JPS61243021A - 生長促進、妊娠能の最適化および免疫刺激用薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 家畜および家禽の飼育に従来用いられてきた生長を促進
する物質、すなわち生長促進剤は、そのほとんどがもっ
ばら抗生物質および／または他の抗菌活性物質であｇ、
その大部分は異物である。

これらの物質は、生長促進のほかに、大量の動物飼育に
際して著しく高まる病気およびその伝染の危険を局限す
るという利点がある。しかしながら、上述の物質の配合
は、動物の肉および／または乳汁および／または層中へ
の残留による副作用や病原菌に対する抵抗性の発現とい
う点で不利である。

１９８４年５月２日に公開番号第０１０７０６０Ａ３号
として公開されたヨーロッパ特許第８３１１０３２５．
４号によれば、特定のオリゴヌクレオチド、核酸塩基な
らびに核酸塩基のカルボキシル誘導体およびアミノ誘導
体がヒトおよび動物でその遺伝的変動幅内において臓器
組＃１ｍを至適化するのに使用できることが知られてい
る。

オリゴヌクレオチドおよび核ｉ’ｉ！ｊＪｉｌは、周知
のように、核酸の天然分解産物であｇ、とくにリボ核酸
の分解産物たとえば酵母リボ核酸の酵素分解産物を挙げ
ることができる。

オリゴヌクレオチドとは、周知のように、モノマーの糖
の３′位が次の七ツマ−の糖の５′位とリン酸基を介し
て結合した、最高２０個までのヌクレオチドからなる直
線配列を意味する。その鎖長によｇ、ジ、トリ、テトラ
、ペンタヌクレオチドのように分類される。モノマー（
ヌクレオチド）は、周知のように、ヌクレオシドのリン
酸エステルである。ヌクレオシドは核酸塩基のＮ−グリ
コシドである。とくにフラノース型のＤ−リボースおよ
びＤ−２−デツキシリボースがグリコシドの糖成分とな
る。

核酸塩基には、プリンおよびピリミジン塩基ならびに希
な核酸骨格がある。希な核酸骨格は、酵素が触媒する変
換反応によって、通常の核酸塩基、アデニン、グアニン
、シトシン、ウラシルおよびチミンを生じる。これらの
通常の核酸塩基はプリン誘導体である で示されるアデニン（６−アミノプリン）、式で示され
るグアニン（２−アミノ−６−ヒドロキシプリン）、ピ
リミジン誘導体である式で示されるシトシン（２−ヒト
０キシ−６−アミノビリミジン）、式 で示されるウラシル（２，４−ジヒドロキシピリミジン
）、式 で示されるチミン（２，６−シヒドロキシー５−メチル
ピリミジン）である。

上に示した式は、アデニンの場合を除いてすべて少なく
とも１個の、二重結合に隣接したヒドロキシル基を有し
、このヒドロキシル基のオキソ基と平衡状態にある（ケ
ト−エノール平衡）。これをグアニンおよびシトシンに
ついて示せば、次式％式％ 環内に少なくとも１個の、二重結合隣接ヒドロキシル基
を有する核酸塩基、そのカルボキシルおよびアミノ誘導
体、ならびにこのような核酸塩基を末端塩基として含む
オリゴヌクレオチドのみが、上述のヨーロッパ特許の目
的に適していることが明らかにされている。したがって
、アデニン、そのカルボキシルおよびアミノ誘導体、な
らびにアデニンを末端塩基として含むオリゴヌクレオチ
ドの作用物質としての使用は除外されている。

この不活性の核酸骨格が、驚くべきことに、たとえばそ
れを窒素源として用いて、酵母の継代培養または酵母に
よる自己消化を行うと、活性化合物に変換することが明
らかにされた。不活性アデニン骨格の分解生成物におい
ては、酸化的脱アミノ化により二重結合隣接ヒドロキシ
ル基が生成する。これをアデニンについて示せば次式の
とおりである。

代謝たとえばｗｌ母の代謝においては、この方式によｇ
、たとえばグアニンはキサンチン（２，６−シヒドロキ
シプリン）、アデニンはヒポキサンチン（６−ヒドロキ
シプリン）、グアノシン（Ｄ−リボースとグアニンから
のβ−グリコシドヌクレオシド）はキサントシン（Ｄ−
リボースとキサンチンからのβ−グリコシドヌクレオシ
ド）、アドノシン（Ｄ−リボースとアデニンのグリコシ
ドヌクレオシド）はイノシン（Ｄ−リボースとヒポキサ
ンチンからのβ−グリコシドヌクレオシド）、グアニル
酸くグアノシン−５′−モノリン酸エステル）はキサン
チル酸（キサントシン−５′−モノリン酸エステル）、
アデニル酸（アデノシン−５′−モノリン酸エステル）
はイノシン酸（イノシン−５′−モノリン酸エステル）
に変換される。

これらの酸化的脱アミノ化で生成した代謝生成物はすべ
て、それぞれの出発物質よりも二重結合隣接ヒドロキシ
ル基を１個多く含み、本発明の目的に有効またはより有
効である。この脱アミン化反応の際に、尿酸のプリン骨
格もグリオキシルジウレイドに変換され、オロトＲ（ウ
ラシル−４−カルボン酸）はオロチジン−５′−モノリ
ン酸エステルに変換される（オロチジンはＤ−リボース
とオロト酸からのβ−グリコシドヌクレオシドである）
。これらの化合物はすべて、驚くべきことに、単独でま
たはたがいに混合して、ヒトおよび動物の生長促進、妊
娠能の最適化および免疫系の刺激に有用である。

リボ核酸、たとえば酵母から得られる酵母リボ核酸の酵
素分解生成物の継代培養および／または酸化的脱アミノ
化によｇ、作用物質の収率は著しく上昇しく約３倍）、
この方法の経済性は有意に改善される。

さらに動物実験によって、オロト酸またはオロチジンリ
ン酸エステルとグリオキシルジウレイドの混合物はＱＡ
Ｂ効果（Ｑ　Ａ　Ｂ　＝　Ｑｕｉｃｋ　Ａｎｔｉｂｏｄ
ｙＢｕｉｌｄｅｒ　）を有し、抗体産生細胞の形成を刺
激することが明らかにされた。オロト酸またはオロチジ
ンリン酸エステルとグリオキシルジウレイドの重量比は
１：２〜１：２０で使用される。グリオキシルジウレイ
ドの量をもつと多くしてもよいが、それによる改善は得
られない。

動物実験は次のように実施した。

オロチジンリン酸エステル１ｇとグリオキシルジウレイ
ド２ｇの混合物について、マウスでのヒツジ赤血球（Ｓ
ＲＢＧ）投与後のＴ細胞依存性Ｂ細胞反応（形質細胞の
形成）に対する影響を検討した。

ａ）ＢＡＬＢ／ｃ、マウス 用量：１０１１１９７に９体重、経口 １０η／Ｋｇ体重、経口の１回投与によｇ、抗体産生牌
細胞は統計的に有意に（ｐ＜０１００１）増加した。

ｂ）スイスマウス 用量：１０ａｙ／Ｋｓ体重、軽口 抗体産生牌細胞の統計的に有意な （＋）＜０．０１＞増加が認められた。

これらの所見は試験物質が免疫刺激作用をもつことを示
している。

したがって、本発明は、グアニンもしくはアデニン、グ
アニンもしくはアデニンのヌクレオシド、グアニンもし
くはアデニンのヌクレオチド、またはオロト酸の天然代
謝産物から選ばれる少なくとも１種の作用物質を含有す
ることを特徴とする、ヒトおよび動物の生長促進、妊娠
能の最適化および免疫刺激用薬剤に関する。作用物質と
しては、キサンチン、ヒポキサンチン、キサントシン、
イノシン、キサントシンリン酸、イノシンリン酸、オロ
チジンリン酸およびグリオキシルジウレイドから選ばれ
るものが好ましい。

とくに、免疫刺激に好ましい薬剤はオロチジンリン酸エ
ステルまたはオロト酸とグリオキシルジウレイドの重量
比１：２〜１：２０の混合物である。

本発明の薬剤は、１ｇあたり１種または２種以上の作用
物質１〜２００η、好ましくは３０〜１５０ａ＋ｓ＋、
とくに約８０１！Ｊを含有する濃縮物または単位用量剤
型とすることができる。また、１０００　Ｋｇあたり１
種または２種以上の作用物質１〜２００ｇ、好ましくは
３０・〜１５０ｇ、とくに約８０ｇを含有する、そのま
ま使用できる飼料または飲用水とすることもできる。

本発明はさらに、グアニンもしくはアデニン、グアニン
もしくはアデニン、のヌクレオシド、グアニンもしくは
アデニンのヌクレオチド、またはオロト酸の天然代謝産
物から選ばれる少なくとも１種の作用物質をヒトまたは
動物に投与することを特徴とする。ヒトまたは動物の生
長の促進、妊娠能の最適化または免疫の刺激方法を提供
する。とくに好ましい作用物質は、キサンチン、ヒポキ
サンチン、キサントシン、イノシン、キサントシンリン
酸、イノシンリン酸、オロチジンリン酸エステルおよび
グリオキシルジウレイドから選ばれる。

本発明の他の実施態様としては、上述の作用物質少なく
とも１種と、末端塩基がアデニンではないオリゴヌクレ
オチド、アデニンを除く核Ｆ！塩基、アデニンを除く核
酸塩基のカルボキシル誘導体およびアデニンを除く核酸
塩基のアミン誘導体から選ばれる少なくとも１種の作用
物質を混合して、ヒトまたは動物に投与する方法を挙げ
ることができる。

免疫刺激には、とくに、オロチジンリン酸エステルまた
はオロト酸とグリオキシジルジウレイドの重量比１：２
〜１：２０の混合物を投与することが好ましい。

この１種または２種以上の作用物質は、注入または注射
によｇ、あるいは経口的にたとえば飼料または飲用水と
ともに与えることができる。１日に体重１Ｋｇあたｇ、
０．０２〜１０ｍｇ、好ましくは２〜６１１ｔｇ、とく
に約３１！Ｆｊを投与する。

製造例 工程１ 購入したリボ核酸を、懸濁液中に乾燥物質約１０％が含
まれるように水に懸濁する。懸濁液の液体部分が１１あ
たり１モルの塩酸を含むように塩酸を加える。酸性懸濁
液を１時間速流煮沸し、冷却する。生成したアデニンお
よびグアニンの塩酸塩からなる沈殿を分離する。

工程２ トルラ酵母の毒性株を、工程１で＋１１造したプリン塩
基を唯一の窒素源とするほかは、通常の方法で培養する
。すでに第２世代から（４〜６時間後）、本発明の目的
に適した酵母を収穫することができる。酵母培養液を、
以後の操作に適した、乾燥物質約１５％を含む濃縮物が
得られるまで遠心分離する。この酵母は、アデニンおよ
びグアニンを特異的に酸化的脱アミノ化し、工程３に使
用できる。

所望によｇ、精製トルラ酵母の代わりに、パン酵母また
はビール酵母も使用できる。

工程３ 工業的に得られる酵母（トルラ酵母、パン酵母、ビール
酵母等）の、乾燥物質含量約１５％の懸濁液を、断熱し
た、加熱可能の、撹拌装置付タンクに取ｇ、発酵温度に
する。懸濁した酵母乾燥物質に対し１％オロト酸および
１％ニコチン酸を含む新たな栄養液を、このタンク内で
ほぼ一世代循環が行われる量だけ適用する。工程２で得
られた酵母の遠心分離物をタンク内の酵母懸濁物の乾燥
物質に対し重量比で１：７の割合で適用する。攪拌下に
２．５時間発酵を行う。ついで酵母乾燥物質に対してリ
ボ核酸乾燥物質が重量で２倍になるように、乾燥物質含
量２０％の市販酵母の懸濁液を加える。

工程４ この工程では、酵母細胞から遊離した酵素の存在下に、
酵母の自己消化およびリボ核酸の加水分解によｇ、本発
明の薬剤であるモノマーまたは短鎖核酸成分を製造する
。これらの薬剤はとくに腺組織および肝組織を、とくに
雌動物で最適化するのに適している。

工程３で製造され、加えたリボ核酸を含む酵母懸濁液を
穏やかに撹拌しながら加温し、温度を２時間で５５℃ま
で上げる。ついで、水酸化ナトリウムでｐＨを６に調整
する。ついで酵母乾燥物質に対して０．１％のパパイン
と０．２％の細菌性プロテアーゼを適用し、１２時１１
１５５℃に置いて自己消化させる。ついで混合物を煮沸
し、乾燥する。

この生成物の核酸塩基含量とＬ−アミノ酸オキシダーゼ
阻害力価を測定する。

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. （１）グアニンもしくはアデニン、グアニンもしくはア
   デニンのヌクレオシド、グアニンもしくはアデニンのヌ
   クレオチド、またはオロト酸の天然代謝産物から選ばれ
   る少なくとも１種の作用物質を含有することを特徴とす
   る、ヒトおよび動物の生長促進、妊娠能の最適化および
   免疫刺激用薬剤
2. （２）キサンチン、ヒポキサンチン、キサントシン、イ
   ノシン、キサントシンリン酸、イノシンリン酸、オロチ
   ジンリン酸エステルおよびグリオキシルジウレイドから
   選ばれる少なくとも１種の作用物質を含有することを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の薬剤
3. （３）最後の塩基がアデニンではないオリゴヌクレオチ
   ド、アデニン以外の核酸塩基、アデニン以外の核酸塩基
   のカルボキシル誘導体、およびアデニン以外の核酸塩基
   アミノ誘導体から選ばれるさらに少なくとも１種の作用
   物質を追加することを特徴とする特許請求の範囲第１項
   または第２項のいずれかに記載の薬剤
4. （４）オロチジリン酸またはオロト酸とグリオキシルジ
   ウレイドを１：２〜１：２０の重量比で含有することを
   特徴とする特許請求の範囲第１項から第３項までのいず
   れかに記載の免疫刺激用薬剤
5. （５）１ｇあたり、１種または２種以上の作用物質１〜
   ２００ｍｇ、好ましくは３０〜１５０ｍｇ、とくに約８
   ０ｍｇを含有する濃縮物または単位用量剤型とすること
   を特徴とする特許請求の範囲第１項から第４項までのい
   ずれかに記載の薬剤
6. （６）１０００Ｋｇあたり、１種または２種以上の作用
   物質１〜２００ｇ、好ましくは３０〜１５０ｇ、とくに
   約８０ｇを含有する通常の飼料または飲料水とすること
   を特徴とする特許請求の範囲第１項から第４項までのい
   ずれかに記載の薬剤
7. （７）ａ）毒性酵母株をアデニンおよび／またはグアニ
   ンを唯一の窒素源として用いるほかは普通に培養し、ｂ
   ）工程ａ）で得られた第二世代の酵母培養液を濃縮物の
   乾燥物質含量が約１５％になるように遠心分離し、ｃ）
   乾燥物質含量約１５％の新たな酵母の懸濁液を発酵温度
   に加温し、ｄ）工程ｃ）の懸濁液に、酵母乾燥物質に対
   して１％オロト酸および１％ニコチン酸を含む栄養液を
   ほぼ１回世代循環が起こるだけの量加え、ｅ）工程ｄ）
   の懸濁液に工程ｂ）の酵母濃縮物を乾燥重量比で１：７
   の割合で加え、ｆ）工程ｄ）の混合物を攪拌下に２．５
   時間発酵させ、ｇ）工程ｆ）の発酵懸濁液に乾燥物質含
   量２０％のリボ核酸懸濁液を、酵母乾燥物質重量に対し
   てリボ核酸乾燥物質重量が２倍になるように加え、ｈ）
   工程ｇ）で得られたリボ核酸含有酵母懸濁液を穏やかに
   撹拌しながら５５℃に加温し、ｉ）工程ｈ）で得られた
   酵母懸濁液のｐＨ値を６に調整し、ｊ）工程ｉ）の酵母
   懸濁液に、酵母乾燥物質あたり０．１％のパパインおよ
   び０．２％の細菌性プロテアーゼを加え、ｋ）工程ｊ）
   で得られた酵母懸濁液を１２時間５５℃で自己消化させ
   、ｌ）工程ｋ）で得られた混合物を煮沸し、乾燥するこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の薬剤の製造
   方法
8. （８）グアニンもしくはアデニン、グアニンもしくはア
   デニンのヌクレオシド、グアニンもしくはアデニンのヌ
   クレオチド、またはオロト酸の天然代謝産物から選ばれ
   る少なくとも１種の作用物質をヒトまたは動物に投与す
   ることを特徴とする、ヒトまたは動物の生長の促進、妊
   娠能の最適化または免疫の刺激方法
9. （９）作用物質はキサンチン、ヒポキサンチン、キサン
   トシン、イノシン、キサントシンリン酸、イノシンリン
   酸、オロチジンリン酸エステルおよびグリオキシジルウ
   レイドから選ばれる少なくとも１種である特許請求の範
   囲第８項記載の方法
10. （１０）特許請求の範囲第７項または第８項に記載の作
    用物質少なくとも１種と、末端塩基がアデニンではない
    オリゴヌクレオチド、アデニンを除く核酸塩基、アデニ
    ンを除く核酸塩基のカルボキシル誘導体およびアデニン
    を除く核酸塩基のアミノ誘導体から選ばれる少なくとも
    １種の作用物質の混合物を使用する特許請求の範囲第８
    項または第９項のいずれかに記載の方法。
11. （１１）オロチジンリン酸エステルまたはオロト酸とグ
    リオキシジルウレイドを重量比で１：２〜１：２０の割
    合で使用することを特徴とする、免疫刺激のための特許
    請求の範囲第８項から第１１項までのいずれかに記載の
    方法
12. （１２）作用物質１種または２種以上を、注入もしくは
    注射により、または経口的にたとえば動物の場合、飼料
    または飲用水とともに与えることを特徴とする特許請求
    の範囲第８項から第１１項までのいずれかに記載の方法
13. （１３）作用物質１種または２種以上を１日、体重１Ｋ
    ｇあたり０．０２〜１０ｍｇ、好ましくは２〜６ｍｇ、
    とくに約３ｍｇを投与することを特徴とする特許請求の
    範囲第８項から第１１項までのいずれかに記載の方法