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JPS62146593A - バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法 - Google Patents

バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法

Info

Publication number
JPS62146593A
JPS62146593A JP61295115A JP29511586A JPS62146593A JP S62146593 A JPS62146593 A JP S62146593A JP 61295115 A JP61295115 A JP 61295115A JP 29511586 A JP29511586 A JP 29511586A JP S62146593 A JPS62146593 A JP S62146593A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
thuringiensis
variety
var
cry
thuringiensis variety
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP61295115A
Other languages
English (en)
Inventor
コリンナ　ハーネシュタット
フランク　エッチ．ガートナー
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mycogen Corp
Original Assignee
Mycogen Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mycogen Corp filed Critical Mycogen Corp
Publication of JPS62146593A publication Critical patent/JPS62146593A/ja
Pending legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A01N63/23—B. thuringiensis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は、ハシラス・スリンギエンシスの安定な５ｐＯ
−（：ｒｙ＋変異株の予測可能で効率的な製法に関する
。更に詳しくは、本発明は胞子を形成し有毒な結晶を生
産するハシラス・スリンギエンシスを臭化エチジウムで
処理し、安定なｓｐｏ−ｃｒ戸Ｂ。
スリンキニンシス変異株を得ることに関する。
［先行技術及び問題？ｉ、］ バシラス種で胞子を形成しない（ｓ　ｐ　Ｏ→変異株の
単離は、５ｐａ−条件に対する選択手法がないため困難
である。また、胞子過小形成と呼ばれろあいまいな変異
型が高率で出現することも、１ｔｔＺｆｉ手順を複雑に
している。胞子過小形成菌株は初め胞子非形成性である
と思われたが、詳しい観察により、これらが低率で胞子
を形成することか見て取４ｔろ。
ロゴルスキーとスレベラキー［Ｒｏｇｏｌｓｋき、′１
．汲び５ｌｅｐｅｃｋｙ、　Ｒ，Ａ、（１９６８年）　
Ｃａｎａｄｉａｎ　ｊ、　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂ。
１４巻６１−６４頁］は、ＤＮＡ割込み染↑゛↓の７ク
リフラしンが、枯草菌（Ｂ、　５ｕｂｔ、Ｍｉｓ）の生
育途上の培滉基中で高率の非胞子形成変異株と彼等か考
えろｉｔたものを誘発したことを認めた＜　、＋　４１
％よて）。このため彼らは、ハシラスの胞子形成に関与
ずろ何かの遺匡的成分がエピゾームに運；よれ、このエ
ピゾームをアクリフラヒンのキュアリンク作用：こよっ
て除去できると提案した。しかし、シエーファ−［５ｃ
ｈａｅｆｆｅｒ、　　Ｐ、　　（１９６９年）　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ　、　　Ｒｅｖ、　３３＠４８−７１頁コ
は、彼らの研究を再現できず、遺法子地図作成によれは
、枯草菌のｓｐｏ−遺伝子の全部がハシラス染色体上に
局在していた。これらの相反する結果のためアクリフラ
ビンの効果に関する研究は続行されなかった。
玉の技術は枯草菌のみに関するものである。このような
研究は、非胞子形成変異株を望んでいる場合には他のバ
シラス種にあてはめろことができるが、Ｂ、スリンギエ
ンシスの菌株において胞子を形成せず結晶を生産するｓ
ｐｏ−ｃｒｙ◆変異株をつくる問題については、何も述
べていない、胞子形成用遣云子を結晶生産に関わる遺伝
子とリンケージさせる上で不確かさがあるため、有毒結
晶の生産導入によって、全状況が複雑化する。Ｂ、スリ
ンキニンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ’変異株をつくる
予測可能で効率的な方法を開示ないし示唆している既知
の先行技術はない。このような変異株の必要は、下記の
ように明らかである。
［問題点を解決する手段］ 本方法で、胞子を形成し有毒な結晶を生産するハシラス
・スリンギエンシスを臭化エナジウムで処理すると、安
定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋８．スリンギエンシス変異株が得
られる。胞子を形成する有毒結晶生産菌のＢ、スリンキ
ニンシスＭ−７（ＮＲＲＬ　Ｂ−１５９３９）を臭化エ
チジウムで処理して、ｓｐｏ−てｃｒｙ”であるような
り、スリンギエンシス阿り変異株を得ることによって例
示されろ。この変異株は、鞘翅目（Ｃｏｌｅ。
ρｔｅｒａ）の甲虫類に活性のある有毒結晶をつくるの
に有用である。
本方法はまた、他のＢ、スリンギエンシス菌株の安定な
ｓｐｏ−ｃｒｙ’変異株をつくるにも使用できる。
これらの８．スリンギエンシス菌株の代表的な一覧表が
下に明らかにされている。
更に、本発明は安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の殺虫剤
としての使用に関する。
Ｂ、スリンギエンシスの安定な非胞子形成性、結晶生産
菌株は幾つかの利点をもっている。
（１）細菌胞子による発酵施設の汚染は、他の発酵を行
なっている施設では重大問題であるが、この問題がなく
なる。
（２）胞子をつくらずに済むので、８．スリンキニンシ
スは殺虫剤結晶タンパクの生産効率を高める。
（３）死菌が殺虫剤としての目標である場合（特に組替
え細菌の場合）の固定化細胞手順においては、固定化に
抵抗する胞子が存在しないため、全細胞が死菌となる。
（４）無傷のＢ、スリンキニンシス細胞を殺虫剤として
望んでいろ場合く固定化細胞手順なとの場合）に、発酵
過程で細胞の溶菌傾向か減る。
胞子形成性の有毒結晶生産性Ｂ、スリンギエンシスの生
きた細胞群を臭化エチジウムで処理すると、安定なｓｐ
ｏ−ｃｒｙ”　Ｂ、スリンギエンシス変異株が得られろ
。例えは、臭化エチジウムの存在下にＢ、スリンギエン
シスＭ−７を培養すると、安定なｓｐｏ−Ｃｒ”７＋変
異株が得られる。
Ｂ、スリンキニンシス細胞を臭化エチジウムの存在下に
生育させるのが有利である。その代わりに、所望の変異
株をつくるのに十分な時間に臭化エチジウムを細胞懸濁
液に添加することによって、Ｂ。
スリンキニンシスの生菌を処理できる。Ｂ、スリンギエ
ンシス細胞を臭化エチジウムの存在下に生育させるとき
は、細胞を一般に約２８°Ｃないし約３２°Ｃて、約３
日ないし約７日間生育させる。
ｓｐｏ−ｃｒｙ’変異株の検出は当業者に周知の手順に
よって行なわれる。例えばＬブロス（ハクトドリブトン
１０　ｇ／ｌ、バクト酵母５ｇ／ｌ、ＮａＣｌ　５　ｚ
／ｌ、アンピシリン５０　ｍｇ／ｌ）及びＳＣＧプレー
ト（０，１％ビタミン無金含有カザミノ酸０．５％グル
コース、０．２％硫酸アンモニウム、１．４％燐故二ナ
トリウム、０．５％燐酸−ナトリウム、０．１％くえん
酸ナトリウム、０．０２％硫酸マグネシウム）で集落を
生育させることができる。培地はハシラスの胞子形成；
こ刺激を与える。
本明細書で明らかにされた手順に従って処理できる他の
Ｂ、スリンギエンシス菌株は以下のとおりである。
ハシラス・スリンギエンシス・バラエティ・力−スタキ
ＨＤ−１、ＮＲＲＬ　Ｂ−３７９２、合衆国特許第４　
、４４８　。
８８５号で開示されたもの。
バシラス・スリンギエンシス・バラエテ、イ・イスラエ
レンシス、＾Ｔ（’Ｃ３５６４６バシラス・スリンギエ
ンシス・バラエティ・テネブリオニス、ＤＳＭ　２８０
３ 次の８．スリンギエンシス培養基が、テキサス州ブラウ
ンスヒルの合衆国農務省から入手できる。
請求は、合衆国７８５２０テキサス州ブラウンスピル、
私Ｗ箱ｌ０３３、合衆国農務省（ＵＳＤＡ）、農業研究
サービス（ＡＲ５）、綿昆虫研究単位、ジョー・ガルシ
ア（Ｊｏｅ　Ｇａｒｃｉａ）宛て。
Ｂ、スリツキ“エンシス−Ｊビラエテイ・１１０２Ｂ、
スリン４−エンシス・ノビラエティ・フ　イ　ニチ　ム
　ス８０３Ｂ、スリシ４−１ンシス・５１”ラエテイ・
ア　し　ス　チ）ｌＤ４Ｂ、スリン４−Ｉンシスｅ１ビ
ラエテイ番カース　タ　キＨＤ７３Ｂ、スリハ゛エンシ
ス・ハーラエティ・ソ　ッ　ト　ウＨＤ７７０Ｂ、スリ
ンキ゛エンソス・ノビラエテイ・デン　ド　ロ　リ　ム
　スＨ〔）７Ｂ、スリツキ−エンシス・Ｊビラエテイφ
ケニャエ）１０５Ｂ、スリツキ−エンシス・１１−ラエ
テイ働ガ　し　リ　アエ）ＩＤ２９８、スリン４”エン
シス・１ビラエテイ・カナデンジ　スＨ［１２２４Ｂ、
スリＪ（“１〕″ノス・ハ゛う■ティ・エ　ン　ト　モ
　シ　ダ　ス１ＩＤ９Ｂ、７リノキ゛Ｉンノ２・ハーラ
エティ・サブ　１・　キ　ン　り　スＩｔ　Ｄ　Ｉ　Ｏ
りＢ、スリン４”Ｉンノス・１ビラＩＦイ・ア　イ　ザ
ヮ　イ　）Ｉ　ＯＩ　＋Ｂ、２すいぐエンシス・Ｊビラ
エティ・モ　リ　ソ　ニ１１０１２８．２リンキーＩノ
ンス・ハーラエティ・オ　ス　ト　リ　ニア　エＩｔ　
Ｄ　５０１Ｂ、スリン４−Ｉンシしハ”う１テイ・ト　
ルワ　−　シ）ｌＤ５３７Ｂ、スリツキ”エンシス・ハ
ーラ■ティ◆ダルムシ　ュ　タ　ジエンシスＨＩ）　＋
　４６ Ｂ、スリンキーエンシス・ハーラＩティ・ツマ　ノ　フ
　ィ　ＨＤ２０１Ｂ、スリツキ−エンシス・ハーラエテ
ィ・キ　ュ　ウ　シ　ュ　エ　ン　シ　ス１ＩＤ５４１
Ｂ、スリン４”エンシス・ハーラエティ・ト　ン　ブソ
　ニ）ｌ［１５４２Ｂ、スリン４”エンシス・Ｊビラ１
ティ・パ　キ　ス　タ　ニｌ＋［＋３９５Ｂ、スリン４
”Ｉンソス匂１”うＩティ・イ　ス　ラエ　し　ンシス
１１０５６７Ｂ、スリンヘー１ンンス・ハーラ１ティ・
イ　ンデ　ィ　アナＨＤ５２１Ｂ、スリンキーエンシス
争１ビラエティφダコ　タＢ、スリンキ゛エンシス・へ
−ラエｉ４拳ト　ウホク　エ　ン　シ　ス＋１　Ｄ　８
６１ｉＢ、スリンキーエンンスリビラエティ・り　マ　
）　ト　エ　ン　シスｌｌ［１８６７Ｂ、スリツキ−エ
ンシス・ｊビラエティ争ト　チギエン　シ　スＨＤ　８
６８Ｂ、スリツキ”エンシス・Ｊビラエティφコ　ルメ
　リ　ＩＤ８４７８、スリン％”Ｉンシス尋１１゛う１
テイ・ウ　ハネ　ン　シ　ス）ＩＤ５２５本明ａｔに例
示されているバシラス・スリンキニンシスＭ−７は驚く
べきことに鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）の甲虫に対
し活性をもつが、トリコブルシア・二（Ｔｒｉｃｈｏｐ
ｌｕｓｉａ　ｎｉ）、スボトブテラ・エクシグア（Ｓｐ
ｏｄｏｐｔｅｒａ　ｅｘｉｇｕａ）、又はアエデス・ア
エギブチ（Ａｅｄｅｓ　ａｅｇｙｐｔｉ　ネツタイシマ
蚊）に対して活性をもたないバシラス・スリンギエンシ
スの分離体である。鞘翅目に含まれるものとしては、ａ
集土の大損害をもたらす種々のジアブロテイ力種（ハム
シ科Ｃｈｒｙｓｏｍｅ　ｌ　ｉ　ｄａｅ）、例えばディ
ー・ウンデシムブンクタータ（Ｄ、　ｕｎ〔Ｊｅｃｉｍ
ｐｕｎｃｔａｔａ西部ＩＪ王点ウリハムシ）、ディー・
ロつキコルニス（Ｄ。
１ｏｎｇｉｃθｒｎｉｓノーザン・コーン・ルートワー
ム）ディー・ビルギテラ（Ｄ、　ｖｉｒｇｉｔｅｒａウ
ェスタン拳コーン・ルートワーム）及びディー・ウンデ
シムブンクタータ番ハワーデイ（１）、　ｕｎｄｅｃｉ
ｍｐｕｎｃｔａｔａｈｏνａｒｄｉ　サザン・コーン・
ルートワーム）がある。
Ｂ、スリンキニンシスＭ−７は、独特のパラ胞子体（結
晶）をもつ点て異例である。これは位相差顕微鏡下に暗
色で、平らな角型の外観を呈する。
この技術の標準的な培地及び発酵手法を使用して、観Ｂ
、スリンキニンシスを培養できる。発酵サイクルが完了
したら、この技術で周知の手段によって細菌を収穫でき
る。
本発明方法でつくられる安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株
は、殺虫剤として有用である。例えば、Ｂ、スリンキニ
ンシス変異株は、目標害虫環境に細胞を施用する時に細
胞中につくられろ毒素の活性を持続するような試薬で処
理できる。生しろ生成物；よ毒素の毒性を保持する。
殺虫剤は、微生物でつくられろ任意の毒素でありうる。
例えばこれは、昆虫類、１クリえは鞘翅目、鱗翅目、双
翅目、半翅目、革翅目、及び直用目：又はクモ形類；腹
足類；又は線虫類とへん形動物のようなぜん虫なと、真
咳多細胞の害虫にズ１して毒性をもつポリペプチドであ
りうる。感受性のある種々の昆虫は、甲虫、力、ハエ、
バッタ、シラミ、及びハサミムシを包含する。
ホスト細胞中でつくられろ殺虫剤は活性型又は、毒素活
性のためここなおも処理を要する前駆型ないしプロ型で
つくられるポリペプチド、例えば害虫による処理を必要
とするＢ、スリンギエンシス・バラエティ・カースタキ
の結晶毒素でありうる。
生物の処理法は幾つかの役割を果たしている。
第一に、処理は構造的一体性を高める。第二に、タンパ
ク分解への毒素の感受性を減少させろように毒素を変更
することにより、また細胞内に天然に存在するプロテア
ーゼのタンパク分解活性を減少させることにより、処理
は毒素の強化されたタンパク分解安定性を提供する。細
胞が無傷の段階にあり、毒素タンパクの実質的蓄積がな
された時に、細胞を変更するのが好ましい。広いスペク
トラムの化学反応性をもつ化学試薬を使用するなど、神
々の方法でこれらの変更を達成できる。約−１゜Ｃない
し６０’Ｃの範囲の温度で、かきまぜを加えて、又は加
えずに、化学試薬を含有する液体試薬培地と無傷の細胞
を一緒にできる。反応時間は経験的：こ決定でき、試薬
と反応条件により大幅に変わる。
■抱１度は、ｍ１当たり＋０２ないし１ｏ１０の範囲に
ある。
化学試薬として特に興味あるものは、ハロゲン化剤、特
に原子番号１７・８０のハロゲンである。もっと特定的
には、ヨウ素を温和な条件下に、所望の結果を達成ずろ
のに十分な時間に使用できる。
池の適当な手法は、ホルムアルデヒドとグルタルアルデ
ヒドのようなアルデヒド類；塩化セフイランと塩化セチ
ルピリジニウムのような抗感染剤；イソプロピルアルコ
ールとエタノールのようなアルコール類；ブアン固定剤
とへり一固定剤［フマソン（Ｈｕｍａｓｏｎ）、グレッ
チェン・エル（Ｇｒｅｔｃｈｅｎ　。
Ｌ、）「動物Ｍｉ織手法」ダブリュー・エッチ・フリー
マン社、１９６７年、を参照コのような種々の組織学的
固定剤等での処理；又は目標害虫環境に細胞を施用する
時に細胞中につくられる毒素の活性を持続するような物
理的処理（加熱）と化学薬剤処理との組合わせを包含す
る。
ヨウ素でのハロゲン化には、温度は概して約０ないし５
０℃の範囲にあるが、反応は室温で都合よく行なわれる
。酸性の水性媒体、特に約０．５−５Ｍの範囲のカルボ
ン酸水溶液中における０、５ないし５％の三ヨウ化物又
はヨウ素を使用して、ヨウ素化を行なうと好都合である
。酢酸を都合よく使用できるが、一般に約１ないし４個
の炭素原子の他のカルボン酸類も使用できる。反応時間
は概して１分未満から約２４時間、通常約１ないし６時
間の範囲にある。任意の残留ヨウ素は、ジチオナイトや
チオ硫酸ナトリウムのような還元剤、又は畑での最終使
用に適合できる池の還元剤との反応によって除去できる
。更に、当業者に周知のように、反応媒体全部を除くた
めの洗浄、乾燥型での単離、及び典型的な粘着剤、展着
剤、及びａ袋用に一般に利用される助剤の処方なと、変
更細胞をなおも処理にかけることができる。
特に興味あるものは、細胞壁を架橋できろ試薬である。
この目的には幾つかの試薬が知られている。処置は殺虫
剤の安定性を強めるへきものである。すなわち、畑条件
下に殺虫剤の強化された持続性又は残留活性がなけれは
ならない。１にって、未処理ｗ抱の殺虫活性が消えるよ
うな条件下に、処理細胞の活性は１倍から３倍の長間間
持続する。
環境中の使用のため細胞を種々の方法で処方できろ。こ
れらを無機鉱物（フィロ珪酸塩、炭酸塩、硫酸塩又は燐
酸塩）や植物材料（粉末のトウモロコシ穂軸、モミ殻又
はクルミ殻）のような種々の不活性を１料と混合するこ
とによって、水和剤、粒剤、粉剤として使用できる。処
方剤は粘着／展着助剤、安定化剤、池の殺虫剤添加剤又
は表面活性剤を包含できる。液体処方剤は水性基盤又は
非水性のもので、フオーム、ゲル、懸濁液、乳剤等とし
て使用される。成分は流動剤、表面活性剤、乳（ヒ剤、
分散剤、重合体類等を包含できる。
殺虫剤濃度は、特定処方剤の性質、例えはそれが１原液
か未希釈で使用されるかによって変わる。
一般に殺虫剤は、少なくとも約１重量％の濃度で存在す
るが、１００重量％まで可能である。乾燥処方剤は、約
１ないし９５重回％の殺虫剤をもつが、液体処方剤は一
般に液相中に固形公約１−６０玉Φ％であろう。処方剤
は一般にｍｇ当たり＋０２ないし１０８（ＩＥ２〜ＩＥ
８）個の細胞数をもつ。
処方剤を害虫環境、例えは植物、土壌又は水；こ、噴霧
、散布、散水等によって施用できる。これらの処方剤は
必要に応し、ヘクタール当たり約２オンス（液体又は乾
燥）ないし２ボンド以上の率で投与できる。
以下の実施例は例示のために提供されろもので限定する
ためのものではない。
実施例１ 臭化エチジウム２−５μ８７ｍ１を含有するしブロス中
のＢ、スリンキニンシスＭ−７細胞の培養基を暗黒中で
３０°Ｃ１４日間生育させた。培養基を希釈し、単一集
落を単離するためにしブロス寒天プレート上に蒔いた。
単一集落を拾い出し、胞子、結晶又は両方の欠失につい
て位相差光学顕微鏡検査によって分析した。全集落をし
ブロスとＳＣＧプレートで検査した。５ｐＯ−Ｃｒｙ舎
変異株は、９−１２％の効率で単離された。
本明細書で明らかにされたとおりにつくられるＢ、スリ
ンキニンシスＭ−７の安定なｓｐｏ−ｃｒｙ’変異株の
二次培養基は、１９８５年１１月１５日、合衆国イリノ
イ州ビオリアの合衆国薦務省、北部研究所の永久保存施
設に寄託された。培養基は受託施設より′−ＲＫＬ　Ｂ
−１８０２９の呼出番号を指定された。この寄託物は、
これを明らかにした特許の授与により一般に人手できる
。寄託物はまた、本出願の対応特許又はその子孫特許が
出願されている諸国において、外国特許法による要求に
応しても人手できる。しかし、寄託物が人手できるか′
らといって、政府措置により授与される特許権を侵害し
てまで本発明の実施権を構成するものではないことを理
解すべきである。
Ｂ、スリンギエンシスドアの安定なｓｐｏ”　ｃｒｙ＋
変異株の処方された製品を、草食性甲虫類の防除のため
、葉の茂みに噴霧又は施用できろ。また、誘引剤とＢ、
スリンギエンシスＭ−７変異株の胞子及び結晶を含有す
る処方された粒状の餌を、土壌に中口、する鞘翅目の防
除のため、土壌に施用できろ。Ｂ。
スリンギエンシスＭ−７の処方された変異株を種子被覆
剤、根処理剤又は植物全体の処理剤として施用できる。
トウモロコシの根を食べるシアプロティ力幼虫：こ対し
ては、クカービタシン（ウリ科植物から誘導されるジア
ブロティ力甲虫用の摂取刺激剤）又：ｉ池の昆虫誘引剤
及びＢ、スリンギエンシスＭ−７変異株の胞子及び結晶
を含有する粒状餌を処方できる。これらの粒剤を、植付
は時に一列にまくこと７′））できる。また、感受性の
ある成熟甲虫類の防除のため、処方された製品（水和剤
等）を茂みに直接噴霧できる。
Ｂ、スリンギエンシスＭ−７ＮＲＲＬ　Ｂ−１５９３９
がキイロコナムシ（ｙｅｌｌｏｗ　ｍｅａｌｗｏｒｍ、
　Ｔｅｎｅｂｒｉｏ　ｍｏｌｉｔｏｒ）に対して活性が
あることも、最近の試験かられかった。この甲虫は鞘翅
目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）のプミムソグマシ科（Ｔｅ
ｎｅｂｒｉｏｎｉｄａｅ）の一種である。従って、゛Ｂ
、スリンギエンシスＭ−７の変異株はこの甲虫の防除に
使用できる。
実施かｊ２ 実施例１のとおりに、ハシラス・スリンキニンシス・バ
ラエティ・アイザワイ［エイ・ダブリュー・ウェスト（
Ａ、Ｗ、　Ｗｅｓｔ）（１９８４年）　５ｏｉｌ　Ｂｉ
ｏｌ。
Ｂ＋ｏｃｌ＋ｅｍ、　１６巻３５７−３６０頁コの菌株
を培養すると、安定なｓｐｏ−ｃｒｙ”変異株が得られ
ろ。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、Ｂ．スリンギエンシスを臭化エチジウムで処理する
    ことを含む、バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐ
    ｏ＾−ｃｒｙ＾＋変異株の製法。 ２、Ｂ．スリンギエンシスが、Ｂ．スリンギエンシス・
    バラエティ・カースタキ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓ
    ｉｓ　ｖａｒ．ｋｕｒｓｔａｋｉ）、Ｂ．スリンギエン
    シス・バラエティ・イスラエレンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉ
    ｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｉｓｒａｅＩｅｎｓｉｓ）
    、バシラス・スリンギエンシスＭ−７（Ｂ．ｔｈｕｒｉ
    ｎｇｉｅｎｓｉｓ　Ｍ−７）、Ｂ．スリンギエンシス・
    バラエティ・フィニチムス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎ
    ｓｉｓ　ｖａｒ．ｆｉｎｉｔｉｍｕｓ）、Ｂ．スリンギ
    エンシス・バラエティ・アレスチ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇ
    ｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ａｌｅｓｔｉ）、Ｂ．スリンギ
    エンシス・バラエティ・ソットウ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇ
    ｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｓｏｔｔｏ）、Ｂ．スリンギエ
    ンシス・バラエティ・デンドロリムス（Ｂ．ｔｈｕｒｉ
    ｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｄｅｎｄｒｏｌｉｍｕｓ）
    、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・ケニアエ（Ｂ．
    ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｋｅｎｙａｅ）
    、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・ガレリアエ（Ｂ
    ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｇａｌｌｅｒ
    ｉａｅ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・カナデ
    ンシス（Ｂ．ｔｈｕｒ−ｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．
    ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラ
    エティ・エントモシダス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎ−
    ｓｉｓ　ｖａｒ．ｅｎｔｏｍｏｃｉｄｕｓ）、Ｂ．スリ
    ンギエンシス・バラエティ・サブトキシクス（Ｂ．ｔｈ
    ｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｓｕｂｔｏｘｉｃｕ
    ｓ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・アイザワイ
    （Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ａｉｚａ
    ｗａｉ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・モリソ
    ニ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｍｏｒ
    ｒｉｓｏｎｉ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・
    オストリニアエ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎ−ｇｉｅｎｓｉｓ　
    ｖａｒ．ｏｓｔｒｉｎｉａｅ）、Ｂ．スリンギエンシス
    ・バラエティ・トルワーシ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎ
    ｓｉｓ　ｖａｒ．ｔｏｌｗｏｒｔｈｉ）、Ｂ．スリンギ
    エンシス・バラエティ・ダルムシュタジエンシス（Ｂ．
    ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｄａｒｍｓｔａ
    ｄｉｅ−ｎｓｉｓ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエテ
    ィ・トウマノフィ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　
    ｖａｒ．ｔｏｕ−ｍａｎｏｆｆｉ）、Ｂ．スリンギエン
    シス・バラエティ・キュウシュエンシス（Ｂ．ｔｈｕｒ
    ｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｋｙｕｓｈｕ−ｅｎｓｉ
    ｓ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・トンプソニ
    （Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｔｈｏｍ
    ｐｓｏｎｉ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・パ
    キスタニ（Ｂ．ｔｈｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｐ
    ａｋｉｓｔａｎｉ）、Ｂ．スリンギエンシス．バラエテ
    ィ・インディアナ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎ−ｓｉｓ
    　ｖａｒ．ｉｎｄｉａｎａ）、Ｂ．スリンギエンシス・
    バラエティ、ダコタ（Ｂ．ｔｈｕ−ｒｉｎｇｉｅｎｓｉ
    ｓ　ｖａｒ．ｄａｋｏｔａ）、Ｂ．スリンギエンシス・
    バラエティ・トウホクエンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉ
    ｅｎ−ｓｉｓ　ｖａｒ．ｔｏｈｏｋｕｅｎｓｉｓ）、Ｂ
    ．スリンギエンシス・バラエティ・クマノトエンシス（
    Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒ．ｋｕｍａｎｏ
    ｔｏｅｎｓｉｓ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ
    ・トチギエンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　
    ｖａｒ．ｔｏｃｈｉｇｉｅｎｓｉｓ）、Ｂ．スリンギエ
    ンシス・バラエティ・コルメリ（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉ
    ｅ−ｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｃｏｌｍｅｒｉ）、Ｂ．スリン
    ギエンシス・バラエティ・ウハネンシス（Ｂ．ｔｈｕｒ
    ｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｗｕｈａｎｅｎｓｉｓ）
    、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・テネブリオニス
    （Ｂ．ｔｈ−ｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．ｔｅｎ
    ｅ−ｂｒｉｏｎｉｓ）、Ｂ．スリンギエンシス・バラエ
    ティ・スリンギエンシス（Ｂ．ｔｈｕ−ｒｉｎｇｉｅｎ
    ｓｉｓ　ｖａｒ．ｔｈｕｒｉ−ｎｇｉｅｎｓｉｓ）から
    なる群から選ばれる、特許請求の範囲第１項による方法
    。 ３、Ｂ．スリンギエンシスの安定なｓｐｏ＾−ｃｒｙ＾
    ＋変異株を含む改良された微生物殺虫剤。 ４、Ｂ．スリンギエンシスの安定なｓｐｏ＾−ｃｒｙ＾
    ＋変異株が、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・カー
    スタキ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・イスラエ
    レンシス、バシラス・スリンギエンシスＭ−７、Ｂ．ス
    リンギエンシス・バラエティ・フィニチムス、Ｂ．スリ
    ンギエンシス・バラエティ・アレスチ、Ｂ．スリンギエ
    ンシス・バラエティ・ソットウ、Ｂ．スリンギエンシス
    ・バラエティ・デンドロリムス、Ｂ．スリンギエンシス
    ・バラエティ・ケニアエ、Ｂ．スリンギエンシス・バラ
    エティ・ガレリアエ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエテ
    ィ・カナデンシス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ
    ・エントモシダス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ
    ・サブトキシクス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ
    ・アイザワイ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・モ
    リソニ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・オストリ
    ニアエ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・トルワー
    シ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・ダルムシュタ
    ジエンシス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・トウ
    マノフィ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・キュウ
    シュエンシス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・ト
    ンプソニ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・パキス
    タニ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・インディア
    ナ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・ダコタ、Ｂ．
    スリンギエンシス・バラエティ・トウホクエンシス、Ｂ
    ．スリンギエンシス・バラエティ・クマノトエンシス、
    Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・トチギエンシス、
    Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・コルメリ、Ｂ．ス
    リンギエンシス・バラエティ・ウハネンシス、Ｂ．スリ
    ンギエンシス・バラエティ・テネブリオニス、Ｂ．スリ
    ンギエンシス・バラエティ・スリンギエンシスからなる
    群から選ばれるＢ．スリンギエンシスからつくられる、
    特許請求の範囲３項による殺虫剤。 ５、有害昆虫を安定なｓｐｏ＾−ｃｒｙ＾＋Ｂ．スリン
    ギエンシスの昆虫防除有効量と接触させることを含む、
    感受性のある有害昆虫の防除法。 ６、安定なｓｐｏ＾−ｃｒｙ＾＋Ｂ．スリンギエンシス
    が、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・カースタキ、
    Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・イスラエレンシス
    、バシラス・スリンギエンシスＭ−７、Ｂ．スリンギエ
    ンシス・バラエティ・フィニチムス、Ｂ．スリンギエン
    シス・バラエティ・アレスチ、Ｂ．スリンギエンシス・
    バラエティ・ソットウ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエ
    ティ・デンドロリムス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエ
    ティ・ケニアエ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・
    ガレリアエ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・カナ
    デンシス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・エント
    モシダス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・サブト
    キシクス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・アイザ
    ワイ、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・モリソニ、
    Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・オストリニアエ、
    Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・トルワーシ、Ｂ．
    スリンギエンシス・バラエティ・ダルムシュタジエンシ
    ス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・トウマノフィ
    、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・キュウシュエン
    シス、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・トンプソニ
    、Ｂ．スリンギエンシス・バラエティ・パキスタニ、Ｂ
    ．スリンギエンシス・バラエティ・インディアナ、Ｂ．
    スリンギエンシス・バラエティ・ダコタ、Ｂ．スリンギ
    エンシス・バラエティ・トウホクエンシス、Ｂ．スリン
    ギエンシス・バラエティ・クマノトエンシス、Ｂ．スリ
    ンギエンシス・バラエティ・トチギエンシス、Ｂ．スリ
    ンギエンシス・バラエティ・コルメリ、Ｂ．スリンギエ
    ンシス・バラエティ・ウハネンシス、Ｂ．スリンギエン
    シス・バラエティ・テネブリオニス、Ｂ．スリンギエン
    シス・バラエティ・スリンギエンシスからなる群から選
    ばれるＢ．スリンギエンシスの安定なｓｐｏ＾−ｃｒｙ
    ＾＋変異株である、特許請求の範囲第５項による方法。 ７、有害昆虫が鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）に属し
    ている、特許請求の範囲第５項による方法。 ８、鞘翅目に属する有害昆虫がハムシ科（Ｃｈｒｙ−ｓ
    ｏｍｅｌｉｄａｅ）又はゴミムシダマシ科（Ｔｅｎｅｂ
    ｒｉｏｎｉｄａｅ）に属している、特許請求の範囲第７
    項による方法。 ９、ハムシ科又はゴミムシダマシ科に属する有害昆虫が
    、ジアブロティカ・ウンデシムプンクタータ（Ｄｉａｂ
    ｒｏｔｉｃａ　ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ西部班
    点ウリハムシ）又はテネブリオ・モリトル（Ｔｅｎｅｂ
    ｒｉｏｍｏｌｉｔｏｒキイロコナムシ）である、特許請
    求の範囲第８項による方法。 １０、Ｂ．スリンギエンシスＭ−７の安定なｓｐｏ−ｃ
    ｒｙ＾＋変異株を粒状の餌に混入し、有害昆虫に食され
    ることが知られている植物の種子を蒔く時に、この粒剤
    を土上又は土中に置くことによって、この変異株の昆虫
    防除有効量に有害昆虫を接触させる、特許請求の範囲第
    ５項による方法。 １１、次の段階を含む、土壌に生息する鞘翅目有害昆虫
    の防除法。 （１）Ｂ．スリンギエンシスＭ−７の安定なｓｐｏ−ｃ
    ｒｙ＾＋変異株結晶を含む粒状の餌をつくる。 （２）粒状の餌を土上又は土中に置く。 １２、トウモロコシ種子を土中に蒔くと同時に粒状餌を
    施用する、特許請求の範囲第１１項による方法。 １３、殺虫剤担体と組合わせたＢ．スリンギエンシスＭ
    −７の安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＾＋変異株結晶を含む物質
    の組成物。 １４、担体が甲虫刺激剤クカービタシン又は他の誘引剤
    を含んでいる、特許請求の範囲第１３項による物質の組
    成物。 １５、種子被覆剤として施用される処方剤成分と組合わ
    せたＢ．スリンギエンシスＭ−７の安定なｓｐｏ−ｃｒ
    ｙ＾＋変異株を含んでいる、物質の組成物。 １６、鞘翅目の有害昆虫に活性をもつＢ．スリンギエン
    シスＭ−７の安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＾＋変異株。
JP61295115A 1985-12-16 1986-12-12 バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法 Pending JPS62146593A (ja)

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EP0228228A3 (en) 1988-05-04

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