JPS6187697A - Ａｔｌｖ抗原活性を有する蛋白及びその製造法 - Google Patents
Ａｔｌｖ抗原活性を有する蛋白及びその製造法Info
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- JPS6187697A JPS6187697A JP20951284A JP20951284A JPS6187697A JP S6187697 A JPS6187697 A JP S6187697A JP 20951284 A JP20951284 A JP 20951284A JP 20951284 A JP20951284 A JP 20951284A JP S6187697 A JPS6187697 A JP S6187697A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
ヒ）Ｔ細胞白血病ウィルス（ＨＴ ＬＶ ）と成人Ｔ細
胞白血病ウィルス（ＡＴＬＶ）は最近ヒトレトロウィル
スの同種のものであることが報告されている。
胞白血病ウィルス（ＡＴＬＶ）は最近ヒトレトロウィル
スの同種のものであることが報告されている。
このＨＴＬＶ又はＡＴＬＶと呼ばれるウィルスに感染し
ている患者の血清中にはこのウィルスに対する抗体が存
在するところから、血清中のこの抗体を検査するととに
よって感染の有無を知ることができる。
ている患者の血清中にはこのウィルスに対する抗体が存
在するところから、血清中のこの抗体を検査するととに
よって感染の有無を知ることができる。
本発明は、この抗体と反応する新規な抗原蛋白及び新規
なプラスミド°を利用したこの抗原蛋白の製造方法に関
するものである＠ （従来の技術） 成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）関連の細胞株にはｐ７０、
ｇｐ６８、ｐ５０−６０．ｇｐ４６、ｐ３６、ｐ２８、
ｐ２４、ｐ２１．ｐ１９、ｐ１５及びｐ１４よりなるＡ
ＴＬ関連の抗原群（ＡＴＬＡ）が存在する仁とが知られ
ている（ＹａｍａｍｏＬｏ、 Ｎ ａｎｄ Ｈｉｎｕｍ
ａ、 Ｙ、、 Ｉｎｔ＠Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ１３０．２
８９−２９３（１９８２））。
なプラスミド°を利用したこの抗原蛋白の製造方法に関
するものである＠ （従来の技術） 成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）関連の細胞株にはｐ７０、
ｇｐ６８、ｐ５０−６０．ｇｐ４６、ｐ３６、ｐ２８、
ｐ２４、ｐ２１．ｐ１９、ｐ１５及びｐ１４よりなるＡ
ＴＬ関連の抗原群（ＡＴＬＡ）が存在する仁とが知られ
ている（ＹａｍａｍｏＬｏ、 Ｎ ａｎｄ Ｈｉｎｕｍ
ａ、 Ｙ、、 Ｉｎｔ＠Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ１３０．２
８９−２９３（１９８２））。
また、ＡＴＬ患者及びＨＴＬＶ保有者のいずれもがこの
ＡＴＬＡに対する特異抗体を保有していることも知られ
ている（ Ｈｉｎｕｍａ、 Ｙ、 ａｔ ａｌ、、 Ｐ
ｒｏｃ。
ＡＴＬＡに対する特異抗体を保有していることも知られ
ている（ Ｈｉｎｕｍａ、 Ｙ、 ａｔ ａｌ、、 Ｐ
ｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 Ｕ、Ｓ、Ａ、、
７８ 、６４７６−６４８０（１９８１））。
７８ 、６４７６−６４８０（１９８１））。
一方、最近このＩ（ＴＬＶあるいはＡＴＬＶに対する抗
体の検出方法の開発が進められているが、それに利用さ
れる抗原は通常ＨＴＬＶあるいはＡＴＬＶの産生細胞で
あった。この細胞の培養上清から当該ウィルス抗原を取
得する方法（特開昭５８−１８７８６１号公報）も開発
されている。
体の検出方法の開発が進められているが、それに利用さ
れる抗原は通常ＨＴＬＶあるいはＡＴＬＶの産生細胞で
あった。この細胞の培養上清から当該ウィルス抗原を取
得する方法（特開昭５８−１８７８６１号公報）も開発
されている。
（発明が解決しようとする問題点）
細胞を抗原に用いた場合には非特異反応が多いところか
ら検査精度に問題があった。培養上清から抗原を取得す
る方法は細胞培養とそれに続く分離精製が必要であり、
生産量が少ないという問題があった。そこで、より直接
な方法でＡＴ ＬＶ抗原を生産できれば、簡便な手段で
高純度の抗原を大量生産できるようになる可能性がある
。
ら検査精度に問題があった。培養上清から抗原を取得す
る方法は細胞培養とそれに続く分離精製が必要であり、
生産量が少ないという問題があった。そこで、より直接
な方法でＡＴ ＬＶ抗原を生産できれば、簡便な手段で
高純度の抗原を大量生産できるようになる可能性がある
。
（問題点を解決するための手段）
本発明はこのような観点のもとになされたものであり、
ＨＴＬＶのｇａｇ遺伝子産物の表現プラスミドの構築に
成功し、これを大腸菌にもたせることによってＡＴＬＶ
抗原群のうちｐ２４とｐ１９に対する抗体と反応する蛋
白を大腸菌が産生することを見出してなされたものであ
る。
ＨＴＬＶのｇａｇ遺伝子産物の表現プラスミドの構築に
成功し、これを大腸菌にもたせることによってＡＴＬＶ
抗原群のうちｐ２４とｐ１９に対する抗体と反応する蛋
白を大腸菌が産生することを見出してなされたものであ
る。
すなわち、本発明は、（１）分子量が４３，０００ダル
トンであって、成人Ｔ細胞白血病に関連するｐ２４に対
する抗体及びｐ１９に対する抗体と反応する抗原蛋白と
、（２）ｔａｃプロモーター部分、合成コドン、ＨＴ
ＬＶのｇａｇ遺伝子部分及びｒｈｏ遺伝子部分を有する
シラスミドｐＨＹ ２０２を保有する大腸菌を培養し、
培養物から成人ＴＭ胞白血病に関連するｐ ２４に対す
る抗体及びｐ１９に対する抗体と反応する抗原蛋白を分
離することを特徴とする抗原蛋白の分離方法に関するも
のである。
トンであって、成人Ｔ細胞白血病に関連するｐ２４に対
する抗体及びｐ１９に対する抗体と反応する抗原蛋白と
、（２）ｔａｃプロモーター部分、合成コドン、ＨＴ
ＬＶのｇａｇ遺伝子部分及びｒｈｏ遺伝子部分を有する
シラスミドｐＨＹ ２０２を保有する大腸菌を培養し、
培養物から成人ＴＭ胞白血病に関連するｐ ２４に対す
る抗体及びｐ１９に対する抗体と反応する抗原蛋白を分
離することを特徴とする抗原蛋白の分離方法に関するも
のである。
シラスミドｐＨＹ ２０２を合成する手段は問うところ
ではないが、例えばまずｌａｃプロモーター部分と翻訳
に必要なＳＤ配列及び開始コドンな有している発現ベク
ターｐｓｉ １０１を構築する。さらに、ＨＴＬＶ ｇ
ａｇ遺伝子を接続するために、ｐｓｒ １０１の開始コ
ドンより下流に存在するＥｃｏＲＩ部位にＳｍａ Ｉ部
位をもつ合成リンカ−を挿入してｐｓＩ２０１を構築す
る。一方、ＨＴＬＶゾロウィルスからｇａｇ遺伝子を５
ｐｚａ Ｉで切断し、これをｐｓＩ２０１のＳｍａＩ部
位に接続することによって構築することができる。
ではないが、例えばまずｌａｃプロモーター部分と翻訳
に必要なＳＤ配列及び開始コドンな有している発現ベク
ターｐｓｉ １０１を構築する。さらに、ＨＴＬＶ ｇ
ａｇ遺伝子を接続するために、ｐｓｒ １０１の開始コ
ドンより下流に存在するＥｃｏＲＩ部位にＳｍａ Ｉ部
位をもつ合成リンカ−を挿入してｐｓＩ２０１を構築す
る。一方、ＨＴＬＶゾロウィルスからｇａｇ遺伝子を５
ｐｚａ Ｉで切断し、これをｐｓＩ２０１のＳｍａＩ部
位に接続することによって構築することができる。
この合成ルートを第１図に示す。
プラスミドｐＨＹ ２０２は、同図に示すよう、に、図
面左方からｔａｃｆロモータ一部分、ＨＴＬＶ （７）
ｇａｇ遺伝子部分、Ｌａｃプロモーター部分及び大腸
菌のｒｈｏ遺伝子部分からなりたっている。
面左方からｔａｃｆロモータ一部分、ＨＴＬＶ （７）
ｇａｇ遺伝子部分、Ｌａｃプロモーター部分及び大腸
菌のｒｈｏ遺伝子部分からなりたっている。
グラスミド、ｐＨＹ２Ｏ２を大腸菌に保有させる方法は
一般のシラスミドあるいはベクターを大腸菌にもたせる
方法と同様でよい。
一般のシラスミドあるいはベクターを大腸菌にもたせる
方法と同様でよい。
ｐＨＹ２Ｏ２を保有する大腸菌を培養する方法も一般の
大腸菌の培養方法と同様でよい。培地にはアンビシ、リ
ン等を加えることによってプラスミドの入った菌を選択
的に増殖させることができる。培養中にイソプロピル−
β−Ｄ−チオガラクトピラノシド、アデノシン−３７，
Ｓ／−サイクリックモノホスフェートなどを加えて転写
誘導を行なってｇａｇ遺伝子産物を誘発させさらに培養
を続け、本発明の抗原蛋白の蓄積量が最大になったとこ
ろで培養を打切る。この蛋白は菌体内に蓄積されるので
菌体を破壊して取り出す。破壊方法は公知の方法によれ
ばよく、リゾチーム等の細胞膜を破壊する酵素処理、凍
結融解、超音波処理などを利用できる。菌体破壊後は遠
心して上清を集め、抗ＡＴＬＡ抗体ヲ用いたアフィテテ
ィークロマトクラフィーで精製することによって容易に
高純度品を得ることができる。
大腸菌の培養方法と同様でよい。培地にはアンビシ、リ
ン等を加えることによってプラスミドの入った菌を選択
的に増殖させることができる。培養中にイソプロピル−
β−Ｄ−チオガラクトピラノシド、アデノシン−３７，
Ｓ／−サイクリックモノホスフェートなどを加えて転写
誘導を行なってｇａｇ遺伝子産物を誘発させさらに培養
を続け、本発明の抗原蛋白の蓄積量が最大になったとこ
ろで培養を打切る。この蛋白は菌体内に蓄積されるので
菌体を破壊して取り出す。破壊方法は公知の方法によれ
ばよく、リゾチーム等の細胞膜を破壊する酵素処理、凍
結融解、超音波処理などを利用できる。菌体破壊後は遠
心して上清を集め、抗ＡＴＬＡ抗体ヲ用いたアフィテテ
ィークロマトクラフィーで精製することによって容易に
高純度品を得ることができる。
本発明の抗原蛋白は実施例（６）で示すようにＡＴＬ患
者血清と強く抗原抗体反応し、健常人血清及びミエロー
マ細胞培養液とは反応しない。一方、ｐ１９及びｐ２８
のＡＴ ＬＡと反応するモノクローナル抗体及びｐ２４
のＡＴＬＡと反応するモノクローナル抗体とは反応を示
す。白血病由来の株化細胞であるＭＴ−２の細胞抽出物
にはこの４．３にの抗原蛋白は存在しないところからこ
の抗原蛋白は明らかに新規である。
者血清と強く抗原抗体反応し、健常人血清及びミエロー
マ細胞培養液とは反応しない。一方、ｐ１９及びｐ２８
のＡＴ ＬＡと反応するモノクローナル抗体及びｐ２４
のＡＴＬＡと反応するモノクローナル抗体とは反応を示
す。白血病由来の株化細胞であるＭＴ−２の細胞抽出物
にはこの４．３にの抗原蛋白は存在しないところからこ
の抗原蛋白は明らかに新規である。
この抗原蛋白の分子量は実施例（６）の電気泳動の結果
から４３にダルトンであり、これは第１図のＤＮＡ配列
から算出される蛋白の分子量が約４４にダルトンになる
ことからも支持される。
から４３にダルトンであり、これは第１図のＤＮＡ配列
から算出される蛋白の分子量が約４４にダルトンになる
ことからも支持される。
そのアミノ酸配列はｐＨＹ ２０２のＤＮＡ配列から、
第１図に示すようになっている。
第１図に示すようになっている。
ｐＨＹ ２０２の由来、分子量、及びｐ１９ 及びｐ２
４のモノクローナル抗体に反応するところから、この抗
原蛋白はｐ１９と９２４の融合蛋白質であると考えられ
る。
４のモノクローナル抗体に反応するところから、この抗
原蛋白はｐ１９と９２４の融合蛋白質であると考えられ
る。
（作 用）
本発明の抗原蛋白はＡＴＬＡ群のｐ１９及びｐ２４に対
する抗体ならびにＡＴＬ患者血清と反応する。
する抗体ならびにＡＴＬ患者血清と反応する。
この抗原蛋白はｐＨＹ２Ｏ２を用いることによって蛋白
合成に必要な付属的部分を付加し、ＨＴＬＶのｇａｇ遺
伝子部分を含む蛋白を大腸菌に生産させている。
合成に必要な付属的部分を付加し、ＨＴＬＶのｇａｇ遺
伝子部分を含む蛋白を大腸菌に生産させている。
実施例
（１）プラスミドｐｓ１１０１の構築
まず、Ｌａｃゾロモーターの部分を有するｐＭＯＢ４１
３ （ＢｉＬｔｎｅｒ、 Ｍ＊ ａｎｄ Ｖａｐｎｅｋ
、 Ｄ、、 Ｇｅｎｅ、 １５ 。
３ （ＢｉＬｔｎｅｒ、 Ｍ＊ ａｎｄ Ｖａｐｎｅｋ
、 Ｄ、、 Ｇｅｎｅ、 １５ 。
３１９−３２９（１９８１））の０．３ ｋｂ Ｈｉｎ
ｄ ＩＩＩ−Ｐｓｔｌフラグメント、大腸菌（Ｅ、 ｃ
ｏｔｉ ）のｒｈｏ遺伝子部分（Ｐｉｎｋｈａｍ 、
Ｊ、Ｌ、及びＰｔａｔｔ、 Ｔ （Ｎｕｃ、Ａｃ１ｄｓ
Ｒｅｓ、、 １１ （１１）、 ３５３１−３５４５（
１９８３））によって９５５の位置に対応するとされた
Ｐｓｔｌの部位）を有するｐＲＨ２０の１．７ ｋｂ
Ｐｖｕｌｌ−Ｐｓｔｌ ７ラグメント、及びｐＢＲ３２
２の２．３ ｋｂ Ｈｉｎｄ Ｉｎ−Ｐｖｕｌｌフラグ
メント（このフラグメントのなかのＥｃｏＲＩ及びＣｔ
ａ１部位は除去した。）からシラスミドｐｓ１１０１を
構築した。
ｄ ＩＩＩ−Ｐｓｔｌフラグメント、大腸菌（Ｅ、 ｃ
ｏｔｉ ）のｒｈｏ遺伝子部分（Ｐｉｎｋｈａｍ 、
Ｊ、Ｌ、及びＰｔａｔｔ、 Ｔ （Ｎｕｃ、Ａｃ１ｄｓ
Ｒｅｓ、、 １１ （１１）、 ３５３１−３５４５（
１９８３））によって９５５の位置に対応するとされた
Ｐｓｔｌの部位）を有するｐＲＨ２０の１．７ ｋｂ
Ｐｖｕｌｌ−Ｐｓｔｌ ７ラグメント、及びｐＢＲ３２
２の２．３ ｋｂ Ｈｉｎｄ Ｉｎ−Ｐｖｕｌｌフラグ
メント（このフラグメントのなかのＥｃｏＲＩ及びＣｔ
ａ１部位は除去した。）からシラスミドｐｓ１１０１を
構築した。
（２）プラスミドｐｓＩ ２０１の構築ｐＳＩ １０１
のＥｃｏＲＩ部位にｄＡＡＴＴＣＣＣＧＧＧよりなる合
成オリゴヌクレオチドを挿入してシラスミドｐｓＩ２０
１を構築した。
のＥｃｏＲＩ部位にｄＡＡＴＴＣＣＣＧＧＧよりなる合
成オリゴヌクレオチドを挿入してシラスミドｐｓＩ２０
１を構築した。
（３） シラスミドｐＨＹ２Ｏ２の構築８５２から１
９３１の位置に対応するＨＴＬＶのｇａｇ遺伝子の１．
１ ｋｂ ＳｍａＩフラグメントをｐｓｉ ２０１のＳ
ｍａＩ部位に接続してプラスミドｐＨＹ２Ｏ２を構築し
た。
９３１の位置に対応するＨＴＬＶのｇａｇ遺伝子の１．
１ ｋｂ ＳｍａＩフラグメントをｐｓｉ ２０１のＳ
ｍａＩ部位に接続してプラスミドｐＨＹ２Ｏ２を構築し
た。
以上のプラスミドｐＨＹ２Ｏ２を構築するに至る流れを
第１図に示す。
第１図に示す。
（、ｓ） ｐＨＹ２Ｏ２の大腸菌への導入ｐＨＹ２Ｏ
２をエシェリヒア・コリに１２株５４５π（Ｂａｋｋａ
ｒｉ、 Ａ、１． ａｎｄ Ｚｉｐｓｅｒ、 Ｄａ、
Ｎａｔｕｒｅ ＮｅｗＢｉｏｔ、、２４３．２３Ｌ−２
４１（１９７３））に導入した。
２をエシェリヒア・コリに１２株５４５π（Ｂａｋｋａ
ｒｉ、 Ａ、１． ａｎｄ Ｚｉｐｓｅｒ、 Ｄａ、
Ｎａｔｕｒｅ ＮｅｗＢｉｏｔ、、２４３．２３Ｌ−２
４１（１９７３））に導入した。
（５）抗原蛋白の生成
ｐＨＹ２Ｏ２をもつ大腸菌を１００ ｔｉ９７Ｍのアス
ピシリンを含むし一ブロス中で３２℃で８０ ｋＡｅｔ
ｔ単位まで生育させた。これにイソプロピル−β−Ｄ−
チオガラクトピラノシド及びアデノシン−３′。
ピシリンを含むし一ブロス中で３２℃で８０ ｋＡｅｔ
ｔ単位まで生育させた。これにイソプロピル−β−Ｄ−
チオガラクトピラノシド及びアデノシン−３′。
５′−サイクリックモノホスフェートを各々最終濃度が
１ ｍＭ Ｋなるように加えてｇａｇ遺伝子産物を誘発
させ、そして、３２℃でさらに１００ ｋｔｅｔｔ単位
まで生育させた。菌体を遠′心して集め、１０ｍＭト
リ ス −ＨＣｔ （ｐＨ８，０） 、 １ ｍ
ＭＥＤＴＡ、 ０．０ ２ ％ＮａＮ３及ヒ１０
μｊｉ／ｍｅ フェニルメチルスルホニルフルオライド
（ＰＭＳ Ｆ ）を含む溶液で洗浄後、１０ｍＭト リ
ス − ＨＣｔ （ｐＨ８，０） 、 １ ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ 、 １００ｍＭＮａ Ｃ１、及び
１０ ｔＪ／ｍｌ ＰＭＳＦを含む溶液に１×１０１０
個／ ｒａｉｌの濃度に懸濁させた。
１ ｍＭ Ｋなるように加えてｇａｇ遺伝子産物を誘発
させ、そして、３２℃でさらに１００ ｋｔｅｔｔ単位
まで生育させた。菌体を遠′心して集め、１０ｍＭト
リ ス −ＨＣｔ （ｐＨ８，０） 、 １ ｍ
ＭＥＤＴＡ、 ０．０ ２ ％ＮａＮ３及ヒ１０
μｊｉ／ｍｅ フェニルメチルスルホニルフルオライド
（ＰＭＳ Ｆ ）を含む溶液で洗浄後、１０ｍＭト リ
ス − ＨＣｔ （ｐＨ８，０） 、 １ ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ 、 １００ｍＭＮａ Ｃ１、及び
１０ ｔＪ／ｍｌ ＰＭＳＦを含む溶液に１×１０１０
個／ ｒａｉｌの濃度に懸濁させた。
この菌体懸濁液を１ｍり／ ｍｌのリノチームで０℃で
１０分間処理し、凍結と解凍を３回繰返した。
１０分間処理し、凍結と解凍を３回繰返した。
これに２０ μｊｌ ／ｍｌ：のＤＮアーゼｌを０℃で
１０分間作用させて反応後遠心して上清を回収した〇一
方、比較のためにｐｓＩ２０１をやはりエシェリヒア・
コリに１２株５４５πに導入し、同様に処理して菌体抽
出物である上清を回収した。
１０分間作用させて反応後遠心して上清を回収した〇一
方、比較のためにｐｓＩ２０１をやはりエシェリヒア・
コリに１２株５４５πに導入し、同様に処理して菌体抽
出物である上清を回収した。
（６）抗原蛋白の分離、検出
こうして得られたｌ×１０ 個に相当する菌体抽出物と
、別途調製した２×ｌＯ個に相当するＭＴ−２細胞の抽
出物を１２係ドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルア
ミドケ°ルで電気泳動させた・泳動後、グルのなかの蛋
白質を電気泳動させてニトロセルロースフィルターに移
し、このフィルターをＡＴＬ患者血清（抗体価Ｘ６４０
）（ト）、健常な成人の血清（Ｂ）、モノクローナル抗
体Ｈ１５（Ｃ）、モノク・−す・・抗体ＧＩＮ ７■）
及びミー・Ｓｉ胞培養液（６）と反応させた。
、別途調製した２×ｌＯ個に相当するＭＴ−２細胞の抽
出物を１２係ドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルア
ミドケ°ルで電気泳動させた・泳動後、グルのなかの蛋
白質を電気泳動させてニトロセルロースフィルターに移
し、このフィルターをＡＴＬ患者血清（抗体価Ｘ６４０
）（ト）、健常な成人の血清（Ｂ）、モノクローナル抗
体Ｈ１５（Ｃ）、モノク・−す・・抗体ＧＩＮ ７■）
及びミー・Ｓｉ胞培養液（６）と反応させた。
免疫複合体はパーオキシダーゼを結合させたプロティン
Ａ （Ｅ、Ｙ、 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｉｎｃ
、 ） （Ａ、Ｂ ）又はツク−オキシダーゼを結合さ
せた抗１ウスＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ、 Ｉｎｃ、）（Ｃ、Ｄ 、 Ｅ ）を用い酵
素免疫測定法で検出した。
Ａ （Ｅ、Ｙ、 Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｉｎｃ
、 ） （Ａ、Ｂ ）又はツク−オキシダーゼを結合さ
せた抗１ウスＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ、 Ｉｎｃ、）（Ｃ、Ｄ 、 Ｅ ）を用い酵
素免疫測定法で検出した。
各ノソネルの第１列はＭＴ−２ｉ胞抽出物を、第２列は
ｐＨＹ２Ｏ２を有するＥ、ｃｏｔｉ ５４５πの菌体抽
出物を、そして第３列はｐＳＩ ２０１を有するＥ、
ｃｏｔｉ５４５πの菌体抽出物をそれぞれ用いて得られ
たものである。分子量の基準には、ミオシン（２００，
０００）、ホスホリラーゼＢ （９２，５００） 、牛
血清アルブミン（６８，０００） 、卵白アルブミン（
４３，０００）、α−キモトリプシノゲン（２５，７０
０）、β−ラクトグロブリン（１８，４００）及びチト
クロームＣ（１２，３００）を含む標準液（Ｂｅｔｈｅ
ｓｄａ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
。
ｐＨＹ２Ｏ２を有するＥ、ｃｏｔｉ ５４５πの菌体抽
出物を、そして第３列はｐＳＩ ２０１を有するＥ、
ｃｏｔｉ５４５πの菌体抽出物をそれぞれ用いて得られ
たものである。分子量の基準には、ミオシン（２００，
０００）、ホスホリラーゼＢ （９２，５００） 、牛
血清アルブミン（６８，０００） 、卵白アルブミン（
４３，０００）、α−キモトリプシノゲン（２５，７０
０）、β−ラクトグロブリン（１８，４００）及びチト
クロームＣ（１２，３００）を含む標準液（Ｂｅｔｈｅ
ｓｄａ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
。
Ｉｎｃ、）を用いた。
（発明の効果）
ＡＴ ＬＶ抗原活性を有する蛋白を大腸菌の培養によっ
て大量生産する途をひらき、かつこの蛋白を容易に高純
度で取得しうる手段を提供するものである。それによっ
て、ＡＴＬの臨床検査を普及させることも可能である。
て大量生産する途をひらき、かつこの蛋白を容易に高純
度で取得しうる手段を提供するものである。それによっ
て、ＡＴＬの臨床検査を普及させることも可能である。
第１図は本発明の抗原蛋白の合成に利用されるプラスミ
ドｐＨＹ２Ｏ２を構築するルートの一例を示すものであ
る。第２図は、白血病株化細胞抽出物、本発明の抗原蛋
白を生成させた菌体細胞の抽出物及びｐＨＹ２Ｏ２を構
築する前段階のシラスミドを保有させて培養した菌体細
胞の抽出物を電気泳動させて、各ｆｉｎ抗体に対する反
応性を測定した結果を示すものである。 特許出願人 富士レビオ、株式会社 代理人 弁理士 １） 中 政 浩第２図 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ
ドｐＨＹ２Ｏ２を構築するルートの一例を示すものであ
る。第２図は、白血病株化細胞抽出物、本発明の抗原蛋
白を生成させた菌体細胞の抽出物及びｐＨＹ２Ｏ２を構
築する前段階のシラスミドを保有させて培養した菌体細
胞の抽出物を電気泳動させて、各ｆｉｎ抗体に対する反
応性を測定した結果を示すものである。 特許出願人 富士レビオ、株式会社 代理人 弁理士 １） 中 政 浩第２図 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ
Claims (2)
- （１）分子量が４３，０００ダルトンであって、成人Ｔ
細胞白血病に関連するｐ２４に対する抗体及びｐ１９に
対する抗体と反応する抗原蛋白 - （２）ｌａｃプロモーター部分、合成コドン、ＨＴＬＶ
のｇａｇ遺伝子部分及びｒｈｏ遺伝子部分を有するプラ
スミドｐＨＹ２０２を保有する大腸菌を培養し、培養物
から成人Ｔ細胞白血病に関連するｐ２４に対する抗体及
びｐ１９に対する抗体と反応する抗原蛋白を分離するこ
とを特徴とする抗原蛋白の取得方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20951284A JPH0762034B2 (ja) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | Ａｔｌｖ抗原活性を有する蛋白及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20951284A JPH0762034B2 (ja) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | Ａｔｌｖ抗原活性を有する蛋白及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6187697A true JPS6187697A (ja) | 1986-05-06 |
| JPH0762034B2 JPH0762034B2 (ja) | 1995-07-05 |
Family
ID=16574020
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20951284A Expired - Lifetime JPH0762034B2 (ja) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | Ａｔｌｖ抗原活性を有する蛋白及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0762034B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6248699A (ja) * | 1985-08-28 | 1987-03-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 融合抗原ポリペプチド |
| JPS62296889A (ja) * | 1986-05-14 | 1987-12-24 | Fujirebio Inc | Ｈｔｌｖ−ｉ抗原活性を有する蛋白及びその製造法 |
| JPS63124963A (ja) * | 1986-11-14 | 1988-05-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗成人ｔ細胞白血病ウイルス抗体の検出法 |
| JPH01113663A (ja) * | 1987-10-28 | 1989-05-02 | Eisai Co Ltd | Ａｔｌｖ抗体の測定試薬および測定方法 |
-
1984
- 1984-10-05 JP JP20951284A patent/JPH0762034B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6248699A (ja) * | 1985-08-28 | 1987-03-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 融合抗原ポリペプチド |
| JPS62296889A (ja) * | 1986-05-14 | 1987-12-24 | Fujirebio Inc | Ｈｔｌｖ−ｉ抗原活性を有する蛋白及びその製造法 |
| JPS63124963A (ja) * | 1986-11-14 | 1988-05-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗成人ｔ細胞白血病ウイルス抗体の検出法 |
| JP2501569B2 (ja) * | 1986-11-14 | 1996-05-29 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗成人ｔ細胞白血病ウイルス抗体の検出法 |
| JPH01113663A (ja) * | 1987-10-28 | 1989-05-02 | Eisai Co Ltd | Ａｔｌｖ抗体の測定試薬および測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0762034B2 (ja) | 1995-07-05 |
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