JPS5946492B2 - 脂質酸化抑制剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はストレプトコツカス属に属する微生物の菌体を
有効成分とする脂質酸化抑制剤に関する３従来、ストレ
プトコッカス属菌とくにストレプトコッカス・フェカリ
ス（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｃａｌ ｉ ｓ）
には整腸作用、ビタミンＢ合成作用等があることが知ら
れ、一般に整腸剤として広く用いられているが（特公昭
３７−４１５０号ストレプトコッカス・フェカリスによ
る強力なる整腸剤製造法；特公昭３７−９２４６号スト
レプトコックス・フェカリス製剤の製造方法；特公昭３
８−１２５５０号整腸剤の製造方法；特公昭３８−２３
０９０号乳酸菌培養液の活性粉末化法）、本菌がヒト及
び動物に対する脂質酸化抑制作用を有することは知られ
ていない。

脂質（過）酸化の抑制を導く抗酸化作用は生体の老化を
抑制するものとして近年注目されている。

すなわち過酸化脂質と疾病とのかかわり合い、生体内の
抗酸化性因子の役割が明らかにされつつある。

従来脂質酸化の抑制作用を有する物質としてはビタミン
Ｅが挙げられているが、この物はその効果を発揮する程
の大量投与を行なう場合、種々の副作用が云われており
、とくに脂質酸化抑制目的の長期大量投与は好ましいも
のとされない。

本発明者等は多年に亘るストレプトコッカス属菌、とく
にストレプトコッカス・フェカリス菌の研究を続けた結
果、本菌が経口的な大量投与により優れた脂質酸化の抑
制効果を有し、しかも見るべき毒性、副作用もないなど
の特性があることを見出した。

尚通常−ストレプトコッカス属菌中にはビタミンＥの蓄
積はなく、仮にあっても無視し得る程度の極く微少量で
あるといわれる。

本発明薬剤は生体構成成分の酸化防止、特に間葉系組織
における本防止作用を通じて血管硬化症や老人性関節症
、皮膚萎縮・弾性低下などの現象を治癒或は防止する効
果を多角的に裏付けている。

すなわち本発明者等は本則が上記の抗酸化作用と併せ、
血管におけるプロリルハイドロキシラーゼ（ｐｒｏｌｙ
ｌ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）活性の抑制、軟骨組織の
Ｂ型コンドロイチン硫酸やケラト硫酸の増加抑制そして
上皮組織では肝細胞核の大小不同性の発現が抑制される
ことを観察しており、本則の抗酸化作用或はそれから派
生した機序を通じて老人性の病気の治療・予防に効果を
示すものと考えられる。

本発明はこのような知見により完成したものである。

すなわち本発明はストレプトコッカス・フェカリス菌を
有効成分とする脂質酸化抑制剤を提供するものである。

本発明で用いるストレプトコッカス・フェカリスとして
は抗脂質酸化作用を有するものであればよく、例えば本
出願人が先に喘息治療剤として出願（特願昭５４−０２
８６１８号、喘息治療剤）した際に用いたと同じ菌株で
あるストレプトコッカス・フェカリスＴＨ−００１株を
挙げることができる。

本菌株はストレプトコッカス・フェカリスＴＨ−００１
株（微工研菌寄第４８６１号）として工業技術院微生物
工業技術研究所に保管されているが、その主たる菌学的
性質は次の通りである。

ａ）形態的性質 （１）形 態 連鎖状球菌大きさ
０．５〜１．０ （１，２）μ（２）粗性
なし く３）ダラム染色性 十 ｂ）培養的性質 （１） 発育条件 通性嫌気性 。

（２）発育温度 １０℃ 十 ４５℃ ＋ （３）オキシダーゼテスト − （４）カタラーゼテスト − （５）６．５％ＮａＣ１＋ （６） ｐＨ９，６＋ （７）６０℃、３０分耐熱性 十 （８）リドマスミルク還元 十 （９） ０．１％メチレンブルー 十α０） ０
．０２膣化ナトリウム ＋αυ ゼラチン液化
− Ｃ）糖分解性 （１）ＯＦ テスト Ｆ （２）アラビノース − トレハロース ＋グルコ
ース ＋ セロビオース ＋フラクトース ＋
メリビオース −ガラクトース ＋ マンニッ
ト −マンノース ＋ ソルビット −シュ
ークロース ＋ ザ゛リシン ＋マルトー
ス ＋ エスクリン ＋ラクトース ＋ ｄ）溶血性 （１）馬面寒天 γ （２）羊血寒天 γ 以上の菌学的性質をもとにして、バージ−のマニュアル
・オブ・デイタミネイティブ・バタテリオロジー（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’ｓ ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍ−ｉ
ｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第７版およ
び第８版ならびに「乳酸菌の研究」（北原覚雄著）によ
り検索した結果、ストレプトコッカス・フェカリスに該
当することが認められた。

ストレプトコッカス・フェカリスはいわゆる病原菌では
なく、生菌体をそのまま有効成分として利用することが
できるが、必要に応じて加熱処理した死菌体、凍結乾燥
菌体などを有効成分として利用することができる。

就中、取扱い便宜を考慮すれば凍結乾燥菌体として用い
るのが好ましい。

更に本発明の脂質酸化抑制剤には賦型肌安定剤など常用
の添加物を適宜加えることができる。

本則の形態はとくに制限がなく、例えば懸濁液、粒状体
、粉状体、錠剤或いはカプセル剤等の形態として用いる
ことができる。

また本則の投与方法も任意であり、例えば経口投与、腹
腔内投与、静脈注射などの方法により投与することがで
きる。

本則が凍結乾燥菌を用いラット（平均体重３００ ｒ）
を対象とした場合に脂質酸化抑制効果を発揮する最少用
量は経口で約２０即／に９以二安定的に効果を生ずる上
では通常約１００り／）ｃｙ以以上ある。

而してヒトへの有効な投与もダラム単位の大量投−与が
予定される。

本発明脂質酸化抑制剤の特性を挙げれば以下の通りであ
る。

（１）本則は大量投与により優れた脂質酸化抑制効果を
有する。

すなわち後述する如くラットを用いての試験の結果対照
群に比較して凍結乾燥菌の経口投与約２ｏｙｎｙ／ｋｇ
以上では明らかな脂質酸化抑制効果が観察された。

更に本則による血管におけるプロリルハイドロキシラー
ゼ活性の抑制、軟骨組織のＢ型コンドロイチン硫酸やケ
ラト硫酸の増加抑制及び上皮組織での肝細胞核の大小不
同性の発現抑制を観察している事と相まって本則がヒト
の血管硬化症、老人性関節症。

皮膚萎縮・弾性低下などの現象、肥満症、慢性中毒症の
治癒或は防止剤として広汎な用途に供する事が可能であ
る。

（２）本発明薬剤は微生物菌体そのものを主成分として
いるが、本発明に用いる菌は非病原性菌である。

従って感染等の恐れがまったくなく、生菌を用いても支
障ない。

（３）本発明薬剤は実験的に見るべき毒性はなく、また
ヒトに投与してもとくに副作用がなく安全性はきわめて
高い（特願昭５４−０２８６１８号参照）。

（４） 従来脂質酸化抑制作用を有するとされるビタ
ミンＥはこれをヒトが欠乏している場合に補給的意味合
いで投与されるもので正常人に投与する意義はないが、
水剤は正常人であると否とに拘らずこれを積極的に投与
する意義がある。

（５）本発明の製剤はその高い薬効と安全性の故に大量
経口投与が可能である。

次に本発明を実施例により詳しく説明する。

実施例 １ ストレプトコッカス、フェカリスＴＨ−００１株（微工
研菌寄第４８６１号）をブドウ糖１％、酵母末１％、ペ
プトン１．０％の培地１５０ｔに本菌を接種し、室温に
て１８〜２０時間培養する。

培養菌体を遠心分離し集め、滅菌生理的食塩水にて十分
洗浄後、凍結乾燥処理して凍結乾燥粉末を得た。

実験には凍結乾燥粉末５％含有の固型飼料と水道水を自
由に摂取させた。

前記ストレプトコッカス・フェカリス含有固型飼料の投
与はウィスター系ラット（１群５匹）をヨ使用し、無投
与群は市販固型飼料を使用し、２７ケ月間飼育後測定を
行った。

過酸化脂質の定量は八木国夫（ビタミン４９巻１９７５
ｐ４０３）の測定法に従い行った。

１、１０％臓器ホモシネ−）０．５７ｄに生理的食塩水
１．ＯＭを加える。

２、遠心分離（４０００ｒＪ）ＩＩ、１０分間）後、上
溝０、５ ＷＬｌをとり、これにＮ／１２Ｈ２Ｓ０４４
．０１１Ｌｌを加え軽く撹拌する。

３、１０％リンタングステン酸０．５ｍＡ！を加えて撹
拌し、５分間室温放置後４０００ｒｐ１１０分間遠心分
離する。

４、沈澱物にＮ／１２Ｈ２ＳＯ４２，Ｏｍｌと１０％リ
ンタングステン酸０．３ ｍＪを加え懸濁し、４０００
甲、１０分間遠心分離し沈澱物を得る。

５、沈澱物に水４．０ｍｌを加えて十分懸濁し、１％Ｔ
ＤＡ試薬１．０Ｍを加え９５℃温湯中で６０分間加熱す
る。

６、冷却後、ｎ−ブタノール５． ＯｒＩＬｌを添加し
よく振とう抽出する。

７、 ４０００ｒｌ）１１！５分間遠心分離後ｎ−ブタ
ノール層について励起波長５１５ｎｍ、螢光波長５５３
ｎｍにて螢光強度を測定する。

８、過酸化脂質の濃度（ＬＰ）をマロンアルデヒド濃度
ｎｍｏｌ／ｍｌで計算した。

第２表から明らかな様に本物質、ストレプトコッカス・
フェカリスＴＨ−００１凍結乾燥粉末投４群は無投与群
に比べ肝臓では８７．７％、脳８９．３係、血清８１．
４％と約１０〜１８％の過酸化脂質の低値が測定され本
物質による脂質の抗酸化作用が確認された。

この抗脂質酸化作用を通じて血管硬化症や老人性関節、
・症、皮膚萎縮・弾性低下などの現象を治療又は防止す
る効果を多角的に証明した。

実施例 ２ 血管末におけるプロリルハイドロキシラーゼ活性の抑制
効果実験には高血圧♀ラット（ＳＨＲ）２群（１０匹）
とウィスター系ラット１群（５のを用い、本物質投与は
実施例１に用いた５％含有飼料を用いた。

測定法は通常の放射線免疫検査法により行った。

結果は下記第２表のとおりである。第２表から明らかな
様に高血圧ラットに本物質を投与した場合には明らかに
プロリルハイドロキシラーゼ活性の抑制効果が認められ
た。

実施例 ３ 本物質が各臓器組織の中、軟骨系にいかに作用している
のかを軟骨基質のコンドロイチン硫酸のトタイプにより
検討した。

実験法は１群（５匹）のウィスター系♀ラットに凍結乾
燥粉末ＴＨ−００１を５％、１．５％、１％、０．２％
、θ％濃度含有固型飼料を２４ケ月間投与し、剣状突起
の硝子様軟骨を用いてコンドロイチン硫酸のタイプが検
討された結果は第３表のとおりである。

従来の文献によれば幼若及成体ラットでのコンドロイチ
ン硫酸のタイプはＡかＣであるのに対し老齢期のラット
（２０ケ月飼育以上）ではＡ、Ｃの他にＢタイプ及びケ
ラト硫酸の産生が顕著となり顕微鏡観察では石灰化を伴
う繊維化が著量である。

第３表から分る通り、本物質無投与群２４ケ月間飼育で
は剣状突起軟骨では明白な石灰化を伴っており、軟骨細
胞表面にはコンドロイチン硫酸タイプＢが強く認められ
た。

反面本物質投与群では軟骨細胞表面のコンドロイチン硫
酸タイプＢは投与量の増加に伴い減少し、０．１％濃度
以上での軟骨細胞表面でのコンドロイチン硫酸タイプＢ
の分布は僅かで、それＣｔ幼若ラットの軟骨組織に認め
られるものであった。

以上のことから本物質を継続的に投与された群では異種
タイプのＢ又はケラト硫酸の産生率がかなり抑えられて
いるとの結論を得た。

実施例 ４ 実験開始特約１５０１のウィスター系ラット♂♀の体重
は２４ケ月終了時第４表に示す様な結果を示した。

第４表から明らかな様に本物質投与群は無投与群に比べ
体重の増加が認められ、老齢型の無投与群に比し健常型
（成体型）であった。

実施例 ５ 病理組織学的検査及び主観的観察が本物質投与群、及び
無投与群について実施例１〜５に用いられたラットにお
いて行われた。

その結果は第５表に示す。

実施例 ６ 雌雄マウスおよび雌雄ラットを用いて本則の急性毒性試
験（ＬＤ５０値）、亜急性（３ケ月）および慢性（６ケ
月、２４ケ月）毒性試験を行なった使用菌株、菌体処理
等は実施例１と同様である。

その結果を以下に示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ストレプトコッカス・フェカリス菌を有効成分とす
   ることを特徴とする脂質酸化抑制剤。 ２ ストレプトコッカス・フェカリス菌がストレプトコ
   ッカス・フェカリスＴＨ−００１株（微工研菌寄第４８
   ６１号）である特許請求の範囲第１項に記載の脂質酸化
   抑制剤。