[go: up one dir, main page]

JPS6363865B2 - - Google Patents

Info

Publication number
JPS6363865B2
JPS6363865B2 JP54165812A JP16581279A JPS6363865B2 JP S6363865 B2 JPS6363865 B2 JP S6363865B2 JP 54165812 A JP54165812 A JP 54165812A JP 16581279 A JP16581279 A JP 16581279A JP S6363865 B2 JPS6363865 B2 JP S6363865B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
glycosylated hemoglobin
ihp
hemoglobin
blood sample
difference
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
JP54165812A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS5587954A (en
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed filed Critical
Publication of JPS5587954A publication Critical patent/JPS5587954A/ja
Publication of JPS6363865B2 publication Critical patent/JPS6363865B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G01N33/721—Haemoglobin
    • G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
    • H—ELECTRICITY
    • H04—ELECTRIC COMMUNICATION TECHNIQUE
    • H04M—TELEPHONIC COMMUNICATION
    • H04M19/00—Current supply arrangements for telephone systems
    • H04M19/02—Current supply arrangements for telephone systems providing ringing current or supervisory tones, e.g. dialling tone or busy tone
    • H04M19/04—Current supply arrangements for telephone systems providing ringing current or supervisory tones, e.g. dialling tone or busy tone the ringing-current being generated at the substations

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Signal Processing (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血液中のグリコシル化ヘモグロビンの
測定法に関する。 ヘモグロビンには２つのアロステリツク
（allosteric）型すなわち、Ｔ型（タウト）とＲ型
（リラツクスド）がある。これらの型は化学的お
よび物理的性質が異なりまたＲとＴヘモグロビン
の相対量は紫外線、赤外線、可視光線、核磁気共
鳴、および電子スピン共鳴分光分析の様なこの技
術分野で認められた方法で測定できる。例えばペ
ルツらのBiochem.、17、3641（1978）にはヘモグ
ロビン誘導体の吸収スペクトル、即ち配位子およ
びイノシトール６りん酸塩の結合作用としてのＲ
→Ｔ転移が記載されている。ヘモグロビンのＲと
Ｔの状態を区別する他の方法には循環２色性およ
び化学反応性がある。ＲとＴ型の相対量は終点法
および運動法の両法によつて測定できる。 高濃度のグリコシル化ヘモグロビンは糖尿病に
随伴すると知られている。グリコシル化ヘモグロ
ビンは非糖尿病者においては全ヘモグロビンの約
５％濃度であるが、糖尿病患者はその２−４倍濃
度である。（Science、200、４月７日1978年）グ
リコシル化ヘモグロビン濃度は長期間にわたる患
者の平均血液グルコース濃度の指標となる。この
指標は血糖の短期変動（時々刻々の）に影響され
ないので、糖尿病における血糖調整状態の比較的
精密な映像となる。 グリコシル化ヘモグロビンはクロマトグラフカ
ラムをより迅速に移動しまた実際に一般にクロマ
トグラフ法又は電気泳動法で測定されるので普通
HbA又は迅速ヘモグロビンといわれる。 血液中のグリコシル化ヘモグロビンのパーセン
トは、グリコシル化されていないヘモグロビンを
アロステリツク位置結合性物質と反応させたとき
のヘモグロビンのＲとＴのアロステリツク型の平
衡集団における移動を監視することによつて測定
できることが発見されたのである。この反応はヘ
モグロビンの非−グリコシル化部分においてアロ
ステリツク型ＲからＴへの移動をおこす。血液試
料中のグリコシル化ヘモグロビンは、グリコシル
化がアロステリツクな結合位置を封鎖するので、
アロステリツク型平衡の移動に寄与しない。故に
血液試料中のグリコシル化ヘモグロビンのパーセ
ントが高い程、ヘモグロビンがアロステリツク位
置結合性物質と反応する際のアロステリツク型間
の移動は小さい。本発明は非−グリコシル化ヘモ
グロビン中影響され易いアロステリツク結合性位
置の反応性およびアロステリツク位置結合性物質
が非−グリコシル化ヘモグロビン部分と反応した
場合得られるグリコシル化および非−グリコシル
化ヘモグロビン混合のアロステリツク型の平衡移
動を利用するのである。 本発明は上記の原理を利用して血液試料中のグ
リコシル化ヘモグロビンを測定する方法に関し、
(i) 赤色血液細胞分解剤、(ii) ヘモグロビン酸化
剤、(iii) ヘム結合性配位子、および(iv) アロステ
リツク位置結合性物質で血液試料を処理してヘモ
グロビンのアロステリツク間の分布を変化させ、
それらの変化を吸光分析法によつて測定すること
によつてグリコシル化ヘモグロビンの濃度を決定
することを特徴とするものであるが、上記(i)〜(iv)
の試薬の添加順序ならびにこれらの試薬で処理し
た血液試料からグリコシル化ヘモグロビンの濃度
を決定するための吸光分析測定操作の相異によ
り、次の３つの方法に分けられる。 第１の発明方法は、［］(i)赤色血液細胞から
グリコシル化したヘモグロビンおよびグリコシル
化されていないヘモグロビンを遊離させるための
赤色血液細胞分解剤、(ii)ヘモグロビンをメトヘモ
グロビンに酸化するための酸化剤、および(iii)ヘム
結合性配位子を混合して成る試薬に血液試料を加
えて培養し；［］この培養液の吸光度を450乃至
700nｍの範囲の２つの異なる波長においてそれ
ぞれ測定してこれらの吸光度測定値の差Δ-IHPを
求め；［］次いでこの培養液に(iv)非グリコシル
化ヘモグロビンのアロステリツクな位置に結合す
るアロステリツク位置結合性物質を加えて生成液
の吸光度を上記工程［］で使用したと同じ２つ
の波長でそれぞれ測定してこれらの吸光度測定値
の差Δ+IHPを求め；［］上記［］と［］の結
果から標準化差 Δ-IHP−Δ+IHP／Δ-IHP を計算し；［］既知の種々の濃度のグリコシル
化ヘモグロビンを含む種々の基準試料について上
記［］〜［］の工程をそれぞれくりかえし
て、グリコシル化ヘモグロビン％と標準化差との
関係を示す標準曲線を作成し；そして［］未知
血液試料について上記［］〜［］の工程を実
施し、えられた標準化差を上記［］でえられた
標準曲線に照合してグリコシル化ヘモグロビンの
濃度を決定することから成る。この方法の具体例
は後記の実施例１に記載されている。 第２の発明方法は、［］(i)赤色血液細胞から
グリコシル化したヘモグロビンおよびグリコシル
化されていないヘモグロビンを遊離させるための
赤色血液細胞分解剤、(ii)ヘモグロビンをメトヘモ
グロビンに酸化するための酸化剤、(iii)ヘム結合性
配位子、および(iv)非グリコシル化ヘモグロビンの
アロステリツクな位置に結合するアロステリツク
位置結合性物質を混合して成る混合試薬に血液試
料を加えて培養し、［］この培養液の吸光度を
450乃至700nｍの範囲の４つの異なる波長におい
てそれぞれ測定して測定における波長の短から長
の順序に４つの吸光度A1、A2、A3、A4を求め；
［］上記の結果から標準化 ΔΔ＝A2−A3／A1−A4 を計算し；［］既知の種々の濃度のグリコシル
化ヘモグロビンを含む種々の基準試料について上
記［］〜［］をそれぞれくりかえして、グリ
コシル化ヘモグロビン％と標準化ΔΔとの関係を
示す標準曲線を作成し；そして［］未知血液試
料について上記［］〜［］の工程を実施し、
えられた標準化ΔΔの値を上記(iv)でえられた標準
曲線に照合してグリコシル化ヘモグロビンの濃度
を決定することから成る。この方法の具体例は後
記の実施例２に記載されている。 第３の発明方法は、［］(i)赤色血液細胞から
グリコシル化したヘモグロビンおよびグリコシル
化されていないヘモグロビンを遊離させるための
赤色血液細胞分解剤、(ii)ヘモグロビンをメトヘモ
グロビンに酸化するための酸化剤、および(iii)ヘム
結合性配位子を混合して成る混合試料に血液試料
を加えて培養し；［］この培養液の吸光度を450
乃至700nｍの範囲の２つの異なる波長において
それぞれ測定してこれらの吸光度測定値の差
Δ-IHPを求め；［］次いでこの培養液に(iv)非グリ
コシル化ヘモグロビンのアロステリツク位置に結
合するアロステリツク位置結合性物質を加えて該
生成液の吸光度を上記工程［］で使用したと同
じ２つの波長でそれぞれ測定してこれらの吸光度
測定値の差Δ+IHPを求め；［］上記［］と
［］の結果から Δ+IHP／Δ-IHP を計算し；［］既知の種々の濃度のグリコシル
化ヘモグロビンを含む種々の基準試料について上
記［］〜［］の工程をそれぞれくりかえし
て、グリコシル化ヘモグロビン％と Δ+IHP／Δ-IHP との関係を示す標準曲線を作成し；そして［］
未知血液試料について上記［］〜［］の工程
を実施し、えられた Δ+IHP／Δ-IHP を上記［］でえられた標準曲線に照合してその
グリコシル化ヘモグロビンの濃度を決定すること
からなる。この方法の具体例は後記の実施例３に
記載されている。 広範な化合物類が有効なアロステリツク作動体
（effector）位置結合性物質として知られている。
これらには有機リン酸塩類、硫酸塩類、カルボン
酸類があり、代表的なものはイノシトールヘキサ
ホスフエイト（J.B：ol.Chem.、246、7168
（1971））；２，３−ジホスホ−グリセレイト
（Nature、234、174（1971））；アデノシントリホ
スフエイト（Biochem.Biophys.Res.Comm.、
26、162（1967））；ピリドオキザルホスフエイト
（Fed.Proc.Fe.Amer.Soc.、Expl.Biol.、28、604
（1969））；イノシトールヘキササルフエイト
（Biochemistry 15、3396（1976））；イノシトー
ルペンタホスフエイト（Can.J.Chem.、47、63
（1969））；８−ヒドロオキシ−１，３，６−ピレ
ントリスルホネイト（J.Biol.Chem.、246、5832
（1971））；ｏ−ヨード安息香酸ナトリウム（The
J.of Pharmacology and Experimental
Thermpeutics、203、72（1977））である。ヘモグ
ロビンに関する技術知識ある者は広範な作動体位
置結合性物質が本発明の実施について均等である
ことを認めるであろう。イノシトールヘキサホス
フエイトは好ましいアロステリツク作動体位置結
合性物質である。 ヘモグロビンを遊離させるため一般に赤色血液
細胞を分解することが望ましい。普通の陽イオン
性（例えばセチルトリ−メチル臭化アンモニウ
ム）；陰イオン性（例えばドデシル硫酸ナトリウ
ムおよびデオキシコール酸ナトリウム）；および
中性（例えばサポニンおよびオクチルフエノオキ
シポリエトオキシエタノール）清浄剤は赤色血液
細胞分解に有用である。濃度約0.025乃至0.5容量
％の中性清浄剤が好ましい。 ヘム（heme）鉄へのヘム結合性配位子の結合
は一般にアロステリツクなヘモグロビンの異性体
の平衡をＲ（リラツクスド）型に移動させる。故
に試験試料中のヘモグロビンのヘム結合している
部分がヘム結合性配位子と配位している場合ヘモ
グロビンのアロステリツク型の平衡集団の大移動
が認められる。この平衡の大移動によつてグリコ
シル化ヘモグロビンの測定を正確にかつ精密に行
なうことが可能になる。アロステリツク異性体の
平衡移動のためのヘム結合性配位子のこの配位は
鉄はFe+2又はFe+3（メトヘモグロビン）状態にあ
る場合適用できる。 ヘモグロビン技術分野について知識ある者はヘ
モグロビン又はメトヘモグロビンの鉄に結合する
種々のヘム結合性配位子を認めるであろう。 例えば炭素原子１−６をもつアルキルイソシア
ン化物類およびフエニルイソシアン化物の様なイ
ソシアン化物類はFe+2状態のヘモグロビンに対
し特に好ましいヘム結合性配位子である。他の適
当する配位子はO2とNOである。 鉄に結合した単一配位子をもつことはアロステ
リツク型における移動の簡単な測定ができるので
一般に好ましい。例えばオキシヘモグロビン（グ
リコシル化されたおよびグリコシル化されない）
はジ亜チオン酸ナトリウム又は他の既知の還元剤
と反応させてデオキシ−ヘモグロビンに脱酸素化
できる。デオキシヘモグロビンはｎ−ブチルイソ
シアン化物の様なアルキルイソシアン化物と反応
させ、結果としてアロステリツクな作動体位置結
合性配位子との反応がアロステリツクな型の平衡
に決定的な移動を与えてグリコシル化ヘモグロビ
ン測定を可能にする。 ヘモグロビンはこの分野に認められた方法（ア
ムステルダム、北オランダ出版会社、アントニニ
とブルノニ著、Hemoglobin and Myoglobin in
their Reaction with Ligauds（1971））によつて
メトヘモグロビンに酸化される。故にフエリシア
ン化カリウム、亜硝酸ナトリウム、アニリン、お
よびフエニルヒドラジンはヘモグロビンをメトヘ
モグロビンに酸化するに便利な試薬である。メチ
レンブルーの様な染料の存在における自動酸化も
またヘモグロビンをメトヘモグロビンに酸化す
る。 非−グリコシル化メトヘモグロビンは非−グリ
コシル化ヘモグロビンについて記載されたアロス
テリツク作動体位置結合性物質と反応性である。 ヘモグロビン技術分野の知識ある者はメトヘモ
グロビンと結合する種々のヘム結合性配位子を認
めるであろう。これら配位子にはシアン酸塩、チ
オシアン酸塩、Ｎ−ヒドロオキシアセトアミド、
イミダゾールおよびそれらの誘導体がある。（ペ
ルツらのBiochemistry、17、3640−3552（1978）） 他の普通の配位子はふつ化物、アジ化物、亜硝
酸塩、シアン化物、水、水酸化アンモニウム、酢
酸塩およびぎ酸塩がある。約0.1Mイミダゾール
はメトヘモグロビンと使用するに好ましいヘム結
合性配位子である。 好ましい実施態様において、PH6.8の緩衝液中
0.1Mイミダゾール、0.2ｍＭフエリシアン化カリ
ウム、〔K3Fe（CN）6〕、および0.05容量％トリト
ンＸ−100（オクチルフエノオキシポリエトオキシ
エタノール）清浄剤より成る試薬１mlを10−20μ
の全血液に加え、混合液を10分間培養する。 フエリシアン化カリウムはヘモグロビンをメト
ヘモグロビンに酸化する。トリトンＸ−100は中
性清浄剤であつて細胞を分解しヘモグロビンを遊
離させる。またイミダゾールは鉄と配位してアロ
ステリツク異性体の平衡をＲ型に移動させる。 この混合物の吸収スペクトルを560nｍおよび
635nｍにおいて記録する。次いで2μの0.1Mイ
ノシトールヘキサホスフエイト液（PH6.8）を加
える。この試薬は非グリコシル化ヘモグロビンの
アロステリツクな結合位置と反応しアロステリツ
ク異性体の平衡をＴ型に移動する。再び560nｍ
と635nｍにおける吸収スペクトルを測定する。
グリコシル化ヘモグロビン濃度は560nｍ吸収の
減少と635nｍ吸収の増加によつて反映される。 本発明は好ましい態様において血清試料中のグ
リコシル化ヘモグロビン測定の試験用具を使用す
る。試験用具には赤色血液細胞分解剤、ヘモグロ
ビンをメトヘモグロビンに酸化する酸化剤、ヘム
結合性配位子およびアロステリツクな位置結合性
物質を別個に又は混合で包含する。試験用具は一
般に標準液を含む。試薬は実施例１に示すとおり
２試薬別々又は組合せでもよく又は実施例２に示
すとおり単一試薬でもよい。分析技術の知識ある
者はこれら試薬を順に又は同時に別々に又は混合
して加えることができると認めるであろう。好ま
しい試験用具は0.1Mイミダゾール、0.2ｍＭフエ
リシアン化カリウムおよび0.05容量％トリトンＸ
−100（PH6.8）の試薬および他の試薬、0.1Mイノ
シトールヘキサホスフエイト（PH6.8）より成る。
この用具は一般に０−100％グリコシル化ヘモグ
ロビンの間の標準液並びに既知量のグリコシル化
ヘモグロビンを含む標準液を含む。この標準液は
正常範囲およびある異常範囲のものである。 本発明は更に希釈剤としてPH６乃至８、好まし
くは約6.8の水又は水性緩衝液中に(a)赤色血液細
胞分解剤、(b)ヘモグロビンをメトヘモグロビンに
酸化する酸化剤、(c)ヘム結合性配位子および(d)稀
釈剤として水又は水性緩衝液中のアロステリツク
な位置結合性物質の２又は３種以上を含む試薬を
包含する。稀釈剤中に(a)＋(b)；(a)＋(b)＋(c)および
(a)＋(b)＋(c)＋(d)の混合物が好ましい試薬である。 次の実施例は本発明を例証するためのもので、
その真意又は範囲を限定するものではない。 実施例 １ 試薬Ａ：0.1Mイミダゾール、0.2ｍMK3Fe
（CN）6、水中0.05容量％トリトンＸ−100（オク
チルフエノ−オキシポリエトオキシエタノール
清浄剤）、PH6.8； 試薬Ｂ：水中0.1Mイノシトールヘクサホスフエ
イト（IHP）、PH6.8 25℃の試薬A1.0mlに10−20μの全血液を加え
10分間培養して細胞を分解させヘモグロビンをメ
トヘモグロビンに酸化する。450nｍから700nｍ、
特に560nｍと635nｍの吸光度を監視して可視ス
ペクトルを記録する。次いで反応混合物に試薬
B2μを加える。再び前のとおりスペクトルを記
録する。 グリコシル化ヘモグロビンで全血液を割ること
により標準液をつくる。 【表】 実施例 ２ ヘモグロビン濃度を標準化するにIHP効果に対
するアイソスベスチツク（isosbestic）な点を利
用することにより単一試薬添加法を用いた。 試薬Ｃ：実施例１の試薬B1容量に試薬A500容量
を加える。 試薬C1.0mlに10−20μの全血液を加える。10
分間培養して血液細胞を分解させヘモグロビンを
メトヘモグロビンに酸化しメトヘモグロビンをイ
ミダゾールおよびIHPと反応させた。可視スペク
トル450−700nｍ、特に476nｍ、560nｍ、635nｍ
および700nｍを監視記録する。 476nｍと700nｍはIHP効果のアイソスベスチ
ツク波長である。 計算：標準化ΔΔ＝A560−A635／A476−A700 【表】
５％
実施例 ３ 試薬Ａ：50ｍＭビス−トリス緩衝液〔ビス−（２
−ヒドロオキシエチル）−イミノ−トリス−（ヒ
ドロオキシメチル）−メタン〕；0.05容量％トリ
トンＸ−100；１ｍMn−ブチルイソシアン化
物；および水中２mg／mlのジ亜チオン酸ナトリ
ウム（PH6.8） 試薬Ｂ：水中2.5ｍＭイノシトールヘキサホスフ
エイト（IHP、PH6.8） ヘモグロビンＡの精製試料を精製グリコシル化
ヘモグロビンの種々の量と混合し既知量のグリコ
シル化ヘモグロビンを含むヘモグロビン試料をつ
くつた。 種々のヘモグロビン試料各100μをそれぞれ
浅皿に入れ試薬A1.0mlを加えた。約２分間培養
後530nｍおよび585nｍにおける吸光度を読んだ。 530nｍおよび585nｍにおける最初に読んだ後
10μの試薬Ｂを加え約１分間培養後再び530nｍ
と585nｍにおける吸光度を読んだ。 【表】 更に0.05％トリトンＸ−100清浄剤を含む試薬
Ａを10−20μの全血液に加え上記のとおり分析
して未知グリコシル化ヘモグロビンを測定した。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ ［］(i)赤色血液細胞からグリコシル化した
    ヘモグロビンおよびグリコシル化されていないヘ
    モグロビンを遊離させるための赤色血液細胞分解
    剤、(ii)ヘモグロビンをメトヘモグロビンに酸化す
    るための酸化剤、および(iii)ヘム結合性配位子を混
    合して成る試薬に血液試料を加えて培養し；［］
    この培養液の吸光度を450乃至700nｍの範囲の２
    つの異なる波長においてそれぞれ測定してこれら
    の吸光度測定値の差Δ-IHPを求め；［］次いでこ
    の培養液に(iv)非グリコシル化ヘモグロビンのアロ
    ステリツクな位置に結合するアロステリツク位置
    結合性物質を加えて生成液の吸光度を上記工程
    ［］で使用したと同じ２つの波長でそれぞれ測
    定してこれらの吸光度測定値の差Δ+IHPを求め；
    ［］上記［］と［］の結果から標準化差 Δ-IHP−Δ+IHP／Δ-IHP を計算し；［］既知の種々の濃度のグリコシル
    化ヘモグロビンを含む種々の基準試料について上
    記［］〜［］の工程をそれぞれくりかえし
    て、グリコシル化ヘモグロビン％と標準化差との
    関係を示す標準曲線を作成し；そして［］未知
    血液試料について上記［］〜［］の工程を実
    施し、えられた標準化差を上記［］でえられた
    標準曲線に照合してそのグリコシル化ヘモグロビ
    ンの濃度を決定することから成ることを特徴とす
    る血液試料中のグリコシル化ヘモグロビンの測定
    法。 ２ ［］(i)赤色血液細胞からグリコシル化した
    ヘモグロビンおよびグリコシル化されていないヘ
    モグロビンを遊離させるための赤色血液細胞分解
    剤、(ii)ヘモグロビンをメトヘモグロビンに酸化す
    るための酸化剤、(iii)ヘム結合性配位子、および(iv)
    非グリコシル化ヘモグロビンのアロステリツクな
    位置に結合するアロステリツク位置結合性物質を
    混合して成る混合試薬に血液試料を加えて培養
    し、［］この培養液の吸光度を450乃至700nｍ
    の範囲の４つの異なる波長においてそれぞれ測定
    して測定における波長の短から長の順序に４つの
    吸光度A1、A2、A3、A4を求め；［］上記の結
    果から標準化 ΔΔ＝A2−A3／A1−A4 を計算し；［］既知の種々の濃度のグリコシル
    化ヘモグロビンを含む種々の基準試料について上
    記工程［］〜［］をそれぞれくりかえして、
    グリコシル化ヘモグロビン％と標準化ΔΔとの関
    係を示す標準曲線を作成し；そして［］未知血
    液試料について上記［］〜［］の工程を実施
    し、えられた標準化ΔΔの値を上記(iv)でえられた
    標準曲線に照合してそのグリコシル化ヘモグロビ
    ンの濃度を決定することから成ることを特徴とす
    る血液試料中のグリコシル化ヘモグロビンの測定
    法。 ３ ［］(i)赤色血液細胞からグリコシル化した
    ヘモグロビンおよびグリコシル化されていないヘ
    モグロビンを遊離させるための赤色血液細胞分解
    剤、(ii)ヘモグロビンをメトヘモグロビンに酸化す
    るための酸化剤、および(iii)ヘム結合性配位子を混
    合して成る混合試料に血液試料を加えて培養し；
    ［］この培養液の吸光度を450乃至700nｍの範
    囲の２つの異なる波長においてそれぞれ測定して
    これらの吸光度測定値の差Δ-IHPを求め；［］次
    いでこの培養液に(iv)非グリコシル化ヘモグロビン
    のアロステリツク位置に結合するアロステリツク
    位置結合性物質を加えて該生成液の吸光度を上記
    工程［］で使用したと同じ２つの波長でそれぞ
    れ測定してこれらの吸光度測定値の差Δ+IHPを求
    め；［］上記［］と［］の結果から Δ+IHP／Δ-IHP を計算し；［］既知の種々の濃度のグリコシル
    化ヘモグロビンを含む種々の基準試料について上
    記工程［］〜［］の工程をそれぞれくりかえ
    して、グリコシル化ヘモグロビン％と Δ+IHP／Δ-IHP との関係を示す標準曲線を作成し；そして［］
    未知血液試料について上記［］〜［］の工程
    を実施し、えられた Δ+IHP／Δ-IHP を上記［］でえられた標準曲線に照合してグリ
    コシル化ヘモグロビンの濃度を決定することから
    なることを特徴とする血液試料中のグリコシル化
    ヘモグロビンの測定法。
JP16581279A 1978-12-26 1979-12-21 Measuring glucocyl hemoglobin in blood Granted JPS5587954A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US05/973,368 US4200435A (en) 1978-12-26 1978-12-26 Determination of glycosylated hemoglobin in blood

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS5587954A JPS5587954A (en) 1980-07-03
JPS6363865B2 true JPS6363865B2 (ja) 1988-12-08

Family

ID=25520823

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP16581279A Granted JPS5587954A (en) 1978-12-26 1979-12-21 Measuring glucocyl hemoglobin in blood

Country Status (15)

Country Link
US (1) US4200435A (ja)
JP (1) JPS5587954A (ja)
AT (1) AT362534B (ja)
AU (1) AU528008B2 (ja)
BE (1) BE880817A (ja)
CA (1) CA1119081A (ja)
CH (1) CH641571A5 (ja)
DE (1) DE2950457B2 (ja)
ES (1) ES487265A0 (ja)
FR (1) FR2445527A1 (ja)
GB (1) GB2038476B (ja)
IT (1) IT1198318B (ja)
NL (1) NL7908272A (ja)
SE (1) SE445147B (ja)
ZA (1) ZA795808B (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0251091A (ja) * 1988-08-12 1990-02-21 Sharp Corp スケジュール登録装置

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2850603A1 (de) * 1978-11-22 1980-06-19 Merck Patent Gmbh Haemolysierloesung und verfahren zur haemolyse von blut
US4270921A (en) * 1979-09-24 1981-06-02 Graas Joseph E Microchromatographic device and method for rapid determination of a desired substance
US4274978A (en) * 1979-12-07 1981-06-23 Abbott Laboratories Standards for determining glycosylated hemoglobin
US4260516A (en) * 1979-12-07 1981-04-07 Abbott Laboratories Glycosylated hemoglobin standards
CA1146769A (en) * 1980-02-04 1983-05-24 Beat E. Glatthaar Process for the determination of diabetes
US4465774A (en) * 1981-07-16 1984-08-14 Sherwood Medical Company Standard or control material for glysocylated or total hemoglobin determination
DE3141146A1 (de) 1981-10-16 1983-04-28 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und reagens zur bestimmung von glykosiliertem haemoglobin
NZ199380A (en) * 1981-12-23 1986-08-08 J R Baker Determination of serum glucose levels in blood samples
US4629692A (en) * 1982-12-06 1986-12-16 Miles Laboratories, Inc. Immunoassay for nonenzymatically glucosylated proteins and protein fragments an index of glycemia
US4876188A (en) * 1986-11-18 1989-10-24 Scripps Clinic And Research Foundation Novel immunochemical method for assaying stable glycosylated hemoglobin
US5110745A (en) * 1989-06-01 1992-05-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of detecting glycated proteins
US5807747A (en) * 1989-06-13 1998-09-15 Clinical Innovations Limited Method and apparatus for determination of glycosylated protein
US5484735A (en) * 1989-08-23 1996-01-16 Northwestern University Immunoassay of glycosylated proteins employing antibody directed to reductively glycosylated N-terminal amino acids
US5571723A (en) * 1991-02-07 1996-11-05 Evans; Cody A. Method of testing for diabetes that reduces the effect of interfering substances
DE4206932A1 (de) * 1992-03-05 1993-09-09 Boehringer Mannheim Gmbh Immunologische methode zur bestimmung eines haemoglobinderivates
ATE223059T1 (de) * 1994-03-11 2002-09-15 Abbott Lab Cyanidfreies reagens und verfahren zur bestimmung von hämoglobin
CA2191614C (en) * 1994-07-14 2006-04-11 Show-Chu Wong Methods and reagents for cyanide-free determination of hemoglobin and leukocytes in whole blood
US5834315A (en) * 1994-12-23 1998-11-10 Coulter Corporation Cyanide-free reagent and method for hemoglobin determination and leukocyte differentitation
AU2001258819A1 (en) * 2000-05-23 2001-12-03 Koji Sode Kit for assaying saccharified protein
US6844149B2 (en) * 2001-06-29 2005-01-18 International Business Machines Corporation Method, system, and apparatus for measurement and recording of blood chemistry and other physiological measurements
US7034126B2 (en) * 2003-05-14 2006-04-25 Agennix, Inc. Lactoferrin in the treatment of diabetes mellitus
US7183381B2 (en) * 2004-10-26 2007-02-27 Agennix, Inc. Composition of lactoferrin related peptides and uses thereof
WO2020159599A1 (en) * 2019-01-29 2020-08-06 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. TURBIDITY NORMALIZATION ALGORITHM AND METHODS OF REDUCING INTRALIPID/LIPEMIA INTERFERENCE IN HEMOGLOBIN A1c ASSAYS

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3918905A (en) * 1973-07-20 1975-11-11 Biolog Corp Of America Diagnostic test for the determination of sickling hemoglobinopathies
US3958560A (en) * 1974-11-25 1976-05-25 Wayne Front March Non-invasive automatic glucose sensor system
US3964865A (en) * 1975-01-30 1976-06-22 Sigma Chemical Company Lyophilized human hemoglobin standard for colorimetric determination of total hemoglobin
US4077772A (en) * 1977-05-31 1978-03-07 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Method for the determination of hemoglobin in trace amounts
US4142858A (en) * 1977-12-02 1979-03-06 Isolab, Incorporated Method to determine a diagnostic indicator of blood sugar condition, and, a liquid chromatographic microcolumn therefor

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0251091A (ja) * 1988-08-12 1990-02-21 Sharp Corp スケジュール登録装置

Also Published As

Publication number Publication date
AT362534B (de) 1981-05-25
AU5275479A (en) 1980-07-03
AU528008B2 (en) 1983-03-31
ZA795808B (en) 1980-10-29
CA1119081A (en) 1982-03-02
GB2038476A (en) 1980-07-23
DE2950457A1 (de) 1980-07-03
SE7910340L (sv) 1980-06-27
DE2950457B2 (de) 1981-04-02
ATA808579A (de) 1980-10-15
NL7908272A (nl) 1980-06-30
GB2038476B (en) 1983-05-05
IT1198318B (it) 1988-12-21
ES8103381A1 (es) 1981-02-16
CH641571A5 (fr) 1984-02-29
SE445147B (sv) 1986-06-02
ES487265A0 (es) 1981-02-16
FR2445527A1 (fr) 1980-07-25
BE880817A (fr) 1980-06-23
FR2445527B1 (ja) 1983-09-02
JPS5587954A (en) 1980-07-03
US4200435A (en) 1980-04-29
IT7928370A0 (it) 1979-12-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPS6363865B2 (ja)
Parker et al. Improved colorimetric assay for glycosylated hemoglobin.
Lubran The measurement of total serum proteins by the Biuret method
Collier Standardization of blood haemoglobin determinations
JP3523878B2 (ja) ヘモグロビンの定量用無シアン化物試薬及び方法
Little et al. Interlaboratory standardization of glycated hemoglobin determinations.
Salhany et al. Correlation between quaternary structure and ligand dissociation kinetics for fully liganded hemoglobin
CN109613280B (zh) 一种血清铁测定试剂盒及其制备方法和应用
US4438204A (en) Determination of glycosilated hemoglobin
CH642750A5 (it) Procedimento per la rapida determinazione del ferro nel siero sanguigno e miscela per l'esecuzione del procedimento.
US4260516A (en) Glycosylated hemoglobin standards
US4399227A (en) Process for determination of glycosylated hemoglobin and reagent therefor
CN104714040B (zh) 血清中葡萄糖氧化酶双试剂测定方法
Moss et al. Magnetic susceptibility evidence for a binuclear iron complex in hemerythrin
CA1129313A (en) Standards for determining glycosylated hemoglobin
US3536448A (en) Uric acid detection
US5106753A (en) Method for determining manganese level in blood using a porphyrin composition
Ross et al. A semi-automated method for the determination of glycosylated haemoglobin
DD223537A5 (de) Verfahren und reagens zur bestimmung des haemoglobin-haptoglobin-komplexes in gegenwart von freiem haemoglobin
Fiechtner et al. Affinity binding assay of glycohemoglobin by two-dimensional centrifugation referenced to hemoglobin A1c
WO2018056762A1 (ko) 당화 알부민 측정용 시약 조성물 및 이를 이용한 당화 알부민의 측정방법
JPH02122267A (ja) ヘモグロビン定量試薬キット及びそれを用いるヘモグロビン定量方法
Li et al. Determination of Nitric Oxide and Its Metabolites in Biological Tissues by Ozone-Based Chemiluminescence Detection: A State of the Art Review
US4056357A (en) Direct bilirubin assay
Rodriguez-Castellon et al. Evaluation of an automated glucose-oxidase procedure