JPS61124383A - 固定化線維素溶解活性酵素の安定化法 - Google Patents
固定化線維素溶解活性酵素の安定化法Info
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- JPS61124383A JPS61124383A JP59242706A JP24270684A JPS61124383A JP S61124383 A JPS61124383 A JP S61124383A JP 59242706 A JP59242706 A JP 59242706A JP 24270684 A JP24270684 A JP 24270684A JP S61124383 A JPS61124383 A JP S61124383A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、担体に固定化された線維素溶解活性酵素の安
定化法に関するものである。
定化法に関するものである。
近年、各種血栓症や塞栓性疾患の治療等にフィブリン（
線維素）及び血栓の溶解酵素である線維素溶解活性酵素
が広く用いられており、５れた臨床効果をもたらしてい
る。また、線維素溶解活性酵素の優れた血栓の溶解力を
利用して高分子材料表面にこの酵素を固定化して抗血栓
材料に使用するという報告もなされている（医学のあゆ
み１０１巻・ １４４頁・１９７１年）。しかし、線維
素溶解活性酵素は活性安定性が必ずしも良好でな（、担
体に固定化しても活性安定性はかわらず不安定である。
線維素）及び血栓の溶解酵素である線維素溶解活性酵素
が広く用いられており、５れた臨床効果をもたらしてい
る。また、線維素溶解活性酵素の優れた血栓の溶解力を
利用して高分子材料表面にこの酵素を固定化して抗血栓
材料に使用するという報告もなされている（医学のあゆ
み１０１巻・ １４４頁・１９７１年）。しかし、線維
素溶解活性酵素は活性安定性が必ずしも良好でな（、担
体に固定化しても活性安定性はかわらず不安定である。
まして、線維素溶解活性酵素を固定化して抗血栓性材料
として医療に使用するとなると酵素を固定化した材料の
保存等における経時的失活は大きな問題である。
として医療に使用するとなると酵素を固定化した材料の
保存等における経時的失活は大きな問題である。
また、腺維素溶解活性酵素を固定化して抗血栓性材料と
して医療に使用する場合には、この酵素を固定化した材
料の滅菌が必要である０通常酵素などの不安定な生理活
性物質はｗｔ蘭により活性の消失、低下を伴う、従っ・
て、滅菌時における酵素の失活も抗血栓性材料として使
用する場合の大きな問題である。
して医療に使用する場合には、この酵素を固定化した材
料の滅菌が必要である０通常酵素などの不安定な生理活
性物質はｗｔ蘭により活性の消失、低下を伴う、従っ・
て、滅菌時における酵素の失活も抗血栓性材料として使
用する場合の大きな問題である。
したがって１本発明の目的は、担体に固定化された線維
素溶解活性酵素の活性を安定に保持する方法を提供する
ことにある。
素溶解活性酵素の活性を安定に保持する方法を提供する
ことにある。
本発明者等は、かかる目的を達成すべく鋭意研究を重ね
た結果、担体に固定化された緑維素溶解活性酵素の保存
、滅菌等に際し、線維素溶解活性酵素が固定化された担
体を塩基性アミノ酸で処理することにより固定化線維素
溶解活性酵素の保存時、滅菌時等の失活、変性を防止で
きることを見出し１本発明を完成したものである。
た結果、担体に固定化された緑維素溶解活性酵素の保存
、滅菌等に際し、線維素溶解活性酵素が固定化された担
体を塩基性アミノ酸で処理することにより固定化線維素
溶解活性酵素の保存時、滅菌時等の失活、変性を防止で
きることを見出し１本発明を完成したものである。
すなわち本発明は、線維素溶解活性酵素が固定化された
担体の表面を塩基性アミノ酸で処理することを特徴とす
る固定化線維素溶解活性酵素の安定化法である。
担体の表面を塩基性アミノ酸で処理することを特徴とす
る固定化線維素溶解活性酵素の安定化法である。
本発明に用いられる担体は固体であればどのようなもの
でもよいが、好ましい担体としては１例えばガラス、カ
オリナイト１ ベントナイト、活性炭などの無機物質、
天然ゴム、セルロース、デンプン、コラーゲン、アガロ
ース、デキストラン。
でもよいが、好ましい担体としては１例えばガラス、カ
オリナイト１ ベントナイト、活性炭などの無機物質、
天然ゴム、セルロース、デンプン、コラーゲン、アガロ
ース、デキストラン。
タンパ質などの天然高分子、ポリスチレン、ポリアミド
、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリエチレ声ン、ポリ
ウレタン、ポリプロピレン、シリコン樹脂、ポリ塩化ビ
ニル、ポリメタクリル酸エステル、ポリビニルアルコー
ル、エチレン酢酸ビニル共重合体などの合成高分子など
からなる担体があげられる。担体の形状は、特に限定さ
れず５例えば繊維、中空系、チェーブ、フィルム、皮膜
、透過性膜、ピース、粉末など目的にｇＳして種々の形
状のものを用いることができる。
、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリエチレ声ン、ポリ
ウレタン、ポリプロピレン、シリコン樹脂、ポリ塩化ビ
ニル、ポリメタクリル酸エステル、ポリビニルアルコー
ル、エチレン酢酸ビニル共重合体などの合成高分子など
からなる担体があげられる。担体の形状は、特に限定さ
れず５例えば繊維、中空系、チェーブ、フィルム、皮膜
、透過性膜、ピース、粉末など目的にｇＳして種々の形
状のものを用いることができる。
本発明に用いられる線維素溶解活性酵素とは。
線維素の溶解に関与する酵素を意味する。そのような酵
素としては８例えばプラスミン、プリノラーゼ、ウロキ
ナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゲン、
アクチベーターなどがあげられる。
素としては８例えばプラスミン、プリノラーゼ、ウロキ
ナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゲン、
アクチベーターなどがあげられる。
これら線維素溶解活性酵素を担体に固定化する方法とし
ては、すでに知られている酵素の固定化方法が利用でき
１例えば「固定化酵素」 （千畑一部編、講談社）特開
昭５３−８８３９０号公報、特開昭５４．２６゛３９４
号公報などに記載されている方法が利用できる。
ては、すでに知られている酵素の固定化方法が利用でき
１例えば「固定化酵素」 （千畑一部編、講談社）特開
昭５３−８８３９０号公報、特開昭５４．２６゛３９４
号公報などに記載されている方法が利用できる。
本発明に用いられる塩基性アミノ酸とは２例えばアルギ
ニン、ヒスチジン、リジンなど塩基性側鎖を有するアミ
ノ酸を意味する。また２本発明に用いられるアミノ酸に
はまた。そのエステル、塩等の誘導体も含まれる。これ
らのうち特に保存安定性にはヒスチジン及びその＝ｉ体
が有効であり。
ニン、ヒスチジン、リジンなど塩基性側鎖を有するアミ
ノ酸を意味する。また２本発明に用いられるアミノ酸に
はまた。そのエステル、塩等の誘導体も含まれる。これ
らのうち特に保存安定性にはヒスチジン及びその＝ｉ体
が有効であり。
また滅菌安定性にはアルギニン及びその誘導体が特に有
効である。
効である。
塩基性アミノ酸は９ｇ通、氷に熔解して使用するが、場
合によっては、この溶液に塩あるいは水と混合する有ｉ
熔媒を添加してもよい、また、担体の表面を処理する塩
基性アミノｆｉ溶液の濃度は。
合によっては、この溶液に塩あるいは水と混合する有ｉ
熔媒を添加してもよい、また、担体の表面を処理する塩
基性アミノｆｉ溶液の濃度は。
希薄な溶液でも効果はあるが、好ましくは０．００００
１’重慢％〜３０重世％である。
１’重慢％〜３０重世％である。
担体の表面を塩基性アミノ酸で処理するには線維素熔解
活性酵素が固定化された担体の表面を塩基性アミノ酸溶
液に接触させればよく、そのため−には１例えば担体の
表面上に塩基性アミノ酸溶液を通すかあるいは担体を塩
基性アミノ酸溶液に浸漬すればよい、線維素溶解活性酵
素が固定化されたｔ旦体の表面と塩基性アミノ酸溶液と
を接触させるに際して好ましい温度は０〜５０℃であり
、必要に応じてロ拌、振とうなどを行えばよい。
活性酵素が固定化された担体の表面を塩基性アミノ酸溶
液に接触させればよく、そのため−には１例えば担体の
表面上に塩基性アミノ酸溶液を通すかあるいは担体を塩
基性アミノ酸溶液に浸漬すればよい、線維素溶解活性酵
素が固定化されたｔ旦体の表面と塩基性アミノ酸溶液と
を接触させるに際して好ましい温度は０〜５０℃であり
、必要に応じてロ拌、振とうなどを行えばよい。
本発明によって固定化線維素７８解活性酵素が安定化さ
れた担体は１種々の方法で滅菌することができる。滅菌
法としては０例えばエチレンオキサイド、プロピレンオ
キサイド、ホルムアルデヒド。
れた担体は１種々の方法で滅菌することができる。滅菌
法としては０例えばエチレンオキサイド、プロピレンオ
キサイド、ホルムアルデヒド。
β−プロピオラクトン、メチルブロマイド等の滅菌ガス
を用いるガス滅２あるいはＸ線、α線などのＴ：Ｌ追放
射線、高速電子線、ベータ線、α線、中性子、陽子など
の粒子放射線等を用いる放射＃！Ａ滅薗を行うことがで
き、滅菌ガスの圧力及び温度。
を用いるガス滅２あるいはＸ線、α線などのＴ：Ｌ追放
射線、高速電子線、ベータ線、α線、中性子、陽子など
の粒子放射線等を用いる放射＃！Ａ滅薗を行うことがで
き、滅菌ガスの圧力及び温度。
放射線の％１ｆｆｉ及び時間などは坦体に固定化された
線維素溶解活性酵素の付着細菌数に応じて任意でよい、
また、滅菌容器としては、滅菌ガスの出入ができ微生物
の侵入ができないものあるいは放射線のｉ３過できるも
のであればよく、形状は袋状に限らず、筒状、チェーブ
状１箱状などいかなる形でもよい。
線維素溶解活性酵素の付着細菌数に応じて任意でよい、
また、滅菌容器としては、滅菌ガスの出入ができ微生物
の侵入ができないものあるいは放射線のｉ３過できるも
のであればよく、形状は袋状に限らず、筒状、チェーブ
状１箱状などいかなる形でもよい。
本発明によれば、担体に固定化された線維素溶解活性酵
素の経時安定性を著しく高めることができるし、また滅
菌時における失活などを著しく防止することができる。
素の経時安定性を著しく高めることができるし、また滅
菌時における失活などを著しく防止することができる。
以下８実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明する
。
。
なお、線維素熔解活性は、金片、金井編著「臨床検査法
提要」改訂第２７版（金属出版）Ｖｌ−１１０を参ｑ＜
Ｈ，、人フィブリノーゲン水溶液にトロンビン生理食塩
水ｉ８Ｍを添加して作成したフィブリン平板にて測定し
た。すなわち、試料片をフィブリン平板上におき、３７
℃で２４時間放置した後、試料片のまわりのフィブリン
の溶解の程度を（直径）×（短径） （ｍｍ”）で表
した。
提要」改訂第２７版（金属出版）Ｖｌ−１１０を参ｑ＜
Ｈ，、人フィブリノーゲン水溶液にトロンビン生理食塩
水ｉ８Ｍを添加して作成したフィブリン平板にて測定し
た。すなわち、試料片をフィブリン平板上におき、３７
℃で２４時間放置した後、試料片のまわりのフィブリン
の溶解の程度を（直径）×（短径） （ｍｍ”）で表
した。
実施例１
直径５１の円形に切断したアミノアセクール化ポリビニ
ルアルコール・フィルム片（アミノアセタール化度５．
２モル％、厚さ１２０μ）を、エチレン−無水マレイン
酸共重合体の５ｉ４ｔ％アセトン溶液中に浸漬して、室
温で５時間放置した。放置後のフィルム片をアセトンで
洗浄したのち乾燥した。
ルアルコール・フィルム片（アミノアセタール化度５．
２モル％、厚さ１２０μ）を、エチレン−無水マレイン
酸共重合体の５ｉ４ｔ％アセトン溶液中に浸漬して、室
温で５時間放置した。放置後のフィルム片をアセトンで
洗浄したのち乾燥した。
乾燥後のフィルム片をウロキナーゼの生理食塩水溶液（
６００４１位／ｍｌ）中に浸漬して７℃で２４時間放置
した後、生理食塩水にて洗浄した。洗浄後。
６００４１位／ｍｌ）中に浸漬して７℃で２４時間放置
した後、生理食塩水にて洗浄した。洗浄後。
ヒスチジンの０．０１ｗｔ％水溶液中に浸漬して室温で
５分間放置後、フィルム片を引き上げて乾燥した。
５分間放置後、フィルム片を引き上げて乾燥した。
このようにして得られたヒスチジン処理ウロキナーゼ固
定化フィルム片の線維製溶解活性を測定したところ、フ
ィルム片はそのまわり直径２４ｍ５の円形状にフィブリ
ンを熔解した（ ５７６ｍ−”）。
定化フィルム片の線維製溶解活性を測定したところ、フ
ィルム片はそのまわり直径２４ｍ５の円形状にフィブリ
ンを熔解した（ ５７６ｍ−”）。
比較のため、ヒスチジン処理を行っていないウロキナー
ゼ固定化フィルム片も同様に線維製溶解活性を測定した
ところ、同じ５７６ｍｍ”の値を示した。
ゼ固定化フィルム片も同様に線維製溶解活性を測定した
ところ、同じ５７６ｍｍ”の値を示した。
この２種類のフィルム片を、温度６０℃及び３０℃。
湿崩５５％の恒温槽内に放置し、各温度における安定性
を試験し、第１表の結果を得た。
を試験し、第１表の結果を得た。
第１表
（単位繭２）
実施例２
直径５翔禦の円形に切断したボリウレクンフィルム（厚
さ１５０μ）を、無水マレイン酸−メチルビニルエーテ
ル共重合体２ （ｗｔ／ｖ） ９／ｇと分子量４００の
ポリエチレングリコール１ （押ｔ／ｖ）％をｔ容解
したアセトン溶液に室温で３０秒間漫漬し２次いで９０
〜１００℃で２時間減圧加熱した。このフィルムをウロ
キナーゼの生理食塩水溶液（６００車位／ ＋ａ １
）中に浸１ｒＩシて７℃で２４時間放置した後、生理食
塩水にて洗浄した。洗浄後アルギニン０．０１ｗｔ％と
ヒスチジン０．０１ｗｔ％の混合水；８液中に室温で２
分間浸漬した後、フィルムを乾燥した。
さ１５０μ）を、無水マレイン酸−メチルビニルエーテ
ル共重合体２ （ｗｔ／ｖ） ９／ｇと分子量４００の
ポリエチレングリコール１ （押ｔ／ｖ）％をｔ容解
したアセトン溶液に室温で３０秒間漫漬し２次いで９０
〜１００℃で２時間減圧加熱した。このフィルムをウロ
キナーゼの生理食塩水溶液（６００車位／ ＋ａ １
）中に浸１ｒＩシて７℃で２４時間放置した後、生理食
塩水にて洗浄した。洗浄後アルギニン０．０１ｗｔ％と
ヒスチジン０．０１ｗｔ％の混合水；８液中に室温で２
分間浸漬した後、フィルムを乾燥した。
このボリウレクンフィルムの室温（２５℃）での安定性
を試験した。比較のため、アルギニン・ヒスチジン処理
をしていないウロキナーゼ固定化ポリウレタンフィルム
を用いて同様に試験を行った。
を試験した。比較のため、アルギニン・ヒスチジン処理
をしていないウロキナーゼ固定化ポリウレタンフィルム
を用いて同様に試験を行った。
その結果を第２表に示す。
第２表
また、８２２種類のフィルムを市販の滅菌袋（ホギ製滅
苫バッグ）に収納し、完全シールした後。
苫バッグ）に収納し、完全シールした後。
放射ｉ＊菌（Ｃｏ−６０，２，５Ｍｒａｄ） した、滅
菌後のウロキナーゼ活性を測定した結果を第３表に示し
た。
菌後のウロキナーゼ活性を測定した結果を第３表に示し
た。
なお、フィルムは無閏状態であった。
第３表
（単位−り
実施例３
内径２１．外径３．５ｍｓ、長さ２０ｃ＋ａのポリ塩化
ピニルチ二−ブを、無水マレイン酸−メチルビニルエー
テル共重合体２ （ｗｔ／ｖ）％と分子ｌ ４００のポ
リエチレングリコール１ （ｗｔ／ν）％を熔解した
アセトン溶液に室温で１分間浸漬し１次いで９０〜１０
０℃で２時間減圧加熱した。このチェープをｈｕｍａｎ
ｍｅｌａｎｏ＋ａａ ｃｅｌｌｌｉｎｅから分離精製し
た組織ブラスミノーゲンアクチベーターの生理食塩水溶
液（６００単位／−１）に浸漬して７℃で２４時間放置
した後。
ピニルチ二−ブを、無水マレイン酸−メチルビニルエー
テル共重合体２ （ｗｔ／ｖ）％と分子ｌ ４００のポ
リエチレングリコール１ （ｗｔ／ν）％を熔解した
アセトン溶液に室温で１分間浸漬し１次いで９０〜１０
０℃で２時間減圧加熱した。このチェープをｈｕｍａｎ
ｍｅｌａｎｏ＋ａａ ｃｅｌｌｌｉｎｅから分離精製し
た組織ブラスミノーゲンアクチベーターの生理食塩水溶
液（６００単位／−１）に浸漬して７℃で２４時間放置
した後。
生理食塩水にて洗浄した。洗浄後、リジン塩酸塩０．０
５ｗｔ％の水溶液中に室温で１分間浸清した後。
５ｗｔ％の水溶液中に室温で１分間浸清した後。
チューブを乾燥した。
このポリ塩化ビニルチューブの３０℃での安定性を試験
した。測定にはチューブを長さ２１１１１の輪切に切断
して行った。また、比較のため、リジン処理をしていな
い＆Ｉｌ織ブラスミノーゲンアクチベーター固定化ポリ
塩化ビニルチューブを用いて同様に試験を行った。その
結果を第４表に示す。
した。測定にはチューブを長さ２１１１１の輪切に切断
して行った。また、比較のため、リジン処理をしていな
い＆Ｉｌ織ブラスミノーゲンアクチベーター固定化ポリ
塩化ビニルチューブを用いて同様に試験を行った。その
結果を第４表に示す。
第４表
実施例、 （単位“″市販
のＣＮＢｒ−５ｅｐｈａｒｏｓｅ （ファルマシア社）
樹脂を１ｍＭｌＩｃ１で数回洗浄後、この樹脂をストレ
プトキナーゼの生理食塩水溶液（６００単位／ ｓ Ｉ
）中に擾清して４℃で２４時間放置した後、生理食塩
水にて洗浄した。洗浄後、アルギニン０．０２ｗｔ％水
溶液中に室温で２分間浸清した後、樹脂を風乾した。
のＣＮＢｒ−５ｅｐｈａｒｏｓｅ （ファルマシア社）
樹脂を１ｍＭｌＩｃ１で数回洗浄後、この樹脂をストレ
プトキナーゼの生理食塩水溶液（６００単位／ ｓ Ｉ
）中に擾清して４℃で２４時間放置した後、生理食塩
水にて洗浄した。洗浄後、アルギニン０．０２ｗｔ％水
溶液中に室温で２分間浸清した後、樹脂を風乾した。
この樹脂の６０℃での安定性を試験した。＆Ｉ定には、
樹脂−粒をフィブリン平板上に置いて行った。
樹脂−粒をフィブリン平板上に置いて行った。
また、比較のため、アルギニン処理を行っていない樹脂
を用いて同様に試験した。その結果を第５表に示す。
を用いて同様に試験した。その結果を第５表に示す。
第５表
（単位鴎り
また。上記２種類の樹脂１ｇをそれぞれ市販の滅凹袋（
ホギ製、Ｍ菌バッグ）に収納し、完全シールした後、ガ
ス滅菌（エチレンオキサイドガス２０９Ａ−炭酸ガス８
０％、１ｋｇ／ｃｊＧ、４０℃、 ４０％Ｒ）Ｉ。
ホギ製、Ｍ菌バッグ）に収納し、完全シールした後、ガ
ス滅菌（エチレンオキサイドガス２０９Ａ−炭酸ガス８
０％、１ｋｇ／ｃｊＧ、４０℃、 ４０％Ｒ）Ｉ。
２時間）した、滅菌後のストレプトキナーゼ活性は樹脂
−粒をフィブリン平板上に置いて行い、その結果を第６
表に示した。なお、樹脂は焦面状態であった。
−粒をフィブリン平板上に置いて行い、その結果を第６
表に示した。なお、樹脂は焦面状態であった。
第６表
実施例、 （単位“つと
スチジンにかえてアルギニンを使用したはがば実施例１
と同様に処理した。
スチジンにかえてアルギニンを使用したはがば実施例１
と同様に処理した。
このようにして得られたアルギニン処理ウロキナーゼ固
定化フィルム片の線維製溶解活性を測定したところ、フ
ィルム片はそのまわり直径２４＠＊の円形状にフィブリ
ンを溶解した（ ５７６ｍｍ”）。
定化フィルム片の線維製溶解活性を測定したところ、フ
ィルム片はそのまわり直径２４＠＊の円形状にフィブリ
ンを溶解した（ ５７６ｍｍ”）。
一方、アルギニン処理を行っていないウロキナーゼ固定
化フィルム片も同様に線維製溶解活性を測定したところ
同じ５７６ｍ５＋”の値を示した。
化フィルム片も同様に線維製溶解活性を測定したところ
同じ５７６ｍ５＋”の値を示した。
この２種類のフィルム片を市販の滅菌袋（ボギ製、滅菌
バッグ）に収納し、完全シールした後。
バッグ）に収納し、完全シールした後。
ガス滅菌（エチレンオキサイドガス２ｏ％、炭酸ガス８
０％、 １ ｋｇ／ｃｉＧ、 ４０℃、 ４０％ＲＨ
，２時間）した、滅菌後のウロキナーゼ活性を測定した
結果を第７表に示した。なお１両種類のフィルム片とも
焦面状態であった。
０％、 １ ｋｇ／ｃｉＧ、 ４０℃、 ４０％ＲＨ
，２時間）した、滅菌後のウロキナーゼ活性を測定した
結果を第７表に示した。なお１両種類のフィルム片とも
焦面状態であった。
第７表
内径’ｌ ａｍ、外径３．５ｍｍ、長さ２０ｃ＋ｓのポ
リ塩化ビニルチューブをｍ水マレイン酸−メチルビニル
エーテル共重合体２ （ｗｔ／ｖ）％と分子量４００の
ポリエチレングリコールｌ （ｗＬ／ｖ）％をン容角
￥したアセトン溶液に室温で１分間浸漬したの５９０〜
１００℃で２時間減圧加熱した。このチューブをｈｕｍ
ａｎ＋ａｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｌｉｎｅから分離精
製したＭｉ織プラスミノーゲンアクチベーターの生理食
塩水溶液（単位／ ｍ １ ）中に浸漬して７℃で２４
時間放置した後。
リ塩化ビニルチューブをｍ水マレイン酸−メチルビニル
エーテル共重合体２ （ｗｔ／ｖ）％と分子量４００の
ポリエチレングリコールｌ （ｗＬ／ｖ）％をン容角
￥したアセトン溶液に室温で１分間浸漬したの５９０〜
１００℃で２時間減圧加熱した。このチューブをｈｕｍ
ａｎ＋ａｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｌｉｎｅから分離精
製したＭｉ織プラスミノーゲンアクチベーターの生理食
塩水溶液（単位／ ｍ １ ）中に浸漬して７℃で２４
時間放置した後。
生理食塩水にて洗浄した。？ｊｃ浄後、リジン０．０５
ｗｔ％の水溶液中に室；ユで１分間浸清した後チューブ
を乾燥した。このポリ塩化ビニルチューブと比較のため
１ リジン処理をしていないＭｉ織プラスミノーゲンア
クチベーター固定化ポリ塩化ビニルチューブを市販の滅
菌ｇ、（ホギ製滅菌バッグ）に収納し、完全シールした
後、放射線滅菌（Ｃｏ−６０，２，５Ｍｒａｄ） １．
、た、滅菌後のｍｍプラスミナノーゲンアクチヘーター
活性はチューブを長さ２１１１１の輪切に切断して行い
０．その結果を第８表に示した。なお。
ｗｔ％の水溶液中に室；ユで１分間浸清した後チューブ
を乾燥した。このポリ塩化ビニルチューブと比較のため
１ リジン処理をしていないＭｉ織プラスミノーゲンア
クチベーター固定化ポリ塩化ビニルチューブを市販の滅
菌ｇ、（ホギ製滅菌バッグ）に収納し、完全シールした
後、放射線滅菌（Ｃｏ−６０，２，５Ｍｒａｄ） １．
、た、滅菌後のｍｍプラスミナノーゲンアクチヘーター
活性はチューブを長さ２１１１１の輪切に切断して行い
０．その結果を第８表に示した。なお。
チューブは無菌状態であった。
第８表
Claims (1)
- （１）線維素溶解活性酵素が固定化された担体の表面を
塩基性アミノ酸で処理することを特徴とする固定化線維
素溶解活性酵素の安定化法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59242706A JPS61124383A (ja) | 1984-11-16 | 1984-11-16 | 固定化線維素溶解活性酵素の安定化法 |
| EP85308206A EP0182579B2 (en) | 1984-11-16 | 1985-11-12 | Method for stabilizing immobilized fibrinolytic enzyme |
| DE8585308206T DE3571329D1 (en) | 1984-11-16 | 1985-11-12 | Method for stabilizing immobilized fibrinolytic enzyme |
| US06/799,239 US4764466A (en) | 1984-11-16 | 1985-11-18 | Method for stabilizing an immobilized fibrinolytic enzyme |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59242706A JPS61124383A (ja) | 1984-11-16 | 1984-11-16 | 固定化線維素溶解活性酵素の安定化法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61124383A true JPS61124383A (ja) | 1986-06-12 |
| JPH0456591B2 JPH0456591B2 (ja) | 1992-09-08 |
Family
ID=17093034
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59242706A Granted JPS61124383A (ja) | 1984-11-16 | 1984-11-16 | 固定化線維素溶解活性酵素の安定化法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4764466A (ja) |
| EP (1) | EP0182579B2 (ja) |
| JP (1) | JPS61124383A (ja) |
| DE (1) | DE3571329D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6281326A (ja) * | 1985-10-02 | 1987-04-14 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 血栓溶解剤及びその製法 |
Families Citing this family (29)
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|---|---|---|---|---|
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| CA2047730A1 (en) * | 1989-02-24 | 1990-08-25 | Carl W. Gilbert | Immobilized cytokines |
| US5279954A (en) * | 1989-06-30 | 1994-01-18 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska And Bionebraska | Exopeptidase catalyzed site-specific bonding of supports, labels and bioactive agents to proteins |
| WO1991008288A1 (en) * | 1989-11-23 | 1991-06-13 | Novo Nordisk A/S | An immobilized enzyme preparation whereby a basic amino acid has been incorporated and a process for the isomerization of glucose or xylose |
| US5468622A (en) * | 1990-04-03 | 1995-11-21 | Immunomatrix, Inc. | Salt stabilization of antibody-enzyme conjugates heat-dried into paper |
| US5491082A (en) * | 1991-03-18 | 1996-02-13 | Director-General Of Agency Of Industrial Science And Technology | Plasminogen activator covalently bonded to a porous body of β-tricalcium phosphate |
| JP2500330B2 (ja) * | 1991-03-26 | 1996-05-29 | 工業技術院長 | 血栓溶解能を有する生体適合性材料 |
| US5378232A (en) * | 1991-08-28 | 1995-01-03 | Orion Therapeutic Systems, Inc. | Injection/activation apparatus |
| US5288489A (en) * | 1991-08-28 | 1994-02-22 | Orion Therapeutic Systems, Inc. | Fibrinolysis and fibrinogenolysis treatment |
| US5304118A (en) * | 1992-12-16 | 1994-04-19 | Trese Michael T | Method for performing a vitrectomy on an eye |
| US6995248B2 (en) * | 2001-07-16 | 2006-02-07 | Dr. Chip Biotechnology, Inc. | Immobilization of nucleic acids |
| US7776026B2 (en) * | 2002-02-06 | 2010-08-17 | Nuvue Technologies, Inc. | Method for vitreous liquefaction |
| US7407955B2 (en) | 2002-08-21 | 2008-08-05 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co., Kg | 8-[3-amino-piperidin-1-yl]-xanthines, the preparation thereof and their use as pharmaceutical compositions |
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| PE20091730A1 (es) | 2008-04-03 | 2009-12-10 | Boehringer Ingelheim Int | Formulaciones que comprenden un inhibidor de dpp4 |
| KR20200118243A (ko) | 2008-08-06 | 2020-10-14 | 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 | 메트포르민 요법이 부적합한 환자에서의 당뇨병 치료 |
| US20200155558A1 (en) | 2018-11-20 | 2020-05-21 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Treatment for diabetes in patients with insufficient glycemic control despite therapy with an oral antidiabetic drug |
| US9333280B2 (en) | 2009-02-25 | 2016-05-10 | Teleflex Medical Incorporated | Stabilized enzyme compositions |
| US8545459B2 (en) * | 2009-02-25 | 2013-10-01 | Teleflex Medical Incorporated | Stabilized enzyme compositions |
| KR102328772B1 (ko) | 2009-11-27 | 2021-11-19 | 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 | 리나글립틴과 같은 ｄｐｐ－ｉｖ 억제제를 사용한 유전자형 검사된 당뇨병 환자의 치료 |
| CA2797310C (en) | 2010-05-05 | 2020-03-31 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Glp-1 receptor agonist and dpp-4 inhibitor combination therapy |
| AR083878A1 (es) | 2010-11-15 | 2013-03-27 | Boehringer Ingelheim Int | Terapia antidiabetica vasoprotectora y cardioprotectora, linagliptina, metodo de tratamiento |
| US20130303554A1 (en) | 2012-05-14 | 2013-11-14 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Use of a dpp-4 inhibitor in sirs and/or sepsis |
| EP3685839A1 (en) | 2012-05-14 | 2020-07-29 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Linagliptin for use in the treatment of albuminuria and kidney related diseases |
| EP4233840A3 (en) | 2016-06-10 | 2023-10-18 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Combinations of linagliptin and metformin |
Family Cites Families (7)
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|---|---|---|---|---|
| GB1274869A (en) * | 1969-02-11 | 1972-05-17 | Guinness Son & Co Ltd A | Enzymes |
| JPS5137343B2 (ja) * | 1972-12-07 | 1976-10-15 | ||
| FR2308636A1 (fr) * | 1975-04-23 | 1976-11-19 | Choay Sa | Matrices portant simultanement plusieurs fonctions enzymatiques differentes, leur procede de production, et procede de preparation d'oligonucleotides et de polynucleotides a terminaisons specifiques, a l'aide desdites matrices |
| JPS54147916A (en) * | 1978-05-12 | 1979-11-19 | Sumitomo Chem Co Ltd | Preparation of urokinase injection |
| US4226935A (en) * | 1978-08-07 | 1980-10-07 | W. R. Grace & Co. | Enzymatic diagnostic composition |
| US4246349A (en) * | 1978-09-05 | 1981-01-20 | Corning Glass Works | Stabilization of immobilized bacteria |
| DE3316601A1 (de) * | 1983-05-06 | 1984-11-08 | Battelle-Institut E.V., 6000 Frankfurt | Verfahren zur immobilisierung von proteinen oder enzymen |
-
1984
- 1984-11-16 JP JP59242706A patent/JPS61124383A/ja active Granted
-
1985
- 1985-11-12 EP EP85308206A patent/EP0182579B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-12 DE DE8585308206T patent/DE3571329D1/de not_active Expired
- 1985-11-18 US US06/799,239 patent/US4764466A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6281326A (ja) * | 1985-10-02 | 1987-04-14 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 血栓溶解剤及びその製法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0182579A1 (en) | 1986-05-28 |
| JPH0456591B2 (ja) | 1992-09-08 |
| US4764466A (en) | 1988-08-16 |
| EP0182579B2 (en) | 1992-08-26 |
| EP0182579B1 (en) | 1989-07-05 |
| DE3571329D1 (en) | 1989-08-10 |
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