JPS62278992A - ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法 - Google Patents
ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法Info
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- JPS62278992A JPS62278992A JP61122723A JP12272386A JPS62278992A JP S62278992 A JPS62278992 A JP S62278992A JP 61122723 A JP61122723 A JP 61122723A JP 12272386 A JP12272386 A JP 12272386A JP S62278992 A JPS62278992 A JP S62278992A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３、発明の詳細な説明
（産業上の利用分野）
本発明は、医薬品又はその原料として有用なジアデノン
ン四リン酸又はその誘導体の製造方法に関するものであ
る。
ン四リン酸又はその誘導体の製造方法に関するものであ
る。
（従来の技術）
ジアデノシン四リン酸又はその誘導体は、ＧＩ阻害を起
こしたＢＨＫ細胞に対するＤＮＡ合成の＆進作用（エフ
・グルムト（Ｆ、 Ｇｒｕｍｍｔ）プロシーディング・
オブ・ナショナル・アカデミツク・サイエンス（Ｐｒｏ
、 Ｎ、八、Ｓ、） ７５． ３７１ （１９７８
））。
こしたＢＨＫ細胞に対するＤＮＡ合成の＆進作用（エフ
・グルムト（Ｆ、 Ｇｒｕｍｍｔ）プロシーディング・
オブ・ナショナル・アカデミツク・サイエンス（Ｐｒｏ
、 Ｎ、八、Ｓ、） ７５． ３７１ （１９７８
））。
リン酸化の阻害作用〔ピー・エフ・マネス（Ｐ、 Ｆ。
Ｍａｎｅｓｓ） ら、ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー（Ｊ、 ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）
２５８．４０５５（１９８３）） 、血小板凝集阻害
作用〔エム・ジエイ・ハリソン（Ｍ、 Ｊ、 １ｌａｒ
ｒｉｓｏｎ）ら、フエブス レターズ（ＦＥＢＳ Ｌｅ
ｔｔｅｒｓ） ５４ 、 ５７ （１９７５月などの住
理作用を有し、医薬品及び医薬品原料としての利用が期
待されている物質である。
カル・ケミストリー（Ｊ、 ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）
２５８．４０５５（１９８３）） 、血小板凝集阻害
作用〔エム・ジエイ・ハリソン（Ｍ、 Ｊ、 １ｌａｒ
ｒｉｓｏｎ）ら、フエブス レターズ（ＦＥＢＳ Ｌｅ
ｔｔｅｒｓ） ５４ 、 ５７ （１９７５月などの住
理作用を有し、医薬品及び医薬品原料としての利用が期
待されている物質である。
このジアデノシン四リン酸又はそのｉＲＲ体（以下Ｎ１
）４Ｎという。）を得る方法としては、ヨーロピアン・
ジャーナル・オブ・バイオケミスＩ−リ−（Ｅｕｒ、
Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、） １２６ 、 １３５ （
１９８２）には、エシェリキア コリ由来のリジル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素、ヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素、フェ
ニルアラニル−ｔ ＲＮ Ａ合成酵素、酵母由来のすシ
ル−ｔ ＲＮ Ａ合成酵素、フェニルアラニル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素、フザリウム由来のフェニルアラニル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素、羊肝細胞由来のフェニルアラニル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素などの種々のアミノアシル−ｔＲＮＡ合成
酵素によりアデノシン−５′−三リン酸（以下ＡＴＰと
いう。）からジアデノシン四リン酸が、また、ＡＴＰの
誘導体である２′−デオキシアデノシン−５′−三リン
酸からジアデノシン四リン酸の誘導体であるジデオキシ
アデノシン四リン酸が合成されることが報告されている
。
）４Ｎという。）を得る方法としては、ヨーロピアン・
ジャーナル・オブ・バイオケミスＩ−リ−（Ｅｕｒ、
Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、） １２６ 、 １３５ （
１９８２）には、エシェリキア コリ由来のリジル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素、ヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素、フェ
ニルアラニル−ｔ ＲＮ Ａ合成酵素、酵母由来のすシ
ル−ｔ ＲＮ Ａ合成酵素、フェニルアラニル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素、フザリウム由来のフェニルアラニル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素、羊肝細胞由来のフェニルアラニル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素などの種々のアミノアシル−ｔＲＮＡ合成
酵素によりアデノシン−５′−三リン酸（以下ＡＴＰと
いう。）からジアデノシン四リン酸が、また、ＡＴＰの
誘導体である２′−デオキシアデノシン−５′−三リン
酸からジアデノシン四リン酸の誘導体であるジデオキシ
アデノシン四リン酸が合成されることが報告されている
。
一方、特開昭５８−１４６５３９号公報には。
アミノ酸からペプチド又はペプチド誘導体を合成するに
際し、縮合剤としてアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素を
用いることが、また、特開昭５９−１０６２９６号公報
には、ＡＭＰをアデノシン−５′−二リン酸（以下ＡＤ
Ｐという。）に変換する酵素と、ＡＤＰをＡＴＰに変換
する酵素とを組み合わせてＡＭＰからＡＴＰを生成させ
、生成させたＡＴＰを用いて生理活性物質を合成すこと
が提案されているが、これらは、ジアデノシン四リン酸
又はその誘導体を合成するものではない。
際し、縮合剤としてアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素を
用いることが、また、特開昭５９−１０６２９６号公報
には、ＡＭＰをアデノシン−５′−二リン酸（以下ＡＤ
Ｐという。）に変換する酵素と、ＡＤＰをＡＴＰに変換
する酵素とを組み合わせてＡＭＰからＡＴＰを生成させ
、生成させたＡＴＰを用いて生理活性物質を合成すこと
が提案されているが、これらは、ジアデノシン四リン酸
又はその誘導体を合成するものではない。
（発明が解決しようとする問題点）
従来の方法、すなわち、ＡＴＰ又はその誘導体（以下Ｎ
ＴＰという。）とアミノ酸とを原料としてアミノアシル
−ｔＲＮＡ合成酵素の存在下で反応を行うと、目的物で
あるＮ１）４Ｎと共にジアデノシン三リン酸又はその誘
導体く以下Ｎｐ３Ｎという。）、ＡＤＰ又はその誘導体
（以下ＮＤＰという。）及びＡＭＰ又はその誘導体（以
下ＮＭＰという。）が副生じ、原料であるところの高価
なＮＴＰを無駄に消費し、Ｎ１）４Ｎの収率の低下を招
くばかりでなく、Ｎｐ３Ｎがあると反応生成物から目的
物であるＮ＋）４Ｎを分離することは極めて困難になる
という欠点がある。
ＴＰという。）とアミノ酸とを原料としてアミノアシル
−ｔＲＮＡ合成酵素の存在下で反応を行うと、目的物で
あるＮ１）４Ｎと共にジアデノシン三リン酸又はその誘
導体く以下Ｎｐ３Ｎという。）、ＡＤＰ又はその誘導体
（以下ＮＤＰという。）及びＡＭＰ又はその誘導体（以
下ＮＭＰという。）が副生じ、原料であるところの高価
なＮＴＰを無駄に消費し、Ｎ１）４Ｎの収率の低下を招
くばかりでなく、Ｎｐ３Ｎがあると反応生成物から目的
物であるＮ＋）４Ｎを分離することは極めて困難になる
という欠点がある。
（問題点を解決するための手段）
そこで２本発明者らは、上記の欠点を改良するために鋭
意研究を重ねた結果１反応をＡＤＰをＡＴＰに変換する
酵素の存在下で行うと、Ｎり３Ｎ及びＮＤＰが副生ぜず
、しかも、極めて高い収率でＮｐ４Ｎが製造できること
を見い出し１本発明を完成するに至った。
意研究を重ねた結果１反応をＡＤＰをＡＴＰに変換する
酵素の存在下で行うと、Ｎり３Ｎ及びＮＤＰが副生ぜず
、しかも、極めて高い収率でＮｐ４Ｎが製造できること
を見い出し１本発明を完成するに至った。
すなわち１本発明はアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の
触媒作用により、アデノシン−５′−三リン酸又はその
誘導体とアミノ酸とを反応させてジアデノシン四リン酸
又はその誘導体を製造するに際し、該反応をアデノシン
−５′−二リン酸をアデノシン−５′−三リン酸に変換
する酵素の存在下で行うことを特徴とするジアデノシン
四リン酸又はその誘導体の製造方法を要旨とするもので
ある。
触媒作用により、アデノシン−５′−三リン酸又はその
誘導体とアミノ酸とを反応させてジアデノシン四リン酸
又はその誘導体を製造するに際し、該反応をアデノシン
−５′−二リン酸をアデノシン−５′−三リン酸に変換
する酵素の存在下で行うことを特徴とするジアデノシン
四リン酸又はその誘導体の製造方法を要旨とするもので
ある。
本発明の最大の特徴は、アミノアシル−１？ＮＡ合成酵
素の触媒作用によりＮ Ｔ Ｐとアミノ酸とを反応させ
るに際し１反応をＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素の存在
下で行うことにあり、特に、ＡＭＰをＡＤＰに変換する
酵素とＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素の存在下で行うこ
とが好ましい。このとき、後者の反応系にはＮＭＰが副
生じないので、ＮＭＰを分離する操作が不要となる。
素の触媒作用によりＮ Ｔ Ｐとアミノ酸とを反応させ
るに際し１反応をＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素の存在
下で行うことにあり、特に、ＡＭＰをＡＤＰに変換する
酵素とＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素の存在下で行うこ
とが好ましい。このとき、後者の反応系にはＮＭＰが副
生じないので、ＮＭＰを分離する操作が不要となる。
本発明でいうジアデノシン四リン酸の誘導体とは、ジア
デノシン四リン酸の構造を基本骨格として有する化合物
であって、その構成成分であるアデノシン三リンｆｌｌ
ＲＭｍ体よりアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の作用に
より変換できる化合物をいう。このようなジアデノシン
四リン酸の誘導体としては、アデニン環のＮ６位アルキ
ル化、カルボキシアルキル化、ベンゾイル化、カルボキ
シベンヅイル化誘導体、アデニン環のハロゲン化誘導体
。
デノシン四リン酸の構造を基本骨格として有する化合物
であって、その構成成分であるアデノシン三リンｆｌｌ
ＲＭｍ体よりアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の作用に
より変換できる化合物をいう。このようなジアデノシン
四リン酸の誘導体としては、アデニン環のＮ６位アルキ
ル化、カルボキシアルキル化、ベンゾイル化、カルボキ
シベンヅイル化誘導体、アデニン環のハロゲン化誘導体
。
ヒドロキシＰｉ体、デアミノ誘導体、リボースの２′−
デオキシ誘導体、３′−デオキシ誘導体、２′。
デオキシ誘導体、３′−デオキシ誘導体、２′。
３′−ジデオキシ誘導体、デオキシアミノ誘導体。
デオキシハロ誘導体などがあげられ、Ｎ６．Ｎ’−ジカ
ルボキシメチルアデノシン四リン酸 Ｎ ６ 、 Ｎ
６−ジカルボキシエチルアデノシン四すンｉ９． Ｎ
ｂ。
ルボキシメチルアデノシン四リン酸 Ｎ ６ 、 Ｎ
６−ジカルボキシエチルアデノシン四すンｉ９． Ｎ
ｂ。
Ｎ６−（Ｐ−ジカルボキシベンゾイル）アデノシン四す
ン酸、ジ８−ブロムアデノシン四リン酸及びこれらの化
合物の２′−デオキシ誘導体、３′−デシオキ誘扉体、
２’、 ３’−ジデオキシ誘導体などが具体例とし
てあげられる。
ン酸、ジ８−ブロムアデノシン四リン酸及びこれらの化
合物の２′−デオキシ誘導体、３′−デシオキ誘扉体、
２’、 ３’−ジデオキシ誘導体などが具体例とし
てあげられる。
本発明に用いられるアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素と
しては、Ｎｐ４Ｎを合成する能力を有するものであれば
いかなるものでもよいが、エシェリキア コリ由来のリ
ジル−ｔＲＮＡ合成酵素。
しては、Ｎｐ４Ｎを合成する能力を有するものであれば
いかなるものでもよいが、エシェリキア コリ由来のリ
ジル−ｔＲＮＡ合成酵素。
ヒスチジル−ｔ ＲＮＡ合成酵素、フェニルアラニル−
ｔＲＮＡ合成酵素、酵母由来のリジル−ｔＲＮＡ合成酵
素、フェニルアラニル−ｔ ＲＮＡ合成酵素、フザリウ
ム由来のフェニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素、バチル
ス ステアロサーモフィルスなどの耐熱性細菌由来のロ
イシル−ｔ ＲＮＡ合成酵素、羊肝細胞由来のフェニル
アラニル−ｔＲＮＡ合成酵素などが具体例としてあげる
ことができる。また、アミノ酸としては２例えば、チロ
シン、アラニン９０イシン、イソロイシン、フェニルア
ラニン、メチオニン、リジン、セリン、バリン、アスパ
ラギン、アスパラギン酸、グリシン。
ｔＲＮＡ合成酵素、酵母由来のリジル−ｔＲＮＡ合成酵
素、フェニルアラニル−ｔ ＲＮＡ合成酵素、フザリウ
ム由来のフェニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素、バチル
ス ステアロサーモフィルスなどの耐熱性細菌由来のロ
イシル−ｔ ＲＮＡ合成酵素、羊肝細胞由来のフェニル
アラニル−ｔＲＮＡ合成酵素などが具体例としてあげる
ことができる。また、アミノ酸としては２例えば、チロ
シン、アラニン９０イシン、イソロイシン、フェニルア
ラニン、メチオニン、リジン、セリン、バリン、アスパ
ラギン、アスパラギン酸、グリシン。
グルタミン、グルタミン酸、システィン、トレオニン、
トリプトファン、ヒスチジン、プロリン。
トリプトファン、ヒスチジン、プロリン。
アルギニンなどのα−アミノ酸があげられ、Ｌ体。
０体のいずれでもよい。
このとき、アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素は。
アミノ酸に特異性のあるものが用いられ３例えば。
ロイシンに特異性のあるものとしては、ロイシル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素が用いられる。
ＲＮＡ合成酵素が用いられる。
本発明に用いられるＡＭＰをＡＤＰに変換する酵素とし
ては１例えばアデニル酸キナーゼが使用され、この１９
．ＮＭＰへのリン酸供与体としてはＮＴＰが使用される
。また、ＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素としては、酢酸
キナーゼ、カルバミン酸キナーゼ、クレアチンキナーゼ
、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、ピルビン酸キナー
ゼ、ポリリン酸キナーゼなど多（のちのが使用できるが
。
ては１例えばアデニル酸キナーゼが使用され、この１９
．ＮＭＰへのリン酸供与体としてはＮＴＰが使用される
。また、ＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素としては、酢酸
キナーゼ、カルバミン酸キナーゼ、クレアチンキナーゼ
、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、ピルビン酸キナー
ゼ、ポリリン酸キナーゼなど多（のちのが使用できるが
。
酵素の入手の容易さなどを勘案すると、酢酸キナーゼを
使用するのが最も有利であり、この際、リン酸供与体と
してはアセチルリン酸が使用される。
使用するのが最も有利であり、この際、リン酸供与体と
してはアセチルリン酸が使用される。
アセチルリン酸は、アンモニウム塩、カリウム・リチウ
ム塩、ナトリウム塩などの塩として使用することができ
るが、入手のしやすさからニナトリウム塩を用いること
が好ましい。このように、アデニル酸キナーゼと酢酸キ
ナーゼを使用するに際して、各酵素のリン酸供与体とし
てはＮＴＰとアセチルリン酸を使用することになるが、
リン酸供与体としてのＮＴＰは、最終変換物であるＮＴ
Ｐを循環使用することができるので、結局リン酸供与体
としてはアセチルリン酸だけを供給すればよいことにな
る。
ム塩、ナトリウム塩などの塩として使用することができ
るが、入手のしやすさからニナトリウム塩を用いること
が好ましい。このように、アデニル酸キナーゼと酢酸キ
ナーゼを使用するに際して、各酵素のリン酸供与体とし
てはＮＴＰとアセチルリン酸を使用することになるが、
リン酸供与体としてのＮＴＰは、最終変換物であるＮＴ
Ｐを循環使用することができるので、結局リン酸供与体
としてはアセチルリン酸だけを供給すればよいことにな
る。
これらの酵素は、最適生育温度が５０℃ないし８５℃で
ある微生物の産生ずる酵素であることが望ましい。この
ような微生物としては、バチルス・ステアロサーモフィ
ルス、バチルス・プレビス。
ある微生物の産生ずる酵素であることが望ましい。この
ような微生物としては、バチルス・ステアロサーモフィ
ルス、バチルス・プレビス。
バチルス・コアギユランス、バチルス・サーモプロテオ
リテイクス、バチルス・アシドカルダリウスなどのバチ
ルス屈の微生物、クロストリジウム属の微生物、サーモ
アクチノマイセス属の微生物。
リテイクス、バチルス・アシドカルダリウスなどのバチ
ルス屈の微生物、クロストリジウム属の微生物、サーモ
アクチノマイセス属の微生物。
アクロモバクタ−属の微生物、ストレプトマイセス属の
微生物、ミクロポリスポラ属の微生物、サーマス・アク
アティクス、サーマス・サーモフィルス、サーマス・フ
ラプスなどのサーマス属の微生物、サーモミクロビウム
属の微生物、カルブリア属の微生物などがあげられる。
微生物、ミクロポリスポラ属の微生物、サーマス・アク
アティクス、サーマス・サーモフィルス、サーマス・フ
ラプスなどのサーマス属の微生物、サーモミクロビウム
属の微生物、カルブリア属の微生物などがあげられる。
また、これら微生物の遺伝子を導入した常温生育微生物
も含まれる。これら微生物の中でも、アデニル酸キナー
ゼ。
も含まれる。これら微生物の中でも、アデニル酸キナー
ゼ。
酢酸キナーゼの産生に特に適したものは、バチルス・ス
テアロサーモフィルスである。
テアロサーモフィルスである。
本発明でＮｐ４Ｎを製造するには９例えば、同一の反応
器の中にＮＴＰ、アミノ酸、アミノアシル−ｔＲＮＡ合
成酵素、ＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素を共存させて反
応させればよい。このときに用いられる反応器としては
１反応をスムーズに進行させうるちのであればいかなる
ものでもよく。
器の中にＮＴＰ、アミノ酸、アミノアシル−ｔＲＮＡ合
成酵素、ＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素を共存させて反
応させればよい。このときに用いられる反応器としては
１反応をスムーズに進行させうるちのであればいかなる
ものでもよく。
各々の酵素量、基質液の濃度、ｐＨ及び供給速度。
反応温度などによって反応器の大きさ及び形状を選定す
ればよい。その反応器の形状としては９例えば５膜型の
反応器、カラム型反応器を使用することができる。この
中でも脱型反応器は９反応生成物が低分子であるので、
特に有効に使用できる。
ればよい。その反応器の形状としては９例えば５膜型の
反応器、カラム型反応器を使用することができる。この
中でも脱型反応器は９反応生成物が低分子であるので、
特に有効に使用できる。
この際、酵素は高分子物質であるので、各酵素はそのま
ま反応器の中にとどまった状態で使用することができる
。
ま反応器の中にとどまった状態で使用することができる
。
また、カラム型反応器の場合には、使用する酵素を適当
な担体１例えばセルロース、デキストラン、アガロース
などのような多糖類の誘導体、ボリスチレン５エチレン
ーマレインＭ 共Ｎ 合体、架橋ポリアクリルアミドな
どのようなビニルポリマーの誘導体、Ｌ−アラニン、Ｌ
−グルタミン酸共重合体、ポリアスパラギン酸などのよ
うなポリアミノ酸又はアミドの誘導体、ガラス、アルミ
ナ。
な担体１例えばセルロース、デキストラン、アガロース
などのような多糖類の誘導体、ボリスチレン５エチレン
ーマレインＭ 共Ｎ 合体、架橋ポリアクリルアミドな
どのようなビニルポリマーの誘導体、Ｌ−アラニン、Ｌ
−グルタミン酸共重合体、ポリアスパラギン酸などのよ
うなポリアミノ酸又はアミドの誘導体、ガラス、アルミ
ナ。
ヒドロキシアパタイトなどのような無機物の誘導体など
に結合、包括あるいは吸着させて、いわゆる固定化酵素
としてカラムに充填して使用すればよい。
に結合、包括あるいは吸着させて、いわゆる固定化酵素
としてカラムに充填して使用すればよい。
上述の反応器は、連続的に操作することを前提として説
明したものであるが、このような思想に基づいて他の反
応器を用いることもできるし、場合によっては、ハツチ
式の反応器を使用してバッチ式に操作して反応させるこ
ともできる。
明したものであるが、このような思想に基づいて他の反
応器を用いることもできるし、場合によっては、ハツチ
式の反応器を使用してバッチ式に操作して反応させるこ
ともできる。
次に、ハツチ式の反応器でＮｐ４Ｎを製造する場合を例
にとり１反応条件について説明すると。
にとり１反応条件について説明すると。
ＮＴＰは１０μＭ以上、特に１ｍＭ以上、さらに１０ｍ
Ｍ以上、アミノ酸は１ＮＭ以上、特に１０μＭ以上、さ
らに０．１ｒｎＭ以上５アセチルリン酸はＮＴＰの濃度
に対して１０ないし１／１０２当量、特に２ないし１／
１０当量、さらに１ないし１／２当量の濃度で添加する
のが望ましく、その添加方法は特に限定されるものでは
なく５反応スタート時に一括して添加してもよいし１分
割して添加してもよい。また１反応をスムーズに進める
ためにピロホスファターゼを添加したり、マグネシウム
イオン５ マンガンイオン、カルシウムイオン、コバル
トイオン、カドミウムイオンなどの金属イオンを添加す
ることもできる。反応のｐＨとしては、酵素によって異
なるが５おおむね中性付近、すなわち、ｐ）（５〜１１
．好ましくはｐＨ６〜８の範囲が使用され、緩衝液で調
整することができる。この緩衝ン夜としては、これらの
ｐＨに適した通常のものを使用することができる。また
。
Ｍ以上、アミノ酸は１ＮＭ以上、特に１０μＭ以上、さ
らに０．１ｒｎＭ以上５アセチルリン酸はＮＴＰの濃度
に対して１０ないし１／１０２当量、特に２ないし１／
１０当量、さらに１ないし１／２当量の濃度で添加する
のが望ましく、その添加方法は特に限定されるものでは
なく５反応スタート時に一括して添加してもよいし１分
割して添加してもよい。また１反応をスムーズに進める
ためにピロホスファターゼを添加したり、マグネシウム
イオン５ マンガンイオン、カルシウムイオン、コバル
トイオン、カドミウムイオンなどの金属イオンを添加す
ることもできる。反応のｐＨとしては、酵素によって異
なるが５おおむね中性付近、すなわち、ｐ）（５〜１１
．好ましくはｐＨ６〜８の範囲が使用され、緩衝液で調
整することができる。この緩衝ン夜としては、これらの
ｐＨに適した通常のものを使用することができる。また
。
反応の温度としては、酵素の失活が起こらず２反応がス
ムーズに進行する範囲であれば特に限定されるものでは
ないが、２０°Ｃから５０゛Ｃの範囲が好ましい。
ムーズに進行する範囲であれば特に限定されるものでは
ないが、２０°Ｃから５０゛Ｃの範囲が好ましい。
このようにして得た反応生成物は、Ｎ１）３Ｎが生して
いないので、イオン交換クロマトグラフィーなど一般に
広く用いられる精製法により容易にＮり４Ｎを単離する
ことができる。
いないので、イオン交換クロマトグラフィーなど一般に
広く用いられる精製法により容易にＮり４Ｎを単離する
ことができる。
（実施例）
次に１本発明を実施例により具体的に説明する。
参考例１
バチルス・ステアロサーモフィルスＵＫ７８８（微工研
菌寄 第５１４１号）の菌体６ ｋｇを２倍量の１００
ｍＭ）リス・塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）に懸濁し、ダイ
ノミルを用いて細胞を破砕した後、遠心分離により不溶
物を除去し、ロイシンに特異的なロイシル−ｔＲＮＡ合
成酵素を含む粗抽出液を得た。あらかしめ５ｍＭメルカ
プトエタノール、２ｍＭエチレンジアミン四酢酸ナトリ
ウム及び０．１ｍＭホスホフェニルスルホニルフルオリ
ドを含む５０ ｍ Ｍ トリス緩衝液（ｐＨ７，５）で
平衡化したマードレックスゲルブルーＡ（アミコン社製
）を充填したカラムに上記の粗抽出液をとおし、塩化カ
リウムを上記緩衝液に加えた溶液で、線速度６０ｃＩｌ
ｌ・ｈ−１で？８出せしめると、ロイシル−ｔ ＲＮＡ
合成酵素が溶出した。この区分を集め、）忌縮、脱塩を
行った結果、約７０％の収率でロイシンに特異的なロイ
シル−ｔ ＲＮ Ａ合成酵素を含む粗酵素液を得た。上
記操作をすべて４“Ｃで行った。
菌寄 第５１４１号）の菌体６ ｋｇを２倍量の１００
ｍＭ）リス・塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）に懸濁し、ダイ
ノミルを用いて細胞を破砕した後、遠心分離により不溶
物を除去し、ロイシンに特異的なロイシル−ｔＲＮＡ合
成酵素を含む粗抽出液を得た。あらかしめ５ｍＭメルカ
プトエタノール、２ｍＭエチレンジアミン四酢酸ナトリ
ウム及び０．１ｍＭホスホフェニルスルホニルフルオリ
ドを含む５０ ｍ Ｍ トリス緩衝液（ｐＨ７，５）で
平衡化したマードレックスゲルブルーＡ（アミコン社製
）を充填したカラムに上記の粗抽出液をとおし、塩化カ
リウムを上記緩衝液に加えた溶液で、線速度６０ｃＩｌ
ｌ・ｈ−１で？８出せしめると、ロイシル−ｔ ＲＮＡ
合成酵素が溶出した。この区分を集め、）忌縮、脱塩を
行った結果、約７０％の収率でロイシンに特異的なロイ
シル−ｔ ＲＮ Ａ合成酵素を含む粗酵素液を得た。上
記操作をすべて４“Ｃで行った。
参考例２
エシェリキア コリに１２株の菌体５ ｋｇを２倍量の
１００ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐ Ｈ７，５）に懸濁
し、ダイノミルを用いて細胞を破砕した後、遠心分離に
より不溶物を除去し、リジンに特異的なリジル−ｔ Ｒ
ＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得た。
１００ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐ Ｈ７，５）に懸濁
し、ダイノミルを用いて細胞を破砕した後、遠心分離に
より不溶物を除去し、リジンに特異的なリジル−ｔ Ｒ
ＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得た。
あらかじめ５ ｍ Ｍメルカプトエタノール、２ｍＭエ
チレンジアミン四酢酸ナトリウムを含む５０ｍＭトリス
緩衝７ｉ（ｐＨ７，５）で平衡化したマードレックスゲ
ルブルーＡ（アミコン社製）を充填したカラムに上記の
粗抽出液をとおし、塩化カリウムを上記緩ｔＪｉ液に加
えた溶液で、線速度６０ｃ＋ｎ−ｈ−’で溶出せしめる
と、リジル−ｔ ＲＮＡ合成酵素が溶出した。この区分
を集め５；酬縮、脱塩を行った結果、約６５％の収率で
リジンに特異的なリジル−ｔ ＲＮＡ合成酵素を含む粗
酵素液を得た。上記操作をすべて４“Ｃで行った。
チレンジアミン四酢酸ナトリウムを含む５０ｍＭトリス
緩衝７ｉ（ｐＨ７，５）で平衡化したマードレックスゲ
ルブルーＡ（アミコン社製）を充填したカラムに上記の
粗抽出液をとおし、塩化カリウムを上記緩ｔＪｉ液に加
えた溶液で、線速度６０ｃ＋ｎ−ｈ−’で溶出せしめる
と、リジル−ｔ ＲＮＡ合成酵素が溶出した。この区分
を集め５；酬縮、脱塩を行った結果、約６５％の収率で
リジンに特異的なリジル−ｔ ＲＮＡ合成酵素を含む粗
酵素液を得た。上記操作をすべて４“Ｃで行った。
実施例１
参考例１で得たロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素及びバチル
ス・ステアロサーモフィルス由来の酢酸キナーゼとアデ
ニル酸キナーゼ（生化学工業販売）を用いて、バッチ法
でＡＩ）４Ａの合成を行った。
ス・ステアロサーモフィルス由来の酢酸キナーゼとアデ
ニル酸キナーゼ（生化学工業販売）を用いて、バッチ法
でＡＩ）４Ａの合成を行った。
このとき、 ＡＴ Ｐ １２．７ ｍＭ、 ロイシ
ン１０ｍＭ、塩化マグ皐シウム６水和′！！／Ｊ２０ｍ
Ｍ、 ピロホスファターゼ（ヘーリンガーマンハイム
社製）２ユニツト／ ｍ （１、酢酸キナーゼ３０ユニ
ツト／ ｍ ７！。
ン１０ｍＭ、塩化マグ皐シウム６水和′！！／Ｊ２０ｍ
Ｍ、 ピロホスファターゼ（ヘーリンガーマンハイム
社製）２ユニツト／ ｍ （１、酢酸キナーゼ３０ユニ
ツト／ ｍ ７！。
アデニル酸キナーゼ４６ユニツト／ｍ１．ロイシ／Ｌｚ
−ｔ［ＪＡ合成酵素０．２５ユニツト／ ｍ １２ 、
ヘペス緩衝液（ｐＨ７，５）１００ｍＭからなる反応
溶液に、アセチルリン酸を反応スタート時にＩＩ２当り
１４ｍｍｏ！添加し、４０’Ｃで２時間反応させた後、
１１当り４．５ｍｍｏβを追加し、２時間反応させた後
、さらに１２当り４．６ｍｍｏＡ加えた後、５時間反応
させた。
−ｔ［ＪＡ合成酵素０．２５ユニツト／ ｍ １２ 、
ヘペス緩衝液（ｐＨ７，５）１００ｍＭからなる反応
溶液に、アセチルリン酸を反応スタート時にＩＩ２当り
１４ｍｍｏ！添加し、４０’Ｃで２時間反応させた後、
１１当り４．５ｍｍｏβを追加し、２時間反応させた後
、さらに１２当り４．６ｍｍｏＡ加えた後、５時間反応
させた。
得られた反応生成物を、ツバパックＣＩＩ＋（ウォータ
ーズ社製）カラムを用いて高速液体クロマトグラフィー
で分析したところ、 ５． ｌ ｍＭ （収率約８０％
）のＡｐ４Ａが生成していた。反応生成物がＡ１４Ａで
あることをリン核磁気共鳴スペクトルにより同定した。
ーズ社製）カラムを用いて高速液体クロマトグラフィー
で分析したところ、 ５． ｌ ｍＭ （収率約８０％
）のＡｐ４Ａが生成していた。反応生成物がＡ１４Ａで
あることをリン核磁気共鳴スペクトルにより同定した。
このとき、ＡＩ）３Ａ、ＡＭＰ。
ＡＤＰは検出されなかった。
比較例１
酢酸キナーゼ、アデニル酸キナーゼ１アセチルリン酸を
加えなかった以外は、実施例１と同様にして反応させた
。
加えなかった以外は、実施例１と同様にして反応させた
。
得られた反応生成物を高速液体クロマトグラフィーで分
析したところ、Ａｐ４Ａ３．１ｍＭ （収率杓４９％）
と共に、ＡＭＰ２．３ｍＭ、ＡＤＰｏ、６ｍＭ、Ａｐ３
Ａ２ｍＭが副生じていた。
析したところ、Ａｐ４Ａ３．１ｍＭ （収率杓４９％）
と共に、ＡＭＰ２．３ｍＭ、ＡＤＰｏ、６ｍＭ、Ａｐ３
Ａ２ｍＭが副生じていた。
実施例２
バチルス・ステアロサーモフィルス由来の酢酸キナーゼ
とアデニル酸キナーゼ（生化学工業販売）。
とアデニル酸キナーゼ（生化学工業販売）。
参考例１で得たロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素及びピロフ
ォスファターゼ（ヘーリンガーマンハイム社製）を、そ
れぞれＣＮＢｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファルマシ
ア社製）に固定化した。固定化酢酸キナーゼ３００ユニ
ツト固定化アデニル酸キナーゼ４００ユニツト固定化ロ
イシル−ｔＲＮＡ合成酵素３ユニット及び固定化ピロホ
スファターゼ２０ユニツトを１つのカラム（カラム容量
５ｍ６）に充填した。
ォスファターゼ（ヘーリンガーマンハイム社製）を、そ
れぞれＣＮＢｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファルマシ
ア社製）に固定化した。固定化酢酸キナーゼ３００ユニ
ツト固定化アデニル酸キナーゼ４００ユニツト固定化ロ
イシル−ｔＲＮＡ合成酵素３ユニット及び固定化ピロホ
スファターゼ２０ユニツトを１つのカラム（カラム容量
５ｍ６）に充填した。
次に、ｌｏｍＭの塩化マグネシウムを含む１００ｍＭヘ
ペス緩衝液（ｐＨ７，０）に）８解した１０ｍＭのＡＴ
Ｐ、５ｍＭのアセチルリン酸、１０μＭのロイシンから
なる原料を、固定化酵素充填カラムの上端からｌ ｍ
７！／ ｈ ｒの流速で供給し、カラムの下端から反応
生成物を連続的に抜き取った。
ペス緩衝液（ｐＨ７，０）に）８解した１０ｍＭのＡＴ
Ｐ、５ｍＭのアセチルリン酸、１０μＭのロイシンから
なる原料を、固定化酵素充填カラムの上端からｌ ｍ
７！／ ｈ ｒの流速で供給し、カラムの下端から反応
生成物を連続的に抜き取った。
得られた反応生成物を実施例１と同し方法により分析し
たところ、 ４．８ｍＭ （収率杓９６％）のＡＩ）４
Ａが生成しており、Ａｐ３Ａ、ＡＭＰ、ＡＤＰは検出さ
れなかった。以後、２４時間にわたり安定にＡｐ４Ａが
生成した。
たところ、 ４．８ｍＭ （収率杓９６％）のＡＩ）４
Ａが生成しており、Ａｐ３Ａ、ＡＭＰ、ＡＤＰは検出さ
れなかった。以後、２４時間にわたり安定にＡｐ４Ａが
生成した。
比較例２
固定化した酢酸キナーゼ及びアデニル酸キナーゼを充填
せずに、しかも、カラムに供給する溶液中にアセチルリ
ン酸を加えなかった以外は、実施例２と同様にして反応
させた。
せずに、しかも、カラムに供給する溶液中にアセチルリ
ン酸を加えなかった以外は、実施例２と同様にして反応
させた。
得られた反応生成物を実施例２と同様に分析したところ
、２．０ｍＭ（収率約４０％）のＡｐ４Ａと共に、１．
８ｍＭのＡｐ３Ａ、１．５ｍＭのＡＭＰ。
、２．０ｍＭ（収率約４０％）のＡｐ４Ａと共に、１．
８ｍＭのＡｐ３Ａ、１．５ｍＭのＡＭＰ。
０．８ｍＭのＡＤＰが検出された。
実施例３
バチルス・ステアロサーモフィルス由来の酢酸キナーゼ
とアデニル酸キナーゼ（生化学工業販売）１参考例２で
得たリジル−ｔＲＮＡ合成酵素及びピロホスファターゼ
（ヘーリンガーマンハイム社製）を、それぞれＣＮ−Ｂ
ｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファルマシア社製）に固
定化した。固定化酢酸キナーゼ２５０ユニツト、固定化
アデニル酸キナーゼ３５０ユニツト５固定化リジル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素２ユニット及び固定化ピロホスファター
ゼ２０ユニツトを１つのカラム（カラム容ｆＪ ５ ｍ
／ｌ ）に充填した。
とアデニル酸キナーゼ（生化学工業販売）１参考例２で
得たリジル−ｔＲＮＡ合成酵素及びピロホスファターゼ
（ヘーリンガーマンハイム社製）を、それぞれＣＮ−Ｂ
ｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファルマシア社製）に固
定化した。固定化酢酸キナーゼ２５０ユニツト、固定化
アデニル酸キナーゼ３５０ユニツト５固定化リジル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素２ユニット及び固定化ピロホスファター
ゼ２０ユニツトを１つのカラム（カラム容ｆＪ ５ ｍ
／ｌ ）に充填した。
次に、１０ｍＭの塩化マグ名シウムを含む１００ｍＭヘ
ペス緩衝液（ｐＨ６，５）に溶解したｔｏｍＭのＡＴＰ
、５ｍＭのアセチルリンｆＪｉ、５０ ｐ Ｍのリジン
からなる原料を、固定化酵素充填力ラムの上端からｌ
ｍ １２ ／ ｈ ｒの流速で供給し、カラムの下端か
ら反応生成物を連続的に抜き取った。
ペス緩衝液（ｐＨ６，５）に溶解したｔｏｍＭのＡＴＰ
、５ｍＭのアセチルリンｆＪｉ、５０ ｐ Ｍのリジン
からなる原料を、固定化酵素充填力ラムの上端からｌ
ｍ １２ ／ ｈ ｒの流速で供給し、カラムの下端か
ら反応生成物を連続的に抜き取った。
得られた反応生成物を実施例１と同じ方法により分析し
たところ、 ４．２ｍＭ （収率約８４％）のＡＩ）４
Ａが生成しており、ＡＩ）３Ａ、ＡＭＰ、ＡＤＰは検出
されなかった。以後、１５時間にわたり安定にＡｐ４Ａ
が生成した。
たところ、 ４．２ｍＭ （収率約８４％）のＡＩ）４
Ａが生成しており、ＡＩ）３Ａ、ＡＭＰ、ＡＤＰは検出
されなかった。以後、１５時間にわたり安定にＡｐ４Ａ
が生成した。
比較例３
固定化した酢酸キナーゼ及びアデニル酸キナーゼを充填
せずに、しかも、カラムに供給する溶液中にアセチルリ
ン酸を加えなかった以外は、実施例３と同様にして反応
させた。
せずに、しかも、カラムに供給する溶液中にアセチルリ
ン酸を加えなかった以外は、実施例３と同様にして反応
させた。
得られた反応生成物を実施例３と同様に分析したところ
、 １．８ｍＭ （収率約３６％）のＡＩ）４Ａと共に
、１．８ｍＭのＡＩ）３Ａ、１．６ｍＭのＡＭＰ。
、 １．８ｍＭ （収率約３６％）のＡＩ）４Ａと共に
、１．８ｍＭのＡＩ）３Ａ、１．６ｍＭのＡＭＰ。
１．１ｍＭのＡＤＰが検出された。
実施例４
バチルス・ステアロサーモフィルス由来の酢酸キナーゼ
（生化学工業販売）と参考例２で得たリジル−ｔ ＲＮ
Ａ合成酵素及びピロホスファターゼ（ベーリンガーマン
ハイム社′！Ｍ）を、それぞれＣＮ−Ｂｒ−活性化セフ
ァロース４Ｂ（ファルマシア社製）に固定化した。固定
化酢酸キナーゼ２５０ユニツト、固定化リジル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素２ユニット及び固定化ピロホスファターゼ２
０ユニツトを１つのカラム（カラム容’５４５ ｍ ｌ
）に充填した。
（生化学工業販売）と参考例２で得たリジル−ｔ ＲＮ
Ａ合成酵素及びピロホスファターゼ（ベーリンガーマン
ハイム社′！Ｍ）を、それぞれＣＮ−Ｂｒ−活性化セフ
ァロース４Ｂ（ファルマシア社製）に固定化した。固定
化酢酸キナーゼ２５０ユニツト、固定化リジル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素２ユニット及び固定化ピロホスファターゼ２
０ユニツトを１つのカラム（カラム容’５４５ ｍ ｌ
）に充填した。
次に、１０ｍＭの塩化マグネシウムを含む１００ｍＭヘ
ペス緩衝液（ｐ’Ｈ６，５）に溶解した１０ｍＭのＡＴ
Ｐ、５ｍＭのアセチルリン酸、５０．ｕＭのリジンから
なる原料を、固定化酵素充填カラムの上端から１ｍ ｌ
／ ｈ ｒの流速で供給し、カラムの下端から反応生
成物を連続的に抜き取った。
ペス緩衝液（ｐ’Ｈ６，５）に溶解した１０ｍＭのＡＴ
Ｐ、５ｍＭのアセチルリン酸、５０．ｕＭのリジンから
なる原料を、固定化酵素充填カラムの上端から１ｍ ｌ
／ ｈ ｒの流速で供給し、カラムの下端から反応生
成物を連続的に抜き取った。
得られた反応生成物を実施例１と同じ方法により分析し
たところ、３．７ｍＭ（収率約７４％）のＡｐ４Ａ及び
１．５ｍＭのＡＭＰが生成していた。
たところ、３．７ｍＭ（収率約７４％）のＡｐ４Ａ及び
１．５ｍＭのＡＭＰが生成していた。
これを酢酸キナーゼを加えない比較例３の結果と比べる
と、副生成物であるＡＩ）３Ａ、ＡＤＰの生成は認めら
れず、酢酸キナーゼのみを用いることによっても副生物
の生成が抑えられることがわかる。
と、副生成物であるＡＩ）３Ａ、ＡＤＰの生成は認めら
れず、酢酸キナーゼのみを用いることによっても副生物
の生成が抑えられることがわかる。
実施例５
バチルス・ステアロサーモフィルス由来の酢酸キナーゼ
とアデニル酸キナーゼ（生化学工業販売）。
とアデニル酸キナーゼ（生化学工業販売）。
参考例１で得たロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素及びピロホ
スファターゼ（ベーリンガーマンハイム社Ｉ！りを、そ
れぞれＣＮ−Ｂｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファルマ
シア社製）に固定化した。固定化酢酸キナーゼ３００ユ
ニツト、固定化アデニル酸キナーゼ４００ユニツト、固
定化ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素１０ユニット及び固定
化ピロホスファターゼ２０ユニツトを１つのカラム（カ
ラム容量５ｍｊりに充填した。
スファターゼ（ベーリンガーマンハイム社Ｉ！りを、そ
れぞれＣＮ−Ｂｒ−活性化セファロース４Ｂ（ファルマ
シア社製）に固定化した。固定化酢酸キナーゼ３００ユ
ニツト、固定化アデニル酸キナーゼ４００ユニツト、固
定化ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素１０ユニット及び固定
化ピロホスファターゼ２０ユニツトを１つのカラム（カ
ラム容量５ｍｊりに充填した。
次に、１０ｍＭの塩化マグネシウムを含む１００ｍＭヘ
ペス緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解した１０ｍＭのＮｂ−
カルボキシエチルＡＴＰ、５ｍＭのアセチルリン酸、１
０μＭのロイシンからなる原料を。
ペス緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解した１０ｍＭのＮｂ−
カルボキシエチルＡＴＰ、５ｍＭのアセチルリン酸、１
０μＭのロイシンからなる原料を。
固定化酵素充填カラムの上端からｌ ｍ ｌ ／ ｈ
ｒの流速で供給し、カラムの下端から反応生成物を連続
的に抜き取った。
ｒの流速で供給し、カラムの下端から反応生成物を連続
的に抜き取った。
得られた反応生成物を実施例１と同じ方法により分析し
たところ、２．６ｍＭ（収率約５２％）のＮｂ、Ｎｂ−
ジカルボキシエチルアデノシン四すン酸が生成していた
。
たところ、２．６ｍＭ（収率約５２％）のＮｂ、Ｎｂ−
ジカルボキシエチルアデノシン四すン酸が生成していた
。
比較例４
固定化した酢酸キナーゼ及びアデニル酸キナーゼを充填
せずに、しかも、カラムに供給する溶液中にアセチルリ
ン酸を加えなかった以外は、実施例５と同様にして反応
させた。
せずに、しかも、カラムに供給する溶液中にアセチルリ
ン酸を加えなかった以外は、実施例５と同様にして反応
させた。
得られた反応生成物を実施例５と同様に分析したところ
、 １．２ｍＭ （収率約２４％）のＮｂ、Ｎｂ−ジカ
ルボキシエチルアデノシン四すン酸と共に。
、 １．２ｍＭ （収率約２４％）のＮｂ、Ｎｂ−ジカ
ルボキシエチルアデノシン四すン酸と共に。
１．０ｍＭのＮｂ−カルボキシエチルアデノシン三リン
Ｊ、０．７ｍＭのＮｂ−カルボキシエチルＡＭＰ、０．
８ｍＭのＮｂ−カルボキシエチルＡＤＰが・検出された
。
Ｊ、０．７ｍＭのＮｂ−カルボキシエチルＡＭＰ、０．
８ｍＭのＮｂ−カルボキシエチルＡＤＰが・検出された
。
（発明の効果）
本発明によれば、Ｎｐ３Ｎ、ＮＤＰ又はＮＭＰが副生せ
ず、しかも、極めて高い収率でＮり４Ｎが製造できる。
ず、しかも、極めて高い収率でＮり４Ｎが製造できる。
Claims (1)
- （１）アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用によ
り、アデノシン−５′−三リン酸又はその誘導体とアミ
ノ酸とを反応させてジアデノシン四リン酸又はその誘導
体を製造するに際し、該反応をアデノシン−５′−二リ
ン酸をアデノシン−５′−三リン酸に変換する酵素の存
在下で行うことを特徴とするジアデノシン四リン酸又は
その誘導体の製造方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61122723A JPS62278992A (ja) | 1986-05-28 | 1986-05-28 | ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法 |
| DE8787304628T DE3771577D1 (de) | 1986-05-28 | 1987-05-26 | Verfahren zur herstellung von diadenosintetraphosphat und derivaten davon. |
| EP87304628A EP0247819B1 (en) | 1986-05-28 | 1987-05-26 | Process for producing diadenosine tetraphosphate and derivatives thereof |
| US07/054,975 US4886749A (en) | 1986-05-28 | 1987-05-28 | Process for producing diadenosine tetraphosphate and derivatives thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61122723A JPS62278992A (ja) | 1986-05-28 | 1986-05-28 | ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62278992A true JPS62278992A (ja) | 1987-12-03 |
| JPH0573392B2 JPH0573392B2 (ja) | 1993-10-14 |
Family
ID=14842994
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61122723A Granted JPS62278992A (ja) | 1986-05-28 | 1986-05-28 | ジアデノシン四リン酸又はその誘導体の製造方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4886749A (ja) |
| EP (1) | EP0247819B1 (ja) |
| JP (1) | JPS62278992A (ja) |
| DE (1) | DE3771577D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0689838A1 (en) | 1994-06-30 | 1996-01-03 | Unitika Limited | Use of diadenosine 5', 5'''- p1, p4 - tetraphosphate for curing ischemic anyocardial disease |
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|---|---|---|---|---|
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| WO1989004321A1 (en) * | 1987-11-05 | 1989-05-18 | The Worcester Foundation For Experimental Biology | Diadenosine 5', 5'''-p1, p4-tetraphosphate and analogs thereof as antithrombotic agents |
| JP2783880B2 (ja) * | 1989-11-24 | 1998-08-06 | 富士レビオ株式会社 | 心臓病治療剤 |
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| US5569650A (en) * | 1993-06-11 | 1996-10-29 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | C-nucleoside isosters of analogs thereof and pharmaceutical compositions |
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| US5688670A (en) * | 1994-09-01 | 1997-11-18 | The General Hospital Corporation | Self-modifying RNA molecules and methods of making |
| JP3487939B2 (ja) * | 1995-01-11 | 2004-01-19 | ユニチカ株式会社 | ジアデノシン４リン酸４ナトリウム塩１２水和物結晶 |
| KR100203919B1 (ko) * | 1996-10-04 | 1999-06-15 | 신동권 | 수용성 단백질을 생산하는 새로운 발현 플라스미드 |
| GB201115793D0 (en) * | 2011-09-13 | 2011-10-26 | Univ Warwick | Screening method |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5225088A (en) * | 1975-08-22 | 1977-02-24 | Kazutomo Imahori | Process for preparing a novel thermoresistant acetate kinase |
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| JPS6016231B2 (ja) * | 1979-11-22 | 1985-04-24 | ユニチカ株式会社 | 耐熱性酢酸キナ−ゼの製造法 |
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1986
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- 1987-05-26 EP EP87304628A patent/EP0247819B1/en not_active Expired - Lifetime
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- 1987-05-28 US US07/054,975 patent/US4886749A/en not_active Expired - Lifetime
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0247819B1 (en) | 1991-07-24 |
| EP0247819A2 (en) | 1987-12-02 |
| US4886749A (en) | 1989-12-12 |
| DE3771577D1 (de) | 1991-08-29 |
| EP0247819A3 (en) | 1989-02-15 |
| JPH0573392B2 (ja) | 1993-10-14 |
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