신의 제조

(a) 염화수소 가스를 HPLC에 의해 측정하여 출발물질이 소모될 때까지 (약 10분)0-5℃에서 메틸렌 클로라이드(1.2L)내 원화합물(S)-N⁴-벤조일-N¹-[(2-디에틸포스포닐-3-트리페닐메톡시)프로필]시토신 (230.1g, 실시예 16에서 얻어짐)의 용액에 버블링하였다. 물(500ml)을 첨가하고, 얻어진 2-상 혼합물을 5분간 세게 교반하였다. 유기상을 분리하고 10% 염산(2×250ml)으로 추출하였다. 결합된 수용액을 0-5℃로 냉각하고, 40% 나트륨 히드록시드 용액으로서 pH=8로 조절한 다음, CH₂CI₂용액을 MgSO₄에서 건조시키고 진공 농축하여 3단계후에 (S)-트리틸록시메톡시-옥시란으로부터 점성 오일로서, 표제의 원화합물(96.2g)을 55% 수율로 얻었다.

¹H NMR(DMSO-d₆): 1.16(t, J = 7Hz, 3H), 1.18(t, J=7Hz, 3H), 3.44-3.57(m, 2H), 3.68-3.80(m, 3H), 3.88-4.01(m, 5H), 4.13(dd, J=8 및 17Hz, 1H), 4.88(t, J=6Hz, 1H), 7.27(br d, J=7Hz, 1H), 7.49(t, J=7Hz, 2H), 7.60(t, J=7Hz, 1H), 7.98(d, J=7Hz, 3H), 11.18(br s, 1H)

C₁₉H₂₆N₃O₇P·0.5H₂O에 대한 분석

계산치 : C, 50.89; H, 6.07; N, 9.37

실측치 : C, 50.99; H, 6.03; N, 9.32

(b) 다음의 시약과 조건에 따라 탈트리틸반응을 수행하여 보통 내지 우수한 수율로 표제의 화합물을 얻었다 :

(1) 80% 초산, 75℃, 45분.

(2) 80% 초산, 100℃, 30분.

(3) 80% 초산, 60℃, 3분.

(4) 80% 포름산, 0-5℃, 30분.

(5) 95-97% 포름산, 상온, 5분.

(6) 트리플루오로아세트산, n-부탄올 또는 이소프로필 알코올, 또는 CH₂Cl₂, 22시간.

(7) ZnBr₂, CH₂Cl₂, 상온, 10분-3시간

(8) Amberlyst 15(H⁺), MeOH, 50℃, 24분.

(9) HCl/MeOH 워쉬(wash)에 의해 활성화된 Amberlyst 15(H⁺), 50℃, 6.5시간.

(10) HCl/MeOH에 의해 활성화된 Dowex 50×8(H⁺).

[실시예 18]

(S)-N⁴-벤조일-N¹-[(3-히드록시-2-포스포닐메톡시)프로필]시토신의 제조

아르곤하에 상온에서 메틸렌 클로라이드(1.2L)내(S)-N¹-[(2-디에틸포스포닐메톡시-3-히드록시)프로필]-N⁴-벤조일시토신(188g, 0.428mol)의 용액을 브로모트리메틸실란(200ml, 1.52mol)으로서 처리하고, 얻어진 혼합물을 18시간 교반하였다. 그후 진공 농축하고 잔류물을 메틸렌클로라이드(500ml)에 재용해하고 재농축하여 타닌색 발포체로서 퍼실릴화된 표제의 원화합물(289g)을 공급하였다. 이 재료를 추가의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. 원화합물의 발포체를 물로서 처리하여 표제의 화합물의 분석 시료를 제조하였고 이로부터 원하는 표제의 화합물을 결정화하였다.

¹H NMR(DMSO-d₆) : 3.45-3.81(m, 6H), 4.11(dd, J - 4및 13Hz, 1H), 7.26(d, J = 7Hz, 1H), 7.49(t, J=7Hz, 2HO, 7.61(t, J=7Hz, 1H), 7.98(d, J=7Hz, 2H), 8.04(d, J=7Hz, 1H).

C₁₅H₁₈N₃O₇P·0.5H₂O에 대한 분석

계산치 : C, 45.93: H, 4.84: N, 10.71

실측치 : C, 46.04: H, 4.67: N, 10.71

[실시예 19]

(S)-N¹-[(3-히드록시-2-포스포닐메톡시)프로필]시토신의 제조 이전의 실시예에서 얻어진, 원화합물 퍼실릴화된 (S)-N⁴-벤조일-N¹-[(3-히드록시-2-포스포닐메톡시)프로필]시토신(289g)을 진한 NH₄OH(850ml)에 용해시키고 상온에서 4시간 교반하였다. 수성 반응 혼합물을 CH₂CI₂(2×600ml)로서 추출하여 대부분의 벤즈아미드를 제거하고 여과한 다음 수용액의 pH가 중성이 될 때까지 진공 농축하였다. 농축된 용액을 물로서 부피 800ml로 희석하였고, 에탄올(600ml)을 첨가하였다. 진한 HCI(65ml)을 조심스럽게 첨가하여 pH를 3.0으로 조절하여 생성물을 침전시켰다. 얻어진 점성의 슬러리를 상온에서 1시간 교반하였고 그후 0-5℃에서 16시간 저장하였다. 고체 생성물을 여과에 의해 수집하고, 물/에탄올(2:1, 2×150ml)로서 세척하고 40℃, 진공에서 일정 중량으로 건조시켜 2단계후 22S 로부터 (S)-HPMPC(105g)를 78%의 수율로 제공하였다. 이 물질은 키랄 HPLC에 의해 측정할 때 불필요한 (R)-이성체 5%를 함유하였다. 수성 슬러리를 40% NaOH 용액으로서 pH=6으로 조절함으로서 원생성물의 이단계 결정화, 이어서 진한 HCI 로서 pH=3으로 재침전시킴으로서 불필요한 (R)-이성체의 수준을 2.4, 90% 증량 회수율로 감소시켰다.

MP : 260℃(분해).

[α]_D: -86.65(C=0.40, H₂O).

¹H NMR(D₂O) : d 3.59-3.67(m, 2H), 3.79-3.94(m,4H), 4.20(dd, J = 3및 14Hz, 1H), 6.17(d, J = 8Hz, 1H), 7.90(d, J = 8Hz, 1H).

C₈H₁₄N₃O₆·2H₂O에 대한 분석

계산치 : C, 30.48: H, 5.75: N, 13.33

실측치 : C, 30.30; H, 5.70; N, 13.25

[실시예 20]

(±)-N¹-[(3-히드록시-2-포스포닐메톡시)프로필]시토신의 제조

(±)-HPNPC의 합성을 (±)-트리틸록시메틸옥시란과 N⁴-벤조일시토신에서 출발하여 5단계(실시예 15, 16, 17, 18및 19)후에 42.4%의 수율로 성취하였다.

[실시예 21]

(R)-N¹-[(3-히드록시-2-프로포닐메톡시)프로필]시토신의 제조

표제의 화합물 (R)-HPMPC를 (S)-HPMPC에 대해 기재된 방법에 따라, (S)-글리시돌(88% ee) 및 N⁴-벤조일시토신으로 부터 제조하였다.

[실시예 22]

(±)-[(3-히드록시-2-포스포닐메톡시)프로필]우라실의 제조

2N 나트륨 히드록시드(4.5ml)내 (±)-N¹-[(2-디에틸포스포닐-3-히드록시)프로필]시토신 (0.228g, 0.68mol)의 용액을 82℃에서 60시간 가열하였다. 그의 HPLC에 의해 확인되는 대로 반응을 완성하였다. 상온에서 Dowex 50×8(H⁺)로서 산성화하고 여과하였고, 수지를 물(30ml)로서 세척하였다. 여과액의 증발은 고체로서 표제의 화합물(0.157g, 82.4%)을 얻었다.

¹H NMR(D₂O) : 3.16-3.29(m,1H), 2.55-4.17(m,9H), 5.87(d,J=7.9Hz, 1H), 7.22(d,J=&.9Hz, 1H).

Claims

(a) B'을 염기 존재하에 다음 일반식(IIa)의 화합물과 반응시켜

다음 일반식(IIIa)의 화합물을 얻고

얻어진 일반식(IIIa) 화합물의 히드록시기를 보호하여 다음 일반식 (IIIb)의 화합물을 얻거나

또는 B'을 염기 존재하에 다음 일반식(IIIb)의 화합물과 반응시켜

다음 일반식(IIIb)의 화합물을 얻고

(일반식(IIb), (IIIa), 및 (IIIb)에 있어서 B'은 퓨린 또는 피리미딘 염기이거나 또는 보호된 퓨린 또는 피린미딘 염기이고, R1은 히드록시 보호기임)

(b) 일반식(IIIb)의 화합물을 염기로 처리한 다음 일반식(IV)의 포스포네이트로 처리하여

다음 일반식(V)의 중간체를 얻은 다음,

(식중 L은 이탈기이고 R2는 탄소원자를 1내지 5개 갖는 저급 알킬기임)

(c) R¹, R²및 퓨린 또는 피리미딘 염기상의 보호기(존재한다면)를 수소를 치환하여 일반식(1)의 생성물을 얻는 단계로 되는 다음 일반식(1)의 화합물의 제조방법.

(식중, B는 퓨린 또는 피린미딘 염기임)
제1항에 있어서, B'을 식(IIb)의 화합물과 반응시켜 일반식(IIIb)의 화합물을 얻는 방법.
제2항에 있어서, 식(IIIb)의 화합물의 R¹가 트리페닐메틸인 방법
제2항에 있어서, B' 가 시토신 또는 N⁴-보호된 시토신인 방법.
제1항에 있어서, (a) B'을 염기 존재 하에 다음 일반식(IIb)의 화합물과 반응시켜

다음 일반식 (IIIb)의 화합물을 얻고:

(식중, B'는 시토신 또는 N⁴-보호된 시토신이며, R¹이 트리페닐메틸형 히드록시 보호기임)

(b) 일반식(IIIb)의 화합물을 염기로서 처리한 다음 식(IV)의 포스포네이트로서 처리하여

다음 일반식 (V)의 중간체를 얻은 다음:

(식중, L은 토실레이트, 메실레이트, 및 트리플레이트중에서 선택된 이탈기이고, : R²는 탄소원자를 1내지 5개 갖는 저급 알킬기임)

(c) R¹, R², 및 시토신 상의 보호기(존재한다면)를 수소로 치환하여 B가 시토신인 일반식(1)의 화합물, N¹-[(3-히드록시-2-포스포닐메톡시)프로필]시토신의 제조방법
제5항에 있어서, B'가 N⁴-벤조일시토신이고 R¹트리페닐 메틸인 제조방법.
제5항에 있어서, 추가로 B'가 시토신인 일반식(IIIb)의 화합물을 디메틸포름아미드 디메틸아세탈과 반응시켜 일반식(XVI)의 화합물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 제조방법.

(식중, R¹은 히드록시 보호기임)
다음 일반식을 갖는 화합물

(식중, R¹은 히드록시 보호기이고 R³은 수소 또는 -CH₂-P(O)(OR²)₂이며, R²는 탄소 원자를 1내지 5개 갖는 저급 알킬기임).
다음 일반식을 갖는 화합물

(식중, R¹은 히드록시 보호기이고 R³는 수소 또는 -CH₂-P(O)(OR₂)₂이며, R²는 탄소원자를 1내지 5개 갖는 저급 알킬기임).
제1항 또는 5항에 있어서, 일반식(IIa)또는 (IIb)의 화합물이 한가지 입체이성체 형태인 것이 특징인 제조방법.
제10항에 있어서, 상기 한가지 입체이성체가 (R)-글리시돌인 제조방법.
제10항에 있어서, 상기 한가지 입체이성체가 (S)-트리페닐메톡시옥시란인 제조방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 생성물이 (S)-N¹-[3-히드록시-2-(포스포닐메톡시(프로필)시토신인 제조방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 염기가 금속 하이드라이드 또는 금속 알콕사이드인 제조방법.
제14항에 있어서, 염기가 소듐 하이드라이드인 제조방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 불활성 금속 비양자성 용매 중에서 수행되는 것이 특징인 제조 방법.
제16항에 있어서, 용매가 디메필포름아미드인 제조방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 중간체 화합물을 분리 및 정제하지 않고 수행되는 제조방법.
제1항 또는 제5항에 있어서, 염기가 금속 하이드라이드이고, 용매는 불활성의 이극성 비양성자성 용매이며 공정은 중간체 화합물의 분리 및 정제 없이 수행되며, 키랄하게 분리되거나 농후화된 상기 출발 물질을 제공함으로써 카이럴 글리시돌 반응물의 입체화학특성은 공정 내내 지속적으로 유지되는 것이 특징인 제조 방법.
제19항에 있어서, 글리시돌이 키랄 글리시돌인 제조방법.
제1항 또는 5항에 있어서, 염기가 금속 하이드라이드이고, 용매는 불활성의 이극성 비양성자성 용매이며 공정은 중간체 화합물의 분리 및 정제 없이 수행되며, 키랄하게 분리되거나 농후화된 상기 출발물질을 제공함으로써 글리시돌 반응물의 입체화학특성은 공정내내 지속적으로 유지되는 것이 특징인 제조방법