JPS5857392A - 新規な抗生物質ｏａ−６１２９のリン酸エステル - Google Patents
新規な抗生物質ｏａ−６１２９のリン酸エステルInfo
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- JPS5857392A JPS5857392A JP56156133A JP15613381A JPS5857392A JP S5857392 A JPS5857392 A JP S5857392A JP 56156133 A JP56156133 A JP 56156133A JP 15613381 A JP15613381 A JP 15613381A JP S5857392 A JPS5857392 A JP S5857392A
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- C07D477/10—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
- C07D477/12—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached in position 6
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な抗生物質に関し、さらに詳しくは、下記
式 ルホニルオキシ基を表わす。
式 ルホニルオキシ基を表わす。
で示される化合物及びそれらの塩、並びに該化合物の製
造方法に関する。
造方法に関する。
で示される７−オキノー１−アザビシクロ〔３・２・０
〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格を有する抗生
物質は、一般に高い抗菌力とβ−ラクタマーゼ阻害活性
を有しており、従来がら２発酵法、半合成法、全合成法
により各種の７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・
０）ヘプト−２−エン−２−カルボン酸誘導体が製造さ
れている〔例えば、チェナマイシン（ジャーナル・オン
・アンティビオティクス、３２巻（１９７９年）。
〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格を有する抗生
物質は、一般に高い抗菌力とβ−ラクタマーゼ阻害活性
を有しており、従来がら２発酵法、半合成法、全合成法
により各種の７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・
０）ヘプト−２−エン−２−カルボン酸誘導体が製造さ
れている〔例えば、チェナマイシン（ジャーナル・オン
・アンティビオティクス、３２巻（１９７９年）。
１〜１２頁）、エピチェナマイシン類（第１７回インタ
ーサイエンス・コンファランス・オン・アンテイミクロ
ビアル・エイインノ・アンド・ケモテラビー、要旨第８
０および第８１号（１９７７年））、Ｎ−アセチルチェ
ナマイシン（西ドイツ特許２６５２６８１号（１９７７
年））、オリバニン酸類（ジャーナル・オン・アンティ
ビオティクス、３２巻（１９７９年）、２８７〜３０４
頁）。
ーサイエンス・コンファランス・オン・アンテイミクロ
ビアル・エイインノ・アンド・ケモテラビー、要旨第８
０および第８１号（１９７７年））、Ｎ−アセチルチェ
ナマイシン（西ドイツ特許２６５２６８１号（１９７７
年））、オリバニン酸類（ジャーナル・オン・アンティ
ビオティクス、３２巻（１９７９年）、２８７〜３０４
頁）。
ＰＳ−５（ジャーナル・オン・アンティビオティクス、
３２巻（１９７９年）、２６２〜２８６頁）。
３２巻（１９７９年）、２６２〜２８６頁）。
ＰＳ−６（公開特許公報昭５４−５９２９５号）。
ｐｓ−７（公開特許公報昭５４−９２９８３号）など〕
。
。
さらに２本発明者の一部は、ストレプトミセス０Ａ−６
１２９菌株が下記式 式中、ＩＬは水素原子、水酸基又はヒドロキシスルホニ
ルオキシ基を表わす。
１２９菌株が下記式 式中、ＩＬは水素原子、水酸基又はヒドロキシスルホニ
ルオキシ基を表わす。
で示されるように７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格の３位
にバンチチイニル基を有し且つ６位にエチル基１−ヒド
ロキシルエチル基又１ｄｌ−ヒドロキシスルホニルオキ
シエチル基を有して゛いる点に構造的特徴を有する従来
の文献に未載の新規な抗生物質な産生ずることを見い出
し、これらを抗生物質０Ａ−６１２９Ａ、Ｂ及びＣと命
名して先に特許出願した（特願昭５５−１３５８２９号
。
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格の３位
にバンチチイニル基を有し且つ６位にエチル基１−ヒド
ロキシルエチル基又１ｄｌ−ヒドロキシスルホニルオキ
シエチル基を有して゛いる点に構造的特徴を有する従来
の文献に未載の新規な抗生物質な産生ずることを見い出
し、これらを抗生物質０Ａ−６１２９Ａ、Ｂ及びＣと命
名して先に特許出願した（特願昭５５−１３５８２９号
。
同昭５５−１４４５０７号及び開閉５５−１７０８６４
号出願明細書参照）。
号出願明細書参照）。
本発明により提供される前記式（１）の化合物は。
上記抗生物質ｏＡ−６１２９Ａ、Ｂ及びＣ（以丁。
総称して［抗生物質０Ａ−６１２９Ｊという）の−級水
酸基がリン酸エステルになっている点に構造的特徴を有
する新規な抗生物質である、。以ｒこれらの抗生物質の
うち、６位にエチル基を有する化合物を［抗生物質０Ａ
−６１２９Ａ−リン酸エステル」。
酸基がリン酸エステルになっている点に構造的特徴を有
する新規な抗生物質である、。以ｒこれらの抗生物質の
うち、６位にエチル基を有する化合物を［抗生物質０Ａ
−６１２９Ａ−リン酸エステル」。
ｌ−ヒドロキンエチル基を有する化合物を１−抗生／
物質０Ａ−６１２９Ｂ −リン酸エステル」、並びに１
−ヒドロキシスルホニルオキシエチル基（ＣＨＫΦ Ｃ−リン酸エステル」と略称する。
−ヒドロキシスルホニルオキシエチル基（ＣＨＫΦ Ｃ−リン酸エステル」と略称する。
また、これらのリン酸エステルを１抗生物質０Ａ−６１
２９のリン酸エステル」と総称する。
２９のリン酸エステル」と総称する。
式（１）の新規抗生物質０Ａ−６１２９のリン酸エステ
ルは、従来提案さ、れている同じ基本骨格をもつ抗生物
質に比較して安定である点でユニークであり、しかも上
記の公知文献に記載されていると同様に１強い抗因力及
びβ−ラクタマーゼ阻害活性を有すると共に、β−ラク
タマーゼ生産菌に対するペニシリン系、セファロスポリ
ン系等の抗菌性物質の抗−力を相乗的に増強する能力を
も併せ荷しており、抗菌剤として有用である。
ルは、従来提案さ、れている同じ基本骨格をもつ抗生物
質に比較して安定である点でユニークであり、しかも上
記の公知文献に記載されていると同様に１強い抗因力及
びβ−ラクタマーゼ阻害活性を有すると共に、β−ラク
タマーゼ生産菌に対するペニシリン系、セファロスポリ
ン系等の抗菌性物質の抗−力を相乗的に増強する能力を
も併せ荷しており、抗菌剤として有用である。
式（Ｊ）の化合物は、２−位のカルボキシル基及び／又
はリン酸基の塩の形態をとることもでき、かかる塩の例
としては２例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム
塩の如きアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム
塩の如きアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩の如きそ
の他の金属塩；アンモニウム塩；モノエチルアミン、ジ
メチルアミン、トリメチルアミン、モノエタノールアミ
ン。
はリン酸基の塩の形態をとることもでき、かかる塩の例
としては２例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム
塩の如きアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム
塩の如きアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩の如きそ
の他の金属塩；アンモニウム塩；モノエチルアミン、ジ
メチルアミン、トリメチルアミン、モノエタノールアミ
ン。
ジェタノールアミンの如き第一級、第二級又は第三級ア
ミンによる塩；ベンザチン塩、プロ力イン塩などの有機
塩基による塩９等が含まれ、中でも製薬学的に許容しう
る塩が好ましく、特に、ナトリウム塩、カリウム塩など
のアルカリ金属塩が好適である。
ミンによる塩；ベンザチン塩、プロ力イン塩などの有機
塩基による塩９等が含まれ、中でも製薬学的に許容しう
る塩が好ましく、特に、ナトリウム塩、カリウム塩など
のアルカリ金属塩が好適である。
本発明に従えば、前記式（１）の抗生物質０Ａ−６１２
９のリン酸エステルは１式（ＩＩ）で示される抗生物質
０Ａ−６１２９Ａ、ＢまたはＣを基質とした通常の酵素
反応乗件下に、ＡＴＰ（アデノシン−５７−ドリリン酸
）の共存丁でパントチ／酸をリン酸化し得る微生物の培
養菌体又は該一体の処理物で反応させることにより製造
することができる。
９のリン酸エステルは１式（ＩＩ）で示される抗生物質
０Ａ−６１２９Ａ、ＢまたはＣを基質とした通常の酵素
反応乗件下に、ＡＴＰ（アデノシン−５７−ドリリン酸
）の共存丁でパントチ／酸をリン酸化し得る微生物の培
養菌体又は該一体の処理物で反応させることにより製造
することができる。
本発明で使用する培養菌体又は該一体の処理物は、前述
した式（ハ）の化合物の一級水酸基をリン酸化し、６位
の置換基が対応する式（１）の化合物な生産する能力を
有するものである限り、どのような属に属する微生物の
菌体又は国体処理物でも使用できるが、不発明の目的に
適する国体又は菌体処理物は、一般にパントテン酸をリ
ン酸化し得るもの（例えば、 Ａｇｒｉｃａｌｔｕａｌ
ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍ−ｉｓｔ
ｒｙ ｖｏｌ、 ３６ 、 ８４〜９２頁（１９７２
）に記載の菌株）を挙げることができるが、その甲で、
ブレビバクテリウム塾アンモニアゲネス ＡＴＣＣ６８
７１の培養菌体の洗浄したものが有利に用いられる。
した式（ハ）の化合物の一級水酸基をリン酸化し、６位
の置換基が対応する式（１）の化合物な生産する能力を
有するものである限り、どのような属に属する微生物の
菌体又は国体処理物でも使用できるが、不発明の目的に
適する国体又は菌体処理物は、一般にパントテン酸をリ
ン酸化し得るもの（例えば、 Ａｇｒｉｃａｌｔｕａｌ
ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍ−ｉｓｔ
ｒｙ ｖｏｌ、 ３６ 、 ８４〜９２頁（１９７２
）に記載の菌株）を挙げることができるが、その甲で、
ブレビバクテリウム塾アンモニアゲネス ＡＴＣＣ６８
７１の培養菌体の洗浄したものが有利に用いられる。
該菌体を用いた酵素反応は、ｐＨ６〜８，５の緩衝液に
リン酸供与体としてＡＴＰを添加し、上記菌体を懸濁し
た溶液を調整した後２式（ＩＩ）−で示される各化合物
を添加反応させる方法によって実施できる。
リン酸供与体としてＡＴＰを添加し、上記菌体を懸濁し
た溶液を調整した後２式（ＩＩ）−で示される各化合物
を添加反応させる方法によって実施できる。
緩衝液は１式＋ＩＩ）の化合物の安定性等を考慮してリ
ン酸を含有するものでｐＨ６〜８．５の範囲、特にｐＨ
７〜８の範囲に調節するのが有利である。
ン酸を含有するものでｐＨ６〜８．５の範囲、特にｐＨ
７〜８の範囲に調節するのが有利である。
かかる緩衝液での反応は、一般に２０〜４５°Ｃ２好ま
しくは３０〜４０℃の範囲内の温度が好適であり、その
反応時間は２反応温度や使用菌体又は菌体処理物によっ
て異なるが通常３０分〜ｌＯ時間の範囲である。
しくは３０〜４０℃の範囲内の温度が好適であり、その
反応時間は２反応温度や使用菌体又は菌体処理物によっ
て異なるが通常３０分〜ｌＯ時間の範囲である。
また２反応を好適に行なうため、必要に応じて反応液中
高級脂肪属硫酸す） ＩＪウム等の界面活性剤やマグネ
７ウム等の酵素活性の安定化に寄与し得る金属イオンを
共存させることができる。
高級脂肪属硫酸す） ＩＪウム等の界面活性剤やマグネ
７ウム等の酵素活性の安定化に寄与し得る金属イオンを
共存させることができる。
なお、使用する反応・条件は、使用する菌体又は菌体処
理物の特性に応じて、当業者であれば簡単な実験により
、最適条件を容易に決定することができる。
理物の特性に応じて、当業者であれば簡単な実験により
、最適条件を容易に決定することができる。
かくして生成した式＋１）の化合物を反応混合物から単
離するには２反応後、濾過、遠心分離、抽出などのそれ
自体公知の分離法によって菌体又は菌体処理物を除去し
、そのｒ液、上澄液、抽出液などより回収される。
離するには２反応後、濾過、遠心分離、抽出などのそれ
自体公知の分離法によって菌体又は菌体処理物を除去し
、そのｒ液、上澄液、抽出液などより回収される。
回収はそれ自体公知の種々の方法で行なうことができ、
特にカルボ／酸型抗生物質の回収のために屡々利用され
る方法が有利に適用される。例えば、低ｐＨにおける酢
酸エチル、ｎ−ブタノール等での溶媒抽出及びその溶媒
層から高ｐＨ水層への転溶；活性炭、アンバーライ）Ｘ
ＡＤ（ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオンＨ
Ｐ−２０（三菱化成社製）等による吸着と、メタノール
水。
特にカルボ／酸型抗生物質の回収のために屡々利用され
る方法が有利に適用される。例えば、低ｐＨにおける酢
酸エチル、ｎ−ブタノール等での溶媒抽出及びその溶媒
層から高ｐＨ水層への転溶；活性炭、アンバーライ）Ｘ
ＡＤ（ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオンＨ
Ｐ−２０（三菱化成社製）等による吸着と、メタノール
水。
アセトン水等による溶出；ダウエックスｌＸ２（ダウケ
ミカル社製）、ＱＡＥ−セファデックスＡ −２５（フ
ァルマシア社製）、ＤＥＡＥ−セルローズワットマンＤ
Ｂ−３２（ワットマンａ［）。
ミカル社製）、ＱＡＥ−セファデックスＡ −２５（フ
ァルマシア社製）、ＤＥＡＥ−セルローズワットマンＤ
Ｂ−３２（ワットマンａ［）。
ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５（ファルマシ７社製
）等のイオ／交換樹脂による吸着及び溶出；セファデッ
クスＧ−１０（ファルマ７７社ｆｆ）。
）等のイオ／交換樹脂による吸着及び溶出；セファデッ
クスＧ−１０（ファルマ７７社ｆｆ）。
バイホ・ゲルＰ−２（バイオ・ランド社！Ｒ）２等によ
るゲル濾過；セルローズ、アビセルＳＦ（アメリカン・
ビスコース社製）等のカラムクロマトグラフィー；アセ
トン等の溶剤添加による強制沈殿法；凍結乾燥法２等を
それぞれ単独で或いは適宜組合せて、さらに場合によっ
ては反復して使用される。
るゲル濾過；セルローズ、アビセルＳＦ（アメリカン・
ビスコース社製）等のカラムクロマトグラフィー；アセ
トン等の溶剤添加による強制沈殿法；凍結乾燥法２等を
それぞれ単独で或いは適宜組合せて、さらに場合によっ
ては反復して使用される。
回収ｎ製工程中の式（１）の化合物の挙動は後述するビ
オアッセイ法およびビオオートグラフィーにより定量測
定することができる。
オアッセイ法およびビオオートグラフィーにより定量測
定することができる。
かくして、前記した特性を有する抗生物質０Ａ−６１２
９Ａ−リン酸エステル、同０Ａ−６１２９Ｂ−リン厳エ
ステル又は同０Ａ−６１２９Ｃ−ＩＪン酸エステルが得
られる。
９Ａ−リン酸エステル、同０Ａ−６１２９Ｂ−リン厳エ
ステル又は同０Ａ−６１２９Ｃ−ＩＪン酸エステルが得
られる。
本抗生物質０Ａ−６１２９のリン酸エステルは。
一般に遊離形のものよりも塩の形の方がより安定である
から、後述する医薬用途に使用したり、さらに誘導体に
転換する場合の中間体として使用したり、或いは前記し
た精製工程に付する場合等においては、塩の形で処理す
ることが好適である。
から、後述する医薬用途に使用したり、さらに誘導体に
転換する場合の中間体として使用したり、或いは前記し
た精製工程に付する場合等においては、塩の形で処理す
ることが好適である。
抗生物質０Ａ−６１２９のリン酸エステルのその塩形へ
の転化はそれ自体公知の方法に従い、該抗生物質０Ａ−
６１２９のリン酸エステルを無機又は有機の塩基で処理
することにより行なうことができる。この造塩反応に使
用し得る無機又は有機の塩基としては１例えば、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムの如きア
ルカリ金属の水酸化物；水酸化カルシウム、水酸化マグ
ネシウムの妬きアルカリ土類金属の水酸化物；モノエチ
ルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン。
の転化はそれ自体公知の方法に従い、該抗生物質０Ａ−
６１２９のリン酸エステルを無機又は有機の塩基で処理
することにより行なうことができる。この造塩反応に使
用し得る無機又は有機の塩基としては１例えば、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムの如きア
ルカリ金属の水酸化物；水酸化カルシウム、水酸化マグ
ネシウムの妬きアルカリ土類金属の水酸化物；モノエチ
ルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン。
モノエタノールアミン、ジェタノールアミン、ベンザチ
ン、プロ力インの如き第一級、第二級又は第三級の有機
アミン等が挙げられる。
ン、プロ力インの如き第一級、第二級又は第三級の有機
アミン等が挙げられる。
本発明により提供される抗生物質０Ａ−６１，２９のリ
ン酸エステル又はその塩は、広範囲の抗菌活性を有し、
各種微生物２例えばスタフィロコッカス属、サルンナ属
、バチルス属等に属するダラム陽性閑に対し非常に強い
抗菌力を示し、更に例えばアルカリ土類金属、コマモナ
ス属等に属するダラム陰性菌に対しても非常に強い抗菌
力を示す。
ン酸エステル又はその塩は、広範囲の抗菌活性を有し、
各種微生物２例えばスタフィロコッカス属、サルンナ属
、バチルス属等に属するダラム陽性閑に対し非常に強い
抗菌力を示し、更に例えばアルカリ土類金属、コマモナ
ス属等に属するダラム陰性菌に対しても非常に強い抗菌
力を示す。
また１本発明の抗生物質０Ａ−６１２９のリン酸エステ
ルは２例えばエシェリヒア属、クレブシェラ属、プロテ
ウス属等に属するダラム陰性菌に対してもかなり強い抗
鉋力を示す。
ルは２例えばエシェリヒア属、クレブシェラ属、プロテ
ウス属等に属するダラム陰性菌に対してもかなり強い抗
鉋力を示す。
特に２本光明の抗生物質０Ａ−６１２９のリン酸エステ
ルは、β−ラクタム環を有する抗生物質に対して耐性を
有する２例えばシトロバクタ−属。
ルは、β−ラクタム環を有する抗生物質に対して耐性を
有する２例えばシトロバクタ−属。
フロテラス属、エンテロバクター属、クレブシェラ属、
セラチア属等に属するダラム陰性細閑に対してかなり強
い抗菌力を示す点、及び哺乳動物の腎臓ホモジネートに
対して安定である点で特徴的である。
セラチア属等に属するダラム陰性細閑に対してかなり強
い抗菌力を示す点、及び哺乳動物の腎臓ホモジネートに
対して安定である点で特徴的である。
本発明の抗生物［０Ａ−６１２９のリン酸エステルの抗
菌スペクトルは以下に述べる各種病原性被験菌に対する
最小発育阻止濃度の測定により立証される。
菌スペクトルは以下に述べる各種病原性被験菌に対する
最小発育阻止濃度の測定により立証される。
（μを汐ｌ）＊＊
＊ β−ラクタム耐性株
＊＊培地 ＨＩ寒天（ディフコ社製）；菌濃度１０６細
胞／ｍｌ。
胞／ｍｌ。
寒天希釈法による
また２本発明の抗生物質０Ａ７６１２９のリン酸エステ
ルは、前述したように、従来公知の同種の抗生物質と比
較して安定であり、特に哺乳動物の腎臓ホモジネートに
対する安定性は、以Ｆに述べる各種の被験腎臓ホモジネ
ート処理に対する残存活性の測定により明らかである。
ルは、前述したように、従来公知の同種の抗生物質と比
較して安定であり、特に哺乳動物の腎臓ホモジネートに
対する安定性は、以Ｆに述べる各種の被験腎臓ホモジネ
ート処理に対する残存活性の測定により明らかである。
次に実施例により本発明をさらに説明する。なお、以下
の実施例において用いる抗菌活性物質の定性及び定量分
析は下記の方法で行なった。
の実施例において用いる抗菌活性物質の定性及び定量分
析は下記の方法で行なった。
（１） ビオアッセイ法
一夜、ニュートリエンド・アガー上で培養したコマモナ
ｘ−テリゲナ（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅ
ｎａ ）Ｂ−９９６の菌体を、ニュートリエンド・プロ
ス中に懸濁させ、その菌体に由来する６ １０ ’ｎｍ
吸光度が、０．０４ を示す種母液をつくる。極東粉末
ブイヨン（極東製薬工業（休）製）０．８％及びノ（ク
ト・アガー（ディフコ社製）１％よりなるとけた寒天培
地に種母液１％を接種し、これを７ ｍｌずつ９０径の
ペトリ皿に分注し固化させて、コマモナス検定板とする
。
ｘ−テリゲナ（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅ
ｎａ ）Ｂ−９９６の菌体を、ニュートリエンド・プロ
ス中に懸濁させ、その菌体に由来する６ １０ ’ｎｍ
吸光度が、０．０４ を示す種母液をつくる。極東粉末
ブイヨン（極東製薬工業（休）製）０．８％及びノ（ク
ト・アガー（ディフコ社製）１％よりなるとけた寒天培
地に種母液１％を接種し、これを７ ｍｌずつ９０径の
ペトリ皿に分注し固化させて、コマモナス検定板とする
。
（２） ビオオートグラフィー
上記ビオアッセイ法において、 ９Ｃｒｎ径ペトリ皿
を用いる代りにタテ３２ＣｍＸヨコ２４ｃｒｎの皿を用
い、被験−を接種した寒天培地１００７７１１を分注し
固化させて大型検定板をつくる。
を用いる代りにタテ３２ＣｍＸヨコ２４ｃｒｎの皿を用
い、被験−を接種した寒天培地１００７７１１を分注し
固化させて大型検定板をつくる。
被検液の展開後のペーパークロマ）２Ｆ紙を上記で作っ
た大型検定板の寒天表面に張り、１５分後取り除き、大
型検定板を３５℃、２０時間培養し。
た大型検定板の寒天表面に張り、１５分後取り除き、大
型検定板を３５℃、２０時間培養し。
阻止帯の位置よりペーパークロマトダラムのＲ／値を算
出しく定性）、且つ阻止帯の大きさから半定量すること
ができる。薄層クロマト板を用いる場合は、薄紙を介し
て、成分面がふれるように寒天表面に張り、１５分後取
り除き、上記と同様操作により定性及び半定量分析を行
なう。
出しく定性）、且つ阻止帯の大きさから半定量すること
ができる。薄層クロマト板を用いる場合は、薄紙を介し
て、成分面がふれるように寒天表面に張り、１５分後取
り除き、上記と同様操作により定性及び半定量分析を行
なう。
実施例１． プレ多バクテリウム・アンモニアゲネス（
ＡＴＣＣ６８７１）の培養方法 グルコース１％、ペプトン１．５％、 Ｋ２ＨＰ０，０
．３％、 ＮａＣｌ ０．２％、 Ｍｇ５Ｏ，−７ｌ−
（２００，０２％、酵母エキス０．１％（殺菌前ｐＨ７
，０） から成る培地５１！を５００１Ｊ容工ルレン
マイヤーフラスコＫ１００ｍ１ずつ分注し、１２０°Ｃ
１５分間殺園した。冷殺菌ブレビバクテリウム・アンモ
ニアゲネス（ＡＴＣＣ６８７１）を無菌的に接種、し、
２８℃で２日間振トク培養した。培養後、遠心分離によ
り菌体を得。
ＡＴＣＣ６８７１）の培養方法 グルコース１％、ペプトン１．５％、 Ｋ２ＨＰ０，０
．３％、 ＮａＣｌ ０．２％、 Ｍｇ５Ｏ，−７ｌ−
（２００，０２％、酵母エキス０．１％（殺菌前ｐＨ７
，０） から成る培地５１！を５００１Ｊ容工ルレン
マイヤーフラスコＫ１００ｍ１ずつ分注し、１２０°Ｃ
１５分間殺園した。冷殺菌ブレビバクテリウム・アンモ
ニアゲネス（ＡＴＣＣ６８７１）を無菌的に接種、し、
２８℃で２日間振トク培養した。培養後、遠心分離によ
り菌体を得。
０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，１）で２回洗浄後。
同緩衝液１００ｍ１に懸濁し、凍結保存した。
実施例２．抗生物質０Ａ−６１２９Ａ −リン酸エステ
ルの調製 ＡＴＰ（２Ｎａ塩） ３００１Ｑ、 Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ
２０１４８ｍｐヲ蒸留水５ｍｌに溶解し、 ＮａＨＣＯ
，でｐＨを７附近に調−後１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
４） ５ ｍｌ、実施例１で得られた菌体！＠濁液１０
．Ｏｍｇ、 ラウリル硫酸す） ＩＪウム１００〜を加
え良く撹拌した。これに抗生物質０Ａ−６１２９Ａ （
Ｎａ塩）４０Ｔｎｇを加え３５℃で４時間、ゆるやかに
振トウした。反応後遠心分離により菌体を除去し、上清
を高圧ｆ紙電気泳動（ワットマン屋ｌＰ紙、 １５０
０Ｖ／３０硼。
ルの調製 ＡＴＰ（２Ｎａ塩） ３００１Ｑ、 Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ
２０１４８ｍｐヲ蒸留水５ｍｌに溶解し、 ＮａＨＣＯ
，でｐＨを７附近に調−後１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
４） ５ ｍｌ、実施例１で得られた菌体！＠濁液１０
．Ｏｍｇ、 ラウリル硫酸す） ＩＪウム１００〜を加
え良く撹拌した。これに抗生物質０Ａ−６１２９Ａ （
Ｎａ塩）４０Ｔｎｇを加え３５℃で４時間、ゆるやかに
振トウした。反応後遠心分離により菌体を除去し、上清
を高圧ｆ紙電気泳動（ワットマン屋ｌＰ紙、 １５０
０Ｖ／３０硼。
５０分、 ｐ、Ｉ−（８，６ベロナール緩衝液）で検
定すると陽極側４ｃｍの所にわずかな原料スポット１１
ｃｍの所に新らたな抗生物質０Ａ−６１２９Ａ −ＩＪ
ン酸エステルのスポットが認められた。
定すると陽極側４ｃｍの所にわずかな原料スポット１１
ｃｍの所に新らたな抗生物質０Ａ−６１２９Ａ −ＩＪ
ン酸エステルのスポットが認められた。
この反応液（遠沈上清）を予め０．０１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ７，４）で平衡化したＱＡ Ｅ −５ｅｐｈａｄ
ｅｘＡ−２５（ファルマシア社製）カラム（３，ＯＸ４
０ｃＩｎ）に吸着させ同緩衝液で洗浄後、同緩衝液に溶
解したＮａ（４の濃度勾配により溶出した。抗生物質０
Ａ−６１２９Ａ−リン酸エステルは０．２５Ｍ附近の濃
度で溶出されｇめで、その活性区分を集め、予め０．０
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４’）で平衡化したダイヤ
イオンＩ■ｐ −’２ ｏＡｏ （三菱化成社製）カラ
ム（３，０Ｘ４０ＣＩｔ）に吸着させた。これを蒸留水
で溶出し、活性区分を凍結乾燥して部分精製標品１６〜
を得た。本標品を蒸留水ｌ ｍｌに溶解し、セルロファ
インＧＣ−１５−ｍ（Ｆ−ッソ社製）カラム（１，９Ｘ
６５ｃｍ）を用いてゲルｆ過を行い、活性区分を凍結乾
燥してＯＡ −６１２９Ａ−！Ｊン酸エステル１２．９
ｍ９を得た。
（ｐＨ７，４）で平衡化したＱＡ Ｅ −５ｅｐｈａｄ
ｅｘＡ−２５（ファルマシア社製）カラム（３，ＯＸ４
０ｃＩｎ）に吸着させ同緩衝液で洗浄後、同緩衝液に溶
解したＮａ（４の濃度勾配により溶出した。抗生物質０
Ａ−６１２９Ａ−リン酸エステルは０．２５Ｍ附近の濃
度で溶出されｇめで、その活性区分を集め、予め０．０
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４’）で平衡化したダイヤ
イオンＩ■ｐ −’２ ｏＡｏ （三菱化成社製）カラ
ム（３，０Ｘ４０ＣＩｔ）に吸着させた。これを蒸留水
で溶出し、活性区分を凍結乾燥して部分精製標品１６〜
を得た。本標品を蒸留水ｌ ｍｌに溶解し、セルロファ
インＧＣ−１５−ｍ（Ｆ−ッソ社製）カラム（１，９Ｘ
６５ｃｍ）を用いてゲルｆ過を行い、活性区分を凍結乾
燥してＯＡ −６１２９Ａ−！Ｊン酸エステル１２．９
ｍ９を得た。
この抗生物質０Ａ−６１２９Ａ −！Ｊン酸エステルは
次のような緒特性を示した。
次のような緒特性を示した。
（１）紫外部吸収スペクトラム
０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）中で測定１チ。
λｍａｘ ｎｍ：３０２． Ｅ ２１！’７．’
９１（１７１’ （２）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒＝Ｄ２０．内部０
．９８ （ａＨ，ｔ、Ｊ＝７．ＯＨ，、ＣＨ２−ＣＨ
，）１．５０〜２．００ （２Ｈ、ｍ 、 ＣＨ，−Ｃ
Ｈ８）２．４７ （２）（、ｔ、Ｊ＝６．５４゜ＮＨ
−Ｃ）（２−Ｃ川−ＣＯ） ２．７０〜３．８３ （１１Ｈ，ｍ、Ｃ−４Ｈ２，Ｃ−
６Ｈ，。
９１（１７１’ （２）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒＝Ｄ２０．内部０
．９８ （ａＨ，ｔ、Ｊ＝７．ＯＨ，、ＣＨ２−ＣＨ
，）１．５０〜２．００ （２Ｈ、ｍ 、 ＣＨ，−Ｃ
Ｈ８）２．４７ （２）（、ｔ、Ｊ＝６．５４゜ＮＨ
−Ｃ）（２−Ｃ川−ＣＯ） ２．７０〜３．８３ （１１Ｈ，ｍ、Ｃ−４Ｈ２，Ｃ−
６Ｈ，。
５−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ。
ＮＨ−Ｃ）（２−Ｃ）（２−ＣＯ。
３．８５〜４．２０ （２Ｈ、ｍ 、 Ｃ−５Ｈ、ｈｔ
ｏ−Ｊｕ−ｃｏ ）（３）呈色反応 エールリッヒ試薬、塩化白金酸反応、モリブデン酸反応
１性 ニンヒドリン反応：陰性 （４）ペーパークロマトグラフィー 東洋１祇扁５０ 展開溶媒 アセトニトリル： ０． Ｉ Ｍ Ｔ ｒ
ｉ ５−４（（Ｊ’ Ｍｌｌ液液 ｐＨ７，５） ：
０．ＩＭ Ｂ［ＴＡ＝１２０：３０：１検出方法 Ｃｏ
ｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ Ｂ９９６
によるバイオオートグラフィー Ｒ／値 ０．０３ （この時抗生物質０Ａ−６１２９Ａ。
ｏ−Ｊｕ−ｃｏ ）（３）呈色反応 エールリッヒ試薬、塩化白金酸反応、モリブデン酸反応
１性 ニンヒドリン反応：陰性 （４）ペーパークロマトグラフィー 東洋１祇扁５０ 展開溶媒 アセトニトリル： ０． Ｉ Ｍ Ｔ ｒ
ｉ ５−４（（Ｊ’ Ｍｌｌ液液 ｐＨ７，５） ：
０．ＩＭ Ｂ［ＴＡ＝１２０：３０：１検出方法 Ｃｏ
ｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ Ｂ９９６
によるバイオオートグラフィー Ｒ／値 ０．０３ （この時抗生物質０Ａ−６１２９Ａ。
及び抗生物質ＰＳ−５のｋＬｆ値はそ
れぞれ０．２６，０．３１であった。）（５） 高圧
１紙電気泳動 ワットマンＪｆ６１１ｊ：１紙 ベロナール緩衝液（ｐＨ８，６） １５００Ｖ／３０ｍ、 ５０分通電 検出方法 Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ
Ｂ９９６ ｉＣよるバイオオートグラフィー 移動度 陽極側に１１〜１２ｃＷＬ （この時、抗生物質０Ａ−６１２９Ａ は４〜５ｃｍ、ＰＳ−５は６〜７ぼ陽 極側に移動した。） （６） ７オ負フアターゼに対する挙動アルカリフォ
スファターゼ、（シグマ社Ｐ３８７７ ）処理により分
解され、抗生物質０Ａ−６１２９Ａを生じる。
１紙電気泳動 ワットマンＪｆ６１１ｊ：１紙 ベロナール緩衝液（ｐＨ８，６） １５００Ｖ／３０ｍ、 ５０分通電 検出方法 Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ
Ｂ９９６ ｉＣよるバイオオートグラフィー 移動度 陽極側に１１〜１２ｃＷＬ （この時、抗生物質０Ａ−６１２９Ａ は４〜５ｃｍ、ＰＳ−５は６〜７ぼ陽 極側に移動した。） （６） ７オ負フアターゼに対する挙動アルカリフォ
スファターゼ、（シグマ社Ｐ３８７７ ）処理により分
解され、抗生物質０Ａ−６１２９Ａを生じる。
実施例３．抗生物質０Ａ−６１２９８−リン酸エステル
の調製及び単離精製 実施例２と同様にして抗生物［０Ａ−６１２’９Ｂ４０
ｍｇをリン酸化した。反応液を菌体除去後、予め０．
ＯＩ Ｍ ＋７７酸緩衝液（ｐＨ７，４）で平衡化した
ＱＡｇ−８ｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５（ファ／Ｌ、？シ
ア社製）カラム（３，０Ｘ４０α）に吸着させた。カラ
ムを同緩衝液で洗浄後、同緩衝液に溶解したＮａＣ／の
濃度勾配で溶出した。抗生物質０Ａ−６１２９Ｂ−リン
酸エステルは０．３５Ｍ附近で溶出されるのでその活性
区分を集め、予め０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝液で平衡化し
たダイヤイオンＨＰ−２０ＡＧ（三菱化成社製）カラム
（３，ＯＸ４ｆ）ｃｍ）に吸着させた。同緩衝液で十分
洗浄後、１０％アセトンで溶出した。
の調製及び単離精製 実施例２と同様にして抗生物［０Ａ−６１２’９Ｂ４０
ｍｇをリン酸化した。反応液を菌体除去後、予め０．
ＯＩ Ｍ ＋７７酸緩衝液（ｐＨ７，４）で平衡化した
ＱＡｇ−８ｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５（ファ／Ｌ、？シ
ア社製）カラム（３，０Ｘ４０α）に吸着させた。カラ
ムを同緩衝液で洗浄後、同緩衝液に溶解したＮａＣ／の
濃度勾配で溶出した。抗生物質０Ａ−６１２９Ｂ−リン
酸エステルは０．３５Ｍ附近で溶出されるのでその活性
区分を集め、予め０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝液で平衡化し
たダイヤイオンＨＰ−２０ＡＧ（三菱化成社製）カラム
（３，ＯＸ４ｆ）ｃｍ）に吸着させた。同緩衝液で十分
洗浄後、１０％アセトンで溶出した。
活性区分を集めドライアイストラップを使用して減圧下
約１ ｍｌになるまで濃縮し、これをセルロファイ７Ｇ
Ｃ−１５−ｍ（チッソ社製）カラム（１，９Ｘ６５ｃｍ
）でゲルｆ過を行った。活性区分を凍結乾燥して抗生物
質ｏＡ−６１’２９Ｂ−＋）ン酸エステル１１．３■を
得た。
約１ ｍｌになるまで濃縮し、これをセルロファイ７Ｇ
Ｃ−１５−ｍ（チッソ社製）カラム（１，９Ｘ６５ｃｍ
）でゲルｆ過を行った。活性区分を凍結乾燥して抗生物
質ｏＡ−６１’２９Ｂ−＋）ン酸エステル１１．３■を
得た。
得られた抗生物質０Ａ−６１２９ｔ３−Ｊン酸エステル
は以ドの緒特性を示した。
は以ドの緒特性を示した。
（１） 紫外部吸収スペクトラム
００１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）中で測定λｍａｘ
ｎｍ：３０２ （２）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：Ｄ２０．内部２
．４７ （２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．５Ｈ，。
ｎｍ：３０２ （２）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：Ｄ２０．内部２
．４７ （２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．５Ｈ，。
ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ，−ＣＯ）
Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ。
ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ。
−〇
）（０−占１（−ＣＯ）
（３）呈色反応
エールリッヒ試薬、塩化白金酸反応、モリブデン酸反応
：陽性 ニンヒドリ／反応：陰性 （４）ペーパークロマトダラフイー 東洋ｆ紙扁５０ 展開溶媒 アセトニトリｋ ： ０． Ｉ Ｍ Ｔｒ
ｉｓ−トＩＣｌ緩衝液（ｐ）（７，５）： ０．１Ｍ
ＥＤＴＡ＝１２０：３０：１ 検出方法 Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ
Ｂ９９６によるバイオオートグラフィー Ｒ／値 ０．０１ （この時抗生物質０Ａ−６１２９Ａ。
：陽性 ニンヒドリ／反応：陰性 （４）ペーパークロマトダラフイー 東洋ｆ紙扁５０ 展開溶媒 アセトニトリｋ ： ０． Ｉ Ｍ Ｔｒ
ｉｓ−トＩＣｌ緩衝液（ｐ）（７，５）： ０．１Ｍ
ＥＤＴＡ＝１２０：３０：１ 検出方法 Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ
Ｂ９９６によるバイオオートグラフィー Ｒ／値 ０．０１ （この時抗生物質０Ａ−６１２９Ａ。
及び抗生物質ＰＳ−５のＲｆ値はそ
れぞれ０．２６，０．３１であった。）（５）高圧１紙
電気泳動 ワットマン扁１ｆ１紙 ベロナール緩衝液（１）Ｈ８，６） １５００Ｖ／３０ｃｒｒＬ、 ５０分通電検出方法
Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ Ｂ９９６
によるバイオオートグラフィー 移動度 陽極側に１１〜１２ｃ＋＋＋ （この時、抗生物質０Ａ−６１２９′Ａは４〜５ｃｍ、
ＰＳ−５は６〜７α陽極側に移動した。） （６） フォスファターゼに対する挙動アルカリフォ
スファターゼ（シグマ社Ｐ３８７７）処理に゛より分解
され、抗生物質０Ａ−６１２９８を生じる。
電気泳動 ワットマン扁１ｆ１紙 ベロナール緩衝液（１）Ｈ８，６） １５００Ｖ／３０ｃｒｒＬ、 ５０分通電検出方法
Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ Ｂ９９６
によるバイオオートグラフィー 移動度 陽極側に１１〜１２ｃ＋＋＋ （この時、抗生物質０Ａ−６１２９′Ａは４〜５ｃｍ、
ＰＳ−５は６〜７α陽極側に移動した。） （６） フォスファターゼに対する挙動アルカリフォ
スファターゼ（シグマ社Ｐ３８７７）処理に゛より分解
され、抗生物質０Ａ−６１２９８を生じる。
実施例４．抗生物質０Ａ−６１２９Ｃ−’）ン酸エステ
ルの調製 抗生物質０Ａ−６１２９ＣｔＩｎ９（力価相当〕 をＭ
２Ｓ リン酸緩衝液（ｐＨ７，４） ０．２ｍｌに溶
解し１００ｍＭＡＴＰ溶液（ＮａＨＣＯ３でｐＨ６〜７
に調整）０．０５ｍ１． １００ ｍＭ Ｍｇ５Ｏ，溶
液Ｑ、Ｑ５ｍｌ、実施例１と同様にして得られた菌体懸
濁液０．２ ｍｌを加え、攪拌後ラウリル硫酸ナトリウ
ム０．５■を添加し３５℃で４時間振盪した。反応後、
遠心分離により函体を除去し、上清について高圧１紙電
気泳動なＦ記の乗件で行った所、陽極側６．５ ｃｍ所
にわずかな原料スポットと９．４ ｃｍの所に新たな０
Ａ−６１：２９Ｃ−リン酸エステルのスポットが認めら
れた。
ルの調製 抗生物質０Ａ−６１２９ＣｔＩｎ９（力価相当〕 をＭ
２Ｓ リン酸緩衝液（ｐＨ７，４） ０．２ｍｌに溶
解し１００ｍＭＡＴＰ溶液（ＮａＨＣＯ３でｐＨ６〜７
に調整）０．０５ｍ１． １００ ｍＭ Ｍｇ５Ｏ，溶
液Ｑ、Ｑ５ｍｌ、実施例１と同様にして得られた菌体懸
濁液０．２ ｍｌを加え、攪拌後ラウリル硫酸ナトリウ
ム０．５■を添加し３５℃で４時間振盪した。反応後、
遠心分離により函体を除去し、上清について高圧１紙電
気泳動なＦ記の乗件で行った所、陽極側６．５ ｃｍ所
にわずかな原料スポットと９．４ ｃｍの所に新たな０
Ａ−６１：２９Ｃ−リン酸エステルのスポットが認めら
れた。
高圧１紙電気泳動
ワットマン腐ｌ−Ｐ紙
ベロナール緩衝液（ｐＨ８，６）
１５００Ｖ／３０α、３０分通電
検出方法 Ｃｏｍａｍｏｎａｓ ｔｅｒｒｉｇｅｎａ
Ｂ９９６によるバイオオートグラフィー 移動度 （全て陽極側） 抗生物質 ＯＡ −６１２９Ｃ６〜７ｃＩｎＯＡ−６１
２９Ｃリン酸エステル ト１０ＣＩｎＯＡ−６１２９Ａ
２〜３α ＰＳ−５４〜５σ 又、抗生物質０Ａ−６１２９Ｃ−ＩＪン酸エステル区分
を切り出し、０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８，４）
で抽出後、アルカリフォスファターゼ（シグマ社Ｐ３８
７７）処理したものを再び高圧ｆ紙電気泳動を行った所
、抗生物質０Ａ−６１２９０のスポットが認められた。
Ｂ９９６によるバイオオートグラフィー 移動度 （全て陽極側） 抗生物質 ＯＡ −６１２９Ｃ６〜７ｃＩｎＯＡ−６１
２９Ｃリン酸エステル ト１０ＣＩｎＯＡ−６１２９Ａ
２〜３α ＰＳ−５４〜５σ 又、抗生物質０Ａ−６１２９Ｃ−ＩＪン酸エステル区分
を切り出し、０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８，４）
で抽出後、アルカリフォスファターゼ（シグマ社Ｐ３８
７７）処理したものを再び高圧ｆ紙電気泳動を行った所
、抗生物質０Ａ−６１２９０のスポットが認められた。
本発明の原料に用いられる抗生物質０Ａ−６１２９物質
の調製法を以下の参考例に示す。
の調製法を以下の参考例に示す。
ＣＡ） ５００ ｍｌ 容エルレンマイヤーフラスコ
にＩＱＱｍ／！の下記組成の種母培地（ｓ−ｉ）を入れ
。
にＩＱＱｍ／！の下記組成の種母培地（ｓ−ｉ）を入れ
。
常法により、１２０℃で１５分間殺菌した。
一方、ストレフトミセス・エスピー０Ａ−６１２９（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ、 ０Ａ−６’ｌ ２
９ ）菌株の胞子を充分着生させ、この−白金耳を上記
種母培地に接種し、２８℃で４８時間ロータリーシェー
カー（２００ｒｐｍ、振幅７儂）で振とう培養した。こ
の種母培養液２００１ｎｌを、下記組成の種母培地ＣＵ
ｇ−４）１５Ａ！を入れた３０１容ジヤー・ファーメン
タ−に接種し、２８℃、４００ｒｐｍで攪拌及び７．５
Ｊ／ｍｉｎ通気の条件丁に９０時間通気攪拌培養を行っ
た。消泡剤としてシリコンＫＭ−７５〔登録商標・信越
化学■製〕を０．０７％使用した。
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ、 ０Ａ−６’ｌ ２
９ ）菌株の胞子を充分着生させ、この−白金耳を上記
種母培地に接種し、２８℃で４８時間ロータリーシェー
カー（２００ｒｐｍ、振幅７儂）で振とう培養した。こ
の種母培養液２００１ｎｌを、下記組成の種母培地ＣＵ
ｇ−４）１５Ａ！を入れた３０１容ジヤー・ファーメン
タ−に接種し、２８℃、４００ｒｐｍで攪拌及び７．５
Ｊ／ｍｉｎ通気の条件丁に９０時間通気攪拌培養を行っ
た。消泡剤としてシリコンＫＭ−７５〔登録商標・信越
化学■製〕を０．０７％使用した。
ＣＢ）上記な〕で得られた２４時間培養後の種母培養液
２７１！ヲ１記組成ノ生、ｅｉ地（ＧＭ−１）ｌ ００
１を入れた２００１容醗酵夕／りに接種し、２８’Ｃ２
０Ｏｒｐｍで攪拌及び５０１／ｍｉｎ通気ｏ４件ドに９
０時間通気攪拌培養を行った。消泡剤としてシリコンＫ
Ｍ−７５［前出］を０．０７％使用した。
２７１！ヲ１記組成ノ生、ｅｉ地（ＧＭ−１）ｌ ００
１を入れた２００１容醗酵夕／りに接種し、２８’Ｃ２
０Ｏｒｐｍで攪拌及び５０１／ｍｉｎ通気ｏ４件ドに９
０時間通気攪拌培養を行った。消泡剤としてシリコンＫ
Ｍ−７５［前出］を０．０７％使用した。
経時的に培養液をサンプリングし、遠心分離した上澄液
についての抗菌力の測定を行った。
についての抗菌力の測定を行った。
各時間における測足結釆は、Ｆ衣に示す通りであった租
菌力価はＰＳ−３ナトリウム塩相当力価である）０培養
時間（時間） 抗菌力価（μｆ７ｆｎｌ）４８
２．６ ７２ １１．５ ９０ ２４．０ 橿母培地（Ｓ−１）の組成： 大豆粉 １．５％（Ｗ／Ｖ）酵母エキ
ストラクト ０．５ゼテトスターチ
２０％（Ｗ／Ｖ）ＣａＣＯ，０，２ ｐａｌ（殺菌１ｒｉＩ） 、 ７．０橿母培地
（Ｓｎ−４）の組成： 牛肉エキストラクト ０．３％（Ｗ／Ｖ）ト
リプトン ０．５ グルコース ０．１ 溶性でんぷん ２４ 酵母エキストラクト ０．５ ＣａＣＯ，０，４ 大豆粉 ０．５ ｐＨ（殺菌前）７５ 生産培地（ＧＭ−１）の組成： グリセリン ８．０％（Ｗ／Ｖ ）魚粉
１０ 大豆粉 ３．０ ＣａＣ０３０，３ に２ＨＰＯ，、０，２ Ｍｇ ８０． ０．２殺菌削に、 Ｎ
ａＯＨでｐＨを７．２に調整。
菌力価はＰＳ−３ナトリウム塩相当力価である）０培養
時間（時間） 抗菌力価（μｆ７ｆｎｌ）４８
２．６ ７２ １１．５ ９０ ２４．０ 橿母培地（Ｓ−１）の組成： 大豆粉 １．５％（Ｗ／Ｖ）酵母エキ
ストラクト ０．５ゼテトスターチ
２０％（Ｗ／Ｖ）ＣａＣＯ，０，２ ｐａｌ（殺菌１ｒｉＩ） 、 ７．０橿母培地
（Ｓｎ−４）の組成： 牛肉エキストラクト ０．３％（Ｗ／Ｖ）ト
リプトン ０．５ グルコース ０．１ 溶性でんぷん ２４ 酵母エキストラクト ０．５ ＣａＣＯ，０，４ 大豆粉 ０．５ ｐＨ（殺菌前）７５ 生産培地（ＧＭ−１）の組成： グリセリン ８．０％（Ｗ／Ｖ ）魚粉
１０ 大豆粉 ３．０ ＣａＣ０３０，３ に２ＨＰＯ，、０，２ Ｍｇ ８０． ０．２殺菌削に、 Ｎ
ａＯＨでｐＨを７．２に調整。
別にｐｋ４５．．５の０．０１Ｍｌ７／酸緩衝液中に浴
解し、且つオートクレーブで１ ｋｇ／ｃｊ Ｇ 、、
５分間殺菌したビタミンＢ１２を０．０００５％（
Ｗ／ｖ）添加。
解し、且つオートクレーブで１ ｋｇ／ｃｊ Ｇ 、、
５分間殺菌したビタミンＢ１２を０．０００５％（
Ｗ／ｖ）添加。
〔Ｃ〕 上記用〕で得られた９０時間培養後の醗酵液１
００／に５％（ＶＶ／Ｖ）量のドブコパーライ［１３４
（登録商標・果実パーライト（（社）製〕を添加し、バ
スケット型遠心分離器で菌体を分離し。
００／に５％（ＶＶ／Ｖ）量のドブコパーライ［１３４
（登録商標・果実パーライト（（社）製〕を添加し、バ
スケット型遠心分離器で菌体を分離し。
’ｌ 、Ｏｌの培養ｆ液を得た。これをダイヤイオン）
ＩＰ−２０［登録商標・三菱化成（株）製］充填カラム
（１５Ｘ１００確）に吸着させ、蒸留水５１で洗浄後、
３０％（Ｖ／Ｖ）アセトン水で溶出した。１両分を１．
０７とし、その浴出液を分画した。
ＩＰ−２０［登録商標・三菱化成（株）製］充填カラム
（１５Ｘ１００確）に吸着させ、蒸留水５１で洗浄後、
３０％（Ｖ／Ｖ）アセトン水で溶出した。１両分を１．
０７とし、その浴出液を分画した。
バイオアッセイ活性画分８から画分１５ま２での合計８
．０／の溶出液を集め、これをダイヤイオンＰＡ３０６
８［登録商標・三菱化成（休）製］充填カラＡ（−８Ｘ
６０ｃＩｒＬ）に吸着させ、蒸留水１．０７で洗浄後、
３０％食塩水で溶出した。５ｏｏｍｌずつ溶出液を分画
し、バイオアッセイ活性画分７がら画分１６までの合計
５．０１の抗生物質０Ａ−６１２９’Ａ、Ｂが含まれた
溶出液を集めた。
．０／の溶出液を集め、これをダイヤイオンＰＡ３０６
８［登録商標・三菱化成（休）製］充填カラＡ（−８Ｘ
６０ｃＩｒＬ）に吸着させ、蒸留水１．０７で洗浄後、
３０％食塩水で溶出した。５ｏｏｍｌずつ溶出液を分画
し、バイオアッセイ活性画分７がら画分１６までの合計
５．０１の抗生物質０Ａ−６１２９’Ａ、Ｂが含まれた
溶出液を集めた。
続いて、上記のＰＡ３０６Ｓ充填カラムを３０％食塩水
で溶出し、５ＱＱｍ／ずつ溶出液を分画し。
で溶出し、５ＱＱｍ／ずつ溶出液を分画し。
バイオアッセイ活性画分３から画分１６までの合計７．
０ノの抗生物質０Ａ−６１２９Ｃが含まれた浴出液を集
めた。
０ノの抗生物質０Ａ−６１２９Ｃが含まれた浴出液を集
めた。
抗生物質０Ａ−６１２９Ａ、Ｂを含む溶出液５．Ｏｌに
３００ｇの食塩を加え、ダイヤイオンＨＰ−２０充填カ
ラム（６Ｘ１５０Ｃｒｎ）に吸着させ、蒸留水５ＱＱｍ
ｌで洗浄後、濃度が０％から４０％まで直線的に増加す
るアセトン水合計４、Ｏｌで溶出した。
３００ｇの食塩を加え、ダイヤイオンＨＰ−２０充填カ
ラム（６Ｘ１５０Ｃｒｎ）に吸着させ、蒸留水５ＱＱｍ
ｌで洗浄後、濃度が０％から４０％まで直線的に増加す
るアセトン水合計４、Ｏｌで溶出した。
１区分を１７ｍ１として、その溶出液を分画した。
バイオアッセイ活性画分２０から画分１３０までの約１
．８１の溶出液には、主に抗生物質０Ａ−６１２９Ｂと
若干の抗生物［０Ａ−６１２９Ａが含まれていた。バイ
オアッセイ活性画分１３１から画分１７０マテノ約７０
０ｍ１の溶出液には０Ａ−６１２９Ａが含まれていた。
．８１の溶出液には、主に抗生物質０Ａ−６１２９Ｂと
若干の抗生物［０Ａ−６１２９Ａが含まれていた。バイ
オアッセイ活性画分１３１から画分１７０マテノ約７０
０ｍ１の溶出液には０Ａ−６１２９Ａが含まれていた。
上記の２区分をそれぞれ凍結乾燥し、茶褐色の粉末を得
た。
た。
抗生物質０Ａ−６１２９Ａの精製
ＣＩ）） 抗生物質０Ａ−６１２９Ａを王に含む溶出液
を、凍結乾燥することによって得られた茶褐色粉末を、
少量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２（登録商標・
バイオランド社製）充填カラム（８Ｘ １００ ｃｒｒ
ｒ ）に導き、蒸留水で展開し、バイオアッセイにより
活性画分１．０１を集めた。この活性画分を予め、０．
０１ＭＩＪン酸緩衝液（１）Ｈ８，４）で平衡化したＱ
ＡＥ−セファデックスＡ−２５（登録商標・ファルマシ
ア社！Ｒ）充填カラム（４Ｘ４０ｃｒｎ）に吸着させ、
上記緩衝液２００ｍ１で洗浄後。
を、凍結乾燥することによって得られた茶褐色粉末を、
少量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２（登録商標・
バイオランド社製）充填カラム（８Ｘ １００ ｃｒｒ
ｒ ）に導き、蒸留水で展開し、バイオアッセイにより
活性画分１．０１を集めた。この活性画分を予め、０．
０１ＭＩＪン酸緩衝液（１）Ｈ８，４）で平衡化したＱ
ＡＥ−セファデックスＡ−２５（登録商標・ファルマシ
ア社！Ｒ）充填カラム（４Ｘ４０ｃｒｎ）に吸着させ、
上記緩衝液２００ｍ１で洗浄後。
良度が０％から４％まで直線的に増加する食塩水（合計
３０１）で溶出を行った。溶出液を１５ｍ１ずつ分画し
、バイオアッセイを行い２画分５１から画分７０まで２
合計３００ｍ１の活性画分を得た。
３０１）で溶出を行った。溶出液を１５ｍ１ずつ分画し
、バイオアッセイを行い２画分５１から画分７０まで２
合計３００ｍ１の活性画分を得た。
この両分を凍結乾燥し、黄褐色の粉末を傅た。
この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｙの食塩を加え、
ダイヤイオンＨＰ−２０ＡＧ（登録商標・三菱化成（ａ
）製〕充填カラム（２Ｘ５０ｃｍ）に吸着させ、５５食
塩水５０ｍ１で洗浄後、蒸留水ｌＱＱｍ７！で洗浄した
。濃度が０％から３０％まで直線的に増加するアセトン
水（合計１．０／）で溶出し、１画分をＩＱｍ／！とし
、その溶出液を分画した。バイオアッセイにより、活性
画分３５から画分４５までの合計１１０１ｎｌを集め、
これを凍結乾燥すると黄褐色の抗生物質０Ａ−６１２９
Ａの粗粉末５２ｍ１が得られた。
ダイヤイオンＨＰ−２０ＡＧ（登録商標・三菱化成（ａ
）製〕充填カラム（２Ｘ５０ｃｍ）に吸着させ、５５食
塩水５０ｍ１で洗浄後、蒸留水ｌＱＱｍ７！で洗浄した
。濃度が０％から３０％まで直線的に増加するアセトン
水（合計１．０／）で溶出し、１画分をＩＱｍ／！とし
、その溶出液を分画した。バイオアッセイにより、活性
画分３５から画分４５までの合計１１０１ｎｌを集め、
これを凍結乾燥すると黄褐色の抗生物質０Ａ−６１２９
Ａの粗粉末５２ｍ１が得られた。
該粉末を、少量の蒸留水に溶解し、セファデックスＧ−
１０（登録商標・ファルマシア社製）充填力２ム（２ｘ
８０ｃｍ）に導き、蒸留水で展開し。
１０（登録商標・ファルマシア社製）充填力２ム（２ｘ
８０ｃｍ）に導き、蒸留水で展開し。
バイオアッセイにより活性画分３０ｍ１を集めた。
この活性画分を予め、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８
，４）テ平衡化したＱ Ａ Ｅ −５ｅｐｈａｄｅｘ
Ａ −２５（前出）充填カラム（２Ｘ３０α）に吸着さ
せ、上記緩衝液５０ｍ１で洗浄後、濃度が０％から５％
まで直線的に増加する食塩水（合計８００１ｎｌ）で浴
出を行い、溶出液を５ ｒｎｌずつ分画した。バイオア
ッセイにより、活性画分３６から画分４ｏまでの合計２
５ｍ１を集めた。
，４）テ平衡化したＱ Ａ Ｅ −５ｅｐｈａｄｅｘ
Ａ −２５（前出）充填カラム（２Ｘ３０α）に吸着さ
せ、上記緩衝液５０ｍ１で洗浄後、濃度が０％から５％
まで直線的に増加する食塩水（合計８００１ｎｌ）で浴
出を行い、溶出液を５ ｒｎｌずつ分画した。バイオア
ッセイにより、活性画分３６から画分４ｏまでの合計２
５ｍ１を集めた。
、＝ｏｉ分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオンＨＰ−２
０ＡＧ〔前出〕充填カラム（２Ｘ４０ｏｒＬ）に吸着さ
せ、蒸留水５０ｍ１で洗浄後、濃度０％から３０％まで
直線的に増加するアセトン水（合計８００ｍ１）で溶出
し、１画分を５ 、ｍｌとし、その溶出液を分画した。
０ＡＧ〔前出〕充填カラム（２Ｘ４０ｏｒＬ）に吸着さ
せ、蒸留水５０ｍ１で洗浄後、濃度０％から３０％まで
直線的に増加するアセトン水（合計８００ｍ１）で溶出
し、１画分を５ 、ｍｌとし、その溶出液を分画した。
バイオアッセイにより活性画分１０５がら画分１１７の
合計６５ｍ１を果−めた。
合計６５ｍ１を果−めた。
これを凍結乾燥することにより抗生物質０Ａ−６１２９
Ａの淡黄色粉末２１ｍ９を得た。
Ａの淡黄色粉末２１ｍ９を得た。
得られた抗生物質０Ａ−６１２９Ａの凍結乾燥標品は次
の特性を示した。
の特性を示した。
（１） 形状：淡黄色粉末
（２）比旋光度： （α）’ｉ、’ ： １１．６°
（ｃ、＝１．０゜０．０１Ｍリン酸緩衝液、ｐ）（８，
４）但し、紫外部吸収においてλｍａｘ ３００ ｎｍ
の８を５６００とした時の値である。
（ｃ、＝１．０゜０．０１Ｍリン酸緩衝液、ｐ）（８，
４）但し、紫外部吸収においてλｍａｘ ３００ ｎｍ
の８を５６００とした時の値である。
（３）分子式
理論分子式 Ｃ２ｏＨ３Ｉ、Ｎ、０７ＳＮａ （Ｍ 、
Ｗ、＝４７９ ）（４）紫外部吸収スペクトラム （５） 赤外部吸収スペクトラム（ＫＢｒ ）の主要
ビーク１７６０（β−ラクタム） １６６０（アミド） １６００（カルボキシレート） （６）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：Ｈ２０）（内部
基準：ＤＳＳ） １．００ （３Ｈ，ｔ 、Ｊ＝７．５Ｈ２、ＣＡ −Ｃ
Ｈ，）１．６０〜２．００ （２Ｍ、 ｍ、 ＣＩ（２
−ＣＨ８）２．４８（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、Ｎ−
Ｃｌ−１，、−ＣＨ２−Ｃ０）２．８０〜３．６５ （
１１Ｈ，ｍ、 Ｃ−４Ｈ２，Ｃ−６Ｈ，５−ＣＨＬ−抗
生物質０Ａ−６１２９Ｂを王に含む溶出液を。
Ｗ、＝４７９ ）（４）紫外部吸収スペクトラム （５） 赤外部吸収スペクトラム（ＫＢｒ ）の主要
ビーク１７６０（β−ラクタム） １６６０（アミド） １６００（カルボキシレート） （６）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：Ｈ２０）（内部
基準：ＤＳＳ） １．００ （３Ｈ，ｔ 、Ｊ＝７．５Ｈ２、ＣＡ −Ｃ
Ｈ，）１．６０〜２．００ （２Ｍ、 ｍ、 ＣＩ（２
−ＣＨ８）２．４８（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、Ｎ−
Ｃｌ−１，、−ＣＨ２−Ｃ０）２．８０〜３．６５ （
１１Ｈ，ｍ、 Ｃ−４Ｈ２，Ｃ−６Ｈ，５−ＣＨＬ−抗
生物質０Ａ−６１２９Ｂを王に含む溶出液を。
凍結乾燥することによって得られた茶褐色の粉末を、少
量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２（目１出）充填
カラム（８×１００ｃｒｎ）に導き、蒸留水で展開し、
バイオアッセイにより活性画分１０ノを集めた。この活
性画分を予め、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，４）
で平衡化したＱＡＥ−セファデックスＡ −２５（目Ｔ
Ｊ出）充填カラム（４Ｘ４０ｃ１ｎ）に吸着させ、上記
緩衝液２ｑＯｍｌで洗浄後、濃度が０％から４％まで直
線的に増加する食塩水（合計３．Ｏｌ）で溶出を行った
。溶出液を１５ｍｅずつ分画し、バイオアッセイを行い
１画分５１から画分７０まで２合計３００ｍ１の活性画
分を得た。
量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２（目１出）充填
カラム（８×１００ｃｒｎ）に導き、蒸留水で展開し、
バイオアッセイにより活性画分１０ノを集めた。この活
性画分を予め、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，４）
で平衡化したＱＡＥ−セファデックスＡ −２５（目Ｔ
Ｊ出）充填カラム（４Ｘ４０ｃ１ｎ）に吸着させ、上記
緩衝液２ｑＯｍｌで洗浄後、濃度が０％から４％まで直
線的に増加する食塩水（合計３．Ｏｌ）で溶出を行った
。溶出液を１５ｍｅずつ分画し、バイオアッセイを行い
１画分５１から画分７０まで２合計３００ｍ１の活性画
分を得た。
この両分を凍結乾燥し、抗生物質０Ａ−６１２９Ｂを含
有する黄褐色の粉末を得た。
有する黄褐色の粉末を得た。
この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食塩を加え、
ダイヤイオン）（Ｐ−２０ＡＧ［前出］充填カラム（２
ｘ５０ｃｒｎ）に吸着させ、５％食塩水５０ｍ１で洗浄
後、蒸留水１００ｍ１で洗浄した。濃度が０％から３０
％壕で直線的に増加するアセトン水（合計１．Ｏｌ）で
溶出し、１画分を１０ｍ１とし、その溶出液を分画した
。バイオアッセイにより活性画分１５から画分３５まで
合計２１０ｍ１の区分を得た。この区分を凍結乾燥する
ことにより抗生物質０Ａ−６１２９Ｂの黄褐色粉末が得
られた。
ダイヤイオン）（Ｐ−２０ＡＧ［前出］充填カラム（２
ｘ５０ｃｒｎ）に吸着させ、５％食塩水５０ｍ１で洗浄
後、蒸留水１００ｍ１で洗浄した。濃度が０％から３０
％壕で直線的に増加するアセトン水（合計１．Ｏｌ）で
溶出し、１画分を１０ｍ１とし、その溶出液を分画した
。バイオアッセイにより活性画分１５から画分３５まで
合計２１０ｍ１の区分を得た。この区分を凍結乾燥する
ことにより抗生物質０Ａ−６１２９Ｂの黄褐色粉末が得
られた。
得られた抗生物質０Ａ−６１２９Ｂの凍結乾燥標品は次
の特性を有した。
の特性を有した。
（１）形状：淡黄色粉末
（２）比旋光度：〔α）ＪＪ１４．７° ＜Ｃ＝１．０
，０．０１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ８，４） 但し紫外部吸収においてλｍａｘ ３００ ｎｍの６
を５４００とした時の値である。
，０．０１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ８，４） 但し紫外部吸収においてλｍａｘ ３００ ｎｍの６
を５４００とした時の値である。
（３）分子式
理論分子式 Ｃ２ｏＨ３ＯＮ３０８ＳＮａ （Ｍ 、Ｗ
、−４９５）（４） 紫外部吸収スペクトラム ０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，４）λｍａｘ ｎ
ｍ（Ｑ ３００（５４００）（５） 赤外部吸収
スペクトラム（ＫＢｒ）の主要ビーク１７６０（β−ラ
クタム） １６６０（アミド） １６００（カルボキンレート） （６）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：Ｈ２０）（内部
基準：Ｄ３Ｓ）：そのチャートを添付第１図に示す。ま
た、特徴的シグナルは次のとおりである。
、−４９５）（４） 紫外部吸収スペクトラム ０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，４）λｍａｘ ｎ
ｍ（Ｑ ３００（５４００）（５） 赤外部吸収
スペクトラム（ＫＢｒ）の主要ビーク１７６０（β−ラ
クタム） １６６０（アミド） １６００（カルボキンレート） （６）核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：Ｈ２０）（内部
基準：Ｄ３Ｓ）：そのチャートを添付第１図に示す。ま
た、特徴的シグナルは次のとおりである。
δ（ｐｐｍ）
２．４５ （２Ｈ，ｔ 、 Ｊ＝７．０Ｈｚ 、ＮＨ−
Ｃ）（、−ＣＨ，−Ｃｏ）前記の抗生物質０Ａ−６１２
９Ｃを含む溶出液７０１をＨＰ−２０ダイヤイオン（前
出）充填カラム（５Ｘ ８０ ｃｍ ）に吸着させ、０
．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，４） １．５１で洗浄
後、濃度が０％から２０％１で直線的に増加するアセト
ン水（合計６０１）で溶出した。溶出液を２５０ｍｔず
つ分画し９画分９から画分１３までの合計１．２５１の
溶出液を得た。
Ｃ）（、−ＣＨ，−Ｃｏ）前記の抗生物質０Ａ−６１２
９Ｃを含む溶出液７０１をＨＰ−２０ダイヤイオン（前
出）充填カラム（５Ｘ ８０ ｃｍ ）に吸着させ、０
．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，４） １．５１で洗浄
後、濃度が０％から２０％１で直線的に増加するアセト
ン水（合計６０１）で溶出した。溶出液を２５０ｍｔず
つ分画し９画分９から画分１３までの合計１．２５１の
溶出液を得た。
この溶出液を、３％のアルキルジメチルベンジルアンモ
ニウムクロライド〔東京化成（内装〕を含むメチレンク
ロライド１．Ｏｌで抽出を行い、続いて、抽出後のメチ
レンクロライド層を８％ヨウ化ナトリウム水溶液３ＱＱ
ｍｌで再抽出を行った。
ニウムクロライド〔東京化成（内装〕を含むメチレンク
ロライド１．Ｏｌで抽出を行い、続いて、抽出後のメチ
レンクロライド層を８％ヨウ化ナトリウム水溶液３ＱＱ
ｍｌで再抽出を行った。
得られた抽出液３００ｍ１を予め０．０１ Ｍ リン酸
緩衝液（ｐＨ８，４）で平衡化したバイオゲルＰ−２（
前出）充填カラム（８ｘｔ００ｏ＋５）に導き、上記緩
衝液で展開し、バイオアッセイを行い、活性画分１．２
１を集めた。
緩衝液（ｐＨ８，４）で平衡化したバイオゲルＰ−２（
前出）充填カラム（８ｘｔ００ｏ＋５）に導き、上記緩
衝液で展開し、バイオアッセイを行い、活性画分１．２
１を集めた。
この溶出液をダイヤイオンＨＰ ＝ ２０充填カラム（
４×６０Ｃ′Ｉｎ）に吸着させ、蒸留水６００ｍ１で洗
浄後、＃度が０％から１０％まで直線的に変化するアセ
トン水（合計３．Ｏｌ）で溶出した。溶出液を１５ｍ１
ずつ分画し、バイオアッセイを行い。
４×６０Ｃ′Ｉｎ）に吸着させ、蒸留水６００ｍ１で洗
浄後、＃度が０％から１０％まで直線的に変化するアセ
トン水（合計３．Ｏｌ）で溶出した。溶出液を１５ｍ１
ずつ分画し、バイオアッセイを行い。
画分４１から画分１１５までの合計１．１１の活性画分
を得た。この溶出液を予め０． ＯＩ Ｍ ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨ８，４）で平衡化したＱＡＥ−セファデック
スＡ −２５（１４ｊＪ出）充填カラム（４Ｘ ４０
ｃｍ ）に吸着させ、上記緩衝液５００ｍ１で洗浄後、
濃度が０％から５％まで直線的に増加する食塩水（合計
３．０／）で溶出を行った。溶出液を１５ｍ１ずつ分画
し、バイオアッセイを行い２画分１１２から画分１３９
．までの合計４２０ｍ１の活性画分を得た。
を得た。この溶出液を予め０． ＯＩ Ｍ ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨ８，４）で平衡化したＱＡＥ−セファデック
スＡ −２５（１４ｊＪ出）充填カラム（４Ｘ ４０
ｃｍ ）に吸着させ、上記緩衝液５００ｍ１で洗浄後、
濃度が０％から５％まで直線的に増加する食塩水（合計
３．０／）で溶出を行った。溶出液を１５ｍ１ずつ分画
し、バイオアッセイを行い２画分１１２から画分１３９
．までの合計４２０ｍ１の活性画分を得た。
次に、この活性画分に最終濃度が５％になるように食塩
を加え、夕゛イヤイオンＨＰ−２０ＡＧ［前出］充填カ
ラム（３Ｘ６０α）に吸着させ、脱イオン水で溶出を行
った。溶出液を１５＋＋＋ｌずつ分画し、バイオアッセ
イを行い画分３１から画分４８まで２合計２７０ｍ１の
活性画分を得た。この活性画分を凍結乾燥し、１３５Ｉ
ｎ９の黄褐色の粉末を得た。
を加え、夕゛イヤイオンＨＰ−２０ＡＧ［前出］充填カ
ラム（３Ｘ６０α）に吸着させ、脱イオン水で溶出を行
った。溶出液を１５＋＋＋ｌずつ分画し、バイオアッセ
イを行い画分３１から画分４８まで２合計２７０ｍ１の
活性画分を得た。この活性画分を凍結乾燥し、１３５Ｉ
ｎ９の黄褐色の粉末を得た。
この粉末１３５■を少量の蒸留水に溶解し、セファデッ
クスＧ−１０（前出）充填カラム（２×７０の）に導き
、蒸留水で展開し、バイオアッセイを行い、活性画分合
計６８ｍ１を得た。
クスＧ−１０（前出）充填カラム（２×７０の）に導き
、蒸留水で展開し、バイオアッセイを行い、活性画分合
計６８ｍ１を得た。
これを予め０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，４）で平
衡化したＱＡＥ−セファデックスＡ−２５充填カラム（
４ｘ３０α）に吸着させ、上記緩衝液ｓｏｏｍｌで洗浄
後、濃度が０から５％まで直線的に増加する食塩水（合
計２．４１）で溶出した。溶出液を１３ｍ１ずつ分画し
、バイオアッセイを行い。
衡化したＱＡＥ−セファデックスＡ−２５充填カラム（
４ｘ３０α）に吸着させ、上記緩衝液ｓｏｏｍｌで洗浄
後、濃度が０から５％まで直線的に増加する食塩水（合
計２．４１）で溶出した。溶出液を１３ｍ１ずつ分画し
、バイオアッセイを行い。
画分１１８から画分１３９まで合計２８６ｍ１を得た。
これに、最終濃度が５％になるように食塩な加え、ダイ
ヤイオン）（Ｐ−２０ＡＧ充填カラム（３×６０α）に
吸着させ脱イオン水で溶出を行った。
ヤイオン）（Ｐ−２０ＡＧ充填カラム（３×６０α）に
吸着させ脱イオン水で溶出を行った。
溶出液をｌＱｍ６ずつ分画し、３００ｎｍに、紫外部極
大吸収を有する両分を合計９０ｍ１集めた。
大吸収を有する両分を合計９０ｍ１集めた。
これを、凍結乾燥し、１８＋Ｑの淡黄色の抗生物質０Ａ
−６１２９Ｃ粉末を得た。
−６１２９Ｃ粉末を得た。
得られた抗生物質０Ａ−６１２９０の凍結乾燥標品は次
の特性を示した。
の特性を示した。
（１）形状：淡黄色粉末
（２） 比旋光度： （（Ｚ、ｌ Ｄ １７．４°
（ｃｍ０．５５゜０．０１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ８，
２）（３）元素分析値（Ｃ２０Ｈ２＋ｌ Ｎｓ ０１１
Ｓ２ Ｎａ２ ・２Ｈ２０として）計算値 Ｃ３７，
９１％、Ｈ５，２５％、Ｎ６．６３％。
（ｃｍ０．５５゜０．０１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ８，
２）（３）元素分析値（Ｃ２０Ｈ２＋ｌ Ｎｓ ０１１
Ｓ２ Ｎａ２ ・２Ｈ２０として）計算値 Ｃ３７，
９１％、Ｈ５，２５％、Ｎ６．６３％。
ＳＬｏ、１２％
分析値 Ｃ３７，６１％、Ｉ（５，００％、Ｎ６．３８
％。
％。
８９．５２％
（４）分子量 ５９７．５７３１（外子式Ｃ２ｏＨ２゜
Ｎｓ ＯＩＩ Ｓ２ Ｎａ２ ）（５）紫外部吸収スペ
クトラム（０，ＯＩ Ｍ ＋７７酸緩衝液中、ｐ）（８
，２） λｍａｘ ｎｍ（す： ３００．５（７６００）（６
） 光外部吸収スペクトラム（’ＫＢ ｒ ）の主要
ピーク）（Ｂｙ −１。
Ｎｓ ＯＩＩ Ｓ２ Ｎａ２ ）（５）紫外部吸収スペ
クトラム（０，ＯＩ Ｍ ＋７７酸緩衝液中、ｐ）（８
，２） λｍａｘ ｎｍ（す： ３００．５（７６００）（６
） 光外部吸収スペクトラム（’ＫＢ ｒ ）の主要
ピーク）（Ｂｙ −１。
νｍａｘ ｃｍ 、 １７５０（７Ｉｙ−ラク
タム）１６６０〜１５９５（アミド、カルボキシレート
）１２５０〜１２２０（硫酸エステル） （７）核磁気共鳴スペクトラム（重水中）（内部基１．
４９ （３Ｈ，ｄ 、 Ｊ＝６．５Ｈｚ 、 ＣＨ，−
ＣＨ−）２．４７ （２Ｈ，ｔ 、 Ｊ−７，０Ｈｚ
、 ＮＨ−ＣＨ□−ＣＨ２−Ｃ０）２．７０〜３．１０
（１０Ｈ，ｍ、 Ｃ−４Ｈ２，−ＣＨ２−ＯＨ。
タム）１６６０〜１５９５（アミド、カルボキシレート
）１２５０〜１２２０（硫酸エステル） （７）核磁気共鳴スペクトラム（重水中）（内部基１．
４９ （３Ｈ，ｄ 、 Ｊ＝６．５Ｈｚ 、 ＣＨ，−
ＣＨ−）２．４７ （２Ｈ，ｔ 、 Ｊ−７，０Ｈｚ
、 ＮＨ−ＣＨ□−ＣＨ２−Ｃ０）２．７０〜３．１０
（１０Ｈ，ｍ、 Ｃ−４Ｈ２，−ＣＨ２−ＯＨ。
ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ、５−ＣＨ２−Ｃ）（２−
ＮＨ）４．１０〜４．４３ （ＩＨ，ｍ、 Ｃ−５Ｈ）
４．７８ （ＩＨ，ｄ ｄ 、 Ｊ＝６．５Ｈ＊ 、
Ｊ＝９．５Ｈｚ 。
ＮＨ）４．１０〜４．４３ （ＩＨ，ｍ、 Ｃ−５Ｈ）
４．７８ （ＩＨ，ｄ ｄ 、 Ｊ＝６．５Ｈ＊ 、
Ｊ＝９．５Ｈｚ 。
特許出願人 三楽オーシャン株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 り式 （１） 式中、Ｒは水素原子、水酸基又はヒドロキンスルホニル
オキシ基を表ワす。 で示される化合物及びそれらの塩。 ２式 式中、Ｒは水素原子、水酸基又はヒドロキンスルホニル
オキシ基を表わす。 で示される化合物又はそれらの塩の一級水酸基をＡＴＰ
の存在ドにリン酸化し得る能力を有する菌体もしくは該
菌体処理物を用いて酵素反応を行うことを特徴とする上
記式（１１の化合物の製造方法。 ３、一体もしくは菌体処理物がブレビバクテリウム・ア
ンモニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ−ｉｕｍ
ａｒｒｍ−ｏｎｉａｇｅｎｅｓ’） ＡＴＣＣ６８７１
由来のものである特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４ 酵素反応がｐＨ６〜８．５のリン酸緩衝液中。 Ｍｇイオン及び界面活性剤の含有溶液中で行なわれる特
許請求の範囲第２項及び＄３項記載の方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56156133A JPS5857392A (ja) | 1981-10-02 | 1981-10-02 | 新規な抗生物質ｏａ−６１２９のリン酸エステル |
| US06/422,378 US4508648A (en) | 1981-10-02 | 1982-09-24 | Phosphoric ester of antibiotic OA-6129 |
| DE8282109030T DE3270278D1 (en) | 1981-10-02 | 1982-09-29 | Novel phosphoric ester of antibiotic oa-6129 and its preparation method |
| EP82109030A EP0076466B1 (en) | 1981-10-02 | 1982-09-29 | Novel phosphoric ester of antibiotic oa-6129 and its preparation method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56156133A JPS5857392A (ja) | 1981-10-02 | 1981-10-02 | 新規な抗生物質ｏａ−６１２９のリン酸エステル |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1229262A Division JPH02138287A (ja) | 1989-09-06 | 1989-09-06 | 新規な抗生物質ｏａ‐６１２９のリン酸エステル |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5857392A true JPS5857392A (ja) | 1983-04-05 |
| JPS6363550B2 JPS6363550B2 (ja) | 1988-12-07 |
Family
ID=15621038
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56156133A Granted JPS5857392A (ja) | 1981-10-02 | 1981-10-02 | 新規な抗生物質ｏａ−６１２９のリン酸エステル |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4508648A (ja) |
| EP (1) | EP0076466B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5857392A (ja) |
| DE (1) | DE3270278D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62242788A (ja) * | 1986-04-14 | 1987-10-23 | 東芝セラミツクス株式会社 | 焼成容器 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060249213A1 (en) * | 2005-04-21 | 2006-11-09 | Stieler David C | Plastic coated metal heater and water tube assembly |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH632508A5 (de) * | 1975-11-21 | 1982-10-15 | Merck & Co Inc | Verfahren zur herstellung von neuen estern des n-acylierten thienamycins. |
| US4235917A (en) * | 1977-05-05 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | N-Alkyl-N-acyl derivatives of thienamycin |
| US4426390A (en) * | 1980-10-01 | 1984-01-17 | Sanraku-Ocean Co., Ltd. | Novel β-lactam compounds, process for producing thereof, and use thereof as medicines |
| DE3277622D1 (en) * | 1981-07-01 | 1987-12-17 | Sanraku Inc | Novel antibiotics and process for production thereof |
-
1981
- 1981-10-02 JP JP56156133A patent/JPS5857392A/ja active Granted
-
1982
- 1982-09-24 US US06/422,378 patent/US4508648A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-09-29 EP EP82109030A patent/EP0076466B1/en not_active Expired
- 1982-09-29 DE DE8282109030T patent/DE3270278D1/de not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62242788A (ja) * | 1986-04-14 | 1987-10-23 | 東芝セラミツクス株式会社 | 焼成容器 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0076466A3 (en) | 1984-05-30 |
| EP0076466B1 (en) | 1986-04-02 |
| DE3270278D1 (en) | 1986-05-07 |
| JPS6363550B2 (ja) | 1988-12-07 |
| US4508648A (en) | 1985-04-02 |
| EP0076466A2 (en) | 1983-04-13 |
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