JPS61119191A - 生物活性の人ｉｌ−１蛋白のコ−ドを有する人ｉｌ−１ｃｄｎａ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は人のインターロイキン（ＩＬ−１）のコードを
冑ｔるヌクレオチド配列からなる核酸、その断片及び得
らｈるポリペプチド、生物活性の新規人ＩＬ・１蛋白の
コードを持つ切断された人ＩＬ−１ｃＤＮＡｉ！配列に
関する．本発明に関し旧Ｈ許可Ａ−１１５６１４，Ａ−
１１７８３３及びＣＡＯ４　１８６に於いて経済的援助
が旧Ｈによフて与えられた。

［発明の利用分野及び先行技術コ 単核食細胞が抗原の認識及び白血球の活性化に要求され
、二九らＪｇ染性、炎症性及び悪性の病気に対する宿主
の免疫応答に重要な役割を果たしていることはよく確立
されていることである．ｇ染及び偏寄に対する免疫ＩＲ
能及び宿主の応答の饅つかの頁はそれらの単核食細胞に
刺激されて放出される種々の蛋白および他のメディエー
タ−（媒介物）によるものである（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ
　ｃ．Ａ．ｌ　Ｒｅｖ。

Ｉｎｆ．　Ｄｉｓ．　８．５１−５９（１９８４））−
これらには熱に対する媒介物である白血球的発熱物質（
ＬＰ）、；急性相（フェーズ）応答の幾つかの化合物の
誘導物である白血球的内在媒介￥ｌＪ（ＬＥＭ）　　；
リンパ球増殖及びリンボキンの生産の両方を増大させる
リンパ球活性因子（ＬＡＦ）　；及びプロスタグランジ
ンＥ２及び滑液細胞中のコラ−ゲナーゼ合成を誘導する
単核細胞因子（ＭＣＦ）がある、　ＬＰ及びＬＡＦ活性
が共精製し、共通の物理的性貿を分は持つことが実証さ
れた（ローゼンヮッサ−（Ｒｏｓｅｎｗａｓｓｅｒ）　
Ｌ−Ｊ、、ディナレロ（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ）　Ｃ，Ａ
、　　及びロゼンタール（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ）　Ａ、
Ｓ、　　、　　　、　　　１５０．７０９−７１４（１
９７９）　；ロゼンワッサーＬ、Ｊ、及びディナレロＣ
，Ａ。

１．７３３．１３４−１４２（１９８１）　；マーフィ
Ｍｕｒｐｈｙ、　Ｐ、Ａ、、シモン（Ｓｉｍｏｎ）、　
Ｐ、Ｌ、、及びウィロウビ−（Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ）
、　Ｗ、Ｆ、　　、　　　　　、　１２４゜２４９８−
２５０１（１９８０）　、同様にＬＰとＬＥｌ’ｌが同
じ分子でないとしても密接に関係しているという証拠が
ある（カンブシュミツト（にａｓ＋ｐｓｃｈａｉｄｔ）
、　Ｒ，Ｆ、ザフ１　　　　“′″″’Ｊ　ｙ　’）　
７　：／　Ｆ　ｙ１９　：ｆリツ７ｕ２＊）２２オブザ
ホストＣＭ、Ｃ，ボヮンダ（Ｐｏｗａｎｄａ）　　Ｐ、
Ｇ、カノニコ（Ｃａｎｏｎｉｃｏ　）編］　５５−７４
　　［エルセピア／ノースオランダ、アムステルダム１
９８１］　）及びさらにＬＡＦとＭＣＦが同しであると
いう証拠がある（ミゼル　（Ｍｉｚｅｌ）、　５．８．
、　　ダイヤ−（Ｄａｙｅｒ）、　ＪｏＭ”＋フレイン
（にｒａｎｅ）＋　Ｓ、Ｍ、、　　及びメルゲンハゲン
（Ｍｅｒｇｅｎｈａｇｅｎ）、　　Ｓ、Ｅ、　　Ｐｒｏ
ｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ　７８．２４７４−２４７７（１９７９）　）　
、インターロイキン−１（ＩＬ−１）という用語はここ
でこれらの種々の生物活性を記載するのに使用するがＩ
Ｌ−１が単一の物質を表わすのか又は関連分子の一群を
あられすのか現在は明かでない０本発明以前にはこの技
術で人ＩＬ−１のコードに対するヌクレオチド配列の知
識はなかった。この技術で一般的なりローニング手順は
知られているが先行技術に人のＩし−１に対するコード
のヌクレオチド配列を同定及びクローン化するのに使用
することの出来る教え又は示唆はなかった。

［問題を解決する手段］ 本発明は人ＩＬ−１に対するコードのヌクレオチド配列
及びその断片からなる核酸及び得られるポリ　　　　　
（。

ペプチド及び蛋白質に間するものである。特定して言え
ば、本発明は細菌エンドトキシンによって刺激された付
着性の人の単核細胞から単離されたポリ（＾）　ＲＮＡ
の逆転写によって合成されるｃＤＮＡのクローニングか
らなる。ハイブリッド選択ポリ（Ａ）　ＲＮＡをキセノ
パスラエビス（Ｘｅｎｏｐｕｓ　１ａｅｖｉｓ）の卵細
胞中に注入することは生物学的に活性のＬＡＦの合成に
向かわす、ヌクレオチド配列並びにポリ（Ａ）　ＲＮＡ
の指示する網赤血球翻訳の免疫沈殿は人のＩＬ−１が先
ず最初に分子量３０７４７を有する前駆体ペプチドとし
て合成することを示唆する。本発明は又生物学的活性人
ＩＬ−１蛋白をコード化している切断された人ＩＬ−１
ｃＤＮ＾配列にも間する。これらの断片ｃＤＮＡ配列及
びそれから得た新規な生物学的に活性の人ＩＬ−１白は
出発物質として完全な人ＩＬ−１ｃＤＮＡ配列を含有し
ているクローンを使用して遺伝子工学手順によって得る
ことが出来る。特定して言えば、式Ａを参照して残基５
３４及び８９３の間に位置するヌクレオチド配列は生物
活性ＩＬ−］蛋白のコードを有するものである。この範
囲内には生物学的に活性のＩし一１蛋臼のコードを有す
る二つの領域がある。即ち（＋）残基５３４と７１０の
間に位置するヌクレオチド配列及び（２）残基７１１及
Ｕ３９３の間に位置するヌクレオチド配列。

単核細胞（単球）を人の末梢血液単核細胞中のリンパ球
からガラス表面への付着を利用して分離した。付着性の
車分子膜（８Ｏ−９０Ｘ単球、食細胞化されたスタフィ
ロコツカル粒の顕微鏡下の検査によって判断）をエンド
トキシンで刺激した。細胞核酸全部は付着性細胞の個体
群から抽出し、ＣｓＣｌを通過させて遠心により精製し
くチャーゲイン（Ｃｈｉｒｇｗｉｎ　Ｊ、Ｍ、）ブラシ
ビラ（Ｐｒｚｙｂｙｌａ）Ａ、Ｂ、、マクドナルド（Ｍ
ｃＤｏｎａｌｄ）、　Ｒ，Ｊ、及びルッター（Ｒｕｔｔ
ｅｒ）Ｗ、Ｊ、　　’　　ｍｉ　　　１Ｂ、　５２９４
−５２９９　（１９７９））　、オリゴｄＴのセルロー
ス上を通過させることによってポリ（Ａ）　ＲＮＡを濃
縮した（バンロル（Ｂａｎｊｌｅ）Ｊ、Ａ。

マックスウェルＡ、■及びハン（Ｉｌａｈｎ）Ｗ、Ｅ、
　　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｇ＋、　７２
．４１３−４２７（１９７６）　）。

ポリ（Ａ）　ＲＮＡの一部分を３５５−メチオニンを含
有する兎の網赤血球溶菌物を使用してインビトロ翻訳に
よって蛋白合成を検定した（ペルハム）１．Ｒ，８゜及
びジャクソンＲ，Ｊ、　　ｕ、、　　ｉ　　ｈ’、６７
　２４２−２５６（１９７６）　、　Ｈ訳生成物を兎抗
人間１シー１抗血清を使用して免疫沈殿させた（ディナ
レロＣ，Ａ、、レンツｙ−Ｌ、及びウォルフＳ、Ｍ、　
　、　　’　、　ｌ　ｖｅｓ　、６０゜４６５−４７２
（＋９７７）　；ディナレロＣ，Ａ、、レンツ７−Ｌ。

及びウォルフＳ、Ｍ、　　　、　　　、　　　、　　’
、Ａ７４、４６２３−４６２７（１９７７）　、そして
スタフィロコツカル蛋白Ａ（クレスラ−５，Ｗ、　　、
　　　　　、　　１１５゜１６１７−１６２４（１９７
５）イバリーし口、及びジョンズＰ、Ｐ。

”　　　、　９７２４−３５（１９７９））を使用して
免疫沈殿させた。免疫沈殿物を５９５−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動（５０５−ＰＡＧＥ）及びオートラジ
オグラフィーで分析した。刺激された単球誘導ポリ（Ａ
）　ＲＮＡの網赤血＃Ｒ訳は二つの強い免疫沈殿し得る
帯を示し明らかな分子量４２１００及び３９８００をも
って移動し、これらは非刺激ポリ（Ａ）　ＲＮＡ沈殿中
に存在しなかったものである。第三のパントン　　　　
が２８０００分子量に移動したがこれも刺激に特異的で
あるようであった。これらの５Ｏ５−ＰＡＧＥによって
決定した三つの蛋白質の見掛は上の分子量の測定は電気
泳動の条件に依存しているようであったつこれらの蛋白
質は以下のように表わされる。

４３にバンド　４２６００±１！００；３５にバンド　
３４６７８±４８００　；２６　Ｋバンド２５５２０±
３３００ １２　ｈのエンドトキシン刺激単球から抽出した幾つか
のポリ（Ａ）　ＲＮＡ　＠＄１物をプールし、庶糖勾配
沈降によって分画した。これらのフラクションをエタノ
ールから沈殿し、網赤血球溶菌物で翻訳し、そして上記
のように免疫沈殿及び電気泳動によって分析した６選ば
れたフラクションからのＲＮＡも卵細胞中に注入した。

２０個の卵細胞の各々の培地からの培養基培地をセファ
クリルＳ−２００上を通過させ溶離したフラクションを
上記のようにＬＡＦ活性につき検定した。活性の大部分
が３５にバンド（フラクション１３を中心とする）を含
有するフラクションの周りに群をなしていることが明か
である。

ｃＤＮＡのライブラリはオカヤマ（Ｏｋａｙａｍａ）及
びべ　　　　（・ルグＣＢｅｒｇ　）　　ｌ　　、　　
　、　　Ｂｉｏ　、　２．１６１−１７０（１９８２）
によフて記載された技術およびベクターを使用してエン
ドトキシン刺激単球ポリ（Ａ）　ＲＮＡから調製した。

このライブラリは刺激した、及び刺激していない単球ポ
リ（＾）　ＲＮＡから造った３２ＰラベルしたｃＤＮＡ
の探り並びに上記の庶糖勾配のフラクション１２内に含
有されていたＲＮＡから造フた３２ＰでラベルしたｃＤ
ＮＡの探りで選別した。三つの異なる大きさのクラスを
表わす五個のｃＤＮＡクローンを、刺激に対し特異的で
あり、庶糖勾配のフラクション１２内に含有された物質
と強く間係しているという基準に従って単離した。

ｃＤＮＡはハイブリッド選択ＲＮＡ　　（マニアティス
Ｔ。

、フリッシュＥ、Ｆ、及びサンプルツクＪ、ｉ旦土ニー
−ロー−′：　　ハ　　１−　ニ　　ル、コールドスプ
リングハーバ−ラボラトリ−、ニューヨーク（１９８２
））を造石のに使用したが、上記と似たインビトロの翻
訳で分析した。幾つかのクローンからのｃＤＮＡをＲＮ
Ａにハイブリッド化し、これは庶糖勾配プロフィールの
フラクション１２の翻訳の結果得られるものに似た蛋白
に翻訳された。

クローンｐＡ−２６は標的ＲＮＡのハイブリッド選択に
対し最も高い効率を有しており、同様にスクリーニング
に使用したｃＤＮＡ探り（ブロウブ）に対し最も強いハ
イブリッド親和性に関連していた。ｐＡ−２６中に含有
されるｃＤＮＡ転写を図面に示すように配列決定をし、
長さがおよそ９２０塩基対であることがわかった。この
配列に対する単一の最も長い間放読みフレーム（ｏｐｃ
Ｄ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ）は〜６８ｏ。

分子量の蛋白質に対してのコードを有していた。

これは網赤血球の翻訳によって見いだされた蛋白に基づ
いて予期される益子の大きざに対応しないのでｃＯＮＡ
転写は完全な長さのものでないと結論した。しかもニッ
クトランスレーション（刻み目翻訳）したｐＡ−２６ブ
ラスミドＤＮＡが刺激した単球ポリ（Ａ）　ＲＮＡのノ
ーザンプロット（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｂｌｏｔ）に対し
てハイブリッド化されたときに（ラベ（Ｒａｖａ）Ｎ、
等、　Ｎｕ、　　　ｉｄ　　Ｒ，２，８１５−８２５（
１９７９）；マニアチスＴ、フリッシュＥ、Ｆ、及びサ
ンプルツク、Ｊ、　ｏｌｅ　ｕｌ　ｒ　　Ｉｏｎｉｎ　
ニアラボラトリ−マニュアル（Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ　Ｍａｎｕａｌ）、コールドスプリングハーバ−ラボ
ラトリ−、ニューヨーク（１９８２））　、そのｃＲＮ
Ａは長さが約１６００ヌクレオチドの単一バンドとして
みえた。二つの追加的なｃＤＮＡライブラリをより新し
いオカヤマとベルブの手順（山ｏ」ｓ工ＱＪ」」工ＬＬ
、　３２８０−２８９（１９８３）を使用して４−ｈと
１２−ｈのエンドトキシンで刺激した人単球ポリ（Ａ）
　ＲＮＡから構築した。結果は５Ｎの４ｈ及び４１１の
１２ｈクローンがクローン＋）Ａ−２６から合成された
ＤＮＡｔＪす（ブロウブ）に対しハイブリッド化された
。これらのクローンのＣＤＮＡ挿入物は三つの異なる大
きさの頚であった。最も大きな挿入物１５６０塩基対（
アガロースゲル電気泳動で決定）は＋２ｈ（１クローン
）及び４ｈ（４クローン）のライブラリの両方を含有し
ていた。

４−ｈクローンのｐｃＤ−４１５はクセノパス、ラエビ
ス（Ｘｅｎｏｐｕｓ　１ａｅｖｉｓ）卵細胞中に注入さ
れた時にＩＬ−１ｍ（ＬＡＦ）生物活性を有するＲＮＡ
ＩＩ！！物に対しハシ　　　イブリッド化される。さら
にこの活性は刺激されていない単球ポリ（Ａ）　ＲＮＡ
及び対照のｃＤＮＡ　１２ｈクローンｐｃＤ−１２１４
から造られたハイブリッド選択１？ＮＡからのものには
なく、これは構造上ｐｃＤ−４１５クローンと関係して
いない、セファクリルＳ−２００カラム上のこのものの
溶ａ装置は約分子量２００００を表わしている。これは
刺激された単球メディア（ローゼンワッサＲ１」、及び
ディナレロＣ−Ａ、−【ｕ」ユ１ｉ旦１１工６３．１３
４−１４２（１９８１）））から単離されたＩＬ−１の
分子の大きさと一致している。

上記から我々は三つの構造的に関係したクローンｐＡ−
２８、ｐｃＤ−４１５及びｐｃＤ−１２１８が人の単球
ＩＬ−１に対するｃＤＮＡを含有していると結論付けた
。これらのクローンは種々のバクチリオフアジＭ−１３
クローニングベクター中のサブクローニングに従うジデ
オキシ鎖（ストランド）末端化技術によって配列を決め
た。（１！１面は配列決定に対して使用した方策の略式
的なまとめである。−啓上の目盛りは式Ａに詳細に記載
されている配列の位ａｌｌに間するヌクレオチド位置を
示すものである。目盛りのすぐ下の線は配列の程度を表
わしている。線の太い部分はＩＬ−１前駆体に対する予
想したコード領域を　　　　　６表わしている。配列決
定手順中で使用した制限位置が示されている（閏いに円
Ｈａｅｌｌｌ、及び閉じた円Ａｌｕ　Ｉ　）　、各ｃＤ
ＮＡクローンの下の矢印は、ジデオキシターミネータ−
法（サンガー（Ｓａｎｅｅｒ）Ｆｌ、ニックレン（Ｎｉ
ｃｋｌｅｎ、　Ｓ、）及びコウルソン（Ｃｏｕｌｓｏｎ
）、Ａ、Ｒ，、、、ｉ。

７４、５４６３−５４６７（１９７７）　　；ピッギン
（Ｂｉｇｇｉｎ、Ｍ、Ｄ、）、ギプソン（Ｇｉｂｓｏｎ
　Ｔ、Ｊ、）及びホンダ（Ｈｏｎｇ　Ｇ、Ｆ）、　　　
、　Ａ　　、　　’　　ＵＳＡ　８０．３９６３−３９
６５（１９８３））を使用して　Ｍ１３サブクローンか
ら読んだゲル配列の方向及び程度を示す（メッシング（
Ｍｅｓｓｉｎｇ）、　Ｊ、ヴイエイラ（Ｖｉｅｉｒａ）
、　Ｊ、ｌ　江邸１９、２６９−２７６（１９８２）　
’）　　（ｌρ８及びｍｐ９　）。

人の単球ＩＬＩ　ｃＤＮＡの意見の一致をみた（コンセ
ンサス）ヌクレオチド配列及び蛋白賞アミノ酸配列を式
Ａに示す、みかけ上のコード化領域は分子量３０７４７
に対応し、前に記載した網赤血球溶菌物中で翻訳した蛋
白質の大きさと類似している。

ヌクレオチドはオカヤマとベルブのシステムでのクロー
ニングから生じるＧテール（しっぽ）に続く最初のヌク
レオチドに対応する位１１ＥＩをもフて番号を付けた。

枠で囲んだのヌクレオチドはグリコジル化位置の可能性
を表わす（ルピンシュタイン門、　”　、　　ｉ　　　
　、　　　　、６９５．５−１６（１９８２）及びポリ
アデノシル化信号の可能性を表わす（プロウドフットＮ
、Ｊ、及びプロウンレーＧ、Ｇ、　　　■組ｕ２６３、
２１１　（１９７６））　。

上に記載したように我々のＩし一１同定に対する基準は
免疫沈殿とインビトロの翻訳生成物の生物検定の両方の
データに頼っていて厳格である０問題のポリペプチドは
刺激に特異的で、免疫沈殿可能で、生物活性を示すもの
でなくてはならない。重要なこととしてこれらの同じ基
準を使用してエンドトキシンで刺激されなかった単球か
ら単離されたポリ（Ａ）ＲＮＡと関連して観察された活
性はほんの少し又は示されなかった。刺激された細胞か
ら抽出されたポリ（Ａ）ＲＮＡの網赤血球溶菌物翻訳は
ｃＤＮＡ配列によって予想されたのと同じような分子量
を有するような刺激に特異的なポリペプチドを表わした
。これは主要な刺激に続いて人の単球の媒体中に並びに
人の滑液から回収されたＩＬ−１中に以前に見いだされ
たＩＬ−１活性の二つの分子量種の一つに対応する０本
開示に於いてミクロ注射されたクセノブス（Ｘｅｎｏｐ
ｕｓ）卵細胞からの生物活性及び刺激された単球媒体中
に見いだされた活性は見かけ分子量２００００をもって
セファクリルＳ−２００から一緒に溶離され、殆どの研
究者によって報告されている種のものと対応している。

この単球に由来する蛋白は培地中で３５−Ｓメチオニン
と共に培養されたエンドトキシン刺激単球から単離され
ることが出来、生物学的に活性な放射ラベルされた分子
を生成して、これがここに記載した同じ５ＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ系上で分析された時に２２０００分子量種として移動
するものである。

ｃＤＮＡヌクレオチド配列は最初の■訳生成物がＩＬ−
１活性と普通関連している蛋白よりも大きいことを示し
ている。我々は従って合成及び／又は刺激された単球か
ら放出されることに続き蛋白分ン　　　　解「カスケー
ド」がＩＬ−１を加工することを示唆する。この蛋白分
解の閏じゆう分子は生物活性のままである。インビトロ
のパルス追跡実験に由来するデータは大きな蛋白（凡そ
分子量３１０００　）と我々の抗血清とクロス反応する
一連のより小さい種ものの間の前駆体−生成物・間係を
支持する。

Ａｌａ　Ｂ及びＳｅｒｇの間に位置する式Ａにおける矢
印はインターロイキン−２に対する予想されたのと幾ら
か似ている可能性ある信号配列開裂位置をマークする（
タニグチＴ０、マツイＨ０、フジタＴ０、タカオアＣ１
、カシマＮ１、ヨシモトＲ１、及びハムロＪ、ｌ且１３
０２．３０５−３１０　（１９８３）　）。Ｌｙｓ　２
１０とＮｅｔ　２１１の間に位置する第二の矢印は、牛
のプロ（前）上皮小体ホルモン、のブロー配列について
クロンベルブ等により記載されたのと非常に似た可能な
開裂位置を示す（クロンベルブＨ，Ｍ、、マツクデビッ
ド８．Ｅ、、マジエゾウブｊ、＾、シャープＰ、Ａ、、
ボッツＪ、Ｔ、及びリッチＡ、　　　　　　　、　　　
　、　　ｉ。

−広ｕ１７６４９８１−４９８５（１９７９）　）　、
　コｔＬ　ラ二ツ（Ｄ　可能な開裂位置は推定上の２３
０００の分子量のペプチドを示すがこれは主要なのＩＬ
−１活性に対し殆どの研究者が報告した１５０００〜２
００００の大きさの範囲と　　　　１□１なるほどと認
め得る一致をみている。

人の単球ＩＬ−１に対するｃＯＮＡを含有しているクロ
ーン（プラスミド）　ｐｃＤ−４１５はアメリカ合衆国
ノーザンリージョナルリサーチラボラトリー（ＮＲＲＬ
）の永久保存培地中の大腸菌Ｈｅ−１０１宿主中に１９
８４年４月２７日に寄託された。この培養基はその寄託
所から入手番号（寄託番号）ＮＲＲＬ　Ｂ−１５７７０
が与えられた。この寄託筒はこれを開示している特許の
付与に基づき公衆は人手できる。この寄託筒は本明細書
の対応出願又はその子孫出願が出願された米国以外の国
の特許法によって要求されるならば入手される。しかし
寄託筒を入手できるからといって政府行為によって与え
られた特許権を侵害してこの発明を実施する実施権が構
成されるものではないことを理解されるべきである。

組み替えプラスミドｐｃＤ−４１５はその大腸菌■ト１
０１宿主から良く知られた手順、例えば透明にされた溶
菌物−密度勾配平衡手順などを使用し良く知られた手順
によって単離することが出来る。

また人のＩＬ−１に対してコードを冑するヌクレオチド
配列をクロン化するこの明細書に開示された条件を変化
することはこの技術の当業者の容易になし得ることであ
る。

クロン化された人のＩＬ−１遺伝子は良く知られた探り
技術によって人のゲノム中で関連するＤＮＡを検出する
のに使用することが出来る。更に人のＩＬ−１に対する
コードを有するヌクレオチド配列からなる非限定量の核
酸は本発明のクロン化された人ＩＬ−１遺伝子によって
造ることが出来る。更に本発明のクロン化された遺伝子
によって造られるＩＬ−１はＴ−細胞を活性化すること
によってＩし−２の生産を誘導するのに使用することが
出来る。−−ＩＬ−２はＴ−細胞が増殖することを刺激
する。３ユ旦止３ユ２２１１３６２−１３８４に報告さ
れる様にｒＮＩＡＩＤ及びフードアンドドラッグアドミ
ニストレーション（ＦＡＤ）からの研究者が試験管検定
を用いて最近インターロイキン−２が６人のエイズ患者
からのＴ−細胞の機能を改良したことを発見したＪ　　
（１３６２頁）。

インビトロでＩＬ−１は好中球の脱顆粒化を活性化し、
又ケモスタティックである。殆どの研究されたＩＬ−１
の効果はリンパ球に間するものである。ＩＬ−１は上記
の様にＢ−細胞及びＴ−細胞に対して作用し、Ｎに一細
胞に対して作用する。８１胞に対してはＩＬ−１は助剤
としての他の８−細胞活性化物と共に作用する。これは
Ｂ−細胞の増殖を増加させ、免疫グロブリン合成を増加
させる（リプスキーＰ、ε０、トンプソンＰ、Ａ、、ロ
ーゼンワッサーＬ、Ｊ、、ディナレロＣ，Ａ、、ムー第
１丈ｗ１．１３０２７０８（１９８３）　；ファルコフ
Ｒ，Ｊ、Ｍ、、ムラグチＡ１、ホンダＪ、Ｘ、、ブット
ラーＪ。

し１、ティｆ　Ｌ／　Ｃ２Ｃ，Ａ、、フアツジＡ−５−
１２」１」ｕ践１゜１３１８０１（１９８３））　、　
Ｔ−細胞に対してはＩＬ−１はＴ−細胞に対する共同因
子として作用し、種々のリンフ才力イン（Ｉｙ■ρｈａ
ｋｉｎ）を生産する。　ＩＬ−２及び白血球の移動阻止
因子がリンフ才力インとし゛で研究されこれは単球又は
抗体を呈するアクセサリ−細胞の非存在下でＩＬ−１か
らの信号を要求する　（マイセル５．８．１１組蝕ムＪ
ＪＪ、　ａ３．５１　（２９８２））。

ＩＬ−１の別の面はその炎症性である。　ＩＬ−１は種
々！　　　（Ｄ　Ｆｆｓ　ｌＪｔ　（７）　５ｆｌ　ｉ
ＩＩ　＊　ｌｔ　＊　ｔ　４３！’、　＠　（Ｄ　ｔｌ
　ｔＦ１６１６１１１１８“た（ウッドＤ、［）、、イ
ーリーＥ、Ｊ、、ディナレロＣ，Ａ。

、コーエンＰ、Ｌ、、　　　９．２６．９７５（＋９８
３））　、そして滑液細胞からのそのコラ−ゲナーゼと
プロスタグランジンε２を増加させる能力は幾つかの関
節炎の病原性に於けるＩＬ−１を意味するのである。筋
肉細胞中に於けるＩＬ−１はまたプロスタグランジンＥ
２を誘導するがこれは増加したリソシームの蛋白分解酵
素活性及び増加した筋肉組織からの蛋白分解を導くもの
である　（バラコス■１、ロープマンＨ，Ｐ、、ディナ
レロＣ，Ａ、、ボルドベルブ＾、Ｌ、　　　　　　、　
　、　　　、　３０８，５５３　（１９８３））。

脳の組織に於いてＩＬ−１はプロスタグランジンεを増
加させ、フエブリル（熱性）応答の発達の重要な役割を
果たす（ディナレロＣ，Ａ、ＩＮ：　リンフォキンズ、
４．　ＥＯ）　、より最近の研究は眠りの誘導（クロイ
ガＪ、、Ｍ、、つ矛ルターＪ０、ディナレロＣ，Ａ、、
ウォルフＳ、Ｍ、、シェディットし０、　８．゛。

インプレス）及びＩａＩ／ａ芽細胞の増殖及びコラーゲ
ン合成に於ける（シュミットＪ、Ａ、、マイゼル５．０
゜、コーエンＤ１、グリーン１．　　ｋユ■肛坦、　　
１２８゜２１７？　（１９８２））　ＩＬ−１に関与す
る・　　　　　　　　　　　　ｊ（宿主の免疫学的及び
防御機能に於ける媒介物としてのその中心的な役割の為
に異なる病気状態に於けるＩＬ−１の検出はある種の病
理学的な工程に対し、光をあてるものとなり得る。　Ｉ
Ｌ−１の水準は特別の薬物によってマスクされているあ
る種の病気の症状の酷さを示すものである。　ＩＬ−１
の生産がある種の癌を有する人の患者中に於いて減少さ
れているという証拠（ホフマン門、に０、ボラックＳ、
　ＩＮ：ゝ　−口　　＋　　＋１　　１ １ｉ２ス扁、オッペンハイムＪ、ｊ、、コーエンＳ０、
アカデミツクプレス７０７−１４（１９８３））及び栄
養失調に於いて減少されているという証拠がある（キー
ナンＲ，Ａ、、モルダワーＬ、Ｌ、、ヤングし１口０、
カワムラ１６、ブラックパンＧ、Ｌ、、ピストラインＢ
、Ｒ，）。

、　　　、　　ｉ　、　　　、１００８４４（１９８２
）　）。そしてこれは動物モデルによる研究によって支
持されている。

人及び動物中に於ける免疫学的な試薬としてのＩＬ−１
の使用は、そのＴ−及びト細胞を刺激する、又免疫グロ
ブリンを増加する能力のため可能性のあるものである。

事実ＩＬ−１は体の外因的な助剤としての優れた候補者
でありそうである。従っである種の免疫原中に於いてＩ
Ｌ−１又はＩＬ−１分子の部分を使用することが可能で
あれる。

本発明は又有利なことに新規な切断された人ＩＬ−１ｃ
ＤＮＡ配列の使用を通じて新規な生物活性の人ＩＬ−１
蛋白を提供する。上に開示したように全体の人ＩＬ−１
ｃＤＮＡ配列は式Ａに示されている。この配列は新規な
切断されたＩＬ−１ｃＤＮＡ配列を含有している新規な
りローンの製造の出発物質である。

切断された人ＩＬ−１に対するコードを有するヌクレオ
チド配列からなる限られない量の核酸を本発明のクロン
化された人ＩＬ−１ｃＤＮＡによって造ることが出来る
。更にクロン化された本発明の切断された人ｌＬｉ　ｃ
ＤＮＡ配列を通じて得られた新規な生物活性の人ＩＬ−
１蛋白は上に開示した元々の人ＩＬ−１と同じ方法で使
用することが出来る。

次の実施例は本発明の方法及び生成物を説明するもので
あるが制限するものとは解釈されない。

別に記載がなければ全ての％は重量％で、全ての溶媒混
合物比率は容量による。

実施例１　ハＷ 人の単核細胞（４−６ｘ　１０９）をブラタレットフォ
レシス（ｐｌａｔｅｌｅｔｐｈｏｒｅｓｉｓ）１１生物
のフィコール−ハイバーク（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑ
ｕｅ）勾配分離から単離した。！Ｉ胞を６００　ｘ　ｇ
で０．９　Ｘ　ＮａＣｌ中で４回洗い、血しょう板を除
いた。単球を　１．２５　ｘ　１０’纏胞／ｃｌＩ２の
密度で１％（容量／容量）熱不活性化した人のＡＢ血清
を含有しているＲＰ旧（ギプコ）中の平坦なガラス瓶中
にプレートにして、３７℃で１．５時間付着させた０Ｍ
を次に激しく振動し非付着個体群を排出し数えた。付着
した単球の合計を、全細胞数から付着細胞数を引き決定
した０代替（Ｉ６１清無し）のＲＰ旧は３００　ｎｇ／
ｍｌの大腸菌エンドトキシン（ディフコ）を含有してい
た。３７３度で１２時間後培地を排出し、付着単球を６
Ｍのグアニジニウムチオシアネートの添加により溶菌し
たくチルグリンＪ、Ｌ、プリジビラ（Ｐｒｚｙｂｙｌａ
）　Ａ、Ｅ、、マ、　　　　７Ｆｆ′ｂＦＲ，Ｊ°ゝＵ
　ｋ　ｙ　９−　Ｗ、Ｊｏ　”。

１８、５２９４−５２９９　（１９７０））　、溶菌物
を一７０℃で凍結させ前に記載したようにＣｓＣｌクッ
ション上で層を形成させるに先だって解凍させた（上記
チルグリン等参照）、ポリ（Ａ）　ＲＮＡをオリゴ（ｄ
Ｔ）セルロースに二度結合させることによって粗製核酸
ペレットから回収した（バンドルＪ、Ａ、、マックスウ
ェル１、Ｈｌ及びバーン讐、Ｅ、　　　　’ｉ、’　　
　　　　７２４１３−４２７（１９７６）、付着単球か
ら単離された全ＲＮＡは１００−２００μｇ　　／１０
９細胞の範囲であって、その中でポリ（Ａ）ＲＮＡは常
に５〜７％を表わしていた。

非刺激単核細胞から同じ手順からであるが刺激又は付着
なしに行なわれたポリ（Ａ）ＲＮＡの＊＊は約５００μ
ｇの全ＲＮＡ／１０９細胞を生成し、そのうち１〜２％
がオリゴ（ｄＴ）セルロースにここで使用した条件下で
結合したにすぎなかった。

実施例２　ポリ（Ａ）ＲＮＡのインビトロ翻訳兎の網赤
血球溶菌物をｌｌ！ｌし、最適化し、ベルハムＨ，Ｒ，
Ｂ、及びジャクソンＲ，Ｊ、　　　、　　、　　’　　
ｐ６７、２４２−２５６　（１９７６）に記載されたよ
うにミクロコツカルヌクレアーゼで処理した。各翻訳は
ｌＯＯμＣｉの３５−５メチオニン１１の存在下で　１
８ｇのボ　　　　」。

す（Ａ）ＲＮＡを含有していた。１時間３７℃で培養後
、試料を幾らか変更したケスクー（にｅｓｓｌｅｒ）の
方法に従って免疫沈殿させた（　Ｊ、　Ｉ＋ｇ＊ｕｎｏ
１．１１５１６１７−１６２７（＋９７５）　）　、予
備クリーニングの間に２０μｍの正常な兎血清（ＮＲ５
）を各試料に加えた。これに続いて４℃で２時間培養し
その後１００μｍ　（即ち１０！（ｗ／ｖ））の蛋白Ａ
　（ＩｇＧ　５ｏｒｂ　（ソープ））（ザエンザイムセ
ンター、ボストン、マセチュウセツツ州）を加えた。試
料を更に１時間室温で培養し、次にＩｇＧソープ（Ｉｇ
Ｇｓｏｒｂ）を最大速度で１０分間臨床的遠心でペレッ
ト化した。上澄み液を新たな試験管に移し、１８時間隔
℃で２０μｍの兎抗人閏ＥＰ／ＬＡＦポリクロナル血清
と共に培養した（ディナレロＣ，Ａ、、レンファーし０
、及びウォルフＳ、Ｍ、ｌ−二Ｌ」−ロ工罎Ｂ、　６０
．４８５−４７２　（１９７０）　、　コ（Ｄ　抗血清
ハ’７’ルろ過の後に得られた１５にｄの人ＥＰ／ＬＡ
Ｆの２０ケ月免疫化によって造られ（ディナレロＣ，Ａ
、、ゴールディンＮ、Ｐ、及びウォルフＳ、Ｍ、ｌ■し
一シＪ、　１３９゜１３６９−１３８１（＋９７３））
　、そして抗ＡεＰ／ＬＡＦを有していたが、抗人ＩＬ
−２活性を有していなかった０次に１００μｍのＩｇＧ
ソープを各試験管に加え、続いて室温で１時間培養した
。　ＩｇＧソープ（ＩｇＧｓｏｒｂ）を上記のようにペ
レット化し、ペレットを　１１部６分の（３ｘ）の０．
５Ｘ（ｖ／ｖ）のトライトン−×１００と共に激しく渦
巻かせることによってペレットを洗った。抗原を６ｚの
ＳＤＳを含有する２０μ１（７）電気泳動緩衝液の添加
によって（レエムリＵ、に、　ネイチャー２７６８０−
６８５（１９７Ｇ））そして更に続いて５分間沸騰させ
ることによって可溶かした。再度ＩＪＧソープを３分隔
ミクロフュージングによって除き、上澄みを次に１７．
５　Ｘのポリアクリルアミドゲル（＋５　ｘ　１７　ｘ
　Ｏ，１５ｃｍ）　　（上のラエムリ参照）に５時間３
５ミリアンペアに於ける電気泳動の為に装填した。ゲル
をフルオル（ｆｌｕｏｒ）　　（ＥｎＨａｎｃｅ＋　Ｎ
ＥＮ）で処理し、乾燥し、次に写真フィルム（コダック
ＸＡＲ−５）に２１７２時間現像前に露出した。

実施例３−一刺激した単球ポリ（Ａ）ＲＮＡの庶糖勾配
フラクショネーション（分画） 庶糖勾配手順はブラックレー等により記載されたものの
変法である（Ｊ、　Ｉｍｎ＋ｕｎｏ１．　１２７＋　　
２４３２−２４３５（１９８１））　、ポリ（Ａ）ＲＮ
Ａ　（刺激した人の単球から調製した５０ｇｇ）を４７
５μｍの水中に溶解し６５℃で３０分加熱し、氷上で冷
却し、５０ミリモルトリスーＨＣｌ、　ｐＨ７，５；　
０．ｌ＄リチウムドデシルサルフェート及び１ミリモル
のＥＤＴＡ　（ＴＬＥ緩衝液）に対し調整した。試料を
アイツカイネティック（等速度）ＴＬＥ−庶糖勾配（１
０−２８Ｋ）上に装填し、Ｓす４Ｉロータ（ベックマン
）中で１９時間（４°）３５に「ｐ■において遠心した
。平行な勾配をマーカーとしての大腸菌ｒＲＮＡと共に
行なった。勾配物を分画しく＋ＳＣＯモデルＤ）、エタ
ノール沈殿させた。　ＲＮＡペレットを２回７０％エタ
ノール中で洗って、３μｍの蒸留水中に再！ＱｆＩ！ｉ
シた。各フラクションの分画を兎網赤血球溶薗物中で翻
訳し、免疫沈殿さぜ、上記のように電気泳動及びオート
ラジオグラフィーに対して処理した。更に、選ばれたフ
ラクションを、上記のように、生物活性の評価の為に、
クセノパス（Ｘｅｎｏｐｕｓ）　、卵細胞中にミクロ注
射した。　ｖ　１９Ｆ＠の〃　　　　卵細胞を（ドゥモ
ン（Ｄｕｍｏｎｔ）、　Ｊ、Ｎ、　Ｊ、　Ｍｏｒｐｈｏ
ｌ。

１３６、１５３−１８０（１９７２）　”）を手作業で
パルス−Ｘ（ｅａｒｔｈ−Ｘ）培地中（フォードＣ，Ｃ
，及びガードＪ、Ｂ。

ｙｘ　　　、　　　、　　　　、　３７２０３−２０９
（１９７７））　ｔ’予めｌ〜６週間人の卵膜（毫Ｎ膜
）ゴナドトロピン（Ｓｉｇｗａ）で刺激しておいた成熟
したクセツバスレビス（Ｘｅｎｏｐｕｓ　Ｉａｅｖｉｓ
）（Ｎａｓｃｏ、　ｖｌ）の卵巣から卵胞を除いた。こ
れらの卵細胞に各々滅菌蒸留水（通常は１〜２ｍｇ／ｍ
ｌ）中の５００１のポリ（Ａ）ＲＮＡ溶液をミクロ注射
した。対照には似たような容量の蒸留水のみ注射した。

ミクロ注射した卵細胞を、抗生物質を加えた（培地培養
基−１当たりｔｏｏ　ｕのペニシリン、１００μｇのス
トレプトマイシン、７０μｇのゲンタマイシン、２．５
μｇのアンフォテリシンＢ）ＩＯμ＋のパルス−Ｘ　（
ｅａｒｔｈ−Ｘ）を含有している丸底のミクロ検定ウェ
ル中で独立に４０−４５時間２０℃で培養した。２０個
の卵細胞のバッチからのパルス−Ｘ培地を集めて１！（
ｖ／ｖ）の熱不活性化フェタル牛血清を含有するＲＰｌ
中で平衡化したセフ７クリルＳ−２００カラム（０，６
ｘ　５４　ｃｍ）上でゲルろ過することによって分画し
た。各フラクション（約１　ｍｌ）を３５００　ｍ、ｗ
、のカットオフ透析チューζ。

ブ中に入れ、ロゼンワッサ及びディナレロエ１ｈ１組肛
姐、　６３１３４−１４２（１９８１）中に報告された
ようにＬＡＦ活性に対し検定する前にポリエチレングリ
コール８０００中に浸漬することによって５倍に濃縮し
た。

実施例４　ハ　　ｒ、−”　　　Ｈ 卵細胞を実施例３に開示した様に加工したが、但し、培
養は２０時間で卵細胞を５０μｍバススーＸ培地中のウ
ェル当たり５卵纏胞の密度でミクロ検定ウェル中で培養
した。　ＬＡＦ活性をローゼンワッサー及びディナレロ
（上記）に記載された手順の変法を使用して検定したが
ここでマウスの胸腺細胞はケイ等（Ｊ、　Ｅｘｆｌ、　
Ｍｅｄ、　１５８．８３６−８５６（１９８３）により
記載されたＤｔｏｍ胞ライシライン換えた。

実施例５　　ｃＤＮＡクローン 図面に示される三つのｃＤＮＡクローンを単離するのに
三つの別々のｃＤＮ＾ライブラリを使用した。

第一のクローン９Ａ−２６によって表わされるものは元
のオカヤマ、ベルブのクローニングベクター系（、ｌ　
、　　’　１．２．１６１−１７０（１９８２）　’）
を使用した１２時間エンドトキシン刺刺激味メッセジか
ら構成した。第二の及び第三のライブラリはクローンｐ
ｃＤ−４１５及びｐｃＤ−１２１８であられされ夫々よ
り新しいオカヤマ、ベルブのクローニングベクター系（
Ｍ　　、　　１．　　ｉ　　、　３．２８０−２８９（
１９８３）　）を使用する４ｈ及び１２ｈ工ンドトキシ
ン刺激単球メッセジからであった。ライブラリを各々２
μｓのポリ（＾）ＲＮＡを使用して造った。凡そ１００
クローンからなる第一のライブラリの部分を刺激した及
び刺激していない単球ポリ（＾）ＲＮＡ並びに実施例３
中に開示された庶糖勾配のフラクション１２に含有され
たポリ（＾）ＲＮＡから合成された三つの異なるｃＤＮ
Ａ探りでスクリーンした。その結果５ｇのクローンが非
刺激ＲＮＡに由来する探りに対してよりも濃縮されたｃ
ＤＮＡ探りに対してより密接に関連しているようにみえ
た。より長いヌクレオチドの配列を含有している二つの
クローンは制限マツピングに基づけば同じであるようで
あった。一つのクローンｐＡ−２６はＢａ１−３１エン
ドヌクレアーゼによる処理に続いてＭ１３ｍｐＨ中でサ
ブクロン化された（ウェイＣ０Ｆ０、アリアネルＧ、Ａ
、、ベンケンＧ、Ｎ、及びグレイＨ０Ｂ、　　、　　°
、　　　、　２５８．１３５０６−１３５１２　（１９
８３）　。

第二の及び第三のｃＤＮＡライブラリはハイブリッダイ
ゼション探りブライマーを使用してｐＡ−２６ｃＤＮＡ
のＭ１３サブクローンの一つとともにスクリーンされた
（）、Ｎ、及びメッシングＪ、江肛ＩＴ、１７１（１９
８２）。

ＩＬｉ　ｃＤＮ＾配列（式Ａ）は本質的なＩＬ−１の領
域を単離することを目的とした特定的欠落を含むプラス
ミドを構築するために使用することの出来る三つの独特
な制限酵素消化位置を含有する＊　　ｃＤＮＡによる蛋
白コーディングの方向の意味での５′から３′への進行
で、これらの三つの位置は夫々以下のように命名および
位置付けがなされる。　　Ｈｉｎｄ４　　　　　　Ｉｌ
ｌ　（位置４８３）　、Ｐｖｕ　ＩＩ　（位置６７８）
、Ｘ＋＊ｎ　Ｉ鮭 （位置１３５５）　　（ここに提示された全ての制限エ
ンドヌクレアゼ位置はｃＤＮＡの蛋白コーディングの「
意味」のストランドに沿って読まれる切断の３′劉上の
第一のヌクレオチドの場所をさすものである。更にｃＤ
ＮＡ　　（１６位置）から上流に位置する独特のＰｓｔ
　ｌ制限位置がも使用できる。

最初のプラスミド構築は全てのＩＬ−１ｃＤＮＡヌクレ
オチド配列をＰｖｕｌｌ及びＸａ＋ｎ　１位置の間で上
記のように欠落させ、以下の通りである。■、オカヤマ
及びＰ、ベルブ（１９８３）　　　　、１．’、３２８
０−２８９に記載された様にファーマシア（ビス力タワ
イＮＪ）から購入することの出来るプラスミドｐｔ、ｔ
がＸ＋ｇｎ　ｌ及び旧ｎｄｌｌｌ制限エンドヌクレアー
ゼで完全に消化される。生じる三つの生成物を７ガロー
スゲル電気泳動で分割する。これらの生成物は凡そ長さ
が５１８．７８２及び１５４４塩基対である。

５１８塩基対断片を標準技術を使ってアガロースゲルか
ら単離した。別のプラスミド、例えばファーマシアから
購入することが出来るｐｕｃ−ａ　（メッシングｊ、及
びビエイラＪ−（１９８２）　Ｇｅｎｅ　１９２６９−
２７６）を５１８塩基対断片の一端に位置するＰｓｔ　
ｌ制限位　　　　！。

置を以下に記載する旧ｎｄｌ１１位置に付ける為にリン
カ−セグメントとして使用することの出来るＤＮＡ断片
の源として使用できる。　ｐＵｃ−８は隣接するＰｓｔ
　Ｉ及びＨｉｎｄ　ＩＩＩ位置とのポリクローニング位
置を含有し、１）ＵＣ−９又は旧３■ｐ８又は旧３＊ｐ
９二１ａｍ！！形などの他の類似の［）ＮＡによって置
き換えることが出来る。これらのＤＮＡはファルマシア
から買うことが出来る。　ｐＵｃ−８プラスミドはＰｓ
ｔＩで消化できｐＬｌに由来する５１８塩基対断片と混
合することが出来る。二つの断片は過剰のｐＵｃ−８と
いう条件下でＴ−４ＤＮＡリガーゼによって連結される
。生じる二つの生成物は線形化したｐＵｃ−８に間して
５１８断片の二つの異なる連結された方向を表わすもの
である。二つの異なる方向は互いに容易に単離すること
は出来ない、なぜなら各々は同じ分子の大きさを有する
からである（約３６６０塩基対）、単離は先ず３６６０
塩基対ＤＮＡ混合物を旧ｎｄｌｌｌエンドヌクレアーゼ
で消化し、最初の混合物を四つのおよそ長さが３６５０
．３１４０．５２８及びＩＯ塩基対の生成物に断片化す
る。これらの生成物を容易に標準のアガロースゲル電気
泳動で分割しそして５２８塩基対のｐ目に由来する断片
を単離する（これは旧ｎｄｌｌｌ付着端（ｃｏｈｅｓｉ
ｖｅ　ｅｎｄ）を有する）。

大腸菌ＪＩＢ−１旧宿主中に含有されているもとの人Ｉ
Ｌ−１ｃＤＮＡプラスミド（ｐｃＤ−４１５）は標準の
プラスミド調製手順を使用して単離される。このプラス
ミドをＰｖｕｌｌ及びＸｍｎ　Ｉ制限エンドヌクレアー
ゼの両方で消化してアガロースゲル電気泳動で分割する
ことの出来る三つの生成物を生成する（凡そ大きさが６
７５．１６３３及び２３７９塩基対）　、　＋６３３及
び２３７９塩基対断片をゲルから単離しＴ−４ＤＮＡリ
ガーゼの存在下で連結して上記の１）Ｌｌ誘導５２８塩
基対断片にす“る、二つの異なるプラスミド構築結果は
一方はＤＮＡ断片に対し正しい方向を有する。正しい構
築物はｐｃＤ−４１５プラスミド内に含有されるアンピ
シリン抵抗遺伝子が所望のＩＬ−１ｃＤＮＡ断片方向を
含有するプラスミド構築物中のみに於いて正しく再構成
されるであろうという事実を利用し、て容易に単離する
ことが出来る。従って両方のプラスミドを含有する混合
物で形質転換された大腸菌１１８−１０１１１胞はアン
ピシリンの存在下で菌体を生育させたときに正しい構築
物を含有している生きた大腸菌細胞のみを生成するであ
ろう、これらの菌体から最終構築物（ｐｃＤ−４１５Δ
Ｐｖｕ／Ｘｓｎと呼ぶ）を標準のプラスミド単離手順を
使用して単離することが出来る。式Ａのヌクレオチド位
置８７〜６７７及び１３５５〜１３９６の位置の間に位
置するＤＮＡ配列に対応する蛋白質に対するコードを有
する切断人ＩＬｉ　ｃＤＮＡを、このプラスミドは含有
する。

このプラスミドは人ＩＬ−１配列内に含まれる上流Ｐｓ
ｔ　１位置及び旧ｎｄ目１位置の閏の全てのｃＤＮＡ配
列が欠落しているように＊＊される。出発物質はｐｃＤ
−４１５である。プラスミド　ｐｃＤ−４１５をＨｉｎ
ｄｌ１１エンドヌクレアーゼで消化し、二つの生成物ン
（約１０１６及び３６７６塩基対）をアガロースゲル電
気泳動で分解する。　３６７６塩基対フラグメントをゲ
ルから単離し、ｐＬ１誘導５２８塩基対（Ｈｉｎｄ　ｌ
ｆｔ付着端）断片であフて実施Ｎ１の構＠　ｐｃＤ−４
１５ΔＰｖｕ／Ｘｓｎに使用するために造った断片と混
合する。これらのＤＮＡをＴ−４リガーゼで連結すると
二つの異なるプラスミド生成物を生じ、これを大腸菌１
１Ｂ−！０１細胞の形質転換と単離したプラスミドの制
限マツピングによフて精製し、区別することが出来る＊
　Ｐｖｕ　Ｉｔ及びＰｓｔ　ｌ二重消化は明瞭な生成物
の同定を特徴とする請求される欠落を有する最終生成物
はρｃＤ−４１５ΔＰｓｔ／Ｈｉｎと呼ぶ、このプラス
ミドは式Ａでヌクレオチド位置４９２〜８９３の間に位
置するＤＮＡ配列に対応する蛋白質をコードする切断人
ＩＬ−１ｃＤＮＡを含有している。

この構築は単一プラスミド内に位置する上記両方の欠落
の組合せである。上記のｐｃＤ１１５ΔＰｓｔ／Ｈｉｎ
　７．２　！　Ｆ　ｔｔ　Ｐｖｕ　ｌＩＲｔＦＸｍ。１
１４イ、、ヨッ６のアガロースゲル分割可能な生成＃Ｊ
（およそ６７５゜１１５０、及び２３７９塩基対）を生
成する。　　１１５０及び２３７９塩基対断片を単離し
、連結し、二つの可能な生成物を生成し、これを実施例
１に記載したのと類似のやり方でアンピシリンの存在下
での形質転換した大腸菌Ｈｅ−１０１での選択によって
分割する。

要求される欠落を有する最終生成物は　ｐｃＤ−４１５
ΔＰｓｔ／）Ｉｉｎ−ΔＰｖｕ／Ｘｈｏと呼ぶ、プラス
ミドは式Ａで示される４９２から６７７のヌクレオチド
位置及び１３５５から１３９６の位置の間に位置するＤ
ＮＡ配列に対し対応する蛋白にコードする切断した人Ｉ
Ｌ−１ｃＤＮＡを含有する− ｃＤＮＡ転写は標準の技術方法によって本質的に純粋な
形態に於けるクローンから得ることが出来る。たとえば
クローンｐｃＤ−４１５に於鳴するｃＤＮＡの転写はＢ
ａ−１−Ｐｓｔｌ二重消化によってプラスミドから切る
（クリップする）ことが出来（オカヤマＬ及びベルブＰ
、Ｍｏ１ｅｃ、　Ｃｅｌ盲、　Ｂｉｏｌ、　３２８０−
２８９（１９８３））そして標準手順で単離する。この
ようにして得た本質的に純粋なｃＤＮＡは異なる変換（
トランスファ）ベクター中にサブクローン化するために
使用することが出来る。

この技術で良く知られるように蛋白質、例えばＩＬ−１
のアミノ酸配列はＤＮＡのヌクレオチド配列によって決
定される。遺伝子コードの冗長さのため、即ち一つ以上
のコード化ヌクレオチドトリブレット（コドン）が蛋白
質を造るのに使用される殆どのアミノ酸に使用できる為
に異なったヌクレオチド配列が特定のアミノ酸に対しコ
ードすることが出来る。従って遺伝子コードは以下の様
に描くことが出来る。

フェニルアラニン（Ｐｈｅ）　ＴＴＫ ロイシン（Ｌｅｕ）　　　　　ＸＴＹ イソロイシン（ｌＩｅ）　　　ＡＴＨ メチオニン（Ｎｅｔ）　　　　ＡＴＧ バリン（Ｖａｌ）　　　　　　ＧＴＬ セリン（Ｓｅｒ）　　　　　　　ＱＲＳプロリン（Ｐｒ
ｏ）　　　　　ＣＣＬ スレオニン（Ｔｈｒ）　　　　ＡＣＬ アラニン（Ａｌｔ）　　　　　ＧＣＬ チロシン（Ｔｙｒ）　　　　　ＴＡに 末端信号　　　　　　　ＴＡＪ 末端信号　　　　　　　ＴＧＡ ヒスチジン（Ｈｉｓ）　　　　ＣＡに グルタミン（Ｇｌｎ）　　　　ＣＡＪ アスパラギン（Ａｓｎ）　　　ＡＡに リジン（Ｌｙｓ）　　　　　　ＡＡＪ アスパラギン酸（Ａｓｐ）　　ＧＡに グルタミン酸（Ｇｌｕ）　　　ＧＡＪ システィン（Ｃｙｓ）　　　　ＴＧに トリプトファン（Ｔｒｙ）　　ＴＧＧ アルギニン（Ａｒｇ）　　　　讐ＧＺ グリシン（Ｇｌｙ）　　　　　ＧＧＬ キー：各三つの文字のデオキシヌクレオチドトリブレッ
トは左側に５′末端、右側に３′末端を有するｔａＲＨ
＾のトリヌクレオチドに対応する。ここに与えられた全
てのＤＮＡ配列はその配列が＋ｗＲＮＡ配列に対応する
鎖のものであってチミンはウラシルに置き鴨 Ｃ換えられている。文字はデオキシヌクレオチド配列を
形成しているプリン又はピリミジン塩基を表わしている
。

Ａ＝アデニン Ｇ＝ニブアニ ン＝シトシン Ｔ＝チミン Ｘ＝Ｖが＾又はＧのときはＴ又はＣ ｘ＝ｙがＣ又はＴのときはＣ Ｖ＝ＸがＣ（７）ときはＡ、　Ｇ、　Ｃ又はＴＹ＝Ｘが
ＴのときはＡ又はＧ Ｖ＝ＺがＡ又はＧのときＣ又はＡ ｖ＝ｚがＣ又はＴのときＣ Ｚ＝ＷがＣのときＡ、Ｇ、Ｃ又はＴ Ｚ＝Ｖが＾のときＡ又はＧ ＱＲ＝　ＳがＡ、Ｇ、Ｃ又はＴのときＴＣＪ　＝Ａ又は
Ｇ に＝Ｔ又はＣ Ｌ＝Ａ、Ｔ、Ｃ又はＧ Ｍ　＝Ａ　、　Ｃ又はＴ 上記は新規な人ＩＬ−１のアミノ酸配列及び人ＩＬｉ白
質がここに開示された以外のヌクレオチド配列によって
製造できることを示している。人ＩＬ−１、人ＩＬ−１
蛋白質又はＩＬ−１活性を有するその断片の新規なアミ
ノ酸配列に対しコードをなしている機能的な均等なヌク
レオチド配列を既知の合成手順によって製造することが
出来る。従って本発明はそのような機能的に均等なヌク
レオチド配列も含むものである。

従って本発明の範囲はここに描かれた特定のヌクレオチ
ド配列のみを含むのみならず実質的に同じ人のＩＬ−１
生物活性を有する分子に対しツー下をなしている全ての
均等なヌクレオチド配列も含むものである。「均等」と
いう用語は普通の特許で使用するような意味でここで使
用し、本質的に同じ種類の宿主中で実質的に同じ人ＩＬ
−１生物活性を有する分子を造るのにここで同定したヌ
クレオチド配列のように機能するヌクレオチド配列を指
すものとして使用される。この定義中に人ＩＬ−１生物
活性を有するサブフラグメントが含まれる・。

本発明の人ＩＬ−１活性に対してコードしているヌクレ
オチド配列を微生物工程を経て人ＩＬ−１を製造するた
めに使用することは遺伝子工学技術に於ける当業者の行
ない得ることである。配列物を表現ベクター中に融合し
、親核生物（酵母又はは乳類の細胞）又は原始植生物（
細菌細胞）のいずれかの宿主中に形質転換又はトランス
フェクションすることは例えばインシュリン、インター
フェロン、人の生長ホルモンなどの良く知られた他の蛋
白質を製造するのに使用する標準手順である。同様の手
順又は自明なその変更を本発明に従って微生物手段また
はは乳類ｍ織培養技術によって人ＩＬ−１蛋白貢を製造
するのに使用できる。

以前に記載した様に式Ａ中のｃＤＮＡ配列は二つの矢印
を経て人のＩＬ−１活性を有するペプチドに対しそれ自
体コードを有しているＣＤＮＡ配列を開示する。

このｃＤＮＡ配列の単離は以後に開示される０本質的に
純粋な形態でＣＤＮＡ配列を単離した後本発明に記載し
た手順を用いて人ＩＬ−１に対してコードしている全ｃ
ＤＮＡ配列に対してここで記載した手順を用°いてこれ
はクロン化出来る。当業者は描かれているｃＤＮＡ断片
が上に定義した実質的に生物学的に（人ＩＬ−１活性）
均等なｃＤＮＡ配列をも含むという事実を認識するであ
ろう。

ｃＤＮＡ配列を単離する方法は以下の通り。

プラスミドｐｃＤ−４１５をＳｔｕ　ｌ及びＸｈｏ　ｌ
制限エンドヌクレアーゼで約＋３７０ｂｐ　（、塩基対
）を含有するＤＮＡ断片を生じる為に消化する。問題の
配列、即ち式Ａ中でＩＩ＋−７１７の閏の位置は凡そこ
の断片中に中心を於いている（各端から約３５０ヌクレ
オチド）、これらの過剰の末端ヌクレオチドは時間に制
御された８ａｌ　３１エンドヌクレアーゼ限定消化を用
いて除去することが出来る（ウェイ等ＩＪｌｊＪＩＬ１
工拒」ユ２５８．１３５０６−１３５１２（１９８３）
　）　、本方法で式Ａ中で二つの矢印の間に位置するも
のに対応するＤＮＡ配列を含有する断片を生じることが
出来る。

この技術で良く知られている技術の組合せを使用して生
じるＢａｔ　３１断片をサブクローン化し、次に元のｐ
ｃＤ−４１５　ｃＤＮＡ挿入物から造った制限エンドヌ
、フレアーゼ消化断片から造フた放射活性の探りを１．
１５．７！ＩＩＲｆ４゜ ＩＬ−１クローンｐｃＤ−４１５から得たヌクレオチド
配列もこの技術で良く知られに遺伝子機械（シーンマシ
ン）によって生成することが出来る。これはヌクレオチ
ド配列の開示の為に可能である。しかしこの技術で現在
所望のヌクレオチド配列を例えばρｃＤ−４１５のクロ
ーンから得ることはここに開示し特許請求したような発
明を実施するのに最も都合のよい便利な方法であること
が認識されている。

開示された制限酵素はベセスダリサーチラボラトリーズ
、ガイサースバーグ、ＭＯ又はニューイングランドバイ
オラボ、バーバレー、ＭＡから購入することが出来る。

酵素は供給者によって与えられる指示に従って使用でき
る。プラスミドの＊ａに使用した種々の方法及び宿主生
物の形質転換はこの技術で良く知られている。これらの
手順は全てマニアティスＴ０、フレイッシュＥ、Ｆ、　
　及びサンプルツクＪ、（１９８２）、モレキュラーク
ローニングニアラボラトリ−マニュアル、コールドスプ
リングハーバ−ラボラトリ−、ニューヨークに記載され
ている。従ってＤＮＡを微生物細胞から抽出し制限（）
。

酵素消化を実施し、ＤＮＡ断片を電気泳動し、ブラ　　
　　　□スミド及び挿入１）ＮＡをティリングしてアニ
ーリングし、ＤＮＡを連結させ、細胞、例えば大Ｂ菌に
形質転換し、プラスミドＤＮＡを造り、蛋白質を電気泳
動し、ＤＮＡ配列を決定することは遺伝子工学技術当業
者の行ない得ることである。

式Ａ ＡＣＡＡＡＣＣＴＴＴＴＣＧＡＧＧＣ＾＾ＡＡＧＧＣＡ
ＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＣ
ＡＧＧＡＣＡＧＴＣＡＡＡＡＡＡＡＡ

【図面の簡単な説明】

図面は配列決定に使用した方策の説明図である。 ？＋−ＲＡＪＰ理士佐々井彌太部 （ｌ五が１名９ ｏ　　　　　　　　　　　　ｎｏ　　　　　　　　　　
　　ｔａｏａ、　　、　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＩＢ
ｏメクに１′Ｆ１′■出願人　　　ニューイングラント
メ　　アメリデイ力ルセンターホス　　８１７ ピタルズ、インコーホ レーテッド ■出　願　人　　トラステイーズ　オブ　　アメリタフ
ツ　力レツジ　　　　アベ ＠出　願　人　　ウニレスレイ　力レツ　　アメリジ　
　　　　　　　　　　　地なし［ 力合衆国ケセチューセツツ州ボストン　ボックスハリソ
ンアベニュー　１７１ 力合衆国マサチューセッツ州　ボストン　ハリソンニュ
ー　１３６ カ合衆国　　マサチューセッツ州　ウニレスレイ（番ν 手続捕正書 １　事件の表示　　　　　　　　　昭和６０年特許願第
１０４９７８号３　補正をする者 事件との関係　　　　　　特許出願人 性　　所　　　アメリカ合衆国０２１３Ｂマセチユーセ
ツツ州ケンアリワン　マセチュー七ツツアヘニュー　７
７ 氏名（名称）　マサチューセノツ　インスティテスート
　オブ　テクノロン−（ほか３名） ↓代理人 １１　　所　　！京都新宿区新宿２丁目Ｂ　＠Ｉ　Ｐ＃
Ｎ宿セブンビル：３　Ｑ　：３６　補正ここより増加す
る発明の数　　　　　増加せず１、特許請求の範囲を以
下に訂正する。 １、　イ）　ＩＬ−１遺伝子ａ配列を含むｃＤＮＡ配列
を含む組み替えＤＮＡクローニングビヒクル又は、 口）以下のアミノ酸配列 （ａ） ＳＥＲＧＬＵ　　ＭＥＴ　　ＭＥＴ　　ＡＬＡ　　ＴＹ
ＲＴＹＲＳＥＲＧＬＹ　　ＡＳＮ　　ＧＬＵ　　ＡＳＰ
　　ＡＳＰ　　ＬＥｔＪＰＨＥ　ＰＨＥ　ＧＬＵ　ＡＬ
Ａ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　ＰＲＯＬＹＳ　ＧＬＮ　ＭＥＴ　
ＬＹＳ　ＣＹＳ　ＳＥＲＰＨＥＧＬＮ　ＡＳＰ　ＬＥＵ
　ＡＳＰ　ＬＥＬＩ　ＣＹＳ　ＰＲＯＬＥＵ　ＡＳＰ　
ＧＬＹ　ＧＬＹ　ＩＬＥ　ＧＬＮ　ＬＥＵＡＲＧ　ＩＬ
ＥＳＥＲＡＳＰ　ＨＩＳ　ＨＩＳ　ＴＹＲＳＥＲＬＹＳ
　ＧＬＹ　ＰＨＥ　ＡＲＧ　ＧＬＮ　ＡＬＡＡＬＡ　　
ＳＥＲＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＡＬＡ　　ＭＥ
Ｔ　　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　ＬＥＵ　　ＡＲＧ　　ＬＹ
Ｓ　　ＭＥＴ　　ＬＥＵＶＡＬ　　ＰＲＯＣＹＳ　　Ｐ
ＲＯＧＬＮ　　ＴＨＲＰＨＥ　　ＧＬＮ　　ＧＬｔＪ　
　ＡＳＮ　　ＡＳＰ　　ＬＥＵ　　ＳＥＲＴＨＲＰＨＥ
　ＰＨＥ　ＰＲＯＰＨＥ　ＩＬＥ　ＰＨＥ　ＧＬＵＧＬ
ｔＪ　ＧＬＵ　ＰＲＯＩＬＥ　ＰＨＥ　ＰＨＥ　ＡＳＰ
ＴＨＲＴＲＰ　ＡＳＰ　ＡＳＮ　ＧＬＵ　ＡＬＡ　ＴＹ
ＲＶＡＬ　ＨＩＳ　ＡＳＰ　ＡＬＡ　ＰＲＯＶＡＬ　Ａ
ＲＧＳＥＲＬＥＵ　ＡＳＮ　ＣＹＳ　ＴＨＲＬＥＵ　Ａ
ＲＧ　ＡＳＰ　ＳＥＲＧＬＮ　ＧＬＮ　ＬＹＳ　ＳＥＲ
ＬＥＤＶＡＬ　　ＭＥＴ　　ＳＥＲＧＬＹ　　ＰＲＯＴ
ＹＲＧＬＵ　　ＬＥＵ　　ＬＹＳ　　ＡＬＡ　　ＬＥＵ
　　）Ｉｔｓ　　ＬＥＵ　　ＧＬＮＧＬＹ　ＧＬＮ　Ａ
ＳＰ　ＭＥＴ　ＧＬＵ　ＧＬＮ　ＧＬＮ　ＶＡＬ　ＶＡ
Ｌ　ＰＨＥ　ＳＥＲＭＥＴ　ＳＥＲＰＨＥＶＡＬ　ＧＬ
Ｎ　ＧＬＹ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　ＳＥＲＡＳＮ　ＡＳＰ　
ＩＪｓ　ＩＬＥ　ＰＲＯＶＡＬ　ＡＬＡ　ＬＥＵＧＬＹ
　ＬＥＩＪ　ＬＹＳ　ＧＬｔＪ　ＬＹＳ　ＡＳＮ　ＬＥ
ｔＪ　ＴＹＲＬＥｕ　ＳＥＲＣＹＳ　ＶＡＬ　ＬＥＩＪ
　ＬＹＳ　　　　　ｌ’：ＡＳＰ　ＡＳＰ　ＬＹＳ　Ｐ
ＲＯＴＨＲＬＥｕ　ＧＬＮ　ＬＥＵ　ＧＬＵ　ＳＥＲＶ
ＡＬ　ＡＳＰ　ＰＲＯＬＶＳＡＳＮ　ＴＹＲＰＲＯＬＹ
Ｓ　ＬＹＳ　ＬＹＳ（ｂ） 阿ＥＴ　ＡＬＡ　ＧＬＵ　ＶＡＬ　ＰＲＯＬＹＳＬＥＤ
　ＡＬＡ　ＳＥＲＧＬＵ　ＭＥＴ　ＭＥＴ　ＡＬＡ　Ｔ
ＹＲＴＹＲＳＥＲＧＬＹ　ＡＳＮ　ＧＬＵ　ＡＳＰ　Ａ
ＳＰ　ＬＥＵ　ＰＨＥ　ＰＨＥ　ＧＬＵ　ＡＬＡ　ＡＳ
Ｐ　ＧＬＹＰＲＯＬＹＳ　ＧＬＮ　ＭＥＴ　ＬＹＳ　Ｃ
ＹＳ　ＳＥＲＰＨＥ　ＧＬＮ　ＡＳＰ　ＬＥＵ　ＡＳＩ
’　ＬＥＵ　ＣＹＳＰＲＯＬＥＵ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　Ｇ
ＬＹ　ＩＬＥ　ＧＬＮ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＩＬＥ　ＳＥ
ＲＡＳＰ　ＨＩＳ　ｌｌｌ５ＴＹＲＳＥＲＬＹＳ　ＧＬ
Ｙ　Ｐ）ＩＥ　ＡＲＧ　ＧＬＮ　ＡＬＡ　ＡＬＡ　ＳＥ
ＲＶＡＬ　ＶＡＬ　ＶＡＬ　、ＡＬＡＭＥＴ　ＡＳＰ　
ＬＹＳ　ＬＥＵＡＲＧ　ＬＹＳ　ＭＥＴ　ＬＥｕ　ＶＡ
Ｌ　ＰＲＯＣＹＳ　ＰＲＯＧＬＮ　ＴＩＩＲＰＨＥ　Ｇ
ＬＮ　ＧＬＵ　ＡＳＮ　ＡＳＰ　ＬＥＵ　ＳＥＲＴＨＲ
ＰＨＥ　ＰＨＥ　ＰＲＯＰＩＥ　ＩＬＥ　ＰＨＥＧＬＵ
　ＧＬＵ　ＧＬＵ　ＰＲＯＩＬＥ　ＰＨＥ　ＰＨＥ　Ａ
ＳＰ　ＴＨＲＴＲＰ　ＡＳＰ　ＡＳＮ　ＧＬＵ　Ａ１．
ＡＴＹＲＶＡＬ　旧Ｓ　ＡＳＰ　ＡＬＡ　ＰＲＯＶＡＬ
　ＡＲＧ　ＳＥＲＬＥＬＩ　ＡＳＮ　ＣＹＳ　ＴＨＲＬ
ＥｔＪＡＲＧ　ＡＳＰ　ＳＥＲＧＬＮ　ＧＬＮ　ＬＹＳ
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ＯＴＹＲＧＬＵ　ＬＥＵ　ＩＪＳ　ＡＬＡ　ＬＥＵ　）
Ｉｔｓ　ＬＥＵ　ＧＬＮ　ＧＬＹ　ＧＬＮ　ＡＳＰ　Ｍ
ＥＴ　ＧＬＵ　ＧＬＮＧＬＮ　ＶＡＬ　ＶＡＬ　ＰＩＥ
　ＳＥＲＭＥＴ　ＳＥＲＰＨＥ　ＶＡＬ　ＧＬＮ　ＧＬ
Ｙ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　５ＥＲＡＳＮ　　ＡＳＰ　　ＬＹ
Ｓ　　ＩＬＥ　　ＰＲＯＶＡＬ　　ＡＬＡ　　ＬＥＵ　
　ＧＬＹ　　ＬＥｔＪ　　ＬＹＳ　　ＧＬＵ　　ＬＹＳ
　　ＡＳＮＬＥＵ　　ＴＹＲＬＥＵ　　ＳＥＲＣＹＳ　
　ＶＡＬ　　ＬＥＵ　　ＬＹＳ　　ＡＳＰ　　ＡＳＰ　
　ＬＹＳ　　ＰＲＯＴＩＩＲＬＥＬＩＧＬＮ　　ＡＳＮ
　　ＳＥＲＩＬＥ　　ＴＲＰ、ＴＨＲＧＬＹ　　ＶＡＬ
　　ＬＥｔＪ　　ＳＥＲＬＥＵ　　ＡＳＮ　　Ｇ１．Ｎ
　　ＶＡＩ、ＬＥＤ （ｃ） ＭＥＴ　ＳＥＲＧＬＹ　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　ＬＥＵ　
ＬＹＳ　ＡＬＡ　ＬＥＵ　ｌ１ｌｓ　ＬＥｔＪ　Ｇｌ、
Ｎ　ＧＬＹＧＬＮ　ＡＳＰ　ＭＥＴ　ＧＬＵ　ＧＬＮ　
ＧＬＮ　ＶＡＬ　ＶＡＬ　ＰＨＥ　ＳＥＲＭＥＴ　ＳＥ
ＲＰＨＥ　ＶＡＬＧＬＮ　ＧＬＹ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　Ｓ
ＥＲＡＳＮ　ＡＳＰ　ＬＹＳ　ＩＬＥ　ＰＲＯＶＡＬ　
ＡＬＡ　ＬＥｔＪ　ＧＬＹＬＥＵ　　ＬＹＳ　　ＧＬＬ
Ｉ　　ＬＹＳ　　ＡＳＮ　　ＬＥＬＩ　　ＴＹＲＬＥＵ
　　ＳＥＲＣＹＳ　　ＶＡＬ　　ＬＥＬＩ　　ＬＹＳ　
　ＡＳＰＡＳＰ　ＬＹＳ　ＰＲＯＴＨＲＬＥＵ　ＧＬＮ
　ＬＥＵ　ＧＬＵ　ＳＥＲＶＡＬ　ＡＳＰ　ＰＲＯＬＹ
Ｓ　ＡＳＮＴＹＲＰＲＯＬＹＳ　ＩＪＳ　ＬＹＳ　ＭＥ
Ｔ　ＧＬＵ　ＬＹＳ　ＡＲＧ　ＰＨＥ　ＶＡＬ　ＰＨＥ
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ＳＮ　ＬＹＳ　ＬＥＵ　ＧＬｔＪ　ＰＨＥ　ＧＬＬＩ　
ＳＥＲＡＬＡ　ＧＬＮ　Ｐ旺ＰＲＯＡＳＮ　ＴＲＰ　Ｔ
ＹＲＩＬＥ　ＳＥＲＴＨＲＳＥＲＧＬＮ　ＡＬＡ　ＧＬ
Ｕ　ＡＳＮ　ＭＥＴ　ＰＲＯＶＡＬ　ＰＨＥ　ＬＥＵ　
ＧＬＹ　ＧＬＹ　ＴＨＲＬＹＳ　ＧＬＹ　ＧＬＹ　ＧＬ
Ｎ　ＡＳＰ　　ＩＬＥ　ＴＨＲＡＳＰＰＨＥ　ＴＨＲＭ
ＥＴ　ＧＬＮ　ＰＨＥ　ＶＡＬ　ＳＥＲＳＥＲ（ｄ） ＭＥＴ　ＳＥＲＧＬＹ　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　ＬＥＬＩ
　ＬＹＳ　ＡＬＡ　ＬＥＵ　Ｈｌｓ　ＬＥＵ　にＬＮ　
ＧＩＪＧＬＮ　ＡＳＰ　ＭＥＴ　ＧＬＵ　ＧＬＮ　ＧＬ
Ｎ　ＶＡＬ　ＶＡＬ　ＰＨＥ　ＳＥＲＭＥＴ　ＳＥＲＰ
ＨＥ　ＶＡＬＧＬＮ　ＧＬＹ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　ＳＥＲ
ＡＳＮ　ＡＳＰ　ＬＹＳ　ＩＬＥ　ＰＲＯＶＡＬ　ＡＬ
Ａ　ＬＥＵ　ＧＩＪＬＥＤ　　ＬＶＳ　　ＧＬＵ　　Ｌ
ＹＳ　　ＡＳＮ　　ＬＥＵ　　ＴＹＲＬＥＤ　　ＳＥＲ
ＣＹＳ　　ＶＡＬ　　ＬＥＵ　　ＬＹＳ　　ＡＳＰＡＳ
Ｐ　　ＬＹＳ　　ＰＲＯＴＨＲＬＥＵ　　ＧＬＮ　　Ａ
ＳＮ　　ＳＥＲＩＬＥ　　ＴＲＰ　　Ｔ）ＩＲＧＬＹ　
　ＶＡＬ　　ＬＥＵＳＥＲＬＥＵ　　ＡＳＮ　　ＧＬＮ
　　ＶＡＬ　　ＬＥＵからなる群から選ばれるアミノ酸
配列に対するコート′を含んているｃＤＮＡを含む組み
替えＤＮＡクローニングビヒクル以上から選ばれる組み
替えＤＮＡクローニングビヒクル。 ２゜ 以下のアミノ酸配列 ＭＥＴ　　ＡＬＡ　　ＧＬＵ　　ＶＡＬ　　ＰＲＯＬＹ
Ｓ　　ＬＥＵ　　ＡＬＡ　　ＳＥＲＧＬＵ　　ＭＥＴ　
　ＭＥＴ　　ＡＬＡ　　ＴＹＲＴＹＲＳＥＲＧＬＹ　　
ＡＳＮ　　ＧＬＵ　　ＡＳＰ　　ＡＳＰ　　ＬＥＵ　　
ＰＨＥ　　ＰＩＥ　　ＧＬＵ　　ＡＬＡ　　ＡＳＰ　　
ｔｉＬＹ１’ＲＯＬＹＳ　　ＧＬＮ　　ＭＥＴ　　ＬＹ
Ｓ　　ＣＹＳ　　ＳＥＲＰＨＥ　　ＧＬＮ　　ＡＳＰ　
　ＬＥＵ　　ＡＳＰ　　ＬＥＩＩ　　ＣＹＳ１’ＲＯＬ
ＥｔＪ　　ＡＳＰ　　ＧＬＹ　ＧＬＹ　　ＩＬＥ　ＧＬ
Ｎ　　ＬＥＤ　ＡＲＧ　　ＩＬＥ　ＳＥＲＡＳＰ　　１
１１５　１１ＩｓＴＹＲＳＥＲＬＹＳ　　ＧＬＹ　　Ｐ
ＨＥ　　ＡＲＧ　　ＧＬＮ　　ＡＬＡ　　ＡＬＡ　　Ｓ
ＥＲＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＡＬＡＭＥＴ　　
ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　ＬＥＵ　　ＡＲＧ　　ＬＹＳ　　
ＭＥＴ　　ＬＥＬＩ　　ＶＡＬ　　ＰＲＯＣ’／Ｓ　　
ＰＲＯＧＬＮ　　ＴＨＲ１’ｌｌＥ　　ＧＬＮ　　ＧＬ
ＩＪ　　ＡＳＮ　　ＡＳＰ　　ＬＥＬＩ　　ＳＥＲＴＨ
ＲＰＨＥ　　ＰＨＥ　　ＰＲＯＰＨＥ　　ＩＬＥ　　Ｐ
ＨＥ＋；ＬＵ　ＧＬＩＪ　ＧＬＵ　ＰＲＯＩＬＥ　　Ｐ
ＨＥ　　ＰＨＥ　ＡＳＰ　ＴＨＲＴＲＰ　　ＡＳＰ　Ａ
ＳＮ　　ＧＬＵ　　ＡＬＡＴＹＲＶＡＬ　）１１ＳＡＳ
Ｐ　ＡＬＡ　ＰＲＯＶＡＬ　ＡＲＧ　ＳＥＲＬＥＵ　Ａ
ＳＮ　ＣＹＳ　ＴＨＲＬＥＵＡＲＧ　　ＡＳＰ　　ＳＥ
ＲＧＬＮ　　ＧＬＮ　　ＬＹＳ　　ＳＥＲＬＥＵ　　Ｖ
ＡＬ　　ＭＥＴ　　ＳＥＲＧＬＹ　　ＰＲＯＴＹＲＧＬ
ｔＪ　ＬＥＵ　ＬＹＳ　ＡＬＡ　ＬＥＤ　ＨＩＳ　ＬＥ
Ｕ　ｃＬＮ　ＧＬＹ　ＧＬＮ　ＡＳＰ　ＭＥＴ　Ｇｌ□
１１　ＧＬＮＧＬＮ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＰＨＥ　
　ＳＥＲＭＥＴ　　ＳＥＲＰＨＥ　　ＶＡＬ　　ＧＬＮ
　　ＧＬＹ　　ＧＬＵ　　ＧＬｔＪ　　５ＥＲＡＳＮ　
　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　ＩＬＥ　　ＰＲＯＶＡＬ　　Ａ
ＬＡ　　ＬＥＬＩ　　ＧＬＹ　　ＬＥＵ　ＬＹＳ　　Ｇ
ＬＵ　　ＬＹＳ　　ＡＳＮＬＥＵ　　ＴＹＲＬＥｔＪ　
　ＳＥＲＣＹＳ　　ＶＡＬ　　ＬＥｔｊ　　ＬＹＳ　　
ＡＳＰ　　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　ＰＲＯＴ）ＩＲＬＥＵ
＋；ＬＮ　　ＬＥＬＩ　ＧＬＵ　ＳＥＲＶＡＬ　ＡＳＰ
　　ＰＲＯＬＹＳ　ＡＳＮ　　ＴＹＲＰＲＯＬＹＳ　　
ＬＹＳ　　ＬＶＳＭＥＴ　　ＧＬＵ　　ＬＹＳ　　ＡＲ
Ｇ　　ＰＨＥ　　ＶＡＬ　　ＰＨＥ　　ＡＳＮ　　ＬＹ
Ｓ　　ＩＬＥ　　ＧＬＵ　　ＩＬＥ　　ＡＳＮ　　ＡＳ
Ｎ＞　　　　ＬＹＳ　ＬＥＩＪ　ＧＬＵ　ＰＨＥ　ＧＬ
ＩＪ　ＳＥＲＡＬＡ　ＧＬＮ　ＰＨＥ　ＰＲＯＡＳＮ　
ＴＲＰ　ＴＹＲＩＬＥｊ ＳＥＲＴ）ＩＲＳＥＲＧＬＮ　　ＡＬＡ　　ＧＬＬＩ　
ＡＳＮ　　ＭＥＴ　　ＰＲＯＶＡＬ　ＰＨＥ　　ＬＥＵ
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ＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＩＬＥ　ＴＨＲＡＳＰ　　ＰＨＥ
　　Ｔ）ＩＲＭＥＴ　ＧＬＮ　　ＰＩＩＥＶＡＬ　　Ｓ
ＥＮ　ＳＥＲ に対するコードを含んでいるｃＤＮＡを含む組み替えＤ
ＮＡクローニングビヒクルである特許請求の範囲第１項
の組み替えＤＮＡクローニングビヒクル。 １・ （■）上記（ｒ）の全ｃ［ｌＮＡ配列のうちの塩基ＩＩ
Ｉ〜？＋７からなる配列、 （ＩＩＩ）上記（Ｉ）の全のｃＤＮＡ配列のうちの塩基
１〜６７７と１３５５〜１５０７からなる配列又は機能
的にこれと同等の配列、（ＩＶ）上記（１）の全のｃＤ
ＮＡ配列のうちの塩基４８２〜１５０１からなる配列又
は機能的にこれと同等の配列、（Ｖ）上記（１）！７）
全（７）　ｃＤＮＡ配列のうちの塩基４８２〜６７７と
１３５５〜！５０７からなる配列又は機能的にこれと同
等の配列、の（１）〜（Ｖ）うちの何れかを有する本質
的に純粋なｃＤＮＡを含む組み替え　ＤＮＡクローニン
グビヒクルである特許請求の範囲第１項の組み替えＤＮ
Ａクローニングビヒクル。 ４゜ 組み替えブラスミＦ’ｐｃＤ−４１５である特許請求の
範囲第１項のクローニングビヒクル。 ５゜ ｐｃＤ−４１５ΔＰＶｕ／Ｘｍｎ、　　ｐｃＤ−４１５
ΔＰｓｔ／）ｔｉｎ　、及びｐｃＯ・４１５ΔＰｓｔ／
１ｌｉｎ−ΔＰＶｕハｂｏからなる群から選ばれる組み
替えプラスミドである特許請求の範囲第１項のクローニ
ングビヒクル。 （■）上記の（１）の全ｃＤＮＡ配列のうちの塩基Ｉ１
１〜７１７からなる配列、 （ＩＩＩ）上記の（１）の全ｃＤＮＡ配列のうちの塩基
１〜６７７と１３５５〜１５０７からなる配列又は機能
的にこれと同等の配列。 （ｒＶ）上記の（【）の全ｃ［ｌＮＡ配列のうちの塩基
４８２〜１５０１からなる配列又は機能的にこれと同等
の配列、（Ｖ）上記（７）　（１）　＋７）全ｃＯＮＡ
配列ノウチノ塩基４８２〜６７７　ト１３５５〜１５０
７からなる配列又は機能的にこれと同等の配列、のうち
の何れかを有する本質的に純粋なｃＤＮＡａ７゜ イ）　ＩＬ−１遺伝子ｃＤＮＡ配列を含むｃＤＮＡ配列
を含む別み替え［ｌＮＡりａ−ニングビヒクル又は、口
） ＳＥＲＧＬＵ　　ＭＥＴ　　ＭＥＴ　　ＡＬＡ　　ＴＹ
Ｒ丁ＹＲＳＥＲＧＬＹ　　ＡＳＮ　　ＧＬＬＩ　　ＡＳ
Ｐ　　ＡＳＰ　　ＬＥＵＰＨＥ　ＰＨＥ　ＧＬＬＩ　Ａ
ＬＡ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　ＰＲＯＬＹＳ　ＧＬＮ　ＭＥＴ
　ＬＹＳ　ＣＹＳ　ＳＥＲＰＨＥＧＬＮ　　ＡＳＰ　　
ＬＥＩＪ　　ＡＳＰ　　ＬＥＬＩ　　ＣＹＳ　　ＰＲＯ
ＬＥｔＪ　　ＡＳＰ　　ＧＬＹ　　ＧＬＶ　　ＩＬＥ　
　ＧＬＮ　　ＬＥｔＪＡＲＧ　ＩＬＥ　ＳＥＲＡＳＰ　
ＨＩＳ　Ｈｌｓ　ＴＹＲＳＥＲＬＹＳ　ＧＬＹ　ＰＨＥ
　ＡＲＧ　ＧＬＮ　ＡＬＡＡＬＡ　　ＳＥＲＶＡＬ　　
ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＡＬＡ　　ＭＥＴ　　ＡＳＰ　　
ＬＹＳ　　ＬＥＵ　　ＡＲＧ　　ＬＹＳ　　ＭＥＴ　　
ＬＥＤ）　　　ＶＡＬ　ＰＲＯＣ’／Ｓ　ＰＲＯＧＬＮ
　ＴＨＲＰＨＥ　ＧＬＮ　ＧＬＵ　ＡＳＮ　ＡＳＰ　Ｌ
ＥｔＪ　ＳＥＲＴＨＲＰ）ＩＥ　Ｐ）ＩＥ　ＰＲＯＰＨ
Ｅ　ＩＬＥ　ＰＨＥ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　ＰＲＯ
ＩＬＥ　Ｐ）ＩＥ　Ｐ）ＩＥ　ＡＳＰＴＨＲＴＲＰ　Ａ
ＳＰ　ＡＳＮ　ＧＬＵ　ＡＬＡ　ＴＹＲＶＡＬ　ＨＩＳ
　ＡＳＰ　ＡＬＡ　ＰＲＯＶＡＬ　ＡＲＧＳＥＲＬＥｔ
Ｊ　　ＡＳＮ　　ＣＹＳ　　ＴＨＲＬＥＵ　　ＡＲＧ　
　ＡＳＰ　　ＳＥＲＧＬＮ　　ＧＬＮ　　ＬＹＳ　　Ｓ
ＥＲＬＥＵＶＡＬ　　ＭＥＴ　　ＳＥＲＧＬＹ　　ＰＲ
ＯＴＹＲＧＬＬＪ　　ＬＥＩＪ　　ＬＹＳ　　ＡＬＡ　
　ＬＥＵ　　ｔｌｌｓ　　ＬＥｔＪ　　ＧＬＮＧＬＹ　
ＧＬＮ　ＡＳＰ　ＭＥＴ　ＧＬＵ　ＧＬＮ　　ＧＬＮ　
ＶＡＬ　ＶＡＬ　　ＰＨＥ　ＳＥＲＭＥＴ　ＳＥＲＰＩ
ＩＥＶＡＬ　　ＧＬＮ　　ＧＬＹ　　ＧＬＵ　　ＧＬＵ
　　ＳＥＲＡＳＮ　　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　ＩＬＥ　　
ＰＲＯＶＡＬ　　ＡＬＡ　　ＬＥＵＧＬＹ　　ＬＥＩＪ
　　ＬＹＳ　　ＧＬＩＪ　　ＬＹＳ　　ＡＳＮ　　ＬＥ
ＩＪ　　ＴｖＲｔ、ＥｔＪ　　ＳＥＲＣＹＳ　　ＶＡＬ
　　ＬＥｔＪ　　ＬＹＳＡＳＰ　ＡＳＰ　ＬＹＳ　ＰＲ
Ｏ刊ＲＬＥＵ　ＧＬＮ　ＬＥＵ　ＧＬＵ　ＳＥＲＶＡＬ
　ＡＳＰ　ＰＲＯＬＹＳＡＳＮ　ＴＹＲＰＲＯＬＹＳ　
ＬＹＳ　ＬＹＳからなるアミノ酸配列に対するコートを
含んでいるｃＤＮＡを含む組み賛えＤＮＡクローニング
ビヒクル以上イ）又は口）から選ばれる組み替えＤＮＡ
クローニングビヒクルによって形質転換された微生物又
は、８゜ 以下のアミノ酸配列 ＭＥＴ　ＡＬＡ　ＧＬＵ　ＶＡＬ　ＰＲＯＬＹＳ　ＬＥ
Ｄ　ＡＬＡ　ＳＥＲＧＬＬＩ　ＭＥＴ　ＭＥＴ　ＡＬＡ
　ＴＹＲ↑ＹＲＳＥＲＧＬＹ　　ＡＳＮ　　ＧＬＬＩ　
　ＡＳＰ　　ＡＳＰ　　ＬＥＬＩ　　ＰＨＥ　　ＰＨＥ
　　ＧＬＵ　　ＡＬＡ　　ＡＳＰ　　ＧＬＹＰＲＯＬＹ
Ｓ　　ＧＬＮ　　ＭＥＴ　　ＬＹＳ　　ＣＹＳ　　ＳＥ
ＲＰＨＥ　ＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＬＥＵ　　ＡＳＰ　　
ＬＥＬＩ　　ＣＹＳＰＲＯＬＥｔＪ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　
ＧＬＹ　ＩＬＥ　ＧＬＮ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＩＬＥＳＥ
ＲＡＳＩ’　ｌｌｌ５　ＨＩＳＴＹＲＳＥＲＬＹＳ　　
ＧＬＹ　ＰＨＥ　　ＡＲＧ　　ＧＬＮ　　ＡＬＡ　　Ａ
ＬＡ　　ＳＥＲＶＡＬ　　Ｖ、ＡＬ　　ＶＡＬ　　Ａ１
．ＡＭＥＴ　　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　ＬＥＬＩ　　ＡＲ
Ｇ　　ＬＹＳ　　ＭＥＴ　　ＬＥＬＩ　　ＶＡＬ　　Ｐ
ＲＯＣ’ＶＳ　　ＰＲＯＧＬＮ　　ＴＨＲＰＨＥ　ＧＬ
Ｎ　ＧＬＬＩ　ＡＳＮ　ＡＳＰ　ＬＥＵＳＥＲＴＨＲＰ
ＩＥ　ＰＨＥ　ＰＲＯＰＩ（Ｅ　　ＩＬＥ　ＰＩＩＥＧ
ＬυＧＬＵ　ＧＬＵ　ＰＲＯＩＬＥ　Ｐ）ＩＥ　ＰＨＥ
　ＡＳＰ　ＴＨＲＴＲＰ　ＡＳＰ　ＡＳＮ　ＧＬｔｊ　
ＡＬＡＴＹＲＶＡＬ　ＨＩＳ　ＡＳＰ　ＡＬＡ　ＰＲＯ
ＶＡＬ　ＡＲＧ　ＳＥＲＬＥＵ　ＡＳＮ　ＣＹＳ　ＴＨ
ＲＬＥＤＡＲＧ　ＡＳＰ　ＳＥＩ？　ＧＬＮ　ＧＬＮ　
Ｌ、’ｆＳ　ＳＥＲＬＥＵ　ＶＡＬ　ＭＥＴ　ＳＥＲＧ
ＬＹ　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　　ＬＥＵ　　ＬＹＳ　　Ａ
ＬＡ　　ＬＥＵ　旧Ｓ　　ＬＥＵ　　ＧＬＮ　　ＧＬＹ
　　ＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＭＥＴ　　ＧＬＵ　　ＧＬＮ
ＧＬＮ　ＶＡＬ　ＶＡＬ　Ｐ）ＩＥ　ＳＥＲＭＥＴ　Ｓ
ＥＲＰＨＥ　ＶＡＬ　ＧＬＮ　ＧＬＹ　ＧＬＵ　ＧＬＵ
　５ＥＲＡＳＮ　　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　ＩＬＥ　　Ｐ
ＲＯＶＡＬ　　ＡＬＡ　　ＬＥＵ　　ＧＬＹ　　ＬＥＵ
　　しＹｓ　　ＧＬ（Ｊ　　ＬｖＳ　　ＡＳＮＬ、ＥＬ
Ｉ　　ＴＹＲＬＥＵ　　ＳＥＲＣ’／Ｓ　　ＶＡＬ　　
ＬＥｔＪ　　ＬＹＳ　　ＡＳＰ　　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　
　ＰＲＯＴ）１１１１　　ＬＥＩＪＧＬＮ　ＬＥＵ　Ｇ
ＬｔＪ　ＳＥＲＶＡＬ　ＡＳＰ　ＰＲＯＬＹＳ　ＡＳＮ
　ＴＹＲｌ’ＲＯＬＹＳ　ＬＹｓ　ＬＶＳＭＥＴ　　Ｇ
ＬＵ　　ＬＹＳ　　ＡＲＧ　　ＰＩＥ　　ＶＡＬ　　Ｐ
ＨＥ　　ＡＳＮ　　ＬＹＳ　　ＩＬＥ　　ＧＬＵ　　Ｉ
ＬＥ　　ＡＳＮ　　ＡＳＮＬＹＳ　ＬＥＵＧＬＬＩ　Ｐ
）ＩＥ　ＧＬＵＳＥＲＡＬＡ　ＧＬＮ　ＦＩＮＥ　ＰＲ
ＯＡＳＮ　ＴＲＰ　ＴＹＲＩＬＥＳＥＲＴＨＲＳＥＲＧ
ＬＮ　　ＡＬＡ　　ＧＬＵ　　、ＡＳＮ　　ＭＥＴ　　
ＰＲＯＶＡＬ　　Ｉ’ＨＥ　　ＬＥｔＪ　　ＧＬＹ　　
ＧＬＹＴＨＲＬＹＳ　ＧＬＹ　ＧＬＹ　ＧＬＮ　ＡＳＰ
　　ＩＬＥ　ＴＨＲＡＳＰ　ＰＨＥ　ＴＨＲＭＥＴ　Ｇ
ＬＮ　ＰＨＥＶＡＬ　ＳＥＲＳＥＲに対するコードを含
んでいるｃＤＮＡを含む紹み替えＤＮＡクローニングビ
ヒクルによって形質転換された微生物又は、囲第７項の
細胞。 ＣＵ）上記（１）の全ｃＤＮＡｌｆｆｉ！クリのうちの
Ｊ−基Ｉ１１〜？＋７からなる配列、 の（ｒ）〜（Ｉｒ）うちの何れかを有する本質的に純粋
なｃＤＮＡを含む組み蟹えＯＮＡクローニングビヒクル
によって形質転換された微１０゜ 紺み替えプラスミドｐｃＤ−４１５、 ｐｃＤ−４１５ΔＰＶｕ／Ｘｎｕ＋、 ｐｃＯ−４１５ΔＩ’ｓｔ／１ｌｉｎ　、及び１　　　
１＋ｃＤ−４１５ΔＰｓｔ／１ｌｉｎ−ΔＰＶＩＩ／Ｘ
ｈ。 からなる群から遣ばれる組み蟹えプラスミドで形質転換
した１１菌である特許請求の範囲第７項の細胞。 微生物の大腸菌ｔｌＢｌｏｌ　（ｐｃＤ−４１５）であ
る特許請求の範囲第７項の細胞。 １．１ 特許請求の範囲第１項のイ）、第２項、第３項、第４項
及び５項の何れか−のクローニングビヒクル、又は切断
された人ＩＬ−１蛋白に対してコードを有するｃＤＮＡ
を含んでいるクローニングビヒクルを宿す微生物を培養
することからなる人１シー１、人１シー１の活性を有す
るペプチド、又は切断された人１シー１蛋白質を製造す
る方法。 １３゜ 特許請求の範囲第２項又は第１項の口）の（ａ）〜（＋
１）に定義される任意のアミノ酸配列を有するポリペプ
チド。 １４゜ 特許請求の範囲第２項に定義されるアミノ酸配列又はそ
の断片を有する免疫性のペプチド又はペプチドを含むコ
ンジヱゲエートに応答して生産される人のＩし−１に対
する抗体。 ２、発明の詳細な説明の以下の訂正をする。 明細書７３頁ｌＯ行の’（Ｔｒｙ）　Ｊをｒ　（Ｔｒｐ
）　ｉに訂正する。 明細書８１頁１９行（塩基対番号で７０２−７０４の上
）の左から４番目にあるｒＴＲＹ」をｒｒｖＲｊに訂正
する。 手続補正書 １　事件の表示　　　　　　　　　昭和６０年特許願第
１Ｑ４９７（３号３　補正をする者 事件との間］ｌｆ、　　　　　　　特許出願人性　　所
　　　アメリカ合衆国０２１３Ｂマセチユー七ツツ州ケ
ンブリツジ　マ七チューセッツアベニュー　７７ 氏名（名称）　マサチューセッツ　インスティテユート
　オブ　テクノロジー（ほか３名） ４代理人 住　　所　　東京都新宿区新宿２丁目８番１号新宿セブ
ンビル３０３Ｇ　補正により増加する発明の数　　　　
　増加せず７　補正の対象　　　　特許請求の範囲の項
８　補正の内容　　　　別紙の通り １、特許請求の範囲を以下に訂正する。 １、　イ）　ＩＬ−１遺伝子配列を含むｃＤＮＡ配列又
はその機能的同等物を含む組み替えＤＮＡクローニング
ビヒクル、口）以下のアミノ酸配列 （ａ） ＳＥＲＧＬＵ　ＭＥＴ　ＭＥＴ　ＡＬＡ　ＴＹＲＴＹＲ
ＳＥＲＧＬＹ　ＡＳＮ　ＧＬＵ　ＡＳＰ　ＡＳＰ　ＬＥ
ｔＪＰＨεＰＨＥ　ＧＬＵ　ＡＬＡ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　
ＰＲＯＬＹＳ　ＧＬＮ　ＭＥＴ　ＬＹＳ　ＣＹＳ　ＳＥ
ＲＰＨＥＧＬＮ　ＡＳＰ　ＬＥＬＩ　ＡＳＰ　ＬＥＩＪ
　ＣＹＳ　ＰＲＯＬＥＵ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　ＧＬＹ　Ｉ
ＬＥ　ＧＬＮ　ＬＥＵＡＲＧ　ＩＬＥ　ＳＥＲＡＳＰ　
ＨＩＳ　ＨＩＳ　ＴＹＲＳＥＲＬＹＳ　ＧＬＹ　ＰＨＥ
　ＡＲＧ　ＧＬＮ　ＡＬＡＡＬＡ　　ＳＥＲＶＡＬ　　
ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＡＬＡ　　ＭＥＴ　　ＡＳＰ　　
ＬＶＳ　　ＬＥＬＩ　　ＡＲＧ　　ＬＹＳ　　ＭＥＴ　
　ＬＥＵＶＡＬ　ＰＲＯＣＹＳ　ＰＲＯＧＬＮ　ＴＨＲ
ＰＨＥ　ＧＬＮ　ＧＬＵ　ＡＳＮ　ＡＳＰ　ＬＥＬＩ　
ＳＥＲＴＨＲＰＨＥ　ＰＨＥ　ＰＲＯＰＩＩＥ　ＩＬＥ
　ＰＨＥ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　ＧＬｔＪ　ＰＲＯＩＬＥ　
ＰＨＥ　ＰＨＥ　ＡＳＰＴＨＲＴＲＰ　ＡＳＰ　、ＡＳ
Ｎ　ＧＬＬＩ　ＡＬＡ　ＴＹＲＶＡＬ旧Ｓ　ＡＳＰ　Ａ
１．Ａ　ＰＲＯＶＡＬ　ＡＲＧＳＥＲＬＥＤ　ＡＳＮ　
ＣＹＳ　ＴＨＲＬＥＤ　ＡＲＧ　ＡＳＰ　ＳＥＲＧＬＮ
　ＧＬＮ　ＬＹＳ　ＳＥＲＬＥＵＶＡＬ　　ＭＥＴ　　
ＳＥＲＧＬＹ　　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　　ＬＥＵ　　Ｌ
ＹＳ　　ＡＬＡ　　ＬＥＵ　　旧ｓ　　ＬＥｔｊ　　Ｇ
ＬＮＧＬＹ　ＧＬＮ　ＡＳＰ　ＭＥＴ　ＧＬＵ　ＧＬＮ
　ＧＬＮ　ＶＡＬ　ＶＡＬ　ＰＩＩＥ　ＳＥＲＭＥＴ　
ＳＥＲＰＨＥＶＡＬ　ＧＬＮ　ＧＬＹ　ＧＬＩＪ　ＧＬ
Ｕ　ＳＥＲＡＳＮ　ＡＳＰ　ＬＹＳ　ＩＬＥ　ＰＲＯＶ
ＡＬ　ＡＬＡ　ＬＥｔＪＧＬＹ　　ＬＥＵ　　ＬＹＳ　
　ＧＬＵ　　ＬＹＳ　　ＡＳＮ　　ＬＥＵ　　ＴＹＲＬ
ＥｔＪ　　ＳＥＲＣＹＳ　　ＶＡＬ　　ＬＥＩＩ　　Ｌ
ＹＳ　　　　　　　　ムＡＳＰ　　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　
　ＰＲＯＴＨＲＬＥＵ　　ＧＬＮ　　ＬＥＬＩ　　ＧＬ
Ｕ　　ＳＥＲＶＡＬ　　ＡＳＰ　　ＰＲＯい’ＳへＳＮ
　　ＴＹＲＰＲＯＬＶＳ　　ＬＹＳ　　ＬＹＳ（ｂ） ＭＥＴ　　ＡＬＡ　　ＧＬＵ　　ＶＡＬ　　Ｉ’ｌ’ｌ
ＯＩＪＳ　　ＬＥＵ　ＡＬＡ　　ＳＥＲ＋几１ノ　ＭＥ
Ｔ　　ＭＥＴ　　Ｓ＋−へ　ＴＹＲＴＹＲＳＥＲＧＬＹ
　　ＡＳＮ　　ＧＬＵ　　ＡＳＰ　　ＡＳＰ　　ＬＥＩ
Ｊ　　ＰＨＥ　　ＰＨＥ　　ＧＬＵ　　ＡＬＡ　　ＡＳ
Ｐ　　ＧＬＹＰＲＯＬＹＳ　ＧＬＮ　ＭＥＴ　ＬＹＳ　
ＣＹＳ　、ＳＥＲＰＨＥ　ＧＬＮ　ＡＳＰ　ＬＥＵ　Ａ
ＳＰ　ＬＥｔＪ　ＣＶＳ１’ＲＯＬＥＵ　ＡＳＰ　ＧＬ
Ｙ　ＧＬ’／　ＩＬＥ　ＧＬＮ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＩＬ
Ｅ　ＳＥＲＡＳＰ　ＨＩＳ　８１５ＴＹＲＳＥＲＬＹＳ
　　ＧＬＹ　　ＰＨＥ　　ＡＲＧ　　ＧＬＮ　　ＡＬＡ
　　ＡＬＡ　　ＳＥＲＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　
ＡＬ、ＡＭＥＴ　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　
ＬＹＳ　ＭＥＴ　ＬＥＵ　ＶＡＬ　ＰＲＯＣＹＳ　ＰＲ
ＯＧＬＮ　ＴＨＲＰＨＥ　ＧＬＮ　　ＧＬＵ　ＡＳＮ　
ＡＳＰ　　ＬＥＵＳＥＲＴＨＲＰＨＥ　　ＰＩＩＥ　　
ＰＲＯＰＩＩＥ　　ＩＬＥ　　ＰＩＩＥＧＬＵ　ＧＬＬ
Ｉ　ＧＬＵ　ＰＲＯＩＬＥ　ＰＨＥ　ＰＨＥ　ＡＳＰ　
ＴＨＲＴＲＰ　ＡＳＰ　ＡＳＮ　を几ＩＩ　ＡＬＡＴＹ
ＲＶＡＬ　）Ｉｔｓ　ＡＳＰ　ＡＬＡ　ＰＲＯＶＡＬ　
ＡＲＧ　ＳＥＲＬＥＩＪ　ＡＳＮ　ＣＹＳ　Ｔ）ＩＲＬ
ＥＵＪＲＧ　　ＡＳＰ　　ＳＥＲＧＬＮ　　ＧＬＮ　　
ＬＹＳ　　ＳＥＲＬＥＵ　　ＶＡＬ　　ＭＥＴ　　ＳＥ
ＲＧＬＹ　　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　ＬＥＵ　ＬＹＳ　Ａ
ＬＡ　ＬＥＵ　Ｈｌｓ　ＬＥＩＪ　ＧＬＮ　ＧＬＹ　Ｇ
ＬＮ　ＡＳＰ　ＭＥＴ　を几ＩＪ　ＧＬＮＧＬＮＶＡＬ
ＶＡＬＰＨＥＳＥＲＭＥＴＳＥＲＰＨＥＶＡＬＧＬＮＧ
ＬＹＧＬＵＧＬＩＪＳＥＲ＾ＳＮ　ＡＳＰ　ＬＹＳ　　
ＩＬＥ　ＰＲＯＶＡＬ　ＡＬＡ　ＬＥＵ　ＧＬＶ　ＬＥ
Ｕ　ＬＹＳ　ＧＬＵ　いＳ　Ａ５ＮＣＥＵ　ＴＹＲＬＥ
ＬＩ　ＳＥＲＣＹＳ　ＶＡＬ　　ＬＥＵ　　ＬＹＳ　Ａ
ＳＰ　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　Ｔ’Ｒｏ　ＴＨＲ１，ＥＩ
ＪにＬＮ　　ＡＳＮ　　ＳＥＲＩＬＥ　ＴＲＰ　ＴＨＲ
ＧＬＹ　ＶＡＬ　　ＬＥＵ　ＳＥＲＬＥＵ　ＡＳＮ　　
ＧＬＮ　　ＶＡＩ。 １、ＥＵ （ｃ） ＦＩＥＴ　　ＳＥＲＧＬＹ　　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　　
ＬＥＵ　　ＬヤＳ　　ＡＬＡ　　ＬＥＩＪ　　）１１５
　　ＬＥＬＩ　　ｆ；Ｌ）ｔ　　ｒ、’ＬＶＧＬＮ　Ａ
ＳＰ　ＭＥＴ　ＧＬＬＩ　ＧＬＮ　ＧＬＮ　ＶＡＬ　Ｖ
ＡＬ　ＰＩＩＥ　ＳＥＲＭＥＴ　ＳＥＲＩ’ｌｌＥ　ｕ
ＡＬＧＬＮ　　ＧＬＹ　　ＧＬＵ　　ＧＬＵ　　ＳＥＲ
ＡＳＮ　　ＡＳＰ　　ＩＪｓ　　ＩＬＥ　　ＰＲＯＶＡ
Ｌ　　ＡＬＡ　　ＬＥＵ　　ＧＬＶＬＥＵ　　ＬＹＳ　
　ＧＬＵ　　ＬＹＳ　　ＡＳＮ　　ＬＥＵ　　ＴＹＲＬ
ＥＵ　　ＳＥＲＣＹＳ　　ＶＡＬ　　ＬＥＩＪ　　ＬＹ
Ｓ　　、ＡＳＰへＳＰ　　ＬＹＳ　　ＰＲＯＴＩＩＲＬ
ＥＵ　　ＧＬＮ　　ＬＥＵ　　ＧＬＵ　　ＳＥＲＶＡＬ
　　ＡＳＰ　　ＰＲＯＬＹＳ　　ＡＳＮＴＹＲＰＲＯＬ
ＹＳ　ＬＹＳ　Ｌｙｓ　ＭＥＴ　ＧＬＵ　ＬＶＳ　ＡＲ
Ｇ　ＰＩＩＥ　ＶＡＬ　ＰＨＥ　ＡＳＮ　ＬＶＳＩＬＥ
　　ＧＬＵ　　ＩＬＥ　　ＡＳＮ　　ＡＳＮ　　ＬＹＳ
　　ＬＥＵ　　ＧＬＩＪ　　ＰＨＥ　　ＧＬＬＩ　　Ｓ
ＥＲＡＬＡ　　ＧＬＮ　　Ｐ）ＩＥＰＲＯＡＳＮ　ＴＲ
Ｐ　ＴＹＲＩＬＥ　ＳＥＲＴＨＲＳＥＲＧＬＮ　ＡＬＡ
　ＧＬＵ　ＡＳＮ　ＭＥＴ　ＰＲＯＶＡＬ　Ｐ）ＩＥ　
ＬＥＵ　ＧＬＹ　ＧＬＹ　ＴＨＲＬＹＳ　ＧＬＹ　ＧＬ
Ｖ　ＧＬＮ　ＡＳＰ　　ＩＬＥ　ＴＨＲＡＳＰＰＨＥ　
ＴＨＲＭＥＴ　ＧＬＮ　　ＰＩＥ　ＶＡＬ　ＳＥＲＳＥ
Ｒ（ｄ） ＭＥＴ　ＳＥＲＧＬＹ　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　ＬＥＵ　
ＬＹＳ　ＡＬＡ　ＬＥＵ旧Ｓ　ＬＥＩＪ　ＧＬＮ　ＧＬ
ＹＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＭＥＴ　　ＧＬＵ　　ＧＬＮ　
　ＧＬＮ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＰＨＥ　　ＳＥＲＭ
ＥＴ　　ＳＥＲＰ）ＩＥ　　ＶＡＬＧＬＮ　ＧＬＹ　Ｇ
ＬＵ　ＧＬｔＪ　ＳＥＲＡＳＮ　ＡＳＰ　Ｌ’／Ｓ　Ｉ
ＬＥ　ＰＲＯＶＡＬ　ＡＬＡ　ＬＥＵ　ＧＬＹＬＥｕ　
　ＬＹＳ　　ＧＬＵ　　ＬＹＳ　　ＡＳＮ　　ＬＥＵ　
　ＴＹＲＬＥＵ　　ＳＥＲＣＹＳ　　ＶＡＬ　　ＬＥＬ
Ｉ　　ＬＹＳ　　ＡＳＰＡＳＰ　ＬＹＳ　ＰＲＯＴ）Ｉ
ＲＬＥＵ　ＧＬＮ　ＡＳＮ　ＳＥＲＩＬＥ　ＴＲＰ　Ｔ
ＨＲＧＬＹ　ＶＡＬ　ＬＥｌｊＳＥＲＬＥＵ　ＡＳＮ　
　ＧＬＮ　　ＶＡＬ　　ＬＥＵからなる群から選ばれる
アミノ酸配列に対するコートを含んているｃＤＮＡ又は
その４！１能的同等物を含む組み替えＤＮＡクローニン
グビヒクル 以上から選ばれる組み替えＤＮＡクローニングビヒクル
。 以下のアミノ酸配列 ＭＥＴ　　ＡＬＡ　　ＧＬＵ　　Ｖ、ＡＬ　　ＰＲＯＬ
ＹＳ　　ＬＥｔＪ　　ＡＬＡ　　ＳＥＲＧＬＵ　　ＭＥ
Ｔ　　ＭＥＴ　　ＡＬ、Ａ　　ＴＹＲＴＹＲＳＥＲＧＬ
Ｙ　ＡＳＮ　ＧＬＬＩ　ＡＳＰ　ＡＳＰ　　ＬＥＵ　内
ＩＥ　ＰＨＥ　Ｇｌ−ＬＩ　ＡＬＡ　　ＡＳＩ’　Ｇ１
．ｖＰＲＯＬＹＳ　　ＧＬＮ　　ＭＥＴ　　ＬＹＳ　　
ＣＹＳ　　ＳＥＲＰＨＥ　　ＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＬＥ
Ｌ！　　ＡＳＩ’　　１．ＥＩＩ　　＋：ＹＳＦ’ＲＯ
ＬＥｔＪ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　ＧＬＹ　ＩＬＥ　ＧＬＮ　
ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＩＬＥ　ＳＥＲＡＳＰ　ｌ１ｌｓ　）
ＩｔｓＴＹＲＳＥＲＬ’／Ｓ　　ＧＬＹ　　ＰＨＥ　　
ＡＲＧ　　ＧＬＮ　　ＡＬＡ　　ＡＬＡ　　ＳＥＲＶＡ
Ｌ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＡＬＡＭＥＴ　ＡＳＰ　Ｌ
ＹＳ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＬＹＳ　ＭＥＴ　ＬＥｕ　ＶＡ
Ｌ　ＰＲＯＣＹＳ　ＰＲＯＧＬＮ　ＴＨＲＰＨＥ　　Ｇ
ＬＮ　　ＧＬＵ　　ＡＳＮ　　ＡＳＰ　　ＬＥＵ　　Ｓ
ＥＲＴＨＲＰＨＥ　　ＰＩＩＥ　　ＰＲＯＰＩＩＥ　　
ＩＬＥ　　ＰＩＩＥＧＬＵ　　ＧＬＵ　　ＧＬＵ　　Ｐ
ＲＯＩＬＥ　　Ｐ）ＩＥ　　ＰＩＩＥ　　ＡＳＰ　　Ｔ
ＩＩＲＴＲＰ　　ＡＳＰ　　ＡＳＮ　　Ｇ１．ｌＩ　　
＾１．ＡＴＶＲＶＡＬ、　ＨＩＳ　ＡＳＰ　ＡＬＡ　Ｐ
ＲＯＶＡＬ　ＡＲＧ　ＳＥＲＬＥＵ　ＡＳＮ　ＣＹＳ　
ＴＨＲＬＥＵＡＲＧ　ＡＳＰ　ＳＥＲＧＬＮ　ＧＬＮ　
ＬＹＳ　ＳＥＲＬＥＬＩ　ＶＡＬ　ＭＥＴ　ＳＥＲＧＬ
Ｖ　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　　ＬＥＵ　　ＩＪｓ　　ＡＬ
Ａ　　ＬＥＵ　　）１１５　　ＬＥＵ　　ＧＬＮ　　Ｇ
ＬＹ　　ＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＭＥＴ　　ＧＬＩＪ　　
ＧＬＮＧＬＮ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　Ｐ）ＩＥ　　Ｓ
ＥＲＭＥＴ　　ＳＥＲＰＨＥ　　ＶＡＬ　　ＧＬＮ　　
ＧＬＹ　　ＧＬＩＪ　　ＧＬＵ　　５ＥＲＡＳＮ　　Ａ
ＳＰ　　ＬＹＳ　　ＩＬＥ　　ＰＲＯＶＡＬ　　ＡＬＡ
　　ＬＥＤ　　ＧＬＹ　　ＬＥＵ　　ＬＹＳ　　ＧＬＵ
　　ＬＹＳ　　ＡＳＮＬ、ＥＵＴＹＲＬＥＵＳＥＲＣ’
１ＳＶＡＬＬＥＤＬＶＳＡＳＰＡＳＰＬＹＳＰＲＯＴＩ
ＩＲ１，ＥＩＪ、　　　　にＬＮ　ＬＥＩＪ　ＧＬＵ　
ＳＥＲＶＡＬ　ＡＳＰ　ＰＲＯＬＹＳ　ＡＳＮ　ＴＹＲ
ＰＲＯ１，’／Ｓ　ＬＹＳ　ＬＹＳゲ ＭＥＴ　ＧＬＵ　ＬＹＳ　ＡＲＧ　ＰＨＥ　ＶＡＬ　Ｐ
ＨＥ　ＡＳＮ　ＬＹＳ　ＩＬＥ　ＧＬＬＩ　ＩＬＥ　Ａ
ＳＮ　ＡＳＮＩＹｓ　ＬＥＬＩ　ＧＬＵ　ＰＨＥ　ＧＬ
Ｕ　ＳＥＲＡＬＡ　ＧＬＮ　ＰＨＥ　ＰＲＯＡＳＮ　Ｔ
ＲＰ　ＴＶＲＩＬＰＳＥＲＴＨＲＳＥＲＧＬＮ　ＡＬＡ
　ＧＬＬＩ　ＡＳＮ　ＭＥＴ　ＰＲＯＶＡＬ　ＰＨＥ　
ＬＥＩＩ　ＧＬＹ　ＧＬＶＴＨＲＬＹＳ　　ＧＬＹ　　
ＧＬＹ　　ＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＩＬＥ　　Ｔｌ（ＲＡ
ＳＰ　　Ｐ）ＩＥ　　ＴＨＲＭＥＴ　　Ｇ１．Ｎ　　Ｐ
ＨＥＶＡＬ　ＳＥＲＳＥＲ に対するコードを含んでいるｃＤＮＡ又はその機能的同
等物を含む組み替えＤＮＡクローニングビヒクルである
特許請求の範囲第１項の組み替えＤＮＡクローニングビ
ヒクル。 １：） 又はその機能的同等物、 （■）上記（１）の全ｃＤＮＡ配列のうちの塩基Ｉｌｌ
〜７１７からなる配列又はその機能的同等物、 （ＩＩＩ）上記（ｒ）の全のｃＤＮＡ配列のうちの塩基
ｌ〜６７７と１３５５〜１５０７からなる配列又は機能
的にこれと同等の配列、（■）上記（１）の全のｃ［Ｉ
ＮＡ配列のうちの塩基４８２〜！５０１からなる配列又
は機能的にこれと同等の配列、（Ｖ）上記（１）の全の
ｃＤＮＡ配列のうちの塩基４８２〜６７７と１３５５〜
１５０７からなる配列又は機能的にこれと同等の配列、
の（１）〜（Ｖ）うちの何れかを有する本質的に純粋な
ｃＤＮＡを含む絹み替え　ＤＮＡクローニングビヒクル
である特許請求の範囲第１項の組み替えＤＮＡクローニ
ングビヒクル。 ４゜ 組み替えプラスミドｐｃＯ−４１５である特許請求の範
囲第１項のクローニングビヒクル。 ５゜ ｐｃＤ−４１５ΔＰＶｕ／Ｘｍｎ、　　ｐｃＤ−４１５
ΔＰｓｔ／）ｔｉｎ　、及びｐｃＤ−４１５ΔＰｓｔ／
ｌ１ｉｎ−ΔＰＶｕ／Ｘｈｏからなる群から選ばれる組
み替えプラスミドである特許請求の範囲第１項のクロー
ニングビヒクル。 又はその機能的同等物、 （Ｉｆ）上記の（１）の全ｃＤＮ＾配列のうちの塩基Ｉ
ｌｌ〜７１７からなる配列又はその機能的同等物、 （ＩＩＩ）上記の（１）の全ｃＤＮＡ配列のうちの塩基
１〜６７７と１３５５〜１５０７からなる配列又は機能
的にこれと同等の配列、（ＩＶ）上記の（［）の全ｃＤ
ＮＡ配列のうちの塩基４８２〜１５０１からなる配列又
は機能的にこれと同等の配列、（Ｖ、）上記の（１）の
全ｃＤＮＡ配列のうちの塩基４８２〜６７７と１３５５
〜１５０７からなる配列又は機能的にこれと同等の配列
、のうちの何れかを有する本質的に純粋なｒ：ＤＮＡ。 ７゜ イ）　ＩＬ−１遺伝子ｃＤＮＡ配列を含むｃＤＮＡ配列
を含む組み替えＤＮＡクローニングビヒクル又はその機
能的同等物又は、口）ＳＥＲＧＬＵ　ＭＥＴ　ＭＥＴ　
ＡＬＡ　ＴＹＲＴＹＲＳＥＲＧＬＹ　ＡＳＮ　ＧＬＵ　
ＡＳＰ　ＡＳＰ　ＬＥＬＩＰＨＥ　ＰＨＥ　ＧＬＵＡＬ
Ａ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　ＰＲＯＬＹＳ　ＧＬＮ　ＭＥＴ　
ＬＹＳ　ＣＹＳ　ＳＥＲＰＨＥＧＬＮ　ＡＳＰ　ＬＥＤ
　ＡＳＰ　ＬＥＵＣＹＳ　ＰＲＯＬＥＵ　ＡＳＰ　ＧＬ
Ｙ　ＧＬＹ　ＩＬＥ　ＧＬＮ　ＬＥＤン　　　　７へＲ
Ｇ　　ＩＬＥ　　ＳＥＲＡＳＰ　　ｌｌｌ５　　Ｈｌｓ
　　ＴＹＲＳＥＲＬＹＳ　　ＧＬＹ　　ＰＨＥ　　ＡＲ
Ｇ　　ＧＬＮ　　ＡＬＡ八Ｌへ　　ＳＥＲＶＡＬ　　Ｖ
ＡＬ　　ＶＡＬ　　ＡＬＡ　　ＭＥＴ　　ＡＳＰ　　Ｌ
ＹＳ　　ＬＥＵ　　ＡＲＣ；　　ＬＹＳ　　ＭＥＴ　　
ＬＥＵＶＡＬ　　ＰＲＯＣＹＳ　　ＰＲＯＧＬＮ　　Ｔ
）ＩＲＰＨＥ　　ＧＬＮ　　ＧＬＵ　　ＡＳＮ　　ＡＳ
Ｐ　　ＬＥＵ　　ＳＥＲＴＨＲＰＨＥ　　ＰＩＩＥ　　
Ｉ’ＲＯＰＨＥ　　ＩＬＥ　　Ｐ）ＩＥ　　ＧＬＵ　　
ＧＬＵ　　ＧＬＵ　　ＰＲＯＩＬＥ　　ＰＨＥ　　ＰＩ
Ｅ　　ＡＳＰＴ）ＩＲＴＲＰ　　ＡＳＰ　　ＡＳＮ　　
ＧＬＵ　　ＡＬＡ　　ＴＹＲＶＡＬ　　）１１５　　Ａ
ＳＰ　　Ａｔ、Ａ　　ＰＲ＋Ｉ　　ＭＡＬ　　ＡＲ＋１
ＳＥＲＬＥＵ　　ＡＳＮ　　ＣＹＳ　　Ｔ）ＩＲＬＥＩ
Ｊ　　ＡＲＧ　　Ａ５＋’　　ＳＥＲＧＬＮ　　ＧＬ、
Ｎ　　ＬＶＳ　　ＳＥＲＬＥＩＪＶＡＬ　　ＭＥＴ　　
ＳＥＲＧＬＹ　　ＰＲＯＴＹＲＧＬＵ　　ＬＥＵ　　Ｌ
ＹＳ　　、ＡＬＡ　　ＬＥＬＩ　　旧Ｓ　　ＬＥＵ　　
ＧＬ、ＮＧＬＹ　　ＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＭＥＴ　　Ｇ
ＬＵ　　ＧＬＮ　　ＧＬＮ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　Ｐ
ＩＥ　　ＳＥＲＭＥＴ　　ＳＥＲＰＩＥＶＡＬ　　ＧＬ
Ｎ　　ＧＬＹ　　ＧＬＵ　　ＧＬＵ　　ＳＥＲＡＳＮ　
　ＡＳＰ　　しＹｓ　　ＩＬＥ　　ＰＲＯＶＡＬ　　Ａ
ＬＡ　　ＬＥｌノＧＬＹ　　ＬＥＵ　　ＬＹＳ　　ＧＬ
ＬＩ　　ＬＹＳ　　ＡＳＮ　　ＬＥＵ　　ＴＹＲＬＥｕ
　　ＳＥＲＣＹＳ　　ＶＡｌ、　　ＬＥＩ、Ｉ　　ＬＹ
ＳＡＳＰ　　ＡＳＰ　　ＬＹＳ　　ＰＲＯＴ）ＩＲＬＥ
ＩＪ　　ＧＬＮ　　ＬＥＵ　　ＧＬＵ　　ＳＥＲＶＡＬ
　　ＡＳＰ　　ＰＲＯＬＹＳＡＳＮ　ＴＹＲＰＲＯＬｙ
ｓ　ＬＹＳ　ＬＹＳからなるアミノ酸配列に対するコー
トを含んでいるｃＤＮＡ又はその機能的同等物を含む組
み替えＩ）ＮＡクローニングビヒクル 以上イ）又は口）から選ばれる組み替えＤＮＡクローニ
ングビヒクルで形質転換された微生物又は、　以上イ）
又は口）から進は８゜ 以下のアミノ酸配列 ＭＥＴ　　ＡＬＡ　　ＧＬＵ　　ＶＡＬ　　ＰＲＯＬＹ
Ｓ　　ＬＥＵ　　ＡＬＡ　　ＳＥＲＧＬＩＪ　　ＭＥＴ
　　ＭＥＴ　　Ａｌ４　　ＴＹＲＴＹＲＳＥＲＧＬＹ　
ＡＳＮ　ＧＬＵ　ＡＳＰ　ＡＳＰ　ＬＥＵ　ＰＨＥ　Ｐ
ＩＩＥ　にＬＵ　ＡＬＡ　ＡＳＰ　ＧＬＶ　　　　　番
ＰＲＯＬＹＳ　　ＧＬＮ　　ＭＥＴ　　ＬＹＳ　　ＣＹ
Ｓ　　ＳＥＲＰＨＥ　　ＧＬＮ　　ＡＳＰ　　ＬＥＵ　
　ＡＳＰ　　ＬＥＩＩ　　（”ＶＳＦ’ＲＯＬＥＵ　　
ＡＳＰ　　ＧＬＶ　　ＧＬＹ　　ＩＬＥ　　ＧＬＮ　　
ＬＥＩＪ　　ＡＲＧ　　ＩＬＥ　　ＳＥＲＡＳＰ　　Ｉ
ＩＩ’；　　ｌｌｌ５ＴＹＲＳＥＲＬＶＳ　　ＧＬＹ　
　ＰＩＥ　　ＡＲＧ　　ＧＬＮ　　ＡＬＡ　　ＡＬＡ　
　ＳＥＲＶＡＬ　　ＶＡＬ　　ＭＡＬ　　ＡＬＡＭＥＴ
　ＡＳＰ　ＬＹＳ　ＬＥｕ　ＡＲＧ　ＬＹＳ　ＭＥＴ　
ＬＥＵ　ＶＡＬ　ＰＲＯＣＹＳ　ＰＲＯＧｔＮ　ＴＩＩ
ＲＰ）ＩＥ　ＧＬＮ　ＧＬＵ　ＡＳＮ　ＡＳＰ　ＬＥＵ
　ＳＥＲＴＨＲＰ）ＩＥ　ＰＨＥ　ＰＲＯＰＨＥ　ＩＬ
Ｅ　ＰＨＥＧＬＵ　ＧＬＵ　ＧＬＬＩ　ＰＲＯＩＬＥ　
ＰＨＥ　ｒ’ＨＥ　ＡＳＰ　ＴＨＲＴＲＰ　ＡＳＰ　Ａ
ＳＮ　ＧＬＵ　ＡＬＡＴＹＲＶＡＬ　ｌ１ｌｓ　ＡＳＰ
　ＡＬＡ　ＰＲＯＶＡＬ　ＡＲＧ　ＳＥＲＬＥＵ　ＡＳ
Ｎ　ＣＹＳ　ＴＨＲＬＥＵＡＲＧ　ＡＳＰ　ＳＥＲＧＬ
Ｎ　ＧＬＮ　ＬＹＳ　ＳＥＲＬＥｔＪ　ＶＡＬ　ＭＥＴ
　ＳＥＲＧＬＶ　ＰＲＯＴＹＲ１’；ｊ−ｔＪ　ＬＥｔ
Ｊ　ＬＹＳ　ＡいしＥＵ　）Ｉｔｓ　ＬＥＤ　ＧＬＮ　
ＧＬＹ　ＧＬＮ　ＡＳＰ　ＭＥＴ　ＧＬＩＩ　ＧＬＮＧ
ＬＮ　　ＶＡＬ　　ＶＡＬ　　Ｐ）ＩＥ　　ＳＥＲＭＥ
Ｔ　　ＳＥＲＰＨＥ　　ＶＡＬ　　ＧＬＮ　　ＧＬＹ　
　ＧＬＵ　　ＧＬＬＩ　　５ＥＲＡＳＮ　　ＡＳＰ　　
ＬＹＳ　　ＩＬＥ　　ＰＲＯＶＡＬ　　ＡＬＡ　　ＬＥ
ＬＩ　　ＧＬＹ　　ＬＥＬｉ　　ＬＶＳ　　ＧＬＩＩ　
　ＬＹＳ　　ＡＳＮＬＥＵ　　ＴＹＲＬＥｔＪ　　ＳＥ
ＲＣＹＳ　　ＶＡＬ　　ＬＥＬＩ　　ＬＹＳ　　ＡＳＰ
　　ＡＳＰ　　ＬＶＳ　　ＰＲＯＴＩＩＲＬＥＵにＬＮ
　　ＬＥＩＪ　　ＧＬＵ　　ＳＥＲＶＡＬ　　ＡＳＰ　
　ＰＲＯＬＹＳ　　ＡＳＮ　　ＴＹＲＰＲＯＬＹＳ　　
ＬＹＳ　　＋、ＹＳＭＥＴ　　ＧＬＵ　　ＬＹＳ　　Ａ
ＲＧ　　ＰＨＥ　　ＶＡＬ　　ＰＨＥ　　ＡＳＮ　　Ｌ
ＹＳ　　ＩＬＥ　　ＧＬＵ　　ＩＬＥ　　ＡＳＮ　　Ａ
ＳＮＬＹＳ　　ＬＥＩＪ　　ＧＬＬＩ　　ＰＩＩＥ　　
ＧＬＵ　　ＳＥＲＡＬＡ　　ＧＬＮ　　ＰＩＩＥ　　Ｐ
ＲＯＡＳＮ　　ＴＲＰ　　ＴＹＲＩＬＥＳＥＲＴＨＲＳ
ＥＲＧＬＮ　　ＡＬＡ　　ＧＬｕ　　ＡＳＮ　　ＭＥＴ
　　ＰＲＯＶＡＬ　　ＰＨＥ　ＬＥｔＪ　　ＧＬＹ　　
ＧＬＹＴＨＲＬＹＳ　　ＧＬＹ　　ＧＬＹ　　ＧＬＮ　
　ＡＳＰ　　ＩＬＥ　　ＴＨＲＡＳＰ　　ＰＨＥ　　Ｔ
ＨＲＭＥＴ　　ＧＬＮ　　ＰＩＩＥＶＡＬ　ＳＥＲＳＥ
Ｈに対するコードを含んでいるＣＤＮＡ又はその機能的
同等物を含む組み替え　ＤＮＡクローニングビヒクルに
よって形質転換された微生物又は、上記組み替えＤＮＡ
クローニングビヒクルに又はその（１能的同等物、 （ＩＩＬＩ−記（＋）の全ＣＩＩＮ＾配列のうちの塩基
１１１〜７１７からなる配＋１１又はその機能的同等物
、 の（１）〜＜　ｎ　）うちの何れかを有する本質的に純
粋なｃＤＮＡを含む絹み８・え１）〜Ａり１コーニング
ヒヒクルにＪ、って形質転換された微１０゜ 矧み腎えプラスミドｕｄｌ−４１！ｉ、＋＋ｒＴ＋−４
１５ΔＰｖｕ／Ｘｍｎ、１＋ｃｒｌ−４１！’ｉΔｒ’
ｓ１．／Ｈｉｐ　、及びｐｔＤ−４１！’ｉΔｌ’ｓＬ
／ｌ１ｉｎ−ΔＩ’Ｖｎ／Ｘｈ。 からなる群から選ばれる絹みＵえプラスミド゛て形質転
換した！Ｉ菌である特許請求の範囲第７項の細胞社剋。 １１゜ ン　　　微生物の大腸菌■旧Ｏｌ　（１＋ｃＤ−４１５
）である特；！Ｆ請求の範囲第７項の細胞長地。 特許請求の範囲第１項のイ）、第２項、第３項、第４項
及び５項の何れか−のクローニングビヒクル、又は切断
された人ＩＬ−１蛋白に対してコートを有するｃＤＮＡ
を含んでいるクローニングヒクルを宿す微生物を培養す
ることからなる人ＩＬ−１、人比−１の活性を有するペ
プチド、又は切断された人ＩＬ−１蛋白質を製造する方
法。 ＋３゜ 特許請求の範囲第２項又は第１項の口）の（ａ）〜（ｄ
）に定義される任意のアミノ酸配列を有するポリペプチ
ド。 ＋４゜ 特許請求の範囲第２項に定義されるアミノ酸配列又はそ
の断片を有する免疫性のペプチド又はペプチドを含むコ
ンジュゲエートに応答して生産される人のＩし−１に対
する抗体。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ＩＬ−１遺伝子ｃＤＮＡ配列を含むｃＤＮＡ配列か
   らなる組み替えＤＮＡクローニングビヒクル。 ２、ｃＤＮＡ配列が以下のアミノ酸配列に対してのコー
   ドを有するｃＤＮＡを含む特許請求の範囲第１項のクロ
   ーニングビヒクル。 【アミノ酸配列があります】 ３．以下のｃＤＮＡ配列からなる、 【遺伝子配列があります】 及び以下のアミノ酸配列 【アミノ酸配列があります】 に対してのコードを有する上記と機能的に均等なヌクレ
   オチド配列からなる特許請求の範囲第１項のクローニン
   グビヒクル。 ４、以下の配列を有する人ＩＬ−１に対してのコードを
   有する本質的に純粋なｃＤＮＡ。 【遺伝子配列があります】 ５、特許請求の範囲第１項のクローニングビヒクル（Ｉ
   Ｌ−１遺伝子ｃＤＮＡ配列を含むｃＤＮＡ配列からなる
   組み替えＤＮＡクローニングビヒクル）によって形質転
   換された微生物。 ６、特許請求の範囲第２項のクローニングビヒクルによ
   って形質転換された微生物。 ７、特許請求の範囲第１項のクローニングビヒクルによ
   ってライン（線）トランスフェクションされた人の組織
   培養細胞。 ８、特許請求の範囲第２項のクローニングビヒクルによ
   ってライン（線）トランスフェクションされた人の組織
   培養細胞。 ９、組み替えプラスミドｐｃＤ−４１５。 １０、特許請求の範囲第９項の組み替えプラスミドによ
   って形質転換された細菌。 １１、微生物の大腸菌ＨＢ１０１（ｐｃＤ−４１５）。 １２、人のＩＬ−１に対してコードを有しているｃＤＮ
   Ａからなるクローニングビヒクルを宿す微生物を培養す
   ることからなる人ＩＬ−１を製造する方法。 １３、上記クローニングビヒクルがプラスミドｐｃＤ−
   ４１５である特許請求の範囲１２項の方法。 １４、下記のアミノ酸配列又はその断片からなる、免疫
   性のペプチドに応答して生産される人のＩＬ−１に対す
   る抗体。 【アミノ酸配列があります】 １５、以下のアミノ酸配列又はその断片を有するペプチ
   ドからなるゴンジュゲートに応答して生産される人のＩ
   Ｌ−１に対する抗体。 【アミノ酸配列があります】 １６、ペプチドを人のＩＬ−１に応答して抗体を生産す
   ることの出来る動物媒体に導入することからなる人のＩ
   Ｌ−１に対する抗体を生産する方法に於いて、上記抗体
   が以下のアミノ酸配列を有する人のＩＬ−１に対する抗
   体であることを特徴とする上記ペプチドに応答して生産
   されるものである方法。 【アミノ酸配列があります】 １７、以下の配列を有する人のＩＬ−１活性に対するコ
   ードを有する本質的に純粋なｃＤＮＡ。 【遺伝子配列があります】 １８、以下の配列を有する人のＩＬ−１活性に対するコ
   ードを有するｃＤＮＡからなるｃＤＮＡ配列を含む組み
   替えＤＮＡクローニングビヒクル。 【遺伝子配列があります】 １９、ｃＤＮＡ配列が以下のアミノ酸配列に対してのコ
   ードを有するｃＤＮＡを含む特許請求の範囲第１８項の
   クローニングビヒクル。 【アミノ酸配列があります】 ２０、以下のｃＤＮＡ配列、 【遺伝子配列があります】 及び以下のアミノ酸配列 【アミノ酸配列があります】 に対するコードを有する上記ｃＤＮＡ配列と機能的に同
   等なヌクレオチド配列からなる特許請求の範囲第１８項
   のクローニングビヒクル。 ２１、特許請求の範囲第１８項のクローニングビヒクル
   によって形質転換された微生物。 ２２、特許請求の範囲第１９項のクローニングビヒクル
   によって形質転換された微生物。 ２３、特許請求の範囲第１８項のクローニングビヒクル
   によってライントランスフェクションされた人の組織培
   養細胞。 ２４、特許請求の範囲第１９項のクローニングビヒクル
   によってライントランスフェクションされた人の組織培
   養細胞。 以下の配列 【遺伝子配列があります】 を有するｃＤＮＡ及び以下のアミノ酸配列 【アミノ酸配列があります】 に対するコードを有している上記のｃＤＮＡ配列と機能
   的に同等なヌクレオチド配列からなるクローニングビヒ
   クルを宿している微生物を培養することからなる人のＩ
   Ｌ−１活性を有するペプチドの製造方法。 ２６、以下のアミノ酸配列を有する蛋白質。 【アミノ酸配列があります】 ２７、以下のアミノ酸配列を有する蛋白質。 【アミノ酸配列があります】 ２８、以下の切断された人のＩＬ−１ｃＤＮＡ【遺伝子
   配列があります】 及び機能的に同等なヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡ配
   列からなる組み替えＤＮＡクローニングビヒクル。 ２９、切断された人ＩＬ−１ｃＤＮＡ配列がアミノ酸配
   列【アミノ酸配列があります】 に対するコードを有するｃＤＮＡからなる特許請求の範
   囲第２８項のクローニングビヒクル。 ３０、以下の切断された人ＩＬ−１ｃＤＮＡ配列【遺伝
   子配列があります】 及び機能的な同等なヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡ配
   列からなる組み替えＤＮＡクローニングビヒクル。 ３１、切断された人ＩＬ−１ｃＤＮＡ配列がアミノ酸配
   列【アミノ酸配列があります】 に対するコードを有するｃＤＮＡからなる特許請求の範
   囲第３０項のクローニングビヒクル。 ３２、以下の切断された人ＩＬ−１ｃＤＮＡ配列【遺伝
   子配列があります】 又はこれと機能的に同等なヌクレオチド配列を含むｃＤ
   ＮＡ配列からなる組み替えＤＮＡクローニングビヒクル
   。 ３３、切断された人ＩＬ−１ｃＤＮＡ配列がアミノ酸配
   列【アミノ酸配列があります】 に対するコードを有するｃＤＮＡからなる特許請求の範
   囲第３２項のクローニングビヒクル。 ３４、特許請求の範囲第２８項に示した配列を有する切
   断された人ＩＬ−１蛋白に対してコードを有する本質的
   に純粋なｃＤＮＡ。 ３５、特許請求の範囲第３０項に示した配列を有する切
   断された人ＩＬ−１蛋白に対してコードを有する本質的
   に純粋なｃＤＮＡ。 ３６、特許請求の範囲第３２項に示した配列を有する切
   断された人ＩＬ−１蛋白に対してコードを有する本質的
   に純粋なｃＤＮＡ。 ３７、ｐｃＤ−４１５ΔＰＶｕ／Ｘｍｎ、ｐｃＤ−４１
   ５ΔＰｓｔ／Ｈｉｎ、及びｐｃＤ−４１５ΔＰｓｔ／Ｈ
   ｉｎ−ΔＰＶｕ／Ｘｈｏからなる群から選ばれる組み替
   えプラスミド。 ３８、特許請求の範囲第３７項の組み替えプラスミドに
   よって形質転換された細菌。 ３９、切断された人ＩＬ−１蛋白に対してコードを有し
   ているｃＤＮＡを含むクローニングビヒクルを宿す微生
   物を培養することからなる切断された人ＩＬ−１蛋白を
   製造する方法。 ４０、上記のクローニングビヒクルがプラスミドｐｃＤ
   −４１５ΔＰＶｕ／Ｘｍｎ、プラスミドｐｃＤ−４１５
   ΔＰｓｔ／Ｈｉｎ、及びプラスミドｐｃＤ−４１５ΔＰ
   ｓｔ／Ｈｉｎ−ΔＰＶｕ／Ｘｈｏからなる群から選ばれ
   る特許請求の範囲第３９項の方法。 ４１、以下のアミノ酸配列を有する蛋白質。 【アミノ酸配列があります】 ４２、以下のアミノ酸配列を有する蛋白質。 【アミノ酸配列があります】 ４３、以下のアミノ酸配列を有する蛋白質。 【アミノ酸配列があります】