JPS60249058A - Ａｔｌウイルス抗体の測定方法および試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （１）発明の目的 本発明はＡＴＬウィルス抗体の測定方法および測定試薬
に関する。ＡＴＬウィルスとはａｄｕｌｔ　Ｔ−ψ■ｌ
ｅｕｋｅｍｉａ　ｖｉｒｕｓ、すなわち成人Ｔ細胞白血
病ウィルスの略称であり、別１ＣＡＴＬＶとも略記され
る。

ＡＴＬウィルスおよびその抗体であり２本発明の測定対
象であ、るＡＴＬウィルス抗体については例えば下記文
献に詳細に記述されているので、それらの記述が本発明
において参照される。

１　）　Ｍｉｙｏｓｈｉ、　１．　ｅｔ　ａｌ　：　Ｇ
ａｎｎ、　７１　：　１５５．１９８０２　）　Ｍｉｙ
ｏｓｈｉ、１．　ｅｔ　ａｌ　：　Ｊａｐ、　Ｊ、　Ｃ
ｌ１ｎ、　０ｎｃｏ１．。

９　（Ｓｕｐｐｌ、）　：　４８５．　１９７９３　）
　Ｈｉｎｕｍａ、Ｙ、　ａｔ　ａｌ　：　Ｐｒｏｃ、　
Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、。

７８　：　６４７６、　１９８１ ４　）　Ｍｉｙｏｓｈｉ、１．　ｅｔ　ａｌ　：　Ｇａ
ｎｎ、７３　：　３９９．　１９８２５　）　Ｍｉｙｏ
ｓｈｉ、１．　ｅｔ　ａｌ　：　Ｌａｎｃｅｔ：　６８
３．１９８２６　）　Ｓｈｉｍｏｙａｍａ、　Ｍ、　ｅ
ｔ　ａｌ　：　Ｊａｐ、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　０ｎｃｏ
ｌ。

１２　：　１０９．　１９８２ ７　）　０ｈｋｏｕｃｈｉ　ｅｔ　ａｌ　：　Ｉｍｍｕ
ｎｏｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ。

Ｖｏｌ、３．　Ｎｏ、５．　ｐ２６７、　１９８３ＡＴ
Ｌウィルス抗体を測定する必要性並びに該測定に必要な
ＡＴＩ、関連抗原の製造方法およびその抗原を利用する
ＡＴＬウィルス抗体の測定方法と測定試薬については特
開昭５９−６２５２７号公報に詳細に記述されているの
で、それらの記述もまた本発明において参照される。

上記文１つ記述によれば、輸血供血者に相当数のＡＴＬ
ウィルス保持者がおり、輸血がＡＴＬウィルスの伝播に
重要な役割を果している可能性があるので、輸血供血者
について血清中のＡＴＬウィ・ルス抗体を測定し、それ
によってＡＴＬウィルス保有者をスクリーニングし、輸
血による感染を防止すべきこと並びにそのための高感度
な測定方法と測定試薬が提供される必要があることが知
られる。

かかる要請に応えて、特開昭５８−１８７８６１号公報
に記載の発明はＡＴＬ関連抗原産生細胞を利用して蛍光
免疫測定法あるいは酵素免疫測定法を適用する測定方法
を開示し、また前記特開昭５９−６２５２７号公報に記
載の発明はＡＴＬ関連抗原産生細胞を界面活性剤を用い
て処理することによりＡＴＬ関連抗原を製造し、当該抗
原を使用する測定方法および測定試薬を開示している。

ところでＡＴＬ関連抗原産生細胞およびそれから部分精
製して得られたＡＴＬ関連抗原にはＡＴＬウィルス抗原
以外に非特異な種々の抗原成分が含まれている。従って
これらを利用して測定をおこなった場合には、これらの
ものは測定対象であるＡＴＬウィルス抗体を認識する以
外に試料中に存在する他の非特異な抗体成分９例えば抗
核抗体あるいは抗Ｔ細胞膜抗体をも認識することになり
、測定結果は必ずしもＡＴＬウィルス抗体の存在を正確
に表現しているものとは限らないことになるのである。

例えば全身性エリテマトーデスの患者の血清を試料とし
て測定した場合に、該試料はＡＴＬウィルス抗体につい
てもともと陰性であるにもかかわらず。

陽性としての測定結果が得られることがある。これは全
身性エリテマトーデスζこ伴って生成する抗体成分とＡ
ＴＬ関連抗原中の非特異的成分とが反応した結果である
と考えられる。

かかる問題に対する一つの解決手段として特願昭５８−
１４４８７４号公報に記載の発明が提示されている。該
発明は、適当なるＡＴＬウィルス陰性細胞株。

例えば急性リンパ芽球性白血病患者からの細胞株を処理
して得られる抗原を別途に用意し、該抗原を使用して測
定した測定結果を対照として対比判定をおこなうことを
要旨とするものであり、対比判定により非特異抗体に基
ずく測定錯誤を防止することができるようになった。し
かしながら該発明にはなお疑義の残る余地がある。すな
わちＡＴＬ関連抗原が認識する非特異抗体とＡＴＬウィ
ルス陰性細胞株由来の抗原が認識する非特異抗体とが免
疫学的に同一であるという保証はない。むしろ精確には
異なるとする方が正しい。従って後者の存在不存在がそ
のまま前者の存在不存在を必ずしも表現していることに
はならず、結局該発明におけるＡＴＬウィルス抗体の存
否判定にはまぎれが生じていることになる。

特願昭５８−１４４８７４号公報に記載の発明がＡＴＬ
ウィルス抗体の存否の判定にあたり現実的には有用であ
りながらも、なお上記のごとき疑義の残る余地のある事
実にかんがみ２本発明はＡＴＬウィルス抗体を正確に紛
れなく測定することのできる方法をめて検討をおこなっ
た。その結果、測定にあたりＡＴＬウィルス抗原を被検
試料に加えた試料を対照試料として別途に用意し、被検
試料についての測定結果から対照試料についての測定結
果を差引くことによって当初の目的が達成されることを
知り１本発明を完成するに至った。

すなわち９本発明の目的は成人Ｔ細胞白血病の予防と診
断の分野において、被検試料中のＡＴＬウィルス抗体を
正確に紛れな（測定することのできる測定試料を提供す
ることであり９本発明は該目的の達成のために測定にあ
たりＡＴＬウィルス抗原を被検試料に加えた試料を対照
試料とすることを要旨とする方法および試薬を開示する
ものである。

（２）発明の構成 以下に本発明の詳細な説明する。

本発明に係るＡＴＬ関連抗原とは、いわゆる成人Ｔ細胞
白血病関連抗原であり、さらに詳しくは。

ＡＴＬ関連抗原産生細胞中に抗原蛋白あるいはＣ型ウィ
ルス粒子として存在しているものである。

ＡＴＬウィルス抗体が存在すれば、それとの間に特異的
な抗原抗体反応を呈する。製造のためには９例えば成人
Ｔ細胞白血病患者末梢血より採取した白血病細胞との混
合培養により樹立されたヒ）［％蛋白血球由来のＭＴ−
２と呼ばれる抗原産生細胞株を。

界面活性剤を用いて処理すればよい。ＡＴＬ関連抗原に
ついての、さらに詳細な説明並びにＭＴ−２および界面
活性剤を用いる処理については、下記文献の記述が参照
される。

７　）　Ｙｏｓｈｉｄａ　Ｍ、、　ｅｔ　ａｌ　：　Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、。

７９　：　２０３１．１９８２ ８　）　Ｍｉｙｏｓｈｉ、　１．　ｅｔ　ａｔ　：　Ｇ
ａｎｎ、　７２　：　９７Ｂ、　１９８１９　）　Ｍｉ
ｙｏｓｈｉ、　１．　ｅｔ　ａｌ　：　Ｎａｔｕｒｅ、
　２９４　：　７７０．１９８１１０）特願昭５７−１
６９６７０号 本発明に係るＡＴＬウィルス抗原とは成人工細胞白血病
の発病ウィルス粒子に由来する該ウィルスに固有の抗原
である。ＡＴＬウィルス抗体が存在すれば、それとの間
に特異的な抗原抗体反応を呈する。

製造のためにはＡＴＬ抗原産生細胞の培養上清からＡＴ
Ｌウィルスを濃縮して分離し、精製し１次にかくして得
られたＡＴＬウィルスを界面活性剤を用いて処理すれば
よい。例えばＭＴ−２細胞の培養上清を濃縮および超遠
心分離してＡＴＬウィルスを回収し、さらにショ糖濃度
勾配をかけた超遠心分離をおこなって所定のフラクショ
ンに分け、抗原陽性分画について透析して精製ＡＴＬウ
ィルスを得る。

次に精製ウィルスにデオキシコール酸ナトリウムを加え
て処理し、透析すればＡＴＬウィルス抗原が得られる。

ＡＴＬ関連抗原を得るための産生細胞とＡＴＬウィルス
およびＡＴＬウィルス抗原を得るための産生細胞とは必
ずしも同一である必要はない。しかし本発明に係るＡＴ
Ｌウィルス抗原はＡＴＬ関連抗原を利用して測定する測
定系の対照試料を調製するためのものとして用意される
関係上９両抗原は同一の産生細胞から製造されるのが望
ましい。

ＡＴＬ抗原産生細胞を処理してＡＴＬ関連抗原を得る方
法あるいはＡＴＬウィルスを処理してＡＴＬウィルス抗
原を得る方法は処理のためのいかなる方法を採用しても
よいが２例えばデオキシコール酸ナトリウム、オクチル
フェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシエチレ
ン（１０）オクチルフェニルエーテル等の界面活性剤を
用いておこなう処理がすすめられる。なお、界面活性剤
による処理の詳細については特開昭５９−６２５２７号
公報の記述を参照にすることができる。

次に本発明測定方法について説明する。

本発明測定方法は酵素免疫測定法、放射免疫測定方法、
受身血球凝集法のいずれかを利用するものである。これ
らの方法墨こおける通常の手順自体はすて番ζ一般に公
知である。従って１例えば酵素免疫測定法を利用する場
合について本発明測定方法を説明すれば以下のごとくで
ある。

測定系全体の構成要素は固相、　ＡＴＬ関連抗原。

ＡＴＬウィルス抗原、被検試料、抗ヒ）　ＩｇＧ抗体（
標識用抗体）、酵素および基質である。固相としてはエ
ンザイムイムノアッセイ用のマイクロタイタープレート
のカップあるいはガラスピーズを用いればよい。測定に
先立ち、　ＡＴＬ関連抗原を０．１５Ｍ　ＩＪン酸緩衝
生理食塩液に溶解し１例えばポリスチロール製エンザイ
ムイムノアッセイ用カップに入れ。

４℃下で１夜放置すれば、固相表面はＡＴＬ関連抗原に
よってコートされる。

抗ヒ）　ＩｇＧ抗体（標識用抗体）としては例えば。

ヤキ抗ヒトＩｇＧ抗体あるいはマウス抗ヒトＦｃモノク
ロナール抗体を用いればよい。また酵素として代例えば
アルカリフォスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、
ペルオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ等を使用す
すことかできる。測定に先立チ、クルタールアルデヒド
のごとき結合剤をもって、標識用抗体に酵素を結合せし
めてフンシュゲートとし２本発明測定方法の実施のため
の試薬の一部としてあらかじめ準備しておくことができ
る。

基質は選択した酵素に応じて適宜使用すればよい。例え
ば酵素としてアルカリフォスファターゼを選択した場合
においてはｐ−ニトロフェニルフォスフェート等を使用
すればよい。

測定系全体の構成要素のうち、被検試料およびＡＴＬウ
ィルス抗原を除いた他の要素についてここに例示した選
択は好ましい態様例を示すものであり２本発明測定方法
を特に限定するものではない。

被検試料はもっとも普通には被検血清として与えられ２
例えば輸血用血液からの血清の形で提供される。しかし
本発明は特にこれ書こ限定されることはなく、形態およ
び出所ζこついていかなる試料であっても。被検試料は
そのまま測定系の中へ加えられてもよいが、測定に先立
ち正常ウサギ血清（ＮＲ８）によって適当な濃度に希釈
されることは自由である。

ＡＴＬウィルス抗原もそのまま測定系の中へ加られても
よいが、正常ウサギ血清（ＮＲ８）によつて適当な濃度
に希釈されて使用されるのが望ましい。

しかし過度に希釈されて測定値が不安定となることは避
けなければならない。このためにはＡＴＬウィルス抗体
陽性血清を用いて至適希釈倍率をめる検討をおこなう必
要があり１例えば後記実施例１によって得られたＡＴＬ
ウィルス抗原の蛋白濃度はＯＤ２．。１１１１１で１．
２３であったが、この場合にはＮＲ８で１６倍に希釈さ
れるのが至適であった。測定は被検試料および対照試料
の二種類の試料についておこなう。対照試料とは被検試
料にＡＴＬウィルス抗原を加えて調製された試料である
。しかしながら通常は測定操作を簡便にして、誤差を減
少せしめるために、各試料を適当な溶媒９例えば正常ウ
サギ（ＮＲ８）によって希釈することが要求される。こ
の場合には希釈溶媒を含んだ被検試料、対照試料のほか
に希釈溶媒のみのコントロール試料が用意され、測定は
これら三種類の試料についておこなわれる。

測定操作は酵素免疫測定法における通常の手順に従って
おこなえばよい。従って、後記実施例において示される
とと（、ＡＴＬ関連抗原をコートしたカップに被検試料
、対照試料、およびコントロール試料をそれぞれ加えて
インキュベートシャ続いて酵素標識抗体９例えばヤギ抗
ヒ）　ＩｇＧ−アルカリフォスファターゼコンジュゲー
トを加えてインキュベートし９次に基質９例えばｐ−ニ
トロフェニルフォスフェートを加えてインキュベートし
、基質の分解量を分光光度計を用いて測定すればよい。

最後に被検試料、対照試料およびコントロール試料につ
いての測定値Ａ、ＢおよびＣに基づいて次式により抑制
率％をめる。

ＡＴＬウィルス抗体量の既知試料を用いて抑制率％をめ
、抑制率％による検量線を作成しておけば被検試料中の
ＡＴＬウィルス抗体を測定することができる。

またＡＴＬウィルス抗体の判定基準として抑制率％が５
０９６以上のときはＡＴＬウィルス抗体が陽性であり、
　５０９６未満のときは陰性であると定めておけば、被
検試料（被検血清）中のＡＴＬウィルス抗体の存否につ
いて正確に紛れのない判定を下すことができる。

本発明測定方法によれば、後記実験例によって示される
とと（ＡＴＬウィルス抗体についての陽性血清と陰性血
清とを正確に判別することが可能である。

次に１本発明測定試薬はＡＴＬ関連抗原およびＡＴＬウ
ィルス抗原を必須の構成成分として含有する試薬である
。

本発明測定試薬は、前記本発明測定方法の実施に直接使
用する試薬であり、測定方法におけると同一の目的を達
成するものである。

本発明測定試薬に係る測定方法は酵素免疫測定法、放射
免疫測定法、受身血球凝集法のいずれかを利用するもの
である。従って１例えば酵素免疫測定法を利用する場合
について本発明測定試薬の具体的態様を示せば次のごと
くである。すなわち。

本発明測定試薬はＡＴＬ関連抗原およびＡＴＬウィルス
抗原の組合わせそれ自体あるいはＡＴＬ関連抗原および
ＡＴＬウィルス抗原と固相、標識用抗体、酵素および基
質よりなる群から任意に選択された１乃至４とを組合わ
せたセットである。ここにおいて、セット中に固相が含
まれる場合、当該固相がＡＴＬ関連抗原によってコート
された状態で提供されることあるいはセット中に標識用
抗体と酵素とが含まれる場合に両者が結合したコンジュ
ゲート。

すなわち標識抗体として提供されることは自由であり、
これらも同様に本発明測定試薬の態様に含まれる。また
測定操作の便益のために適当なる緩衝液あるいは正常ウ
サギ血清（ＮＲ８）等をセット中εこ添付することも自
由であり、これらは本発明を限定するものではない。

以下に記載する実施例をもって本発明をさらに具体的に
説明する。

実施例Ｉ ＭＴ−２細胞２．４Ｘ１０７個に０．１５Ｍリン酸緩衝
生理食塩液（ｐＨ７，２）を加え、遠心分離して細胞を
パックした。これに０．２％デオキシコール酸ナトリウ
ム含有ベロナール緩衝液（ｐＨ７，５，ｇ−０，１４５
）　５　ａｌを加えた。４°Ｃ下で４時間スターラーに
よって撹拌し、その後１０．００Ｏｒｐｍで３０分間遠
心分離した。上清をとり、透析チューブに詰め、０．１
５Ｍ！Ｊン酸緩衝生理食塩液に対して４℃下で２日間透
析し、その後１０．００Ｏｒｐｍで３０分間遠心分離し
た。上清をとりＡＴＬ関連抗原含有上清とした。当該上
清のＯＤ２．。

値は１５／＋ａＬであった。

得られたＡＴＬ関連抗原含有上清に０．１５Ｍ　Ｕン酸
緩衝生理食塩液を加えてＯＤ、８゜値が０．４となるよ
うに希釈し、ポリスチロール製エンザイムイムノアッセ
イ用カップに１５０ＩＬｔずつ入れた。

４９Ｃ下で１夜間静置し、その後排液し、脱イオン水に
てカップを洗浄した。かくのどと（調製されたカップに
ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体−アルカリフォスファターゼコン
ジュゲートおよびＰ−ニトロフェニルフォスフヱートお
よびＡＴＬウィルス抗原を組合わせてセットとした。当
該セットは酵素免疫測定法を利用する測定試薬である。

別に、測定操作の便益のために正常ウサギ血清（ＮＲ８
）および０，９％塩化ナトリウム液、ｌＮ−ＮａＯＨを
セット中に添付した。

なおＡＴＬウィルス抗原は次のように調製した。

ＭＴ−２細胞の培養上清３Ｌを１０．ＯＯＯｒｐｍ、　
３０分間遠心分離し、上清を回収した。回収した上清濃
縮し。

濃縮液を１００，０００　Ｑで２時間超遠心分離し、　
ＡＴＬウィルスを沈渣として回収した。この沈渣を４ｒ
ＬＬの０．０１Ｍトリス塩酸緩衝液ｐＨ７，５（０，１
５Ｍ−ＮａＣ１，０，００２Ｍ−ＥＤＴＡ、０．１％Ｎ
ａＮ、を含む）によくサスヘンジョンした後、　１０．
０００ｒｐｍ、　３０分間遠心分離し、上清を粗製ウィ
ルス濃縮液として回収した。１５〜６０％（ＷＡｌ）の
ショ糖濃度勾配液４５　ｍＬをニトロセルロースチュー
ブに作成し、その上に粗製ウィルス濃縮液２ｍｌを層積
シ、　ＲＰＳ−２５−２ロー　タ（日立）　ニテ２２．
００Ｏｒｐｍ。

１５時間超遠心処理した。処理後、チューブの底より５
０滴（約２ｍＬ’）／管づつ分割し回収した。ヒ）、Ａ
ＴＩＪＡ抗体をインヒビッション用抗体として使用する
酵素免疫測定法によって各公開中のＡＴＬウィルスの測
定をおこない、　ＡＴＬウィルス陽性分劃分割−ルし、
　０．０１Ｍ　）リス塩酸緩衝液ｐＨ７，５（０，１５
Ｍ−Ｎａｉｌ。

０．００２Ｍ−ＢＤＴＡ、　０．１％ＮａＮ、、を含む
）で透析し、ＡＴＩ。

ウィルス液１．１５　ｇ　／ｒｒｔＬを得た。透析後の
液に０．２％となるようにデオキシコール酸ナトリウム
を加え、４℃で３０分間撹拌した。デオキシコール酸ナ
トリウムを除去するために、　０．ＯＩＭ　ｌ−ＩＪス
塩酸緩衝液ｐＨ７，５（０，１５Ｍ−Ｍａｉｌ、　０．
００２Ｍ−ＥＤＴＡ、　０．１９６ＮａＮ。

を含む゛）で透析し、　ＡＴＬウィルス抗原を得た。Ａ
ＴＬウィルス抗原の蛋白量はＯＤ２．ｏｆｉ□として１
．２３であり、　３５ｍ、１回収された。

実施例２ ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体またはマウス抗ヒトＩｇＧ　（Ｆ
ｃ）抗体をｐＨ７，５，０，０５ＭＩＪン酸緩衝液に溶
解し、蛋白質濃度を１■／ｒｔｄに調製する。この液１
０μ乙に１ミリキユーリーの１２５　Ｉ　Ｎａ５０μｔ
を加え、さらにクロラミンＴを前記リン酸緩衝液にＬ５
ｒｒＬｇ　／　Ｂｌの割合に溶解した液を１０μＬ加え
て３０秒間撹拌する。次いでメタ重亜硫酸ナトリウムを
前記リン酸緩衝液に２■／ｒｒＬＬの割合に溶解した液
を１００μＬを加えて反応を停止させる。ヨウ化カリウ
ムを前記リン酸緩衝液に１１０１ｒＬ／ｒｒＬＬの割合
に溶解した液１００ＬＬｔをこの反応液に加え、ただち
にセファデックスＧ−５０を用いたゲル濾過により１２
６　ｉ標識物質とｍＩとを分離する。

得られた１２５　（標識物質の比放射能は約５〜２０μ
ａ／μｇとなる。

このｔｚｓｌ標識物質を実施例１記載のごとく調製され
たカップおよびＡＴＬウィルス抗原と組合わせてセット
とし、放射免疫測定法を利用する測定試薬とする。

実施例３ ヒツジ血液を遠心管にとり、生理食塩液を用いて２．０
０Ｏｒｐｍで１０分間の遠心分離を５回操返し、赤血球
を洗浄した。この赤血球にｐＨ７，５，０，１５Ｍのリ
ン酸緩衝生理食塩液を加えて５９６濃度に調整した。同
リン酸緩衝生理食塩液で２．５％濃度に調整したゲルタ
ールアルデヒド溶液を前記赤血球浮遊液中に、その５分
の１容加え、撹拌しながら室温で約５時間反応させ、赤
血球を固定した。ついでこの溶液を遠心分離して固定赤
血球を得、さらに生理食塩液を用い遠心分離により数回
洗浄した。この固定赤血球を前記リン酸緩衝液で５９６
浮遊液に調整し、これに同リン酸緩衝生理食塩液で５　
ｍｙ　、／　ｄＬ化調整したタンニン酸溶液を等量添加
して３０分間撹拌した。この溶液を遠心分離してタンニ
ン酸処理固定赤血球を得さらに生理食塩液を用い遠心分
離により数回洗浄した。得られたタンニン酸処理固定赤
血球に前記リン酸緩衝液を加え、５９６赤血球浮遊液と
した。

この赤血球浮遊液と実施例１において得られたＡＴＬ関
連抗原含有上清を前記リン酸緩衝生理食塩液で蛋白濃度
が約５　ｍｇ　／　ＷＬｔになるように希釈した液と同
量混合し、室温で６０分間撹拌して感作した。

この液を遠心分離して感作血球を得、さらに生理食塩液
を用い遠心分離により数回洗浄した。得られた感作赤血
球に２％正常家兎血清含有リン酸緩衝生理食塩液を加え
て７９６浮遊液とした。この感作赤血球に実施例１にお
いて得られたＡＴＬウィルス抗原を組合せて、受身血球
凝集法を利用する測定試薬とする。

実施例４” 実施例１の測定試薬セットを用いて被検血清中のＡＴＬ
ウィルス抗体の陽性または陰性を次の測定方法によって
おこなう。

正常ウサギ血清（ＮＲ８）およびＡＴＬウィルス抗原液
（実施例１のＡＴＬウィルス抗原をＮＲ８で１６倍に希
釈した液）を別々の試験管に１００μｌづつとる。

次に被検血清を２０μｔづつそれぞれに添加し、前者を
被検試料液、後者を対照試料液とする。別１こ１ＮＲｓ
のみを用意し、コントロール試料液とする。

それぞれよく撹拌した後、３７°Ｃ，１時間または４℃
、−夜装置する。次に実施例１のコートカップに各試料
を１００ｔ１．ｌづつ別々にとり、３７°Ｃ９６０分間
インキュベートする。インキュベート後、０．９％塩化
ナトリウム液を加えて未反応物質を洗浄により除去し、
ヤギ抗ヒトＩｇＧ−アルカリフォスファターゼコンジュ
ゲート液を１００μｔづつ添加する。再び３７６Ｃ１６
０分間インキュベートした後、０．９９６塩化ナトリウ
ム液を加えて未反応物質を洗浄により除去し、Ｐ−ニト
ロフェニールフォスフェート液を１００μＬずつ添加す
る。３７°Ｃ９３０分間反応せしめ。

ｌＮ−ＮａＯＨ１００μｔずつを添加して反応を停止さ
せる。

最後に、　４０５ｎｍのＯＤ吸光値を測定し、被検試料
液について測定値Ａ、対照試料液について測定値Ｂ、コ
ントロール試料液についての測定値Ｃをめる。Ａ、Ｂ、
Ｃに基づき９次式により抑制率％を算出する。

抑制率％が５０９６以上であれば被検血清はＡＴＬウィ
ルス抗体陽性であり、５０％未満であれば陰性であると
判定することができる。

（３）発明の効果 以下の実験例をもって本発明の詳細な説明する。

実施例１ 表１１ご記載のごとく、被検血清Ｎ１１ｌ〜Ｎ１１ｌｌ
を用意した。これらのうちＮｎｌ〜魔５は螢光抗体免疫
測定法によりＡＴＬウィルス抗体が陽性であることが確
認されており、またＮｎ６〜Ｎａ１ｌは反対に陰性であ
ることが確認されている。なお陰性血清のうち魚６〜Ｎ
Ｑ８は正常ヒト血清（ＮＨ８）であり、勲９〜Ｎａ１ｌ
は全身性エリテマトーデス患者血清である。

各被検血清について実施例４記載の測定方法を実施し、
それぞれ実施例４に記載の測定値Ａ、　Ｂ。

Ｃをめ抑制率％を算出し、　５０９６ラインの判定基準
によりＡＴＬウィルス抗体の陽性および陰性の判定をし
た。結果を表１に示す。表１より本発明測定方法はＡＴ
Ｌウィルス抗体について正確かつ紛れのない判定を与え
ることのできる方法であることが判明する。特に被検血
清Ｎ１１９〜尚１１の結果について検討してみると、も
し通常の測定方法に従い測定値Ａのみから判定するなら
ば、これらの被検血清はもともとＡＴＬウィルス抗体が
陰性であるにもかかわらず陽性であるとの誤まった判定
結果を導くことになる。しかしながら本発明方法に従い
抑制率により判定するならば０表１記載のごとくそれら
はやはりＡＴＬウィルス抗体について陰性であるとの正
しい判定結果を得ることになり。

真の陽性とは明瞭に区別されることが判明する。

これは本発明の特徴的な利点である。

実験例２ ＡＴＬウィルス抗原の至適希釈倍率のめ方を実験例２を
もって説明する。

実施例１で得られたＡＴＬウィルス抗原を正常ウサギ血
清（ＮＲ８）　１００μＬによって２ｎ倍に希釈した（
希釈倍率２〜１２８）。別にＮＲ８のみを用意した。次
に各々にヒトＡＴＬウィルス抗体陽性血清２０μＬを添
加し、３７℃、１時間または４℃、−夜間インキュベー
トした。反応後の液１００μｌを実施例１の測定試薬セ
ットのコートカップに入れ、以下実施例４の対照試料液
についての測定手順に従って測定値Ｂをめた。他方、希
釈に要した各ＮＲ８について同様に実施例４のコントロ
ール試料液についての測定手順に従って測定値Ｃをめた
。

結果を表２に示す。表２の希釈倍率においてＮＲ８はＡ
ＴＬウィルス抗原陰性のコントロールとしての正常ウサ
ギ血清を意味する。表２よりＡＴＬウィルス抗原による
抑制が平衡に達し、測定値が安定するのは希釈倍率が１
６倍のときであることが判明する。

表２ 希釈倍率　測定値Ｂ　測定値Ｃ Ｎ　ＲＳ　Ｏ，４３７０，０１９ １：　１２８　０．０７５　０．０１８１　：　６４　
０．０５４　０．０１９１　：　１６　０．０３５　０
．０１８］：　８　０．０３８　０．０２０ １：　４　０．０３５　０．０１９ １：　２　０．０３５　０．０１８ 特許出願人 工−ザイ株式金社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）酵素免疫測定法、放射免疫測定法、受身赤血球凝
   集法のいずれかにより、　ＡＴＬ関連抗原を利用して被
   検試料中のＡＴＬウィルス抗体の測定をおこなうにあた
   り、当該被検試料にＡＴＬウィルス抗原を加えた試料を
   対照試料として使用することを特徴とするＡＴＬウィル
   ス抗体の測定方法（２）　ＡＴＬ関連抗原がＭＴ−２細
   胞由来である特許請求の範囲第１項記載のＡＴＬウィル
   ス抗体の測定方法＋３１　ＡＴＬウィルス抗原がＭＴ−
   ２細胞由来である特許請求の範囲第１項または第２項記
   載のＡＴＬウィルス抗体の測定方法 （４）酵素免疫測定法、放射免疫測定法、受身赤血球凝
   集法のいずれかにより、ＡＴＬ関連抗原を利用してＡＴ
   Ｌウィルス抗体を測定ｔｃｉ、に末いて遥当該測定試薬
   中にＡＴＬウィルス抗原を成分とする試薬が包含される
   ことを特徴とするＡＴＬウィルス抗体の測定試薬 （５）　ＡＴＬ関連抗原がＭＴ−２細胞由来である特許
   請求の範囲第４項記載のＡＴＬウィルス抗体の測定試薬
   （５）　ＡＴＬウィルス抗原がＭＴ−２細胞由来である
   特許請求の範囲第４項または第５項記載のＡＴＬウィル
   ス抗体の測定試薬