JPS62247243A - Medium material for electrophoresis - Google Patents
Medium material for electrophoresisInfo
- Publication number
- JPS62247243A JPS62247243A JP61090623A JP9062386A JPS62247243A JP S62247243 A JPS62247243 A JP S62247243A JP 61090623 A JP61090623 A JP 61090623A JP 9062386 A JP9062386 A JP 9062386A JP S62247243 A JPS62247243 A JP S62247243A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- support
- layer
- electrophoresis
- resin
- intermediate layer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Laminated Bodies (AREA)
Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
[発明の分野]
本発明は、電気泳動用媒体材料に関するものであり、さ
らに詳しくは特に蛋白質等の生体高分子成分の電気泳動
分析に使用するのに適した電気泳動用媒体材料に関する
ものである。[Detailed Description of the Invention] [Field of the Invention] The present invention relates to an electrophoretic medium material, and more particularly to an electrophoretic medium material suitable for use in electrophoretic analysis of biopolymer components such as proteins. This relates to media materials for use.
[発明の背景]
電気泳動分析の代表的な態様としては、ガラス板支持体
に寒天、セルロース、セルロースアセテート、デンプン
、シリカゲル、ポリアクリルアミド等の膜形成材料を塗
布または流延して製造した電気泳動膜に緩衝液をしみこ
ませ、この−Lに分析対象のTh質を付着させ、支持体
のP4端に電圧をかけ、支持体の上または内部で展開(
移動)させたのち、染色し、この染色した試料の光学濃
度を測定して物質の各成分の1雀分析を行なう態様を挙
げることができる。[Background of the Invention] A typical embodiment of electrophoretic analysis is electrophoresis produced by coating or casting a film-forming material such as agar, cellulose, cellulose acetate, starch, silica gel, or polyacrylamide on a glass plate support. The membrane is impregnated with a buffer solution, the Th substance to be analyzed is attached to this -L, a voltage is applied to the P4 end of the support, and the membrane is developed on or inside the support (
An example of an embodiment is to carry out a single-sparrow analysis of each component of the substance by staining the sample and measuring the optical density of the dyed sample.
このような′心気泳動分析および電気泳動膜の詳細につ
いては、電気泳動実験法「電気泳動実験法(L!に訂第
5版)」(文光堂、1975年発行)。For details on such 'hypophoresis analysis and electrophoretic membranes, please refer to Electrophoresis Experimental Methods, ``Electrophoresis Experimental Methods (revised 5th edition in L!)'' (Bunkodo, published in 1975).
青水、永井編″J!r最新電気泳動法」 (成用書店、
1973年発行)′:9に記載されている。Aomizu, Nagai ed. “J!r latest electrophoresis method” (Nariyo Shoten,
Published in 1973)':9.
近年において、電気泳動法は生体成分の分析に多用され
ており、特に蛋白分析は病気診断のための生化学検査に
おいてs1繁に用いられている。In recent years, electrophoresis has been frequently used to analyze biological components, and protein analysis in particular has been frequently used in biochemical tests for disease diagnosis.
電気泳動用膜またはシートとしては古くから濾紙が用い
られていたが、上述のように性能上の面から最近はアガ
ロース膜やポリアクリルアミドゲル膜が用いられるよう
になり、特に分子ふるい効果を有するポリアクリルアミ
ドゲル膜は現在最も多く利用されている。Filter paper has been used as a membrane or sheet for electrophoresis for a long time, but as mentioned above, agarose membranes and polyacrylamide gel membranes have recently been used from the viewpoint of performance. Acrylamide gel membranes are currently most commonly used.
ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
単量体を、重合触媒の存在下、N、N’−メチレンビス
アクリルアミドのような二官滝性の架橋剤で酸素不存在
条件下て重合架橋させることによって得られている。Polyacrylamide gel membranes are produced by polymerizing and crosslinking monomers such as acrylamide with a difunctional crosslinking agent such as N,N'-methylenebisacrylamide in the absence of oxygen in the presence of a polymerization catalyst. It is obtained by
なお、ポリアクリルアミドゲル膜の製造に際しては変性
剤として陰イオン界面活性剤か添加されることが多いが
、蛋白質分析用ゲル膜の製造においては、変性剤の必要
量が少ないため、湿潤ゲル膜に変性剤水溶液を塗布する
方法、ゲル膜を変性剤水溶液に浸漬する方法等によりゲ
ル膜内に変性剤を含浸させることができる。Anionic surfactants are often added as denaturing agents when producing polyacrylamide gel membranes, but in the production of gel membranes for protein analysis, the amount of denaturing agent required is small, so it is added to wet gel membranes. The modifier can be impregnated into the gel film by a method of applying an aqueous modifier solution, a method of immersing the gel film in an aqueous modifier solution, or the like.
上記の重合反応はラジカル架橋重合であり、酸素の影響
により反応が阻害されるため、ポリアクリルアミドゲル
膜は#素を遮断した状態で調製する必要かある。この理
由から、現在では一般に。The above polymerization reaction is a radical crosslinking polymerization, and since the reaction is inhibited by the influence of oxygen, it is necessary to prepare the polyacrylamide gel film in a state where the # element is blocked. For this reason, it is now common.
ポリアクリルアミドゲル膜は2枚のガラス板で形成され
たセル(一定の空間、たとえば約0.3〜1mm厚の空
間を有するもの)の中にゲル形成液を注入し、酸十を遮
断した状態で架橋重合させてゲル膜を形成させている。A polyacrylamide gel film is produced by injecting a gel-forming solution into a cell (having a certain space, for example, about 0.3 to 1 mm thick) formed by two glass plates, and blocking out oxygen. It is cross-linked and polymerized to form a gel film.
しかし、この方法は二枚のガラス板の間でゲル膜を形成
するために、取り扱い性が悪く、かつゲル膜の量産化か
困難であるといった大きな欠点を有している。However, since the gel film is formed between two glass plates, this method has major drawbacks such as poor handling and difficulty in mass-producing the gel film.
以上のようにして形成したポリアクリルアミドゲル膜を
電気泳動媒体として用いる電気泳動操作は、たとえば、
次のようにして実施される。Electrophoresis operations using the polyacrylamide gel membrane formed as described above as an electrophoresis medium include, for example,
It is implemented as follows.
サンプルスロットが上端部に設けられたポリアクリルア
ミドゲル膜をガラス板に挟んだままの状態で垂直に配置
し、まず前電気泳fjJ操作を行なったのち、サンプル
スロット中に試料を一定量注入し、次いで電気泳動操作
を行なう。そして一定時間の電気泳動を行なった後、片
面のガラス板を注意深く除去し、染色液中に浸漬して、
泳動分層した蛋白質もしくはその誘導体1分解物などを
染色して、泳動パターンを画像化する。A polyacrylamide gel membrane with a sample slot provided at the upper end was placed vertically between glass plates, and after performing a pre-electrophoresis fjJ operation, a fixed amount of sample was injected into the sample slot. Next, electrophoresis is performed. After performing electrophoresis for a certain period of time, one side of the glass plate was carefully removed and immersed in a staining solution.
The electrophoretic pattern is imaged by staining the electrophoretically separated protein or its derivative 1 decomposition product.
従来のアクリルアミドゲル膜な用いた1「気泳動媒体材
料は上記のようにガラス板を用いるために取り扱い性に
問題があり、しばしばガラスを割ったりして実験を失敗
することがある。この様な欠点を改良した取り扱い性の
良好な1に気泳動用媒体材料の開発は既にすすめられ、
支持体としてポリエチレンテレフタレートなどのプラス
チック材料からなる支持体を用い、その上にポリアクリ
ルアミドゲル膜を形成した電気泳動媒体材料か既に提案
されている。Conventional acrylamide gel membranes used as aerophoretic media materials have problems in handling because they use glass plates as mentioned above, and experiments often fail due to the glass breaking. The development of a pneumophoresis medium material that has improved its shortcomings and is easy to handle has already been promoted.
An electrophoretic medium material has already been proposed in which a support made of a plastic material such as polyethylene terephthalate is used as a support and a polyacrylamide gel film is formed thereon.
]−記のプラスチック材料製の支持体を用いた゛電気泳
動媒体材料は、その製造が容易で、取り扱い性も良いと
の利点を有する。そして、蛋白質などの電気泳動も、そ
の電気泳動媒体材料を用いて行なうことができるか1本
発明者が詳細に検討したところによると、支持体として
ガラス板を用い、て製造した従来の゛電気泳動媒体材料
に比較すると。] The electrophoretic medium material using the support made of plastic material has the advantage of being easy to manufacture and easy to handle. The present inventor has investigated in detail whether it is possible to perform electrophoresis of proteins, etc. using this electrophoretic medium material. When compared to the running media material.
その解像力か若干低下する傾向かあることがわかった。It was found that there was a tendency for the resolution to decrease slightly.
[発明の要旨]
本発明の目的は、新規なプラスチック製フィルム(ある
いはシート)を支持体として用いたポリアクリルアミド
ゲル膜系電気泳動媒体材料を提供することにある。[Summary of the Invention] An object of the present invention is to provide a polyacrylamide gel membrane-based electrophoretic medium material using a novel plastic film (or sheet) as a support.
本発明の]」的は、特にプラスチック製フィルム(ある
いはシート)を支持体として用いたポリアクリルアミド
ゲル膜系電気泳動媒体材料であって、支持体としてガラ
ス板を用いて製造した電気泳動媒体材料と同等もしくは
それ以上の解像力を示す電気泳動媒体材料を提供するこ
とにある。The object of the present invention is particularly a polyacrylamide gel membrane-based electrophoretic medium material using a plastic film (or sheet) as a support, which is different from an electrophoretic medium material manufactured using a glass plate as a support. The object of the present invention is to provide an electrophoretic medium material that exhibits an equivalent or higher resolution.
本発明は、アクリルアミド系化合物と架橋剤とが木の存
在下で架橋刊合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル
からなる電気泳動用媒体層およびプラスチック材料製支
持体を含む電気泳動用媒体材料てあって、該電気泳動用
媒体層と支持体層との間に、該支持体材料よりも酸素透
過係数が低い樹脂材料からなる樹脂中間層が備えられて
いることを特徴とする電気泳動用媒体材料からなるもの
である。The present invention provides an electrophoretic medium material comprising an electrophoretic medium layer made of an aqueous polyacrylamide gel formed by crosslinking an acrylamide compound and a crosslinking agent in the presence of wood, and a support made of a plastic material. A medium material for electrophoresis, characterized in that a resin intermediate layer made of a resin material having an oxygen permeability coefficient lower than that of the support material is provided between the medium layer for electrophoresis and the support layer. It consists of
[発明の効果]
本発明の電気泳動用媒体材料は、上記のようにプラスチ
ック製支持体からの電気泳動媒体層への酸素の透過、拡
散を低下させることのできる樹脂中間層が設けられてい
るため、電気泳動用媒体層(ポリアクリルアミドゲル膜
)の形成のための架橋重合反応が非常に円滑に進行し、
高度に均質な電気泳動用媒体層が形成される。従って、
そのような樹脂中間層を備えていないプラスチック支持
体層に形成された電気泳動用媒体層に比較して、本発明
の電気泳動用媒体材料の電気泳動用媒体層は、更に高い
解像性を示す。[Effects of the Invention] As described above, the electrophoresis medium material of the present invention is provided with a resin intermediate layer that can reduce the permeation and diffusion of oxygen from the plastic support to the electrophoresis medium layer. Therefore, the crosslinking polymerization reaction for forming the electrophoresis medium layer (polyacrylamide gel membrane) proceeds very smoothly.
A highly homogeneous electrophoretic medium layer is formed. Therefore,
Compared to an electrophoretic medium layer formed on a plastic support layer that does not include such a resin intermediate layer, the electrophoretic medium layer of the electrophoretic medium material of the present invention has even higher resolution. show.
[発明の詳細な記述]
本発明の電気泳動用媒体材料の支持体は、プラスチック
材料から形成されるシート状物(フィルム状物も含む)
である。このプラスチック製シートとしては、任意のプ
ラスチック材料から形成したものを用いることができる
。好ましいプラスチック材料の例としては、ポリエチレ
ンテレフタレート、ビスフェノールAのポリカルボネー
ト、ポリ塩化ビニル、ポリメチルメタクリレート、ポリ
エチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、セルロース
アセテート、およびセルロースアセテートプロピオネー
トをあげることができる。[Detailed Description of the Invention] The support for the electrophoresis medium material of the present invention is a sheet-like material (including a film-like material) formed from a plastic material.
It is. This plastic sheet may be made of any plastic material. Examples of preferred plastic materials include polyethylene terephthalate, polycarbonate of bisphenol A, polyvinyl chloride, polymethyl methacrylate, polyethylene, polypropylene, polystyrene, cellulose acetate, and cellulose acetate propionate.
プラスチック材料製支持体は公知の表面活性化処理によ
り表面を親水化したものであることが好ましい。表面親
木化処理のためには紫外線照射、グロー放電処理、コロ
ナ放電処理、火焔処理、電子線照射、ケミカルエツチン
グ、電解エツチング笠の公知の方法を適用することがで
きる。It is preferable that the support made of plastic material has its surface made hydrophilic by a known surface activation treatment. Known methods such as ultraviolet irradiation, glow discharge treatment, corona discharge treatment, flame treatment, electron beam irradiation, chemical etching, and electrolytic etching can be applied to the surface wood-carrying treatment.
支持体は、一般に厚さが約50〜5007hm、好まし
くは約70〜300pmのものか用いられる。The support used generally has a thickness of about 50 to 5007 hm, preferably about 70 to 300 pm.
これまでに提案されているプラスチック製支持体を用い
た電気泳動用媒体においては、プラスチック製支持体上
に、直接あるいは接着剤層を介してポリアクリルアミド
ゲル形成用塗布液が塗布され、次いで窒素雰囲気下にて
架橋重合反応か行なわれている。In electrophoresis media using plastic supports that have been proposed so far, a coating solution for forming a polyacrylamide gel is applied onto the plastic support directly or via an adhesive layer, and then a nitrogen atmosphere is applied. A cross-linking polymerization reaction is carried out below.
本発明の電気泳動用媒体においては、プラスチック製支
持体上に酸素透過係数が低い樹脂材料からなる樹脂中間
層が設けられる。In the electrophoresis medium of the present invention, a resin intermediate layer made of a resin material with a low oxygen permeability coefficient is provided on a plastic support.
と記の樹脂中間層は、層厚20gmに形成したフィルム
の状態における酸素透過量が15cc/ゴ・aLIl−
day以下の樹脂材料よりなることが好ましく、特に層
厚201Lmに形成したフィルムの状態における酸素透
過量が1Occ/ゴ・aL■・day以下の樹脂材料よ
りなることが好ましい。好ましい樹脂材料の例としては
、塩化ビニリデン・塩化ビニル共重合体、ポリビニルア
ルコール、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニリデン
、ビニルアルコール・エチレン共重合体、塩化ビニリデ
ン・アクリロニトリル共重合体、アクリロニトリル・メ
チルアクリレート・ブタジエン共重合体などを挙げるこ
とができる。なお、上記の酸素透過!、:、は、酸素透
過にの測定方法として一般的に利用されているm o
c o n法による測定値である。The resin intermediate layer marked with has an oxygen permeation rate of 15 cc/go・alIl- in the state of a film formed to a layer thickness of 20 gm.
It is preferably made of a resin material having a film thickness of 201 Lm or less, and particularly preferably a resin material having an oxygen permeation rate of 1 Occ/G·aL·day or less in a film formed to a layer thickness of 201 Lm. Examples of preferred resin materials include vinylidene chloride/vinyl chloride copolymer, polyvinyl alcohol, polyacrylonitrile, polyvinylidene chloride, vinyl alcohol/ethylene copolymer, vinylidene chloride/acrylonitrile copolymer, and acrylonitrile/methyl acrylate/butadiene copolymer. Examples include polymers. In addition, the oxygen permeation mentioned above! , :, is m o which is generally used as a measurement method for oxygen permeation.
This is a value measured by the con method.
上記樹脂中間層は約0.5〜20μmの層厚を有するこ
とが好ましく、さらに約1〜8μmの層厚を有すること
が特に好ましい。The resin intermediate layer preferably has a layer thickness of about 0.5 to 20 μm, more preferably about 1 to 8 μm.
樹脂中間層と上記支持体とがらなる積層体の酸十透過量
は10 c c /rtf−al、m ・day以下で
あることが好ましく、さらに7 c c /m′・at
@・day以下であることが特に好ましい。The acid permeation rate of the laminate consisting of the resin intermediate layer and the support is preferably 10 cc/rtf-al, m.day or less, and more preferably 7 cc/m'.at
It is particularly preferable that it is less than @·day.
1−、記の樹脂中間層の4−に直接、あるいは接着剤層
などの他の中間層を介して電気泳動用媒体層が設けられ
る。1-, an electrophoretic medium layer is provided on the resin intermediate layer 4- either directly or via another intermediate layer such as an adhesive layer.
次に電気泳動用媒体層(以下において、ゲル媒体層、ポ
リアクリルアミドゲル膜あるいは単にゲル膜ともいう)
について説明する。Next, the electrophoresis medium layer (hereinafter also referred to as gel medium layer, polyacrylamide gel membrane, or simply gel membrane)
I will explain about it.
ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中て両
者を架橋重合させて架橋重合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることがてきる0本明細書においては
、特にことわらない限り、(水中に)溶解と(水中に)
分散の両者を含めて巾に(水中に)溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて単に水溶液という。また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。Polyacrylamide gel membrane is an aqueous gel obtained by dissolving or dispersing an acrylamide compound and a crosslinking agent in water as an aqueous solution or dispersion to prepare a gel forming liquid, and then crosslinking and polymerizing both in the liquid. In this specification, unless otherwise specified, dissolution (in water) and dissolution (in water)
Both dispersion and dispersion are collectively referred to as dissolution (in water), and both aqueous solutions and aqueous dispersions are simply referred to as aqueous solutions. It also includes a mixture of an organic solvent and water, which may be added as desired as a solvent or dispersion medium.
ポリアクリルアミドゲル膜の形成に用いることがてきる
アクリルアミド系化合物の例としては、アクリルアミド
、N−メチルアクリルアミド、N、N−ジメチルアクリ
ルアミド、N−(ヒドロキシメチル)アクリルアミド、
ジアセトンアクリルアミド等のアクリルアミド系化合物
やメタクリルアミド等のメタクリルアミド系化合物が挙
げられ、これらの化合物は単独で、あるいは二種以上を
併用して用いることができる。これらのアクリルアミド
系化合物のうちてはアクリルアミドか最も好ましく、ま
たアクリルアミドと他のアクリルアミ1〜県北合物、メ
タクリルアミド系化合物の一種以上の併用も好ましい。Examples of acrylamide compounds that can be used to form polyacrylamide gel membranes include acrylamide, N-methylacrylamide, N,N-dimethylacrylamide, N-(hydroxymethyl)acrylamide,
Examples include acrylamide compounds such as diacetone acrylamide and methacrylamide compounds such as methacrylamide, and these compounds can be used alone or in combination of two or more. Among these acrylamide compounds, acrylamide is most preferred, and a combination of acrylamide and one or more of other acrylamides, Kenhokuai products, and methacrylamide compounds is also preferred.
架橋剤としてはr EIectrophoresis
J 19g1.2゜220−228等に記載の公知の化
合物(一種または二種以上の組合せ)を用いることがで
きる。架橋剤の其体例としては、N、N’ −メチレン
ビスアクリルアミド(BIS);N、N’ −プロピレ
ンビスアクリルアミド(PBA)、ジ(アクリルアミド
ジメチル)エーテル(DAE); l、2−ジアクリル
アミドエチレングリコール(DEG);エチレンウレア
ビスアクリルアミド(EUB);エチレンジアクリレー
ト(EDA);N、N’ −ジアリルタータルジアミド
(N、N’−diallylLartardiasid
e : DATD) ;およびN、N’ −ビスアク
リリルシスタミン(N、N’−bisacrylylc
ysLamine。As a crosslinking agent, rEIelectrophoresis
Known compounds (one type or a combination of two or more types) described in J 19g1.2゜220-228 etc. can be used. Examples of crosslinking agents include N,N'-methylenebisacrylamide (BIS); N,N'-propylenebisacrylamide (PBA), di(acrylamide dimethyl) ether (DAE); l,2-diacrylamide ethylene glycol. (DEG); ethylene ureabisacrylamide (EUB); ethylene diacrylate (EDA);
e: DATD); and N,N'-bisacrylycystamine (N,N'-bisacrylylylc
ysLamine.
BAC)等の二官渣性化合物か挙げられる。Examples include difunctional residue compounds such as BAC).
架橋剤の量は、弔が体と架橋剤の総重量に対して約2〜
30wt%、好ましくは約3〜lowt%の範囲である
。The amount of crosslinking agent is approximately 2 to 20% based on the total weight of the body and crosslinking agent.
30 wt%, preferably in the range of about 3 to low wt%.
ゲル濃度としては、S、 1ljerten: r
Arch。The gel concentration is S, 1ljerten: r
Arch.
口iochem、 Biophys、 J I
(5upp1. )、 147(1962)に記
載の定義に従って表示して、単量体、架橋剤および水か
らなるゲル膜の容積に対して、単量体と架橋剤の量か約
3〜30 w / v%の範囲で好ましく用いられる。Mouth iochem, Biophys, J I
(5upp1.), 147 (1962), the amount of monomer and crosslinking agent is approximately 3 to 30 w, based on the volume of the gel film consisting of monomer, crosslinking agent, and water. /v% range.
本発明の電気泳動用媒体材料は主として蛋白質または複
合蛋白質(たとえばリボプロティン、糖プロティンなど
)の分析に有利に用いられるものてあり、電気泳動用媒
体層には、変性剤として陰イオン性界面活性剤を含有さ
せることができる。The electrophoresis medium material of the present invention is mainly used to advantageously analyze proteins or complex proteins (e.g. riboprotein, glycoprotein, etc.), and the electrophoresis medium layer contains an anionic surfactant as a denaturing agent. It is possible to contain an agent.
分析試料か蛋白質または複合蛋白質(例えばリボ蛋白質
、糖蛋白質など)の場合には陰イオン界面活性剤を含ま
せることは好ましいが、または必須であることが多い。When the sample to be analyzed is a protein or a complex protein (eg, riboproteins, glycoproteins, etc.), the inclusion of an anionic surfactant is preferred or often necessary.
陰イオン界面活性剤をゲル媒体層に含有させないことが
あることは勿論である。たとえば陰イオン界面活性剤を
含有しないゲル媒体層は、DNAフラグメント分析に基
づく遺伝病診断あるいは制限酵素分解を利用したDNA
構造解析などの1]的に用いることができる。Of course, the anionic surfactant may not be included in the gel medium layer. For example, a gel medium layer that does not contain an anionic surfactant can be used for genetic disease diagnosis based on DNA fragment analysis or DNA analysis using restriction enzyme digestion.
It can be used for structural analysis, etc.
陰イオン界面活性剤を電気泳動用媒体層に含有させるこ
とにより、蛋白質または複合蛋白質の効率的な分離およ
びそれらの分子が測定か可能となる。By incorporating an anionic surfactant into the electrophoresis medium layer, it becomes possible to efficiently separate proteins or complex proteins and measure their molecules.
陰イオン性界面活性剤の例としてはアルキル硫酸塩か挙
げることができ、特に炭素原子数lO以七の長鎖アルキ
ル基を有するアルキル硫酸塩が好ましく用いられる。塩
を形成する陽イオンとしては、ナトリウムイオン、カリ
ウムイオン、リチウムイオン笠のアルカリ金属イオンが
一般的であり、これらのうちてはナトリウムイオンか用
いやすい。アルキル硫酸塩のうちではドデシル硫酸塩(
ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等)が好ましく
、なかてもドデシル硫酸ナトリウム(SDS)か最も好
ましい。SDSを本発明のゲル媒体層に含有させること
により蛋白質または複合蛋白質の効率的な分mおよびそ
れらの分子量測定が可f敵となる。Examples of anionic surfactants include alkyl sulfates, and alkyl sulfates having a long chain alkyl group having 10 or more carbon atoms are particularly preferably used. As cations that form salts, alkali metal ions such as sodium ions, potassium ions, and lithium ions are generally used, and among these, sodium ions are easier to use. Among alkyl sulfates, dodecyl sulfate (
(sodium salt, potassium salt, lithium salt, etc.) are preferred, and among them, sodium dodecyl sulfate (SDS) is most preferred. Inclusion of SDS in the gel medium layer of the present invention facilitates efficient separation of proteins or complex proteins and measurement of their molecular weights.
変性剤としての陰イオン界面活性剤の含有州はゲル形成
液に対して、約0,05〜2.0w/v%、好ましくは
約0.1〜1.5w/v%の範囲である。The content of the anionic surfactant as a modifier is in the range of about 0.05 to 2.0 w/v%, preferably about 0.1 to 1.5 w/v%, based on the gel forming solution.
ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマーを含有さ
せることができる。The polyacrylamide gel membrane can contain a water-soluble polymer.
水溶性ポリマーとしては、付加重合型または縮東金型の
水溶性ポリマーを用いることがてきる。As the water-soluble polymer, an addition polymerization type or a reduced-to-metal type water-soluble polymer can be used.
付加重合型ポリマーの具体例としては、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド等
の非イオン性水溶性ポリマーか挙げられる。1Iiif
fi合型ポリマーの具体例としてポリエチレングリコー
ル、ポリプロピレングリコール等の非イオン性水溶性ポ
リアルキレンゲリコールか挙げられる。水溶性ポリマー
の分子量は、約1万から約100万の範囲のものか好ま
しい。これらの水溶性ポリマーのうちては、ポリエチレ
ングリコール、ポリアクリルアミドか特に好ましい。Specific examples of addition polymerization type polymers include nonionic water-soluble polymers such as polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, and polyacrylamide. 1Iiif
Specific examples of fi polymers include nonionic water-soluble polyalkylene gelcols such as polyethylene glycol and polypropylene glycol. Preferably, the water-soluble polymer has a molecular weight in the range of about 10,000 to about 1,000,000. Among these water-soluble polymers, polyethylene glycol and polyacrylamide are particularly preferred.
水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合計重量に対して
約2〜100 w t%の範囲、好ましくは約5〜50
w t%の範囲の量で用いられる。水溶性ポリマーを
添加することにより、ポリアクリルアミドゲル膜は可塑
性を有するようになるため、裁断加工時に壊れることが
なくなり、またゲル膜は乾燥時にも可塑性を有するよう
になり、もろさが改良され、壊れにくくなるとの利点が
ある。また、水溶性ポリマーの分子量および添加量を選
択することにより、ゲル膜の粘度をコントロールするこ
ともできる。The water-soluble polymer is present in an amount ranging from about 2 to 100 wt%, preferably from about 5 to 50 wt% based on the total weight of monomer and crosslinker.
It is used in amounts ranging from wt%. By adding a water-soluble polymer, the polyacrylamide gel film becomes plastic, so it will not break during cutting, and the gel film also becomes plastic when drying, improving its brittleness and preventing it from breaking. This has the advantage of being less difficult. Furthermore, the viscosity of the gel film can be controlled by selecting the molecular weight and amount of the water-soluble polymer added.
ポリアクリルアミドゲル膜にはアガロースを含有させる
ことがてきる。アガロースは公知のアガロースであれば
特に制限はなく、低電気浸透性、中電気$2′X1i性
、高電気浸透性アガロースのいずれをも用いることがで
きる。用いることのできるアガロースの例としては特開
昭55−5730号、特開昭55−110946号、特
表昭57−502098号等の公報に開示されているア
ガロース等がある。The polyacrylamide gel membrane can contain agarose. The agarose is not particularly limited as long as it is a known agarose, and any of low electroosmotic, medium electroosmotic, and high electroosmotic agaroses can be used. Examples of agarose that can be used include those disclosed in Japanese Patent Application Laid-open Nos. 57-5730, 110946-1982, and Japanese Patent Publication No. 502098-1982.
アガロースは、m H体と架橋剤とを含むゲル組成液の
容積に対して約0.2〜2 w / v%、好ましくは
約0.3〜1.2w/v%の割合にて添加される。ゲル
膜にアガロースを添加することにより、ゲル形成用溶液
温度を変化させることにより、適当な溶液粘度にコント
ロールすることが可能となり、そのtli、fh性を止
めることができ、またゲル膜を成形する時には成形しや
すくなるとの利点がある。Agarose is added at a rate of about 0.2 to 2 w/v%, preferably about 0.3 to 1.2 w/v%, based on the volume of the gel composition containing the mH form and the crosslinking agent. Ru. By adding agarose to the gel film, it is possible to control the solution viscosity to an appropriate level by changing the temperature of the gel forming solution, and the tli and fh properties can be stopped, and the gel film can be formed. Sometimes it has the advantage of being easier to mold.
ゲル媒体層にはpH緩衝剤を含有させることもできる。The gel medium layer may also contain a pH buffer.
緩衝剤としては、電気泳動分析される試料に応じて、P
H2,5から10.0の範囲内のpH4tiに緩衝でき
る公知の緩衝剤から適宜選択して用いることができる。As a buffer, depending on the sample to be electrophoretically analyzed, P
It is possible to use an appropriate buffer selected from known buffering agents capable of buffering to pH 4ti within the range of H2.5 to 10.0.
用いつる緩衝剤としては、日本化学会t!A「化学便覧
基礎編」(東京、丸管■1966年発行)1312−
1320ベージ:8木、永井編「最新電気泳動法」 (
東京、広角書店、 1973年発行320−322ベー
ジ; r Data for Biochemical
Re5earchJ (R,M。The vine buffer to be used is manufactured by Chemical Society of Japan T! A “Chemistry Handbook Basic Edition” (Tokyo, Marukan ■ Published in 1966) 1312-
1320 pages: 8th Thu, Nagai ed. “Latest electrophoresis methods” (
Tokyo, Hirokaku Shoten, 1973, 320-322 pages; r Data for Biochemical
Re5searchJ (R,M.
C,Dawson cL al、編、第2版、 0xf
ord at LheClarcndon Press
、 1969年発行) 476−508ベージ; r
RiochemisLry J 5.467 (1
966)、r AnalyLical Biochem
isLryJ 104. :100−:110(198
0)iに記載の緩衝剤か挙げられる。C, Dawson cL al, ed., 2nd edition, 0xf
ord at LheClarkdon Press
, published in 1969) 476-508 pages; r
RiochemisLry J 5.467 (1
966), r Analytical Biochem
isLryJ 104. :100-:110(198
0) Buffers described in i.
緩衝剤の例としては、バルビツールを含む緩衝剤、トリ
ス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(Tris)を含
む緩衝剤、燐酸塩を含む緩衝剤、ホウ酸塩を含む緩衝剤
、酢酸または酢酸塩を含む緩衝剤、クエン酸またはクエ
ン酸塩を含む緩衝剤、乳酸または乳#Ji!を含む緩衝
剤、グリシンを含む緩衝剤、N、N−ビス(2−ヒドロ
キシエチル)グリシン(Bicine)、N−2−ヒド
ロキシエチルピペラジン−N’ −2−ヒドロキシプロ
パン−3−スルホン# (HEPPSO)またはその塩
、N−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N’ −3−
プロパンスルホン酸(EPPS)またはその塩、N−[
トリス(ヒドロキシメチル)コー3−アミノプロパンス
ルホン酸(TAPS)またはその塩等をおよび、これら
のいずれかと必要により組合せられる酸、アルカリ、ま
たはJ′i!等を挙げることができる。好ましい緩衝剤
の具体例としては、燐酸二水素カリウム−燐酸水素二ナ
トリウム、Tris・ホウ酸ナトリウム、Tris・ホ
ウ酸ナトリウム・EDTAZNa塩、Tris・クエン
酸、ハルビタールナトリウム・酢酸ナトリウム、ハルビ
タールナトリウム・塩酸。Examples of buffers include barbiturate-containing buffers, tris(hydroxymethyl)aminomethane (Tris)-containing buffers, phosphate-containing buffers, borate-containing buffers, acetic acid or acetate salts. Buffers, citric acid or buffers containing citrate, lactic acid or milk #Ji! buffer containing glycine, N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine (Bicine), N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-hydroxypropane-3-sulfone # (HEPPSO) or a salt thereof, N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-3-
Propanesulfonic acid (EPPS) or its salt, N-[
Tris(hydroxymethyl)co-3-aminopropanesulfonic acid (TAPS) or a salt thereof, and an acid, alkali, or J'i! which is optionally combined with any of these. etc. can be mentioned. Specific examples of preferred buffers include potassium dihydrogen phosphate-disodium hydrogen phosphate, Tris/sodium borate, Tris/sodium borate/EDTAZNa salt, Tris/citric acid, sodium harbital/sodium acetate, sodium harbital/ hydrochloric acid.
バルビツール・ハルビタールナトリウム、酢酸・酢酸ナ
トリウム、乳酸・乳酸ナトリウム、クエン酸−燐酸木よ
ニナトリウム、ビシン(Bicine) 。Barbiturate/sodium harbital, acetic acid/sodium acetate, lactic acid/sodium lactate, citric acid/phosphoric acid disodium, Bicine.
HEPPSO,HEPPSOナトリウム塩、EPPS、
EPPSナトリウム塩、TAPS、TAPSナトリウム
塩等を挙げることができる。HEPPSO, HEPPSO sodium salt, EPPS,
Examples include EPPS sodium salt, TAPS, TAPS sodium salt, and the like.
本発明においてポリアクリルアミドゲル膜はアクリルア
ミドに代表される単量体、二官能性のアリル(ally
l )化合物またはアクリル化合物(架橋剤)、水溶性
ポリマー、およびアガロースを実質的に均一に溶解させ
た水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル架橋重合させ
て得られるものであり、単量体と架橋剤から形成された
三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガロースか実質
的に分散されて、後二者のポリマー釦か三次元架橋重合
体とがらみあっている構造を有すると推定される。In the present invention, the polyacrylamide gel membrane is a monomer typified by acrylamide, a difunctional allyl (ally)
l) It is obtained by radical crosslinking polymerization of a monomer and a crosslinking agent in an aqueous solution in which a compound or an acrylic compound (crosslinking agent), a water-soluble polymer, and agarose are substantially uniformly dissolved. It is presumed that the water-soluble polymer and agarose are substantially dispersed in the three-dimensional cross-linked polymer formed from the body and the cross-linking agent, and the latter two polymer buttons are intertwined with the three-dimensional cross-linked polymer. Ru.
上記のラジカル架橋重合反応は、分子状酸素の不存在下
で過酸化物の存在および/または紫外線照射等の公知の
方法により発生させることができる。この反応を加熱お
よび紫外線照射により加速することもできる。The above-mentioned radical crosslinking polymerization reaction can be caused by a known method such as the presence of peroxide and/or ultraviolet irradiation in the absence of molecular oxygen. This reaction can also be accelerated by heating and UV radiation.
ラジカル架橋重合用触媒としては、r Electr
。As a catalyst for radical crosslinking polymerization, r Electr
.
phoresisJ 1981. 2. 213−2
19. 同 1981. 2. 220−228;青
水、永井編[最新電気泳動法J (1973年発行)等
に記載の公知の低温ラジカル重合開始剤のうちから適宜
選択して用いることができる。phoresisJ 1981. 2. 213-2
19. Same 1981. 2. 220-228; Aomizu and Nagai (eds.) [Latest Electrophoresis Methods J (published in 1973), etc., known low-temperature radical polymerization initiators can be appropriately selected and used.
好ましいラジカル重合開始剤の具体例としては、β−ジ
メチルアミノプロピオニトリル(DMAPN)−ベルオ
クソニ硫酸アンモニウム混合物、N、N、N’ 、N’
−テトラメチルエチレンジアミン(TEMED)−ベル
オクソニ硫酸アンモニウム混合物、TEMED−リボフ
ラビン混合物、TEMED−リボフラビン−過酸化水素
混合物と紫外線照射の組合せ等が挙げられる。ラジカル
重合開始剤の含有量は、巾h1一体と架橋剤の合計重碌
に対して約0.3〜5重量%、そして好ましくは約0.
5〜3屯量%の範囲である。Specific examples of preferred radical polymerization initiators include β-dimethylaminopropionitrile (DMAPN)-beroxonisulfate ammonium mixture, N, N, N', N'
Examples include a combination of -tetramethylethylenediamine (TEMED)-beroxonisulfate mixture, TEMED-riboflavin mixture, TEMED-riboflavin-hydrogen peroxide mixture and ultraviolet irradiation. The content of the radical polymerization initiator is about 0.3 to 5% by weight, and preferably about 0.3% to 5% by weight, based on the total weight of the width h1 and the crosslinking agent.
It is in the range of 5 to 3% by weight.
ゲル媒体層は、支持体上の前記の樹脂中間層の上に直接
あるいは接着剤層などの他の中間層を介して上記のゲル
形成液を公知の方法により塗布して設けたのち、ゲル形
成液を架橋重合させることにより形成することができる
。The gel medium layer is formed by coating the gel forming liquid on the resin intermediate layer on the support by a known method, either directly or through another intermediate layer such as an adhesive layer, and then forming the gel. It can be formed by crosslinking and polymerizing a liquid.
ゲル形成液を樹脂中間層の表面で架橋重合させる場合に
は、ゲル形成液塗布層の上をさらにカバーフィルム、シ
ートまたは板などの被覆材料でおおうことができる。こ
の目的に使用されるカバーフィルム、シート、または板
としては前記支持体と同様な素材からなり、更に支持体
と同様に、酸実透過能を低下させているものを用いるこ
とがてきる。被覆材料の厚さは300Bm以下てあり、
実用的に好ましい厚さの範囲は約4〜200延mであり
、特に好ましい範囲は約44m〜100gmである。When the gel-forming liquid is crosslinked and polymerized on the surface of the resin intermediate layer, the gel-forming liquid coating layer can be further covered with a covering material such as a cover film, sheet, or plate. The cover film, sheet, or plate used for this purpose may be made of the same material as the support described above, and may also have a reduced actual acid permeability like the support. The thickness of the coating material is less than 300Bm,
A practically preferred thickness range is about 4 to 200 gm, and a particularly preferred range is about 44 m to 100 gm.
ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて抗酸化剤
などの他の添加剤を含有させることができる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうろことが知られている種々
の化合物を用いることができる。抗酸化剤の具体例とし
てはジチオスレイトール、2−メルカプトエタノールを
挙げることがてきる。The polyacrylamide gel film may contain other additives such as an antioxidant, if necessary. As the antioxidant, various compounds known to be incorporated into the gel film can be used. Specific examples of antioxidants include dithiothreitol and 2-mercaptoethanol.
その他の添加剤としては湿潤剤かあり、ポリアクリルア
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコールTのポ
リオール化合物を含有させることもてきる。ポリオール
化合物の含有量は、ゲル膜の容積に対して約5〜約40
w / v%の範囲から選ばれる。ポリオール化合物
のうちではグリセリンか特に好ましい。湿潤剤を配合す
ることによりゲル膜の保存時の極端な水分の蒸発による
乾燥を防ぐことがllff駈となり、また極端な乾燥に
起因するもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等のゲル膜の物
性か改Rされるとの利点かある。Other additives include wetting agents, and the polyacrylamide gel film may contain polyol compounds such as glycerin and ethylene glycol T. The content of the polyol compound is about 5 to about 40% based on the volume of the gel membrane.
Selected from the range of w/v%. Among the polyol compounds, glycerin is particularly preferred. By incorporating a wetting agent, it is possible to prevent the gel film from drying out due to extreme water evaporation during storage, and it also improves the physical properties of the gel film, such as preventing brittleness caused by extreme dryness and preventing cracking. There is an advantage to being R.
本発明の電気泳動用媒体材料は、前述の諸文献等に記載
の公知の方法に従って、水モ型および垂直型平板電気泳
動法、ディスク電気泳動泳動法等のいずれにも用いるこ
とができる。The electrophoresis medium material of the present invention can be used in any of the water-motor type and vertical plate electrophoresis methods, disk electrophoresis methods, etc. according to the known methods described in the above-mentioned documents.
以ドに本発明の実施例を記載するが、これらは未発11
の範囲を限定するものてはない。Examples of the present invention are described below.
There is no limit to the scope of
[実施例1]
紫外線照射処理により表面を親木性にした厚さ180g
mの無色透明ポリエチレンテレフタレートシート(支持
体)七に、塩化ビニリデン・塩化ビニル(9:l)共重
合体のラテックス(この塩化ビニリデン・塩化ビニル(
9:l)共重合体の層厚20pmに形成したフィルムの
状態における酸素透過量は約5cc/m2・atm ・
day )を塗布して、層厚か約5pmの樹脂層を形成
した。[Example 1] Thickness: 180g with surface made wood-friendly by ultraviolet irradiation treatment
M colorless and transparent polyethylene terephthalate sheet (support)
9:l) The amount of oxygen permeation in a film formed with a copolymer layer thickness of 20 pm is approximately 5 cc/m2・atm.
day) to form a resin layer with a thickness of approximately 5 pm.
L記の樹脂層か付設された支持体の酸素透′jS係数は
4cc/rrf−atm・dayてあった。The oxygen permeability 'jS coefficient of the support provided with the resin layer of letter L was 4 cc/rrf-atm·day.
支持体上に設けられた蒸着層の上に、アクリルアミド9
.5g、BISo、5g、リン酸水素二ナトリウム・十
三水塩3.58g、 リン酸二水素ナトリウム・二水
塩0.33g、および5DSO、logを含有する10
0mJLの溶液に改合開始剤としてベルオクソニ硫酸ア
ンモニウム(5m ji1%)1.3ml、TEMED
33.uを加えたものを0.3mmの厚みに塗布成形し
、窒素雰囲気下にて、100w高圧水銀灯をlocmの
距離から照射し、10分間静置しポリアクリルアミドゲ
ル膜を得た。On the vapor deposition layer provided on the support, acrylamide 9
.. 5g, BISo, 5g, 3.58g disodium hydrogen phosphate decahydrate, 0.33g sodium dihydrogen phosphate dihydrate, and 5DSO, 10 containing log
Add 1.3 ml of ammonium belloxonisulfate (5 m ji 1%) as a polymerization initiator to a solution of 0 mJL, TEMED.
33. The product to which u was added was coated and molded to a thickness of 0.3 mm, irradiated with a 100W high-pressure mercury lamp from a distance of 10 cm in a nitrogen atmosphere, and left to stand for 10 minutes to obtain a polyacrylamide gel film.
[比較例1]
ポリエチレンテレフタレートシート(支持体)Lに、塩
化ビニリデン・塩化ビニル(9:1)共重合体の塗布層
を設けなかったこと以外は実施例1と同様にして支持体
上にポリアクリルアミドゲル1悶を形成した。[Comparative Example 1] Polyethylene terephthalate sheet (support) L was coated with polyvinylidene chloride/vinyl chloride (9:1) copolymer in the same manner as in Example 1, except that a coating layer of vinylidene chloride/vinyl chloride (9:1) copolymer was not provided. An acrylamide gel was formed.
なお、L記の支持体の酸素透過係数は17cc/ゴ・a
te −dayてあった。In addition, the oxygen permeability coefficient of the support described in L is 17cc/go・a
It was te-day.
[参考例1]
支持体としてポリエチレンテレフタレートシートの代り
にガラス板を用い、tij化ビニリデン・塩化ビニル(
9・l)共重合体の塗布層を設けなかったこと以外は実
施例1と同様にして支持体上にポリアクリルアミドゲル
膜を形成した。[Reference Example 1] Using a glass plate instead of a polyethylene terephthalate sheet as a support, vinylidene tijide/vinyl chloride (
9.l) A polyacrylamide gel film was formed on the support in the same manner as in Example 1 except that the copolymer coating layer was not provided.
[電気泳動試験]
実施例1、比較例1および参考例1で11)られたポリ
アクリルアミドゲル膜にサンプル注入口を形成し1次い
でゲル膜に厚さ63牌mのポリエチレンテレフタレート
シート(カバーシート)をかぶせた。[Electrophoresis test] A sample injection port was formed in the polyacrylamide gel film prepared in 11) in Example 1, Comparative Example 1, and Reference Example 1, and then a polyethylene terephthalate sheet (cover sheet) with a thickness of 63 m was placed on the gel film. covered.
このポリアクリルアミドゲル膜を使用して!!準蛋白質
試料を電気泳動にかけ、分離実験を行なった。Use this polyacrylamide gel membrane! ! Separation experiments were performed by subjecting quasi-protein samples to electrophoresis.
電気泳動終了後に、ゲル膜のカバーフィルムを静かには
がして除去し、ゲル膜全体を0.1%コーマシープルー
水溶液に浸漬して、泳動ゾーンを青色に染色した。After the electrophoresis was completed, the cover film of the gel membrane was gently peeled off and removed, and the entire gel membrane was immersed in a 0.1% Coma Sea Blue aqueous solution to stain the migration zone blue.
実施例1および参照例1のゲル膜により得られた泳動パ
ターンは高い解像力を示し、解読か容易であった。一方
、比較例1のゲル膜により得られた泳動パターンの解像
力は、実施例1および参照例1のゲル膜により得られた
泳動パターンの解像力に比較して低かった。The migration patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 showed high resolution and were easy to decipher. On the other hand, the resolution of the migration pattern obtained with the gel film of Comparative Example 1 was lower than that of the migration pattern obtained with the gel films of Example 1 and Reference Example 1.
また、実施例1および参照例1のゲル膜により得られた
泳動パターンのスマイリング効果による中央部泳動列と
両側部泳動列との泳動距離の差はいずれも小さい値てあ
ったが、比較例1のゲル膜により得られた泳動パターン
のスマイリンク効果による中央部泳動列とr+?側部泳
動列との泳動距離の差は大きかった。In addition, the difference in migration distance between the central migration row and both side migration rows due to the smiling effect of the migration patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 was small, but Comparative Example 1 The migration pattern obtained with the gel membrane has a central migration column due to the Smile Link effect and r+? The difference in migration distance with the side migration column was large.
[実施例2]
支持体りに設ける中間樹脂層をポリアクリロニトリル(
このポリアクリロニトリルの層厚20μmに形成したフ
ィルムの状態における酸素透過量は約2cc/lrr’
・atm −day )から、厚さを1101Lの層と
して形成した以外は実施例1と同様にして中間樹脂層を
有する支持体を形成した。[Example 2] The intermediate resin layer provided on the support was made of polyacrylonitrile (
The oxygen permeation rate of this polyacrylonitrile film formed to a layer thickness of 20 μm is approximately 2 cc/lrr'
A support having an intermediate resin layer was formed in the same manner as in Example 1, except that the layer was formed from 1101 L in thickness.
上記の樹脂層か付設された支持体の酸よ透過係数は2
c c /rn’−atm −dayであった。The acid permeability coefficient of the support attached to the above resin layer is 2.
c c /rn'-atm-day.
次いて、]二2支持体七に中間樹脂層の上に実施例1と
同様にしてポリアクリルアミドゲル膜を形成した。Then, a polyacrylamide gel film was formed on the intermediate resin layer of the support 7 in the same manner as in Example 1.
[電気泳動試験]
実施例2、比較例1および参考例1で得られたポリアク
リルアミドゲル膜にサンプル注入口を形成し、次いでゲ
ル膜に厚さ504mのポリエチレンテレフタレートシー
ト(カバーシート)をかぶせた。[Electrophoresis test] A sample injection port was formed in the polyacrylamide gel membrane obtained in Example 2, Comparative Example 1, and Reference Example 1, and then a polyethylene terephthalate sheet (cover sheet) with a thickness of 504 m was covered over the gel membrane. .
このポリアクリルアミドゲル膜な使用して、標準蛋白質
試料を電気泳動にかけ1分離実験を行なった。Using this polyacrylamide gel membrane, a standard protein sample was subjected to electrophoresis and a separation experiment was conducted.
電気泳動路r後に、ゲル膜のカバーフィルムを静かには
かして除去し、ゲル膜全体を0.1%コーマシーブルー
水溶液に浸漬して、泳動ゾーンを青色に染色した。After the electrophoresis run, the cover film of the gel membrane was gently removed, and the entire gel membrane was immersed in a 0.1% Comassie blue aqueous solution to dye the migration zone blue.
実施例1および参照例1のゲル膜により得られた泳動パ
ターンは高い解像力を示し、解読か容易であった。一方
、比較例1のゲル膜により得られた泳動パターンの解像
力は、実施例1および参照例1.のゲル膜により得られ
た泳動パターンの解像力に比較して低かった。The migration patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 showed high resolution and were easy to decipher. On the other hand, the resolution of the migration pattern obtained with the gel membrane of Comparative Example 1 was the same as that of Example 1 and Reference Example 1. The resolution of the electrophoretic pattern obtained with the gel membrane was low compared to that obtained with the gel membrane.
また、実施例1および参照例1のゲル膜により得られた
泳動パターンのスマイリング効果による中央部泳動列と
両測部泳動列との泳動距離の差はいずれも小さい値であ
ったが、比較例1のゲル膜により1りられた泳動パター
ンのスマイリング効果による中央部泳動列と両測部泳動
列との泳動距離の差は大きかった。In addition, the difference in migration distance between the central electrophoresis column and the both measurement sections due to the smiling effect of the electrophoresis patterns obtained with the gel membranes of Example 1 and Reference Example 1 was small, but in the comparative example There was a large difference in the migration distance between the central electrophoresis column and both measurement sections due to the smiling effect of the electrophoresis pattern formed by the gel membrane of No. 1.
Claims (1)
架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルからな
る電気泳動用媒体層およびプラスチック材料製支持体を
含む電気泳動用媒体材料であって、該電気泳動用媒体層
と支持体層との間に、該支持体材料よりも酸素透過係数
が低い樹脂材料からなる樹脂中間層が備えられているこ
とを特徴とする電気泳動用媒体材料。 2、上記樹脂中間層が0.5〜20μmの層厚を有する
ことを特徴とする特許請求の範囲第1項記載の電気泳動
用媒体材料。 3、上記樹脂中間層が、層厚20μmに形成したフィル
ムの状態における酸素透過量が15cc/m^2・at
m・day以下の樹脂材料よりなることを特徴とする特
許請求の範囲第1項記載の電気泳動用媒体材料。 4、上記樹脂中間層が、塩化ビニリデン・塩化ビニル共
重合体、ポリビニルアルコール、ポリアクリロニトリル
、ポリ塩化ビニリデン、ビニルアルコール・エチレン共
重合体、塩化ビニリデン・アクリロニトリル共重合体、
およびアクリロニトリル・メチルアクリレート・ブタジ
エン共重合体からなる酸素低透過性樹脂材料を含むこと
を特徴とする特許請求の範囲第1項記載の電気泳動用媒
体材料。 5、上記樹脂中間層が上記支持体に塗布により形成され
ており、かつ該樹脂中間層と支持体とが形成する積層体
の酸素透過量が、10cc/m^2・atm・day以
下であることを特徴とする特許請求の範囲第1項記載の
電気泳動用媒体材料。 6、プラスチック材料製支持体がポリエチレンテレフタ
レートからなることを特徴とする特許請求の範囲第1項
記載の電気泳動用媒体材料。 7、上記電気泳動用媒体層がさらに水溶性ポリマーおよ
びアガロースを含むことを特徴とする特許請求の範囲第
1項乃至第6項のいずれかの項記載の電気泳動用媒体材
料。 8、上記電気泳動用媒体層がさらに陰イオン界面活性剤
からなる変性剤を含むことを特徴とする特許請求の範囲
第1項乃至第6項のいずれかの項記載の電気泳動用媒体
材料。[Scope of Claims] 1. An electrophoretic medium comprising an electrophoretic medium layer made of an aqueous polyacrylamide gel obtained by crosslinking and polymerizing an acrylamide compound and a crosslinking agent in the presence of water, and a support made of a plastic material. An electrophoresis material, characterized in that a resin intermediate layer made of a resin material having an oxygen permeability coefficient lower than that of the support material is provided between the electrophoresis medium layer and the support layer. medium material. 2. The electrophoretic medium material according to claim 1, wherein the resin intermediate layer has a layer thickness of 0.5 to 20 μm. 3. The resin intermediate layer has an oxygen permeation rate of 15 cc/m^2・at in the state of a film formed to a layer thickness of 20 μm.
2. The electrophoretic medium material according to claim 1, characterized in that it is made of a resin material having a particle diameter of m·day or less. 4. The resin intermediate layer is made of vinylidene chloride/vinyl chloride copolymer, polyvinyl alcohol, polyacrylonitrile, polyvinylidene chloride, vinyl alcohol/ethylene copolymer, vinylidene chloride/acrylonitrile copolymer,
and a low oxygen permeability resin material comprising acrylonitrile/methyl acrylate/butadiene copolymer. 5. The resin intermediate layer is formed by coating on the support, and the oxygen permeation rate of the laminate formed by the resin intermediate layer and the support is 10 cc/m^2・atm・day or less. The electrophoretic medium material according to claim 1, characterized in that: 6. The electrophoretic medium material according to claim 1, wherein the support made of plastic material is made of polyethylene terephthalate. 7. The electrophoresis medium material according to any one of claims 1 to 6, wherein the electrophoresis medium layer further contains a water-soluble polymer and agarose. 8. The electrophoretic medium material according to any one of claims 1 to 6, wherein the electrophoretic medium layer further contains a modifier consisting of an anionic surfactant.
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61090623A JPS62247243A (en) | 1986-04-19 | 1986-04-19 | Medium material for electrophoresis |
US07/040,486 US4897306A (en) | 1986-04-19 | 1987-04-20 | Medium for electrophoresis |
EP19870303480 EP0246751B1 (en) | 1986-04-19 | 1987-04-21 | Medium for electrophoresis |
DE8787303480T DE3771571D1 (en) | 1986-04-19 | 1987-04-21 | ELECTROPHORESE MEDIUM. |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61090623A JPS62247243A (en) | 1986-04-19 | 1986-04-19 | Medium material for electrophoresis |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62247243A true JPS62247243A (en) | 1987-10-28 |
JPH0556821B2 JPH0556821B2 (en) | 1993-08-20 |
Family
ID=14003611
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61090623A Granted JPS62247243A (en) | 1986-04-19 | 1986-04-19 | Medium material for electrophoresis |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS62247243A (en) |
-
1986
- 1986-04-19 JP JP61090623A patent/JPS62247243A/en active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0556821B2 (en) | 1993-08-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0137753B1 (en) | Medium for electrophoresis | |
EP0139471B1 (en) | Medium for electrophoresis | |
JPS59126236A (en) | Medium for electrophoresis | |
US4737259A (en) | Element for electrophoresis | |
US4718998A (en) | Element for electrophoresis | |
US4897306A (en) | Medium for electrophoresis | |
US4722777A (en) | Improvement of electrophoretic element using polyacrylamide gel | |
JPH0457974B2 (en) | ||
EP0115436B1 (en) | Medium for electrophoresis | |
JPS6266153A (en) | Medium for electrophoresis | |
JPS62247243A (en) | Medium material for electrophoresis | |
JPS631964A (en) | Medium material for electrophoresis | |
JPS60243551A (en) | Medium material for electrophoresis and manufacture thereof | |
JPS62247244A (en) | Medium material for electrophoresis | |
JPS59212750A (en) | Medium material for electrophoresis | |
JPS62247242A (en) | Medium material for electrophoresis | |
JPS6120849A (en) | Medium for electrophoresis | |
JPS6291850A (en) | Production of medium for electrophoresis | |
JPS61296258A (en) | Electrophoretic medium material and its preparation | |
JPS63210653A (en) | Medium membrane for electrophoresis | |
JPS63210654A (en) | Medium membrane for electrophoresis | |
JPS612058A (en) | Medium for electrophoresis | |
JPS6114558A (en) | Medium material for electrophoresis | |
JPS6291849A (en) | Production of medium for electrophoresis | |
JPH0471179B2 (en) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |