JPS63502960A - ラセミ体の分割方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 う七ミ体の分割方法 本発明にラセミ体の分割方法に関するものでちる。

アミノ酸に対する日常的需用に増加の一途に８カ、そしてその原料源を広くめか つできるだけ能率的に利用し、セして又更にはこれを合成する新しい方法を発見 することが要求されている。一般に化学的合成法においては、まずラセミ体を作 ）そしてこれを更に別の工程によ多分割して対掌体としなくてにならない。

本発明は、アミノ酸カルバメートラセミ体から出発し該ラセミ体を酵素的に分割 することによる、アミノ酸誘導体のラセミ分割方法を提供するものである。

光学活性アミノ酸を作るのにアミノ酸カルバメートを使用する利点として以、そ の出発化合物？合成する際にこれに相当するアミノ酸から出発する必要になくア ミノ酸前駆体（飼えばα−ハロゲンカルボン酸）を直接にカルバメートに変えれ ば良いことが挙げられる。

又本発明のう七ミ体分割方法にノルエフェドリンカルバメートラセミ体の分割に も応用することが出来る。ノルエフェドリンは多感神経°作用剤としての機能を 有する。

本発明方法においてに例えばメトキクカルボニル基を有するメチルカルバメート を使用することが出来る。

水溶性アミノ酸カルバメートラセミ体および（またに）天然アミノ酸のう大ミ体 を使用するのが好ましい。

本発明方法に、 （ａ）アミノ酸カルバメートラセミ体又はノルエフェドリンカルバメートラセミ 体の鏡像体の１方を加水分解的に分割する酵素活性を有し、そして該酵素゛活性 試験によシ得られた微生物により、あるいに （ｂ）前記（＆）の微生物の酵素活性によシ、行うことが出来る。

方法（ｂ）においてに、方法（ａ）の微生物の培養物、又にそれから微生物を除 いた培養物、又は培養物の抽出物、又に微生物の抽出物の形の酵素活性の利用に よ〕ラセミ分割を行うことが出来る。

使用するのに適当な微生物く土壌試料から得ることが出来る。例えばこれを単離 するために扛、カルバメートで処理した土壌試料を使用することが出来る。例え ばＢｅｔａｎａｌやＵｎｄｅｎの様なカルバメート殺虫剤で処理した土地には選 択性のあるカルバメート分解性微生物が生育し、従って所望の特性を有する菌株 を増殖するのに都合が良いことは容易に考えられることである。

別法として本発明でに又、アミノ酸カルバメートラセミ体又ハノルエ７エドリン カルバメートラセミ体の鏡像体の１方を加水分解的にラセミ分割する酵素であっ て、しかもこの様な酵素活性試験によシ決定される酵素の作用によシラセミ分割 を行うことが出来る。

この様な酵素は新規用途を広範囲に開発するものでるる。これまでその可能とさ れて来た用途としては、ペプチド合成の分野において導入された保護基例えばｔ −ブチルオキシカルボニル基又はベンズオキシカルボニル基を温和に脱離するな めに使用することが最も重要なものでちると考えられる。

最後に本発明方法の態様として、ラセミ分割によル生成した光学活性アミノ酸。

特にＬ−アミノ酸を単離し、そして（またく）その生成したアミノ酸に対する鏡 像体で６カそして該ラセミ分割によシ生成した光学活性アミノ酸、特にＤ−アミ ノ酸のカルバメー）５ｃそれ自体公知の方法によシ分解してその鏡像体アミノ酸 を回収する操作を行う。

下記の実施例においてハ、飼えは下記の反応式の＃素的ラセミ分割について述べ る。

刃−（メトキシカルボニル）−ＤＬ−バ９ン　→Ｎ−（メトキシカルボニル）− Ｄ−バリン＋Ｌ−バリン＋ＣＯ雪＋メタノール ｏｏ、　Ｈ平衡から除去されるので、反応鉱右側すなわち下側に移行することに １にル、これによル両鑓偉体に高純度で回収することが出来る。

次に実験方法および実施向によシ本発明の詳細な説明上ｍサンプル１ｆを、０お よび刃単独源としてカルバメート誘導体を含有する最少培地（Ｍ２）１００−中 。

２７℃で１００　ｒｐｍの回転振動装置中で培養した。４８時間後に、更に１％ （マ／Ｙ）の培養物を同培地に接種した。単一コロニーを回収するために、無菌 生理食塩水（”）の希釈系を作った。アリクオツド（部分標本）ｔ−最少培地（ Ｍ２）の寒天板上に散布した。このペトリ皿を２７℃で３〜７日間培養した。

生長が良好であった生物体を希釈スミアに二〕精製した。こうして精製した菌株 ｔ−１００ｗｔの液体培地（Ｍｌ）中に接種して２枚の隔壁を有する５００ｍの 三角フラスコに移し、１００　ｒｐｍの回転振動装置中２７℃で生育させた。１ 〜３日後に、フラスコ内容物を遠心分離した。

沈でんをｐｎｔｏのα１１ＪＪ）ん酸カリウム緩衝液中にけん濁させた。細胞分 離に超音波法によ〕行った。不溶成分を遠心分離（５００００Ｆ、４℃）した。

上ずみ液を酵素試験に直接使用するか又は最初に深部凍結（−２０℃）した。

（優）生理食塩水緩衝剤組成： 塩化ナトリウム　ａ５Ｆ ＫＨＩＰＯ，（Ｌ　５　ｆ ＮＩＪＨＰＯ４α　６１ １％ゼラチン（Ｍｅｒｃｋ社製）　１〇　−１１０９９０ｄ スクリーニングした菌株用培地（Ｍｌ）ルん酸二水素カリウム　α８０ｆ ルん酸水素二カリウム　１．７６　を 酵母エキス　αＳａｔ ＭａＯＡ　α５０ｔ グルコース　ａｏｏｒ アミノ酸カルバメート誘導体　５ｏａｒ蒸留水で全ｆｉｆｔｔｏｏｔ（ＰＨ７， ０）とする。

シん酸二水素カリウム　０．８０ｆ ）ん酸水素二カリウム　ｔ７４Ｆ 微食塩水　２．ａａｗｔ ビタミン溶液　ｚｏｏｙ アミノ酸カルバメート誘導体　ＩＣＬＯＯＰ蒸留水で全量１ｔ、ｏｏｔ（ｐＩＩ Ｉ７．０）とする。

発　酵　培　地　（Ｍ　４　） シん酸二水素カリウム　αＢＯｆ ）ん酸水素二カリウム　１．７６　ｆ メタノール　α５ｏ％（ｖ／ｖ　） 酵母エキス　５．０Ｏｆ 麦芽エキス　ｓ、ｏｏｔ ＮａＯ６ｌ　ＯＯｆ 蒸留水で全ｊｉｉｔ−１ｏｏｌ（ｐＨ７，００）とする。

回転振動装置（１００ｒｐｍ　）上の５００ｍｇの三角フラスコ（隔壁２枚）中 に１００−の培地を入れて５０℃で振とり培養した。斜面寒天培地から接種ルー プを使って接種した。４８時間後に最初の初期培養物がら１％（Ｖ／Ｖ）を接種 してこれを更に初期培養物とした。この後者を初期培養物として使用し、２４時 間後にこれから３％（ｖ／ｖ）ｆｔ接種して頓に更に一連の試験に供した。

発酵槽（実効容１Ｒ１０ｔ）中での培養工程接種する前に１日間発酵槽５ｃ滅菌 した。こうして接種前に培地を酸素で飽和しそして温度を一定（３０℃±１℃） に保つことが可能であった。発酵槽内部の滅＃Ｉに１２１℃、ｔ２バール、回転 スピード１００　ｒｐｍの条件下で熱スチームで５０〜６０分間との場で行なっ た。Ｃ（炭素）源に接種の前に予じめ１〜２時間発酵槽に無菌的にかえた。ｐ１ ！値の調節のためにＩ　Ｍ　ＫＯＨ又は１ＭＨｚＰＯ，ｌｉ使用した。全発酵工 程中、　１　ｖｖｍ　（初期値）で一定の通気を行ないそして８００　ｒｐｍで 攪拌しな（ここで°ｖｖｍ″とに１分間、１反応器体積につき、１通気量体積ｔ −意味する。）。

特記しない限シ１発酵槽中の条件に下記のパラメーターを保持した。

回転速度　２００　ｒｐｍ 通気１１　１　ｖｖｍ 温度　３０℃ 栄養培地　Ｍ４ ｐＨ７，０ 培養期間　４０〜８０時間 培養工程中、下記の値を連続的に測定した。

０酸素分圧 ＯＦよりｔ−介しての排気中のメタノール濃度０反名器からの排気中の酸素体積 濃度（体積％）０反応器からの排気中の二酸化炭素の体積濃度（体積％） ｏｐＨ値 ０培養源度 ０通気速度 （ここで１Ｆより１　と探査のイオン化検出装置のことである。） この発酵工程を更に観察する念めに１間欠的に滅菌パルフカらザンプルを取り出 してこれを分析しな。

アミノ酸分析装置 アミノ酸の定量にアミノ酸分析装置２は蛍光試験にょ多行なった。

アミノ酸分析装置：　Ｂｉｏｔｒｏｎｉｋ　ＬＯ４０００カラム：　Ｂｉｏｔｒ ｏｎｉｋ　Ｄｏ−４ム（Ｄｉｏｎｅｘ）初期カラム：　Ｅｌｏｔｒｏｎｉｋ　Ｄ ｏ−５反応源度二　τ１＝４９℃、Ｔ禦＝６５℃検　出：　Ｂｉｏｔｒｏｎｉｋ 光度計Ｅｔ　６６２０５７０℃ｍ。

４０ｎｍ 分析時間＝　１１０〜１４０分間 サンプル量：　１００μＬ 検定液：　Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｅｅｈｒｉｎｇ社アミノ酸検定基準■型 所定のプログラムで下記の保持時間結果が得られた。

リシン　９２．６分 ｑ−ペンズオキシヵルゼニルリシン　８　Ｋ２分Ｃ−ベンズオキ７カルボニルリ クン　８２．６分ａ−７セチルリクン　６ム９分 α−メトキシカルボニルリクン　５１７分１−メトキシカルボニルリクン　４　 ＆、６分メチオニン　４１１６分 Ｉ−エトキクカ〃ボニル１−ｙクン　４　ａ４分バリン　４ム３分 アラニン　４＆４分 ε−７セチルリシン　３４３分 希釈緩衝剤：ｐＨ１，８５ くえん酸ナトリウム　１９．６０ｆＸ２Ｈ，０濃塩酸　１＆５− チオエタノール（蒸留）　２（ＬＯｓｄカプリル酸　α１− 蒸留水で全量を　５ｔにする・ 分離緩衝剤： 緩衝剤ム：ｐＨ五２゜ くえん酸ナトリウム　８＆２ｒＸ２ＨＩＯ濃塩酸　５５〜６ｏＩＩ１ｇ チオジェタノール（再蒸留）　４２− ２５　％　Ｂｒ１ｊ　Ｉ　Ｌ　Ｏａｄ フェノール　ＬＯｄ エチルグリコールモノメチルエーテル　７　！ｔｏｄ蒸留水で全量ｔ　ｓｔにす る。

緩衝剤Ｅ　：　ｐＨ４９３ くえん酸ナトリウム　８ａ２ＦＸ２Ｈ，０１１ａＯＬ　２９．Ｏｒ 濃塩酸　４五〇− ２５１Ｂｒｉｊ　１２．Ｏｄ フェノール　ｉ、ｏｓ＋ｊ 蒸留水で全量を５ｔにする。

緩衝剤０　：　ｐＨ五〇〇 くえん酸ナトリウム　８　ａ　２　ｒ　Ｘ　２　ＨＩＯＮａＯｔ２９．Ｏｆ 濃塩酸　＆〇− ２５％Ｂｒ１ｊ　１２．（ｌｄ フェノール　ＬＯｄ 蒸留水で全量を５ｔにする。

緩衝剤Ｄ：ｐＨ９，６６ くえん酸ナトリウム　１７ｔ５ＰＸ２１１１．ＯＨ，Ｐｏ、　１５．５’Ｉ ＭａＯＨｔ、　５１ ２５％Ｂｒ１ｊ　１２．０ＩＩｔ 蒸留水で全量を５ｔにする。

ニンヒドリン溶液： エチレングリコールモノメチルエーテルＭ８５９　五ａｔニンヒドリンｐ、Ａ、 　８αＯｆ ４Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ５，５１ＬＯＬ１５係塩化チタン（２）溶液　２ α〇−蛍　光　試　験 ［Ｌ２Ｍはう酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，２）フルラムアセトン溶液（２０岬 ／１００ｄ）測定すべきアミノ酸溶液のアリフォント（１１〜１００１００ｎ／ ｙｄ　）　ｔ−２，２５−のほう酸ナトリウム緩衝液に加え念。

うず混合機中ですばやく攪拌しながら１７５−のフルラムアセトン溶液を加えた 。ここで所望の結果を得るためには迅速な添加と迅速な混合が必須でおる。蛍光 度をＰ＠ｒｋｉｎ−１〇ｍｅｒ　Ｌ８−５　＃ミタスセンスメーターで輝尽波長 ３９０　ｎｍおよび発光波長４７５　ｎｍ〜４９０　ｎｍで測定した。検量線か ら相当値を決定した。

Ｐｅｒｋｉｎ−１１ｍ＋ｓｒ　施光計２４１型を使用して４５６　ｎｍ４２５℃ で測定した。検量系に、アミノ酸濃度を定量出来る０〜５００　ｍＭの範囲内と した。

定　義： （α）：比旋光度　α：旋光度 Ｃ：濃ｇｔ７ｔ　ｚ：長さくａｍ） Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ試験 ガラガラヘビ（Ｃｒｏｔａｌｕｓ　ｄｕｒｉｓａｕｓ　）からのＬ−アミノ酸オ キシダーゼをＬ−アミノ酸の試験用に使用した。

本試験ｆ＠　Ｂｏｓｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｓｉｍの方法により行った。

溶　液： （ｂ）　ｏ−ジアニシジン溶液、２五２ｍＭ（ｃ）　緩衝剤アミノ酸溶液子０５ 艷の溶液（ｂ）（＋１）　ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）、２５０１７／ｊｙ（６ ）　水冷蒸留水で１００倍、５０倍又は２０倍に希釈した酵素溶液、１７／ａｙ 反応バッチ： 緩衝液（ａ）　五〇〇− ＰＯＤけん濁液は）　ユ０１− 酵素溶液（・）　α０２ｄ 反応にＤυＢｅｃｋｍａｎｎ　分光光度計を使用して４３６ｎｍ、２５℃で行つ 九。

Ｌ−アラニンとＬ−バリンの検量系に４０〜４００ｐＭの範囲内で直線関係を示 した。

Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ試験 ブタ腎臓からのＤ−アミノ酸オキシダーゼをＤ−アミノ酸の試験用に使用した。

本試験はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　ＭａＺｌｎ−ｂａｉｍ　の方法によシ行った。

溶　液： （ａ）１０分間０臆　で通気したトリス緩衝液、２００ｍＭ％　ｐｉｌｌ　＆　 ５ （ｂ）ｎＡｐａ溶液、１２ｍＭ（１０ｑのＮムＤＢ。

Ｍ＋！Ｌ塩／　ｗｔ　Ｈ寓０） （ａ）　カタラーゼ溶液（蒸留水で１００倍に希釈）、約２６へ０００υ／− （イ）乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、約４５０　Ｕ／岬 （ｅ）　氷冷水で５０倍、２０倍又は１０倍に希釈し九酵素溶液、約１５１７／ ＪＩＦ Ｄ−アラニンとＤ−バ替ンの検量系は１０〜５５０μＭの範囲内で直線関係を示 した。検出限界ｆ＠５ｐＭＤ−アミノ酸であった。

反応バッチ： トリス緩衝液（ａ）　２．５０　ｗｄ アミノ酸被験液　α５〇− ＭＡＤＥ溶液（ｂ）　（１０５ｍ カタラーゼ溶液（ｃ）　（Ｌ　Ｏ１５ｊＩＩＤＨけん濁液（ａ）　α０１− 酵素溶液（８）　１０１− ５４０　ｎｍにおける光吸収の変化を２５℃において分光光度計によ〕測定した 。

実施例１〜４２ アミノ酸カルバメートを立体選択的に加水分解する酵素を有する微生物を得るた めに、可能な限ルの広範囲の微生物を単離出来る様に色々な場所からの土壌サン プルを使用した。

力）ｖバメート殺虫剤Ｅｅｔａｎａｌ　５２およびＴＪｎａｅｎ　Ｓ　５で処理 した農地および土地からサンプルを採つな。

スクリーニングの結果、好ましい位置づけは見られなかった。土壌から洗い出し た微生物をそれぞれの場合に単一の０およびＮ源としての舅−（メトキシカルボ ニル）−Ｄ’Ｌ−アラニン、Ｎ−（メトキクカルボニル）−ＤＬ−バリン又はＮ −α−信書−ジメトキシカルボニル）−ＤＬ−９シン上で生育させた。Ｎ−（メ トキシカルボニル）−ＤＩｔ−バリン上の場合に他の２つのアミノ酸力〃バメー ト上の場合よシも非常に少ない菌株しか見られなかった。

見出された４２菌株の内、３５菌株が基質ｓ−Ｃメトギシカルボニル）−ＤＬ− アラニン変換の最高の酵素活性を示した。扇−α−虐一（ジメトキシカルボニル ）−ＤＬ−リシンは酵素加水分解に二〕理論的に４′）の化合物、すなわちｎ− ｇ−（メトキシカルボニル）−リシンのＤ−又にＬ−鏡偉体、Ｎ−α−（エトキ クカルボニル）−ＤＬ−リシンおよびリシンでとなることが出来る。

Ｎ−α−１−（ジメトキシカルボニル）−ＤＬ−リシン変換活性を示した全ての 菌株に生成物ｍ−ａ−Ｃメトキシカルボニル）−リシン（これに場合によっては ソノＬ−鏡像体の形で検出されることもあった）を生成した。

４２菌株の内の５菌株の場合には、遊離アミノ酸であるリシンも又検出された。

化合物Ｎ−α−（エトキクカルボニル）−ＤＬ−リシン框どの場合にも検出され なかった。この様にこれら酵素群にリシンジカルバメートのα−位に選択的に作 用するものでるる。

詳細に検討した野性型単離体の全てがラセミ体アミノ酸カルバメートの加水分解 において所定の立体選択性を示したことに注目に値するものである。

先に見出された４２菌株の内６菌株を使用しての長時細胞を含有しない粗抽出物 と基質１−（メトキシカルボニル）−ＤＩｔ−バリンとの長時間反応 ム４　１．２　７．０　６ａＯｔ１８　１１２　！７１Ａｓ　［１２７，０６５ ，５［７４８＆６２Ｌ１４Ｌ８　ｔｓ　７．０　６５５　＋１４７　４４７１（ Ｌ７４Ｌ１０　α５　７．０　６７、Ｏｔ８４　２１に８５２．６ＳＬ１２　ｔ ｏ　７．０　６４．ｏ　２．９９　５５ｃＬ２ＢＳ、４５Ｉ、１Ｂ　１．４　１ ４．０　６４５　＆５０　７６Ｌ４９ＬＢにれら６菌株の生変酸における立体特 異性に、化合物Ｎ−（メトキシカルボニル）−Ｄ−バリンが変換されなかつ九事 実からも立証された。菌株ム３の活性に注目に値するものである。粗抽出物に多 くの因子、９１えは禁止剤等を含有しているので、反応経路に影＃を与え得る。

実施例４３〜５０ アミノ酸カルバメートの加水分解反応によるアミノ酸。

二酸化炭素およびアルコールへの変換にアミド結合又はエステル結合への酵素作 用によシ行なわれる。従ってエステルやアミド結合を開裂する作用を有するどの 市販酵素が基質としてのアミノ酸カルバメートを受容するかどうかの問題を考慮 する必要がある。エステラーゼとして、３種のアセチルコリンエステラーゼ、各 １種のヒダントイナーゼおよびウレアーゼおよび２ＰＭのアクラーゼを検討した 。

ブタ肝臓からのカルボキクエステラーゼ（実施例４３）は何らの反応も示さなか った。ウナギのアセチルコリンエステラーゼ（実施例４４）にアミノ酸カルバメ ートを変換しないが、ウシ（実施ｇＡＵ４５）およびヒト（実施列４６）のエチ スロサイト（ｅｔｈ７ｔｈｒＯｃ７ｔｅａ　）のアセチルコリンエステラーゼに は酵素活性が見られた。Ｌ−アミノ酸カルバメートだけが変換された。基質とし て使用したＤ一対掌体に何ら反応を示さなかった。

これらの酵素は良好な安定性を示した。１５０時間に及ぶ培養パンチの中で、直 線的な基質変換が達成された。

プノイドモナスフルオレツセンス（Ｐｇｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏ−ｒｅｓ ｃａｎｓ　）　（実施列４７）からのヒダントイナーゼは活性を示さなかった。

又、ウレアーゼ（実施例４８）も活性を示さなかった。真菌アクラーゼ（実施例 ４９）およびブタ腎臓からのアクラーゼ（実施列５０）も又目的とする活性を有 することが検出された。

表２に腎アシラーゼによるアセチル基およびカルバメートアミノ酸の転化率の比 較を示した。反応にＬ−特異性であった。

ブタ腎臓からのアミノアシラーゼの基質特異性（アラニン１００％に関して） アクルアミノ酸　アミノ酸カルバメートアラニン　クロロアセチル　１００　メ トキ７カルボニＡ−１００アセチル　２７　エトキクカルボニル　８９バリン　 アセチル　１４５　メトキクカルボニル　７１エトキシカルボニル　５９ Ａ３：　ｘ　Ａ４：◇　Ｌ８：　Δ 国際調査報告 ＡＮＮＥＸ　Ｔｏ　Ｔ！（Ｅ　ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡｌ：、５ＥＡＲＣＨＲ ＥＰＯＲτ０ＮｒＮＴＥＲＮＡＴｒＯＮＡＬ　ＡＰＰＬＩＣＡＴｒＯＮ　Ｎｏ、 　ＰＣＴ／Ｅ：’　８７１０Ｏｉ０７　（ＳＡ　１６４８２）

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．アミノ酸又はノルエフエドリンのカルバメートラセミ体から出発し、該ラセ ミ体を酵素的に分別することを特徴とするラセミ体の分割方法。
2. ２．メチルカルバメートを使用する請求の範囲第１項に記載の方法。
3. ３．水溶性アミノ酸カルバメートラセミ体を使用する請求の範囲第１又は第２項 に記載の方法。
4. ４．　天然アミノ酸のアミノ酸カルバメートラセミ体を使用する請求の範囲前項 のいずれかに記載の方法。
5. ５．（ａ）アミノ酸カルバメートラセミ体又はノルエフエドリンカルバメートラ セミ体の鏡像体の１方を加水分解的に分割する酵素活性を有し、そして該酵素活 性試験により得られた微生物により、あるいは （ｂ）前記（ａ）の微生物の酵素活性により、行なう、請求の範囲前項のいずれ かに記載の方法。
6. ６．方法（ｂ）を、方法（ａ）の微生物の培養物、又はそれから微生物を除いた 培養物、又は培養物の抽出物、又は微生物の抽出物の形の酵素活性の利用により ラセミ分割を行う、請求の範囲第５項に記載の方法。
7. ７．土壌サンブルから単離された微生物又は該微生物の酵素活性の利用によりラ セミ分割を酵素的に行う、請求の範囲前項のいずれかに記載の方法。
8. ８．カルバメートで処理した土壌サンブルから単離された微生物又は該微生物の 酵素活性の利用によりラセミ分割を酵素的に行う、請求の範囲第７項に記載の方 法。
9. ９．アミノ酸カルバメートラセミ体又はノルエフエドリンカルバメートラセミ体 の鏡像体の１方を加水分解的に分割する作用を有し、そして酵素活性試験により 得られた酵素の利用により行う、請求の範囲第１〜４項のいずれかに記載の方法 。
10. １０．ラセミ分割により生成した光学活性アミノ酸、特にＬ−アミノ酸を単離し 、そして（または）その生成したアミノ酸に対する鏡像体でありそして該ラセミ 分割により生成した光学活性アミノ酸、特にＤ−アミノ酸のカルバメートをそれ 自体公知の方法により分解してその鏡像体アミノ酸を回収する、請求の範囲前項 のいずれかに記載の方法。