JPS60120823A - ＩｇＧ単量体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、静注可能なＩｇＧに関する。さらに詳しくは
、ヒト由来１ｇＧを、特定条件下で酸処理することによ
ってＩｇＧの二量体および／または重合体（以下、これ
らをＩｇＧ凝集型と総称することもある）を除去して得
られる静脈没１ｊ可能なＩｇＧに関する。

冷エタノール分画法や硫安分画法等で製造されたＩｇＧ
製剤中には、７ＳＩｇＧ（７）他に１０〜４０％の■ｇ
Ｇ凝集型が含まれている。このものは、抗補体活性化作
用や、ときには抗原性を示すために静脈内投与を行うこ
とはできない。静注用■ｇＧを製するためにはこれらＩ
ｇＧ凝集型を除く必要がある。

ＴｇＧ凝集型を除去する方法に関して、酸処理法に関す
る先行技術としては以下のものがある。

ミエローマｒｇＧの凝策型が、ｐＨ４処理で解離するこ
とはＫｏｃｈｗａら（１９６６）により観察されている
が、ミエローマＩｇＧであるためが、又はｐｉ調整時の
界面変性によるものが、中性に戻すと再重合すると報告
されている。

１１ａｎｓｓｏｎ　（１９６Ｂ　）は、正常人のＩｇＧ
を透析しなからｐｌ＋３．０に調整すると、そこに含ま
れていたＩｇＧ凝集型は解離するが、再度中性に戻すと
不溶物が生しると報告している。このように酸処理でＩ
ｇＧ凝集型が解離することは知られてし）たが、特に単
量体１ｇＧを効率よく得る方法についての詳細な報告は
みられない。

他方ヒトＩｇＧの酸変性については、Ｊｉｒｇｅｎｓｏ
ｎら（］　９５４）やＤｏｉら（１９７０）による旋光
性や円偏光二色性等の観察報告はあるが、その他の生物
学的性状がどのように変化しているかに関しては報告さ
れていない。一方、５ｔｏｌ１１１ｒら（１９７６）や
−４ｎｋｅｌｈａｋｅら（１９８０）はウサギ１［Ｇを
用いて酸変性の研究を行い、ＩｇＧの重要な生物活性の
一つである補体結合能がｐｌ＋３．５より酸性側でｌＳ
、弱すること、抗原結合能はｐＨ２，５〜３．０でも安
定であること等の成績を報告した。しかし、ウサギＩｇ
ＧはヒトＩｇＧと性状が異なるため、かかる知見がヒト
ＩｇＧにも適用されるとは言い難い。

ヒトＩｇＣ，凝集型を、ヒト単量体を変性さ七ることな
く、解離さゼる方法を見いだすことができれば、従来の
筋注用グロブリンから単量体ｒｉｃｈの静注用グロブリ
ンを効率よ（製造することが可能となる。

従って、本発明の第一の目的は静注可能なヒトＩｇＧを
提供することである。

本発明の第二の目的は重合型１ｇＧの含量が可及的に少
ないヒトＩｇＧの製造方法を提供することである。

本発明の第三の目的は中性においてもＩｇＧａ＆集型の
生じることのないヒトＩｇＧを提供することである。

本発明の第四の目的は安定な、静注可能ヒ）ＩｇＧを提
供することである。

本発明は、ヒトＩｇＧ重合体を含有するヒト１ｇＧの０
．２〜２０　ｗ　／　ｖ％温溶液ｐＨ３，７〜Ｉ１．３
で３０分〜２０時間処理してヒ）ＩｇＧｉｌｊ合体を中
量体へ解離させて得られた静脈投与可能なＩｇＧからな
る。

原料となるヒトＩｇＧは、ｒｇＧ凝巣型巣型むものが選
ばれる。高度精製されたものであれば本発明処理後ただ
ちに医薬品として調製できるし、又、粗製段階であれば
既知のＩｆｉ製法と組合せられる。原料ヒトＩｇＧの調
製法としては、冷エタノールによるアルコール分画法が
好適に利用される（ジャーナル　オブ　クリニカル　イ
ンベスチゲイション、Ｌ屯、４１７．１９４４年）　（
ジャーナル　オブ　ジ　アメリカン　ケミカル　ソサイ
エティ、エエ、４７９．１９４６年）。

酸処理は、原料をｐＨ３，７〜４．３に保ち行う。処理
温度は１〜ｌＯ℃、好ましくは３〜６℃であり、処理時
間は３０分〜２０時間、好ましくは６０分〜４時間、更
に好ましくは１２０分〜２００分である。ここでｐｏｇ
ｌ＆Ｉ整に用いられる酸としては、上記ρ１１に調整可
能なもので、かつｒｇｃに悪影響を及ぼさないものであ
ればよく、たとえば塩酸などの無機酸、酢酸などの有機
酸があげられる。酸処理時におけるＩｇＧの濃度は、０
．２〜２０ｗ／ｖ％、好ましくは１０〜１８Ｗ／ｖ％で
ある。

この酸処理に際し、ＩｇＧの変性を防ぐためには無機塩
、糖類、蛋白質および有ｉ酸塩から選ばれる化合物の単
独、又は複数を添加することが好ましい。無機塩として
は塩化ナトリウム、塩化カリウムなどのハロゲンとアル
カリ金属との塩など、糖類としてはグルコース、フラク
ト−ス、ンルビトール、マンニット、サッカロースなど
、蛋白質としてはアルブミン、ゼラチンなど、有機酸塩
としてはシュウ酸塩、クエン酸塩（特にこれらイｊ機酸
のナトリウム塩、カリウＪ、塩などのアルカリ金属塩）
等が好適に例示される。その添加量は総量として５〜２
０Ｗ／Ｖ％である。

当該安定化剤は、本発明１ｇＧ製造後もそのまま存在さ
せておくことがＩｇＧの保存安定性の観点から、好まし
い。

かくして得られる酸処理１ｇＧは、医薬品型造の常套手
段に準じて、除菌濾過及び凍結乾燥処理などを行うこと
により、凍結乾燥製剤とすることも可能である。

本発明によって特定条件下に調整された静脈投与可能１
［Ｇは、ＩｇＧ単量体が変性されておらず、またこれを
中性に戻してもＩｇＧ凝集凝集化ずることがないので、
極めて有用なものである。

以下に本発明の実験例と実施例を示す。

実験例１ ５、７　ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ凝集凝集化む水溶液を各種
ｐ＋１に調整し、２８℃で６０分間１ｎｃｕｂａｔｅ後
、Ｎａ０１＋を加え中和した。更にリン酸緩衝液を等量
加え、高速液体クロマトグラフィーによる残存１ｇＧ凝
集型の量およびプラスミン消化の程度を測定した。ここ
で用いた試料溶液中には７Ｓが３８％、二量体が６１％
および１％の重合体が含まれていた。このものを酸処理
すると、ｐＨ３，８の処理において７８のｍがピークに
なった。二量体１ｇＧも処理ｐＨの低下とともに減少し
たが、ρ１１３．８１ｆｆ下での処理では重合体の量が
増加した。

プラスミン消化の程度は、ｐＨ４付近の処理の場合に最
もおそく、重合体の増加する処理領域および二量体が残
存する処理領域では、プラスミンによる消化が早かった
。

以上のことから、本発明の処理によって得られたものは
単量体の含量が多く、中和にすることによってＩｇＧ凝
集凝集化ることがないことが明らかである。

実験例２ １．４＋ｎｇ／ｍｌのＩｇＧ凝ｍ型を含む水溶液（７Ｓ
が３８％、二量体が６１％、重合体が１％）に各種安定
剤を添加し、ｐｌ＋を３．８に調整し、２８℃で６０分
間１ｎｃｕｂａｔｅ後、Ｎａ０ＩＩを加え中和した。そ
の後、ＩｇＧの麻疹抗体価をＨｅｍａｇｇｌｕｔｉ＋＋
＋＋ｌ　ｉｏｎ　１ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ法に
より測定し、国際単位（ＩＵ／１００ｍｇ）で表し、安
定剤の効果をみた。その結果は次の通りである。

：　Ｗ　ｖ％　−」Ｌ唐１ばト価− す　シ　７ アルブミン　：］５　１０ 同上　：　１　ｌＯ ゼラチン　：１０　１Ｏ ＮａＣＩ　：１５　１０ 同上　＝１９ グルコース　、　１５　１０ 同上　：１９ サッカロース８ｔ０　１０ マンニトール：１５　ｔ。

１司」二　：　１　１０ クエン酸Ｎａ：１５　１０ 同」二　：　１　９ ＮａＣ１：５ 十　フルクトース＝５　１０ 実施例１ アルコール分画法で得たヒｌ−１ｇ　Ｇの１５Ｗ／Ｖ％
溶液を、０．１規定塩酸を用いてｐＨ４，０に調整し、
４℃で３時間静置した。その後、０．１規定カセイソー
ダを用いて１１１６．５に修正した。その後、ＮａＣｌ
をＩＯＷ／Ｖ％およびグルコースを５ｗ／ｖ％濃度にな
るように加え、除菌濾過して静注用グロブリンとした。

特許出願人　株式会社　ミドリ十字 手　続　ネＴｉｔ　正　辺：　（自発）１、事件の表示 昭和５８年特許願第２２８６３８号 ２、発明の名称 ＴｇＧ単量体 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏名（名称）　株式会社　ミドリ十字 ４、代理人　■５４１ 住　所　大阪市東区平野町４丁１′−１５３ｆｌｒ地３
ニューライフ平野町４０（５号 電話（０６）　２２７−１１５６ ６、補正の対象 明細書の「特許請求の範囲」の欄 および「発明の詳細な説明」の欄 ７、補正の内容 （１）明細書の「特許請求の範囲１を別紙の通りに訂正
する。

（２）明細書第５頁、第１９行の「酢酸」の次に「、ク
エン酸、シュウ酸」を加入する。

（３）同書第６頁、第６行の１金属との塩」の次に「お
よびリン酸ナトリウム」を加入する。

（４）同書第８頁、第１０行のｒＮａＯｌｌを加え」を
削除する。

（５）同書第８頁、第１７行の「アルブミン：１５」を
「アルブミン；５」に訂正する。

（６）同書第９頁、第５行の「マンニト−ル；１５」を
「マンニトール：５」に訂正する。

（７）同書第９頁、第１０行と第１−１行の間に［アル
ブミン；１ １−　グリシン：２．５　１０Ｊ を加入する。

（８）同書第９頁、節１３行の「０，１規定塩酸」をｒ
Ｏ，ＩＭ酢＃ｉ緩１壷ｉ液（ａｌｌ　３．５　）　Ｊに
訂正する。

（９）間書第９頁、第１４〜１５行の「０．１規定カセ
イソーダ」をｒ１Ｍグリシン緩衝液（ａｌｌ　９．５　
）　Ｊに訂正する。

（１０）同書第９頁、第１５行の「その後、」の次に［
アルブミンを１ｗ／ｖ％、」を加入する。

（工１）同書第９頁、第１６行のｒｊＯｗ／ｖ％」をｒ
　３　ｗ　／　ｖ％」に訂正する。

特許請求の範囲 ＋１．ｌ　ヒ！−１ｇＧの二量体および／またＩＦ　）
重合体を夾雑するヒ）ＴｇＧの０．２〜２Ｑ　ｗ　／　
ｖ％溶液をｐＨ３，７〜４．３で３０分〜２０時間処理
してヒ］・［ｇＧ二量体および重合体を小量体へ解１ｆ
ｉｌｌさ〜Ｕて得られた静脈投与可能なＩｇＧ。

（２）無機塩、糖類、蛋白質及び有機酸塩から選ばれる
少なくとも一種の安定化剤０，５〜２０ｗ／Ｖ％濃度の
存在下に解離されたことを特徴とする特許請求の範囲第
（１１項記載の静脈投与可能な１ｇ０ （３）　無機塩が塩化ナトリウム、リン酸ナトリウムま
たは塩化カリウムであり、ｔｉ７　ｋＢがグルコース、
フラクトース、ザソカロース、ソルビトールまたはマン
ニトールであり、蛋白質がアルブミンまたはゼラチンで
あり、有機酸塩がシュウ酸塩、クエン酸塩であることを
特徴とする特許請求の範囲第（２）項記載の静脈投与可
能なｒｇＧ。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｆｉｌ　ヒトＩｇＧの二量体および／または重合体を夾
   雑するヒト■ｇＧの０．２〜２０ｗ／ｖ％溶液をｐＨ３
   ，７〜４．３で３０分〜２０時間処理してヒト１ｇＧ二
   量体および重合体を単量体へ解離させて得られた静脈投
   与可能なＩｇＧ。 （２）無機塩、糖類、蛋白質及び有機酸塩から選ばれる
   少なくとも一種の安定化剤０．５〜２０Ｗ／■％濃度の
   存在下に解離されたことを特徴とする特許請求の範囲第
   ｆｉ１項記載の静脈投与可能なＩｇＧ０ （３）無機塩が塩化ナトリウムまたは塩化カリウムであ
   り、糖類がグルコース、フラクトース、サッカロース、
   ソルビトールまたはマンニトールであり、蛋白質がアル
   ブミンまたはゼラチンであり、有機酸塩がシュウ酸塩、
   クエン酸塩であることを特徴とする特許請求の範囲第ｉ
   １１項記載の方法。