JPS63264422A - 血栓症状の予防及び治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 慶栗上公五皿北災 本発明は、１，２−ジエイコサペンタエニル−３ｎ−グ
リセロ−（３）−ホスホリル誘導体を含有してなる血栓
症状の予防及び治療剤に関し、更に詳述すれば従来のエ
イコサペンタエン酸（以下、ＥＰＡと略記する）と比較
して１７１０以下の投与量で迅速な血栓症状の予防及び
治療に有効な薬剤に関する。

来の　　　び　明が　　しようとする課２従来、エイコ
サペンタエン酸（Ｅ　Ｐ　Ａ）が人体における血栓症状
の予防もしくは治療にある程度有効であることが知られ
ているが、実用上満足すべきものとは言えない。

題を解　するための手　　び　用 本発明者らは上記事情を改善するために種々検討してい
るうちに、下記化学構造式（１）で示される１、２−ジ
エイコサペンタエニル−Ｓｎ−グリセロ−（３）−ホス
ホコリン（以下、化合物（１）で示される１、２−ジエ
イコサペンタエニル−５ｎ−グリセロ−（３）−ホスホ
エタノールアミン（以下、化合物（２）で示す）よりな
る１、２−ジエイコサペンタエニル−８ｎ−グリセロ−
（３）−ホスホリル誘導体が顕著な薬理効果を有するこ
とを知見して本発明を完成するに至ったもので、その目
的とするところはＥＰＡと比較してはるかに微量の投与
量で迅速な血栓症状の予防及び治療に有効な作用を併せ
持つ、薬剤を提供することにある。

以下、本発明の詳細な説明する。

本発明の血栓症状の予防及び治療剤は文献末記載の新規
化合物である（１）の化合物又は（２）の化合物を有効
成分として含有してなるものであるが、これら雨化合物
のうち（１）の化合物は、例えば次の方法により合成す
ることができる。

即も、（１）の化合物は出発物質としてエイコサペンタ
エニルクロリドとＬ−α−グリセリルホスホリルコリン
の塩化カドミウム複合体とを用いて、これらを下記反応
式に従って反応させることにより製造することができる
。

（式中、Ｒは−（ＣＨ２）１−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ，）
、−ＣＨｌを示す、） なお、エイコサペンタエニルクロリドはＥＰＡを公知の
方法で酸塩化物とすることにより製造できる。ＥＰＡは
特に海産生物に特徴的に多量に含有されている天然物質
であり、前記海産生物を原料として用いて、これから単
離して得ることができる。ＥＰＡの精製は硝酸銀含浸ケ
イ酸カラムクロマトグラフィーにより、純度９９％以上
とすることができる。

またＬ−α−グリセリルホスホリルコリンの塩化カドミ
ウム複合体は、例えば１，２−ジアシル−８ｎ−グリセ
ロ−（３）−ホスホコリンを出発物質として、これをテ
トラブチルアンモニウムヒドロキシド、次いで塩化カド
ミウムで処理することにより製造できる。１，２−ジア
シル−Ｓローグリセロ−（３）−ホスホコリンも動物、
植物に広く分布している天然物で、例えば卵黄、大豆等
を原料として公知の方法で単離、精製したものを用いる
ことができる。

（２）の化合物は出発物質としてＥＰＡとＳｎ−グリセ
ロ−３−ホスホリル−Ｎ、Ｎ−フタロイルエタノールア
ミン又は０−８ｎ−グリセロ−３−ホスホリル−Ｎ−エ
タノールアミンのナトリウム塩とを反応させることによ
り製造できる。

Ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル−Ｎ、Ｎ−フタロイル
エタノールアミンは１，２−ジアシル＝Ｓｎ−グリセロ
−（３）−ホスホエタノールアミンにフタル酸を反応さ
せることにより製造することができる。１，２−ジアシ
ル−３ｎ−グリセロ−（３）−ホスホエタノールアミン
は細菌、動物、植物等に広く分布している天然物で、例
えば卵黄、大豆等を原料として公知の方法により単離、
精製して得ることができるものである。

本発明の血栓症状の予防及び治療効果を持つ薬剤は、上
記方法等で裏道した（１）の化合物又は（２）の化合物
を有効成分として含有してなるものであるが、その製剤
形態には特に制限がなく９例えば液状、粉末状、粒状な
ど従来公知の各種製剤形態に製剤することができる。

（１）の化合物又は（２）の化合物の製剤中の含有率も
特に制限がなく１例えば（１）の化合物又は（２）の化
合物のみで製剤とすることもできるが、他の不活性物質
、増量剤、賦形剤等と併用しても良く。

更に他の薬剤その他との混合剤もしくは配合剤としても
良い。この場合、（１）又は（２）の化合物の配合量は
約０．１〜９９．９％と広範囲に選択し得る。

投与方法としては経口投与、その他剤形に応じて適宜投
与方法が選択される。

（１）又は（２）の化合物の１日当りの体重５０ｋｇの
人間への投与量としては０．１〜０．２ｇで抗血栓作用
を発揮する。

λ更９カー果 而して、本発明の薬剤は有効成分として１，２−ジエイ
コサペンタエニル−Ｓｎ−グリセロ＝（３）−ホスホコ
リン（（１）の化合物）又は１，２−ジエイコサペンタ
エニル−３ｎ−グリセロ−（３）−ホスホエタノールア
ミン（（２）の化合物）を含有するものであり、このた
め抗血栓作用において優れたものを示し、更にその効果
は短時間内に発現する。この場合、投与量は極めて小量
でよく、例えば従来知られているＥＰＡと比較した場合
、約１７１０以下の投与量で十分効果を発現する。また
更に、（１）の化合物及び（２）の化合物はいずれも天
然物から合成されたものであり、副作用もほとんどない
安全なものである。

以下、試験例により本発明を更に具体的に説明する。

〔試験例〕

１−Δニジｌ」冥し１±２之１≦フＬ二影肛＝Ｌ史欠純
度９８．０％以上の１，２−ジアシル−５ｎ−グリセロ
−（３）−ホスホコリン５０ｇを無水エーテルに溶かし
た。これにテトラブチルアンモニウムヒドロキシドの２
５％メチルアルコール溶液５０ｍＱを加えて２分間振盪
した。５分後溶液は濁り、固形物が沈殿してきた。２時
間室温にて放置した後、上澄み液をデカンテーションに
よって除いた。無水エーテル１００ｍＱで沈殿物を洗滌
した後、１２５ｍＱのアルコールを加えて沸騰させた。

濾過助材ハイドロ−スーパーセル（Ｈｙｔｌｏ−Ｓ　ｕ
ｐｅｒ−Ｃｅｌｌ）　１　ｇを加え、熱いうちに濾過し
た。炉液を冷して無水エーテル２５０ｄを加えると沈殿
が生じた。２５０Ｏｒｐｍで１０分間遠心分離した後。

上澄み液をデカンテーションによって除き、４〇−の沸
騰水に溶かした。これに塩化カドミウム水′溶液（Ｃｄ
ＣＱ、・２Ｈ，Ｏ）８ｇ／２０ｍＱ水を加えた。

エチルアルコール２５０ａｌｌを加えて０〜５℃で１夜
放置した。Ｌ−α−グリセリルホスホリルコリンの塩化
カドミウム複合体が無色針状結晶として析出した。収量
は４５ｇであった。このＬ−α−グリセリルホスホリル
コリンの塩化カドミウム複合体１１　ｇ（０，０１ｍｏ
ｌ）を５００ｍＱの三ロフラスコに入れ、直径５Ｉのガ
ラスピーズ１００ｍＱｉ［Ｉえた。フラスコを氷にっけ
、激しく攪拌しながら６０．６ｇのエイコサペンタエニ
ルクロリドの無水クロロホルム溶液６　Ｑ　ｍＱ（０、
２ｍｏｌ）を徐々に加えた。これに１１　ｍＱ（０、１
４ｍｏｌ）の無水ピリジンと１００−の無水クロロホル
ム混液を加えた。３０分後、温度２５℃にて更に攪拌し
た。反応液全部をブツフナー濾過装置（フィルターはっ
けない）に通してガラスピーズを除いた。ガラスピーズ
を５０−のクロロホルムで洗滌した。炉液を遠心して透
明な液体を得た。減圧下に溶媒を留去し、残渣からピリ
ジンを完全に除くために、真空デシケータ−に−夜装置
した。残渣に無水アセトン５００−を加え、遠心して沈
殿を得た。同様に、アセトン１００ｆｆＩＱで２回、エ
ーテ＃１００ｍＱで２回洗滌して残渣を乾燥させた。ク
ロロホルム−メチルアルコール−水（５：　４　：　１
）２００−に溶かし等量のイオン交換樹脂（アンバーラ
イトＩＲ−４５゜アンバーライトＩＲＣ−５０）の混合
カラムに通し、塩化カドミウムとピリジンを完全に除い
た。流出液に５０ｄのクロロホルムと１５０ｍ１ｌのア
セトンを加えて再結晶後、遠心分離して精製した。収量
は１１．６ｇであった。これをさらにシリカゲルカラム
クロマトグラフィーにかけて精製した。クロマトグラフ
ィー条件を以下に記述した。

９１力ゲル力ラムクロマトグラフイー条シリカゲル：１
ｋｇ サンプル量：１１．６　ｇ 流　　　　量：　４　Ｑ　ｍＱ／＋ｎｉｎ産−蛮一条一
花 Ｆ２　　　ＣＨＣら−ＭｅＯＨ（８５：１５）　　　１
２．０Ｆ３　　　　　　　　　（７０：　３０）　　　
６．０Ｆ４　　　　　　　　　（６５：３５）　　　６
．０Ｆ５　　　　　　　　　（６０：　４０）　　　８
．０Ｆ６　　　　　　ｎ　　　　（５０：　５０）　　
　８．０１．２−ジエイコサペンタエニル−３ｎ−グリ
セロ−（３）−ホスホコリンはＦ５，６．７に溶出され
た。収量は６．５ｇであった。

１．２−ジエイコサペンタエニル〜Ｓｎ−グリセロ−（
３）−ホスホコリンの物理的及び化学的性質は以下に示
すものであった。

■物理的性質 融　　点　　２２９〜２３１℃ 元素分析　ＣＨＮ　　　Ｐ 計算値（％）　　６９．８　９．３０　１，７０　３．
７０実測値（％）　　６９．６　９．２１　１，６８　
３．７４このものの赤外線吸収スペクトルを第１図に示
した。測定はＫＢｒ法によった。

■化学的性質 １．２−ジエイコサペンタエニル−８ｎ−グリセロ−＜
３）−ホスホコリンの薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ
）分析 １．２−ジエイコサペンタエニル−Ｓｎ−グリセロ−（
３）−ホスホコリンを以下に示す条件でＴＬ−Ｃにかけ
て分析した結果、ＴＬＣ上で単一のスポットを与えた。

Ｒｆ値は、０．３５であった。

ＴＬＣ条件 シリカゲルプレート：厚さ０．２５ｎｙｎ、２０Ｘ２０
■展開溶媒　　　　：　ＣＨＣＱ、　−ＭｅＯＨ−Ｎ２
０−酢象（５０：２５：４：８） 検出は濃硫准５０％水溶液をオールガラス製噴霧器で乾
燥シリカゲルプレートに吹き付け、１８０℃で２０分間
加熱した。

１．２−ジエイコサペンタエニル−Ｓｎ−グリセロ−（
３）−ホスホコリンの構成脂肪酸のガスクロマトグラフ
ィー（Ｇ　、Ｃ）分析 １．２−ジエイコサペンタエニル−５ｎ−グリセロ−（
３）−ホスホコリンにメタノール性５％塩酸を加えて封
管し、これを３時間湯浴中に放置してメタツリシスを行
った後、内容物を分液漏斗に移し、１０倍量のイオン交
換水を加えて生成した脂肪酸メチルエステルを石油エー
テルで抽出した。

これを以下に示す条件でＧＣ分析に供試した結果、エイ
コサペンタエン酸メチルエステルの純度は９８．０％で
あった。

ＧＣ条件 カラム充填剤　：５％シラー７ＣＰ／８０−１８０−１
Ｏ０ユニポートＢ キャリアーガス：Ｎ２ 検　　出　　器　：　ＦＩＤ カ　　　ラ　　　ム　：１ｍ　　１．Ｄ、　　３ｍｍカ
ラム温度：２００℃ 検出器温度：２３０℃ 注入温度：２３０’Ｃ ４５，０ｇの１，２−ジアシル−５ｎ−グリセロ−（３
）−ホスホエタノールアミンの１．５Ｑベンゼン溶液に
無水フタル酸１０．０ｇ、トリエチルアミン１０％水溶
液２５ｍＱを加えてゆるやかに加熱還流したー。得られ
たフタル酸誘導体に１．５０のジエチルエーテルを加え
て２時間攪拌した後、　５．Ｏｍｏｌのナトリウムメト
キシドのメタノール溶液を１滴ずつ沈殿が生ずるまで加
えた。エーテルで徹底的に洗滌後、遠心した。沈殿物を
メチルアルコールに溶解し、過剰のアセトンで再結晶し
て精製した。

このフタル酸誘導体（Ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリル
−Ｎ、Ｎ−フタロイルエタノールアミンのナトリウム塩
か０−８ｎ−グリセロ−３−ホスホリル−Ｎ＝エタノー
ルアミンのナトリウム塩）のメチルアルコール溶液１０
．Ｏｍｍｏｌｅｓ（３，６７ｇ）にＥＰＡのカリウム塩
２０　、　Ｏｍｍｏｌｅｓ（６，４５ｇ）を加え、メチ
ルアルコールをロータリーエバポレーターで留去した。

これにＥＰＡ４０．Ｏｍｍｏｌｅｓ（１１，５ｇ＞を加
え、微量のメチルアルコールを７０’Ｃでロータリーエ
バポレーターで留去した。

次に３０　、　ＯｍｍｏｌｅｓのＥＰＡの無水物を加え
、フラスコに栓をしてグリセロール湯浴８０〜８５℃で
４０・時間回転させた。次いで、反応物をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーにかけた。第１画分のクロロホ
ルム溶出画分に遊離脂肪酸が溶出し、第２画分のメチル
アルコール：クロロホルム＝１０　：　９（Ｖ／Ｖ）溶
出画分に目的物質である０−（１，２−ジエイコサベン
タエニルーＳｎ−グリセロ−３−ホスホリル）−Ｎ、Ｎ
−フタ口イルエタノ−ルアミンが得られた。収量は７．
０ｇであった。

これを更にシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ
て精製した。クロマトグラフィーの条件は下記のもので
あった。

シリカゲルカラムクロマトグラフィー条シリカゲル：　
２５０ｇ サンプル量ニア、０ｇ 流　　　　量：　　Ｉ　Ｑ　ｔＩＩＱ／ｍｉｎ亙−媒−
ゑ−狂 ＦＩ　　ＣＨＣＱ、　　　　　　　　　　　　３．０Ｆ
２　　ＣＨＣＱ３−ＭｅＯＨ（９５：５）　　　　２．
０Ｆ３　　　　　７７　　　　（９０：１０）　　　２
．０Ｆ４　　　　　　　　　（８５：１５）　　　２．
０１．２−ジエイコサペンタエニル−８ｎ−グリセロ−
（３）−ホスホエタノールアミンはＦ３，４゜５に溶出
された。収量は３．１８ｇであった。

１．２−ジエイコサペンタエニル−３ｎ−グリセロ−（
３）−ホスホエタノールアミンの物理的及び化学的性質
は以下に示すものであった。

■物理的性質 融　　点　　１７９〜１８１℃ 元素分析　ＣＨＮＰ 計算値（％）　　６９．０　８．９０　１．８０　４．
００実測値（％）６９．２　８，８８　１，８３　３．
９にのもののＫＢｒ法による赤外線吸収スペクトルを第
２図に、また第３図に核磁気共鳴スペクトルを示した。

核磁気共鳴スペクトルの測定はＣＤＣｆ１．を用いて行
った。

■化学的性質 １．２−ジエイコサペンタエニル−Ｓｎ−グリセロ−（
３）−ホスホコリンの薄層クロマトグラフィー（Ｔ　Ｌ
　Ｃ）分析 １．２−ジエイコサペンタエニル−８ｎ−グリセロ−（
３）−ホスホエタノールアミンを以下に示す条件でＴＬ
Ｃにかけて分析した結果、ＴＬＣ上で単一のスポットを
与えた。Ｒｆ値は０．９０であった。

ＴＬＣ条件 シリカゲルプレート：厚さ０．２５ｍ、２０Ｘ２０ｃｍ
展開溶媒　　　　：　ＣＨＣＱ、−ＭｅＯＨ−Ｈ，Ｏ−
酢酸（５０：　２５　：　４．：　８） 検出は濃硫酸５０％水溶液をオールガラス製噴霧器で乾
燥シリカゲルプレートに吹き付け、１８０℃で２０分間
加熱した。

１．２−ジエイコサペンタエニル−Ｓｎ−グリセロ−（
３）−ホスホコリンの構成脂肪酸のガスクロマトグラフ
ィー（ＧＣ）分析 １．２−ジエイコサペンタエニル−８ｎ−グリセロ−（
３）−ホスホエタノールアミンにメタノール性５％塩酸
を加えて封管し、これを３時間湯浴中に放置しメタツリ
シスを行った。次いで分液漏斗に移しこれに１０倍量の
イオン交換水を加えて生成した脂肪酸メチルエステルを
石油エーテルで抽出し、以下に示す条件でＧＣ分析に供
試した結果エイらサペンタエン酸メチルエステルの純度
は９８．２％であった。

ＧＣ条件 カラム充填剤　：５％シラー７ＣＰ／８０−１８０−１
Ｏ０ユニポートＢ キャリアーガス二Ｎ２ 検　　出　　器　：ＦＩＤ カ　　　ラ　　　ム　　：１ｍ　　１．Ｄ、　　３ｍｍ
カラム温度：２００’Ｃ 検出器温度：２３０℃ 注入温度：２３０℃ 小 供試薬剤は上記方法で製造した（１）の化合物（純度９
８．０重量％（以下、単に％で示す。））、（２）の化
合物（純度９８．２％）並びに比較対象薬剤としてエイ
コサペンタエン酸メチルエステル（純度９９．９％）と
アセチルサルチル酸（純度９９．０％）で、試験方法は
ボーン法によりウサギの血小板を豊富に含む血漿を調製
し、試験管内実験（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）でのＡＤＰ及び
コラーゲンによる凝集に対しての抑制作用を試験し、５
０％以上の抑制作用を示す場合に有効とみなして最小有
効濃度（ＭＥＣ）を求めた。試験結果を第１表及び第２
表に示した。

第　　　　　１　　　　　表 第　　　　　２　　　　　表 第１，２表の結果から明らかな通り、本発明の有効成分
である１、２−ジエイコサペンタエニル−Ｓｎ−グリセ
ロ−（３）−ホスホコリンと１，２−ジエイコサペンタ
エニル−８ｎ−グリセロ−（３）−ホスホエタノールア
ミンはＡＤＰ及びコラーゲンによる血小板凝集に対して
顕著な抑制作用を示し、いずれも比較対照物であるエイ
コサペンタエン酸メチルエステル又はアスピリンよりも
強い血小板抑制作用を示した。

以上の試験結果からして、本発明の有効成分である１、
２−ジエイコサペンタエニル−３ｎ−グリセロ−（３）
−ホスホコリン及ｒｊ　１９２−　シエイコサペンタエ
ニルーＳｎ−グリセロ−（３）−ホスホエタノールアミ
ンはエイコサペンタエン酸メチルエステル及びアスピリ
ンよりも小量の投与で顕著な血小板凝集抑制作用を発揮
することから、血栓症状の予防及び治療に極めて有効な
ものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は１，２−ジエイコサペンタエニル−５ｎ−グリ
セロ−（３）−ホスホコリンのＫＢｒ錠剤法により測定
した赤外線吸収スペクトル、第２図は１．２−ジエイコ
サペンタエニル−Ｓｎ−グリセロ−（３）−ホスホエタ
ノールアミンのＫＢｒＢｒ法により測定した赤外線吸収
スペクトル、第３図は１，２−ジエイコサベンタエニル
ー８ｎ−グリセロ−（３）−ホスホエタノールアミンを
ＣＤＣらを用いて測定した核磁気共鳴スペクトルである
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、１，２−ジエイコサペンタエニル−Ｓｎ−グリセロ
   −（３）−ホスホコリン又は１，２−ジエイコサペンタ
   エニル−Ｓｎ−グリセロ−（３）−ホスホエタノールア
   ミンよりなる１，２−ジエイコサペンタエニル−Ｓｎ−
   グリセロ−（３）−ホスホリル誘導体を有効成分として
   含有してなることを特徴とする血栓症状の予防及び治療
   剤。