JPS6047686A - 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 - Google Patents
抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法Info
- Publication number
- JPS6047686A JPS6047686A JP58153827A JP15382783A JPS6047686A JP S6047686 A JPS6047686 A JP S6047686A JP 58153827 A JP58153827 A JP 58153827A JP 15382783 A JP15382783 A JP 15382783A JP S6047686 A JPS6047686 A JP S6047686A
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- JP
- Japan
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- agalactin
- soluble
- water
- substance
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- Prior art date
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
不発明は新規な抗インフルエンザウィルス物質アガラク
チン及びその製造法に関する。
チン及びその製造法に関する。
これまで多くの抗インフルエンザウイルス物質が報告さ
れているが、実用に供されているものは極めて少ない。
れているが、実用に供されているものは極めて少ない。
不発明者らは、長期にわたって抗インフルエンザウィル
ス剤の研究にたずされっていたところ、今回ストレグト
コツカ１８群Ｕ型の菌体がら新規な抗インフルエンザウ
イルス物質を分離することに成功し、これを「アガラク
チン」と命名した。
ス剤の研究にたずされっていたところ、今回ストレグト
コツカ１８群Ｕ型の菌体がら新規な抗インフルエンザウ
イルス物質を分離することに成功し、これを「アガラク
チン」と命名した。
不発明のアガラクチンはストレプトコッカス８群０型菌
から次の如くして製造される。
から次の如くして製造される。
不発明で使用されるストレプトコッカスＢ群ｌ型菌はす
でに公知の菌でるり、向えばストレプトコッカスＢ＃…
型／１８Ｒ８２１（Ｗｌ（０５０−５９）として何人も
入手できるものでるる。
でに公知の菌でるり、向えばストレプトコッカスＢ＃…
型／１８Ｒ８２１（Ｗｌ（０５０−５９）として何人も
入手できるものでるる。
不発明方法によれば、まずストレプトコッカスＢ群ｌ型
菌を、当該菌の培養に一般に使用されている培地、例え
ばトッドーヒュウィット（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔｔ ）
培地、プレインハートインフュージョン（ＢＥ工）培地
中で培養する。培養は３７℃付近の温度で１５〜２０時
間行うのが好ましい。
菌を、当該菌の培養に一般に使用されている培地、例え
ばトッドーヒュウィット（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔｔ ）
培地、プレインハートインフュージョン（ＢＥ工）培地
中で培養する。培養は３７℃付近の温度で１５〜２０時
間行うのが好ましい。
この培養液にホルマリン等を加えて殺菌し、遠心分離等
によって菌体を採取する。画体は超音波処理、ブ四ナー
ゼ処理等に付して破砕した後Ｎ−アセチルムラミダーゼ
による酵素処理を行う。斯くするときアガラクチンは水
溶性成分として水性溶剤中に抽出される。
によって菌体を採取する。画体は超音波処理、ブ四ナー
ゼ処理等に付して破砕した後Ｎ−アセチルムラミダーゼ
による酵素処理を行う。斯くするときアガラクチンは水
溶性成分として水性溶剤中に抽出される。
このようにして得られたアガラクチンは、デオキシリボ
ヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ等の酵素処理、ゲル濾
過、透析、イオン交換クロマトグラフィー、電気泳動、
限外濾過等を単独で又は組合せて使用して更に精製する
ことかできる。
ヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ等の酵素処理、ゲル濾
過、透析、イオン交換クロマトグラフィー、電気泳動、
限外濾過等を単独で又は組合せて使用して更に精製する
ことかできる。
斯くして得られた本発明のアガラクチンは次のような物
性を有する。
性を有する。
ａ） 物理化学的性質
■性状二白色の粉末
■比旋光度：〔α〕み２ニー６°（０＝０．５．Ｈ，ｏ
）■分子量：２０万〜３０万 ■紫外線吸収スペクトル： ２０５ｎｍに肩を有する（
第１図） ■呈色反応：アンスロン、バイアル、ジフェニルアミン
−酢酸及びモーリッシュ反応に陽性、チオバルビッール
酸反応に陰性 ■溶解性：水に易溶、エタノール及びメタノールにやや
離溶、クロロホルム、アセトン及びベンゼンに離溶。
）■分子量：２０万〜３０万 ■紫外線吸収スペクトル： ２０５ｎｍに肩を有する（
第１図） ■呈色反応：アンスロン、バイアル、ジフェニルアミン
−酢酸及びモーリッシュ反応に陽性、チオバルビッール
酸反応に陰性 ■溶解性：水に易溶、エタノール及びメタノールにやや
離溶、クロロホルム、アセトン及びベンゼンに離溶。
■熱安定性二６０℃、２４時間及びＮｏ□Ｃ１１０分の
加熱処理で失活しない。
加熱処理で失活しない。
■耐酵素分解性：各種グリコシダーゼ、ノイラミナーゼ
、ペグチダーゼ、トリプシン。
、ペグチダーゼ、トリプシン。
プロナーゼの酵素処理で失活されない。
■耐薬品性：過ヨウ累酸、２ Ｍ＋！！ 、［＋１ＤＴ
Ａ。
Ａ。
８ＤＳによって失活されない。
（２生物学的性質
■コンカナバインａ （ｃｏｎ−Ａ）によって抗ウィル
ス活性は拮抗されない。
ス活性は拮抗されない。
■ふ化鶏卵に対しｌＱＩ＋１ｇ／Ｎで、またＭＤＯＫ細
胞に対し１■／ｍｌで毒性を示さない。
胞に対し１■／ｍｌで毒性を示さない。
■ウィルス増殖抑制最小有効量：＜１μｆ／ｒｒｔｌ■
赤血球凝集抑制最小有効量： ＜２ｏｎｑ／ｍｅ■赤血
球溶血抑制最小有効量： ＜１０ｎｆ７ｍ１次に笑施飼
を挙げて説明する。
赤血球凝集抑制最小有効量： ＜２ｏｎｑ／ｍｅ■赤血
球溶血抑制最小有効量： ＜１０ｎｆ７ｍ１次に笑施飼
を挙げて説明する。
実施例１
（１）トツドーヒュウイット培地にストレプトコッカス
Ｂ群■型／１８Ｒ８２１菌株を接種し、３７℃で１６時
間培養して増菌させた。培養液に最終濃度０．０１％に
なるようにホルマリンを加えて殺菌し、８．ＯＯＯｒｐ
ｍで３０分間冷凍遠心を行ってペレットに集菌した。こ
のベレットにハンクス氏（Ｈａｎｋ’ｓ）液を１！加え
、同様圧して遠心し培地液を除去した。この操作を培地
液の色がなくなるまで繰り返し行った。最後に、３０，
０００ｒｐｍで２時間遠心し、５１の培養液から乾燥菌
体ｉ、ｓｔ’を得た。この菌体をハンクス氏液１００祷
に懸濁し、超音波処理を１０分間行い、これにプロナー
ゼ１ｔを加えて３７℃で１６時間振とり培養した。この
とき菌液のｐＨが急激に低下するので、０．ＩＮ苛性ソ
ーダにてｐＨ７，５に調整し、新たにプロナーゼ１２全
追加し、上記と同様に培養を行った。このプロナーゼ処
理紮再度行い、その処理液ｋ ３０，００Ｏｒｐｍで２
時間超遠心し、菌体を回収した。この菌体’ｔ’０．０
１Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ ）に懸濁し、超音波処理後
、菌体１ｇ？に対してＮ−アセチルムラミダーゼ１１１
９を加え、３７℃で１６時間酵素処理を行った。この菌
液’ｋ ３０，００ Ｏｒｐｍで２時間超遠心し、わず
かに粘性のめる透明な上滑を得た。この上清１００ｍ１
に対してエタノール４ＱＱｍＡ１２−４℃にて攪拌下静
かに加え、−２０℃で４時間放置し、１０．００Ｏｒｐ
ｍで３０分間冷却遠心して沈渣を採取した。この沈渣′
ｆ、蒸留水５０ｒｒＬｅに溶解し、やや褐色の透明なア
ガラクチン溶液を得た。
Ｂ群■型／１８Ｒ８２１菌株を接種し、３７℃で１６時
間培養して増菌させた。培養液に最終濃度０．０１％に
なるようにホルマリンを加えて殺菌し、８．ＯＯＯｒｐ
ｍで３０分間冷凍遠心を行ってペレットに集菌した。こ
のベレットにハンクス氏（Ｈａｎｋ’ｓ）液を１！加え
、同様圧して遠心し培地液を除去した。この操作を培地
液の色がなくなるまで繰り返し行った。最後に、３０，
０００ｒｐｍで２時間遠心し、５１の培養液から乾燥菌
体ｉ、ｓｔ’を得た。この菌体をハンクス氏液１００祷
に懸濁し、超音波処理を１０分間行い、これにプロナー
ゼ１ｔを加えて３７℃で１６時間振とり培養した。この
とき菌液のｐＨが急激に低下するので、０．ＩＮ苛性ソ
ーダにてｐＨ７，５に調整し、新たにプロナーゼ１２全
追加し、上記と同様に培養を行った。このプロナーゼ処
理紮再度行い、その処理液ｋ ３０，００Ｏｒｐｍで２
時間超遠心し、菌体を回収した。この菌体’ｔ’０．０
１Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ ）に懸濁し、超音波処理後
、菌体１ｇ？に対してＮ−アセチルムラミダーゼ１１１
９を加え、３７℃で１６時間酵素処理を行った。この菌
液’ｋ ３０，００ Ｏｒｐｍで２時間超遠心し、わず
かに粘性のめる透明な上滑を得た。この上清１００ｍ１
に対してエタノール４ＱＱｍＡ１２−４℃にて攪拌下静
かに加え、−２０℃で４時間放置し、１０．００Ｏｒｐ
ｍで３０分間冷却遠心して沈渣を採取した。この沈渣′
ｆ、蒸留水５０ｒｒＬｅに溶解し、やや褐色の透明なア
ガラクチン溶液を得た。
（１１）上で得たアガラクチン溶液にデオキシリボヌク
レアーゼ及びリボヌクレアーゼを加えて酵素分解を充分
に行った（この分解により、アガラクチンの抗ウィルス
活性の低下は認められなかった）。この処理液１０祷全
、（１８５％食塩加０．０１Ｍ）リス緩衝液（ｐＨ７，
５）で平衡化したセファクリルＣ！Ｌ−６Ｂカラム（２
，５Ｘ９Ｑ６ｎ）に重層し、毎分１ｍｌで分画を行った
。アガラクチンはＵＶ （λ＝２５４）の吸収を示す最
初のピーク（ｖＯ）と２番目のピークとの間に溶出され
る。この活性分画を集め、凍結乾燥にて６１縮した。こ
の濃縮物’ｚｏ、ｏＩＭトリス緩衝液（ｐＨ７，５）に
対して一夜透析し、４゜次いで同緩衝液で平衡化したＤ
ｉ！ｌトφロファイン（ＡＭ）カラム（２，ＯＸ １０
ｃｍ ）に重層した。
レアーゼ及びリボヌクレアーゼを加えて酵素分解を充分
に行った（この分解により、アガラクチンの抗ウィルス
活性の低下は認められなかった）。この処理液１０祷全
、（１８５％食塩加０．０１Ｍ）リス緩衝液（ｐＨ７，
５）で平衡化したセファクリルＣ！Ｌ−６Ｂカラム（２
，５Ｘ９Ｑ６ｎ）に重層し、毎分１ｍｌで分画を行った
。アガラクチンはＵＶ （λ＝２５４）の吸収を示す最
初のピーク（ｖＯ）と２番目のピークとの間に溶出され
る。この活性分画を集め、凍結乾燥にて６１縮した。こ
の濃縮物’ｚｏ、ｏＩＭトリス緩衝液（ｐＨ７，５）に
対して一夜透析し、４゜次いで同緩衝液で平衡化したＤ
ｉ！ｌトφロファイン（ＡＭ）カラム（２，ＯＸ １０
ｃｍ ）に重層した。
大部分のアガラクチンは通過液中に回収され、一部（不
純物のタンパク質に非特異的に吸着されているもの）は
カラムに吸着された。カラムに吸着されたアガラクチン
は、１．０ Ｍ ＮａＯＪ直線塩濃度勾配による溶出を
行って、塩り度０．１Ｍ付近に溶出された。この溶出液
’ｉ０．０１Ｍトリス緩衝液に対して透析した後、再び
ＤＩ！ｉＡ［Ｉｉセルｐファインカラムに重層し、通過
液全採取した。この通過液と前に採取した通過液を合し
た。このものについて上記カラムクロマトグラフィー金
繰り返し行って、純粋なアガラクチンをイ０た。
純物のタンパク質に非特異的に吸着されているもの）は
カラムに吸着された。カラムに吸着されたアガラクチン
は、１．０ Ｍ ＮａＯＪ直線塩濃度勾配による溶出を
行って、塩り度０．１Ｍ付近に溶出された。この溶出液
’ｉ０．０１Ｍトリス緩衝液に対して透析した後、再び
ＤＩ！ｉＡ［Ｉｉセルｐファインカラムに重層し、通過
液全採取した。この通過液と前に採取した通過液を合し
た。このものについて上記カラムクロマトグラフィー金
繰り返し行って、純粋なアガラクチンをイ０た。
第１図は不発明アガラクチンの紫外線吸収スペクトルで
ある。 以上 出願人 財団法人 仙台微生物研が ２００ ２５０ ３００ 波長（ｎｍ）
ある。 以上 出願人 財団法人 仙台微生物研が ２００ ２５０ ３００ 波長（ｎｍ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 次の物性を有する抗インフルエンザウィルス物質
アガンクチン。 ■性状：白色の粉末 ＠比旋光度：〔α〕αニー６°（Ｑ＝ ０．５ 、Ｈ，
ｏ ）■分子量：２０万〜３０万 ■紫外線吸収スペクトル：２０５ｎｍに屑を有する ■呈色反応：アンスロン、バイアル、ジフェニルアミン
−酢酸及びモーリッシュ反応に陽性、チオバルビッール
酸反応に陰性 ■溶解性：水に易溶、エタノール及びメタノールにやや
難溶、クロロホルム、アセトン及びベンゼンに難溶。 ２、 ストレグトコツカ１８群■型菌を培養し、その培
養菌体をＮ−アセチルムラミダーゼで処理し、その水Ｍ
性成分を採取することを特徴とする抗インフルエンザウ
ィルス物質アガラクチンの製造法、
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58153827A JPS6047686A (ja) | 1983-08-23 | 1983-08-23 | 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58153827A JPS6047686A (ja) | 1983-08-23 | 1983-08-23 | 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6047686A true JPS6047686A (ja) | 1985-03-15 |
Family
ID=15570951
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58153827A Pending JPS6047686A (ja) | 1983-08-23 | 1983-08-23 | 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6047686A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7767936B2 (en) | 2003-06-02 | 2010-08-03 | Nel Technologies Limited | Functional therapeutic heater |
| US8291612B2 (en) | 2003-06-02 | 2012-10-23 | Nel Technologies Limited | Heater element for the inner sole of a footwear |
-
1983
- 1983-08-23 JP JP58153827A patent/JPS6047686A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7767936B2 (en) | 2003-06-02 | 2010-08-03 | Nel Technologies Limited | Functional therapeutic heater |
| US8291612B2 (en) | 2003-06-02 | 2012-10-23 | Nel Technologies Limited | Heater element for the inner sole of a footwear |
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