JPS6040838B2 - ビシクロマイシンの製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はビシクロマィシンの新しい製造方法に関する
ものである。

この発明の目的物質ビシクロマィシンは、例えばストレ
プトセィセス・サッポロネンシス菌の生産するグラム陰
性菌に抗菌力を有する抗生物質として知られている。

（例えばジャーナル・オブ・アンティバィオティックス
第２５登第５７６〜５７８頁参照）この発明者等は新た
に±壌から分離したストレプトマィセス属の薪菌種であ
るストレプトマイセス・イラベンシスがビシクロマイシ
ンを生産する・ことを見し、出し、さらに鋭意研究の末
、この発明を完成した。

この発明者等が沖縄県伊良部島の土壌から新たに分離し
た菌株（Ｎｏ．５２２と番号を付す）は次のような菌学
的性質を有する。

【１’形態学的性質 シュークロース・硝酸塩寒天平板上に１０日間生育した
Ｎｏ．５２２珠の気菌糸を顕微鏡で観察した結果は次の
とおりである。

■ 胞子形成菌糸の分枝法：単純分枝 ■ 胞子形成菌糸の形態：直〜曲状 （Ｒｅｃｔｉ８ｘｉｂｉｌｅｓ） ■ 胞子の数：５〜３の固 ■ 胞子の表面構造および大きさ：平滑、０．３一０．
８×１．１一１．８ミクロン■ 鞭毛胞子の有無：認め
られない。

■ 胞子のうの有無：認められない ■ 胞子柄の着生位置：気菌糸上 ■ 各種塔地上の生育状態 下記の各種培地上のＮｏ．５２２株の生育状態は特記し
ない限り、３０つ０で１０〜１４日間培養後の観察であ
る。

×室温で２０日間培養 【３’生理的性質 ■ 生育温度範囲（ベネツト寒天塔地上）２０００〜４
０ｑｏ、最適３０ｑｏ ■ ゼラチンの液化（グルコース・ベプトンゼラチン培
地上）陽性 ■ でん粉の加水分解（スタ−チ・無機塩寒天培地上）
腸性■ 脱脂牛乳の凝固・ベプトン化 凝固・・・・・・陰 性 べプトン化……腸 性 ■ メラミン様色素のの生成 チロシン寒天培地、ベプトン・イースト鉄寒天培地、及
びトリプトン・イーストブロス上ではいづれも陰性■
細胞壁組成 １型（ＬＬージアミノピメリン酸を含む。

）｛４’各炭素源の同化性（プリドハム・ゴツトリ−ブ
ー寒天塔地上）Ｌ−アラビノース ＋ Ｄーキシロース 士 ○ーグルコース ＋○ーフラクト
ース ＋ シユークロース ＋ イノシトール ＋ Ｌーラムノース ラフイノース ＋ Ｄ−マンニトール 十マンノース
＋ サリシン （十：よく同化する。

±僅かに同化する。−：同化しない。）以上の様な菌学
的性質を有するィー・ビー・シヤーリングおよびディー
・ゴツトリーブ（Ｅ．Ｂ．ＳｈｉｒｌｉｎｇａｎｄＤ．
Ｇｏ比ｏｌｉｅｂ）著のインターナショナル・ストレフ
。

トマイセス・プロジェクト（ｌｎｔｅｒｎａｔｊｏｎａ
ＩＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏｊｅｃｔ）報告｛イ
ンターナショナル・ジヤーナル・オブ・システマチック
・バクテリオロジー（ｌｎ■ｒ順ｔｉｏｎａ１ＪｏｍＭ
１０ｆＳｙｓにｍａｔｉｏＢａｃにｒｉｏｌｏｇｙ）第
１８巻第６９〜１８９頁および第２７９〜３９２頁（１
９６群車）、同第１９巻第３９１〜５１２頁（１９６９
年）ならびに同第２２巻第２６５〜３９４頁（１９７２
年）｝に記載されている中から検索した。その結果、Ｎ
ｏ．５２２株に類縁する菌として、ストレプトマイセス
・コラルス（Ｓｕｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃｏｒａｌｕｓ）
およびストレプトマイセス・リンコルネンシス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｎＣｏｌｎｅ船ｉｓ）が挙げら
れる。

そこで、上記のインターナショナル・ストレプトマイセ
ス・プロジェクト報告の記載およびこれら公知菌種の標
準菌株（ストレプトマイセス・コラルスＩＦＯ１２８５
６、ストレプトマイセス・リンコルネンシスＩＦＯ１３
０５４）とＮＯ．５２２株との比較同定実験の結果から
、Ｎｏ．５２２株は以下の様な点でストレプトマイセス
・コラルスおよびストレプトマイセス・リンコルネンシ
スと相違する。■ストレブトマイセス・コラルス： 気菌糸が一般に長く、５の固以上の胞子が連鎖すること
もある。

各種塔地上での基生菌糸の色素の色がｐＨにより変化す
る。（一方Ｎｏ．５２２※こはこのような性質は認めら
れない。）。チロシン寒天塔地、ベプトン・イースト鉄
寒天培地およびトリプトン・イーストブロス上でメラニ
ン様色素を生成する。Ｌ−ラムノースを資化する。■ス
トレプトマイセス・リンコルネンシス：気菌糸が比較的
長く伸びる。５Ｍ固以上の胞子を連鎖する。

チロシン寒天培地、ベプトン・イースト鉄裏天培地およ
びトリプトン・イーストブロス上でメラニン様色素を生
成する。Ｌーラムノースを資化する。以上の相違点およ
びＮｏ．５２２株はビシクロマイシンを生産する点でス
トレプトマィセス・コラルスおよびストレプトマイセス
・リンコルネンシスとは異なり、従ってこのＮｏ．５２
２総ま新菌種であると認められるので、これをストレプ
トマィセス・イラベンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｉｒａｂｅｎｓｉｓ）Ｎｏ．５２２と命名した。

このストレプトマィセス・ィラベンシスＮｏ．５２２は
工業技術院微生物工業技術研究所に申請書受理番号第３
４７１号として寄託されている。この発明で使用するス
トレプトマィセス・ィラベンシスは、例えばＸ線、紫外
線等の照射処理、例えばナイトロジェン・マスタード、
アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン、Ｎーメチル−
Ｎ′ーニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等の
変異誘起剤による処理、形質転換、形質導入、接合等の
通常用いられる菌種変異処理方法により、ビシクロマィ
シンの生産能を高めることができる。

この発明によるピシクロマィシンの生産は、ストレプト
マィセス・ィラベンシスを培地に培養することにより行
なわれる。

培養方法は原則的には一般微生物の培養方法に準ずるが
、通常は液体塔地による深部培養法が有利である。培養
に用いられる培地としては、ストレプトマイセス・イラ
ベンシスが利用する栄養源を含有する培地であればよい
。すなわち、合成培地、半合成堵地あるいは天然培地が
用いられ、培地の組成は炭素源としては例えばグルコー
ス、マンノース、グリセリン、シュークロース、糖蜜、
でん粉、液化でん粉等が用いられ、窒素源としては例え
ば肉エキス、カザミノ酸、ベプトン、グルテンミール、
コーンミール、棉実柏、大豆粉、コーンスチープリカー
、乾燥酵母、りん酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、
尿素等が用いられる。また、例えばりん酸水素２ナトリ
ウム、りん酸２水素カリウム、炭酸カルシウム、塩化マ
グネシウム等の金属のりん酸塩、炭酸塩、塩化物等の無
機塩も必要に応じて添加される。また、培養中発泡の著
しい時には、例えば大豆油、亜麻仁油等の植物油、オク
タデカノール、テトラデカノール、ヘプタノール等の高
級アルコール類、シリコン化合物等の消泡剤を適宜添加
すればよい。培養温度は３０ｏｏ前後が適当であり、培
養容量の増大に従って適宜種培養を行なうと好結果が得
られることが多い。

本培養の培養時間は５０〜１００時間位が適当であり、
培地が濃厚になるに従って、培養時間をさらに延長して
もよい。以上述べた培養条件は使用生産菌株の特性に応
じてそれぞれ最適の条件を選択して適用される。

このようにして培養物中に蓄積されたビシクロマィシン
は主に培養液中に含有されているので、遠心分離または
ろ過により培養物から菌体を除去した後、ろ液から一般
抗生物質の製造に用いられる常用の手段によって分離、
採取、精製される。すなわち、減圧濃縮、凍結乾燥、溶
媒抽出、液性変換、例えば陰イオン交換樹脂、腸イオン
交換樹脂、非イオン性吸着樹脂等の樹脂による処理、例
えば活性炭、けし、酸、シリカゲル、アルミナ等の吸着
剤による処理、結晶化、再結晶等の手段を単独、あるい
は任意の順序に組合わせ、また反復して用いてろ液ビシ
クロマィシンの分離、採取精製を行う。次に、この発明
を実施例により説明する。

実施例 でん粉２％、綿実粕１％、グルテンミール１％、乾燥酵
母１％、りん酸２水素カリウム１％、りん酸水素２ナト
リウム（ＩＺ火化物）１％の組成の培地を１００の‘ず
つ５００の上容坂口フラスコに分注し、１２０午０で２
び分間滅菌する。

これにストレプトマィセス・ィラベンシスＮＯ．５２２
の斜面培養物を１白金耳接種し、３０午○で２日間培養
する。別に、上記と同じ組成の培地２０そを３０そ客ジ
ャーファーメンターに注入し、１２０ｑｏで２０分間滅
菌する。これに、上記培養物の全量を接種し、３０ｑｏ
で３日間培養する。培養終了後、培養物にけし、糠土４
００夕を添加してろ過する。得られたろ液２０のこ活性
蕨４００夕を加え５分間かく拝した後、活性炭をろ取す
る。この活性炭に８０％アセトン水２．５夕を加え、目
的物質の溶出を行う。この溶出操作を２回くり返す。得
られた溶出液約５そを２００叫まで濃縮し、次いで凍結
乾燥して、５０夕の粉末を得る。この粉末にメタノール
５０の‘を加え、不溶物を除去し、次いで減圧濃縮する
。酸績をシリカゲルを使用したカラムクロマトグラフイ
ー｛展開剤：クロロホルム：メタノール（１０：１）｝
に対し、溶世液のうち目的物質を含む画分を集め減圧濃
縮し、乾燥すると白色粉末が得られる。この粉末をアセ
トンより結晶化するとビシクロマイシンの無色結晶４０
０凧９が得られる。このものの赤外線吸収スペクトルは
図面に付す遠りで、公知のビシクロマイシンのそれと一
致した。

【図面の簡単な説明】

図面はこの発明で得られるビシクロマィシンの赤外線吸
収スペクトルを示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレプトマイセス・イラベンシスを培地に培養し
   、得られる培養物からビシクロマイシンを分離、採取す
   ることを特徴とするビシクロマイシンの製造方法。