JPWO1998008899A1 - Polysaccharide derivative-magnetic metal oxide complex - Google Patents
Polysaccharide derivative-magnetic metal oxide complexInfo
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Abstract
(57)【要約】 本発明は、多糖をカルボキシアルキルエーテル化及び未置換もしくは置換アミノアルキルエーテル化してなる多糖誘導体（ここで該カルボキシ基及び／又はアミノ基は塩の形態であってもよい）と磁性金属酸化物との多糖−磁性金属酸化物複合体を提供するものであり、該複合体は、血液クリアランスが遅く、毒性も低く、核磁気共鳴イメージング造影剤として有用である。 (57) [Abstract] The present invention provides a polysaccharide-magnetic metal oxide composite comprising a polysaccharide derivative (wherein the carboxyl and/or amino groups may be in the form of a salt) obtained by carboxyalkyl-etherifying a polysaccharide and unsubstituted or substituted aminoalkyl-etherifying the polysaccharide, and a magnetic metal oxide. The composite has slow blood clearance, low toxicity, and is useful as a nuclear magnetic resonance imaging contrast agent.
Description
【発明の詳細な説明】 多糖誘導体−磁性金属酸化物複合体 技術分野 本発明は、カルボキシアルキル基及び未置換もしくは置換アミノアルキル基の 両置換基で置換された多糖誘導体と磁性金属酸化物との複合体、その製造法及び その用途に関する。[Detailed Description of the Invention] Polysaccharide Derivative-Magnetic Metal Oxide Composite Technical Field The present invention relates to a composite of a polysaccharide derivative substituted with both carboxyalkyl groups and unsubstituted or substituted aminoalkyl groups and a magnetic metal oxide, as well as a method for producing the same and its uses.
背景技術 水性磁性ゾルの安定性や毒性を改善するために、多糖もしくは多糖誘導体と磁 性金属酸化物との複合体が提案されている。例えば、特公昭５９−１３５２１号 公報（＝米国特許第４,１０１,４３５号明細書）には、デキストラン又は水酸化 ナトリウムによる改質デキストランとコロイドサイズの磁性酸化鉄との複合体が 、また、米国特許第４,４５２,７７３号明細書には、粒子径が１０〜２０ｎｍの 磁性酸化鉄粒子をデキストランで被覆した磁性酸化鉄微小球が開示されている。BACKGROUND ART To improve the stability and toxicity of aqueous magnetic sols, complexes of polysaccharides or polysaccharide derivatives with magnetic metal oxides have been proposed. For example, Japanese Patent Publication No. 59-13521 (U.S. Pat. No. 4,101,435) discloses a complex of dextran or dextran modified with sodium hydroxide with colloidal-sized magnetic iron oxide, while U.S. Pat. No. 4,452,773 discloses magnetic iron oxide microspheres in which magnetic iron oxide particles with a particle diameter of 10 to 20 nm are coated with dextran.
更に、特開平３−１３４００１号公報（＝米国特許第５,２０４,４５７号明細 書）には、多糖類のカルボキシアルキルエーテルと粒子径が２〜１００ｎｍの磁 性金属酸化物との複合体が開示されている。これらの複合体はＭＲＩ造影剤、特 に肝臓用造影剤として有用であるが、その他の臓器又は部位のための造影剤とし て使用するためにはまだ改良すべき点がいくつかある。Furthermore, Japanese Patent Laid-Open Publication No. 3-134001 (U.S. Pat. No. 5,204,457) discloses a complex of a carboxyalkyl ether of a polysaccharide with a magnetic metal oxide having a particle size of 2 to 100 nm. These complexes are useful as MRI contrast agents, particularly for the liver, but several improvements are required for their use as contrast agents for other organs or regions.
そこで、本発明者らは、今回、カルボキシアルキルエーテル基と未置換もしく は置換アミノアルキルエーテル基の両置換基を有する多糖誘導体と磁性金属酸化 物との複合体を調製し、それを水性ゾルの形態で血流中に投与したところ、血液 クリアランスが遅く（血液からの排除が遅く）、かつ毒性も低く、核磁気共鳴イ メージング（以下、ＭＲＩと略記する） 造影剤、特に血管用造影剤として極めて有用であることを見い出し、本発明を完 成するに至った。Therefore, the present inventors have now prepared a complex of a polysaccharide derivative bearing both carboxyalkyl ether groups and unsubstituted or substituted aminoalkyl ether groups with a magnetic metal oxide. This complex was administered into the bloodstream in the form of an aqueous sol, and found to have slow blood clearance (slow elimination from the blood) and low toxicity, making it extremely useful as a contrast agent for nuclear magnetic resonance imaging (MRI), particularly as a vascular contrast agent, leading to the completion of the present invention.
発明の開示 かくして、本発明は、多糖をカルボキシアルキルエーテル化及び未置換もしく は置換アミノアルキルエーテル化してなる多糖誘導体（ここで該カルボキシ基及 び／又はアミノ基は塩の形態であってもよい）と磁性金属酸化物との複合体を提 供するものである。DISCLOSURE OF THE INVENTION Thus, the present invention provides a composite of a polysaccharide derivative (wherein the carboxyl and/or amino groups may be in the form of a salt) obtained by carboxyalkyl-etherifying and unsubstituted or substituted aminoalkyl-etherifying a polysaccharide, and a magnetic metal oxide.
以下、本発明の複合体についてさらに詳細に説明する。The complex of the present invention will be described in more detail below.
本発明の複合体を構成する一方の成分であるカルボキシアルキルエーテル基と 未置換もしくは置換アミノアルキルエーテル基の両置換基（ここで該カルボキシ 基及び／又はアミノ基は塩の形態であってもよい。以下、同様）を有する多糖誘 導体（以下、単に多糖エーテル誘導体という）は、多糖をそれ自体既知の方法で カルボキシアルキルエーテル化及び未置換もしくは置換アミノアルキルエーテル 化（以下、アミノアルキルエーテル化という）することにより製造することがで きる。カルボキシアルキルエーテル化及びアミノアルキルエーテル化の順序は特 に制限されないが、両置換基の置換率の測定が容易であるという観点からすると 、カルボキシアルキルエーテル化を先に行なうことが好ましい。A polysaccharide derivative (hereinafter simply referred to as a polysaccharide ether derivative) having both a carboxyalkyl ether group and an unsubstituted or substituted aminoalkyl ether group (wherein the carboxy group and/or amino group may be in the form of a salt; the same applies hereinafter), which is one of the components constituting the complex of the present invention, can be produced by subjecting a polysaccharide to carboxyalkyl etherification and unsubstituted or substituted aminoalkyl etherification (hereinafter referred to as aminoalkyl etherification) using a method known per se. The order of carboxyalkyl etherification and aminoalkyl etherification is not particularly limited, but from the viewpoint of ease of measuring the substitution rates of both substituents, it is preferable to perform carboxyalkyl etherification first.
多糖のカルボキシアルキルエーテル化は、それ自体既知の方法、例えば、米国 特許第２,７４６,９０６号明細書、米国特許第２,８７６,１６５号明細書、工業 化学会誌、６８、１５９０（１９６５年）等に記載の方法に従い、例えば、多糖 （これは下記の方法で予めアミノアルキルエーテル化されていてもよい）の水溶 液又は懸濁液にアルカリを添加した後、モノハロアルキルカルボン酸、特にモノ クロロアルキルカルボン酸 を加えて反応させることにより容易に実施することができる。また、多糖又はカ ルボキシアルキルエーテル化された多糖のアミノアルキルエーテル化もまた、そ れ自体既知の方法、例えば、Chemistry and Industry，１９５９，（１１），１ ４９０−１４９１、特公昭５９−３０１６１号公報等に記載の方法に従い、例え ば、多糖又は多糖のカルボキシアルキルエーテルの水溶液又は懸濁液にアルカリ を添加した後、未置換もしくは置換アミノアルキルハライドもしくは対応するエ ポキシド又は未置換もしくは置換アンモニオアルキルハライドもしくは対応する エポキシドを加えて反応することにより行なうことができる。 Carboxyalkyl etherification of polysaccharides can be easily carried out according to known methods, such as those described in U.S. Pat. Nos. 2,746,906 and 2,876,165, and Journal of Industrial Chemistry, 68 , 1590 (1965), for example, by adding an alkali to an aqueous solution or suspension of a polysaccharide (which may have been aminoalkyl-etherified in advance by the method described below), followed by the addition of a monohaloalkyl carboxylic acid, particularly a monochloroalkyl carboxylic acid, to effect the reaction. Aminoalkyl etherification of polysaccharides or carboxyalkyl-etherified polysaccharides can also be carried out according to known methods, such as those described in Chemistry and Industry, 1959, (11), 1, 490-1491, and JP-B No. 59-30161, for example, by adding an alkali to an aqueous solution or suspension of a polysaccharide or a carboxyalkyl ether of a polysaccharide, followed by the addition of an unsubstituted or substituted aminoalkyl halide or the corresponding epoxide, or an unsubstituted or substituted ammonioalkyl halide or the corresponding epoxide to effect the reaction.
所望の極限粘度をもつ多糖エーテル誘導体は、対応する極限粘度を持つ多糖を 出発原料に用いるか、或いは高粘度の多糖エーテル誘導体を予め調製した後に低 粘度化することにより得ることができる。出発原料として用いることができる多 糖としては中性多糖が好ましく、例えば、グルコースポリマーであるデキストラ ン、デンプン、グリコーゲン、セルロース、プルラン、カードラン、シゾフィラ ン、レンチナン、ペスタロチアン等；フラクトースポリマーであるイヌリン、レ バン等；マンノースポリマーであるマンナン等；ガラクトースポリマーであるア ガロース、ガラクタン等；キシロースポリマーであるキシラン、Ｌ−アラビノー スポリマーであるアラビナン等が挙げられ、中でもデキストラン、デンプン、セ ルロース、プルランが好ましく、特にデキストランが好ましい。また、原料の多 糖としては、多糖を予め適当な還元法、例えば、ナトリウムアマルガムを用いる 方法、パラジウムカーボンの存在下に水素ガスを用いる方法、水素化ホウ素ナト リウム（ＮａＢＨ4）を用いる方法等によって還元することにより得られる還元 多糖も好適に用いることがで きる。 Polysaccharide ether derivatives with desired intrinsic viscosity can be obtained by using a polysaccharide with the corresponding intrinsic viscosity as starting material, or by preparing a polysaccharide ether derivative with high viscosity in advance and then reducing its viscosity.Polysaccharides that can be used as starting material are preferably neutral polysaccharides, such as glucose polymers such as dextran, starch, glycogen, cellulose, pullulan, curdlan, schizophyllan, lentinan, and pestalotian; fructose polymers such as inulin and levan; mannose polymers such as mannan; galactose polymers such as agarose and galactan; xylan, a xylose polymer; and L-arabinose polymers such as arabinan.Among these, dextran, starch, cellulose, and pullulan are preferred, and dextran is particularly preferred.In addition, reduced polysaccharides can also be used as starting material, which can be obtained by reducing polysaccharides in advance using a suitable reduction method, such as using sodium amalgam, using hydrogen gas in the presence of palladium carbon, or using sodium borohydride ( NaBH4 ).
上記多糖のカルボキシアルキルエーテル化に使用し得るモノハロアルキルカル ボン酸としては、特に、ハロ低級アルキルカルボン酸、例えば、モノクロロ酢酸 、モノブロモ酢酸、３−クロロプロピオン酸、３−ブロモプロピオン酸、４−ク ロロ−ｎ−酪酸、４−ブロモ−ｎ−酪酸、２−クロロプロピオン酸、３−クロロ −ｎ−酪酸等が挙げられる。なお、本明細書において「低級」なる語はこの語が 付された基又は化合物の炭素数が６以下、好ましくは４以下であることを意味す る。かくして、本発明において好適な多糖のカルボキシアルキルエーテルには、 カルボキシメチルエーテル、カルボキシエチルエーテル、カルボキシプロピルエ ーテル等が含まれる。多糖カルボキシアルキルエーテルのカルボキシル基は塩の 形態であってもよく、その塩としては、例えば、アルカリ金属塩、アミン塩、ア ンモニウム塩等が挙げられ、好ましくはナトリウム塩である。Monohaloalkylcarboxylic acids that can be used in the carboxyalkyl etherification of the polysaccharides described above include, in particular, halo-lower alkylcarboxylic acids, such as monochloroacetic acid, monobromoacetic acid, 3-chloropropionic acid, 3-bromopropionic acid, 4-chloro-n-butyric acid, 4-bromo-n-butyric acid, 2-chloropropionic acid, and 3-chloro-n-butyric acid. As used herein, the term "lower" refers to a group or compound having 6 or fewer carbon atoms, preferably 4 or fewer. Thus, suitable polysaccharide carboxyalkyl ethers in the present invention include carboxymethyl ether, carboxyethyl ether, carboxypropyl ether, and the like. The carboxyl group of the polysaccharide carboxyalkyl ether may be in the form of a salt, such as an alkali metal salt, an amine salt, or an ammonium salt, preferably a sodium salt.
また、多糖（これは予めカルボキシアルキルエーテル化されていてもよい）の アミノアルキルエーテル化に使用しうる未置換もしくは置換アミノアルキルハラ イドもしくは対応するエポキシドとしては、例えば、下記式 式中、 Ａ1はアルキレン基を表わし、 Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立に水素原子又は炭化水素基（例えば、ア ルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアル キル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル等）を表わすか、或い はＲ1とＲ2はそれらが結合している窒素原子と一緒になって含窒素複素環（例え ば、アジリジン、ピロリジン、ピロリン、ピロール、ピペリジン、モルホリン、 インドール、インドリン、イソインドリン等）を形成し、 で示されるもの、好ましくは、Ａ1が低級アルキレン基を表わし、Ｒ1及びＲ2が それぞれ独立に水素原子又は低級アルキル基を表わすか、或いはＲ1とＲ2がそれ らが結合している窒素原子と一緒になって５もしくは６員の含窒素複素環（例え ばピロリジン、ピロリン、ピペリジン、モルホリン等）を形成しているものが包 含される。具体的には、例えば、アミノメチルクロライド、アミノメチルブロマ イド、アミノエチルクロライド、アミノプロピルブロマイド、メチルアミノメチ ルクロライド、メチルアミノメチルブロマイド、エチルアミノエチルクロライド 、エチルアミノエチルブロマイド、エチルアミノプロピルクロライド、プロピル アミノプロピルクロライド、ジメチルアミノメチルクロライド、ジメチルアミノ エチルクロライド、ジエチルアミノメチルクロライド、ジエチルアミノエチルク ロライド、ジエチルアミノエチルブロマイド、ジエチルアミノプロピルクロライ ド、ジプロピルアミノエチルブロマイド、ジプロピルアミノプロピルクロライド 、１−ピロリジニルメチルクロライド、２−（１−ピロリジニル）エチルクロラ イド、３−（１−ピロリジニル）プロピルクロライド、１−ピペリジニルメチル クロライド、２− （１−ピペリジニル）エチルクロライド、３−（１−ピペリジニル）プロピルク ロライド等並びにこれらの対応するエポキシドが挙げられる。 Furthermore, examples of unsubstituted or substituted aminoalkyl halides or corresponding epoxides that can be used for aminoalkyl etherification of polysaccharides (which may be previously carboxyalkyl etherified) include those represented by the following formula: In the formula, A1 represents an alkylene group; R1 and R2 each independently represent a hydrogen atom or a hydrocarbon group (e.g., alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkylalkyl, cycloalkenylalkyl, aryl, aralkyl, etc.), or R1 and R2 together with the nitrogen atom to which they are bonded form a nitrogen-containing heterocycle (e.g., aziridine, pyrrolidine, pyrroline, pyrrole, piperidine, morpholine, indole, indoline, isoindoline, etc.); and preferably, A 1 represents a lower alkylene group, and R 1 and R 2 each independently represent a hydrogen atom or a lower alkyl group, or R 1 and R 2 together with the nitrogen atom to which they are bonded form a 5- or 6-membered nitrogen-containing heterocycle (e.g., pyrrolidine, pyrroline, piperidine, morpholine, etc.). Specific examples include aminomethyl chloride, aminomethyl bromide, aminoethyl chloride, aminopropyl bromide, methylaminomethyl chloride, methylaminomethyl bromide, ethylaminoethyl chloride, ethylaminoethyl bromide, ethylaminopropyl chloride, propylaminopropyl chloride, dimethylaminomethyl chloride, dimethylaminoethyl chloride, diethylaminomethyl chloride, diethylaminoethyl chloride, diethylaminoethyl bromide, diethylaminopropyl chloride, dipropylaminoethyl bromide, dipropylaminopropyl chloride, 1-pyrrolidinylmethyl chloride, 2-(1-pyrrolidinyl)ethyl chloride, 3-(1-pyrrolidinyl)propyl chloride, 1-piperidinylmethyl chloride, 2-(1-piperidinyl)ethyl chloride, 3-(1-piperidinyl)propyl chloride, and the corresponding epoxides thereof.
また、多糖（これは予めカルボキシアルキルエーテル化されていてもよい）の アミノアルキルエーテル化に使用しうる未置換もしくは置換アンモニオアルキル ハライドもしくは対応するエポキシドとしては、例えば、下記式 式中、 Ａ2はアルキレン基を表わし、 Ｒ3、Ｒ4及びＲ5はそれぞれ独立に水素原子又は炭化水素基（例えば、アル キル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキ ル、シクロアルケニルアルキル、アリール、アラルキル等）を表わすか、或いは Ｒ3、Ｒ4及びＲ5のうちの少なくとも２つはそれらが結合している窒素原子と一 緒になって含窒素複素環（例えば、アジリジン、ピロリジン、ピロリン、ピロー ル、ピペリジン、モルホリン、ピリジン、インドール等）を形成し、 Ｚ-はアニオンを表わす、 で示されるもの、好ましくは、Ａ2が低級アルキレン基を表わし、Ｒ3、Ｒ4及び Ｒ5がそれぞれ独立に水素原子又は低級アルキル基を表わすか、或いはＲ3、Ｒ4 及びＲ5のうちの少くとも２つはそれらが結合している 窒素原子と一緒になって５もしくは６員の含窒素複素環（例えば、ピロリジン、 ピロリン、ピペリジン、モルホリン、ピリジン等）を形成しているものが包含さ れる。具体的には、例えば（ただし、アニオン部分の表現は省略して記載する） 、２−クロロエチルトリメチルアンモニウム、２−クロロエチルトリエチルアン モニウム、２−クロロエチルトリプロピルアンモニウム、２−クロロエチルトリ ｎ−ブチルアンモニウム、３−クロロプロピルトリメチルアンモニウム、３−ク ロロプロピルトリエチルアンモニウム、３−クロロプロピルトリプロピルアンモ ニウム、３−クロロプロピルトリｎ−ブチルアンモニウム、３−クロロ−２−ヒ ドロキシプロピルトリメチルアンモニウム、３−クロロ−２−ヒドロキシプロピ ルトリエチルアンモニウム、３−クロロ−２−ヒドロキシプロピルトリｎ−ブチ ルアンモニウム、３−クロロ−２−ヒドロキシプロピルトリｉｓｏ−ブチルアン モニウム、３−ブロモ−２−ヒドロキシプロピルトリメチルアンモニウム、３− ブロモ−２−ヒドロキシプロピルトリエチルアンモニウム、３−ブロモ−２−ヒ ドロキシプロピルトリｎ−ブチルアンモニウム、３−ブロモ−２−ヒドロキシプ ロピルトリｉｓｏ−ブチルアンモニウム等並びにこれらの対応するエポキシドが 挙げられる。Furthermore, examples of unsubstituted or substituted ammonioalkyl halides or corresponding epoxides that can be used for aminoalkyl etherification of polysaccharides (which may be pre-carboxyalkyl etherified) include those represented by the following formula: During the ceremony, A2represents an alkylene group, R3, R4and R5each independently represents a hydrogen atom or a hydrocarbon group (e.g., alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkenyl, cycloalkylalkyl, cycloalkenylalkyl, aryl, aralkyl, etc.), or3, R4and R5At least two of these, together with the nitrogen atom to which they are attached, form a nitrogen-containing heterocycle (e.g., aziridine, pyrrolidine, pyrroline, pyrrole, piperidine, morpholine, pyridine, indole, etc.),Z-represents an anion, preferably A2represents a lower alkylene group, R3, R4and R5each independently represents a hydrogen atom or a lower alkyl group, or R3, R4 and R5At least two of these, together with the nitrogen atom to which they are attached, form a 5- or 6-membered nitrogen-containing heterocycle (e.g., pyrrolidine, pyrroline, piperidine, morpholine, pyridine, etc.). Specific examples (where the anion portion is omitted) include 2-chloroethyltrimethylammonium, 2-chloroethyltriethylammonium, 2-chloroethyltripropylammonium, 2-chloroethyltri-n-butylammonium, 3-chloropropyltrimethylammonium, 3-chloropropyltriethylammonium, 3-chloropropyltripropylammonium, 3-chloropropyltri-n-butylammonium, 3-chloro-2-hydroxypropyltrimethylammonium, 3-chloro-2-hydroxypropyltriethylammonium, 3-chloro-2-hydroxypropyltri-n-butylammonium, 3-chloro-2-hydroxypropyltriiso-butylammonium, 3-bromo-2-hydroxypropyltrimethylammonium, 3-bromo-2-hydroxypropyltriethylammonium, 3-bromo-2-hydroxypropyltri-n-butylammonium, 3-bromo-2-hydroxypropyltriiso-butylammonium, and the like, as well as their corresponding epoxides.
上記式（Ｉ）又は（ＩＩ）のエーテル化剤の使用により、多糖のヒドロキシ基 が下記式 又は 式中、 Ａ3及びＡ4はそれぞれ場合によりヒドロキシ基で置換されていてもよいアル キレン基を表わし、 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5及びＺ-は前記定義のとおりである、 で示されるアミノアルキルエーテル基に置換された多糖エーテル誘導体を得るこ とができる。 By using the etherifying agent of the above formula (I) or (II), the hydroxy groups of the polysaccharide are converted to the following formula: or In the formula, A3 and A4 each represent an alkylene group which may be optionally substituted with a hydroxy group, and R1 , R2 , R3 , R4 , R5 and Z- are as defined above, and a polysaccharide ether derivative substituted with an aminoalkyl ether group represented by the formula: can be obtained.
該アミノアルキルエーテル基としては、特に、下記式 又は 式中、 Ａ31及びＡ41はそれぞれ場合によりヒドロキシ基で置換されていてもよい低 級アルキレン基を表わし、 Ｒ11及びＲ21はそれぞれ独立に水素原子又は低級アルキル基を表わすか、或 いはＲ11とＲ21はそれらが結合している窒素原子と一緒になって５もしくは６員 の含窒素複素環を形成し、 Ｒ31、Ｒ41及びＲ51はそれぞれ独立に水素原子又は低級アルキル基を表わす か、或いはＲ31、Ｒ41及びＲ51のうちの少くとも２つはそれらが結合している窒 素原子と一緒になって５もしくは６員の含窒素複素環を形成し、 Ｚ-はアニオンを表わす、 で示されるものが好適である。 The aminoalkyl ether group is particularly a group represented by the following formula: or In the formula, A 31 and A 41 each represent a lower alkylene group optionally substituted with a hydroxy group; R 11 and R 21 each independently represent a hydrogen atom or a lower alkyl group, or R 11 and R 21 together with the nitrogen atom to which they are bonded form a 5- or 6-membered nitrogen-containing heterocycle; R 31 , R 41 and R 51 each independently represent a hydrogen atom or a lower alkyl group, or at least two of R 31 , R 41 and R 51 together with the nitrogen atom to which they are bonded form a 5- or 6-membered nitrogen-containing heterocycle; and Z - represents an anion.
しかして、本発明において特に好適な多糖のアミノアルキルエーテルとしては 、ジメチルアミノメチルエーテル、ジエチルアミノエチルエーテル、ジプロピル アミノプロピルエーテル、ジエチルアミノプロピルエーテル、２−（１−ピロリ ジニル）エチルエーテル、トリメチルアンモニオエチルエーテル、トリエチルア ンモニオエチルエーテル、トリプロピルアンモニオエチルエーテル、トリメチル アンモニオプロピルエーテル、トリエチルアンモニオプロピルエーテル、トリメ チルアンモニオ−２−ハイドロキシプロピルエーテル、トリエチルアンモニオ− ２−ハイドロキシプロピルエーテル等が挙げられる。Particularly preferred aminoalkyl ethers of polysaccharides in the present invention include dimethylaminomethyl ether, diethylaminoethyl ether, dipropylaminopropyl ether, diethylaminopropyl ether, 2-(1-pyrrolidinyl)ethyl ether, trimethylammonioethyl ether, triethylammonioethyl ether, tripropylammonioethyl ether, trimethylammoniopropyl ether, triethylammoniopropyl ether, trimethylammonio-2-hydroxypropyl ether, triethylammonio-2-hydroxypropyl ether, and the like.
多糖アミノアルキルエーテルの未置換もしくは置換アミノ基は塩の形で存在す ることができ、その塩の中には、酸付加塩のみならず、前記式（ＩＶ）又は（Ｉ Ｖ−１）で示されるようなアンモニウム塩をも包含される。しかして、酸付加塩 としては、無機酸塩として、例えば、塩酸塩、フッ化水素酸塩、臭化水素酸塩、 硝酸塩等；有機酸塩として、例えば、ギ酸塩、酢酸塩等が挙げられる。The unsubstituted or substituted amino group of the polysaccharide amino alkyl ether can exist in the form of a salt, which includes not only acid addition salts but also ammonium salts such as those represented by formula (IV) or (IV-1). Acid addition salts include inorganic acid salts such as hydrochloride, hydrofluoride, hydrobromide, and nitrate; and organic acid salts such as formate and acetate.
なお、前記式（ＩＶ）又は（ＩＶ−１）で示されるようなアンモニウム塩の形 態のアミノアルキルエーテル基を含む多糖エーテル誘導体は、エーテル化剤とし て前記式（ＩＩ）の化合物を用いて製造することができ、或いは前記式（Ｉ）の 化合物でエーテル化した後、そのアミノアルキルエーテル基のアミノ基を例えば 、未置換もしくは置換アルキルハライドと反応させることによりアンモニウム塩 の形に変えることによって製造することもできる。The polysaccharide ether derivatives containing aminoalkyl ether groups in the form of ammonium salts, such as those represented by formula (IV) or (IV-1), can be produced using the compound of formula (II) as an etherifying agent, or can be produced by etherifying with the compound of formula (I) and then converting the amino group of the aminoalkyl ether group into the form of an ammonium salt, for example, by reacting it with an unsubstituted or substituted alkyl halide.
さらに、カルボキシアルキルエーテル基とアミノアルキルエーテル基の両置換 基を有する多糖エーテル誘導体は、カルボキシル基とアミノ甚とが分子内で塩を 形成していてもよい。Furthermore, in the polysaccharide ether derivatives having both carboxyalkyl ether and aminoalkyl ether substituents, the carboxyl group and the amino group may form a salt within the molecule.
本発明に用いる多糖エーテル誘導体は水溶性であることが望ましく、その極限 粘度は一般に約０.０２〜約０.５ｄｌ／ｇ、好ましくは約０.０４〜約０.２ｄｌ ／ｇ、更に好ましくは約０.０６〜約０.１ｄｌ／ｇの範囲内にあることができる 。The polysaccharide ether derivatives used in the present invention are desirably water-soluble, and their intrinsic viscosities generally range from about 0.02 to about 0.5 dl/g, preferably from about 0.04 to about 0.2 dl/g, and more preferably from about 0.06 to about 0.1 dl/g.
また、多糖エーテル誘導体の両置換基の置換率はそれぞれ一般に約１％〜約３ ０％、特に約２％〜約１６％、更に特に約３％〜約１０％の範囲内にあることが 好ましく、そして両置換基の置換率はほぼ同じ程度であることが好ましく、具体 的には置換率の差、即ち、（アミノアルキルエーテル基の置換率−カルボキシア ルキルエーテル基の置換率）は通常４％未満、好ましくは約−１％〜約３％、更 に好ましくは約０％〜約２％の範囲内にあるのが好都合である。なお、本明細書 において、置換率は多糖の全水酸基に対する各置換基の置換百分率を意味する。The substitution rates of both substituents in the polysaccharide ether derivative are generally within the range of about 1% to about 30%, particularly about 2% to about 16%, and even more particularly about 3% to about 10%. It is also preferred that the substitution rates of both substituents are approximately the same. Specifically, the difference in substitution rate, i.e., (substitution rate of aminoalkyl ether group - substitution rate of carboxyalkyl ether group), is generally less than 4%, preferably within the range of about -1% to about 3%, and even more preferably within the range of about 0% to about 2%. In this specification, the substitution rate refers to the percentage of each substituent relative to the total hydroxyl groups of the polysaccharide.
本明細書において、多糖エーテル誘導体の極限粘度及び両置換基の置換率は次 のようにして測定したときの値である。In this specification, the intrinsic viscosity and the substitution ratios of both substituents of the polysaccharide ether derivatives are values measured as follows.
極限粘度［η］（lntrinsic viscosity）の測定法： 日本薬局方（第１２改正、１９９１年）、一般試験法、第３５項粘度測定法に 記載されている方法に従って、２５℃において測定する。その際に用いる溶媒は 、塩の形態の多糖エーテル誘導体の両置換基の対イオンと同じイオンからなる１ Ｍ塩水溶液、通常は１Ｍ食塩水溶液である。 Measurement of intrinsic viscosity [η]: Measure at 25°C according to the method described in Section 35, Viscosity Measurement, General Test Methods, of the Japanese Pharmacopoeia (12th edition, 1991). The solvent used is a 1 M aqueous salt solution, usually a 1 M saline solution, which contains the same ions as the counter ions of both substituents of the polysaccharide ether derivative in the salt form.
カルボキシアルキルエーテル基の置換率の測定： １つの方法によれば、多糖エーテル誘導体のカルボキシアルキルエー テル基の置換率は、中間体であるアミノアルキルエーテル化する前の多糖カルボ キシアルキルエーテルを用いて測定することができる。即ち、多糖カルボキシア ルキルエーテルの塩を水に溶解し、これを適当に希釈して測定試料液とする。試 料液のカルボキシル基の対イオンである金属イオンの標準試料（濃度既知）につ いて、日本薬局方（第１２改正、１９９１年）、一般試験法、第２０項原子吸光 光度法に記載される方法により金属含量を測定し、多糖カルボキシアルキルエー テルの置換率を計算する。 Measurement of the substitution rate of carboxyalkyl ether groups: According to one method, the substitution rate of carboxyalkyl ether groups in a polysaccharide ether derivative can be measured using the polysaccharide carboxyalkyl ether intermediate before aminoalkyl etherification. Specifically, a salt of the polysaccharide carboxyalkyl ether is dissolved in water and diluted appropriately to prepare a measurement sample solution. The metal content of a standard sample (with known concentration) of metal ions, which serve as counterions to the carboxyl groups in the sample solution, is measured by the method described in Section 20, Atomic Absorption Spectrophotometry, General Test Methods, in the Japanese Pharmacopoeia (12th Edition, 1991), and the substitution rate of the polysaccharide carboxyalkyl ether is calculated.
多糖エーテル誘導体のカルボキシアルキルエーテル基の置換率は赤外線吸収法 でも測定することができる。即ち、カルボキシアルキルエーテル基の置換率を種 々変えて作成した多糖カルボキシアルキルエーテル試料について上記の原子吸光 光度法で置換率を測定すると同時に、上記試料の赤外吸収スペクトル図の１６０ ０ｃｍ-1付近のピークの吸光度を測定し、原子吸光光度法による置換率と赤外吸 収スペクトル図の１６００ｃｍ-1付近のピークの吸光度との関係をプロットした 標準曲線を作成しておき、置換率が未知の多糖エーテル誘導体の赤外スペクトル 図の１６００ｃｍ-1付近のピークの吸光度を読みとり、上記標準曲線に当てはめ ることにより、該未知試料の置換率を決定することができる。 The substitution rate of the carboxyalkyl ether group in a polysaccharide ether derivative can also be measured by infrared absorption spectrometry. Specifically, polysaccharide carboxyalkyl ether samples prepared with various substitution rates of the carboxyalkyl ether group are measured by atomic absorption spectrometry. At the same time, the absorbance of the peak near 1600 cm in the infrared absorption spectrum of each sample is measured. A standard curve is then prepared by plotting the relationship between the substitution rate measured by atomic absorption spectrometry and the absorbance of the peak near 1600 cm in the infrared absorption spectrum. The absorbance of the peak near 1600 cm in the infrared spectrum of a polysaccharide ether derivative with an unknown substitution rate can then be read and applied to the standard curve to determine the substitution rate of the unknown sample.
アミノアルキルエーテル基の置換率の測定： 多糖エーテル誘導体について、日本薬局方（第１２改正、１９９１年）、一般 試験法、第３０項、窒素定量法に記載の方法に従って、その窒素含量を測定し、 アミノアルキルエーテル基の置換率を計算する。 Measurement of substitution rate of aminoalkyl ether group: The nitrogen content of the polysaccharide ether derivative is measured according to the method described in the Japanese Pharmacopoeia (12th edition, 1991), General Test Method, Section 30, Nitrogen Determination Method, and the substitution rate of the aminoalkyl ether group is calculated.
本発明の複合体を構成する他方の成分である磁性金属酸化物としては粒子径が 小さく、従って一般に保磁力の大きさが小さい強磁性体が用い られる。The magnetic metal oxide, which is the other component constituting the composite of the present invention, is a ferromagnetic material having a small particle size and therefore generally a small coercive force.
そのような磁性金属酸化物としては、例えば、下記式 (ＭIIＯ)l・Ｍ2 IIIＯ3 （Ｖ） 式中、 ＭIIは２価の金属原子を表わし、 ＭIIIは３価の金属原子を表わし、 ｌは０〜１の範囲内の実数である、 で示されるものを挙げることができる。上記式（Ｖ）において、２価の金属原子 ＭIIとしては、例えば、マグネシウム、カルシウム、マンガン、鉄、ニッケル、 コバルト、銅、亜鉛、ストロンチュウム、バリウム等が挙げられ、これらは単独 で使用することもでき、あるいは２種以上併用することもできる。また、３価の 金属原子ＭIIIとしては、例えば、アルミニウム、鉄、イットリウム、ネオジウ ム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム等が挙げられ、これらはそれぞれ 単独で使用するか、あるいは２種以上組み合わせて用いることができる。 Examples of such magnetic metal oxides include those represented by the following formula: (M II O) l.M 2 III O 3 (V), where M II represents a divalent metal atom, M III represents a trivalent metal atom, and l is a real number ranging from 0 to 1. In the formula (V), examples of the divalent metal atom M II include magnesium, calcium, manganese, iron, nickel, cobalt, copper, zinc, strontium, and barium, which can be used alone or in combination of two or more. Examples of the trivalent metal atom M III include aluminum, iron, yttrium, neodymium, samarium, europium, and gadolinium, which can be used alone or in combination of two or more.
上記式（Ｉ）の化合物中、ＭIIIが３価の鉄である磁性金属酸化物、すなわち 下記式 (ＭIIＯ)m・Ｆｅ2Ｏ3 （Ｖ−１） 式中、 ＭIIは上記と同義であり、 ｍは０〜１の範囲内の実数である、 で示されるフェライトが好適である。ここで、ＭIIとしては前記式（Ｖ）で例示 したと同じ金属原子を挙げることができる。特に、ＭIIが２価の鉄である場合の 上記式（Ｖ−１）の磁性金属酸化物、すなわち下記式 (ＦｅＯ)n・Ｆｅ2Ｏ3 （Ｖ−２） 式中、ｎは０≦ｎ≦１の範囲内の実数である。 Among the compounds of formula (I) above, magnetic metal oxides in which M III is trivalent iron, i.e., ferrites represented by the following formula: (M II O) m ·Fe 2 O 3 (V-1) where M II is as defined above and m is a real number in the range of 0 to 1, are preferred. Here, examples of M II include the same metal atoms as exemplified in formula (V) above. In particular, magnetic metal oxides of formula (V-1) in which M II is divalent iron, i.e., the following formula: (FeO) n ·Fe 2 O 3 (V-2) where n is a real number in the range of 0≦n≦1, are preferred.
で示される磁性酸化鉄もまた、本発明において好適な磁性金属酸化物として挙げ ることができる。なお、上記式（Ｖ−２）において、ｎ＝０の場合はγ−酸化鉄 （γ−Ｆｅ2Ｏ3）であり、また、ｎ＝１の場合はマグネタイト（Ｆｅ3Ｏ4）であ る。なお、本発明において磁性金属酸化物には、結晶水を有する磁性金属酸化物 も包含される。The magnetic metal oxide represented by the formula (V-2) below can also be cited as a suitable magnetic metal oxide in the present invention. In the above formula (V-2), when n = 0, it is γ -iron oxide (γ- Fe2O3 ), and when n = 1, it is magnetite ( Fe3O4 ). In the present invention, the magnetic metal oxide also includes a magnetic metal oxide having water of crystallization.
以上述べたように磁性金属酸化物は強磁性体であることができ、一般に、２０ ℃において０.５テスラ（５０００エルステッド）の磁場で金属１ｇ当り約１〜 約１５０ｅｍｕ、好ましくは約１０〜約１５０ｅｍｕ、更に好ましくは約３０〜 約１５０ｅｍｕの範囲内の磁化を有することが望ましい。As described above, the magnetic metal oxide may be ferromagnetic and generally has a magnetization within the range of about 1 to about 150 emu, preferably about 10 to about 150 emu, and more preferably about 30 to about 150 emu per gram of metal in a magnetic field of 0.5 Tesla (5000 oersted) at 20°C.
磁性金属酸化物は通常超微粒子状で前述した多糖エーテル誘導体と反応せしめ られる。一般に、磁性体粒子の磁化は粒子径の減少に従って減少し、粒子径が１ ０ｎｍ以下になるとその傾向が強くなる。また、上記磁性金属酸化物の保磁力も 、粒子径の減少に伴って低下するので、本発明の複合体は保磁力が小さく、実質 的に超常磁性である。しかして、本発明における磁性金属酸化物の粒子直径は、 一般に、約２〜約２０ｎｍ、好ましくは約３〜約１５ｎｍ、更に好ましくは約３ 〜約１０ｎｍの範囲内にあることができる。The magnetic metal oxide is usually in the form of ultrafine particles when reacted with the polysaccharide ether derivative. Generally, the magnetization of magnetic particles decreases as the particle size decreases, and this tendency becomes stronger when the particle size is 10 nm or less. Furthermore, the coercive force of the magnetic metal oxide also decreases as the particle size decreases, so the composite of the present invention has a low coercive force and is essentially superparamagnetic. Therefore, the particle diameter of the magnetic metal oxide in the present invention can generally be within the range of about 2 to about 20 nm, preferably about 3 to about 15 nm, and more preferably about 3 to about 10 nm.
本発明の多糖エーテル誘導体と磁性金属酸化物の複合体は、大別して次の二つ の方法により製造することができる。The composite of the polysaccharide ether derivative and the magnetic metal oxide of the present invention can be produced by the following two methods:
第１の方法は、あらかじめ複合体の芯になる磁性金属酸化物粒子を含む水性ゾ ルを調製し、該エーテル化物と反応させる方法である。第２の 方法は、水系で該エーテル化物の存在下に２価の金属塩と３価の金属塩と塩基を 撹拌下に混合及び反応させる方法である。以下、これらの方法についてさらに詳 しく説明する。The first method involves preparing an aqueous sol containing magnetic metal oxide particles that will form the core of the composite, and then reacting the sol with the etherified compound. The second method involves mixing and reacting a divalent metal salt, a trivalent metal salt, and a base in the presence of the etherified compound in an aqueous system with stirring. These methods are described in more detail below.
第１の方法においては、まず、磁性粒子を含む水性ゾル（以下、原料ゾルとい う）を調製し、これを多糖エーテル誘導体を反応させて複合体を生成せしめる。In the first method, an aqueous sol containing magnetic particles (hereinafter referred to as the raw material sol) is first prepared, and then this is reacted with a polysaccharide ether derivative to form a composite.
原料ゾル中の磁性粒子の粒子径及び磁性は得られる複合体に含まれる磁性粒子の それとほとんど同じである。従って、目的に応じた物性を有する磁性粒子を含む 原料ゾルをあらかじめ調製することが望ましい。磁性粒子を含む原料ゾルの調製 はそれ自体既知の方法で行うことができる。例えば、アルカリ共沈法により行う ことができ、具体的には例えば、第１鉄鉱酸塩と第２鉄鉱酸塩をモル比で約１： ３〜約２：１で含む水溶液とＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ4ＯＨ等の塩基とをｐＨ７ 〜１２になるように混合し、必要なら加熱熟成し、次いで生成する磁性酸化鉄粒 子を分離、水洗した後、水に再分散し、塩酸等の鉱酸を液のｐＨが１〜３となる まで加えることにより、磁性酸化鉄水性ゾルを得ることができる。この水性ゾル は必要に応じて、透析、限外濾過、遠心分離等により精製及び／又は濃縮するこ とができる。この方法により得られる磁性酸化鉄粒子の直径は通常約５〜約２０ ｎｍの範囲内にある。The particle size and magnetic properties of the magnetic particles in the raw sol are almost the same as those of the magnetic particles contained in the resulting composite. Therefore, it is desirable to prepare a raw sol containing magnetic particles with the desired physical properties in advance. The raw sol containing magnetic particles can be prepared by a known method. For example, it can be performed by alkali coprecipitation. Specifically, an aqueous solution containing a ferrous mineral acid salt and a ferric mineral acid salt in a molar ratio of about 1:3 to about 2:1 is mixed with a base such as NaOH, KOH, or NH 4 OH to adjust the pH to 7 to 12, and if necessary, heated and aged. The resulting magnetic iron oxide particles are then separated, washed with water, and redispersed in water. A mineral acid such as hydrochloric acid is added until the pH of the solution reaches 1 to 3, thereby obtaining a magnetic iron oxide aqueous sol. This aqueous sol can be purified and/or concentrated by dialysis, ultrafiltration, centrifugation, etc., as necessary. The diameter of the magnetic iron oxide particles obtained by this method is usually within the range of about 5 to about 20 nm.
上記の方法において、第１鉄塩の一部又は全部を鉄以外の２価金属塩に変えて 用いれば、同様にしてフェライト水性ゾルを得ることができる。該ゾル中に含ま れるフェライト粒子の直径は通常約５〜約２０ｎｍの範囲内にある。使用できる ２価金属塩としては、マグネシウム、カルシウム、マンガン、鉄、ニッケル、コ バルト、銅、亜鉛、ストロンチュウム、バリウム等の金属の鉱酸塩を例示するこ とができ、これらは１種のみま たは複数種を同時に用いてもよい。In the above method, a ferrite aqueous sol can be obtained in the same manner by replacing part or all of the ferrous salt with a divalent metal salt other than iron. The diameter of the ferrite particles contained in the sol is typically within the range of about 5 to about 20 nm. Usable divalent metal salts include mineral acid salts of metals such as magnesium, calcium, manganese, iron, nickel, cobalt, copper, zinc, strontium, and barium, and these may be used alone or in combination.
また、原料ゾルは、特公昭４２−２４６６３号公報（＝米国特許第３,４８０, ５５５号明細書）に開示されている方法によっても調製することができる。例え ば、強塩基性イオン交換樹脂スラリーに撹拌下に、第１鉄塩と第２鉄塩を約１： ２のモル比で含む水溶液を、液のｐＨを８〜９に保ちながら添加した後、塩酸等 の鉱酸をｐＨ１〜３になるまで加え、次いで樹脂を濾別し、必要により透析、限 外濾過等により精製及び／又は濃縮すれば、磁性酸化鉄の水性ゾルが得られる。The raw material sol can also be prepared by the method disclosed in Japanese Patent Publication No. 42-24663 (U.S. Pat. No. 3,480,555). For example, an aqueous solution containing a ferrous salt and a ferric salt in a molar ratio of approximately 1:2 is added to a strongly basic ion exchange resin slurry with stirring while maintaining the pH of the solution at 8 to 9, and then a mineral acid such as hydrochloric acid is added until the pH reaches 1 to 3. The resin is then filtered off, and the resulting solution is purified and/or concentrated, as necessary, by dialysis, ultrafiltration, or the like, to obtain an aqueous sol of magnetic iron oxide.
含まれる磁性酸化鉄の直径は通常約５〜約１５ｎｍの範囲内にある。The diameter of the included magnetic iron oxide is typically in the range of about 5 to about 15 nm.
こうして得られる原料ゾルと多糖エーテル誘導体の水溶液とを混合反応させる ことにより複合体を生成させることができる。より具体的には、例えば、原料ゾ ルに含まれる磁性粒子１重量部（金属換算で）に対し、多糖エーテル誘導体を一 般に、１〜１０重量部、好ましくは３〜５重量部の割合で反応させる。反応液中 の磁性粒子の濃度は、特に制限されるものではないが、通常、金属換算で０.１ 〜１０ｗ／ｖ％、好ましくは１〜５ｗ／ｖ％の範囲内とすることができる。反応 は一般に室温〜１２０℃の範囲内において１０分〜１０時間行うことができるが 、便宜的には約１時間程度還流加熱すれば十分である。冷却後、必要に応じて精 製及び／又は濃度調整を行うことができる。例えば、得られる反応液にメタノー ル、エタノール、アセトン、エチルエーテル等の複合体に対する貧溶媒を添加し 、該複合体を優先的に沈澱析出させ、析出物を分離し、次いで析出物を水に再溶 解し、流水透析し、必要に応じて減圧濃縮し、所望の純度及び濃度を有する複合 体の水性ゾルを得ることができ、また、限外濾過により生成する複合体から未反 応エーテル化物及び低分子化合 物を分離する操作を繰り返し、所望の純度及び濃度を有する複合体の水性ゾルを 得ることができる。この際所望により、上記工程の途中及び／または最後に、ｐ Ｈ調整、遠心分離及び／または濾過の工程を入れることもできる。こうして得ら れる本発明の複合体の水性ゾルをそれ自体既知の方法で乾燥し、例えば好ましく は凍結乾燥することにより、本発明の複合体を粉末として取得することもできる 。The resulting starting sol is mixed with an aqueous solution of a polysaccharide ether derivative to produce a composite. More specifically, for example, 1 part by weight (in terms of metal) of magnetic particles contained in the starting sol is reacted with 1 to 10 parts by weight, preferably 3 to 5 parts by weight, of the polysaccharide ether derivative. The concentration of magnetic particles in the reaction solution is not particularly limited, but is typically in the range of 0.1 to 10% w/v, preferably 1 to 5% w/v, in terms of metal. The reaction can generally be carried out at room temperature to 120°C for 10 minutes to 10 hours, although reflux heating for approximately 1 hour is sufficient for convenience. After cooling, purification and/or concentration adjustment can be performed as necessary. For example, a poor solvent for the complex, such as methanol, ethanol, acetone, or ethyl ether, can be added to the resulting reaction solution to preferentially precipitate the complex. The precipitate can then be separated and redissolved in water, subjected to flow dialysis, and, if necessary, concentrated under reduced pressure to obtain an aqueous sol of the complex with the desired purity and concentration. Alternatively, the process of separating unreacted etherified compounds and low-molecular-weight compounds from the resulting complex by ultrafiltration can be repeated to obtain an aqueous sol of the complex with the desired purity and concentration. If desired, pH adjustment, centrifugation, and/or filtration steps can be added during and/or at the end of the process. The resulting aqueous sol of the complex of the present invention can be dried by a method known per se, preferably by lyophilization, to obtain the complex as a powder.
本発明の複合体を製造するための第２の方法は、水系で多糖エーテル誘導体の 存在下に、２価の金属鉱酸塩及び３価の金属鉱酸塩の混合金属塩溶液と塩基溶液 とを混合反応させ、１工程で本発明の複合体を得る方法である。この第２の方法 は更に添加順序により、（Ａ）該エーテル化物の水溶液に混合金属塩水溶液を添 加し、次いで塩基水溶液を添加して反応させる方法；（Ｂ）該エーテル化物の水 溶液に塩基水溶液を添加し、次いで混合金属塩水溶液を添加して反応させる方法 ；（Ｃ）塩基水溶液に該エーテル化物の水溶液と混合金属塩水溶液を添加して反 応させる方法；（Ｄ）混合金属塩水溶液に塩基水溶液と該エーテル化物の水溶液 の混液を添加して反応させる方法等に分類することができる。これら（Ａ）、（ Ｂ）、（Ｃ）及び（Ｄ）法は添加順序が相違するのみで、他の条件は本質的には 変わらないが、少なくとも得られる複合体の物性を幅広く変えられる点で（Ａ） 法が好ましい。The second method for producing the composite of the present invention involves mixing and reacting a mixed metal salt solution of a divalent metal mineral acid salt and a trivalent metal mineral acid salt with a base solution in an aqueous system in the presence of a polysaccharide ether derivative to obtain the composite of the present invention in a single step. This second method can be further classified based on the order of addition: (A) adding the mixed metal salt aqueous solution to the etherified product aqueous solution, followed by adding the base aqueous solution, and continuing the reaction; (B) adding the base aqueous solution to the etherified product aqueous solution, followed by adding the mixed metal salt aqueous solution, and continuing the reaction; (C) adding the etherified product aqueous solution and the mixed metal salt aqueous solution to the base aqueous solution, and continuing the reaction; and (D) adding a mixture of the base aqueous solution and the etherified product aqueous solution to the mixed metal salt aqueous solution and continuing the reaction. Methods (A), (B), (C), and (D) differ only in the order of addition, and the other conditions are essentially the same. However, method (A) is preferred, at least in that it allows for a wide range of variations in the physical properties of the resulting composite.
上記の混合金属塩水溶液の調製には、例えば、２価の金属塩が第１鉄であり且 つ３価の金属塩が第２鉄の場合には、第１鉄塩と第２鉄塩とのモル比を約１：４ 〜約３：１、好ましくは約１：３〜約１：１の割合で水性媒体中に溶解する。こ の場合、第１鉄塩の１部、例えば約半量を他の２価金属塩、例えばマグネシウム 、カルシウム、マンガン、鉄、ニッ ケル、コバルト、銅、亜鉛、ストロンチュウム、バリウム等の少なくとも１種の 金属の塩と置き換えることができる。混合金属塩水溶液の濃度は特に制限されな いが、通常、約０.１〜約３Ｍ、好ましくは約０.５〜約２Ｍの範囲内が適当であ る。To prepare the mixed metal salt aqueous solution, for example, when the divalent metal salt is ferrous and the trivalent metal salt is ferric, the ferrous salt and the ferric salt are dissolved in an aqueous medium at a molar ratio of about 1:4 to about 3:1, preferably about 1:3 to about 1:1. In this case, a portion, for example, about half, of the ferrous salt can be replaced with a salt of at least one other divalent metal, such as magnesium, calcium, manganese, iron, nickel, cobalt, copper, zinc, strontium, or barium. The concentration of the mixed metal salt aqueous solution is not particularly limited, but is typically within the range of about 0.1 to about 3 M, preferably about 0.5 to about 2 M.
金属塩としては、例えば塩酸、硫酸、硝酸等の鉱酸から選ばれる１種、通常塩 酸との塩を挙げることができ、また、塩基としては、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ 等のアルカリ金属水酸化物；アンモニア；トリメチルアミン、トリエチルアミン 等のアミン類等から選ばれる少なくとも１種、通常、ＮａＯＨを使用することが できる。塩基水溶液の濃度も広範囲に渡り変えることができるが、通常、約０. １〜約１０Ｎ、好ましくは約１〜約５Ｎの範囲内が適当である。使用する塩基の 量は添加終了後の反応液のｐＨがほぼ中性ないし約ｐＨ１２になる量、すなわち 金属塩と塩基との比が約１：１〜約１：１.４（規定比）となるような量である 。The metal salt may be a salt with a mineral acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, or nitric acid, typically a salt with hydrochloric acid. The base may be at least one selected from alkali metal hydroxides such as NaOH or KOH; ammonia; or amines such as trimethylamine or triethylamine, typically NaOH. The concentration of the aqueous base solution may vary over a wide range, but is typically within the range of about 0.1 to about 10 N, preferably about 1 to about 5 N. The amount of base used is such that the pH of the reaction solution after addition is approximately neutral to about pH 12, i.e., the ratio of metal salt to base is about 1:1 to about 1:1.4 (normal).
他方、使用する多糖エーテル誘導体の量は、用いる金属塩中の金属の重量を基 準にして約１〜約１５倍、好ましくは約３〜約１０倍とすることができる。また 、多糖エーテル誘導体水溶液の濃度も厳密に制限されるものではないが、通常、 約１〜約３０ｗ／ｖ％、好ましくは約５〜約２０ｗ／ｖ％の範囲内が好適である 。各水溶液の添加及び混合は、撹拌下に約０〜約１００℃、好ましくは約２０〜 約８０℃の非加熱又は加熱下に行うことができ、必要なら塩基又は酸を添加して ｐＨを調整した後、約５０〜約１２０℃の温度で約１０分〜約５時間、通常約１ 時間加熱還流することにより反応させることができる。上記の混合及び反応は、 空気雰囲気下で行うことができるが、所望によりＮ2及びＡｒガス等の不活性ガ ス並びにＨ2ガス等の還元性ガス、またはＯ2ガス等の酸化性ガス 下で行うこともできる。こうして得られる反応液は前記第１の方法におけると同 様に精製し、所望ならば、ｐＨ調整、濃縮、濾過、更には乾燥することができる 。得られる複合体中の磁性金属酸化物粒子の直径は、通常、約２〜約２０ｎｍ、 好ましくは約３〜約１５ｎｍ、更に好ましくは約３〜約１０ｎｍの範囲内にある 。 The amount of polysaccharide ether derivative used can be about 1 to about 15 times, preferably about 3 to about 10 times, the weight of the metal in the metal salt used. The concentration of the aqueous polysaccharide ether derivative solution is not strictly limited, but is typically about 1 to about 30 w/v%, preferably about 5 to about 20 w/v%. The addition and mixing of each aqueous solution can be carried out with stirring at about 0 to about 100°C, preferably about 20 to about 80°C, with or without heating. If necessary, a base or acid can be added to adjust the pH, and the mixture can be heated and refluxed at about 50 to about 120°C for about 10 minutes to about 5 hours, usually about 1 hour. The above mixing and reaction can be carried out in an air atmosphere, or, if desired, in an inert gas such as N2 or Ar gas, a reducing gas such as H2 gas, or an oxidizing gas such as O2 gas. The resulting reaction solution can be purified in the same manner as in the first method, and, if desired, pH adjusted, concentrated, filtered, and further dried. The diameter of the magnetic metal oxide particles in the resulting composite is usually in the range of about 2 to about 20 nm, preferably about 3 to about 15 nm, and more preferably about 3 to about 10 nm.
本発明の複合体を製造するための前記第１及び第２の方法を比較すると、少な くとも工程の長さ及び多様な物性を有する複合体を製造できる点で第２の方法が 好ましく、一般的である。Comparing the first and second methods for producing the composites of the present invention, the second method is preferred and common at least in terms of the length of the process and the ability to produce composites with a variety of physical properties.
さらに、本発明の複合体は、第１及び第２の方法を組合せた方法、即ち、予め 調製された既知の多糖もしくは多糖誘導体と磁性金属酸化物との複合体ゾルまた は多糖で被覆した磁性金属酸化物微小球ゾル（以下、既知の磁性複合体ゾルと言 う）に本発明の多糖エーテル誘導体を添加し、所望により第１の方法におけると 同様に加熱反応、精製、ｐＨ調整、濃縮、濾過、更には乾燥することからなる方 法によっても製造することができる。この場合、所望により既知の磁性複合体ゾ ルを既知の精製方法、例えば貧溶媒による再沈殿、ゲル濾過及び限外濾過等によ り、不純物、遊離の多糖もしくは多糖誘導体を減らした磁性複合体を用いること ができ、かつそれが好ましい。この第１及び第２の方法を組合せた方法及びこれ によって得られる磁性複合体も本発明に包含される。Furthermore, the composite of the present invention can also be produced by a combination of the first and second methods, i.e., by adding the polysaccharide ether derivative of the present invention to a previously prepared known sol of a composite of a polysaccharide or polysaccharide derivative and a magnetic metal oxide, or a sol of polysaccharide-coated magnetic metal oxide microspheres (hereinafter referred to as the known magnetic composite sol), and optionally performing a heating reaction, purification, pH adjustment, concentration, filtration, and drying in the same manner as in the first method. In this case, if desired, the known magnetic composite sol can be purified by known methods, such as reprecipitation with a poor solvent, gel filtration, and ultrafiltration, to reduce impurities and free polysaccharide or polysaccharide derivatives, to produce a magnetic composite. This combination of the first and second methods and the magnetic composite obtained thereby are also encompassed by the present invention.
本発明の複合体における多糖エーテル誘導体対磁性金属酸化物の比率は、磁性 金属酸化物粒子の直径や該エーテル化物の分子量に依存し、広い範囲内で変える ことができるが、本発明の複合体は、一般には、多糖エーテル誘導体を磁性金属 酸化物中の金属１重量部当り約０.２〜約１０重量部、好ましくは約０.５〜約５ 重量部、更に好ましくは約１〜約 ３重量部含有することができる。The ratio of polysaccharide ether derivative to magnetic metal oxide in the composite of the present invention depends on the diameter of the magnetic metal oxide particles and the molecular weight of the etherified product, and can vary within a wide range. However, the composite of the present invention generally contains about 0.2 to about 10 parts by weight, preferably about 0.5 to about 5 parts by weight, and more preferably about 1 to about 3 parts by weight, of polysaccharide ether derivative per part by weight of metal in the magnetic metal oxide.
なお、本発明の複合体中の金属含量（この金属は複合体に含まれる金属酸化物 に由来する）は先に示した原子吸光光度法で測定したときの値である。すなわち 、複合体に少量の水の存在下に塩酸を添加し、含まれる金属を完全に塩化物まで 分解した後、適当に希釈し、各金属の基準液と比較して金属含量を決定する。The metal content in the composite of the present invention (the metals originating from the metal oxides contained in the composite) is the value measured by atomic absorption spectrometry as described above. That is, hydrochloric acid is added to the composite in the presence of a small amount of water to completely decompose the contained metals to chlorides, and then the mixture is appropriately diluted and compared with a standard solution of each metal to determine the metal content.
また、複合体中の多糖エーテル誘導体の含量は、Analytical Chem.，２５，１ ６５６（１９５３）に準拠し、硫酸−アントロン法で測定したときの値である。The content of the polysaccharide ether derivative in the complex is a value measured by the sulfuric acid-anthrone method in accordance with Analytical Chem., 25, 1656 (1953).
すなわち、複合体ゾルを適当に希釈した液に硫酸−アントロン試液を加えて発色 させ、吸光度を測定する。同時に複合体の製造に用いた多糖エーテル誘導体を基 準物質として、同様に発色させ、吸光度を測定し、両者の吸光度の比率から複合 体中の多糖エーテル誘導体の含量を求める。Specifically, the complex sol is diluted appropriately, and a sulfuric acid-anthrone test solution is added to the solution to develop color, and the absorbance is measured. At the same time, the polysaccharide ether derivative used in the preparation of the complex is used as a standard substance, and the color is similarly developed, and the absorbance is measured. The content of the polysaccharide ether derivative in the complex is determined from the ratio of the absorbances.
本発明の複合体の構成部分である磁性金属酸化物の粒子直径はＸ線回折法によ って測定したものである。粉末Ｘ線回折計（ターゲット：Ｃｏ、波長：１.７９ ０Å）を用い、凍結乾燥した本発明の複合体粉末についてＸ線回折を行うと、特 定の化合物に対応したいくつかの回折ピークを認めることができるので、複合体 に含まれる磁性金属酸化物（磁性粒子）は結晶形態で存在することが分かる。得 られる回折ピークは、複合体に含まれる磁性粒子の直径の減少に従ってブロード になるので、Ｘ線回折により磁性粒子の直径を測定することができる。すなわち 、Ｘ線回折での最強ピークについて、下記シェラー（Sherrer）式に従って粒子 直径を計算することができる。The particle diameter of the magnetic metal oxide, a component of the composite of the present invention, was measured by X-ray diffraction. When X-ray diffraction was performed on the freeze-dried composite powder of the present invention using a powder X-ray diffractometer (target: Co, wavelength: 1.790 Å), several diffraction peaks corresponding to specific compounds were observed, indicating that the magnetic metal oxide (magnetic particles) contained in the composite existed in a crystalline form. The resulting diffraction peaks broaden as the diameter of the magnetic particles contained in the composite decreases, allowing the diameter of the magnetic particles to be measured by X-ray diffraction. Specifically, the particle diameter can be calculated from the strongest peak in X-ray diffraction using the Scherrer equation:
Ｄ＝ｋλ／β・ｃｏｓθ ここで Ｄ：粒子直径（Å）、 θ：ブラッグ角（度）、 ｋ：定数（０.９）、 Ｂ：試料の半値幅（ラジアン）、 λ：Ｘ線波長(１.７９０Å)、ｂ：標準試料の半値幅（ラジアン）。 D=kλ/β・cosθ where D: particle diameter (Å), θ: Bragg angle (degrees), k: constant (0.9), B: half-width of sample (radian), λ: X-ray wavelength (1.790 Å), b: half-width of standard sample (radian).
なお、用いる標準試料は粒子直径１μｍ以上の同一物質である。こうして求め た値は透過型電子顕微鏡から求めた値と比較的一致する。The standard samples used are identical materials with particle diameters of 1 μm or more. The values obtained in this way are in good agreement with those obtained using a transmission electron microscope.
更に、本発明の複合体それ自体の直径は、動的光散乱法（例えば、Polymer J. ，１３，１０３７−１０４３（１９８１）参照）により測定された値であり、本 発明の複合体は、一般に、約１０〜約５００ｎｍ、好ましくは約１０〜約１００ ｎｍ、更に好ましくは約１０〜約５０ｎｍの範囲内の直径を有することができる 。Furthermore, the diameter of the complex of the present invention itself is measured by dynamic light scattering (see, for example, Polymer J., 13, 1037-1043 (1981)). The complex of the present invention generally has a diameter within the range of about 10 to about 500 nm, preferably about 10 to about 100 nm, and more preferably about 10 to about 50 nm.
本発明の複合体は単なる混合物ではなく、磁性金属酸化物粒子と多糖エーテル 誘導体との化合物である。このことは、例えば、反応後に貧溶媒を添加すると、 本発明の複合体が優先的に析出してくること及び本発明の複合体の水性ゾルを分 画すると、糖と金属を含む複合体と遊離の多糖誘導体に分離できること等から理 解できる。The complex of the present invention is not a simple mixture but a compound of magnetic metal oxide particles and a polysaccharide ether derivative. This can be understood, for example, from the fact that the complex of the present invention is preferentially precipitated when a poor solvent is added after the reaction, and from the fact that fractionation of an aqueous sol of the complex of the present invention allows separation into a complex containing sugar and metal and a free polysaccharide derivative.
水性ゾルの形態の本発明の複合体のＴ1及びＴ2緩和能力は、本発明の複合体を 水で種々の濃度に希釈した水性ゾルと希釈に用いた水について、２０ＭＨｚ（磁 場が約０.５テスラ）のパルスＮＭＲでＴ1及びＴ2緩和時間を測定し、得られる 緩和時間の逆数、即ち１／Ｔ1及び１／Ｔ2（単位：１／ｓｅｃ）と測定試料中の 金属濃度（単位：ｍＭ）との関係をグラフにプロットし、最小自乗法で求めた直 線の傾きから求めることがで きる（単位：１／ｍＭ・ｓｅｃ）。こうして算出される本発明の水性ゾルの形態 の複合体のＴ1及びＴ2緩和能力は、それぞれ、一般に、約５〜約１００(ｍＭ・ ｓｅｃ)-1及び約１０〜約５００(ｍＭ・ｓｅｃ)-1、好ましくは約１０〜約５０( ｍＭ・ｓｅｃ)-1及び約２０〜約３００(ｍＭ・ｓｅｃ)-1の範囲内にある。 The T1 and T2 relaxation abilities of the complex of the present invention in the form of an aqueous sol can be determined by measuring the T1 and T2 relaxation times using 20 MHz (magnetic field of approximately 0.5 Tesla) pulse NMR for aqueous sols prepared by diluting the complex of the present invention to various concentrations with water and the water used for dilution, plotting the relationship between the reciprocals of the obtained relaxation times, i.e., 1 / T1 and 1/ T2 (unit: 1/sec) and the metal concentration (unit: mM) in the measured sample on a graph, and determining the T1 and T2 relaxation abilities from the slope of the straight line obtained by the least squares method (unit: 1/mM·sec). The T1 and T2 relaxation capacities of the complex in the form of an aqueous sol of the present invention calculated in this manner are generally within the ranges of about 5 to about 100 (mM·sec) -1 and about 10 to about 500 (mM·sec) -1 , preferably about 10 to about 50 (mM·sec) -1 and about 20 to about 300 (mM·sec) -1 , respectively.
水性ゾルの形態の本発明の複合体の急性毒性ＬＤ50は、マウスを用いた静脈内 投与によると、金属として約１５〜約８０ｍｍｏｌ／ｋｇであり、改質デキスト ランを用いて得られる複合体と同程度ないしそれよりも低毒性であり、また、カ ルボキシアルキルデキストランを用いて得られる複合体に比較してやや高毒性で ある。すなわち、後記試験例１に示すように、本発明の複合体の好ましい態様、 例えば実施例で得られる複合体番号１の複合体のＬＤ50は６０ｍｍｏｌ（Ｆｅ） ／ｋｇであった。一般に本発明の好ましい態様の複合体のＬＤ50は、改質デキス トランを用いて同様にして合成した複合体に比較して、同程度ないし約２分の１ であり、また、カルボキシアルキルデキストランを用いて同様にして合成した複 合体に比較して、同程度ないし約２倍である。 The acute toxicity LD50 of the complex of the present invention in the form of an aqueous sol, as determined by intravenous administration to mice, was about 15 to about 80 mmol/kg of metal, which is comparable to or less toxic than complexes obtained using modified dextran, and slightly more toxic than complexes obtained using carboxyalkyl dextran. That is, as shown in Test Example 1 below, the LD50 of a preferred embodiment of the complex of the present invention, for example, Complex No. 1 obtained in the Examples, was 60 mmol (Fe)/kg. Generally, the LD50 of the complexes of the preferred embodiments of the present invention is comparable to or about half that of complexes synthesized in the same manner using modified dextran, and comparable to or about twice that of complexes synthesized in the same manner using carboxyalkyl dextran.
水性ゾルの形態の本発明の複合体を静脈内投与した時の該複合体の血液中内か ら除去される速度（以下血液クリアランス）については、好ましい態様の複合体 は、改質デキストランを用いた複合体と比較してきわめてゆっくり除去される。When the conjugate of the present invention in the form of an aqueous sol is intravenously administered, the conjugate of the preferred embodiment is eliminated from the blood (hereinafter referred to as blood clearance) at a rate significantly slower than that of a conjugate using modified dextrans.
すなわち、後記試験例２に示すように、本発明の好ましい態様の複合体、例えば 実施例で得られる番号１及び２の複合体の血液クリアランスの半減期（half lif e）はそれぞれ６.１及び６.８時間であった。一般に、本発明の好ましい態様の 複合体の血液クリアランスは、改質デキストラン又はカルボキシアルキルデキス トランを用 いた複合体と比較して、約２〜約６倍遅い。That is, as shown in Test Example 2 below, the blood clearance half-lives of the conjugates of preferred embodiments of the present invention, such as conjugates Nos. 1 and 2 obtained in the Examples, were 6.1 and 6.8 hours, respectively. In general, the blood clearance of the conjugates of preferred embodiments of the present invention is about 2 to about 6 times slower than that of conjugates using modified dextran or carboxyalkyl dextran.
改質デキストラン又はカルボキシアルキルデキストランを用いた複合体を水性 ゾルの形態で静脈内投与すると、複合体は細網内皮系の発達した臓器、例えば肝 臓や脾臓に比較的速く取り込まれるので、投与された複合体の血液クリアランス は比較的速い。一方、本発明の好ましい態様の複合体を水性ゾルの形態で静脈内 投与すると、該複合体は細網内皮系の臓器（肝臓、脾臓、肺及び骨）のみならず 、その他の臓器（腎臓皮質、腎臓随質、胸線、心臓、小腸及び大脳）にもほとん ど取り込まれないので、該複合体の血液クリアランスは遅くなる。When a conjugate using modified dextran or carboxyalkyl dextran is administered intravenously in the form of an aqueous sol, the conjugate is taken up relatively quickly by organs with a well-developed reticuloendothelial system, such as the liver and spleen, resulting in relatively rapid blood clearance of the administered conjugate. On the other hand, when a conjugate according to a preferred embodiment of the present invention is administered intravenously in the form of an aqueous sol, the conjugate is hardly taken up not only by organs of the reticuloendothelial system (liver, spleen, lung, and bone) but also by other organs (renal cortex, renal medulla, thymus, heart, small intestine, and cerebrum), resulting in slow blood clearance of the conjugate.
しかも、本発明の複合体は多糖エーテル誘導体の置換基の親油性効果により、 従来の複合体が取り込まれにくい部位、例えば、リンパ節、腫瘍及び癌部位に取 り込まれやすいという特徴がある。Furthermore, due to the lipophilic effect of the substituents on the polysaccharide ether derivative, the conjugates of the present invention are characterized by their ease of uptake into sites where conventional conjugates are difficult to uptake, such as lymph nodes, tumors, and cancer sites.
しかして、本発明の複合体のうち、水性ゾルになり得る複合体は、いわゆる磁 性流体としてメカニカルシール材、磁気クラッチ、磁気インクなどの工業分野に も使用することができるが、好ましくは生物学分野及び医療分野において、例え ばＭＲＩ造影剤、殊に、血管又はリンパ節用ＭＲＩ造影剤、腫瘍又は癌部位用Ｍ ＲＩ造影剤として、並びに血流の測定用として安全に使用することができる。Among the complexes of the present invention, those that can be converted into aqueous sols can be used as so-called magnetic fluids in industrial applications such as mechanical seals, magnetic clutches, and magnetic inks. However, they can also be used safely in biological and medical applications, such as MRI contrast agents, particularly MRI contrast agents for blood vessels or lymph nodes, tumors, or cancer sites, and for measuring blood flow.
ＭＲＩ造影剤として好ましく使用しうる本発明の複合体において、多糖エーテ ル誘導体の極限粘度は約０.０４〜約０.２ｄｌ／ｇ、特に約０.０６〜約０.１ｄ ｌ／ｇの範囲内にあることが好ましく、原料多糖としては、デキストラン、デン プン、セルロース又はプルランであることが好ましく、また多糖エーテル誘導体 のカルボキシアルキルエーテル部分は、カルボキシメチルエーテル、カルボキシ エチルエーテルまたはカル ボキシプロピルエーテル、好ましくはカルボキシメチルエーテルであることが好 適であり、そしてアミノアルキルエーテル部分は、ジエチルアミノエチルエーテ ル、ジメチルアミノメチルエーテル、ジプロピルアミノプロピルエーテル、トリ メチルアンモニオ−２−ヒドロキシプロピルエーテル、トリエチルアンモニオ− ２−ヒドロキシプロピルエーテル、トリプロピルアンモニオ−２−ヒドロキシプ ロピルエーテルが好適である。更に多糖エーテル誘導体の両置換基の置換率はそ れぞれ約２％〜約１６％、特に約３％〜約１０％の範囲内にあることが望ましく 、両置換基の置換率が同じ程度、具体的には置換率の差、即ち、（アミノアルキ ルエーテル基の置換率−カルボキシアルキルエーテル基の置換率）は約−１％〜 約３％、好ましくは約０％〜約２％の範囲内にあることが好適である。In the conjugates of the present invention which can be preferably used as MRI contrast agents, the intrinsic viscosity of the polysaccharide ether derivative is preferably in the range of about 0.04 to about 0.2 dL/g, particularly about 0.06 to about 0.1 dL/g. The starting polysaccharide is preferably dextran, starch, cellulose, or pullulan. The carboxyalkyl ether moiety of the polysaccharide ether derivative is preferably carboxymethyl ether, carboxyethyl ether, or carboxypropyl ether, preferably carboxymethyl ether. The aminoalkyl ether moiety is preferably diethylaminoethyl ether, dimethylaminomethyl ether, dipropylaminopropyl ether, trimethylammonio-2-hydroxypropyl ether, triethylammonio-2-hydroxypropyl ether, or tripropylammonio-2-hydroxypropyl ether. Furthermore, it is desirable that the substitution rates of both substituents in the polysaccharide ether derivative are each within the range of about 2% to about 16%, particularly about 3% to about 10%. It is also desirable that the substitution rates of both substituents are similar, specifically, that the difference in substitution rates, i.e., (substitution rate of amino alkyl ether group - substitution rate of carboxy alkyl ether group), is within the range of about -1% to about 3%, preferably about 0% to about 2%.
一方、磁性金属酸化物粒子としては、磁性酸化鉄又はフェライト、特に磁性酸 化鉄であることが望ましく、磁性粒子の直径は約３〜約１５ｎｍ、特に約３〜約 １０ｎｍの範囲内にあることが望ましく、また、該複合体それ自体の直径は約１ ０〜約１００ｎｍ、特に約１０〜約５０ｎｍの範囲にあることが望ましく、更に Ｔ1及びＴ2緩和能力は、それぞれ、約５〜約１００(ｍＭ・ｓｅｃ)-1及び約１０ 〜約５００(ｍＭ・ｓｅｃ)-1、特に約１０〜約５０(ｍＭ・ｓｅｃ)-1及び約２０ 〜約３００(ｍＭ・ｓｅｃ)-1の範囲内にあることが望ましい。 On the other hand, the magnetic metal oxide particles are preferably magnetic iron oxide or ferrite, particularly magnetic iron oxide, and the diameter of the magnetic particles is preferably within the range of about 3 to about 15 nm, particularly about 3 to about 10 nm. The diameter of the complex itself is preferably within the range of about 10 to about 100 nm, particularly about 10 to about 50 nm. Furthermore, the T1 and T2 relaxivities are preferably within the ranges of about 5 to about 100 (mM·sec) -1 and about 10 to about 500 (mM·sec) -1 , particularly about 10 to about 50 (mM·sec) -1 and about 20 to about 300 (mM·sec) -1 , respectively.
本発明の複合体をＭＲＩ造影剤として使用する場合には、通常、複合体を水性 ゾルの形態で使用する。この際複合体の濃度は広範囲に渡って変えることができ るが、通常、金属換算で約１ｍｍｏｌ／Ｌ〜約４ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは約０. １〜約２ｍｏｌ／Ｌの範囲内が適当である。When the complex of the present invention is used as an MRI contrast agent, it is usually used in the form of an aqueous sol. In this case, the concentration of the complex can be varied over a wide range, but is usually within the range of about 1 mmol/L to about 4 mol/L, preferably about 0.1 to about 2 mol/L, calculated as metal.
また、水性ゾルの調製に際しては、例えば、塩化ナトリウム等の無機塩類；ブド ウ糖等の単糖類、マンニトール、ソルビトール等の糖アルコール類；酢酸、乳酸 、クエン酸等の有機酸；あるいはリン酸緩衝液、トリス緩衝液などの生理学的に 許容される種々の助剤を添加することもできる。In preparing the aqueous sol, various physiologically acceptable auxiliary agents may be added, such as inorganic salts such as sodium chloride; monosaccharides such as glucose; sugar alcohols such as mannitol and sorbitol; organic acids such as acetic acid, lactic acid, and citric acid; or phosphate buffer and Tris buffer.
本発明の複合体をＭＲＩ造影剤として使用する場合のその投与量は、目的によ って異なるが、通常、金属換算で約１μｍｏｌ／ｋｇ〜１０ｍｍｏｌ／ｋｇ、好 ましくは約２μｍｏｌ／ｋｇ〜１ｍｍｏｌ／ｋｇ、更に好ましくは約５μｍｏｌ ／ｋｇ〜０.１ｍｍｏｌ／ｋｇの範囲内とすることができる。投与方法としては 、例えば、静脈内、動脈内、膀胱内、リンパ管内、筋肉内、皮下等への注射、注 入等が挙げられるが、場合によっては経口投与あるいは腸内直接投与も可能であ る。When the complex of the present invention is used as an MRI contrast agent, the dosage will vary depending on the purpose, but typically ranges from about 1 μmol/kg to 10 mmol/kg, preferably about 2 μmol/kg to 1 mmol/kg, and more preferably about 5 μmol/kg to 0.1 mmol/kg, in terms of metal. Examples of administration methods include intravenous, intraarterial, intravesical, intralymphatic, intramuscular, and subcutaneous injections and infusions, but oral administration or direct intestinal administration may also be possible in some cases.
図面の簡単な説明 図１は、参考例１で調製された多糖誘導体Ｎｏ．３の赤外線吸収スペクトル図 （ＫＢｒ法）である。BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS Figure 1 shows the infrared absorption spectrum (KBr method) of polysaccharide derivative No. 3 prepared in Reference Example 1.
図２は、参考例２で調製された多糖誘導体Ｎｏ．８の赤外線吸収スペクトル図 （ＫＢｒ法）である。Figure 2 shows the infrared absorption spectrum (KBr method) of polysaccharide derivative No. 8 prepared in Reference Example 2.
図３は、比較例２で調製された複合体Ｎｏ．３の凍結乾燥粉末の赤外線吸収ス ペクトル図（ＫＢｒ法）である。FIG. 3 is an infrared absorption spectrum (KBr method) of the freeze-dried powder of Complex No. 3 prepared in Comparative Example 2.
図４は、実施例１で調製された複合体Ｎｏ．６の凍結乾燥粉末の赤外線吸収ス ペクトル図（ＫＢｒ法）である。FIG. 4 is an infrared absorption spectrum (KBr method) of the freeze-dried powder of Complex No. 6 prepared in Example 1.
実施例 以下、本発明を参考例、比較例、実施例及び試験例によって更に具体的に説明 する。EXAMPLES The present invention will be explained in more detail below with reference to reference examples, comparative examples, working examples, and test examples.
参考例１：各種多糖カルボキシメチルエーテルの調製 各種の多糖５００ｇを水１６７０ｍＬに溶解し、これに水酸化ナトリウム及び モノクロロ酢酸（ＣｌＣＨ2ＣＯＯＨ）を約３０℃以下で加えた後、約６０℃で ２時間撹拌する。冷後、塩酸を用いてｐＨを８に調整した後、使用した多糖の極 限粘度とカルボキシメチル基（以下、ＣＭ基と略記する）の置換度に応じ、反応 液の１.５〜２.５倍のメタノールを撹拌下に添加し、目的物を析出させる。析出 物を水１.５Ｌに再溶解し、メタノールを加えて析出物を得る操作を更に３回繰 り返し、得られた析出物を水１.５Ｌに溶解し、水酸化ナトリウムを用いてｐＨ ８とした後、グラスフィルターで濾過、減圧濃縮し、凍結乾燥して、多糖カルボ キシメチルエーテルのナトリウム塩（以下ＣＭ化多糖と称する）を得る。下記表 １に、使用した多糖の種類、原料である水酸化ナトリウムとモノクロロ酢酸の使 用量及び得られたＣＭ化多糖の収量とそれらの性質を示す。Reference Example 1: Preparation of Various Polysaccharide Carboxymethyl Ethers 500 g of various polysaccharides were dissolved in 1670 mL of water, and sodium hydroxide and monochloroacetic acid ( ClCH2COOH ) were added at approximately 30°C or below, followed by stirring at approximately 60°C for 2 hours. After cooling, the pH was adjusted to 8 with hydrochloric acid, and then 1.5 to 2.5 times the volume of methanol (depending on the intrinsic viscosity of the polysaccharide used and the degree of carboxymethyl group (CM group) substitution) was added with stirring to precipitate the target product. The precipitate was redissolved in 1.5 L of water, and this process of adding methanol to obtain a precipitate was repeated three more times. The resulting precipitate was dissolved in 1.5 L of water, adjusted to pH 8 with sodium hydroxide, filtered through a glass filter, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to obtain the sodium salt of polysaccharide carboxymethyl ether (hereinafter referred to as CM polysaccharide). Table 1 below shows the type of polysaccharide used, the amounts of sodium hydroxide and monochloroacetic acid used as raw materials, and the yield and properties of the resulting carboxymethylated polysaccharide.
参考例２：各種の多糖カルボキシメチル・ジエチルアミノエチルエーテルの調製 表１に示す各種のＣＭ化多糖３００ｇを水９００ｍＬに溶解し、これに水酸化 ナトリウム及びジエチルアミノエチルクロライド（以 下、ＤＥＡＥＣｌと略記する）を約３０℃以下で加えた後、約６０℃で２時間撹 拌する。冷後、塩酸を用いてｐＨを８に調整した後、使用した多糖の分子量（極 限粘度）とジエチルアミノエチル基（以下、ＥＡ基と略記する）の置換率に応じ て、反応液の１.５〜２.５倍のメタノール及びアセトンを撹拌下に添加し、目的 物を析出させる。析出物を水１.５Ｌに再溶解し、メタノール及びアセトンを加 えて析出物を得る操作を更に３回繰り返し、得られた析出物を水１.５Ｌに溶解 し、水酸化ナトリウムを用いてｐＨ８とした後、グラスフィルターで濾過、減圧 濃縮し、凍結乾燥して、多糖カルボキシメチル・ジエチルアミノエチルエーテル のナトリウム及び塩酸塩（以下、ＣＭＥＡ化多糖と称する）を得る。下記表２に 、使用したＣＭ化多糖の番号、原料である水酸化ナトリウムとＤＥＡＥＣｌの使 用量及び得られたＣＭＥＡ化多糖の収量とそれらの性質を示す。 Reference Example 2: Preparation of various polysaccharide carboxymethyl diethylaminoethyl ethers 300 g of various carboxymethyl polysaccharides shown in Table 1 were dissolved in 900 mL of water, and sodium hydroxide and diethylaminoethyl chloride (hereinafter abbreviated as DEAECl) were added to the solution at approximately 30° C. or below, followed by stirring for 2 hours at approximately 60° C. After cooling, the pH was adjusted to 8 with hydrochloric acid, and then methanol and acetone were added in amounts of 1.5 to 2.5 times the reaction solution with stirring, depending on the molecular weight (intrinsic viscosity) of the polysaccharide used and the substitution rate of diethylaminoethyl groups (hereinafter abbreviated as EA groups), to precipitate the target product. The precipitate was redissolved in 1.5 L of water, and methanol and acetone were added to obtain a precipitate. This procedure was repeated three more times. The resulting precipitate was dissolved in 1.5 L of water, adjusted to pH 8 with sodium hydroxide, filtered through a glass filter, concentrated under reduced pressure, and freeze-dried to obtain the sodium and hydrochloride salts of polysaccharide carboxymethyl diethylaminoethyl ether (hereinafter referred to as "CMEA polysaccharide"). Table 2 below shows the number of the CMEA polysaccharide used, the amounts of the raw materials sodium hydroxide and DEAECl used, and the yield and properties of the obtained CMEA polysaccharide.
参考例３：カルボキシメチル・トリメチルアンモニオ−２−ヒドロキシプロピル デキストランの調製 デキストラン５００ｇを水１２００ｍＬに溶解し、これに４０％水酸化ナトリ ウム５４０ｍＬ及びモノクロロ酢酸（ＣｌＣＨ2ＣＯＯＨ）２５２ｇを約３０℃ 以下で加えた後、約７０℃で３時間撹拌する。冷後、塩酸を用いてｐＨを８に調 整した後、反応液の約１.５倍のメタノールを撹拌下に添加し、目的物を析出さ せる。析出物を水１.５Ｌに再溶解し、メタノールを加えて析出物を得る操作を 更に３回繰り返し、得られた析出物を水１.５Ｌに溶解し、水酸化ナトリウムを 用いてｐＨ８とした後、減圧濃縮し、凍結乾燥して、カルボキシメチルデキスト ラン（ＣＭＤ）を得る。 Reference Example 3: Preparation of carboxymethyl-trimethylammonio-2-hydroxypropyl dextran: 500 g of dextran was dissolved in 1200 mL of water, to which 540 mL of 40% sodium hydroxide and 252 g of monochloroacetic acid ( ClCH2COOH ) were added at approximately 30°C or below, followed by stirring at approximately 70°C for 3 hours. After cooling, the pH was adjusted to 8 with hydrochloric acid, and then approximately 1.5 times the volume of methanol as the reaction solution was added with stirring to precipitate the desired product. The precipitate was redissolved in 1.5 L of water, and the addition of methanol to obtain a precipitate was repeated three more times. The resulting precipitate was dissolved in 1.5 L of water, adjusted to pH 8 with sodium hydroxide, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to obtain carboxymethyl dextran (CMD).
得られたＣＭＤ３００ｇを水４００ｍＬに再溶解し、これに４０％水酸化ナト リウム４００ｍＬ及び７５％３−クロロ−２−ヒドロキシプロピルトリメチルア ンモニウムクロライド９２５ｍＬを約３０℃以下で加えた後、約６５℃で２時間 撹拌する。冷後、塩酸を用いて中性に調整した後、反応液の約２倍のメタノール を撹拌下に添加し、目的物を析出させる。析出物を水１Ｌに再溶解し、これにメ タノールを加えて析出物を得る操作を更に３回繰り返し、得られた析出物を水１ Ｌに溶解し、水酸化ナトリウムを用いてｐＨ約７とした後、これをグラスフィル ターで濾過、減圧濃縮し、凍結乾燥して、カルボキシメチル・トリメチルアンモ ニオ−２−ヒドロキシプロピルデキストラン（多糖誘導体番号１４）２８５ｇを 得た。極限粘度：０.１５ｄＬ／ｇ、ＣＭ置換度：１４％、トリメチルアンモニ オ−２−ヒドロキシプロピル置換度：１４％ 比較例１ 改質デキストラン（極限粘度＝０.０７０ｄＬ／ｇ；以下ＣＤｘと略記する） ８６ｇを水２４０ｍＬに溶解し、撹拌下窒素置換及び約８０℃に加温しながら、 これに１Ｍ塩化第二鉄溶液１８４ｍＬに塩化第一鉄４水塩１８ｇを溶解した混合 鉄塩溶液を加え、更に３規定水酸化ナトリウム水溶液を、約ｐＨ１１まで添加す る。次いで塩酸を加えてｐＨ７に調整した後、１時間還流加熱する。冷後遠心分 離し、上澄液に約０.９倍量のメタノールを添加し、複合体を優先的に沈澱させ 、得られた沈澱物を水に溶解し、一晩流水透析する。透析液のｐＨを８に調整し 、減圧濃縮し、次いでメンブランフィルター（ポアーサイズ：０.４５μｍ）で 濾過した後、アンプルに充填する（複合体番号１）。鉄含量：５６ｍｇ／ｍＬ、 鉄収率：８８％、糖含量：６６ｍｇ／ｍＬ、芯直径：７.７ｎｍ、Ｔ１緩和能力 （以下Ｔ１−Ｒと略記）：４４(ｍＭ・ｓｅｃ)-1、Ｔ２緩和能力（以下、Ｔ２− Ｒと略記する）：２０９(ｍＭ・ｓｅｃ)-1 比較例２ 参考例１で調製した２、３及び４番の各多糖誘導体（ＣＭ化多糖）８６ｇを、 それぞれ水２４０ｍＬに溶解し、撹拌下窒素置換及び約８０℃に加温しながら、 これに１Ｍ塩化第二鉄溶液１８４ｍＬに塩化第一鉄４水塩１８ｇを溶解した混合 鉄塩溶液を加え、更に３規定水酸化ナトリウム水溶液を、約ｐＨ１１まで添加す る。次いで塩酸を加えてｐＨ７に調整した後、１時間還流加熱する。冷後遠心分 離し、上澄液に用いたＣＭ化多糖の置換率に応じて約０.５〜約０.８倍量のメタ ノールを添加し、複合体を優先的に沈澱させ、得られた沈澱物を水に溶解し、一 晩流水透析する。透析液をｐＨ８に調整し、減圧濃縮し、次いでメンブランフィ ルター（ポアーサイズ：０.４５μｍ）で濾過した後、アンプルに充填 する（複合体番号２、３及び４）。得られる複合体の性質を下記表３に示す。300 g of the resulting CMD was redissolved in 400 mL of water, and 400 mL of 40% sodium hydroxide and 925 mL of 75% 3-chloro-2-hydroxypropyltrimethylammonium chloride were added at approximately 30°C or below. The mixture was then stirred at approximately 65°C for 2 hours. After cooling, the mixture was adjusted to neutral with hydrochloric acid, and approximately twice the volume of methanol as the reaction mixture was added with stirring to precipitate the desired product. The precipitate was redissolved in 1 L of water, and this process of adding methanol to obtain a precipitate was repeated three more times. The resulting precipitate was then dissolved in 1 L of water, adjusted to approximately pH 7 with sodium hydroxide, filtered through a glass filter, concentrated under reduced pressure, and lyophilized to yield 285 g of carboxymethyl trimethylammonio-2-hydroxypropyl dextran (polysaccharide derivative No. 14). Intrinsic viscosity: 0.15 dL/g, CM substitution: 14%, trimethylammonio-2-hydroxypropyl substitution: 14% Comparative Example 1 Modified dextran (intrinsic viscosity = 0.070 dL/g; hereafter abbreviated as CDx) 86 g was dissolved in 240 mL of water. While stirring, the mixture was purged with nitrogen and heated to approximately 80°C. A mixed iron salt solution consisting of 18 g of ferrous chloride tetrahydrate dissolved in 184 mL of 1 M ferric chloride solution was added, and 3 N aqueous sodium hydroxide was added until the pH reached approximately 11. Hydrochloric acid was then added to adjust the pH to 7, and the mixture was refluxed for 1 hour. After cooling, the mixture was centrifuged. Approximately 0.9 volumes of methanol were added to the supernatant to preferentially precipitate the complex. The resulting precipitate was dissolved in water and dialyzed overnight against running water. The pH of the dialysate was adjusted to 8, concentrated under reduced pressure, and then filtered through a membrane filter (pore size: 0.45 μm) before being filled into ampoules (Complex No. 1). Iron content: 56 mg/mL, iron yield: 88%, sugar content: 66 mg/mL, core diameter: 7.7 nm, T1 relaxivity (hereafter abbreviated as T1-R): 44 (mM sec).-1T2 relaxation capacity (hereinafter abbreviated as T2-R): 209 (mM sec)-1 Comparative Example 2 86 g of each of the polysaccharide derivatives (carboxymethylated polysaccharides) Nos. 2, 3, and 4 prepared in Reference Example 1 was dissolved in 240 mL of water. While stirring, the mixture was purged with nitrogen, and heated to approximately 80°C. A mixed iron salt solution, consisting of 18 g of ferrous chloride tetrahydrate dissolved in 184 mL of 1 M ferric chloride solution, was added. 3 N aqueous sodium hydroxide solution was then added until the pH reached approximately 11. Hydrochloric acid was then added to adjust the pH to 7, and the mixture was heated under reflux for 1 hour. After cooling, the mixture was centrifuged. Approximately 0.5 to 0.8 times the amount of methanol (depending on the substitution rate of the carboxymethylated polysaccharide) was added to the supernatant to preferentially precipitate the complex. The resulting precipitate was dissolved in water and dialyzed overnight against running water. The dialyzate was adjusted to pH 8, concentrated under reduced pressure, and then filtered through a membrane filter (pore size: 0.45 μm) before being filled into ampoules (Conjugates Nos. 2, 3, and 4). The properties of the resulting composites are shown in Table 3 below.
実施例１ 参考例２で調製した７〜１３番の各多糖誘導体（ＣＭＥＡ化多糖）を、それぞ れ水２４０ｍＬに溶解し、撹拌下窒素置換及び約８０℃に加温しながら、これに １Ｍ塩化第二鉄溶液１８４ｍＬに塩化第一鉄４水塩１８ｇを溶解した混合鉄塩溶 液を加え、更に３規定水酸化ナトリウム水溶液を、約ｐＨ１１まで添加する。次 いで塩酸を加えてｐＨ７に調整した後、１時間還流加熱する。冷後遠心分離し、 上澄液に、用いたＣＭＥＡ化多糖の置換率及び分子量に応じて約０.５〜約０.８ 倍量のメタノールを添加し、複合体を優先的に沈澱させ、得られた沈澱物を水に 溶解し、一晩流水透析する。透析液のｐＨを８に調整し、減圧濃縮し、次いでメ ンブランフィルター（ポアーサイズ：０.４５〜１０μｍ）で濾過した後、アン プルに充填する（複合体番号５〜１０）。得られる複合体の性質を下記表４に示 す。 Example 1: Each of the polysaccharide derivatives (CMEA-modified polysaccharides) Nos. 7 to 13 prepared in Reference Example 2 was dissolved in 240 mL of water. While stirring, the mixture was purged with nitrogen, and heated to approximately 80°C, and a mixed iron salt solution (18 g of ferrous chloride tetrahydrate dissolved in 184 mL of 1 M ferric chloride solution) was added. 3 N aqueous sodium hydroxide solution was then added until the pH reached approximately 11. Hydrochloric acid was then added to adjust the pH to 7, and the mixture was refluxed for 1 hour. After cooling, the mixture was centrifuged. Approximately 0.5 to 0.8 volumes of methanol, depending on the substitution rate and molecular weight of the CMEA-modified polysaccharide used, were added to the supernatant to preferentially precipitate the conjugate. The resulting precipitate was dissolved in water and dialyzed overnight against running water. The pH of the dialyzate was adjusted to 8, concentrated under reduced pressure, and then filtered through a membrane filter (pore size: 0.45 to 10 μm) before being filled into ampoules (Conjugates Nos. 5 to 10). The properties of the resulting conjugates are shown in Table 4 below.
実施例２ 参考例３で調製した１４番の多糖誘導体８６ｇを水３００ｍＬに溶解し、撹拌 下窒素置換及び約８０℃に加温しながら、これに１Ｍ塩化第二鉄溶液１８４ｍＬ に塩化第一鉄４水塩１８ｇを溶解した混合鉄塩溶液を加え、更に３規定水酸化ナ トリウム水溶液を、約ｐＨ１１まで添加する。次いで塩酸を加えてｐＨ７に調整 した後、１時間還流加熱する。冷後遠心分離し、上澄液に約１.５倍量のメタノ ールを添加し、複合体を優先的に沈澱させ、得られた沈澱物を水に溶解し、一晩 流水透析する。透析液のｐＨを８に調整し、減圧濃縮し、次いで濾過した後、ア ンプルに充填する（複合体番号１１）。鉄含量：１２ｍｇ／ｍＬ、鉄収率：１８ ％、糖含量：７６ｍｇ／ｍＬ、芯直径：６.５ｎｍ。 Example 2: 86 g of polysaccharide derivative No. 14 prepared in Reference Example 3 was dissolved in 300 mL of water. While stirring, the mixture was purged with nitrogen, and heated to approximately 80°C, a mixed iron salt solution (18 g of ferrous chloride tetrahydrate dissolved in 184 mL of 1 M ferric chloride solution) was added, and 3 N aqueous sodium hydroxide solution was added until the pH reached approximately 11. Hydrochloric acid was then added to adjust the pH to 7, and the mixture was refluxed for 1 hour. After cooling, the mixture was centrifuged, and approximately 1.5 volumes of methanol were added to the supernatant to preferentially precipitate the complex. The resulting precipitate was dissolved in water and dialyzed overnight against running water. The pH of the dialyzate was adjusted to 8, concentrated under reduced pressure, filtered, and filled into ampoules (Complex No. 11). Iron content: 12 mg/mL, iron yield: 18%, sugar content: 76 mg/mL, core diameter: 6.5 nm.
試験例１ 安全性試験 比較例１、２及び実施例１、２で調製した各複合体について急性毒性（ＬＤ50 ）を求めた。５週令のｄｄ系マウス（オス）１群５匹に、各複合体の水性ゾルを 鉄として１０、２０、４０、８０及び１６０ｍｍｏｌ ／ｋｇづつを静脈内投与し、１週間その生死を観察し、ベーレンスーカーバー（ Behrens Karber）法により、ＬＤ50を算出した。各複合体のＬＤ50値を下記表５ に示す。Test Example 1: Safety Test Acute toxicity (LD) of each complex prepared in Comparative Examples 1 and 2 and Examples 1 and 2 was measured.50 The LD values were calculated using the Behrens-Karber method. The aqueous sol of each complex was intravenously administered to groups of five 5-week-old male dd mice at doses of 10, 20, 40, 80, and 160 mmol/kg of iron. The mice were observed for survival over a week, and the LD values were calculated using the Behrens-Karber method.50The LD of each complex was calculated.50The values are shown in Table 5 below.
試験例２ 血液クリアランス試験 比較例１、２及び実施例１で調製した各複合体について血液クリアランス（血 液中から除去される速度）を半減期として求めた。６〜７週令のウイスター系ラ ット１群２〜３匹に、各複合体の水性ゾルを鉄として２.５ｍｇ／ｋｇの量づつ を静脈内投与し、経時的に４〜８点でラットの血液の採取及び臓器を摘出した。 Test Example 2: Blood Clearance Test The blood clearance (the rate at which each complex is removed from the blood) was determined as a half-life for each of the complexes prepared in Comparative Examples 1 and 2 and Example 1. The aqueous sol of each complex was intravenously administered at a dose of 2.5 mg/kg in terms of iron to groups of 2-3 Wistar rats aged 6-7 weeks, and blood samples were taken and organs were removed from the rats at 4-8 time points over time.
採取した全血及び遠心処理して得られる血漿についてＴ１及びＴ２緩和時間を測 定した。投与から血液採取までの時間とＴ１またはＴ２緩和時間の逆数との関係 から血液クリアランスの半減期（Half life）を算出した。全血及び血漿につい ても、またＴ１及びＴ２緩和時間のいずれにおいても、ほぼ同じ半減期が算出さ れた。得られた結果を下記表６に示す。The T1 and T2 relaxation times were measured for the collected whole blood and the plasma obtained by centrifugation. The blood clearance half-life was calculated from the relationship between the time from administration to blood collection and the reciprocal of the T1 or T2 relaxation time. Nearly identical half-lives were calculated for both whole blood and plasma, and for both the T1 and T2 relaxation times. The results are shown in Table 6 below.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 村瀬 勝俊 愛知県海部郡大治町大字西条字石間畑134 番地の２ (72)発明者 山田 永人 愛知県豊田市四郷町天道24番地 (72)発明者 長江 英夫 愛知県春日井市東野町２丁目８番地７ (72)発明者 鬼頭 恭二 愛知県名古屋市守山区弁天が丘701番地 （注）この公表は、国際事務局（ＷＩＰＯ）により国際公開された公報を基に作 成したものである。 なおこの公表に係る日本語特許出願（日本語実用新案登録出願）の国際公開の 効果は、特許法第１８４条の１０第１項（実用新案法第４８条の１３第２項）に より生ずるものであり、本掲載とは関係ありません。───────────────────────────────────────────────────── Continued from the front page (72) Inventor: Katsutoshi Murase 134 Ishimahata, Saijo, Oaza, Oji-cho, Kaifu-gun, Aichi Prefecture Address: 2 (72) Inventor: Nagato Yamada 24 Tendou, Shigo-cho, Toyota City, Aichi Prefecture (72) Inventor: Hideo Nagae 2-8-7 Higashino-cho, Kasugai City, Aichi Prefecture (72) Inventor: Kyoji Kito 701 Benten-ga-oka, Moriyama-ku, Nagoya City, Aichi Prefecture (Note) This publication is based on the publication published internationally by the International Bureau of International Patent Publication (WIPO). Please note that the effect of the international publication of the Japanese-language patent application (Japanese-language utility model registration application) related to this publication arises pursuant to Article 184-10, Paragraph 1 of the Patent Act (Article 48-13, Paragraph 2 of the Utility Model Act), and is unrelated to this publication.
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