JPS59231061A

JPS59231061A - アミノ酸誘導体及びその製造方法

Info

Publication number: JPS59231061A
Application number: JP59098864A
Authority: JP
Inventors: デビツド・ロバ−ト・ボリン
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1983-05-20
Filing date: 1984-05-18
Publication date: 1984-12-25
Also published as: EP0129075A2; EP0129075A3

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明はアミノ酸誘導体及びその製造に関する。

災に詳細には、本発明は実質的１００％純粋型における
Ｎ　　−（ウレタンタイプ）　−保護されたアミノ酸及
びその製造方法に関する。

次の反応式％式％式中、Ｒ′はα−アミノ酸側鎖であり、そしてＲ２はアルキルまたはアラルキルである、に従りて製造
される多くのＮ　−（ウレタンタイプ）　−保護された
アミノ酸は式％式％）式中、２は２または３である、の対応するジー及びトリペプチドのかなりの量（２〜５
％及びこれ以上）で汚染されていることが認められてい
る。

一般に上記の反応は生じるＥＣ１を中和するために無機
塩基（例えば戻酸ナトリウム、酸化マグネシウム等）を
用いて水性／イ＝＋＊性溶４中で行われる（Ｓｃｈｏｔ
ｔｅｎ−Ｂａｗｍａｎｎ）。この反応中に、カルボキシ
ル基が金属陽イオンＲ”−０ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ（ＲＩ　
）−ＣＯＪ’Ｍ■ｈ　つり　＠　イ、；６Ｅ　、Ｌ：　
ｎＰｃ　カ）Ｌ’　？キシレート陰イオンとしてさらさ
れており、この化合物は試薬Ｒ２−０ＣＯＣＩの第二の
分子と反応して一般式Ｒ”−０ＣＯ−ＮＨ−Ｃ１ｌ　（
Ｒ１）−ＣＯＯＣＯＯＲ”の反応性混住無水物を生成す
る。

この中間体は第二のアミノ酸分子と反応して弐Ｒ”−ｏ
ｃｏ−αＨ−ＣＭ（Ｒ・）　−ＣＯ）　、−０°Ｍ■の
Ｎ　−ブロックされた（　ｂｌｏｃｋｅｄ　）ジペプチ
ドを生成し得る。

上記の反応順序をくり返し行った際、減少的に夕景の高
級同族体（トリペプチド類、テトラペグチド類、等）が
つくられる。

これらの汚染されるペプチドの量はアシル化剤のタイプ
、塩基及び溶媒並びに温度及びｐＨを含めた種々な因子
に依存する。汚染を最少に減じるための努力がなされた
が、汚染を除くことはこれまで不可能であった。

望ましくない副反応を防止するために、カルボキシル基
を好１しくは不安定なエステルとしてブロックしなけれ
ばならない。トリメチルシリル（１“ｍｓ）エステルは
、容易に生成し、そして容易にカルボン酸に通論水分解
されることが知られている。パルｏス（Ｅａｒｌｏｓ）
等、Ｊ、ｏｒｇ＋Ｃｈｇｍ、４’ｌ、１３２４（ｉ９８
２）　、はとの事実をＮ−ト＋）チルアミノ酸の高収率
合成に利用している。スミヌウィク（ＳｍｉｔＳｍｌｔ
ｈ　）等、Ｊ。

ＯｒＱ、Ｃｈｇｍ、３９，３４４１　　（１９７４）　
、は従来公知の方法によれば低収率でのみ得ることがα
　　　Ｇ、ＧできるＮ、Ｎ−トリペンゾイルオキシヵルゲニルーＬ−
アルギニンを製造するために一時的なＴｍｓ保捗を期待
していた。

本質的に１ｏｏ％純粋なアミノ末端保ｉ☆されたアミノ
酸の製造方法は（ａ）　　アミノ酸を有機溶媒及び有イ幾塩基の存在下
においてトリメチルンリルクロライドと反応させ、（ｂ
）得られるトリメチルシリルエステルをアミン末端アシ
ル化剤と反応させてＮ　−（ウレタンタイプ）−保議さ
れたアミノ阪トリメチルシリルエステルを生成させ、そ
して（ｃ）　　Ｎ　　−保譲されたアミノ酸トリメチルシリ
ルエステルを加水分解し、これによって本質的に１００
％純粋なアミノ−末端保穫されたアミノ酸を生成させる
ことからなる。

この方法は完全で、速かで且つセＩＩ々な側鎖の保護官
能基に適用可能である。全ての普通のアミノ酸のＮ−（
９−フルオレニルメトキシカルボニル）　（Ｆ　　）誘
導体が、一般に〉９５チ収率及びＯＣベグチド不純物が検出されることなく、この方法て合成
される。またこの方法は数種の他のウレタンタイプのブ
ロッキング基列えばｔ　ｇ　ｒ　ｔ、−グトキシカルｙ
＋？ニル（Ｈｏｃ）、カルボベンズオキシ（Ｚ）及Ｕ２
．２．２−　トリクロローエトキシヵｋｄ？ニル（Ｔｒ
ｏｃ）に用いて同等にすぐれた結果が得られる。

市販のまたは公知の方法に従って実験案（ｈｏ、ｗｓｅ
）で製造した数株のＦｍｏｃ−アミノ酸の試験は対応す
るジペプチド誘導体でかな逆汚染されていることを示す
が（第１表参照）、一方、本方法に従ってＭ造したＦｍ
、ｏ　ｃ−７ミツ酸ｔｒｉ　ｔ　ｏ　ｏ　％Ｎ粋−ｒす
る（第■表参照ン。

≧　　　ｅ　　　智　　　−ａ　　　　Ｏ−９本発明の
方法に面い、好まＬ　＜　＋ｆよＬ−立体１・４保（ｔ
であるアミノ酸を、有機塩基σ）例とし、てジイソプロ
ピルエチルアミン（１）ＩＰＥΔ）の存在下において塩
化メチレン中でＴｍ−Ｃｔの２当諸−ど反応さする。ｌ
；ｔ　１ｒ、’：、性１１１１　部の官能基が存在する
場合、例えばセリンにおける４合、３当州“ヲ用いる。

Ｉｆ２Ｎ−ＣＢ　　（ノイ’ｒ−ｃｏｏ）４　　＋　　
　２　　（＃、ＩＺ°）　　ｓ　ＳｉＣ’１ｃｎ２ｃｔ
。

ＤＩｐＥＡｔＨ３Ｃ）　　３Ｓｉ−ＩＶＩｉ−ＣＭ　　（）＜’　
　）　　−Ｃ’００Ｓｉ　　（Ｃ１ｉ、）ｓ次にトリメ
チルシリル（ｔｊされた中間体全アミン末端アシル化剤
例えばＰ’ｍｏ　ｃ、　Ｂｏ　ｃ、　ＺまたはＴｒｏｃ
　　ｇＱ体、好寸しくけクロライドと反応させ、対応す
るＮ−（ウレタンタイプ）　−保議されたアミノ酸トリ
メチルシリルエステル例えばは加水分解した際、商収率
で且つ対応するり−及びトリペプチド誘導体を含まずに
、Ｎ−（ウレタンタイプ）−保護されたアミノ酸例えば
ＦｍｏＣアミノ酸を生じる。

実質的に１００％純粋がＦｍｏｃアミノ酸を製造するた
めに次の一般的な玉梓（ｐｒｏｔｏａｏｌｌ　）を用い
ることがでさ、一方、以下の笑施例は不発明を更に叱明
するものである。高純度のアミノ酸誘導体は特に自動化
されたペプチド合成に対する試県として有用である。

容量２５０　ｍｅの丸底フラスコ中の細かく粉砕したア
ミンｐｓｒ、５ミリ、モルを蒸留した乾燥塩化メチレン
８７．５　ｍｅに窒素下で懸濁させ、はげしく攪拌する
。Ｔｍ５−Ｃｌ　　９．５２　ｍＡ　（７５ミリモル）
を一度に加える。この混合物を１時間娯流させ、水浴中
で冷却する。ＤＩｐＥＡ　Ｆｍｏｃ−Ｃ１ｌ　Ｌ３ｍｌ
（１００ミＩＪモル）を注意して一度に加え、この溶液
を水中で２０分間攪拌し、室温に１〜１．５時間加温す
る。混合物を濃縮し、次にジエチルエーテル２０〇−及
び２５％重炭酸ナトリウム２５０ゴ聞に分配する。相を
分離し、水層をジエチルエーテル２　Ｘ　５０　ｍ７！
で抽出する。エーテル層をＥ、Ｏ２Ｘ２５ｍ１で逆洗浄
する。合液した水層を１．０　ＮＭＣＩでｐＨ４ｉ［２
の酸性にし、酢酸エチル３×７５ｍ１で抽出する。南機
層を傭、酸ナトリウム上で乾燥し、−縮して油にし、ア
セトニトリル２Ｘ３０ｍと共に共佛的に乾燥する。凸真
依Ｆでこの油は固化し、適当な溶媒を用いて生成物を再
結晶させることができる。

実施例ｔ　ｅ　ｒ　ｔ、−ブトキシカルボニル−Ｌ−ｒラニン
Ｌ−アラニン（２，，６７ｙ１３０ミリモル）を塩化メ
チレン８フ、５机に懸ＩＡさせた。Ｔｍ５−Ｃ１（１０
，７８ｍ／！、　　８５ミリモル）を加え、この７昆合
物を１．５時間還流させた。浜、金物を０℃に冷却した
。ＤＩＰＥＡ　　（１１，３ｍｌ、　　１００ミリモル
）を加工、次いでジーｔａｒｔ、−ブチルージカルボネ
ート（５，４６ｆ／、２５ミリモル）を加えた。この混
合ｔＶ／Ｊｆ：２０分間攪拌し、次に゛室温に２時間加
温した。

癖媒を蒸発させ、残渣を２５％重炭酸ナトリウム５０ｄ
及びジエチルエーテル５０ｍ１！Ｔｏ’ｌに分配させた
。水ｊ會を分離し、エーテル２　Ｘ　３０　ｍｅで洗浄
し、クエン酸宕液でｐＨＨ２Ｏ酸性にした。この混合物
を塩化ナトリウムで飽和させ、ｊ塩化メチレン３Ｘ　４
０　ｍｌで抽出した。＠放した有機層を注意してＨｅ　
０２　ｘ　１　ｍｉ！で洗浄し、そして乾燥した。′ａ
縮して白色の固体３．６ＦＢ６Ｕ　を得た。

アミノ酸分析はアミノ末嬬保Ｈ１フされたＡｌａ−Ａｌ
ａまたはＡｌａ−Ａｌａ−Ａｌａケ示さなかった。

実施例２Ｎ−カルボベンズオキシ−Ｌ−チアゾリジン−４−カル
ボン酸Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸３．３３２（２ａｏ
ミリモル）を乾燥塩化メチレン７５ｄＫ懸濁させた。Ｔ
ｍ５−Ｃ１６，３５ｍｌ！　（５０，０ミ！Ｊ−Ｆ−ル
）を加えた。この混合物をはげしく攪拌しながら１時間
還流させ、次に水浴中で０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ　（
１１，Ｏば、９７．２ミリモル）を徐々に加えた。添加
終了後、カルがベンズオキシクロライド５．５Ｏｆ’（
３２，２ミリモル）を加えた。この混合物を０℃で３０
分間、次に室温で１．５時間攪拌した。溶媒を蒸発させ
、残った油状の固体を２５％重炭酸ナトリウムｌ　ＯＯ
ｍｌ及Ｕ　”エチルニーデル５０耐に分配させた。水層
を分離し、エーテル２×３０ｍ１”’Ｃ抽出し、１．Ｏ
Ｎ　　ＪＩＣｌｒ：ｐＨＨ２Ｏ酸性にした。酢酸エチル
３Ｘ５０１ｎ７！で抽出し、乾燥し、そして濃縮し、透
明な油６．０ｆ（９０％）が得られ、どのものはＨＰＬ
Ｃによれば均質であった。

実施例３２　、２　＋　２−　）　’Ｊクロロエトキシカルボニ
ルーＬ塩化メチレン８７．５　ｍｌ中のＬ−フェニルア
ラニン４゜９６Ｆ（３０ミリモル）及びＴｒｎ、５−Ｃ
１７，６１Ｔｎｇ（６０ミリモル）を１５時間イ流させ
た。この混合物＞０℃に冷却した。トリクロロエチルク
ロロホルメート５．３０！　（２５ミリモル）及びＤ　
Ｉ　　Ｐ　Ｅ　Ａ　　９．　６　１　　ｒ＋１！　　（
８５ミ　リ　・、　ル）　を刀１１えた。

攪拌を０℃で２０分「…、？ＫＶこ室温で２１左但続け
た。

溶媒を蒸発させ、残渣を２５ｖ５重炭酸す）　ＩＪウム
に溶解した。水性混合物をジエチルエーテルで２回抽出
ｊ、、ＩＮ　　ＢＣｌでｐＨｌｉｄ、　４　（７）　１
９２性ｆ、シ、酢酸エチルで３回抽出した。合液した酢
硲エチル層を乾燥し、濃縮し、白色固体８．１４（９５
ｑｂ）を得た。エーテル／石油エーテルから再結晶させ
、融点１２９．５〜１３１　’Ｃの小さな針状晶を得た
。

アミノ酸分析はアミノ末端保護されたｐｈｅ−ｐｈａま
たはＰｈｅ−Ｐｈｇ−Ｐｈｇ　を示さなかった。

ｌ出Ｍ人　　エフ・ホフマン・う・ロシュ・ラント・コ
ンパニー・アクチェンガゼルシャフト

Claims

【特許請求の範囲】１、　実質的に１００チ紳枠なＮ　　−９−フルオレニ
ルメトキシカルボニル−アミノ酸。２、　アミノ酸がグリシン、アラニン、フェニルアラニ
ン、バリン、プロリン、グルミン、メチオニン、トリプ
トファン、アスパラギン酸、ロイシン、イソロイシン、
グルタミン能、リジン、セリ／、アスノぐラギン、シス
ティン及びス１／オニンからなる群よ！７選ばれるギｒ
許梢求の範囲第１項記載の化合物。３、　アミノ酸がＬ−立体１白トＩ′である特許請求の
範囲第１項または第２１ｆｉ　Ｍｅ　’ｎｏｒの化合物
。４、　　（ａ）アミノ酸を１憬溶媒及び有機塩基の存在
″［においてトリメチルシリルクロジイドと反応させ；（ｂ）得られるトリメチルシリルエステルをアミン末端
アシル化剤と反応させてＮ−（ウレタンタイプ）−保護
さ・れたアミノ１ｆトリメチルシリルエステルを生成さ
せ、そして（Ｃ）　　Ｎ　　−保護されたアミノ酸トリメチルンリ
ルエステルを加水分解し、これによって本質的に１００
％純粋なアミノ−末端保−されたアミノ酸を生成させること全特徴とする本質的に１ＯＯｑ６純粋なアミノ−末
端保護されたアミノ酸の製造方法。５、　アミノ酸がグリシン、アラニン、フェニルアラニ
ン、バリン、プロリン、グルタミン、メチオニン、トリ
ブトファン、アス・ぐラギン酸、ロイシン、インロイシ
ン、グルタミン酸、リジン、セリン、アスパラギン、シ
スティン及びスレオニンからなる群より選ばれる特許請
求の範囲第４項記載の方法。６．　アミノ酸がＬ−立体配置である特許請求の範囲第
４項記載の方法。７、有＠溶媒が塩化メチレンである特許請求の範囲第４
項記載の方法。８、壱機塩基がジイソプロピルエチルアミンである特許
請求の範囲第４項記載の方法。９、　アミノ末端アシル化剤が９−フルオレニルメトキ
シカルボニル、ｔｔＪｒｔ、−ブトキシカルボニル、カ
ルボベンズオキシまたｆ′ｉ２，２．２−）リクロロエ
トキシカルビニル化合物である特許請求の範囲第４項記
載の方法。１０、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル化合物
が９−フルオレニルメトキシカルボニルクロライドであ
る特許請求の範囲第９項記載の方法。１１、　　アミノ酸を少なくとも２モル当量のトリメチ
ルシリルクロライドと反応させる特許請求の範囲第４項
記敏の方法。１２、　＃−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニ
ル）ブロッキング基によるアミノ酸トリメチルシリルエ
ステル。１３、アミノ酸がグリシン、アラニン、フェニルアラニ
ン、バリン、プ、ロリン、グルタミン、メチオニン、ト
リプトファン、アスパラギン酸、ロイシン、インロイシ
ン、グルタミン酸、リジン、セリン、アスパラギン、シ
スティン及びスレオニンからなる肝より選ばれる将Ｋ［
請求の範囲第１２項記載の化合物。１４、アミノ酸がＬ−立体配置である特許請求の範囲第
１２項または１３項記載の化θ物。