【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は一般式（）：
（式中、Mepは２−メルカプトプロピオニル残基
（−Ｓ−CH2CH2CO−）を示し、Ｄ−アルギニン
は８位に存在する）で表わされる副作用のなくか
つ持続作用を有する抗利尿活性デスアミノ−アス
パラギン４−Ｄ−アルギニン８−バゾプレツシン
の製造方法に関する。
バゾプレツシンの抗利尿活性の持続性は無傷ペ
プチド（intact peptide）の酵素崩壊の速度に影
響される。生物学的活性を保持しながら酵素崩壊
速度を減少するペプチドの構造変化は、特に得ら
れる治療作用を向上させかつ延長させる場合に極
めて望ましい。アルギニン−バゾプレツシンにお
けるMepによる位置１においてのシステイン部分
の置換およびＤ−argによる位置８においてのＬ
−argの置換はバゾプレツシンに類似する
DDAVPとして知られているデスアミノ−Ｄ−ア
ルギニン８−バゾプレツシンを減少し、かつ持続
抗利尿作用を有し、更に脈管系における非−横紋
筋（non−striated muscles）に対する著しい軽
減作用を有し、バゾプレツシンに比較して優れて
いる。これらの両作用は尿崩症の治療に効果的で
ある。上述する効果以外に、妊娠している婦人が
尿崩症をわずらう場合には子宮緊縮作用を考慮す
る必要がある。治療使用におけるオールダーバゾ
プレツシン（older vasopressin）誘導体は妊婦
に流産を生ずる危険なく与えるのには、あまりに
高い子宮緊縮作用を有している。このために、尿
崩症をわずらつている妊娠に治療投与するのに十
分に低い子宮緊縮作用を有する医薬を得ることが
非常に要望されている。
尿崩症を一定にする、すなわち、長期間治療の
観点において、治療期間後に患者は薬剤に対して
免疫になるかまたは感覚過敏になる危険を生ず
る。病気の連続治療を可能にするために、この場
合には、患者に上述する免疫性またはアレルギー
性を生じさせないある種の他の相当する薬剤を用
いる必要がある。しかしながら、従来、バゾプレ
ツシンおよびDDAVPに対するかかる他の種類の
薬剤は使用されていない。このために、本発明の
目的はかかる欠点を除去することにある。本発明
は従来の調剤と同程度の抗利尿作用を有し、かつ
著しく低い子宮緊縮作用を有していて抗利尿／子
宮緊縮作用の著しく向上された新規バゾプレツシ
ン誘導体を提供することにある。特に、本発明に
おける調剤の子宮緊縮作用は従来の調剤より10効
力（tenth potency）低く、10効力高い抗利尿／
子宮緊縮作用比を生ずる特有な特性を有する。こ
のために、本発明における化合物は尿崩症をわず
らつている妊娠しようとする婦人の治療に用いる
ことができ、しかもかかる婦人に対して妊娠の期
間中にわたり治療することができ、この事はこの
婦人に対する治療に全く新しい分野である。
本発明は、次の一般式：
（式中、Mepは２−メルカプトプロピオニルを示
す）で表わされるアミノ酸セキユエンス（amino
acid sequence）をそれ自体既知のようにして
徐々に生成させ、しかる後にこのアミノ酸セキユ
エンスを酸化して一般式：
で表わされるデスアミノ−アスパラギン４−Ｄ−
アルギニン８−バゾプレツシンを生成することを
特徴とする。
本発明の他の観点によれば、酸化を水溶液中に
おいてPH6.5〜7.0でフエリシアン化カリウムによ
り行なう。
本発明によるポリペプチドは無機または有機酸
の塩としての遊離塩基の形で用いることができ、
助剤、安定剤および防腐添加剤（preservative
additives）、甘味料、芳香族物質、湿潤剤等を添
加することができ、かつ非経口、経口、鼻孔内、
皮下、筋肉内および静脈内投与の形に形成するこ
とができる。無機酸としては、例えば塩化水素
酸、燐酸を用いることができ、また有機酸として
は、例えば酢酸、くえん酸および酒石酸を用いる
ことができる。
また、タンニンの如き酸作用を有する化合物を
用いることができる。適当な添加剤としては澱
粉、ラクトース、天然油またはキユアド油
（cured oil）、タルク、グリセリン等である。新
規化合物の利点は良好な鼻孔内投与性
（intranasal resorbability）であることである。
この事は患者に対して投与が簡単で、鼻孔内的に
調剤を投与できる。このために状況により複雑で
ある静脈内投与により注射する必要がない。
本発明におけるペプチドは次式：
Ｘ−Asn−Cys（Bzl）−Pro−Ｄ
−Arg（Ｙ）−Gly−NH2 （）
（式中、Ｘはアミノ基の保護基（ベンジルオキシ
カルボニル）、Bzlはシステインのメルカプト基
（ベンジル）に対する保護基およびＹはグアニジ
ン窒素に対する保護基（ｐ−トルエンスルホニ
ル）を示す）で表わされる保護ペンタペプチドア
ミドをジヤンピング−オフポイント（jumping−
off point）として用いて作る。保護基Ｘは除去
し、ペンタペプチドを次式（）：
Ｘ−Asn−ONp （）
〔式中、ONpは保護ヘキサペプチド（）：
Ｘ−Asn−Asn−Cys（Bzl）−Pro
−Ｄ−Arg（Ｙ）−Gly−NH2
に対するｐ−ニトロフエニルエステル基を示す）
で表わされるペプチドに結合する。
ペプチド（）の保護基Ｘを除去し、ヘキサペ
プチドをトリペプチドヒドラジン（）：
Mep（Bzl）−Tyr−Phe−NHNH2
に保護ノナペプチドアミド（）：
Mep（Bzl）−Tyr−Phe−Asn−Asn
−Cys（Bzl）−Pro−Ｄ−Arg（Ｙ）
−Gly−NH2
を得るアジドカツプリング法により結合する。
液体アンモニア中アルカリ金属により保護ノナ
ペプチドアミドを処理することは保護基を分裂さ
せて還元ノナペプチドアミド（）：
Mep（SH）−Tyr−Phe−Asn−Asn
−Cys（SH）−Pro−Ｄ−Arg−Gly
−NH2
を生成させ、この生成物をフエリシアン化カリウ
ム水溶液中6.5〜7.0のPHで酸化して一般式（）
の環状生物学的活性ペプチドを得る。
Mepにより位置１におけるシステイン部分およ
びＤ−アルギニンにより位置８におけるＬ−アル
ギニンの置換と協同したアスパラギンによる位置
４におけるバゾプレツシンのアミノ酸の置換は、
バゾプレツシンに比較して良好な鼻孔内リゾルバ
ビリテイの外に高い抗利尿作用、血圧の上昇を低
下する作用および著しく低下した子宮緊縮作用を
有するペプチド（）を生ずる（第表参照）。
標準物質としてのアルギニン−バゾプレツシンと
は別にDDAVPを第１表に記載すると共に、文献
（ケミカルアプストラクト：80、347V（1974））
に記載されている類似４−Val−DDAVPも第
表に記載する。一般式（）を有する抗利尿ペプ
チドの応答に対する理論投薬量（loy dose）の曲
線は線状でないから、バゾプレツシンと比較して
Ｄ−アルギニン８−類似物に対するユニツト／mg
により普通活性を表わすことは困難である。この
ために、表における強さは比較化合物を1.00に
任意にセツトした場合におけるDDAVPの相対活
性値、データとして表わした。
The present invention is based on the general formula (): (In the formula, Mep represents a 2-mercaptopropionyl residue (-S-CH 2 CH 2 CO-), and D-arginine is present at the 8th position.) Antidiuretic activity with no side effects and long-lasting action. The present invention relates to a method for producing desamino-asparagine 4 -D-arginine 8 -vasopressin. The duration of antidiuretic activity of vasopressin is influenced by the rate of enzymatic degradation of the intact peptide. Structural changes in peptides that reduce the rate of enzymatic decay while retaining biological activity are highly desirable, especially when improving and prolonging the resulting therapeutic action. Replacement of cysteine moiety at position 1 by Mep and L at position 8 by D-arg in arginine-vasopressin
−arg substitution is similar to vasopressin
It reduces desamino-D-arginine 8 -vasopressin, known as DDAVP, and has a long-lasting antidiuretic effect, as well as a significant relief effect on non-striated muscles in the vascular system. , superior to vasopressin. Both of these actions are effective in treating diabetes insipidus. In addition to the effects mentioned above, when a pregnant woman suffers from diabetes insipidus, it is necessary to consider the effect of uterine contraction. Older vasopressin derivatives in therapeutic use have too high a uterine tonic effect to be given to pregnant women without the risk of miscarriage. For this reason, it is highly desirable to have a medicament with a sufficiently low uterine tonic effect for therapeutic administration to pregnancies suffering from diabetes insipidus. In view of constant diabetes insipidus, ie long-term treatment, the patient runs the risk of becoming immune to the drug or becoming hyperesthetized after the treatment period. In order to allow continuous treatment of the disease, it is necessary in this case to use certain other corresponding drugs that do not cause the above-mentioned immune or allergic reactions in the patient. However, to date, such other classes of drugs against vasopressin and DDAVP have not been used. The aim of the invention is therefore to eliminate such drawbacks. The object of the present invention is to provide a new vasopressin derivative that has an antidiuretic effect comparable to that of conventional preparations, and a significantly lower uterine tonic effect, with significantly improved antidiuretic/uterotonic effects. In particular, the uterine tonic effect of the preparation of the present invention is 10 tenth potency lower and 10 tenth potency higher than that of conventional preparations.
It has unique properties that produce a uterine tonic effect ratio. For this reason, the compounds of the present invention can be used to treat pregnant women suffering from diabetes insipidus, and can be used to treat such women throughout pregnancy; This is a completely new field of treatment for women. The present invention is based on the following general formula: (In the formula, Mep represents 2-mercaptopropionyl.)
acid sequence) is gradually formed in a manner known per se, and then this amino acid sequence is oxidized to the general formula: Desamino-asparagine 4 -D-
It is characterized by producing arginine 8 -vasopressin. According to another aspect of the invention, the oxidation is carried out with potassium ferricyanide in aqueous solution at a pH of 6.5 to 7.0. The polypeptide according to the invention can be used in free base form as a salt of an inorganic or organic acid,
Auxiliaries, stabilizers and preservative additives
additives), sweeteners, aromatics, humectants, etc. can be added, and parenteral, oral, intranasal,
It can be formulated for subcutaneous, intramuscular and intravenous administration. Examples of inorganic acids that can be used include hydrochloric acid and phosphoric acid, and examples of organic acids that can be used include acetic acid, citric acid, and tartaric acid. Additionally, compounds having acid action such as tannins can be used. Suitable additives include starch, lactose, natural or cured oil, talc, glycerin, and the like. An advantage of the new compounds is good intranasal resorbability.
This is easy to administer to the patient, and the preparation can be administered intranasally. This eliminates the need for injections by intravenous administration, which is complicated in some situations. The peptide in the present invention has the following formula: is a protecting group for the mercapto group (benzyl) of cysteine and Y is a protecting group for the guanidine nitrogen (p-toluenesulfonyl).
off point). The protecting group X was removed and the pentapeptide was converted into the pentapeptide with the following formula (): (Y)-Gly-indicates p-nitrophenyl ester group for NH2 )
It binds to the peptide represented by Removing the protecting group X of the peptide () and converting the hexapeptide to the tripeptide hydrazine (): Mep(Bzl)-Tyr-Phe- NHNH2 protected nonapeptide amide (): Mep(Bzl)-Tyr-Phe-Asn- Coupling is performed by the azide coupling method to obtain Asn-Cys(Bzl)-Pro-D-Arg(Y)-Gly- NH2 . Treatment of the protected nonapeptide amide with an alkali metal in liquid ammonia splits the protecting group and reduces the nonapeptide amide (): Mep(SH)−Tyr−Phe−Asn−Asn−Cys(SH)−Pro−D− Arg-Gly- NH2 is generated and this product is oxidized at a pH of 6.5-7.0 in an aqueous potassium ferricyanide solution to form the general formula ()
A cyclic biologically active peptide is obtained. Substitution of the amino acid of vasopressin at position 4 by asparagine in concert with the substitution of the cysteine moiety at position 1 by Mep and the L-arginine at position 8 by D-arginine is
In addition to good intranasal resolvability compared to vasopressin, it produces a peptide () that has a high antidiuretic effect, an effect of reducing the increase in blood pressure and a significantly reduced uterine tonic effect (see Table 1).
DDAVP is listed in Table 1 separately from arginine-vasopressin as a standard substance, and it is also listed in the literature (Chemical Abstracts: 80 , 347V (1974)).
The analogous 4-Val-DDAVP described in Table 1 is also listed in the table. Since the theoretical dose curve for the response of antidiuretic peptides with general formula () is not linear, the number of units/mg for D-arginine 8 -analogues compared to vasopressin is not linear.
Therefore, it is difficult to express the activity normally. For this reason, the intensities in the table are expressed as relative activity values and data of DDAVP when the comparison compound is arbitrarily set at 1.00.
【表】
ゾプレ
ツシン
(既知)
上記表から明らかなように、本発明における化
合物、４−Asn−DDAVPは既知化合物と比較し
て抗利尿性、持続性および血圧に対して最適な値
を示していることがわかる。更に、抗利尿性／子
宮緊縮作用関係に対して優れた値を示している。
同時に、抗利尿性に対する良好な値、低い血圧−
上昇作用、良好な持続性および極めて低い子宮緊
縮作用を示し、尿崩症にかかつている妊婦に対し
て極めて効果的である。
デスアミノ−アスパラギン４−Ｄ−アルギニン
８−バゾプレツシンは経口、直腸また皮下投与に
用いる有機または無機塩類、酸類または塩基を含
有する水溶液または非水溶液の治療調剤に作るこ
とができる。
次に示す例において特に記載しない限り次に示
す略語を用いることにする：
TLC＝薄層クロマトクラフイ
AAA＝アミノ酸組成の分析
Cbs＝カルボベンジルオキシ−基
Tos＝トシル基（ｐ−トルエンスルホニル基）
蒸発は特に記載しない限り水吸収により35℃で
行なつた。すべての溶剤は試薬品位とする。非水
溶液のPHは湿気リトマスペーパー（moist litmus
paper）により定めた。
回転の光角（optical angle）パーキン−エルマ
ー141偏光計により測定した。
薄層クロマトグラフイは次に示すシステムにお
いて「マークDC−フエルテイグプラテン珪藻土
60（Merck DC−Fertigplatten Kiselgel 60）」
上で行なつた：
Ａ：ブタノール：酢酸：水 ４：１：１
Ｂ：ブタノール：ピリジン：酢酸：水 15：10：
３：６
Ｃ：シクロヘキサン：酢酸エチル：メタノール
１：１：１
Ｄ：クロロホルム：メタノール：酢酸 10：２：
１
Ｅ：クロロホルム：メタノール：酢酸：水 30：
20：４：６
アミノ酸組成の分析に対する試料は密閉蒸発管
内において6M HCl中110℃で24時間にわたり加
水分解した。
分析はJEOL−5AHオートマチツクアミノ酸分
析計により±1.2％の正確さで得た。
例 １
Cbz−Ｄ−Arg（Tos）−Gly−OEt（化合物
１）
Cbz−Ｄ−Arg（Tos）の０゜の溶液（509ｇ、
1.10モル）、Gly−OEt・HCl（169ｇ、1.21モル）
および169ml（1.21モル）のトリエチルアミンを
1.81のクロロホルムに溶解した溶液を、ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（227ｇ、1.10モル）
を600mlのクロロホルムに溶解した溶液で処理
し、常温で24時間放置した。ジシクロヘキシル尿
素を別し、３部のクロロホルムで洗浄し、液
および洗浄液を減圧下蒸発させた。残留物を６
の酢酸エチルに溶解し、１の0.25NHCl（６
×）、水（１×）、５％NaHCO3（３×）および水
（２×）で洗浄した。酢酸エチル溶液を乾燥し
（Na2SO4）、蒸発させ（油ポンプ）保護したジペ
プチドエステル１を554ｇ（92％）得た。
〔α〕D＋3.1゜（c3.0、95％cOH）
AAA：Arg、0.85；Gly、1.00
TLC：RfC：0.62 RfD：0.67
例 ２
Cbz−Pro−Ｄ−Arg（Tos）−Gly−OEt（化合
物２）
保護したジペプチドエステル（化合物１）
（42.5ｇ、0.77モル）をHBr（478ｇ）の酢酸
（AcOH）（2800ml）溶液中に振盪し乍ら溶解し、
溶液を50℃に10分間加熱した。温溶液を18のジ
エチルエーテルにかきまぜ乍ら注入し、白色沈澱
を過器上に集め、２のジエチルエーテル（８
×）で洗浄し、真空中NaOH上で６時間乾燥し
た。この沈澱を1260mlのクロロホルムに溶解、０
゜に冷却し、トリエチルアミンを添加してPHを
7.5にした。結晶質のCbz−Pro−ONp（280ｇ、
0.758モル）を添加し、溶液を常温で１週間維持
し、所要の如くPHを7.5に調整した。この溶液を
５のクロロホルムで稀釈し、１の水（１
×）、Ｎ NH3（10×）、H2O（１×）、Ｎ HCl
（２×）およびH2O（３×）で洗浄した。クロロ
ホルム溶液を乾燥し（Na2SO4）、蒸発させて（油
ポンプ）黄かつ色の固体として保護されたトリペ
プチドエステル486ｇ（99％）を得た。
〔α〕D−23.0゜（c1.80、95％AcOH）
TLC：RfC：0.64 RfD：0.74
例 ３
Cbz−Pro−Ｄ−Arg（Tos）Gly−NH2（化合
物３）
再蒸留したNH3を、保護されたトリペプチドエ
ステル（化合物２）（210ｇ、0.328モル）を6.9
のメタノールに溶解した溶液中に常温でバブルし
た。アンモニアおよびメタノールを蒸発させ、油
状物を400mlのクロロホルムに溶解し、酢酸エチ
ル（2500ml）を添加して油状物を沈澱させ、１
のジエチルエーテル３部で粉状にした。固形物
過器上にあつめ、乾燥して168ｇ（83％）の保護
されたトリペプチドアミド（化合物３）を得た。
〔α〕D−22.6゜（c1.09、95％AcOH）
AAA：Pro、1.03、Arg、0.82：Gly、1.00
TLC：RfC：0.37 RfD：0.47
例 ４
Cbz−Cys（Bzl）−Pro−Drg（Tos）−Gly−
NH2（化合物４）
保護されたトリペプチドアミド（化合物３）
（168ｇ、0.273モル）を455mlの酢酸でスラリに
し、このスラリを、HBr（240ｇ）を酢酸（700
ml）に溶解した溶液で常温で１時間処理し、次い
でかきまぜ乍ら９のジエチルエーテルに注入し
た。白色沈澱を過器上に集め、６のジエチル
エーテル洗浄した。沈澱を真空中NaOH上で６時
間乾燥し、1070mlのジメチルホルムアミドに溶解
し、生成した溶液を０゜に冷却した。この溶液の
PHをトリエチルアミンで8.0に調整し、Cbz−Cys
（Bzl）−ONp（128ｇ、0.27モル）を添加した。常
温で３日後ジメチルホルムアミドを蒸発させ（油
ポンプ）、生成した油状物を５のクロロホルム
に溶解し、１のＮ NH3（３×）、Ｎ HCl
（１×）およびH2O（２×）で洗浄した。クロロ
ホルム溶液を乾燥し（Na2SO4）、500mlに濃縮
し、1500mlのジエチルエーテルを添加して油状物
を沈澱させ、これを１のジエチルエーテル２部
で粉状にした。固体を過器上に集め、乾燥して
保護されたテトラペプチドアミド（化合物４）、
194ｇ（88％）を得た。
〔α〕D−15.9゜〔c0.91、ジメチルホルムアミド
（DMF）〕
AAA：Cys（Bzl）、0.81；Pro、1.02；Arg、
0.79；Gly、1.00
TLC：RfC：0.48、RfD：0.56
例 ５
Cbz−Asn−Cys（Bzl）−Pro−Ｄ−Arg
（Tos）−Gly−NH2（化合物５）
保護したテトラペプチドアミド（化合物４）
（190ｇ、0.235モル）を540mlの酢酸でスラリに
し、このスラリをHBr（380ｇ）の酢酸（1450
ml）溶液で1.25時間処理し、９のジエチルエー
テル中にかきませ乍ら注入した。白色沈澱を過
器上に集め、７のジエチルエーテルで洗浄し、
真空中NaOH上で５時間乾燥し、4.5のメタノ
ールに溶解した。IRA−410（OH-）イオン交換樹
脂（800ml床）のメタノールスラリを添加し、混
合物を10分間かきまぜ、樹脂を別し、メタノー
ルで洗浄した。液と洗浄液を混合し、これを蒸
発させて油状物を得、この油状物を800mlのジメ
チルホルムアミドに溶解した。Cbz−Asn−ONp
（100ｇ、0.259モル）を添加し、トリエチルアミ
ンでPHを7.5に調整し、溶液を常温で４時間放置
した。この溶液を100mlに濃縮し（油ポンプ）、生
成した粘稠性油状物を150mlの温メタノールで稀
釈した。保護されたペンタペプチドアミドを１
の酢酸エチルの添加により沈澱させ、過器上に
集め、酢酸エチル：メタノール（４：１）の溶液
２および500mlの酢酸エチルで洗浄した。乾燥
したペプチド（化合物５）は160ｇ（72％）であ
つた。
〔α〕D−18.9゜（c1.10、DMF）
AAA：Asp、0.91；Cys（Bzl）、0.72；Pro、
0.98；Arg、0.80、Gly、1.00
TLC：RfA：0.50；RfC：0.19；RfD：0.16
例 ６
Cbz−Asn−Asn−Cys（Bzl）−Pro−Ｄ−Arg
−（Tos）−Gly−NH2（化合物６）
保護されたペンタペプチドアミド（化合物５）
（923mg、１ミリモル）を2.5M HBrの酢酸溶液10
mlに溶解した。常温で1.25時間後臭化水素酸塩を
ジエチルエーテルで沈澱させ、別し、数部のジ
エチルエタノールで洗浄し、真空中NaOH上で乾
燥した。沈澱を８mlのジメチルホルムアミドに溶
解し、０℃に冷却し、Cbz−Asn−ONp（490
mg、1.2ミリモル）およびトリエチルアミン
（0.58ml）を添加した。常温で24時間放置後ジメ
チルホルムアミドを蒸発させ（油ポンプ）残留物
をエタノールで稀釈し、生成した固形物を別
し、数部をエタノールで洗浄した。P2O5上で乾
燥した後、保護されたヘキサペプチドアミド（化
合物６）は859mg（83％）であつた。
mp 185〜187℃
〔α〕２５ Ｄ−18.0（c1.0、DMF）
TLC RfA 0.43、RfD 0.11、RfE 0.78
例 ７
Cbz−Tyr（Bzl）−Phe−OMe（化合物７）
Cbz−Tyr（Bzl）−ONP（52.6ｇ、0.10モル）、
HCl・Phe−OMe（23.6ｇ、0.11モル）およびト
リエチルアミン（15.3ml、0.11モル）を170mlの
ジメチルホルムアミドに添加した混合物を常温で
19時間放置した。この溶液にエタノール（600
ml）を添加し、４℃で2.5時間後形成した結晶質
物質を過器上に集め、エタノール（４×200
ml）およびジエチルエーテル（２×200ml）で洗
浄した。空気乾燥後保護されたジペプチドエステ
ル（化合物７）は51.8ｇ（91％）であつた。
mp 179〜181℃
〔α〕２５ Ｄ−18.7゜（c1.05、DMF）
TLC：RfC：0.84、RfD：0.90
例 ８
HCl・Tyr−Phe−OMe（化合物８）
Cbz−Tyr（Bzl）−Phe−OMe（20.4ｇ、0.036
モル）および１ｇのPdを、7.2mlの5N HCl
（0.036モル）を含有するメタノール400mlに懸濁
させた溶液を大気圧下常温で24時間水素添加し、
更に１ｇのパラジウムを添加し、水素添加を10時
間継続した。Pdを別し、過器でメタノール
で洗浄した。混合したメタノール液および洗浄
液を蒸発させ、生成した油状物をジエチルエーテ
ルで稀釈し、４℃で一夜放置した。結晶質塩化水
素酸塩を過器で集め、ジエチルエーテルで洗浄
し、乾燥した結果13.1ｇ（97％）であつた。
〔α〕２５ Ｄ＋2.8゜（c1.0、DMF）
TLC：RfC：0.54、RfD：0.32
例 ９
Mep（Bzl）−Tyr−Phe−OMe（化合物９）
HCl・Tyr−Phe−OMe（5.0ｇ、13.2ミリモ
ル）、Mep（Bzl）−ONp（4.6ｇ、13.2ミリモル）
およびトリエチルアミン（1.85ml、13.2ミリモ
ル）を40mlのジメチルホルムアミドに溶解した０
゜の溶液を常温で２日間放置した。DMFを真空
中で除去し、残留物を100mlのクロロホルムに溶
解した。このクロロホルム溶液を25mlのＮ NH3
（５×）、Ｎ HCl（１×）およびH2O（２×）で
洗浄し、乾燥し（Na2SO4）蒸発させて6.2ｇ（90
％）の(9)を得た。
mp 135〜136℃
TLC：RfA：0.92、RfC：0.81、RfD：0.80
例 10
Mep（Bzl）−Tyr−Phe−NHNH2（化合物10）
Mep（Bzl）−Tyr−Phe−OMe（3.0ｇ、5.8ミ
リモル）およびNH2NH2・H2O（1.5ml、30ミリモ
ル）を、50mlのメタノールおよび20mlのジメチル
ホルムアミドの混合物に溶解した溶液を常温で24
時間放置した。結晶質ヒドラジド(10)を過器上に
集め、６部のメタノールで洗浄し、真空中H2SO4
上で乾燥して2.1ｇ（70％）を得た。
mp 246℃
〔α〕D−19.9゜（c1.0、DMF）
例 11
Mep（Bzl）−Tyr−Phe−Asn−Asn−Cys
（Bzl）−Pro−Ｄ−Arg（Tos）−Gly−NH2（化
合物11）
保護されたヘキサペプチドアミド（化合物６）
（518mg、0.5ミリモル）を2.5M HBrの酢酸溶液10
mlに溶解した。1.5時間後、臭化水素酸塩をジエ
チルエーテルで沈澱し、過器上で集め、過器
上で数部のジエチルエーテルで洗浄し、真空中
NaOH上で乾燥した。該塩を５mlのジメチルホル
ムアミドに溶解し、溶液トリエチルアミンで塩基
性（PH8.0）にし、−15℃に冷却した。この溶液を
（化合物10）（286ml、0.55ミリモル）そのものか
らイソアミルニトライトを用いてつくつたアジド
の−15℃溶液に添加した。反応液を−15℃で２時
間かきまぜ、トリエチルアミンでPHを8.0に調整
し、反応を４℃で24時間維持した。溶液を真空中
１mlに濃縮し（油ポンプ）、15mlのエタノールで
稀釈した。40℃で一夜放置した後、沈澱を過器
上に集め、数部のエタノールで洗浄し、乾燥して
保護されたノナペプチドアミド（化合物11）550
mg（79％）を得た。
mp 203〜205℃
〔α〕２５ Ｄ−26.9゜（c0.5、酢酸）
TLC：RfA：0.53、RfB：0.74
例 12
（Asn4）−デスアミノ−Ｄ−Arg8−バゾプレツ
シン（４−Asn−DDAVP）（化合物12）
保護されたノナペプチドアミド(11)（250mg、
0.180ミリモル）を200mlのNH3に溶解した−40℃
の溶液を間欠的にNa（小内径のピペツトで引き
上げた）で、Naを除去した際溶液中に青色が残
留するまで処理した。190mgのNH4Clを添加する
ことにより２分後青色は消えた。NH3をN2の緩徐
な流れ中で蒸発させた。残留物を20mlの酢酸エチ
ル２部で抽出し、300mlの水に溶解し、溶液のPH
を酢酸により6.8に調整した。0.1MのK3Fe
（CN）63.6mlを添加することによりPH6.8で酸化を
実施した。10分間かきまぜた後、IRA400（−
Ac-）イオン交換樹脂の50ml床を黄色の溶液に添
加し、懸濁液を30分間かきまぜ、樹脂を別し
た。樹脂を数部の水で洗浄し、混合した液と洗
浄液をPH3.9まで酸性にし、凍結乾燥した。
200mgの凍結乾燥物を50％酢酸10mlに溶解し、
50％酢酸で平衡にしておいたセフアデツクスＧ−
15の2.5×114.5cmカラムに通し、100ml／時の流
速で溶離した。280mmで検出され、240mlに中心を
おく主ピークを集め、１容量の水で稀釈し、凍結
乾燥して脱塩したペプチド（化合物12）87mgを得
た。
この脱塩ペプチド86mgを0.2M酢酸10mlに溶解
し、0.2M酢酸で平衡にしておいたセフアデツク
スＧ−15の2.5×112cmカラムに通し、同じ溶媒で
100ml／時の流速で溶離した。単一ピーク（510
ml、3.90Vo）に対応する部分を集め、凍結乾燥
し43.5ｇの上記ペプチド（化合物12）を得た。
〔α〕２５ Ｄ−53.7（c0.2068、１％酢酸）
AAA：Tyr 1.05、Phe 1.10、Asp 2.12、Pro
0.99、Arg 1.04、Gly 1.00
TLC：RfA：0.21、RfB：0.51、RfE：0.36[Table] Zopretusin
(known)
As is clear from the above table, it can be seen that the compound of the present invention, 4-Asn-DDAVP, exhibits optimal values for antidiuretic properties, persistence, and blood pressure compared to known compounds. Furthermore, it shows excellent values for the relationship between antidiuretic and uterine tonic effects.
At the same time, good values for antidiuretic, low blood pressure -
It exhibits an ascending effect, good persistence and very low uterine tonicity, making it extremely effective for pregnant women suffering from diabetes insipidus. Desamino-asparagine 4 -D-arginine
8 -Vasopressin can be made into aqueous or non-aqueous therapeutic preparations containing organic or inorganic salts, acids or bases for oral, rectal or subcutaneous administration. In the following examples, the following abbreviations will be used unless otherwise specified: TLC = thin layer chromatography AAA = analysis of amino acid composition Cbs = carbobenzyloxy group Tos = tosyl group (p-toluenesulfonyl group) Evaporation was carried out at 35° C. by water absorption unless otherwise stated. All solvents are at reagent level. The pH of a non-aqueous solution is measured using moist litmus paper.
(paper). Optical angle of rotation was measured with a Perkin-Elmer 141 polarimeter. Thin layer chromatography is performed using the following system:
60 (Merck DC-Fertigplatten Kiselgel 60)”
Did above: A: Butanol:acetic acid:water 4:1:1 B: Butanol:pyridine:acetic acid:water 15:10:
3:6 C: Cyclohexane: Ethyl acetate: Methanol
1:1:1 D: Chloroform: Methanol: Acetic acid 10:2:
1 E: Chloroform: Methanol: Acetic acid: Water 30:
20:4:6 Samples for analysis of amino acid composition were hydrolyzed in 6M HCl in a closed evaporator tube at 110° C. for 24 hours. Analysis was obtained with a JEOL-5AH automatic amino acid analyzer with an accuracy of ±1.2%. Example 1 Cbz-D-Arg(Tos)-Gly-OEt (Compound 1) A 0° solution of Cbz-D-Arg(Tos) (509 g,
1.10 mol), Gly-OEt・HCl (169 g, 1.21 mol)
and 169 ml (1.21 mol) of triethylamine.
A solution of 1.81 g of dicyclohexylcarbodiimide (227 g, 1.10 mol) in chloroform was added to
was treated with a solution dissolved in 600 ml of chloroform and left at room temperature for 24 hours. The dicyclohexylurea was separated off, washed with 3 parts of chloroform, and the liquid and washings were evaporated under reduced pressure. 6 residues
of ethyl acetate and 1 part of 0.25NHCl (6
×), water (1×), 5% NaHCO 3 (3×) and water (2×). The ethyl acetate solution was dried (Na 2 SO 4 ) and evaporated (oil pump) to yield 554 g (92%) of the protected dipeptide ester 1 . [α] D +3.1゜ (c3.0, 95%cOH) AAA: Arg, 0.85; Gly, 1.00 TLC: Rf C : 0.62 Rf D : 0.67 Example 2 Cbz−Pro−D−Arg(Tos)−Gly -OEt (Compound 2) Protected dipeptide ester (Compound 1)
(42.5 g, 0.77 mol) was dissolved in a solution of HBr (478 g) in acetic acid (AcOH) (2800 ml) with shaking;
The solution was heated to 50°C for 10 minutes. The warm solution was poured into 18 parts of diethyl ether with stirring, the white precipitate was collected on a filter, and the white precipitate was poured into 2 parts of diethyl ether (8 parts) with stirring.
x) and dried in vacuo over NaOH for 6 hours. Dissolve this precipitate in 1260ml of chloroform,
Cool to ℃ and add triethylamine to adjust the pH.
I set it to 7.5. Crystalline Cbz-Pro-ONp (280g,
0.758 mol) was added and the solution was kept at room temperature for one week and the pH was adjusted to 7.5 as required. This solution was diluted with 5 parts of chloroform and 1 part of water (1 part of water).
×), N NH 3 (10 ×), H 2 O (1 ×), N HCl
(2x) and H2O (3x). The chloroform solution was dried (Na 2 SO 4 ) and evaporated (oil pump) to give 486 g (99%) of the protected tripeptide ester as a yellow colored solid. [α] D -23.0゜ (c1.80, 95% AcOH) TLC: Rf C : 0.64 Rf D : 0.74 Example 3 Cbz-Pro-D-Arg(Tos)Gly-NH 2 (Compound 3) Redistilled NH 3 and the protected tripeptide ester (compound 2) (210 g, 0.328 mol) to 6.9
was bubbled into a solution dissolved in methanol at room temperature. The ammonia and methanol were evaporated, the oil was dissolved in 400 ml of chloroform, and the oil was precipitated by adding ethyl acetate (2500 ml).
The mixture was triturated with 3 parts of diethyl ether. Collected on a solid filter and dried to yield 168 g (83%) of the protected tripeptide amide (Compound 3). [α] D −22.6゜(c1.09, 95%AcOH) AAA: Pro, 1.03, Arg, 0.82: Gly, 1.00 TLC: Rf C : 0.37 Rf D : 0.47 Example 4 Cbz−Cys(Bzl)−Pro− Drg(Tos)－Gly－
NH 2 (Compound 4) Protected tripeptide amide (Compound 3)
(168 g, 0.273 mol) was slurried with 455 ml of acetic acid, and this slurry was mixed with HBr (240 g) and acetic acid (700
ml) at room temperature for 1 hour, and then poured into 9.0 ml of diethyl ether with stirring. A white precipitate was collected on a filter and washed with diethyl ether in step 6. The precipitate was dried in vacuo over NaOH for 6 hours, dissolved in 1070 ml of dimethylformamide, and the resulting solution was cooled to 0°. of this solution
Adjust the pH to 8.0 with triethylamine and add Cbz−Cys.
(Bzl)-ONp (128 g, 0.27 mol) was added. After 3 days at room temperature, dimethylformamide was evaporated (oil pump) and the resulting oil was dissolved in 5 parts of chloroform, 1 part of N NH3 (3x), N HCl
(1x) and H2O (2x). The chloroform solution was dried (Na 2 SO 4 ), concentrated to 500 ml, and 1500 ml of diethyl ether was added to precipitate an oil, which was triturated with 2 parts of 1 part diethyl ether. The solid was collected on a strainer and dried to give the protected tetrapeptide amide (compound 4),
194g (88%) was obtained. [α] D −15.9゜ [c0.91, dimethylformamide (DMF)] AAA: Cys (Bzl), 0.81; Pro, 1.02; Arg,
0.79; Gly, 1.00 TLC: Rf C : 0.48, Rf D : 0.56 Example 5 Cbz−Asn−Cys(Bzl)−Pro−D−Arg
(Tos)-Gly-NH 2 (Compound 5) Protected tetrapeptide amide (Compound 4)
(190 g, 0.235 mol) was slurried in 540 ml acetic acid, and this slurry was mixed with HBr (380 g) in acetic acid (1450 mol).
ml) solution for 1.25 hours and poured into diethyl ether while stirring. The white precipitate was collected on a filter, washed with diethyl ether in step 7,
Dry in vacuo over NaOH for 5 hours and dissolve in 4.5 methanol. A methanol slurry of IRA-410 (OH - ) ion exchange resin (800 ml bed) was added, the mixture was stirred for 10 minutes, and the resin was separated and washed with methanol. The liquid and washing liquid were mixed and evaporated to give an oil which was dissolved in 800 ml of dimethylformamide. Cbz−Asn−ONp
(100 g, 0.259 mol) was added, the pH was adjusted to 7.5 with triethylamine, and the solution was left at room temperature for 4 hours. The solution was concentrated to 100 ml (oil pump) and the resulting viscous oil was diluted with 150 ml of warm methanol. 1 protected pentapeptide amide
of ethyl acetate, collected on a filter and washed with a solution of ethyl acetate:methanol (4:1) 2 and 500 ml of ethyl acetate. The dried peptide (compound 5) was 160 g (72%). [α] D −18.9° (c1.10, DMF) AAA: Asp, 0.91; Cys (Bzl), 0.72; Pro,
0.98; Arg, 0.80, Gly, 1.00 TLC: Rf A : 0.50; Rf C : 0.19; Rf D : 0.16 Example 6 Cbz−Asn−Asn−Cys(Bzl)−Pro−D−Arg
-(Tos)-Gly-NH 2 (Compound 6) Protected pentapeptide amide (Compound 5)
(923 mg, 1 mmol) in 2.5 M HBr in acetic acid 10
Dissolved in ml. After 1.25 hours at ambient temperature, the hydrobromide salt was precipitated with diethyl ether, separated, washed with several portions of diethyl ethanol, and dried over NaOH in vacuo. The precipitate was dissolved in 8 ml of dimethylformamide, cooled to 0°C, and Cbz-Asn-ONp (490
mg, 1.2 mmol) and triethylamine (0.58 ml) were added. After standing at room temperature for 24 hours, the dimethylformamide was evaporated (oil pump), the residue was diluted with ethanol, the formed solid was separated, and several parts were washed with ethanol. After drying over P2O5 , the protected hexapeptide amide (compound 6) was 859 mg (83%). mp 185-187℃ [α] 25 D -18.0 (c1.0, DMF) TLC Rf A 0.43, Rf D 0.11, Rf E 0.78 Example 7 Cbz-Tyr (Bzl)-Phe-OMe (Compound 7) Cbz-Tyr (Bzl)-ONP (52.6 g, 0.10 mol),
A mixture of HCl・Phe-OMe (23.6 g, 0.11 mol) and triethylamine (15.3 ml, 0.11 mol) in 170 ml of dimethylformamide was prepared at room temperature.
I left it for 19 hours. Add ethanol (600 ml) to this solution.
ml) and after 2.5 h at 4°C the crystalline material that formed was collected on a strainer and added with ethanol (4 x 200
ml) and diethyl ether (2 x 200 ml). After air drying, the protected dipeptide ester (Compound 7) was 51.8 g (91%). mp 179-181℃ [α] 25 D -18.7゜ (c1.05, DMF) TLC: Rf C : 0.84, Rf D : 0.90 Example 8 HCl・Tyr−Phe−OMe (Compound 8) Cbz−Tyr (Bzl) -Phe-OMe (20.4g, 0.036
mol) and 1 g of Pd in 7.2 ml of 5N HCl
(0.036 mol) suspended in 400 ml of methanol was hydrogenated at atmospheric pressure and room temperature for 24 hours.
Another 1 g of palladium was added and hydrogenation continued for 10 hours. Pd was separated and washed with methanol in a filter. The combined methanol and washings were evaporated, and the resulting oil was diluted with diethyl ether and left overnight at 4°C. Crystalline hydrochloride was collected in a sieve, washed with diethyl ether, and dried to yield 13.1 g (97%). [α] 25 D +2.8゜ (c1.0, DMF) TLC: Rf C : 0.54, Rf D : 0.32 Example 9 Mep(Bzl)-Tyr-Phe-OMe (Compound 9) HCl・Tyr-Phe-OMe (5.0 g, 13.2 mmol), Mep(Bzl)-ONp (4.6 g, 13.2 mmol)
and triethylamine (1.85 ml, 13.2 mmol) dissolved in 40 ml dimethylformamide.
The solution was left at room temperature for 2 days. DMF was removed in vacuo and the residue was dissolved in 100ml chloroform. Add this chloroform solution to 25 ml of NNH3
(5x), washed with N HCl (1x) and H 2 O (2x), dried (Na 2 SO 4 ) and evaporated to 6.2 g (90
%) of (9) was obtained. mp 135-136℃ TLC: Rf A : 0.92, Rf C : 0.81, Rf D : 0.80 Example 10 Mep(Bzl)−Tyr−Phe−NHNH 2 (Compound 10) Mep(Bzl)−Tyr−Phe−OMe(3.0 g, 5.8 mmol) and NH 2 NH 2 ·H 2 O (1.5 ml, 30 mmol) in a mixture of 50 ml methanol and 20 ml dimethylformamide at room temperature.
I left it for a while. The crystalline hydrazide (10) was collected on a sieve, washed with 6 parts of methanol, and purified with H 2 SO 4 in vacuo.
Drying on top yielded 2.1 g (70%). mp 246℃ [α] D −19.9゜ (c1.0, DMF) Example 11 Mep(Bzl)−Tyr−Phe−Asn−Asn−Cys
(Bzl)-Pro-D-Arg(Tos)-Gly- NH2 (Compound 11) Protected hexapeptide amide (Compound 6)
(518 mg, 0.5 mmol) in 2.5 M HBr in acetic acid solution 10
Dissolved in ml. After 1.5 hours, the hydrobromide salt was precipitated with diethyl ether, collected on the sieve, washed with several parts of diethyl ether on the sieve, and concentrated in vacuo.
Dry over NaOH. The salt was dissolved in 5 ml of dimethylformamide, made basic (PH8.0) with solution triethylamine and cooled to -15°C. This solution was added to a -15° C. solution of the azide made from neat (Compound 10) (286 ml, 0.55 mmol) using isoamyl nitrite. The reaction solution was stirred at -15°C for 2 hours, the pH was adjusted to 8.0 with triethylamine, and the reaction was maintained at 4°C for 24 hours. The solution was concentrated in vacuo to 1 ml (oil pump) and diluted with 15 ml of ethanol. After standing overnight at 40 °C, the precipitate was collected on a strainer, washed with several parts of ethanol, and dried to obtain the protected nonapeptide amide (compound 11).
mg (79%). mp 203-205℃ [α] 25 D -26.9゜ (c0.5, acetic acid) TLC: Rf A : 0.53, Rf B : 0.74 Example 12 (Asn 4 )-Desamino-D-Arg 8 -Vasopressin (4-Asn -DDAVP) (Compound 12) Protected nonapeptide amide (11) (250 mg,
0.180 mmol) dissolved in 200 ml of NH3 at −40 °C
The solution was treated intermittently with Na (drawn up with a small internal diameter pipette) until a blue color remained in the solution upon removal of the Na. The blue color disappeared after 2 minutes by adding 190 mg of NH 4 Cl. NH3 was evaporated in a slow stream of N2 . The residue was extracted with 2 parts of 20 ml of ethyl acetate, dissolved in 300 ml of water, and the pH of the solution
was adjusted to 6.8 with acetic acid. 0.1M K3Fe
Oxidation was carried out at PH 6.8 by adding 3.6 ml of (CN) 6 . After stirring for 10 minutes, IRA400 (−
A 50 ml bed of Ac- ) ion exchange resin was added to the yellow solution, the suspension was stirred for 30 minutes, and the resin was separated. The resin was washed with several parts of water, and the mixed solution and washing solution were acidified to pH 3.9 and freeze-dried. Dissolve 200 mg of lyophilizate in 10 ml of 50% acetic acid,
Cephadex G- equilibrated with 50% acetic acid
It was passed through 15 2.5 x 114.5 cm columns and eluted at a flow rate of 100 ml/hr. The main peak detected at 280 mm and centered at 240 ml was collected, diluted with 1 volume of water, and lyophilized to yield 87 mg of desalted peptide (compound 12). 86 mg of this desalted peptide was dissolved in 10 ml of 0.2 M acetic acid and passed through a 2.5 x 112 cm column of Sephadex G-15 equilibrated with 0.2 M acetic acid.
Elution was performed at a flow rate of 100 ml/h. Single peak (510
ml, 3.90 Vo) was collected and lyophilized to obtain 43.5 g of the above peptide (Compound 12). [α] 25 D -53.7 (c0.2068, 1% acetic acid) AAA: Tyr 1.05, Phe 1.10, Asp 2.12, Pro
0.99, Arg 1.04, Gly 1.00 TLC: Rf A : 0.21, Rf B : 0.51, Rf E : 0.36