JPS6342691A - リン脂質の改質方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、りン脂質にリパーゼを作用させ、その少なく
とも一部をリゾ型リン脂質とすることからなるリン脂質
の改質法に関する。

（従来の技術） リゾ型リン脂質とはリン脂質のグリセリシ残基に結合し
た脂肪酊の一部を加水分解して得られる部分分解リン脂
質である。かかるリゾ型リレ脂質は、水溶性が増加して
Ｏ／Ｗ型の乳化性が強くなり、また、カルシウムやマグ
ネシウム等のイオ。

が高濃度に共存しても乳化力が低下しない等、（憂ねた
特性が付与されることが報告されており　（Ｊ。

Ａｍｅｒ、Ｏｉ　ｌ　　Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、５３，４２
５．１９７６）　、このものの応用例としてはミルクリ
ブレーサー（文献上記）、マヨネーズの熱安定性の改良
（Ｊ、Ｓｃｉ、Ｆｏｏｄ　　Ａｇｒｉｃ、３２，４５１
．１９８１）、製パン改良剤（特開昭６Ｏ−３０６４４
）などが知られている。

リン脂質をリゾ型リン脂質に変えるための加水分解の手
段には酸、アルカリ等を用いる化学的方法と酵素を用い
る方法とがあるが、化学的方法（よ昌￥反応に特異性が
ないためり・ｆ型リン脂質の収率が低く、また、反応に
は高温を必要とし分解生成物が着色する等の不都合があ
り、現在では殆ど顧みられていない。

リン脂質を分解する酵素としてホスホリパーゼが知られ
ている。該酵素はその作用部位によって更に細分類され
、このうちリン脂質をリゾ型リン脂質に分解するにはグ
リセロール残基の１位および２位に結合した脂肪酸をそ
れぞれ選択的に加水分解する、ホスホリパーゼＡｉ、ま
たはＡ２、もしくは１位および２位の両方を加水分解す
るホスホリパーゼ活性を有するもののうち、いずれかが
必要とされる。

ホスホリパーゼＡあるいはＢ活性を有する酵素は、蛇毒
や蜂毒中に存在することが古くから知られているが、こ
の他にはすい臓リパーゼ、リゾプス°デしマー（Ｒｈｉ
ｚｏｐｕｓ　　ｄｅｌｅｍａｒ）−リ゛ｆ　−ｆ　スー
アルヒズス（Ｒ，ａｒｒｈｉｚｕ　ｓ　）やムコール・
ジャバニカス（Ｍｕｃｏｒｊａｖａｎｉｃｕｓ）等の少
数の微生物起源のリパーゼに、その活性の存在が報告さ
れているのに過ぎない。現在、酵素を利用してリン脂質
を分解したり・ｊ型リン脂質も一部市販されているが、
これは豚すい臓すパーセを用いたものであり、ｊ敞生物
起源のリパーゼを用いるリン脂質の改質は未ｔ＝工業的
に行われていない。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明は、工業的に入手可能な微生物起源のリパーゼに
つき広く検索を行って、リン脂質をリゾ型リン脂質に分
解することができろ、強いホスホリパーゼＡあるいはＢ
活性を有するリパーゼ剤を見出し、もって酵素を用いた
リン脂質のリゾ型リン脂質への改変による改質に実用化
の道を開こうとするものである。

（発明の構成） 本発明は、リン脂質にアスペルギルス属まｔ二はシュー
ドモナス属に属する微生物、リゾプス・ジャバニカス（
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　　ｊａｖａｎｉｃｕｓ）　　リゾプ
ス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓｎｉｖｅｕｓ）および
ムコール・ミーハイのうちの−っが生産するリパーゼを
作用させ、その少な１とも一部をリゾ型リン脂質とする
ことを特徴とするリン脂質の改質方法である。　アスペ
ルギルス属に属する微′生物としてはアスペルギルス・
ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｎｉｇｅｒ）まｔ
二（よアスベ７Ｌキルス・ウエンチ（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ　　ｗｅｎｔｉ）が、ンユードモナス属に属する
微生物としてはシュードモナス・フルオレ−７セ：／ス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｕｓ　　ｆ　１ｕｏｒｅ　ｓ　ｃ
、θｎｃｅ）またはンユモードナス・フしイジ（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎｕｓ　　ｆｒａｇｉ）の生産するリパーゼ
が、高いホスホリパーゼ活性を有するので特に有利であ
る。これらの微生物の生産する酵素は市販されているも
のも多く、本発明においてもこれらを利用することがで
きる。

これら微生物から取得したリパーゼ剤のホスホリパーゼ
活性は、その起源によりリン脂質の１位脂肪酸を擾先的
に加水分解するものと、１および２位脂肪酸の両方をほ
ぼ均一に加水分解するものとがあ吟、前者の例としては
アスペルギルス・ニガ−、リゾプス・ジャバニカス、同
ニベウスの生産するリパーゼがあり、後者の例としては
シュードモナス・フルオレッセンス、同フし・イジがあ
る。

す゛ｊ型リン脂質のみを多量に生成させるためには、前
者タイプのリパーゼを使用するのが有利である。

かかる酵素を作用させてリゾ型リン脂質を得るためのリ
ン脂質原料としては、例ば大豆レシチン、１［ｆｆレシ
チン等の動植物起源の市販レシチンの他、植物油の精製
工程の一つである脱ガム工程で得られる、所謂抽出油滓
をも用いることができる。反応は、水、または酵素に至
適なＰＨの緩衝液にリレ脂質１〜５０重量％の濃度に分
散し、この分散液にリン脂質１ｇ当たり、山田らの方法
［日本農芸化学会誌３６，８６０．１９６２］により測
定したリパーゼ活性が１〜１００００ユニ、ソトに相当
する量のリパーゼを加え、反応液を揺動させつつ２０〜
６０℃、より好ましくは２５〜４０℃で３〜２４時間反
応させるのがよい。

所定時間経過した反応液は、例えば製パンへの利用では
これをそのまま生地の混捏水として使用することもでき
るが、一般的には必要に応し加熱等によりリバーセを失
活せしめ、更に必要に応し薄層濃縮等の適宜の濃縮機に
よる濃縮、更には噴霧乾燥、凍結乾燥等の適宜の乾燥手
段を施して、濃縮もしくは乾燥製品とすることもてきる
。

以下実施例により具体的に説明する。

（実施例） 実施例１ リソ脂質１−バルミｌ−イル２−オし・イルポスファチ
ンルコリン１０　ｍ　ｇおよび表１に挙げた各微生物起
源の市販リバーセ剤４００ユニットを、０゜１Ｍリン酸
緩衝液（ＰＨ７，０）１ｍｌ！に分散し、３７℃恒温槽
中で攪（よんしつつ３時間反応させた。

経時後反応液を凍結乾燥し、このもののクロロホルム−
メタノール（２：　　１）抽出液に内部標準物質として
ステアリン酸２　ｍ　ｇを加え、シリカゲル薄層板にス
ボットシて、クロロホルム：メタノール：水（６０：　
　３０：　　３）を展開溶媒として薄層クロマ１〜ゲラ
フイーを行った。展開後、遊離脂肪酸区分およびリゾホ
スファチジルコリン区分をそれぞれ掻き取り、前者につ
いては三フッ化メタノール法で脂肪酸をメチルエステル
化後、ガスクロマトグラフィーによりパルミチン酸とオ
レイン酸の定量を行い、後者についてはこれを過塩素酸
分解後リンの定量を行ってリゾホスファチジルコリンの
生成量を算出した。結果を表１にまとめる。

表１ ＊ＩＦＯ８８６４菌株をＨｏＣｈａｎｄｅｒら（Ｊ、Ｆ
ｏｏｄ　　　Ｓｃｉ、４５，５９８．１９８０）に準じ
て培養、菌体を遠心除去したもの。

表１に見られるように、本発明に係るアスペルギルス属
およびシュードモナス属に属する微生物、リソフス・ジ
ャバニカス、同ニベウス、ムコール・ミーハイから取得
したリパーゼ剤は、いずれもホスホリパーゼ活性を有し
、リン脂質１−パノＬ、ニドイル２−オレイルホスファ
チンルコリンに作用してリゾ型リン脂質であるリゾホス
ファチジルコリン（表中リゾＰＣと略記）を生成した。

一方、キャンタイプ・ンリンドラセア、りＵモバクテリ
ウム・ビスコサム、アースロバク々　・ニーリアファシ
ェンス等の生産するリパーセにはホスホリパーゼ活性が
殆どないか、あるいは極めて微弱なものであり実用化の
可能性はなかった。。

また、ホスホリパーゼ活性を有するリパーゼ剤において
も、その作用機作によってり・ｆホス７アチジルコリン
生成能にかなりの差があり、リソ型リン脂質を多量に生
成させるには、特にリン脂質の１位脂肪酸を優先的に分
解するタイプ（表１中の遊離脂肪酸組成の欄でパルミチ
ン酸（１位脂肪酸）がオレイン酸（２位脂肪酸）より多
いもの）のリパーゼ剤の使用が好ましいことが示唆され
た。

実施例２ 大豆リン脂質（独スターンケミ−社製スターンパーＰＭ
）の１０％（Ｗ／Ｗ）緩衝液＊分散液５０ｇに表２収載
の微生物起源のリパーゼ各１０００ユニットを加え、ロ
ークリーンーーカー中３７℃で２４時間反応させた。

＊緩衝液 ンユードモナス・フルオレッセンス、同フレイジ、すｆ
−ｊス・ジャバニカス、同ニベウス生産の酵素剤につい
ては０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７，０）、アスペルギ
ルス・ニガー生産のｉＩ　−Ｚ　剤については０．１Ｍ
酢酸緩衝液（ＰＨ５，６１を使用。

経時後、凍結乾燥を行い、そのクロロホルム−メタノー
ル抽出物につき、クロロホルム−、メタノ−）Ｌ−水（
６５：　　２５：　４）およびブタノール−酢酸−水（
６０：　　２０：　　２０）の２種の展開溶媒を用いた
二次元薄層クロマトグラフィーを行った。

ホスファチジルコン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノー
ルアミン（ＰＥ）、リゾホスファチジルコリン（リゾＰ
Ｃ）およびリゾホスファチジルエタノールアミン（リゾ
ＰＥ）の各区分を掻き取り、それぞれにつき過塩素酸分
解後リンの定量を行ってこれらの組成比を求めた。結果
を表２に示す。

表２に見るように、基質に大豆リン脂質を用いた場合に
も、本発明に係る微生物起源のリパーゼはいずれもリゾ
型リン脂質を生成するが、（リゾＰＣ＋ｌＪ−／ＰＥ）
／　（ＰＣ＋ＰＥ＋ｌＪゾＰＣ＋リゾＰＥ） で算出した「リゾ化率」は、アスペルギルス・ニガーが
最も大きく、以下リゾプス・ジャバニカス、ムコール・
ミーハイ、リゾプス・ニベウス、シュードモナス・フル
オレッセンスおよび同フレイジの順で、リゾ型リン脂質
を得るには１位脂肪酸に優先的に作用するタイプのリパ
ーゼの使用が望ましいという先の実施例１の結果を裏付
けるものであった。

表２．大豆リン脂質リパーゼ分解物の組成（％）ＰＣ：
ホスファチジルコリン、 リゾＰＣ：　リ・ブホスファチジルコリン、ＰＥ：ホス
ファチジルエタノールアミン、リゾＰＥ：　リゾホスフ
ァチジルエタノールアミン注）ＰＣ：ホスファチジルコ
リン、 す・ｊ　Ｐ　Ｃ：　　リゾホスファチジルコリン、ＰＥ
：ホス７アチジルエ々ノールアミノ、リ　　ノ　Ｐ　Ｅ
　：　　リ　ノ　ホ　ス　−フ　ァ　チ　ン　フル　エ
　タ　ノ　−−ル　フ′　ミ　ノ実施例３ 実施例２０犬豆り、脂質を卵黄リレ脂質（和光紬薬工業
製　即製レンチン、生化学用）に、リバー七使用量を３
０００ユニツ）・に、それぞれ代えた以外（よ実施例２
と同様に操作して、表３の結果を得た０１本発明に係る
微生物起源のリバーセは卵黄リレ脂質にも作用してリゾ
型すソ脂質を生成することが確認された。反応の傾向（
：ｆ大豆りン脂質のそれと略同様てあっｌ−６ 実施例４ 実施例２て使用したのと同一の大豆リン脂質の２０％（
Ｗ／Ｗ）　水分散液５０ｇにアスペルギルス・ニガー起
源のリバーセ剤（天野製薬すバーセＡ）２０００ユニッ
１−を加え、ロータリーシ□−カー中３７℃で２４時間
反応させた。

反応液を実施例２に準じ−Ｃ分析した結果は、表４に示
すとおりてあり、高濃度水分散液においてもリハーセに
よる分解反応が正常に行われることが分かつｔ二。

表４．実施例４のリパーセ分解物の組成（％）ＰＣリ　
・グ　ＰＣＰＥ　　　　　リ　・ノ　ＰＥ　　　　　　
　　リ　ソ　化　率（Ａ）　　　　　　　（Ｂ）　　　
　　　　　　　　（Ｃ）　　　　　　　（Ｄ）　　　　
　（Ｒ＋Ｄ）／　（人士Ｂ＋Ｃ＋Ｄ）８．０　　　　　
　８．１　　　　　　　　　　　　　　７．２　　　　
　　５．９　　　　　　　　　　　　　　０．４８実験
例５ 本発明の方法で得た分解物の乳化力を次のとおり試験し
た。

本発明の方法にょろりン脂質として実験例４で得た酵素
分解物の凍結乾燥品を、対照区として未分解大豆しパ／
グツを、各々試料とし、試料各０゜５ｇと表５に記載の
各濃度の塩化カルシウム水溶７（１５ｍ　ｌを試験管に
とり、日音医理科器械製作所製ホモジナイ升−「ヒスコ
Ｉ・ｎＪ」−Ｃ４、５ｍｍΦン禁７１・を用い１０．０
０Ｏｒｐｍ、２分間分散させ、乳化状態を観察した。。

表５ ０；均一に乳化　　　　　×：乳化せず△：均一に乳化
するが数分て分離 以上のように、本発明によろ酵素処理レシチンは、未処
理しシチンては乳化力が殆どないイオン強度の高い系に
おいても優れた乳化力を発現することが示された。

（発明の効果） 本発明によれば、工業的に入手が可能な市販の微生物起
源のリバーセ剤を用い、広範な原料リン脂質をり・ｆ型
すソ脂質に改質することができろ一１該リゾ型リン脂質
（を特に水系分散媒における乳化性に優れた物質であり
、このものを安価に提供することを可能としｔ：本発明
は、特に食品丁業を中心に産業面に多大の貢献を未たす
ものである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）リン脂質にアスペルギルス属またはシュードモナ
   ス属に属する微生物、リゾプス・ジャバニカス、リゾプ
   ス・ニベウスおよびムコール・ミーハイのうちの一つが
   生産するリパーゼを作用させ、その少なくとも一部をリ
   ゾ型リン脂質とすることを特徴とするリン脂質の改質方
   法。
2. （２）アスペルギルス属に属する微生物がアスペルギル
   ス・ニガーまたはアスペルギルス・ウェンチである特許
   請求の範囲第（１）項記載のリン脂質の改質方法。
3. （３）シュードモナス属に属する微生物がシュードモナ
   ス・フルオレッセンスまたはシュードモナス・フレイジ
   である特許請求の範囲第（１）項記載のリン脂質の改質
   方法。