JPS60231699A - 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はヒト白血球に存在する抗原を検出するモノクロ
ーナル抗体およびその製造法に関する。

ヒ）ＩＪンパ球Ｔ細胞、Ｂ細胞および各々のサブセット
に対するモノクローナル抗体が最近の細胞工学の手法を
用いることにより作製可能きなり、各々の細胞群が次第
に明確になってきた（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ。

Ｂ、　Ｌ、　ｅｔす：　Ｃｅ１ｌ　１９．８２１　（１
９８０）、　Ｆｏｏｎ、　Ｋ、Ａ。

ｅｔ　ａｌ　：　Ｂｌｏｏｄ　６０．１　（１９８２）
３゜即ち、これらサブセットを認識するモノクローナル
抗体を用いることにより、ヒトリンパ球の機能的細胞亜
群がより明確となり、各種疾患におけるこれらの異常が
明らかにされつつある。

本発明者らは、各種造血器疾患の診断等に使用できるモ
ノクローナル抗体を見出すべく研究を重ねた結果、白血
球に存在する抗原および成人Ｔ細胞白血病（以下ＡＴＬ
と略記する）に対するモノクローナル抗体を見出し、本
発明を完成するに至った。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明は、白血球に存在する抗原およびＡＴＬウィルス
（以下ＡＴＬＶと略記する）に対するモノクローナル抗
体を提供する。

本発明のモノクローナル抗体は、具体的には、Ｔｐｗ４
０．Ｔａ１２ｃ、Ｔａ６０ａ、Ｔａ６０ｂ。

Ｔａ６０ｃ、Ｔｓ６０．Ｔｓｗ３２．ＴｓＡ、ＴｓＢ、
Ｔｓ１４５．Ｌｐ９５．Ｌｓ７０．ＬｓＡ。

ＡＴＶ１９ａ、ＡＴＶ１９ｂと命名サレタモノカあげら
れる。

Ｔａ６０ａ、Ｔａ５ＱｂおよびＴａ６０ｃは正常人末梢
血Ｔ細胞分画、非Ｔ　（Ｂ）細胞分画、単球、顆粒球、
胸腺細胞などの正常血液細胞とは反応せず、Ｔ細胞群を
インターロイキン−２（ＩＬ−２，バイオテスト社（西
独）〕、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡディフコ社（米
１３１ｉ１）　）　、コンカナバリアＡ　［ＣｏｎＡ　
Ｂ、Ｔ、社（米国）〕、ボホークライードマイトジェン
ＰＷＭ、ギブ二社（米国）〕などのマイトジェンやアロ
Ｂ細胞などで刺激することにより得られたいわゆる活性
化Ｔ１８１１！ａに反応することを特徴としている（実
施例８参照）。すなわち、対照としてマイトジェンを含
まない培養液のみの培養条件では発現してこないことを
特徴としている。

本発明のモノクローナル抗体のうちＴａ６０ａ。

Ｔａ６０ｂは、固型腫瘍由来の細胞とは反応しない造血
器腫瘍細胞に対しては、ＴＩＢ胞由来のうちでもＡＴＬ
の金側に陽性を示し、ＡＴＬ以外のＴ細胞由来悪性疾患
に関してほとんど全ての症例で陰性である。このことは
臨床上鑑別困難な症例群を明確に区別するために本発明
のモノクローナル抗体が使用できることを示している。

また本発明のモノクローナル抗体は、Ｔ細胞由来以外の
腫瘍細胞として、Ｂ−ＣＬＬ　（Ｂ細胞性慢性リンパ性
白血病）やＢ−ＭＬ　（Ｂ細胞性悪性リンパ腫）の一部
症例に弱陽性に反応し、骨髄性細胞由来のＡＭＬ　（急
性骨髄性白血病）の一部症例にも弱陽性に反応すること
も特徴としている。

Ｔｐｗ４０およびＴａ１２ｃは、末梢血リンパ球Ｔ細胞
分画の大部分の細胞と反応し、いわゆるＴ卸自／、りｎ
　Ｔ　１片百丈桧山ナスＴｓ６０．Ｔｓｗ３２．ＴｓＡ
、ＴｓＢおよびＴｓ　１４５の５抗体は、Ｔ細胞分画の
一部分の細胞に存在する抗原、Ｔ面分画くサブセット）
抗原を検出する。Ｔｓ６０は、’Ｔａ５Ｑと同じ抗原分
子量を示すが、血清学的特異性は異なり、活性化Ｔ細胞
とは反応せず、Ｔ細胞株の一部とのみ反応を示す。

Ｌｐ９５は、全ての白血球細胞と反応を示す白血球（Ｐ
ａｎ　Ｉｅｕｋｏｃｙｔｅ　）抗原を検出し、一方Ｌｓ
７０およびＬｓＡは、単球およびその他の白血球細胞の
一部と反応を示し、白血球並分画（Ｉｅｕｋｏｃｙｔｅ
ｓｕｂｓｅｔ　）抗原を認識する。

Ｔｐｗ４０．ＴｐＩ　２０は、ともにｐａｎＴ抗原を検
出しているが、Ｔｐｗ４０は、Ｔ細胞腫瘍のうち比較的
未熟なＴ細胞型急性リンパ性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）およ
びリンパ芽球腫（ＬＬ）に反応を示し、一方Ｔｐ１２０
は、成熟型Ｔ細胞腫であるＴ２’）ンバ腫およびＡＴＬ
に反応を示す。また、Ｔａ１２ｃはＢ細胞型慢性リンパ
性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）にも反応を示す。（第６表）Ｔ
ｓｗ３２は、Ｔ−ＡＬＬおよびＬＬに反応を示し、ＴＳ
Ａはこの両Ｔ細胞腫瘍とともにＴ２　リンパ腫、ＡＴＬ
等の成熟型Ｔ細胞腫とも反応を示した。

ＴｓＢは、成熟型Ｔ細胞腫であるＴ２　リンパ腫。

ＡＴ’Ｌに高率に反応した。ＴｓＢは、Ｂ−ＣＬＬとも
反応を示した。

これら、Ｔ細胞分化抗原を検出する抗体は、Ｔ細胞腫瘍
の鑑別診断に有用である。

Ｔｓ１４’５は、末梢リンパ球にはほとんど反応を示さ
ず、ＩＬ−２存在下で長期培養されているＴ細胞株に特
異的に反応を示すという特徴を持つ。

Ｌｐ９５は、白血球の大部分と反応を示し、また、はぼ
全ての白血病およびリンパ腫とも反応を示す。

Ｌｓ７０は、単球および他の白血球の一部に存在し、Ｔ
細胞リンパ肺中Ｔ２　リンパ腫およびＡＴＬに反応し、
またＢ−ＣＬＬとも反応する。

ＬｓＡは、単球およびＴ細胞と主に反応し、Ｔ細胞リン
パ腫とはまったく反応を示さない。また、卓球性白血病
には高率に反応を示す。

ＡＴＶ１９ａおよびΔＴＶ１９ｂ抗体は、ＡＴＬ■構成
蛋白中のＰ１９成分に対するモノクローナル抗体であり
、ＭＴ−１，ＭＴ−２などのＡＴＬ由来の培養株ならび
にＡＴＬ白血病細胞のＩＬ−２存在下の短期培養した細
胞にも存在する抗原を検出することを特徴とする。

ＡＴＶ１９ａおよびＡＴＶ１９ｂｌｔ、ウィルスの粒子
構成蛋白で、分子量１９×１０３のペプチドを認識して
おり、ＡＴＬの診断に有用である。

本発明モノクローナル抗体の生物学的活性は実施例６〜
１３に示した。実施例中に用いたマウス混合血球吸着試
験［Ｍｏｕｓｅ−ｍｉｘｅｄ　ｈｅｍａｄｓｏｒｐｔｉ
ｏｎａｓｓａｙ、Ｍ−Ｍ　ＨＡ　〕法は下記の方法に従
い、マイクロプレート（Ｆａｌｃｏｎ社、３０４０）に
単層細胞培養または浮遊細胞を付着させた標的細胞への
指示細胞の付着の有無で観察する。指示細胞としては、
ヒツジ赤血球とマウス抗ヒツジ赤血球抗体を反応させた
後、さらに家兎抗マウスイムノグロブリン血清を反応さ
せたものを用いる。

マウス混合血球吸着試験ＣＭ−ＭＨＡＩ　：Ｍ−ＭＨＡ
はＢｓｐｍａｒｋとＦａｇｒｅｕｓの原注（Ａｃｔａ。

Ｐａｔｈｏｓ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　５ｃｏｎｄ、
　Ｓｕｐ吐１５４２５８−２６２゜１９６２　”）を改
良して行う。

指示赤血球の作製法は以下の通りである。

洗滌羊赤血球２％浮遊液と等量の１．０００倍希釈マウ
ス抗羊赤血球抗体（ＢＡＬＢ／Ｃマウスに羊赤血球を過
免疫して作製）とを２４℃にて４５分間反応させ洗滌後
再び２％浮遊液として等量の２００倍稀釈家兎抗マウス
イムノプロプリン（ｃａｐｐｅ１社、米国）を２４℃に
て４５分間反応させた後、２回洗滌後再び２％浮遊液と
じたものを、いわゆるＭ−ＭＨＡの指示赤血球として用
いる。

Ｍ−ＭＨＡ検査法の手法としては、被検索細胞は、ハイ
ブリドーマ細胞、培養上清またはハイプリドーマ細胞接
種ＢΔＬＢ／ｃマウスもしくはＢＡＬＢ／’ｃ由来ヌー
ドマウス腹水と２４℃にて４５分間反応させ、抗体を洗
滌除去後、０．２％指示羊赤血球と２４℃にて４５分間
反応させ、軽く一部リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）
で洗滌後光学的顕微鏡下、指示赤血球のロゼツト形成の
有無にて判定する。

また実施例中において用いた間接螢光抗体法〔細胞質螢
光抗体法（Ｃｙ−ＩＦ）または膜壁光抗体法（ＭＩＦ）
は下記方法で行った。

細胞質螢光抗体法： １〜５Ｘ１０’の標的細胞を、スライドグラス上に９５
％アセトンで１０分間固定し、−７Ｄｔ：に保存してお
いたものを標的細胞として用いる。

第１吹拭体として、ハイブリドーマ細胞培養上清または
ハイプリドーマ細胞接種ＢＡＬＢ／ｃマウスもしくはＢ
ＡＬＢ／ｃ由来ヌードマウス腹水２５μｌを用いて４℃
または２５℃にてａＯ分間反応させる。ＰＢＳで洗滌後
２次抗体として、９０〜４０倍涌」魯を鍾朧穿砺マ均ス
イムノグロブリンＧＡＭ　（ＣＡＭ−Ｆ　ＩＴＣ，コー
ル・ター社、米国）を２５℃にて３０分間反応させる。

反応は螢光顕微鏡下で螢光の有無にて判定する。

膜壁光抗体法： ５　Ｘ　１０５．　／ｍｌの標的細胞５０ｕｊｌ！と、
第１吹拭体としてハイブリドーマ細胞培養上清またはハ
イプリドーマ細胞接種ＢＡＬＢ／ｃマウスもしくｆｔＢ
ＡＬＢ／ｃ由来ヌードマウス腹水５０μｌとを用いて、
４℃または２５℃にて３０分間反応させる。ＰＢＳで洗
滌後、２次抗体として２０〜４０倍稀釈螢光標識家兎マ
ウスイムノグロブリンＣＡＭ　（ＣＡＭ−Ｆ　ＩＴＣ，
コール・ター社、米国）を２５℃にて３０分間反応させ
る。反応は螢光顕微鏡下で螢光の有無にて判定する。

本発明のモノクローナル抗体はマウスをＡＴＬ細胞、Ａ
ＴＬＶ産性株ＭＴ−２細胞またはＭＴ−２より分離した
ＡＴＬウィルス（ＡＴＬＶ）、混合培養リンパ球、プロ
ティンＡ　（ＰＡ）活性化リンパ球などで免疫し、肺細
胞を取り出し、これとマウスミエローマ細胞とを融合し
て得たノ飄イブリドーマを培養することによって製造す
ることができる。

このハイブリドーマ製造に際してはにｏｈｌｅｒ　とＭ
ｉ　ｌ５ｔｅｉｎの方法［’　Ｎａｔｕｒｅ　２５６．
４９５−４９７　（１９７５））を改良したＵｅｄａら
の方法（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７８．５１２２−５１２６　（１９
８１）’：ｌに従って行えばよい。

免疫用マウスとしては、ＢＡＬＢ／Ｃ系マウス。

ＢＡＬＢ／Ｃ系マウスと他系マウスとのＦ１マウスなど
が用いられる。

免疫はマウス１匹（４〜８週令、２０〜３０ｇ）に対し
て細胞１０７〜８個またはウィルス５０〜５００μｇを
用いて２〜５週間ごとに２〜３回行う。マウスの飼育お
よび、肺細胞の採取は常法に従う。

ミエローマ細胞としては、ＭＯＰＣ−１１ＮＳ／　Ｉ　
ＣＮａｔｕｒｅ、亜６．４９５−４９７　（１９７５）
　〕、Ｓ’Ｐ２１０−Ａｇ１４　〔Ｎａｔｕｒｅ、虱１
３１−１３３（１９７９））、５１９４１５、ＸＸＯ，
ＢＵ、ＩＣＪ、　ＢＸＩｌ、　Ｍｅｄ、　１４８．３１
３−３２８　（１９７８）　Ｅなどが用いられる。肺細
胞とミエローマ細胞は１対１〜１０対１の割合で混合し
、融合は、ＮａＣｊｉ’（約０．８５％）、ジメチルス
ルホキシド〔１０〜２０％（Ｖ／Ｖ）：］および分子量
１．０００〜６．０００のポリエチレングリコールを含
むリン酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，２〜７．４）中で行う。

融合は両細胞を３５〜３７℃で１〜３分間インキュベー
トすることによって行う。

融合細胞（ハイブリドーマ）の選択は、ヒポキサンチン
（１，３〜１．４ｍｇ／ａ）、アミノプテリン（１８〜
２０μｇ／＃）、チミジン（３７５〜４００μｇ／＃）
、ストレプトマイシン（５０〜１００μｇ／ｍｌ）、ペ
ニシリン（５０〜１００単位）、グルタミン（３，５〜
４．０ｇ／４１）、牛胎児血清（１０〜２０％）を含む
基礎培地を用い、生育してくる細胞として選択する。

基礎培地としては、動物細胞の培養に一般に使用されて
いるＲＰＭ１１６４０培地、ＥａｇｌｅのＭＥＭ培地な
どが用いられる。

融合細胞（ハイブリドーマ）のクローン化は限界希釈法
にて少なくとも３回繰返して行う。

ハイブリドーマを通常の動物細胞の培養と同様にして培
養すれば、培地中に本発明の抗体が生産される。例えば
２〜５Ｘ１．０’のハイブリドーマ細胞をストレプトマ
イシン（５０〜１００μｇ／ｍ１）、ペニシリン（５０
〜１００単位／ｍｌ）、グルタミン（３，５〜４．０ｇ
／ｊり、牛脂児血清（１０〜２０％）を含むＲＰＭ１１
６４０培地１０〜２０ＩＴ１１を用い、フラスコ内で９
５％Ｃｏ２−５％０２存在下、３５〜３７℃、３〜７日
間培養することによって培養液中に抗体が分泌、蓄積さ
れる。

またハイブリドーマ細胞をブリスタン（Ｐｒｉｓｔａｎ
ｅ）処理のヌードマウスまたはＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹
腔内に移植して増殖することにより腹水中に本発明の抗
体を蓄積させることができる。すなわち、これらのマウ
ス腹腔内にプリスタン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ。

２、６．１０．１４　ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ　ｐｅｎ
ｔａｄｅｃａｎｅ、　米国アルドリッチ社製）０．５〜
１ｍｌ注射し、その後２〜３週目に腹腔に５〜ｌ０ＸＩ
Ｏ’個のハイブリドーマ細胞を移植する。通常７〜１０
日後に腹水が貯溜し、これを採取する。

本発明においては、ＡＴＬ由来細胞株ＭＴ−２を免疫原
として用いてモノクローナル抗体Ｔａ６０ｂ、Ｔａ５Ｑ
ｃおよびＴｓ６０を（尋、ＡＴＬＶを免疫原として用い
てモノクローナル抗体Ｔａ５Ｑａ、ＡＴＶ１９ａおよび
ＡＴＶ１９ｂを得た。

ＡＴＬ細胞を免疫原としてＴｓＡを得、混合リンパ球培
養細胞を免疫原としてＴｐｗ４０．Ｔｐ１２０、Ｔｓｗ
３２．Ｌｐ９５．Ｌｓ７０．ＬｓＡを得、ＰＡ活性化リ
ンパ球を免疫原としてＴｓＢおよびＴｓ　１４５を得た
。

これらモノクローナル抗体の抗原特異性は実施例６〜１
３に示した方法により確認した。

本発明のモノクローナル抗体の抗体クラスは、Ｔｐ１２
０およびＬｐ９５がＩｇＧ２ａ、ＴｓＡがＩｇＭで、他
はすべてＩｇＧ１に分類される。

また〔３Ｈ〕グルコサミン標識による下記免疫沈降反応
による分子量測定では、Ｔａ６０ａ、Ｔａ６０ｂ、Ｔａ
６０ｃおよびＴｓ５Ｑ抗原はＭＴ−２またはＭＴ−１細
胞において６０．０００ダルトン（ｇｐ６０　ＭＴ−２
）を示し、ＨＵＴ　１０２細胞においては５３．０００
ダルトン（ｇ　ｐ５３　ＨＵＴ１０２）であり、これら
４抗原はほぼ同一分子量を示した。

また、Ｔｐ１２０抗原は、ＨＵＴ１０２細胞においては
１２０．０００ダルトンであった。また１２５Ｉ標識に
よる免疫沈降反応による分子量測定では、ＴＳ１４５抗
原およびＬｓ７０抗原はＮ　Ｋ　３．３細胞においてそ
れぞれ１４５．０００ダルトン、　７０，０００ダルト
ンであった。

３５Ｓメチオニン標識による分子量測定では、Ｌｐ９５
抗原は、ＨＵＴ１０２細胞において９５．０００ダルト
ンを示した。

イムノブロッ°ティング法による分子量測定では、ＡＴ
Ｖ　１９　ａおよびＡＴＶ　１９　ｂは、ともにＡＴＬ
Ｖの１９．０００ダルトンのウィルス粒子構成成分と同
じ分子量を示した。

他の５つの抗原（Ｔｐｗ４０．Ｔｓｗ３２゜ＴｓＡ、Ｔ
ｓＢ、ＬｓＡ）の分子量は、現在のところ不明である。

免疫沈降反応： 標的細胞（ＭＴ−２，ＭＴ−１およびＨＵＴ１０２）は
〔３Ｈ〕−グルコサミンを用いて標識する。１５μＣ／
ｍｌ’Ｈ−グルコサミン（３８Ｃｕｒｉｅｓ／ｍｍｏｌ
、　Ａｍｅｒｓｈａｍ米国）を含んだＲＰＭ　１１６４
０培養液（日永製薬社製）にて３５〜４０時間培養して
標識する。

標的細胞ＨＵＴ　１０２は″′Ｓメチオニンを用いて標
識した５００μＣ／、、ｐｓ　３メチオニンを含んだＲ
ＰＭ１１６４０培養液にて８時間培養して標識する。ま
たＮ　Ｋ　３．３標的細胞は、５Ｘ１０７細胞を２００
μｇのアイオドゲン存在下で０．５　ｍ　ＣのＮ　ａ　
ｌ　２　Ｓ　Ｉで標識する。

これら標識した細胞を０．１〜１％（Ｖ／Ｖ）ＮＰ−４
０を用いて可溶化し、その細胞抽出物（１〜１０ｘ１０
５　ｃｐｍ）をモノクローナル抗体（１〜１０μｌ）と
４℃にて６〜１２時間反応させ、第２吹拭体として５〜
２０μｌの家兎抗マウスイムノグロブリン（Ｃａｐｐｅ
１社、米国）と４℃で３０分間反応させ、さらに４℃で
１時間スフフィロコツカス・アウレウス（Ｃｏｗａｎ　
Ｉ株）と反応させ免疫沈降物を作製し、５ＰＳ−ポリア
クリルアミド・ゲル電気泳動により解析する。

イムノブロッティング法（Ｔｏｗｉｎ、　）１．　ら、
　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　八ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＩＳＡ　７６、
４３５０．　１９７９　）　：ポリアクリルアミド・ゲ
ル電気泳動法により展開し、ニトロセルロース膜に各ペ
プチドを転移させ、その後モノクローナル抗体と反応さ
せ、さらに２次抗体である１３１■標識抗マウス免疫グ
ロブリン抗体と反応せしめ、その後、フルオログラフィ
ーで観察する。

なお、本発明のモノクローナル抗体は、昭和５８年９月
２５日発行の日本癌学会第４２回総会記事〔日本癌学会
発行〕１００頁の２９０番およびシンポジウムＶＩ２３
の２番に記載があり、該記事中、ＴＡ−５３Ｃ，Ｔ’Ａ
〜５３ｂ、ＴＡ−５３ａ、ＴＳ−５３，ＡＴＶ−Ｗ２６
ａおよびＡＴＶ−Ｗ２６ｂは、それぞれ本明細書におけ
るＴａ−６０ａ、Ｔａ６０ｂ、Ｔａ６（ｌｃ、Ｔｓ６０
゜ΔＴＶ１９ａおよびＡＴＶ　１９　ｂに相当する。ま
たＴＰ−Ｗ２Ｏ，ＬＰ−９４，ＴＰ−Ｗ６７およびＴＰ
’−１２０はそれぞれ本明細書におけるＴｐｗ４０、Ｌ
ｐ９５．ＴｓＡおよびＴｐ１２０に相当する。

以下、本発明の実施例を示す。

実施例１゜ Ｔａ６０ａ、Ｔａ６０ｃ、ＡＴＶ１９ａおよびＡＴＶ　
１９　ｂモノクローナル抗体の製造；ＡＴＬ由来培養株
ＭＴ−２ＣＧａｎｎ　７１．１５５（１９８０）　）　
ノ培養上清より採取分離した（Ｙｏｓｈｉｄａ。

Ｈ，ｅｔ　ａｌ　：　Ｐｒｉｍａｒｙ　ａｎｄ　ｔｅｒ
ｔｉａｒｙ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆｎｕｃｌｅｉｃ
　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｃａｎｃｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ、　Ｍ、　Ｍｉｗａｅｔ　ａｌ、（ＥＤＳ、　Ｊａｐ
ａｎ、　Ｓｃｉ、　Ｓｏｃ、　Ｐｒｅｓｓ、　Ｔｏｋｙ
ｏ。

ｐｐ　２５５−２９４．１９８２）ウィルス粒子蛋白分
画を免疫原として用いた。

上記蛋白分画く蛋白量（１，４５ｍｇ）を免疫直前瞬時
にドライアイス含有エチルアルコール中にて凍結し、再
び３７℃恒温槽にて融解せしめる凍結融解過程を６回行
った後、完全プロインドアジュバント０．０２ｆｌｌ＋
と混合し、ＢＡＬＢ／Ｃ７ウス（８週令、　２４ｇ）　
（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ、　Ｉｎｃ、、　Ａｔｓ
ｕｇｉ。

Ｊａｐａｎより購入〕１匹の背面に皮下接種することに
より免疫した。この免疫を４週ごとに４回行い、最終免
疫４日目にマウスを殺し、膵臓を摘出し、常法により浮
遊細胞を得た。

この肺臓浮遊細胞１０８個と、マウスミエローマＭＯＰ
Ｃ−２１ＮＳ／１細胞２Ｘ１０７個とを、４２％（Ｗ／
Ｖ）ポリエチレングライコール（Ｍ。

Ｗ、　４，０００．　Ｋｏｃｈ’−Ｌｉｇｈｔ、　Ｂｕ
ｃｋｓ、英国）および１５％（Ｖ／Ｖ）ジメチルスルホ
キシド（Ｍｅｒｃｋ。

Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、西独）をふくむリン酸緩衝液生理
食塩水（ＰＢＳ）０．２ｍｌ中でＵｅｄａ　らの方法［
Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７８．５
１２２−５１２６　（１９８１）　）に従って融合させ
た。

融合細胞は、ＨＡＴ培地〔ヒポキサンチン１．３６ｍｇ
　／　ａ　、アミノプテリン１９．１．ｃｊｇ／ｄｌ、
ｆミ’；ン３８７μｇ／ｄ１１．ストレプトマイシン１
００μｇ　／ｍｌ　、ペニシリン１００単位／ｍ１．グ
ルタミン２ｍＭおよび牛胎児血清１０％を含むＲＰＭ　
１１６４０培地（ｐ　Ｈ７，２：］を用いて常法〔前記
Ｕｅｄａらの方法〕に従い選択した。

得られた融合細胞３個を限界希釈法を３回繰返すことに
よりクローン化した。を尋られたクローン（３個）を、
下記の方法で培養して、ＡＴＬ関連抗原に対して特異的
に反応するモノクローナル抗体を著量生産する株を得た
。すなわち、５×１０６のハイブリドーマ細胞をストレ
プトマイシン１００μｇ　／ｍｌ　、ペニシリン１００
単位／ｍ１．グルタミン３．８　ｇ　／　ｉ’　、牛胎
児血清１０％を含むＲＰＭ　１１６４０培地１５ｍｌを
用い、１５０ＣＩ１１のフラスコ内で９５％ＣＯ２５％
０２の存在下、３７℃で７日間培養した。

得られた細胞株Ｔａ５０ａ、Ｔａ６０ｃ、ＡＴＶｌ　９
ａおよびＡＴＶ　１９　ｂが生産するモノクローナル抗
体をそれぞれＴａ　６０　ａ、　Ｔａ−６０ｃ。

ＡＴＶ　１９　ａおよびＡＴＶ１９ｂとした。

この細胞株をマウスの腹腔内に投与する下記の方法で培
養するとＴａ６０ａ、Ｔａ６０ｃ、ＡＴＶ１９ａおよび
ＡＴＶ１９ｂがそれぞれ３〜１０ｍｇ／Ｉｌ生成した。

すなわちマウス腹腔内にプリスタン０．５ｍｌ注射し、
その後３週目の腹腔に５×１０６個のハイブリドーマ細
胞を移植し、１０日後に腹水を採取した。

実施例２゜ Ｔａ６０ｂおよびＴＳ６０モノクローナル抗体の製造： Ａ　Ｔ、、、、Ｌ由来培養株Ｍ　Ｔ　−２［：Ｍｉｙｏ
ｓｈｉ鮎１−Ｇａｎｎ−ハ、　１５５　（１９８０））
を１０７個マウス皮下に初回免疫し、その３週後に２回
目の免疫を同様に行い、さらに３回目の免疫を１０７個
腹腔内に注射した。その後４日目に、免疫マウスを殺し
、肺臓細胞を採取し、細胞融合を行った。以下は実施例
１と同様に行い、Ｔａ６０ｂおよびＴｓ６０モノクロー
ナル抗体を得た。

実施例３゜ ＴＳＡモノクローナル抗体の製造； ＡＴＬ患者末梢血より分離したＡＴＬ細胞を１０７個、
マウス皮下に初回免疫し、その３週後に２回目の免疫を
同様に行い、さらに３回目の免疫を１０７個腹腔内に注
射した。その後４日目に免疫マウスを殺し、肺臓細胞を
採取し細胞融合を行った。以下は実施例１と同様に行い
、ＴｓＡモノクローナル抗体を得た。

実施例４゜ Ｔｐｗ４０．Ｔｐ１２０．’Ｔｓｗ３２．Ｌｐ９５゜Ｌ
ｓ７０およびＬｓＡモノ・クローナル抗体の製造；混合
培養４日目のリンパ球を採取し、洗滌後５×１０６個の
細胞をマウス皮下に初回免疫し、その３週間後に２回目
の免疫を同様に行い、さらに３回目の免疫を１０７個腹
腔内に注射した。その後４日目に免疫マウスを殺し、肺
臓細胞を採取し細胞融合を行った。以下は実施例１と同
様に行い、標記モノクローナル抗体を得た。

実施例５゜ ＴｓＢおよびＴｓ　１４５モノクローナル抗体の製造； プロティンＡ　（ＰＡ）１０ａｇ／ｍｌの存在下で、末
梢血リンパ球を３日間培養後、活性化リンパ球を採取し
、洗滌後５×１０６個の細胞をマウス皮下に初回免疫し
、その３週後に２回目の免疫を同様に行い、さらに３回
目の免疫を１０７個腹腔内に注射した。その後４日目に
免疫マウスを殺し、肺臓細胞を採取し、細胞融合を行っ
た。以下は実施例１と同様に行い、ＴｓＢおよびＴｓ　
１４５モノクローナル抗体を得た。

実施例６、 モノクローナル抗体Ｔａ６０ａ、Ｔａ６０ｂ。

Ｔｓ６０およびＡＴＶ　１９　ａの各種培養株細胞なら
びにヒト正常血液細胞成分に対する反応性：細胞表面抗
原と標記モノクローナル抗体との反応を調べる為に、マ
ウス混合血球吸着試験ＣＭ−ＭＨＡ：Ｉ　Ｃ前記〕およ
び細胞質内抗原と抗体との反応を検索する目的での間接
螢光抗体法〔前記〕を行った。結果を第１表に示す。

第　１　表 ＋＋＋　：　＞　ＩＱ’　、　十＋　：　＞　ＩＱ　５
　、　＋　：　＞　１０３　、　＃＋＋＋　：　＞　１
０’±：１０２．　＊ｐｏｓ＋ｔｉｖｅｃｅｌｌｓ　：
　Ｉ−５Ｘこの結果、Ｔａ６０ａ、Ｔａ６’Ｏｂは同一
反応性を示し、これら両抗原は特にＴ細胞由来株のうち
ＡＴＬＶまたＨＴＬＶに関係ある（ＡＴＬ−関連）細胞
に存在するのみで他のＴ細胞には存在しておらず、ＲＰ
Ｍ　Ｉ８４０２．ＨＰＢ−ＡＬＬ。

ＭＯＬＴ−’３．ＪｕｒｋａｔおよびＩＬ−２依存性の
Ｎ　Ｋ　３．３株細胞には陰性であった。但し、Ｂ細胞
株に対しては、Ｍ−ＭＨＡでＲａｊｉ、ＲＰＭ１１７８
８の２細胞株に陽性であった。固型腫瘍細胞由来株は第
１表に示したメラノーマ株（ＳＫ−ＭＥＩ−３７，ＳＫ
−ＭＥＬ−３３）ならびに、肺癌、腎癌、胃癌、脳腫瘍
株などはすべて陰性であった。正常血液細胞に関しては
、胸腺、末梢白血球、単球、顆粒球、骨髄細胞を含めて
すべて陰性であった。

Ｔａ６０は、ＡＴＬ関連細胞（ＭＴ−２゜ＨＵＴ１０２
．ＨＵＴ７８）に存在するほかは、例外的にＴ細胞由来
のＪｕｒｋａｔ細胞に存在したのみで、他の培養株細胞
、正常細胞には存在していない。興味あることに、細胞
質内抗原に対する螢光抗体法による結果からは、Ｊｕｒ
ｋａ　ｔは陰性で、固型腫瘍のＳＫ−Ｍ’ＥＬ−３７に
陽性であり、細胞膜抗原と存在の様式を異に口でいる。

ΔＴＶ１９ａは、細胞質内抗原で、ＡＴＬ−関連細胞で
あるＭＴ−２，ＭＴ−１，ＨＬＩＴ１０２およびＡＴ’
Ｎ−１に存在するが、他の細胞にはすべて陰性であった
。

実鴇例７゜ Ｔａ６０ｂ、ＴＳ６０抗体の各種細胞に対する抗体価の
比較（Ｍ−ＭＨＡ法による）：ＴΔ６０ｂの抗体価を５
０％陽性値で比較すると、ＭＴ−２，ＨＵＴ１０２．Ｍ
Ｔ−１，ＲＰＭ１１７８８、Ｒａｊｉの順で、ＨＵＴ７
８゜Ｊｕｒｋａｔは陰性であった。

ＭＴ−２，ＨＵＴ１０２　：　１０７Ｎ１０７Ｎ８　：
　１１０ ７ＲＰ　１１７８８．　Ｒａ　ｊ　ｉ　：　１０６Ｔｓ
６０は、ＭＴ−２，ＨＵＴ７８．Ｊｕｒｋａｔ。

ＨＵＴ１０２に陽性で、ＭＴ−１，ＲｐＭＩ１７ｊａ。

Ｒａｊｉには陰性であった。

ＭＴ−２：　１０’″８ １（ＬＩＴ７８．　Ｊｕｒｋａｔ、　ＨＩＪＴ１０２　
：　１０６ＭＴ−１，ＲＰＭ１１７８Ｂ、　Ｒａｊｉ　
：陰性実施例８゜ 本発明モノクローナル抗体の正常血液細胞に対する反応
性（Ｍ−ＭＨＡ法による）： 第、２表に示すごと＜Ｔａ６０．ａ、Ｔａ６０ｂは、と
もに無処理の末梢血液成分には全く反応しないが、下記
のマイト−ジエンを含有する培養液で培養するとこれら
両抗原が陽性となる。

１）ＩＬ−２１０−２５％（Ｂｉｏｔｅｓｔ社、西独）
■）フィトヘムアグルチニン（Ｐ）ＩＡ）　２０〜５０
μｇ／＋＋＋　］（ＧＩＢＣＯ社） ■）コンカナバリンＡ　（ＣｏｎＡ）　２０〜２５μｓ
／ｍ１（ＧＩＢＣＯ社）一方、Ｔａ６０は、いかなる条
件下でも陰性であった。

第　２　表 ＊１０％ＦＣ３含有ＲＰＭ１１６４０ 実施例９゜ 本発明モノクローナル抗体の造血器腫瘍細胞に対する反
応性（Ｍ　−’Ｍ　ＨＡ法）：造血器腫瘍７９症例検索
の結果を第３表に示す。

第　３　表 ＊　ＲＰＭＩ−１６４０ｗｉｔｈ　１０％ＦＣ３含有Ｒ
ＰＭ１１６４０第３表中カッコで示した抗体価１０５以
下の弱陽性例を含めると、Ｔａ６０ａ、Ｔａ６０ｂ両抗
体ともＡＴＬ症例全例に陽性で、他のＴ細胞由来症例に
は全て陰性であった。Ｔ−ＣＬＬの１例が陽性であるが
、この症例は既にプロバイラル（ｐｒｏｖｉｒａｌ　）
　ＤＮＡを有しており、臨床診断はＴ−ＣＬＬであるが
、ＡＴＬとも考えられる。即ち、この両抗原はＡＴＬと
鑑別診断上問題となるＴ由来細胞の悪性造血器疾患に陰
性であり、これら抗体は診断上有用である。なお、これ
らの抗体は、Ｂ細胞由来のＢ−ＣＬＬ、Ｂ−、ＭＬ　（
Ｂ細胞悪性リンパ腫）の一部症例とも反応し、また骨髄
性白血病（ＡＭＣ）の一部症例にも弱陽性ながら反応を
示した。

一方、ＴＳ６０はすべての造血器疾患に陰性であった。

実施例１０゜ 本発明モノクローナル抗体のＩＬ−２依存性細胞に対す
る反応性： ＩＬＩ依存細胞株であるクローン化Ｔ細胞４Ｅ８［ツベ
ルクリン陽性健常者の末梢血とＰＰＤ（結核菌細胞膜抗
原の一種）抗原とを試験管内で反応させ、長期培養した
Ｔ細胞株〕を９６穴平底培養用プレー）　ＣＦａｌｃｏ
ｎ社製〕に、各ウェル宛２Ｘ１０’　１０．２ｍｌ培養
液（１０％ＦＣ３含有ＲＰＭ１１６４０培地）で播き、
室温で３０分間各種濃度の抗体で反応させた。

その後ＩＬ−２を最終濃度５％（Ｖ／Ｖ）になるように
加えて５％Ｃ０２１５％０２，３７℃で７２時間培養後
、０．４μＣｉの３Ｈ−メチル−チミジンの４時間の取
り込みを見て、ＩＬ−２依存性細胞増殖阻止を観察した
。

その結果、Ｔａ５Ｑａは１０−”〜１０−’濃度まで７
５％〜９５％の阻止率をまたＴａ５Ｑｂは１０−２〜１
Ｏ−，４まで６０％以上の阻止率を示した。

一方Ｔｓ６０は、なんら細胞増殖阻止効果を有していな
かった。

実施例１１゜ 本発明モノクローナル抗体ΔＴＶ１９ａの正常および悪
性造血器細胞に対する反応性（Ｍ−ＭＨＡ法による）を
調べた結果を第４表に示す。

＊　３日間培養 実施例１２゜ ヒト白血球分化抗原を検出する９抗体の正常造血器細胞
に対する反応性； 第５表に示すごとく、Ｔｐｗ４０．Ｔｐ１２０抗体は、
末梢血Ｔ細胞の６０〜８０％に反応を示すが、Ｂ細胞、
単球、顆粒球等には反応を示さない。

Ｔｐｗ４０抗体は、胸腺細胞の大部分と反応を示すが、
Ｔ、ｐ　１２０抗体は、胸腺細胞の３０〜４０％のみと
反応を示し、ともにｐａｎＴ細胞抗原を検出しているが
、その特異性においては、差異が見られた。

Ｔｓｗ３２．ＴｓＡ、ＴｓＢおよびＴｓ１４５の４抗体
は、末梢血Ｔ細胞のある一分画に反応を示したが、Ｂ細
胞、単球、顆粒球には反応を示さず、いわゆる、Ｔ細胞
サブセット抗原を検出しＣいた。胸腺細胞に対する反応
性は、抗体間で異なっており、Ｔｓｗ３２は８０〜９０
％の胸腺細胞に反応を示したが、ＴｓＢ、Ｔｓ　１４５
抗体は、ごく一部の細胞に反応を示したのみであった。

Ｌｐ９５抗体は、はぼすべての白血球細胞群と反応を示
し、ｐａｎ白血球抗原を検出すると考えられた。

Ｌｓ７０およびＬｓＡ抗体はともに単球およびその他の
白血球と反応を示し、白血球の一部の細胞に存在する抗
原を検出していた。

実施例１３゜ ヒト白血球分化抗原を検出する９抗体の各種造血器腫瘍
に対する反応性： 各種造血器腫瘍６０症例に対する反応性を検索し、第６
表に示した、 ｐａｎ白血球抗原を検出するＬｐ９５抗体は、はとんど
の造血器腫瘍細胞と反応を示した。ｐａｎＴ抗原を認識
するＴｐｗ４０．Ｔｐｌ　２０抗体は反応性を異にして
おり、Ｔｐｗ４０はより未熟なＴＩＭ胞リンす腫である
Ｔ−ＡＬＬ、ＬＬに反応を示し、また、Ｉａ抗原陰性の
Ｎｕｌｌ−ＡＬＬとも反応を示した。一方Ｔｐ１２０抗
体は、成熟型Ｔ細胞リンパ腫であるＴ２　リンパ腫およ
びＡＴＬに高率に反応した。この抗体は、またＢ−ＣＬ
Ｌとも反応を示した。

Ｔ面分画抗原を認識するＴｓｗ３２およびＴｓＡ抗体は
、ともにＴ−ＡＬＬおよびＬＬには反応を示し、ＴｓＡ
抗体は、さらにＴ２　リンパ腫、ＡＴＬとも反応性を示
した。

Ｔ面分画抗原を認識するＴｓＢ抗体はＴ２リンパ腫ＡＴ
Ｌらの成熟Ｔ細胞リンパ腫と主に反応を示した。また、
この抗体はＢ−ＣＬＬとも反応を示した。Ｔｓ　１４５
抗体は、いずれのＴ細胞リンパ腫とも高率の反応は示さ
なか−た、白血球の一部に存在する抗原を認識するＬｓ
７Ｑ抗体は成熟Ｔ細胞リンパ腫およびＢ−ＣＬＬに反応
を示した。

ＬｓΔ抗体は、正常卓球細胞に反応を示すが、急性単球
性白血球とも反応を示した。この抗体は、Ｔ細月包すン
パ腫Ｂ−ＣＬＬらとはまったく反応を示さなかった。

手続補正書 昭和５θ年１２月７日 特許庁長官　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第２１０３８１号 ２、発明の名称 新規モノクローナル抗体 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 ４、代理人 住　所　東京都練馬区関町北３−４３−３６明細書の発
明の詳細な説明の欄、証明書および委任状 ６、補正の内容 ｆｌｌ　明細書第１６頁１８行目のＦＴＰ−Ｗ４０Ｊの
前に次の記載を加入する。　／　”　、”、、　、、ａ
、’１・　５ａ　１２　？デ穎 「昭和５８年１１月１０日発行の日本免疫学会総会記録
で発表のあった」 （２）　別紙のとおり証明書および委任状を提出する。

７、添付書類の目録 （１１特許出願に係る発明が特許法第３０条第１項に規
定する発明であることを証明する書面１）ｉＥ　明　書
（日本癌学会）　１通２）第１３回日本免疫学会総会記
録 表紙、２１６〜２１７頁、臭付　１通 （２）委任状　１通 手続補正書 昭和５９年２月２９日 特許庁長官　殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第２１０３８１号 ２、発明の名称 新規モノクローナル抗体 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 ４、代理人 住　所　東京都練馬区関町北３−４３−３６願書および
明細書の発明の名称の欄 ６、補正の内容 セイ　リイボウ 生ハイブリドーマ細胞」に訂正する。

（２）明細書第１頁の発明の名称を「正常及び悪性ヒト
造血器細胞に対するモノクローナル抗体及びその産生ハ
イブリドーマ細胞」に訂正する。

手続補正書く方式） ％式％ １、事件の表示 昭和５８年特許願第２１０３８１、 発明の名称 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗
体及びその産生ハイブリドーマ細胞３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　所　愛知県名古屋市緑区鳴海町白山６８氏　名　高
　橋　利　忠 ４、代理人 住　所　東京都練馬区関町北３−４３−３６昭和５９年
２月８日（発送日：昭和５９年２月２８日）６、補正の
対象 明　細　書 ７、補正の内容 明細書の浄書（内容に変更なし） 手続補正書（自発） 昭和ら０年　ｌ　月３１　日：３欲 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第２１０３８１号 ２、発明の名称 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗
体及びその産生ハイブリドーマ細胞３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　愛知県名古屋市中区三の丸三丁目１番２号名称　
愛知県 知事　鈴　木　礼　治 ４、代理人 ６、イ正の対象 明細書の特許請求の範囲の欄 ７、補正の内容 別紙のとおり。

特許請求の範囲 （１）　ヒト白血球に存在する抗原を検出するモノクロ
ーナル抗体。

（２）　ヒトＴ細胞に対する特許請求の範囲第１項のモ
ノクローナル抗体。

（３）成人Ｔ細胞白血病（以下ＡＴＬと略記する）関連
抗原に対する特許請求の範囲第２項のモノクローナル抗
体。

（４）　ｇｐ６０１：ＭＴ−２：］抗原を認識すること
を特徴とする特許請求の範囲第３項記載のモノクローナ
ル抗体。

（５）活性化Ｔ細胞およびＡＴＬ細胞に特異的に反応す
る特許請求の範囲第３項記載のモノクローナル抗体。

（６）ＡＴＬ関連培養細胞のみに反応することを特徴と
する特許請求の範囲第３項記載のモノクローナル抗体。

（７）　ＡＴＬウィルス（以下ΔＴＬＶと略記する）産
生株細胞のみに反応することを特徴とする特許請求の範
囲第３項記載のモノクローナル抗体。

（８）Ｔａ６０ａ、Ｔａ５ＱｂまたはＴａ６０ｃと命名
した特許請求の範囲第３〜６項のいずれかに記載のモノ
クローナル抗体。

（９）ＴＳ６０と命名した特許請求の範囲第３，４また
は６項記載のモノクローナル抗体。

σＧ　ＡＴＶ１９ａまたはＡＴＶ　ｌ　９　ｂと命名し
た特許請求の範囲第３．６または７項記載のモノクロー
ナル抗体。

（１１）　末梢血Ｔ細胞の大部分に存在するＴ細胞分化
抗原（ｐａｎ　Ｔ抗原）に対する特許請求の範囲第１項
のモノクローナル抗体。

（１２）　Ｔｐｗ４０またはＴｐ１２０と命名した特許
請求の範囲第１１項のモノクローナル抗体。

（１３）　Ｔ細胞の面分画に存在する抗原（Ｔ細胞サブ
セット抗原）に対する特許請求の範囲第１項のモノクロ
ーナル抗体。

（１４）　Ｔｓｗ３２．ＴｓΔ、ＴｓＢまたはＴｓ１４
５と命名した特許請求の範囲第１３項のモノクロナール
抗体。

（１５）　Ｔ細胞および他の白血球に存在する抗原に対
する特許請求の範囲第１項のモノクローナル抗体。

（１６）　Ｌｐ９５．Ｌｓ７０またはＬｓＡと命名した
特許請求の範囲第１５項のモノクローナル抗体。

（１７）　ヒト白血球細胞抗原に対するモノクローナル
抗体を生産する能力を有するハイブリドーマを培養し、
培養液中に該モノクローナル抗体を分泌、蓄積せしめ、
該培養液から該モノクローナル抗体を採取することを特
徴とするヒト白血球細胞抗原に対するモノクローナル抗
体の製造法。

（１８）該ハイブリドーマがＡＴＬ細胞、ＡＴＬＶ産生
株、ＡＴＬＶ、混合培養リンパ球、または活性化リンパ
球で免疫したマウス牌細胞とマウスのミエローマ細胞と
を融合させたハイブリドーマであることを特徴とする特
許請求の範囲第１７項記載のモノクローナル抗体の製造
法。

求の範囲第１９項記載のハイブリドーマ。

進互　該モノクローナル抗体が、Ｔｐｗ４０またはブリ
ドーマ。

一マ０ リドーマ。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　ヒト白血球に存在する抗原を検出するモノクロ
   ーナル抗体。 （２）　ヒ）Ｔ細胞に対する特許請求の範囲第１項のモ
   ノクローナル抗体。 （３）成人Ｔ細胞白血病（以下ＡＴＬと略記する）関連
   抗原に対する特許請求の範囲第２項のモノクローナル抗
   体。 （４）　ｇｐ６０　（ＭＴ−２］抗原を認識することを
   特徴とする特許請求の範囲第３項記載のモノクローナル
   抗体。 （５）活性化Ｔ細胞およびＡＴＬ細月狛こ特異的に反応
   する特許請求の範囲第３項記載のモノクローナル抗体。 （６）ＡＴＬ関連培養細胞のみに反応することを特徴と
   する特許請求の範囲第３項記載のモノクローナル抗体。 （７）ＡＴＬウィルス（以下ＡＴＬＶと略記する）産生
   株細胞のみに反応することを特徴とする特許請求の範囲
   第３項記載のモノクローナル抗体−（８）Ｔａ６０ａ、
   Ｔａ６０ｂまたはＴａ６０ｃと命名した特許請求の範囲
   第３〜６項のいずれかに記載のモノクローナル抗体。 （９）Ｔｓ６０と命名した特許請求の範囲第３，４また
   は６項記載のモノクローナル抗体。 Ｑ＠　ＡＴＶ１９ａまたはＡＴＶ　１９　ｂと命名した
   特許請求の範囲第３，６または７項記載のモノクローナ
   ル抗体。 （１１）末梢血Ｔ細胞の大部分に存在するＴ細胞分化抗
   原（ｐａｎ　”ｌ”抗原）に対する特許請求の範囲第１
   項のモノクローナル抗体。 （１２）Ｔｐｗ４０またはＴｐ１２０と命名した特許請
   求の範囲第１１項のモノクローナル抗体。 （１３）　ＴＩＩＩ胞の亜分画に存在する抗原（ＴＩＢ
   胞サブセット抗原〉に対する特許請求の範囲第１項のモ
   ノクローナル抗体。 （１４）Ｔｓｗ３２．ＴｓＡ、ＴｓＢまたはＴｓ１４５
   と命名した特許請求の範囲第１３項のモノクローナル抗
   体。 （１５）’　Ｔ細胞および他の白血球に存在する抗原に
   対する特許請求の範囲第１項のモノクローナル抗体。 （１６）Ｌｐ９５．Ｌｓ７０またはＬｓＡと命名した特
   許請求の範囲第１５項のモノクローナル抗体。 （１７）ヒト白血球細胞抗原に対するモノクローナル抗
   体を生産する能力を有するハイブリドーマを培養し、培
   養液中に該モノクローナル抗体を分泌、蓄積せしめ、該
   培養液から該モノクローナル抗体を採取することを特徴
   とするヒト白血球細胞抗原に対するモノクローナル抗体
   の製造法。 （１８）該ハイブリドーマが、ＡＴＬＶ産生株またはＡ
   ＴＬＶおよび活性化リンパ球で免疫したマウス牌細胞と
   マウスのミエローマ細胞とを融合させたハイブリドーマ
   であることを特徴とする特許請求の範囲第１７項記載の
   モノクローナル抗体の製造法。