JPS6121088A - 新規抗癌抗生物質ｋ−８０２−４及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な抗癌抗生物質に−８０２−４及びその製
造法に関する。

〔従来の技術〕

従来、微生物が生産する糧々の抗生物質が知られている
。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は医療用として有用な新規抗生物質を得ることを
目的とする。

〔問題を解決するだめの手段〕

本発明者は天然に存する多くの微生物が産生ずる物質に
ついて研究を行っていたところ、特定の微生物が新規抗
癌抗生物質に−８０２−４を産生することを見出し、本
発明を完成した。

本発明の抗癌抗生物質（以下、単に「抗生物質」という
）　Ｋ−８０２−４を生産する菌株（以下、「Ｋ−８０
２−４株」という）は次のような菌学的性状を有する。

（１）形態 栄養菌糸は合成培地および天然培地ともに良く発達し、
単純分岐するが分断することはない。

気菌糸は比較的長く伸長し単純分岐する。胞子柄は直線
状ないしゆるやかに屈曲しておシ、２０個以上の胞子の
連鎖が認められる。胞子の大きさは０．５〜０．６　Ｘ
　１．　Ｏ〜１．４μであり、その形は楕円形で、胞子
の表面は平滑である。

胞子のり、輪生板、鞭毛胞子などは認められ力いが、気
菌糸のからみ合ったこぶ様の結び目板体が認められる。

（２）各種培地における生育状態 イー・ビー・シャーリングら（Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓ
ｔ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、　１６巻、３１３頁、　１９６
６年）の方法に従い、２８℃、７〜１４日培養後の生育
状態を以下に示す。

（３）生理的性質 ■メラニン色素の形成 トリプトン・イーストプロス　陽性 ペプトン・イースト・鉄寒天　疑かわしいチロシン寒天
　　　　　　　陽性 ■チロシナーゼ　　　　　　　　陽性 ■硝酸塩の還元　　　　　　　　陰性 ■ゼラチンの液化　　　　　　　陽性 ■デンプンの加水分解　　　　　陽性 ■セルロースの分解　　　　　　陰性 ■脱脂乳の凝固、ペプトン化 凝　　　固　　　　　　　　　　　　　陽性ペプトン化
　　　　　　　　陽性 ■生育温度　　　１５〜４０℃ ■生育ｐＨ４，５〜８．５ （４）炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培
地、ｌ５Ｐ−９） Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、シュークロース、
Ｄ−キシロース、イノントール、Ｄ−マンニトール、Ｄ
−７ラクトース、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−
ガラクトース、を良く利用する。

サリシンをやや利用する。

（５）細胞壁構成成分 ＬＬ−ジアミノピメリン酸およびグリシンを有する。

以上、本菌株の性質を要約すれば、 ■　基底菌糸に分断は認められない。

■　気菌糸は単純分岐して直線状又はゆるやかに屈曲し
、輪生枝はない。胞子は２０個以上の連鎖となシ、胞子
のう、鞭毛胞子などは認められない。

■　細胞壁組成はＬＬ−ジアミノピメリン酸とグイセス
属に属する。

更に本菌株に類似する菌をニス・ニー・ワックスマンの
ザ・アクチノミセーテス第２巻（Ｓ、Ａ。

Ｗａｋｓｍａｎ　：Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ　Ｖｏｌ、　１．　）　、イー・ビー・シャーリング
とデー・ゴツトリープのＩＳＰの記載（Ｅ、Ｂ、Ｓｈｉ
ｒｉｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄ、Ｇａｔｔｌｉｅｂ　；　Ｉｎ
ｔ、　Ｊ。

５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、　１８．６９〜１
８９．２７９〜３９２　；　１９゜３９１〜５１２．聾
、２６５〜３９４）およびバーシーズ・マニュアル・オ
プ・デターミネイティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇ
ｅｙ’ｓ　ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第８版（１９７６
）より検索すると、本菌株は灰色系列に属し、胞子柄は
ワックス・フレキシビリス（＆ｃｔｕｓ　ｆｌｅｘｉｂ
ｉｌｉｓ）でメラニン色素を形成し、胞子表面は平滑で
あることを参酌すると類似する菌としては、ストレプト
マイセス・カカオイ・サブスペシーズ・アソエンシス（
Ｓｔｒｅ−ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃａｃａｏｉ　５ｕｂｓ
ｐ、　ａｓｏｅｎｓｉｓ　）、ストレプトマイセス・グ
リセオルビギノサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉ
ｓｅｏｒｕｂｉｇｉｎｏｓｕａ　）が挙げられる。

しかしながら、ストレプトマイセス・カカオイ・サブス
ペシーズ・アソエンシスは、その原記載ＣＡｇｒ、　Ｂ
ｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２９．８４８　（１９６５）
　　）によれば、胞子柄の形がオープンスパイラルであ
ること、アラビノース、キシロースをわずかにしか利用
しないこと、チロシン寒天培地では気菌糸を形成しない
が普通寒天培地では気菌糸を形成すること、硝酸塩の還
元能が陽性であること等の点で本菌株と相違する。

つぎにストレプトマイセス・グリセオルビギノサスＩＦ
Ｏ１３０４７（ＩＳＰ５４６９）株と本菌株の比較実験
を行ったところ、気菌糸の色系列、胞子柄の形などの形
態的性状、糖の利用性および生理的諸性質などにおいて
両菌株は良く一致した。また、両菌株で、気菌糸のから
み合ったこぶ様の結び目様体（Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓ
ｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、す、　４３７．　（１９６
９））がイースト麦芽宍天、オートミール寒天、グリセ
ロールアスパラギン寒天培地上で認められた。しかし、
可溶性色素の生成に関して両菌株を比較する・−ゴ＼ と、本゛菌株はオートミール寒天、スターチ無機塩寒天
培地上で色素を生成しないのに対し、ＩＦ０１３０４７
株はこれらの培地上で各々うすいピンクおよび明るい茶
灰色の色素を生成せず、また本菌株はグリセロールアス
パラギン寒天、シュークロース硝酸塩寒天培地上で各々
明るい茶色および赤茶色の色素を生成したが、ＩＦｏ　
１３０４７株ではいずれの培地においても色素の生成は
認められない点で相違した。

紙上の如く、本菌株は赤色ないし茶色系統の可溶性色素
を生成し、形態的性状および生理的諸性質においてＩＦ
ｏ　１３０４７株と近似するが、寒天培地上での可溶性
色素生成能において相違する。そこで、本発明者は本菌
株をストレプトマイセス・グリセオルビギノサスに属す
るものと同定し、ストレプトマイセス・グリセオルビギ
ノサス（Ｓｔｒｅ−ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｏｒ
ｕｂｉｇｉｎｏｓｕｓ　）　Ｋ−８０２−４と命名して
、工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第７１
９１号（ＦＥＲＭ　Ｐ−７１９１）として寄託した。

本発明の抗生物質に−８０２−４は上記菌株を栄養源含
有培地に接種し、２０〜４０℃で好気的に２〜５日間培
養することにより製造される。抗生物質に−８０２−４
生産株としては上記に−８０２−４株はもとよシ、その
人工変異株あるいは自然変異株であっても抗生物質に−
８０２−４株を生産する能力を有するものであれば、す
べて本発明に使゛用することができる。

抗生物質に−８０２−４生産菌株の培養には通常の放線
菌の培養法が用いられる。栄養培地としては、資化しう
−る炭素源、窒素源、無機物などを適当に含有する限シ
、合成培地、半合戒壇又は天然培地のいずれをも使用で
きる。

炭素源としては、例えばグルコース、シェークロース、
フラクトース、キシロース、ガラクトース、でん粉、グ
リセリン、糖蜜等が単独または組合せて用いられる。更
に菌の資化性によっては炭化水素、アルコール類、有機
酸等も使用し得る。

窒素源としては、無機若しくは有機窒素化合物、例えば
ペプトン、乾燥酵母、硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、カザミノ酸等、および例えば
肉エキス、大豆粉、綿実粉、コーンステイープリカー等
の天然物を単独または組合せて用いることができる。無
機物としては例えば塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、
塩化カリウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム、
硫酸第一鉄等を単独または組合せて用いることができる
。

培養物からの抗生物質に−８０２−４の単離は、後記実
施例２〜４に示す如く、本抗生物質の理化学的性状を考
慮して種々の方法を単独で、又は適宜組合せることによ
って行なわれる。

すなわち、培養物から抗生物質に−８０２−４を採取す
るには、培養物を遠心分離又は濾過等によって菌体と培
養Ｆ液に分別した後、菌体および培養Ｆ液から通常の分
離手段によシ抗生物質に−８０２−４を分離・精製する
。

好ましい分離・精製法としては、例えば次の方法が挙げ
られる。まず、菌体からはアセトン、メタノール等の有
機溶媒で抽出することにより、また培養Ｐ液からはｎ−
ブタノール、酢酸エチル、クロロホルム等の水と混和し
ない有機溶媒に抽出するか、アンバーライトＸＡＤ−１
１、ダイアイオンＨＰ−２、活性炭などの担体に吸着さ
せ７０％メタノールで溶出させることによシ粗物質を得
る。

次いでこの組物質を通常脂溶性物質の精製に使用する方
法、例えば抽出液を濃縮した後、゛シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー、オクタデシルシラン処理シリカゲル
カラムクロマトグラフィー等に付すことにより単離する
。

以上の如くして得られた抗生物質に−８０２−４は次の
ような理化学的性質を有する。

く理化学的性質〉 ■元素分析値 Ｃ＋５９．０〜５９．２チ １（：４．３〜４．５チ Ｎ：　０チ ■分子量 ３７２　（ＦＤ−ＭＡＳ８による） ■分子式 ％式％ ■紫外線吸収スペクトル（メタノール溶液）第１図 ■赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 ■溶解性 メタノール、エタノール、アセトンに可溶。

クロロホルム、酢酸エステル、水にやや溶は難い。ベン
ゼン、ヘキサン、石油エーテルに不溶。

■呈色反応 硫酸銅、ホルムアルデヒド−〇−ジニトロベンゼンに陽
性。ニンヒドリン、モーリッシュ、フェーリング試薬に
陰性。

■物質の色及び性状 黄橙色結晶 ０熱安定性（水溶液） 以下衆白 鋲止の如き理化的性質を有する本発明抗生物質に類似の
抗生物質としては、フレノリシンＢ（荷分Ｈ５８−１４
４３９号）、デオキシフレノリシン（米国特許第３４５
２０５１号）、カラ７アンジン（Ｊ。

Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、　２１．４５４．　（１９６
８））、Ｏ８−４７４２（特公昭５８−４２７６０号）
、およびライマイクン（特公昭３９−１４４９６号）が
挙げられる。

しかし、フレノリシンＢ１カラファンジンは赤外吸収ス
ペクトルの１７７０ｃｒｎ−’　に５員環ラクトンの吸
収が存在するが、本発明抗生物質ではこれに対応する吸
収はなく、１７２０ｃｒｎ−’　のカルボニル吸収を有
する。また、フレノリシンＢ１デオキシフレノリシンＢ
１カラ７アンジン、ライマイシンは紫外線吸収スペクト
ルにおいて、本発明抗生物質に吸収のある３　１０　ｎ
ｍの吸収帯が見られない。更にまた、Ｏ８−４Ｈ４２は
分子量が８７８〜９５２、かつ、旋光度〔α）：＋ｘｏ
４　であり本発明抗生物質とは相違する。以上の理由か
ら、抗生物質に−８０２−４は新規抗生物質であると判
断した。

〔作用〕

抗生物質に−８０２−４は次のような生物学的性質を有
する。

く生物学的性質〉 （１）　　急性毒性 ■　ＩＣＲ系マウス（体重２３〜２８ｆ！、雄性、１群
５匹）に抗生物質に−８０２−４を生理食塩水に溶解さ
せたものを尾静脈内又は腹腔内に１回投与し、投与後２
週間にわたシ一般状態および生死を観察した。また、Ｌ
Ｄ、、をＰｒｏｂｉｔ法によって算出した。結果を第１
表起示す。

以下余白 第１表 試験の結果、静脈内投与の場合特記すべき中毒症状はみ
られず、腹腔内投与では２４時間後に軽度の立毛がみら
れた。死亡例は静脈内投与では２４時間以内、腹腔内投
与では２４〜４８時間にみられた。

■　ウィスター系ラット（体重１６０〜１８０ｚ１雄性
、１群５匹）に抗生物質に−８０２−４を生理食塩水に
溶解させたものを尾静脈内に１回投与し、投与後２週間
にわたり一般状態および生死を観察した。また、ＬＤｖ
をＰｒｏｂｉｔ法によって算出した。結果を第２表に示
す。

第２表 試験の結果、投与後特記すべき中毒症状はみられず、死
亡例は２４時間以内にみられた。

（２）　　抗菌作用 抗生物質に−８０２−４の各種微生物に対する最小発育
阻止濃度（ＭＩＣ）を第３表に示す。

以下余白 第３表 （３）抗腫瘍作用 抗生物質に−８０２−４のマウスエールリッヒ（Ｅｈｒ
ｌｉｃｈ）　　腹水癌に対する治療効果を下記方法によ
り試験した。結果を第゛４表に示す。なお表中の延命率
は次式によシ求めた。

試験方法： ｌＸｌ０’個の腫瘍細胞をＩＣＲマウス（雄性）の腹腔
内に移植し、２４時間後より抗生物質に−８０２−４を
１日１回計１ｏ回腹腔内に投与した。

第３表 〔発明の効果〕 これらの結果から明らか外ように抗生物質に−８０２−
４はダラム陽性菌およびダラム陰性菌に対し抗菌力を有
している。また、マウスエールリッヒ腹水癌に対し治療
効果を示す。これらの抗菌活性および抗腫瘍活性からみ
て抗生物質に−８０２−４は医療用の抗生物質として有
用な物質である。

〔実施例〕 次に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例１ グルコース３チ、ペア’　ｌ−ン０．５％、肉エキス０
．５チ、塩化ナトリウム０．５　％　、炭酸カルミウム
０，２チから成る培地（ｐｆ（７，０）７０−を５００
Ｒ１容坂ロフラスコに分注滅菌後、これにストレプトマ
イセス・グリセオルビギノサスに−８０２−４株の斜面
培地よシ１白金耳を接種し、２８℃、２４時間振盪培養
を行った。この培養物を同上培地２００−を含む１！容
坂ロフラスコに１．５ｄ移植し、２８℃、２４時間振盪
培養を行った。

この種培養物を、グルコース３チ、ペプトン０，５チカ
ザミノ酸０．２　ｎ、リン酸二カリウム０．１チ、塩化
カリウム０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５チ、硫
酸第一鉄ｏ、ｏｏｉ＊、炭酸カルシウム０．２チ（ｐＨ
６，６）から成る培地２００Ｊｌ？を含むステンレスタ
ンクに２に接種し、２８℃で、毎分１００にの無菌空気
を送り７０時間通気攪拌培養を行った。

この培養液中にはに−８０２−４物質が１２０　ｍｃ７
／ｖＬｌ含まれていた。

実施例２ 実施例１で得られた培養液をケイソウ土を助剤としてフ
ィルタープレスで濾過し、　Ｋ−８０２−４物質を含有
する培養炉液１８０乃を得た。

この培養ν液を、塩酸でｐＨ４，５に修正し、アンバー
ライトＸＡＤ−■　２０ｎを充填しだカラムを通過させ
て吸着させた。吸着後、４０Ａの水で水洗し、７０チメ
タノールで溶出して活性区分を集めて減圧下に濃縮乾固
し、次いで酢酸エチル、アセトンに順次溶解して不溶物
を除去した。このようにして得られた抽出液を減圧濃縮
してに−８０２−４物質を含んだ褐色油状物質２６ｆＰ
を得た。

実施例３ 実施例１で得られた培養物をケイソウ土を助剤としてフ
ィルタープレスで濾過し、菌体とｆ液に分離する。菌体
にメタノール４０４を加え３０分攪拌した後、ブ７ナー
ロートで沖過し、メタノール層を採取する。戸液は抽出
タンクに戻し、酢酸エチル７（ｌを加え３０分攪拌した
後１夜靜置した後、酢酸エチル層を分取する。菌体から
のメタノール抽出液と酢酸エチル層を合わせて減圧下に
濃縮乾固し褐色油状物質３０ｐを得た。

実施例４ 実施例２で得られた褐色油状物質５？をシリカゲルカラ
ム（メルク社、キーセルゲル６０　、６００２）にかけ
、クロロホルム：メタノール（１０＋１）で展開した。

ニジエリシア・コリ（Ｅ　、　Ｃｏ１１）ＮＩＨＪを試
験菌として各７ラクシヨン（ｌＱｍｌ）を検定し、活性
区分を集めて減圧乾固した後、再び同上のシリカゲルカ
ラム（４００ｇ−）’にかけ、クロロホルム：メタノー
ル（５０：１〜１０　：　２）で展開して活性区分を濃
縮して針状結晶を得た。

この結晶をクロロホルムより再結晶して黄橙色針状結晶
を得た。区量は４２０！ｎ９であった。

実施例５ 実施例３で得られた褐色油状物質５デを３０チメタノー
ルにとかし、これを同じ３０チメタノールで平衡化した
オクタデシルシラン処理シリカゲル１００ｒｎｌ（富士
ゲル社製シリカゲル０ＤＳ−Ｑａ　）に添加し、同じ溶
媒で展開して１０ｄずつ分画した。各分画フラクション
を４１０　ｎｍの可視吸収と、ニジエリシア・コリＮＩ
　ＨＪによる抗菌活性をチェックし、活性区分を集めて
減圧濃縮し粗結晶を得た。この結晶をイソプロパツール
を用いて再結晶し、黄橙色柱状結晶５１０ｍｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質に−８０２−４の紫外線吸収スペクト
ル、第２図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示す図面
である。 以上 ％　　　　　　　第１図 イ 帽　珊　冊 手続補正書（自発） 昭和５９年８月１６日 特許庁長官志賀　　学　殿　　　　　　　適１　事件の
表示 昭和５９年　特　　許　願第１４３８４１　　号２　発
明の名称 新規抗癌抗生物質に−８０２−４及びその製造法ｒ３．
　　補正をする者 事件との関係　　　出願人 住　所　東京都豊島区南池袋１丁目２４査５号名　称　
株式会社　科薬抗生物質研究次代表者　持　塚　　　淘 ４代理人 ６、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、　補正の内容 （１）　　明細書中、第５頁、下から第２行「トリプト
ン」とあるを 「トリプトン」と訂正する。 （２）同、第６頁第１５行 「イノシトール」とあるを 「イノシトール」と訂正する。 （３）　同、第９頁第１３行 「生成せず、」とあるを 「生成し、」と訂正する。 ｔ４）　　同、第１６頁第１行 ［０８−４Ｈ４２Ｊとあるを ［Ｏ８−４７４２４と訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の理化学的性質を有する新規抗癌抗生物質Ｋ−８
   ０２−４。 （１）元素分析値 Ｃ：５９．０〜５９．２％ Ｈ：　４．３〜　４．５％ Ｎ：　０％ （２）分子量 ３７２（ＦＤ−ＭＡＳＳによる） （３）分子式 Ｃ＿１＿８＿〜＿１＿９Ｈ＿１＿６＿〜＿１＿７Ｏ＿８
   ＿〜＿９（４）比旋光度 〔α〕＾２＾５＿Ｄ−１００°（ｃ＝１メタノール）（
   ５）融点 ２２０〜２３０℃（分解） （６）紫外線吸収スペクトル（メタノール溶液）第１図 （７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 （８）溶解性 メタノール、エタノール、アセトンに可溶。 クロロホルム、酢酸エステル、水にやや溶 け難い。ベンゼン、ヘキサン、石油エーテ ルに不溶。 （９）呈色反応 硫酸銅、ホルムアルデヒド−ｏ−ジニトロ ベンゼンに陽性。ニンヒドリン、モーリツ シユ、フェーリング試薬に陰性。 （１０）物質の色及び性状 黄橙色結晶 ２、ストレプトミセス属に属し、抗癌抗生物質に−８０
   ２−４を生産する菌株を培地に好気的に培養し、培地中
   又は菌体中にＫ−８０２−４を蓄積せしめ、これを採取
   することを特徴とする抗癌抗生物質Ｋ−８０２−４の製
   造法。