JPS623791A

JPS623791A - カビ類または藻類による脂質の製造法

Info

Publication number: JPS623791A
Application number: JP60144371A
Authority: JP
Inventors: Hideki Fukuda; 秀樹福田
Original assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Kanegafuchi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1985-07-01
Filing date: 1985-07-01
Publication date: 1987-01-09
Also published as: EP0207475A2; EP0207475A3; DE3686788T2; EP0207475B1; DE3686788D1; JPH0412714B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野コ本発明は、脂質生合成能を有するカビ類もしくは藻類、
または同カビ類もしくは藻類の固定化微生物粒子を用い
て脂質を生成せしめるに際し、反応系に界面活性剤を存
在させて反応を行なうことを特徴とする脂質の製造法に
関する。

［従来技術１微生物国体の脂質はそれ自体油脂原料として、また脂質
の精製によってえられる各種ステロールや各種高級脂肪
酸などの有用物質は食品用、医薬用、または一般工業用
として幅広い用途に適用できるので、従来より脂質生産
性を高めたり望ましい組成の脂質を生産させる技術に関
して活発な研究開発が続けられてきた。特に最近では、
このような脂質から回収される不飽和脂肪酸のうちアラ
キドン酸やγ−リルン酸が多様な生理活性を有すること
が明らかになりつつあり、ますます注目を集めている。

従来このような脂質の製造方法としては、カカオ脂類似
の油脂の製造法（特開昭６０−７５２９２＠　’）　、
アラキドン酸の製造法（特開昭５２−６４４８２号、バ
イオテクノロジー・アンド・バイオエンジニアリング（
Ｂ＋ｏｔｅｃｈｎｏ＋ｏａｙ　ａｎｄ　Ｂ１０ｅｎ（ｌ
ｌｎｅｅｒｉｎ（１）、２５巻、１０５７（１９８３）
）およびγ−リルン酸の製造法（特公昭４７−２２２８
０号、同５８−２２１９９号）などを示しかしながら、
このような製造法では各種微生物菌体内の脂質蓄積量は
制限を受け、充分量生産することは不可能であり、しか
も脂質の大部分が菌体内に蓄積されるので、これらを回
収するためには国体を破砕処理したり酸処理したりする
などの複雑な抽出処理が必要となっていた。このような
抽出処理を用いれば抽出される多口の不純物の存在によ
って精製プロセスがきわめて複雑になり、工業化を推進
するうえで大きな阻害要因となっていた。したがって、
脂質を高収量で製造でき、しかも回収が容易な新しい製
造プロセスの開発が強く望まれていた。

［問題点を解決するための手段］本発明者は、このような観点から鋭意研究を重ねた結果
、反応系に界面活性剤を存在させながら反応を行なえば
菌体内に蓄積した脂質を菌体外に著量移行させることが
でき、脂質が高収量でしかも容易に回収できることを見
出し本発明を完成するにいたった。また、反応系に界面
活性剤を存在させながら反応を行なう際に脂質生合成能
を有するカビ類または藻類の固定化微粒子を用いれば反
応器中の微生物ａ度を高濃度に維持できるのでより高収
量に、また効率よく脂質を生産することができる。

菌体中に生成した有用物質を反応液中に移行せしめよう
とした例には酵母菌体中のグルタチオンの製造方法（特
開昭５４−８６６９１号）があるが、本発明とは微生物
の種類や蓄積される物質が異なり、脂質を効率よく反応
液中に移行せしめようとする方法は本発明が最初である
。

［作用および実施例］本発明は、脂質生合成能を有するカビ類もしくは藻類、
または同カビ類もしくは藻類の固定化微生物粒子を用い
て脂質を生成せしめるに際し、反応系に界面活性剤を存
在させて反応させることを特徴とする脂質の製造法であ
って、本発明によって反応液中に多量の脂質を蓄積する
ことができる。このような脂質が菌体外にスムーズに移
行する理由は明らかではないが、界面活性剤を適切な条
件下で反応液中に存在させれば界面活性剤は微生物の生
育に何ら悪影響を与えることなく微生物の細胞表面に作
用して、細胞膜の透過性を改善するものと思われる。こ
のようにしてえられた反応液中の脂質は従来より公知の
抽出および精製方法によって容易に高純度の油脂、各種
ステロールおよび各種高級脂肪酸などを回収することが
できる。

本発明に使用しうる微生物としては、脂質生合成能を有
するカビ類または藻類であればよく任意のものを用いる
ことができるが、（１）アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ）　、（２）フザリウム（ＦｌｌＳａｒｉ
ＬＩｍ）、（３）ペニシリウム属（Ｐ１３ｎｉＣｉｌｌ
ｉｔ１ｍ）、（４）ポルピリジウム属（Ｐｏｒｐｈｙｒ
ｉｄｉｕｍ）、（５）ムコール属（Ｈｕｃｏｒ）　、　
（６）リゾプスｌｉｌ　（Ｐｈｉｚｏｐｕｓ）、（７）
アブシディア属（Ａｂｓｉｄｉａｌ　、　［８）アクチ
ノムコール属（ＡｃｔｉｎｏＩＩｌｕｃｏｒ）　、　（
９）コアネフオラ属（Ｃｈｏａｎｅｐｈｏｒａ）　、（
ｔｏ）力ニンガメラ属（Ｃｕｎｎｉｎａｈａｍｅｌ　ｌ
ａ）、（１１）ヒコマイセス属（Ｐｈｙｃｏｎｙｃｅｓ
）、（１２）リゾムコール属（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ）
、（１３）へリコスチラム属（Ｈｅｌ　ｉｃｏｓｔｙｌ
ｕｍ）、（１４）パエシロマイセス属（Ｐａｅｃｉ　ｌ
ｏｍｙｃｅｓ）、（１５）シンセファラストラム属（Ｓ
ｙｎｃｅｐｈａｌａｓｔｒｕｍ）　、　（１Ｂ）サルシ
ネラ属（Ｃｉｒｃｉｎｅｌ　ｌａ）、（１７）ゴングロ
ネラ属（Ｇｏｎａｒｏｎｅｌｌａ）　、（１８）バクゼ
ラ属（Ｂａｃｋｕｓｅｌ　ｌａ）、（１９）ピチウム属
（Ｐｙｔｈｉｕｍｌ　、（２０）フェネロマイセス属（
Ｆｅｎｎｅｌｌｏｍｙｃｅｓ）　、（２１）モルティエ
レラ属０（ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）　、（２２）スピル
リナ属（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ）　、（２３）クラドスポ
リウム属（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）、（２４）ｌ−
リコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）　、（２５）
ペリキュラリア属（Ｐｅｌｌｉｃｕｌａｒｉａ）、（２
６）グリオクラディウム属（Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ）
　、（２７）ヒュミコラ属（Ｈｕｍ　ｉ　ｃｏ　ｌ　ａ
　ｌ、（２８）クラビセブス属（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ）
および（２９）クロレラ属（Ｃｈｌｏｒｅｌ　ｌａｌな
どをその代表的なものとしてあげることができる。特に
アラキドン酸については上記のうち（１）〜（６）に属
する微生物、γ−リルン酸については（５）〜（２２）
に属する微生物から選択するのが含有量の点から好まし
い。

ざらに具体的にそれぞれの属に対する代表的菌株例をあ
げれば、アスペルギルス・カンデイダス（Ａ、ｃａｎｄ
ｉｄｕｓ）ＩＦＯ４３０９、フザリウム・オキソボラ°
ム（Ｆ、ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）　ＩＦＯ５９４２、ペニ
シリウム−，７，ビヌロサム（Ｐ、ｓｐｉｒｕｌｏｓｕ
ｍ）ＩＦＯ５７９３、ポルピリジウム・クルエンタム（
Ｐ、　ｃｒｕｅｎｔｕｍ）、ムコール・アンビガウス（
Ｈ，ａｍｂｉｇｕｕｓ）ＩＦＯ６７４２、リゾプス・オ
リゼー（Ｒ，ｏｒｙｚａｅ）　ＩＦＯ５４１８、リゾプ
ス・ストロニフｐ−（Ｒ，５ｔｏｌｏｎｉｆｅｒ）　Ｉ
ＦＯ４７８１、アブシディア−］エルレア（Ａ、ｃｏｅ
ｒｕｌｅａ）ＩＦＯ４０１１、アクチノムコール・レベ
ンス（Ａ、ｒｅｐｅｎｓ）ＨＵＴ　１０４９、コアネフ
オラ・シルシナシス（Ｃ，ｃｉｒｃｉｎａｎｓ）　ＩＦ
Ｏ５９９１、カニンガメラ・エチヌレータ・エレガンス
（Ｃ，ｅｃｈｉｎｕｌｅｔａ　ｖａｒ。

ｅｌｅｇａｎｓ）ＩＦＯ４４４１、ピコマイセス・ニテ
ンス（Ｐ、ｎ１ｔｅｎｓ）ＴＦＯ５６９４、リゾムコー
ル・ミーヘイ（Ｒ，ｍ１ｅｈｅｉ）　ＩＦＯ９７４０１
ヘリコスチラム・ニグリカンス（Ｈ，ｎｉｇｒｉｃａｎ
ｓ）　ＩＦＯ８０９１、パエシロマイセス・バリオチ（
Ｐ、ｖａｒｉｏｔｉ）　ＨＵＴ　４０２８、シンセファ
ラストラム・、ニグリカンス（Ｓ、ｎｉｇｒｉｃａｎｓ
）ＨＵＴ　１２２９、サルシネラ・リシダ（Ｃ，ｒｉｇ
ｉｄａ）　ＩＦＯ６４１１、ゴングロネラ・ブトレリ（
Ｇ、ｂｕ口ｅｒｉ）、ＩＦｏ　８０８０、バクセラ・シ
ルシナ（Ｂ、ｃｉｒｃｉｎａ）ＩＦＯ９２３１、ピチウ
ム・デバリアナム（Ｐ、ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ）ＩＦＯ
５９１９、フェネロマイセス・リンプリ（Ｆ、１ｉｎｄ
ｅｒｉ）　ＩＦＯ６４０９、モルティエレラ・イサベリ
ｔ　（Ｈ，１ｓａｂｅｌ　ｌ　１ｎａ）ＩＦＯ７８２４
、スピルリナ・プラテンシス（Ｓ、ｐｌａｔｅｎＳｉ３
）　、クラドスポリウム・ヘルバラム（Ｃ，ｔ＋ｅｒｂ
ａｒｕｍ）ＩＦＯ６３４８、トリコデルＶ−ビリデ（Ｔ
、ｖｉｒｉｄｅ）ＩＦｏ　９０６Ｇ、ペリキュラリア・
フィラメントサ（Ｐ、ｆｉｌａｍｅｎｔｏｓａ）ＩＦＯ
６４７６、グリオクラディウム・ビレンス（Ｇ、ｖｉｒ
ｅｎｓ）　ＩＦＯ９１６９、ヒュミコラ・グリゼー（Ｈ
，ａｒｉｓｅａ）　ＩＦＯ４８６８、クラビセブス・ブ
ルブレアＣＣ，Ｉ）ｕｒｌ）ｕｒｅａ）　ＩＦＯ５７８
２およびクロレラ・ピレノイドサ（Ｃ，ｐｙｒｅｎｏｉ
ｄｏｓａ）がある。

このような微生物の培養条件としては各種微生物が生育
できる条件であれば特に制限はなく力ご類に対してはグ
ルコース、糖蜜またはシュクロースなどの炭水化物、エ
タノール、酢酸や０−アルカン、ｎ−デカン、ヘキサデ
カンまたはヘプタデカンなどの炭化水素類を炭素源とし
、その他必要な栄ｉｉ、ｍを添加した培地が一般に用い
られ、温度、ｐＨおよび反応時間などの条件は各種微生
物に適した条件に準ずればよい。また藻類に対しても−
・般に知られる無機栄養源を基本培地とし適切な光照射
度、温度、ｐＨおよび反応時間などの培養条件に準ずれ
ばよい。

本発明の反応系に存在させる界面活性剤は陽イオン界面
活性剤、陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤また
は両性イオン界面活性剤のいずれも用いることができる
が、陰イオン界面活性剤および非イオン界面活性剤が特
に効果的である。

陰イオン界面活性剤としては（１）カルボン酸型高分子
活性剤、（２）ポリオキシエチレンアルキルエーテル１
ｉｉｌｌｌｌエステル塩、（３）ポリオキシエチレンア
ルキルアリルエーテル硫酸エステル塩、（４）ジアルキ
ルスルホコハク酸塩、（５）アルキルベンゼンスルホン
酸塩、（６）アルキル硫酸エステル塩、（７）脂肪酸塩
、（８）アルキルリン酸塩、（９）アルキルナフタレン
スルホン酸塩、（１０）芳香族スルホン酸ホルマリン縮
合物および（１１）ナフタレンスルホン酸ホルマリン縮
合物に属するもののほか、陰イオン界面活性剤の性質を
有するものが用いられるが、特に（１）〜（４）に属す
るものが効果的である。具体的に代表的なものをあげれ
ば、（１）についてはデモールＥＰ（商品名、花王石鹸
９朱製）、ボイズ５４０（商品名、花玉石ｆｉ［Ｊ）、
エレミノールＨＢＮ−１（商品名、三洋化成工業■製）
、エレミノールＨＢＮ−２（商品名、三洋化成工業！１
１製）、サンスパールＰＳ−８（商品名、三洋化成工業
０１製）およびポリスターＯＭ（商品名、日本油脂（槻
製）など、（２）についてはエマール２０Ｃ（商品名、
花王石鹸■製〉など、（３）についてはサンノールＮＥ
Ｓ　　（商品名、ライオン（Ｉｌ製）および工マールＮ
Ｃ（商品名、花王石鹸■製）など、（４）についてはペ
レックス０Ｔ−Ｐ　（商品名、花玉石＠■製）およびラ
ビゾールＢ−３０（商品名、日本油脂■製）などを示す
ことができる。

非イオン界面活性剤としては（１）ポリオキシエチレン
ソルビタン脂肪酸エステル、（２）オキシエチレンオキ
シプロピレンブロックポリマー、（３）ソルビタン脂肪
酸エステル、（４）ポリエチレングリコール脂肪酸エス
テル、（５）ポリオキシエチレンアルキルエーテル、（
６）ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、（
７）脂肪酸モノグリセライドおよび（８）ポリオキシエ
チレンアルキルアミンに属するもののほか、非イオン界
面活性剤の性質を有するものが用いられるが、特に（１
）〜（４）に属するものが効果的である。具体的に代表
的なものをあげれば（１）についてはポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウレートとして、たとえばノニオン
ＬＴ−２２１（商品名、日本油脂！１１製）、レオドー
ルＴＷ−１１２０（商品名、花王石鹸■製）およびツイ
ーン２０（商品名、半井化学薬品■製）など・ポリオキ
シエチレンソルビタンモノパルミテートとして、たとえ
ばレオドールＴＷ−Ｐ１２０（商品名、花王石＠＠製）
およびツイーン４０（商品名、半井化学薬品■製）など
、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレートとし
てたとえばレオドールＴＷ−３１２０（商品名、花王石
鹸■製）など、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレ
エートとして、たとえばノニオン０Ｔ−２１１（商品名
、日本油脂■製）、レオドールＴＷ−０１２０（商品名
、花王石鹸＠製）およびツイーン８０（商品名、半井化
学薬品＠製）など、ポリオキシエチレンソルビタントリ
オレエートとして、たとえばレオドールＴＷ−０３２０
（商品名、花王石鹸（掬製）など、（２１についてはプ
ロノン２０１および１０２（商品名、日本油脂０勾製）
など、（３）についてはノニオン０Ｐ−８５Ｒ（商品名
、日本油脂■製）、レオドール５Ｐ−０３０（商品名、
花王石鹸ｖｉＪ製）およびエマゾール０−３０（Ｆ）　
　（商品名、花王石Ｍ＠Ｉ製）など、（４）については
エマノーン４１１０　（商品名、花王石鹸仔１製）など
を示すことができる。もちろん、これら陰イオン界面活
性剤および非イオン界面活性剤の両方を適切に混合して
使用することもできる。また界面活性剤は反応の初期か
ら添加してもよく、反応の途中または終期に添加し効果
的に脂質を反応液中に移行させてもよい。もちろん、こ
れら界面活性剤の添加により発泡がはげしいばあいには
通常用いられる消泡剤を適量添加すればよい。

本発明の反応系に存在させる界面活性剤の量は、陰イオ
ン界面活性剤のばあいには、ｏ、　ｏｏｓ重量％以下で
は細胞膜に効果的な影響を与えることができず、５重量
％以上では微生物の生育に好ましくない影響を与えるの
で、ｏ、ｏｏｓ〜５重口％、好ましくは０．０１〜１重
量％、非イオン界面活性剤のばあいにも同様の理由で０
．０５〜８重世％、好ましくは０．３〜３重量％であり
、かかる条件下において脂質が反応液中に著量蓄積する
。

本発明においては、通常のサスペンション系での回分、
半回分、連続培養などの各種培養方法はもちろん適用で
きるが、上記微生物を固定化した固定化微生物を用いる
とより効率的である。固定化の方法は、ゲル化剤を用い
る包括固定化法および微生物保持材料を用いる物理吸着
　　　　−固定化法のいずれをも適用できる。ゲル化剤
としては通常公知の物質が適用でき、具体的にはポリア
クリルアミド、アルギン酸、カラギーナン、コラーゲン
およびウレタンプレポリマーなどをあげることができる
。

微生物保持材料としては、カビ類や藻類の持つ粘着力に
より固定化を可能ならしめる任意の材料が適用できる。

たとえば、高分子発泡材料としては、ポリエチレンまた
はポリプロピレンなどのポリオレフィン系；ブタジェン
またはイソプレンなどのジエン系：ポリウレタン：ポリ
塩化ビニル、アクリルアミドまたはボリスチレ・ンなど
のビニル系重合体；ポリエーテル、ポリエステル、ポリ
カーボネートまたはナイロンなどの縮合系；シリコンお
よびフッ素樹脂などの材料、無機材料としては、セラミ
ックス、ガラス、活性炭、軽石および金属類などが適用
できるが、いずれの材料においてもカビ類や藻類を良好
に該微生物保持材料に固定化させるためには、空げき率
が７０〜９９％、車位置線長さ当りの孔数が２〜５０個
／ｃｍの範囲である多孔質材料か、空げき率が７０〜９
９％である金属加工材料などを使用するのが好ましい。

通常、前記にあげた微生物はベレット状または菌糸状な
どの種々の様相を呈するが、上記の特徴を有する保持材
料を適用すれば、微生物が増殖をくり返す過程において
、微生物固有の粘着力や保持材料の包括作用などによっ
て吸着固定化される。このような各種保持材料は、微生
物の種類および反応条件などによって適宜選択でき、形
状についてはたとえば球状、ブロック状、リング状、筒
状またはシー１〜状などに加工し使用することができる
。寸法については、微生物の種類、反応条件および反応
器の種類などにより決定できるが、おおむね球状のもの
であれば直径１〜１１００ｎ　１ブロツク状のものであ
れば一辺が１〜１００ｍｍのものが使用される。

微生物を上記保持材料に固定化させるには、通常、公知
の回分、半回分、連続培養法などを用いて容易に吸着固
定化させることができる。

１例を示すと、あらかじめ蒸気などで殺菌された空の該
保持材料と微生物を好ましい反応条件下、たとえばムコ
ール・アンビガウスＩＦＯ６７４２をグルコースを基本
培地とし、初発ｐＨ６，０、温度３０℃で通気培養すれ
ば、約１００時間後には該微生物が保持材料に吸着され
、反応に適した固定化微生物が形成される。このような
固定化法は他のカビ類や藻類についても同様に、好適な
反応条件下で容易に固定化できる。

このような固定化微生物は、ひきつづき同一反応器で界
面活性剤の存在下において回分、半回分または連続培養
法などにより反応を行なわせうる。すなわち、回分培養
または半回分培養のばあい、培地を新しい培地と交換し
、反応を継続する。このような交換操作をいく度もくり
返すことによって効率をより高めることができる。また
連続培養のばあい、固定化後、新しい培地をポンプなど
で連続的に送り込み、反応器の一方から連続的に注入速
度と同じ割合で反応液を流出させればよい。

本発明においては、通気は空気、酸素または両者の混合
ガスが用いられ、反応器は撹拌型または無撹拌型の各種
気泡型のあらゆる型式のものが適用できるが、固定化微
生物を用いるばあいには通常無撹拌型の反応器が操作面
およびコスト面からより好ましい。

このようにしてえられた反応液中の脂質は精製する常法
、たとえば溶媒抽出により回収でき、さらに各種高級脂
肪酸やステロール類もクロマトグラフィーなどの公知の
分離１製法により高純度の製品をうろことができる。ま
た、残存している菌体中の脂質もホモジナイズなどの処
理を行ない同様に各種有用物質を回収することができる
。

つぎに本発明を実施例によりざらにくわしく説明するが
、本発明はもとよりこれらに限られるものではない。

以下の実施例においては生成した反応液中の脂質はクロ
ロホルムによる溶媒抽出後、常法の重う法によって分析
した。各種高級脂肪は溶媒抽出後、加水分解およびメチ
ルエステル化を施した後、ガスクロマトグラフィーによ
り分析を行なった。菌体中に残存する脂質についても国
体をホモジナイズしたのち、反応液のばあいと同様の操
作によって分析した。

実施例１各種カビ類をグルコースが４％、ＫＨ２ＰＯ４が　。

０．３％、（ＮＨ４）２　ＳＯｉ　　が　０．２％、（
ＮＨ２）２　ＣＯが　０．１％、ＨｇＳＯ４・７Ｈ２０
が０．０５％、　ＦｅＳＯ４・ｌＨ２Ｏが０．００１％
、ＣａＣｌ２　　・２Ｈ２０が０．００１％、ＣＬＩＳ
Ｏ４・５Ｈ２０が０．００００２％、ＺｎＳＯ４・７Ｈ
２０が０．０００１％、Ｈｎ（Ｊ　２　・４Ｈ２０が０
．０００１％、ＮａＣｊが００１％、酵母エキスが０．
０４％、麦芽エキスが０．０４％およびポリペプトンが
０．０２％の（Ａ）培地、またはグルコースが３％、Ｋ
Ｈ２ＰＯ４が０．３％、ＮＨＩＣｈが０．３％、Ｈ（１
３０４・７Ｈ２０が０．０３％、酵母エキスが０．０２
％、麦芽エキスが０４０２％、Ｆｅ５Ｏａ　　・７Ｈ２
０が０．００１％、ＣａＣ１２・２Ｈ２０が０、０００
１２％、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０が０．００００２％およ
びｚｎＳＯ４・７Ｈ２０が０．０００１％の（Ｂ）培地
で初発ｐＨ６，０、温度３０℃にて約１週間振盪培養を
行ない種母を調整した。５００ｄ容のシェーカーフラス
コに種母調整用培地と同じ（Ａ）培地１００戒または（
Ｂ）培地２００ｄを入れ、上記種母とともに初発ｐＨ６
，０、温度３０°Ｃにて界面活性剤の存在下で約１周間
ｆ［培養を行、ない反応液中に脂質を生成させた。

一方、スピルリナ・プラテンシスおよびクロレラ・ピレ
ノイドサについては、ＮａＣ＃Ｉｆｉｏ、ｓ％、にＣ１
が０．５％、Ｎａ２ＣＯ３が０．８％、ＫＮＯ３が０１
％、＋４０　Ｓ　Ｏ４・７８２０が０．０１％、クエン
酸ソーダが０．０２％、Ａ５溶液が１１Ｒ１／ρ、１ｉ
ｉｉＩ酸鉄溶液が１＃ｌｉ！＃、土壌浸出液が１００ｄ
　／　４１およびビタミ＞　Ｂ＋２が４０μｊ）／ρノ
（Ｃ）培地５００ｄ　ニ植菌し、１）Ｈ８，Ｏ１温度３
０℃、螢光燈による照度約５０００ルツクスで約６日間
、ポルピリジウム・クルエンタムについてはＮａＣ１が
２．７％、ＫＮＯ３が０．１％、にＨ２ＰＯ４が０．０
０７％、Ｎ　ａ　ＨＣＯ３が０．００４％、Ｈ（］ＳＯ
４・７Ｎ２０が　０．６６％、Ｍｇ（Ｊ　２　　・６Ｈ
２０が０．５６％、ＣａＣｊ　２　　・２Ｈ，２０が０
．１５％、２ｎ（Ｊが４×１０　％、Ｈ３ＢＯ，が６　
Ｘ　１０−”％、ＣＯＣｌ２−６１ｈＯが　１．５Ｘ１
０　　％、ＣｕＣｊ　２　　・２Ｎ２０が４　Ｘ　１０
−６％、ＨｎＣＩ２・４Ｈ２０が４　Ｘ　１０−５％、
Ｎｏが３、７Ｘ　１０−”％、Ｆｅ（＋２・４８２０　
（２４０ｍｇ／　１ｏｏｙＯ，０５ＭＮａｚ　ＥＤＴＡ
）が１　ｍｆｌ／ｆＪ　ｔｌＪ：ヒＩＨトＩＪ　ス−Ｈ
（Ｊ溶液（ｐＨ７，６）が２０ｄ　／ρの（０）培地１
００−に植菌し、温度２０’Ｃ，螢光；ｎによる照度約
８０００ルツクスにて約１０日間それぞれ界面活性剤の
存在下で反応させた。界面活性剤は非イオン系に属する
レオドールＴＷ−０３２０を１．０重量％となるように
添加し、対照としての無添加のばあいと比較した。

ムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２を（Ａ）培地で
、フザリウム・オキツボラムＩＦＯ５９４２を（Ｂ）培
地でそれぞれ反応させたばあいの脂質などの分析結果を
第１表に、本発明による反応液中の脂質の脂肪酸組成を
第２表に示す。また、その他各種微生物の反応液中の脂
質、アラキドン酸またはγ−リルン酸とそれぞれの全量
との比を第３表に示す。いずれの表においても（）内は
対照の結果を示す。

−また、上記のことくえられたアラキドン酸とγ−リル
ン酸は常法のクロマトグラフィーなどによる分離精製法
によって９７％以上の高純度の製品かえられた。

なお第３表において１の菌については（Ｂ）培地使用で
反応液中のアラキドン酸と全アラキドン酸との比、２の
菌については（Ｄ）培地使用で反応液中のアラキドン酸
と全アラキドン酸との比、３の菌については（Ａ）培地
使用で反応液中のγ−リルン酸と全γ−リルン酸との比
、４の菌については（Ｃ）培地使用で反応液中のγ−リ
ルン酸と全γ−リルン酸との比、５の菌については（Ｃ
）培地使用で反応液中の脂質と全脂質との比をそれぞれ
あられす。

実施例２各種カビ類を実施例１に示した（Ａ）培地を用い、同一
条件にて脂質を生成させた。反応液中の脂質と全脂質と
の比を第４表に示す、、（）内は界面活性剤無添加の対
照の結果を示す。

［以下余白］実流例３ムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２およびフザリウ
ム・オキツボラムＩＦＯ５９４２をそれぞれ実施例１に
示した（Ａ）培地および（Ｂ）培地で実施例１と同様の
手順にしたがって振盪培養を行ない、各種界面活性剤の
効果を比較した。反応液中の脂質と全脂質との比を無添
加の対照とともに第５表に示す。

［以下余白］このようにしてえられた脂質中の脂肪酸組成は実施例１
の第２表に示した結果と類似しており、ムコール・アン
ビガウスＴＦＯ６７４２についてはγ−リルン酸含最は
８〜２０％、フザリウム、オキツボラムＩＦＯ５９４２
についてはアラキドン酸含量は１〜４％であった。

実施例４ムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２およびフザリウ
ム・オキツボラムＩＦＯ５９４２をそれぞれ実施例１に
示した（Ａｌ培地および（Ｂ）培地で実施例１と同じ手
順にしたがって撮盪培養を行ない種母を調整した。

微生物保持材料を用いるばあい、あらかじめ殺菌された
１辺６ｎｍのブロック状ポリウレタンおよびナイロン（
いずれも空げき率９５〜９８％、孔数３０個／　ｃｍ）
の微生物保持材料的１ｆＪを実施例１と同じ培地２ｆＪ
中で上記種母とともに通常の気泡塔にて通気培養した。

培養開始約１００時間後には微生物は保持材料に物理吸
着されたので、ひきつづき界面活性剤の存在下において
脂質を生成させる反応に供した。

ゲル化剤としてアルギン酸を用いるばあい、上記のごと
く調整された種母を遠心分離にて集菌し２％アルギン酸
ナトリウム液に懸濁させた。

あらかじめ撹拌されている０、　１８　ＣａＣｌ　２溶
Ｉ中に懸濁液をノズルから滴下させ直径約４ｍｍの球状
ゲルにした。カラギーナンを用いるばあい、同様にカラ
ギーナン水溶液に菌体を懸濁させ、２％ＫＣＩ溶液中に
滴下させて直径約４ｍｍの球状ゲルにした。このように
してえられた球状ゲル約１１を気泡塔に充填し、界面活
性剤の存在下で脂質を生成させた。

培地成分はいずれも種母調整用培地と同じものを用い、
ｐＨ３〜５、温度３０℃、通気ｆｉｔ　１　ｖｖｍで反
応せしめ、７日間ごとに３回反応液を交換した。界面活
性剤はレオドールＴＷ−０３２０を１０重山％となるよ
うに添加した。

それぞれのばあいの反応液中の脂質場を分析して第６表
に示したような結果をえた。

このようにしてえられた脂質中のγ−リルン酸やアラキ
ドン酸の含有量は実施例１でえられた結果に類似してお
りムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２についてのγ
−リルン酸組成は　　　　−９〜１８％、フザリウム・
オキツボラム１．ＦＯ５９４２についてのアラキドン酸
組成は２〜４％であった。

実施例５実施例４と同じ手順にしたがってえられた固定化微生物
（ムコール・アンビガウスＩＦＯ６７４２をブロック状
ポリウレタンにて固定化）を同一気泡塔にて続培養を行
なった。グルコースが０．４％でその伯の組成は実施例
１の（Ａ）培地と同じ新しい培地をポンプで２００ｍ１
／時の速度で連続的に送り込み、気泡塔の一部から連続
的に注入速度と同じ割合で反応液を流出させた。界面活
性剤はレオドールＴ１４−０３２０を反応液中に１．０
重量％となるように添加した。定常状態に達したのち、
流出中の脂質を分析したところ反応液中の脂質濃度およ
びγ−リルン酸濃度はそれぞれ６５ＩＩＩｇ／ＬＪおよ
び８．２ｍｇ、’ｊであった。

［発明の効果］このように、本発明によれば界面活性剤を添加しないば
あいに比へ脂質を高収量でうろことができ、さらに精製
工程の簡素化が可能となることから高純度の脂質を高収
量にえられるので工業的に製造するうえできわめて好都
合である。

Claims

【特許請求の範囲】１　脂質生合成能を有するカビ類または藻類を用いて脂
質を生成せしめるに際し、反応系に界面活性剤を存在さ
せて反応を行なうことを特徴とする脂質の製造法。２　前記脂質生合成能を有するカビ類または藻類がアス
ペルギルス属、フザリウム属、ペニシリウム属、ポルピ
リジウム属、ムコール属、リゾプス属、アブシディア属
、アクチノムコール属、コアネフォラ属、カニンガメラ
属、ピコマイセス属、リゾムコール属、ヘリコスチラム
属、パエシロマイセス属、シンセファラストラム属、サ
ルシネラ属、ゴングロネラ属、バクセラ属、ピチウム属
、フェネロマイセス属、スピルリナ属、クラドスポリウ
ム属、トリコデルマ属、ペリキュラリア属、グリオクラ
ディウム属、ヒュミコラ属、クラビセブス属またはクロ
レラ属に属する特許請求の範囲第１項記載の方法。３　界面活性剤として陰イオン界面活性剤または非イオ
ン界面活性剤を用いる特許請求の範囲第１項記載の方法
。４　前記陰イオン界面活性剤がカルボン酸型高分子活性
剤、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル
塩、ポリオキシエチレンアルキルアリルエーテル硫酸エ
ステル塩およびジアルキルスルホコハク酸塩類よりなる
群から選ばれた１種または２種以上の陰イオン界面活性
剤である特許請求の範囲第３項記載の方法。５　前記非イオン界面活性剤がポリオキシエチレンソル
ビタン脂肪酸エステル、オキシエチレンオキシプロピレ
ンブロックポリマー、ソルビタン脂肪酸エステルおよび
ポリエチレングリコール脂肪酸エステル類よりなる群か
ら選ばれた１種または２種以上の非イオン界面活性剤で
ある特許請求の範囲第３項記載の方法。６　脂質生合成能を有するカビ類または藻類の固定化微
生物粒子を用いて脂質を生成せしめるに際し、反応系に
界面活性剤を存在させて反応を行なうことを特徴とする
脂質の製造法。７　前記脂質生合成能を有するカビ類または藻類がアス
ペルギルス属、フザリウム属、ペニシリウム属、ポルピ
リジウム属、ムコール属、リゾプス属、アブシディア属
、アクチノムコール属、コアネフォラ属、カニンガメラ
属、ピコマイセス属、リゾムコール属、ヘリコスチラム
属、パエシロマイセス属、シンセファラストラム属、サ
ルシネラ属、ゴングロネラ属、バクセラ属、ピチウム属
、フェネロマイセス属、スピルリナ属、クラドスポリウ
ム属、トリコデルマ属、ペリキュラリア属、グリオクラ
ディウム属、ヒュミコラ属、クラビセブス属またはクロ
レラ属に属する特許請求の範囲第６項記載の方法。８　界面活性剤として陰イオン界面活性剤または非イオ
ン界面活性剤を用いる特許請求の範囲第６項記載の方法
。９　前記陰イオン界面活性剤がカルボン酸型高分子活性
剤、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル
塩、ポリオキシエチレンアルキルアリルエーテル硫酸エ
ステル塩およびジアルキルスルホコハク酸塩類よりなる
群から選ばれた１種または２種以上の陰イオン界面活性
剤である特許請求範囲第８項記載の方法。１０　前記非イオン界面活性剤がポリオキシエチレンソ
ルビタン脂肪酸エステル、オキシエチレンオキシプロピ
レンブロックポリマー、ソルビタン脂肪酸エステルおよ
びポリエチレングリコール脂肪酸エステル類よりなる群
から選ばれた１種または２種以上の非イオン界面活性剤
である特許請求の範囲第８項記載の方法。１１　ゲル化剤または微生物保持粒子によってえられる
固定化微生物粒子を用いる特許請求の範囲第６項記載の
方法。１２　前記ゲル化剤がポリアクリルアミド、アルギン酸
、カラギーナン、コラーゲンまたはウレタンポリマーで
ある特許請求の範囲第１１項記載の方法。１３　前記微生物保持粒子がポリオレフィン系、ジエン
系、ポリウレタン、ビニル系、縮合系、シリコンまたは
フッ素樹脂の高分子発泡材料よりなる特許請求の範囲第
１１項記載の方法。１４　前記微生物保持粒子がセラミックス、ガラス、活
性炭、軽石および金属類よりなる群から選ばれた多孔質
材または空隙率が７０〜９９％の金属加工材料である特
許請求範囲第１１項記載の方法。