JPS61502819A - 腎臓障害の阻止治療薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 肝臓、膵臓及び腎臓の細胞保護作用を有するプロスタサイクリン誘導体 本発明は作用物質としてプロスタサイクリン誘導体を含有する肝臓、膵臓及び腎 臓の細胞保護作用を有する薬品並びに該薬品の製法に関する。

欧州特許第１１５９１号明細書から、既にカルバサイクリン誘導体の彎−及び腸 粘膜忙対する細胞保護作用並びにカルバサイクリン誘導体を用いる心筋の細胞保 護作用は公知である。

ところで、一般式■： 〔式中、Ｒｏは水素又は炭素原子１〜１０個を有するアルキル基を表わし、Ａは 一０Ｈ２−ＣＨ２−、トランス−０Ｈ−ＯＨ−又は−（！！！Ｏ−基を表わし、 ＷはＯＨ−基がα位又はβ位である、遊離又はヒドロキシ基で官能性に変換した ヒドロキシメチル基を表わし、又はＣｌ３２−基又は酸素原子を表わし、２は水 素又はシアノ基を表わし、Ｄは炭素原子１〜５個を有する直鎖又は分枝鎖の飽和 アルキレン基を表わし、Ｅは−Ｃ！ａ（！−結合又は直接結合を表わし、Ｒ２は 炭素原子１〜７個を有する直鎖又は分枝鎖の飽和アルキル基を表わし、Ｒ３は遊 離又は官能性に変換したヒドロキシ基を表わし、かつＲ１が水素原子を表わす場 合には、生理的に認容性の塩基との該塩を表わす〕のプロスタサイクリン誘導体 も肝臓、膵臓及び腎臓で保護作用的に作用することが判明した。

ル、プロピル、ブチル、インブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘ プチル、ヘキシル、デシルが挙げられる。アルキル基Ｒ１は場合によってはノ・ ロデンＩＫ子、（！１　（Ｒ２−アルコキシ基、フェニル又ハ（０１−Ｃ！２　 ）−ジアルキルアミンにより置換されていて良い。

置換分としては例えば前記弗素−１塩素−又は臭素原子、フェニル、ジメチルア ミン、ジエチルアミン、メトキシ、エトキシが挙げられる。有利なアルキル基Ｒ １は炭素原子１〜４個を有する様なもの、例えばメチル、エチル、プロピル、ジ メチルアミノプロピル、イソブチル、ブチルが挙げられる。

Ｒ５及びＷ中のヒドロキシ基は、例えばエーテル化又はエステル化によって官能 性に変換されていても良く、その際Ｗ中の遊離又は変換されたヒドロキシ基はα 位であり、遊離ヒドロキシ基が有利である。エーテル−及びアシル残基としては 当業者に公知の残基が挙げられる。有利には容易に脱離可能なエーテル残基、例 えばテトラヒドロフラニルー、テトラヒドロフラニル−１α−エトキシエチル− 、トリメチルシリル−、ジメチル−ｔ−ブチルシリル−及びトリベンジル−シリ ル基である。アシル基としては例えばアセチル、プロピオニル、ブチリル、ベン ゾイルが挙げられる。

アルキル基Ｒ２としては炭素原子１〜７個を有する直鎖及び分枝鎖の飽和アルキ ル基が挙げられる。例えばメチル−、エチル−、プロピル−、ブチル−及びイン ブチル、ｔ−ブチル−、ペンチル−、ヘキシル−、ヘプチルが挙げられる。

アルキレン基りとしては炭素原子５個までを有する直鎖又は分枝鎖の飽和アルキ レン基が挙げられる。例エバ、メチレン、エチレン、１．２−プロピレン、エチ ルエチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、１−メチル−テ トラメチレン、１−メチ性の塩を生成するために当業者に公知の、無機及び有機 塩基が挙げられる。例えば、水酸化アルカリ、例えば水酸化ナトリウム及び水酸 化カリウム、アルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化カルシウム、アンモニア 、アミン、例えばエタノールアミン、ジエタ、ノールアミン、トリエタノールア ミン、Ｎ−メチルグルカミン、モルフォリン、トリス−（ヒｒロキシメチル）− メチルアミン等が挙げられる。

式Ｉの化合物の製造は、欧州特許第２２６４号及び第１１５９１号明細書に記載 されている。

欧州特許第１１５９号明細書には式Ｉのカルバサイクリン誘導体に関して次の薬 理学的特性が記載されている：末梢動脈及び冠状血管の抵抗の低下、血小板凝集 の抑制及び血小板血栓の溶解、心筋細胞保護；拍出Ｉ及び冠状血液潅流を同時に 低下させることなしに全身系血圧の低下：卒中発作の治療、冠状心臓病、冠状血 栓、心筋梗塞、末梢動脈疾病、動脈硬化症及び血栓の予防と治療、ショックの治 療、気管支収縮の抑制、胃酸分泌の抑制及び胃−及び腸粘膜の細胞保護；抗アレ ルギー特性、肺血管抵抗及び肺血圧の低下、腎臓血Ｑ４流の促進、透析又は血液 瀘Ｊ　（Ｈ’ａ’１ｏｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）におけるヘパリンの代り又は補薬 としての使用、血漿貯蔵品、特に血小板貯蔵品の保存、分娩陣痛の抑制、妊娠中 毒症の治療、小脳の血液ｄＡ流及び抗増殖の増強。

肝臓、膵臓及び腎臓の保護作用は記載されておらず、欧州特許第１１５９１号明 細書に記載の細胞保護作用と直接関係ない。更に弐Ｉの化合物は移植すべき器官 の処理に適当である。

急性膵臓炎の従来常用の薬物治療は、破壊された膵臓組織から遊離したカリクレ インの不活性化によってキニンの生成を阻止し、７：ｌ・つそれによって重いシ ョック症状を阻止する酵素抑制剤例えばアプロチニンの使用を基礎とする。更に アプロチニンは逆流したトリプシンによる自己消化に対して膵臓を保護する。最 近は、肺臓炎で分泌性工程の閉止下に稽々のホルモン例えばンマトスタチン、グ ルカゴン又はカルシトニンを治療で使用する。

両方の治療法で確かに立証可能な作用−例えば血中のアミラーゼの病理学的移行 を阻止する−を有するが、結局重い病気経過の死亡率を減少させることはできな かった。

さて極めて意外かつ従来公知の作用プロフィールにより予期されなかったことに は、ヒトの肺臓炎にとって重要とみなされる動物モデルに対する研究で、式Ｉの プロスタサイクリン誘導体が保護作用を有することが判明した。血清中のアミラ ーゼ濃度の減少、障害のある膵臓の形態学的像の正常化、肺臓炎の結果としての 腹腔への液体蓄積（腹水）の著しい解消、及び完治を一般に早めることが判明し た。

肝臓及び腎臓でも一般式■のプロスタサイクリン誘導体は意想外にも細胞保護作 用を有する。肝臓に関しては、肝臓細胞の細胞培養で四塩化炭素による障害に対 し、て意想外の低い用量の式Ｉのプロスタサイクリン誘導体音用いるこの種の作 用が判明した。腎臓に関しては、非ステロイド系炎症抑制物質による乳頭壊死誘 発に対する保護作用としての細胞保護作用が立証された。

ヒトの患者に投与する際の化合物の用量は１〜１５００μＭ１ｋｇ　／日である 。製薬的に認容性の賦形剤の単位用量は０．０１〜１００＃＋９である。

常用の水性溶剤、例えば０．９　％　ＮａＣ１溶液中の持続注入としての経静脈 適用の配量添加は、有利には０．１　ｎｇ／ｋｇ／分と０．１　μｌｌ／ｋｇ／ 分の間の配量添加を行なう。

従って本発明は一般式Ｉの化合物及び常用の助剤及び賦形剤を基礎とする医薬に も関する。

本発明による作用物質は、例えば細胞保護剤（Ｚｙｔｏｐｒｏｔｅｋｔｉｖａ　 ）の製造でガｖ　ヌスｇ剤で公知かつ常用の助剤と組合せて使用すべきである。

法は、自体公知の方法で式■の細胞保護作用を有する化合物を自体公知の助剤及 び賦形剤と共にガレヌス処方物にすることを特徴とする。

例　１ 実験的膵臓炎を、外分泌の膵臓分泌の増加を左右するホルモンコレシストキニン の作用と等しいペプチド、セルレイン（Ｃｉａθｒｕ、１ｅｉｎ　）　′Ｉｉ− 用いて膵臓を過剰に刺激することによって惹起させた［ヴイルショウス・アルキ ７．　Ａ　（Ｖｉｒｃｈｏｗｓ　Ａｒｃｈ、　Ａ）　３８２巻第６１〜４７頁（ １９７９年）及び（Ｃθ１１Ｔ１θ、Ｒθ８．）第１９４巻：第４４７〜４６２ 頁（１９７８年）〕。

セルレインの低い用量（例えば０．５μｇ１ｋｇ／分）の経静脈供給によって、 例えば食物摂取後の膵液の分泌が刺激されるが、その際、膵臓細胞における蛋白 質合成の全工程の活性が生じた酵素の細胞内輸送を経て膵臓小葉（細葉）の膵臓 管系と接続した腔中へ先端分泌するまで増大するが、高い用量（５μＭ／ｋＦｌ ／分）の投与に際しては、病理学的変化を生じる。膵臓分泌は劇的に減少し、器 官は細胞間の水貯蔵によって腫張しく間質浮腫）、生じた酵素はもはや管系内に ではなく、そこから間質間隙に供給されるか、又は細胞の大きな空洞（空胞）に それ自体集まる（ジグ、ジス、サイ。

（Ｄｉｇ、　Ｄｉｓ、　Ｅｌｃｉ、　）第２７巻、第９９３〜１００２頁（１９ ８２年）〕。同時に組織中の細胞溶解（／リゾンーム）酵素の活性は増大し〔ジ グ、シス、サイ。

（ＤＩ＋Ｅ、　Ｄｉｓ、　ｓｃｘ、　）第２８巻、９２３頁（１９８５年）〕、 腹水が生じかつ血液中のアミラーゼ活性が上昇する。

肺臓炎の銹発後に膵臓の脂肪壊死及び著しい細胞炎症反応が存在する。該徴候は 完全に細部までヒトの急性膵炎像に一致する。

式Ｉのプロスタサイクリンの保護作用は２種類の選択した化合物、イロプロスト 及びニレプロストイロプロスト　ニレゾロスト により良く説明されるが、その際該化合物を一定時間ラツテに０．１又は０．５ μＩ／に９　／分の用量で経静脈注入しかつ強力な膵臓炎銹発用量（５μＮ／に ９ｌ時）のセルレインの経静脈持続注入を引続き行なう。第１表から該実験の結 果が明白であるが、該実験で、血清中の７ミラーゼ活性を測定しかつ１１当りの 容積単位（Ｕ／／）で記載し、並びに外分泌膵臓の細胞の空胞化、腹水の発生及 び間質性水腫による膵臓の増大をスコア（５ｃｏｒθ）により評価した。

経静脈注入によってイロプロスト及びニレプロストの場合に血清アミラーゼがセ ルレインにより高められた水率の半分に降下しかつ腹水の発生は完全に阻止され た。イロプロストは空胞化及び水腫形成の著し−・低下も惹起した。ニレプロス トも該作用を示したが、勿論部分的に非常に著しいものではなかった。

弐■のプロスタサイクリン誘導体によるセルレイン誘発空腔化の軽減は、セルレ イン（５μｙ／に９ｌ時）だけか又は先ずイロプロスト（０，１μＩ／ｋｇ１分 ）を用いて、かつ引続きセルレイン（５μｌ／に９　／時）を用いて処理したラ ッテの各膵臓の組織学的切片を示す下記図面により明白である。

第１図はセルレイン５μＥ１ｋｇ／時を用いて３時間処理したラッテの膵臓の組 織学的切片を示す写真である。

第２図は先ずセルレイン０．１μ９／に９ｌ分を用いて６時間処理しかつ次いで イロプロスト５１／に９ｌ時を用いて３時間処理したラッテの膵臓の組織学的切 片を示す写真である。

例　２ 肝細胞における新規プロスタサイクリン誘導体の細胞保護作用を検・査するため に、限局性細胞障害を惹起するため忙四塩化炭素（ａＣｌ、　）で毒化したラッ テの培養肝細胞を単離した。細胞障害を確認するために３極類の異なるパラメー ターを用いた： １、　光学顕微鏡での細胞形態学判定ニブル−（Ｔｒ７ｐａｎｂｌａｕ　）色素 の吸収；３、細胞膜の破壊に依る周囲の培養基への細胞形質酵素の遊離；乳酸− 脱水素酵素（ＬＤＨ）の活性を測定（ラッテ♀、１４０〜１６０Ｆ）をフエノバ ルビタール（５０７１１＆／ｋｇ／日）で処理した。肝細胞〔ヘパトサイテｙ　 （Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｎ　）　］をセグレン（Ｓｅｇｌｅｎ　）の方法〔メソ ツズ・イン省セルｅバイオロジー（Ｍθｔｈｏｄｓｉｎ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌｏ ｇｙ　）第１３巻、２９頁（１９７６年）〕を手本にしてコラゲナーゼの潅注に よって単離しかつコラーケ９ン被覆したプラスチック血中でウィリアムス（Ｗｉ ｌｌｉａｍｅ　）培地Ｅで密度５ＸＩＱ’細胞／α２で接種るために培地を洗浄 した。Ｃ（！ｌ、　（０，１２もしくは０．３５μＩＩ／Ｔｌｄｌ　）をアルコ ール性溶液で培地に添加した。

試験すべき式■の化合物を下記第３〜５図の説明に記載の濃度で添加した。

トリバンプルー吸収を測定するためＫ、トリバンプルー（最終濃度０．０２％） を培地に添加した。青色に着色した細胞を培地当りのへ／トサイテン１２００〜 １５００ｔカウントすることによって測定しかつ数えた総細胞の６分率で表わし た（１トリパンゾル−指数Ｎ）。

乳酸−脱水素酵素（ＬＤＨ）遊離を測定するために、実験終了時に培地から部分 標本（Ａ１１ｑｕｏｔ　）を取った。

引続き、培養で存在する総ＬＤＨ活性を測定するために、まだ完全な細胞の膜を トリトン添加（最終濃度１％）によって破壊した。トリトン添加の前に測定した ＬＤＨ性の測定はベルクメイヤー（Ｂｅｒｇｍθｙθｒ）（ヴアイン／％イＡ（ Ｗθｉｎｈｅｉｍ　）在フエアシーク・ヒエミー（Ｖｅｒｌａｇ　Ｃｈｅｍｉｅ 　）出版１メトーデン・デルーエンツイマテツシエ拳アナリーゼ’　（Ｍｅｔｈ ｏｄｅｎ　ｄｅｒｅｎｚｙｍａｔｉｓｃｈｅｎ　Ａｎａｌｙｓｅ　）　（１９７ ０年）〕により行なった。

肝臓における式■の化合物の細胞保護作用はイロプロストの例で立証された。

２ａ）細胞の形態学 光学顕微鏡による観察で培養した細胞はへパトサイテン（Ｈθｐａｔｏｃｙｔθ ｎ）に典型的なぺんち体状（ｂａｌｋｅｎｆ６ｒｍｉｇ）配置、比較的均一な細 胞形質及びｃｃｌ、毒化後に多数のへパトサイテンが顕粒状で見られ；細胞の膜 は多数の不定形の突起を有していた（第メｂ　、　ｃ　ｆａｉｌ　）。若干の細 胞で膜はもはや判明できず、その他の細胞は種々の部分で崩解していた（第６［ Ｆ］ ！図、矢印）。培地にＣＣ！１．と−緒忙イロゾロストを養の細胞と殆んど変化 がなかった。

２ｂ）トリパンブルー吸収 ００１、作用後に死滅した細胞数を測定するために、トリパンブルーを吸収した 細胞膜を検査した。第４図は代表的実験結果を表わす。００１．の添加はトリパ ンブルー指数の約８倍上昇を生じるが、該上昇はイロプロストの添加によって十 分に阻止される。

ＣＣ１，’ｉ用いる培養の処理は培地においてほぼ２倍のＬＤＨ活性を生じるが （第５図ａ）、これは細胞膜の破壊を推定させる。該上昇は０．００５〜０．０ ２　ｎｇ／Ｍのイロプロスト濃度によりほぼ完全に抑制され、０．０５及びＱ、 １　ｎｊ／／ｍｌでは上昇は部分的に阻止された。

００１、を用いて毒化してない細胞培養にイロプロストを添加する場合にも培地 に遊離したＬＭ活性の著しい低下が判明した（第５ｂ図）。明らかに００１４添 加なしでも培養した細胞で膜損傷が生じるが、これもイロプロス）Ｋよって減少 することができる。従ってイロプロストの保護作用はＯＯＩ、毒化の結果にのみ 限定されるものでない。

２ｄ）該観察から、イロプロストが肝細胞に対して細胞保護作用を有することが 明らかである。該結論は３種類の異なるパラメーターを根拠とする：細胞形態学 のの不在、トリパンブルー指数を用いて測定した細胞死の阻止及び乳酸脱水素酵 素の遊離で測定した周囲の培地への細胞形質成分の遊離の阻止。

細胞保護作用を有する用量は０．００５〜０．２　ｎｇ／ｍｌの範囲である。

第３図は培養したへ、パトサイテンの形態を示す写真である。（ａ）：対照培地 ；（ｂ、Ｃ）：ＣＣ１４（０，１２μｌ／ｍｌ）添加してから１．５時間後；（ ｄ、θ）　：　００１４（０，１２μｌ／ｍｌ　）添加してから１．５時間後で あるが、ＣＣＶ、と同時に水溶液中のイロデロス）　（０，２Ｊ７４Ａ’）′ｆ ｃ添加した。位相差撮影６６Ｘ。

第４図はトリパンブルー指数を表わす。トリパンブルー指数は０ＣＩ４又は００ １．とイロプロストを添加してから１．５時間後に１１１１１足した。実験条件 は第３図と同じである。

第５図は培地中の乳酸−脱水素酵素（ＬＤＨ）活性を表わす。：ｔｊＪ、（ａ　 ）　：　ＣＣ：Ｌｔ添加（０，３５μｌ／ｍｌ　）のＬＤＩ（遊Ｉｔに対するイ ロプロストの作用。イロプロストはＣＯ’ｌ、毒化の２０分前に水溶液で添加し た。統計的比較：イログロスト処理培地ｔ−ＣＣｌ４毒化培地と比較した。〜、 （ｂ　）　：比較培地のＬＤＨ遊朧に対するイロプロストの作用。統計的比較： イロプロスト処理した培地を未処理培地と比較した。培地各々２〜６個の平均値 及び標準偏差を記載し、有意の差をスチューデンツ（５ｔｕｄθｎｔ　）　ｔ− 試験により分析した。

、×× ※ｐ＜０．５．　ｐ＜０．１゜−００１，無し、＋　ＣＣＩ。

（０，３５μｌ／ｍｌ　）。

例　６ ガレヌス処方物 ５−（（］Ｉｃ）　−（１８，５８，６Ｒ，７Ｒ）−７−ヒトロキシー６−ｒ　 （Ｅ）−（４Ｒ８）−６α−ヒドロキシ−４−メチル−オクト−１−エン−６− イニル〕−ビシクロ（３，３゜０〕オクタン−６−イリデン）−ペンタン酸　０ ．５■トロメタノール緩衝剤　１．２１２ｍ９０．１Ｎ塩酸で−８，３にする 注射目的に　１．０ｄにする。

キ　３　図 トリパップルーお１ケ（ 灯　り弱、ｃｃｔ４　ＣＣｔ４ 第４図 国際調査報告

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）肝臓、膵臓及び腎臓の障害を阻止又は治療するための薬品において、一般 式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中Ｒ１は水素又は炭素原子１〜１ ０個を有するアルキルを表わし、Ａは−ＣＨ２−ＣＨ２−、トランスＣ−Ｈ＝Ｃ Ｈ−又は−Ｃ≡Ｃ−基を表わし、ＷはＯＨ基がα−又はβ位である、遊離又はヒ ドロキシ基で官能性に変換したヒドロキシメチル基を表わし、ＸはＣＨ２−基又 は酸素原子を表わし、Ｚは水素又はシアノ基を表わし、Ｄは炭素原子１〜５個を 有する直鎖又は分枝鎖の飽和アルキレン基を表わし、Ｅは−Ｃ≡Ｃ−結合又は直 接結合を表わし、Ｒ２は炭素原子１〜７個を有する直鎖又は分枝鎖の飽和アルキ ル基を表わし、Ｒ３は遊離又は官能性に変換したヒドロキシ基を表わしかつＲ１ が水素原子で表わす場合には生理的に認容性の塩基との該塩を表わす〕の１種又 は多極のプロスタサイクリン誘導体を含有することを特徴とする、肝臓、膵臓及 び腎臓の障害を阻止又は治療するための薬品。
2. （２）一段式Ｉのプロスタサイクリン誘導体を、肝臓、膵臓及び腎臓の障害を阻 止又は治療するために使用すること。
3. （３）肝臓、膵臓及び腎臓の障害を阻止又は治療するための薬品を製造するため に、一段式Ｉ：▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中、Ｒ１は水素又 は炭素原子１〜１０個を有するアルキル基を表わし、Ａは−ＣＨ２−ＣＨ２−、 トランス−ＣＨ＝ＣＨ−又は−Ｃ≡Ｃ−基を表わし、ＷはＯＨ基がα位又はβ位 である、遊離又はヒドロキシ基で官能性に変換したヒドロキシメチル基を表わし 、ＸはＣＨ２−基又は酸素原子を表わし、Ｚは水素又はシアノ基を表わし、Ｄは 炭素原子１〜５個を有する直鎖又は分枝鎖の飽和アルキレン基を表わし、Ｅは− Ｃ≡Ｃ−結合又は直接結合を表わし、Ｒ２は炭素原子１〜７個を有する直鎖又は 分枝鎖の飽和アルキル基を表わし、Ｒ３は遊離又は官能柱に変換したヒドロキシ 基を表わしかつＲ１が水素原子を表わす場合には生理的に認容性の塩基との該塩 を表わす〕の１種又土多毛種のプロスタサイクリン誘導体を含有することを特徴 とする、肝臓、膵臓及び腎臓の傷害を阻止又は治療するための薬品の製法。
4. （４）イロプロストを含有することを特徴とする肝臓、膵臓及び腎臓の細胞保護 するための薬品。
5. （５）イロプロストを含有することを特徴とする、細胞保護剤の製法。
6. （６）ニレプロストを含有することを特徴とする、肝臓、膵臓及び腎臓で保護作 用をするための薬品。
7. （７）ニレプロストを含有することを特徴とする、細胞保護剤の製法。
8. （８）ニレプロストを肝臓、膵臓及び腎臓の障害の阻止又は治療に使用すること 。
9. （９）イロプロストを肝臓、膵臓及び腎臓の障害の阻止又は治療に使用すること 。