JPS61289005A

JPS61289005A - 植物病原菌胞子発芽抑制剤

Info

Publication number: JPS61289005A
Application number: JP60130339A
Authority: JP
Inventors: Kiyotaka Hatada; 清隆畑田; Takashi Asano; 隆浅野; Shota Ito; 伊東　祥太; Isao Saito; 斉藤　功夫; Tomio Goto; 富雄後藤; Yutaka Ikushima; 豊生島; Tsuneo Ikui; 生井　恒雄
Original assignee: Agency of Industrial Science and Technology
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 1985-06-14
Filing date: 1985-06-14
Publication date: 1986-12-19

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は植物病原菌胞子発芽抑制剤に関し、詳しくはｉ
ｔｕｒｉｎｅ　−Ａを有効成分とする植物病原菌胞子発
芽抑制剤に関するものである。更に、詳しくは、ｉｔｕ
ｒｉｎｅ　−Ａ生産菌によって生産され、下式、で表さ
れる公知の物質ｉｔｕｒｉｎｅ　−Ａを有効成分とする
植物病原菌胞子発芽抑制剤に関するものである。

有用な農業、園芸等の植物病害菌からの防除はその生産
性や省力化に欠くことのできない手法であり、特に主要
農作物である稲は、その栽培期中に害虫による被害のみ
でなく、種々の植物病原菌による被害を受けるが、とく
に、イモチ病（Ｐｉｒｉｃｕｌａｒｉａｏｒｙｚａｅ）
による被害は最も大きなものであり、その防除は重要で
ある。更に、また、これら植物病害菌はその有効な防除
剤に対して数年を経ないでその耐性菌の現れることから
、種々の対抗防除剤を開発しておくことは極めて重要で
ある。

本発明者はイモチ病菌胞子の発芽をスクリーニングの指
標として、胞子発芽の抑制活性因子を広く探索した結果
、稲葉上より分離した、バチルス・ズブチリス種の培養
液に強い胞子発芽抑制効果のあることを発見した。そし
て、同菌の培養液中の活性因子について、鋭意研究をし
た結果、次の構造を有する、ｉｔｕｒｉｎｅ　−Ａ　（
式中、Ｒはアルキルである）を単離した。

この同活性物質は、菌糸の成長を阻害する効果が報告さ
れている公知の物質であるが、本発明者において別途に
胞子発芽抑制という観点から初めて単離されたことから
植物病原菌胞子発芽抑制剤として、単品及び、必要に応
じて、不活性の液体または固体状の担体および、または
希釈剤、溶剤、乳化剤その他の補助剤等を用いて、イモ
チ病菌胞子（〜由血ｒｉａ　ｏｒｙｚ徊）、フハイ病菌
胞子（Ｆｕｓａｒｉｔ皿ｏｘｙｓｐｏｍｍ）、立枯病菌
胞子（Ｒｈｉｚａｃｔｏｎｉａ　５ｏｌａｎｉ　）、ゴ
マハガレ病胞子（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ　
ｏｒｙｚａｅ）　、ハイイロカビ病菌胞子（Ｂｏｔｒｙ
ｔｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ　）等の植物病原菌胞子の発芽
を抑制し、更に、発芽管の伸長を低濃度で抑制すること
から、その病害予防に有効であることを見出し本発明を
完成した。

本発明で使用する上記菌は宮城県仙台市内の稲葉上より
分離されたもので、次のごとき菌学的性質を有する。

（ａ）　　形態（１）細菌の形：桿状（２）細胞の大きさ二〇、８〜ｏ、ｓ／１ｍ（３）多形
性：なしく４）運動性：あり、側鞭毛を有する（５）胞子：あり（６）ダラム染色性：陽性（ｂ）　　生育伏態２８°Ｃで培養し、７日間にわたって観察した。

（１）肉汁寒天平板培養：多量生育、２日後、１．０〜
２．Ｏｍｍ不規則円形、色彩はクリーム色、可溶性色素
は生成しない。

（２）肉汁寒天斜面培養：表面に生育し、不透明、乳白
色後やや黄味。

（３）肉汁液体培養：多量生育し、濁り後沈澱する、橙
色を呈す。

（４）　　リドマス・ミルり：ペプトン化ＬｐＨはやや
アルカリ性を示す。

（Ｃ）　　生理学的性質（１）硝酸塩の還元：陽性（２）ＶＰテスト：陽性（３）インドールの生成：陽性（４）デンプンの加水分解：陽性（５）クエン酸の利用：陽性（６）プロピオン酸の利用：陰性（７）７％ＮａＣ１培地：生育（８）アジド培地：生育せず（９）色素の生産（肉汁寒天培地に１％のブドウ糖及び
チロシンを加え色素の生産を調べた）：陰性（１０）カゼイン分解二分解する（１１）カタラーゼ：陽性（１２）嫌気培養：陰性（１３）卵黄反応：陰性（１４）チロシンの分解二分解せず（１５）ゼラチンの液化：溶解（１６）リゾチーム抵抗試験：陽性（１７）馬尿酸塩の分解：陰性（１８）炭素源より酸の生成グルコース；陽性アラビノース：陽性ギシロース：陽性マニトール：陽性（ｄ）　　サバロウド・デキストロース培地（ディフコ
製）：生育以上の諸性質をバージエンスｅマニュアル・オン・デタ
ーミイネテイブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　　第８版、１９７４年
の記載と比較すると本菌株は好気性のグラム陽性桿菌で
側鞭毛による運動性を有することからバチルス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　）属に属するものと判断される。バチルス
属の中でも馬尿酸塩の分解、生育温度、炭素源の利用性
などの特徴からバチルス・ズブチリスの一菌株と同定し
、バチルス・ズブチリスＮ　ｏ、Ｎ　Ａ　−ａ　ｐ　ｂ
　−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　Ｎｏ、
ＮＡ−ａｐｂ−１）と命名し、工業技術院微生物工業技
術研究所に微生物受託番号微工研菌寄７６６１号（昭和
５９年６月１１１１付）として寄託した。

これまで、植物病原菌に用いられている、たとえば、抗
生物質防除剤としては、プラストサイジン・８１カスガ
マイシン等があるが、近年、その使用に伴い耐性菌の出
現していることから、このような耐性菌に対して、本発
明者によって提供される植物病原菌胞子発芽抑制剤は広
く利用されることが期待されるものである。

従って、本発明は、バチルス属に属するズブチリス種の
ｉｔｕｒｉｎｅ　−Ａ生産性を有するバチルス舎ズブチ
リスＮ　ｏ、　ＮＡ−ａ　ｐ　ｂ−１（Ｂａｃｉｕｕｓ
　５ｕｂｔｉｌｉｓ　Ｎｏ　、　ＮＡ−ａｐｂ−１）で
生産される１ｔｕｒｉｎｎ−Ａを有効成分とする植物病
菌胞子発芽抑制剤として出来る。

本発明の植物病菌胞子発芽抑制剤の製法としては、バチ
ルス・ズブチリスＮｏ、ＮＡ−ａ　ｐ　ｂ−１（＆ｃｉ
ｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｓ　Ｎｏ、ＮＡ−ａ　ｐ　ｂ−
１）菌株を利用可能な栄養物を含有する培地で培養して
行なわれる。

培地組成としては、たとえば、じゃがいも煎汁、澱粉、
グリセリン、デキストリン、しよ糖、麦芽糖、ブドウ糖
等の炭素源、ペプトン、肉エキス、カゼイン加水分解物
、コーン・スチープｅリカー、グルテンミール、無機窒
素源等が用いられる。また必要に応じて炭酸カルシウム
、燐酸２水素カリウム、燐酸水素２カリウム、塩化マグ
ネシウム、塩化ナトリウム等の無機塩が添加される。培
地温度は２０〜３０°Ｃが適当である。種培養は固体培
養でも液体培養でもよい。本培養の場合は攪拌培養、振
とう培養、通気培養等が用いられる。培養あるいは培養
滅菌中消泡を必要とするときはシリコーンオイル、界面
活性剤等の消泡剤が使用できる。

培養はｉｔｕｒｉｎｅ　−Ａが実質的に蓄積されるまで
続け、本物質の培養液からの抽出は、後記製造例に示す
ごとく、生成したｉｔｕｒｉｎｅ　−Ａは主に培養濾液
中に存在するので、遠心分離、または濾過により菌体を
除去した後、その上清液から精製、採取される。同抑制
因子を精製、採取するには通常微生物の代謝産物を採取
するのに用いられる手段を適宜利用することができる。

例えば減圧濃縮、凍結乾燥、溶媒抽出、樹脂による処理
、吸着剤による処理、結晶化、再結晶等の手段を単独、
あるいは任意の順序に組合せ、または反復して濾液から
目的物質の分離、精製、採取を行う。

さらに具体的にその一例を述べるならば、培養終了後、
培養液を濾過補助剤を用いて濾過し、菌体を除去する。

得られた濾液を減圧下で濃縮し、有機溶媒たとえば酢酸
エチル、ヘキサン、クロロホルム、アセトン等を添加し
て目的外物を抽出除去する。ここで得られた残物をアル
コールし、抽出物を減圧下で濃縮し、たとえば、シリカ
ゲルの如き吸気剤を用いたクロマトグラフィーにかける
。吸気剤としてシリカゲルを用いた場合には、溶出溶媒
に、ブタノール、エタノール、クロロホルム、アンモニ
ア水、水等の混合溶媒系を用いて展開溶出する。溶出液
を適宜分画し、目的物質を含む両分を集め減圧下低温で
濃縮乾固して粗物質を得る。得られた粗物質を更に精製
するためこれらの手段を適当に組合せて、使用すること
により、本物質は培養液から単離される。このようにし
て、得られたｉｔｕｒｉｎｅ　−　Ａは、そのもの自体
或は必要に応じて不活性の液体又は固体状の単体および
、または希釈剤、溶剤、乳化剤その他の補助剤等を用い
、目的植物病菌胞子に施行することにより、目的を達す
ることができる。

次に本発明の胞子抑制における実施例を示すが、同有効
成分の植物病原菌胞子抑制剤は諸種の修飾施行が可能で
あり、本発明は実施例に限定されるものではなくすでに
明らかにされている全ての施行法を含むものである。

製造例肉エキス１％、ペプトン１％、酵母エキス０．２５％、
ＮａＣ１　０，５％を含む液体培地に、バチルス・ズー
／ｆリスＮｏ，Ｎａ−ａ　ｐ　ｂ−１株を接種して２８
°Ｃにて５０時間好気適に培養した。得られた培養濾液
（３Ｑｌｔｅｒ）　　を減圧下低温で濃縮し、酢酸エチ
ル、洗浄後、メタノールで抽出した。抽出液を減圧低温
で濃縮乾固し、同物質をシリカゲル（ＯＤＳ）カラムク
ロマトグラフィー、展開溶媒６０〜８０％メタノールで
溶出し抑制因子含有、初流液２．５１ｉｔｅｒを採取し
た。この溶出液を濃縮乾固し、同操作を適時繰返すこと
によって白色粉末のｉｔｕｒｉｎｅ　−　Ａを１００　
ｍ　ｇ得た。このものは、別途得た標品と完全に一致し
た。

実施例イモチ病菌胞子発芽および発芽管抑制試験は同菌の胞子
濃度８Ｘ１０／ｍｌの懸濁液と表−１のように２０ｐｐ
ｍの，界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ　−　８３）で濃度を調
整した胞子発芽抑制剤施行液と良く混ぜ、その溶液をス
ライドグラス（１，５Ｘ　１０　ｃ　ｍ）に滴下し、２
５°Ｃ１１５時間インキュベートした。胞子発芽管抑制
判定はそのインキュベートした溶液にラクトフェノール
・コツトンブル−で染色（同定染色）し、顕微鏡下で胞
子の発芽および発芽管伸長を観察し計測する。その結果
を表−１に示した。

表−１ハイイロカビ病菌胞子　　　　　　　　＋＋十＋　　　
　　＊＃特許出願人　　工業技術院長　　等々力　　　
達しく、置丁；

Claims

【特許請求の範囲】

１　植物病原菌胞子発芽抑制因子ｉｔｕｒｉｎｅ−Ａを
有効成分とすることを特徴とする植物病原菌胞子発芽抑
制剤。