JPS585037B2

JPS585037B2 - シンコウセイブツシツｓｆ−１７３９ブツシツノセイゾウホウ

Info

Publication number: JPS585037B2
Application number: JP50049131A
Authority: JP
Inventors: 井上重治; 近藤泰光; 小川安昭; 小島道男; 庄村喬; 仁井田太郎; 大場和則; 鶴岡崇士; 渡辺浩
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1975-04-24
Filing date: 1975-04-24
Publication date: 1983-01-28
Also published as: JPS51125798A

Description

【発明の詳細な説明】本発明はストレプトミセス属の菌株を培養することによ
って得られる新抗生物質５Ｆ−１７３９物質の製造法に
関するものである。

本発明者らはストレプトミセス属に属する一菌株の培養
物中にグラム陽性細菌及びダラム陰性細菌に対し、強力
な抗菌作用を示す新規物質が生産され、これを培養物中
から採取しうろことを知り、本発明を完成した。

本発明の方法で使用する５Ｆ−１７３９物質生産菌とし
ては、本発明者らが新たに土壌から分離し、ストレプト
ミセス・グリゼオプラヌスと同定した菌株（ＳＦ−１７
３９株）が用いられる。

ストレプトミセス・グリゼオプラヌス５Ｆ−１７３９株
は微工研に寄託され（微生物受託番号ＦＥＲＭ−ＰＮｏ
、３００２）、次のような菌学的性質を有する。

■形態気菌糸はオートミール寒天、イースト麦芽寒天等で良好
に着生し、胞子形成も豊富である。

分枝は単純分枝で車軸分枝はみられない。

気菌糸の先端はらせん状（ルーズなｏｐｅｎ５ｐｉｒ
ａｌ）である。

菌核等の特殊構造は観察されない。電子顕微鏡による胞
子の表面構造はＷａｒｔｙであるが、部分的には５ｐｉ
ｎｙに近い形状も観察される。

胞子は楕円〜短円筒型で０．６〜０．８×０．８〜１．
２ミクロンの大きさを有し、通常１０胞子以上連鎖する
。

■ 各種培地上の生育状態 ■ 生理的性質（１）生育温度範囲：イースト麦芽寒天培地において２
０〜４０℃の温度範囲で生育する。

（２）ゼラチンの液化＝２０℃にて２１日以上の培養で
ゆっくり液化する。

（３）スターチの加水分解：陽性（２８℃で強力（４）
脱脂乳の凝固：陽性（２８℃、３７℃で強力）脱脂乳のペプトン化：陽性（２８℃、３７℃）（５）メラニン様色素の生成：陰性 ■ 炭素源の利用性（ブリードハム・ボッブ寒天培地、
２８℃培養）Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−マンニトール、■ーイノシトール、Ｌ−アラビノー
ス、ラムノース、シュクロースを利用してよく発育し、
ラフィノースは利用しない。

以上の性状を要約すると、ＳＦ−１７３９株はストレプ
トミセス属に属し、気菌糸先端はらせん状、胞子表面構
造はＷａｒｔｙである。

種々の培地上での発育は灰色〜灰黄褐色で気菌糸色調は
灰色となる。

メラニン様色素を生成せず、その他の可溶性色素も認め
られない。

ＳＦ−１７３９株のこのような性状はストレプトミセス
属の菌種の中でストレプトミセス・グリゼオプラヌス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｐｌａｎｕｓ
）の性状と最も近似している。

即ち、らせん糸を形成し、胞子表面はＷａｒｔｙであり
、灰色の気菌糸を着生し、メラニン色素を生成しない点
で両者はよく一致している。

ＩＳＰ（インターナショナル・ストレプトミセス・プロ
ジェクト）の記載（Ｉｎｔｅｒ−ｎａｔｉｏｎａｌＪ
ｏｕｒｎａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔ
ｅｒｉｏｌ−ｏｇｙ１８巻、１２４〜１２６頁、１９
６８年）によるストレプトミセス・グリゼオプラヌスと
ＳＦ−１７３９株を比較すると、ＩＳＰの記載法はスタ
ーチ寒天での発育が貧弱であり、ラフィノースを利用し
、一方、シュクロース、■ーイノシトール、Ｄ−マンニ
トール及びラムノースを利用しない点でＳＦ−１７３９
株と相違しているが、形態、特に胞子表面構造がＳｐｉ
ｎｙに近いＷａｒｔｙでＳＦ−１７３９株と極めてよく
一致している。

以上より、ＳＦ−１７３９株はＩＳＰの記載法とは炭素
源利用性等において相違するものの形態が完全に一致し
、その他の基体性状もよく一致するから、これをストレ
プトミセス・グリゼオプラヌスの種に属させることは妥
当であり、従って本発明者らは、ＳＦ−１７３９株をス
トレプトミセス・グリゼオプラヌス・ＳＦ−１７３９（
Ｓｔｒｅ−ｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｐｌａｎｕ
ｓＳＦ−１７３９）と命名した。

ＳＦ−１７３９株は他のストレプトミセス属の菌株の場
合にみられるようにその性状が変化しやすく、例えば、
紫外線、エックス線、高周波、放射線、薬品等を用いる
人工的変異手段で変異しうるものであり、このような変
異株であってもＳＦ−１７３９物質の生産能を有するス
トレプトミセス属の菌はすべて本発明の方法に使用する
ことが出来る。

本発明の方法では前記菌株を通常の微生物が利用しうる
栄養物を含有する培地で培養する。

栄養源としては、従来ストレプトミセス属の菌の培養に
利用されている公知のものが使用できる。

例えば、炭素源としてグルコース、シュクロース、澱粉
、グリセリン、水あめ、糖みつ、大豆油等を使用しうる
。

また窒素源として大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、ペプト
ン、乾燥酵母、コーンステイープリカー、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム等を使用しうる。

その他、必要に応じて炭酸カルシウム、食塩、塩化カリ
、燐酸塩等の無機塩類を添加するほか、菌の発育を助け
、ＳＦ−１７３９物質の生産を促進するごとき有機及び
無機物を適当に添加することが出来る。

培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同じく、液
体培養法、特に深部培養法が最も適している。

培養は好気的条件で行われ、培養に適当な温度は２５〜
３５℃であるが、多くの場合２８℃付近で培養する。

５Ｆ−１７３９物質の生産は振盪培養、タンク培養共に
２〜６日で最高に達する５Ｆ−１７３９物質の検定に当
っては、次の方法が用いられる。

検定用培地としてポリペプトン０．５％、肉エキス０．
３％、寒天１．５％（ｐＨ７，０：の組成からなる培地
を用いる。

検定菌としてはエシェリヒア・コリＮＩＨＪ株（Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）を用いる。

５Ｆ−１７３９物質はこれを用いた検定において３．１
２５ｍｃｇ／ｍｌ〜５０ｍｃｇ／ｍｌにおいて濃度の対
数と阻止円径との関係は直線関係を示し、それぞれ１２
．５〜２１．３ｍｍの阻止内を与える（ペーパーディス
ク平板法）。

上述した培養で５Ｆ−１７３９物質は培養液中に蓄積さ
れる。

５Ｆ−１７３９物質は後述する如く、塩基性、半水溶性
物質である。

この物質の採取の方法としては、塩基性、半水溶性天然
物を採取する際に用いられる公知の方法を全て適用でき
る。

例えば、水と任意に混合することのない溶剤、ｎ−ブタ
ノール、酢酸エチル、酢酸ブチル、ベンゼン、エーテル
等の溶剤を用い培養ろ液を塩基性にし、食塩、硫安等で
飽和させたものから溶剤抽出される。

又、ＩＲＣ−５０，ＣＧ−５０，ＩＲ−１２０，Ｄｏｗ
ｅｘ５０Ｗ等の陽イオン交換樹脂等に吸着され、塩酸、
硫酸等の酸にて溶離される３さらに高純度のものを得る
ためには上記抽出方法の組合わせの他にＸＡＤ−２等の
樹脂による吸着、脱離、セファデックスＧ−１０，Ｃ，
Ｍ、セファデックス等のカラムクロマトグラフィーによ
る精製、エーテル溶液中における、ピクラートとしての
沈澱法等があげられる。

本物質は以下に述べる性状から既知の該当物質はなく新
物質と認められる。

本発明の方法で得られた５Ｆ−１７３９物質は遊離塩基
としては不安定で容易に分解するので通常酸塩として単
離保存される。

その一例として、塩酸塩としての理化学的性状は次の通
りである。

形状：赤橙色粉末含有する元素：炭素、水素、窒素、酸素（他に塩酸由来
の塩素）分子量：４２７（滴定値）元素分析値：炭素５６．７０％、水素６．４０％、窒素
８．８７％、酸素２１．６７％、塩素６．９９％融点：明確な融点を示さず１２０℃から１３５℃に
て分解比旋光度：〔α〕■＋１６３°（Ｃ０，５゜０．１規定
塩酸）紫外部吸収スペクトル：第１図に示す通りである。

光外部吸収スペクトル：第２図に示す通りである。

溶解性：水に易溶、メタノールに可溶、ベンゼン、エー
テル、石油エーテル等に不溶。

安定性：室温、ｐＨ４以下の水溶液で比較的安定、ｐＨ
７以上では不安定呈色反応ニゲレイク・リーバツク、レミュー試薬陽も１
０％硫酸（１１０℃）にて発色、ニンヒドリンは陰性。

薄層クロマトグラフィー：シリカゲルプレートで、クロ
ロホルム・メタノール（３：１）ではＲｆ＝０．９２．
ｎ−ブタノール・酢酸・水（２：１：１）ではＲｆ＝０
．４７又５Ｆ−１７３９物質のピクラートとしての性状は次の
通りである。

形状：黄色粉末融点：明確な融点を示さず、１２５°〜１３０℃に
て分解元素分析値：炭素４６．５０％、水素３．９７％、窒素
１３．７４％紫外部吸収スペクトル：第３図に示す通り。

光外部吸収スペクトル：第４図に示す通り。

次に５Ｆ−１７３９物質塩酸塩のブロス・グイリュージ
ョン法による抗菌活性を示す。

最小阻止濃度ｍｃｇ／ｍｌバチルス・ズブチリス＜０．００２ＡＴ
ＣＣ６６３３スタフィロコッカス・アウレウス＜０．００２０９
Ｐサルシナ・ルテア＜０．００２エシ
エリヒア・コリ０．０４エシエリヒ
ア・コリに一１２Ｒ０，１９プロテウス・ブルガリス０．０９クレブ
ジラ・プニュモニエ０．１９シユウトモナ
ス・エルギノザ０．３９又、このものの急性
毒性はマウスを５匹使用して１０ｍｇ／Ｋｇで静脈注射
を行ったところ金側死亡した。

以下実施例をあげて本発明を説明する。

実施例１ストレプトミセス・グリゼオプラヌス５Ｆ−１７３９株
（微生物受託番号ＦＥＲＭ−ＰＡ３００２）の胞子を澱
粉１．０％、大豆粉３．０％（ｐＨ７，０）の液体培地
１．６１に接種し、２８℃で３０時間振盪培養し、その
培養物を種母とする（坂ロフラスコ１６本使用）。

水あめ３．０％、大豆粉２．０％、牛肉エキス１．０％
、小麦胚芽１．０％食塩０．３％（ｐＨ６，６）の液体
培地７０１に前記の種母を接種し、２８℃で７２時間通
気攪拌培養した（５０ドジャーファーメンタ−２基使用
）。

この培養液を６規定塩酸でｐＨ３〜４に調整したのち、
濾過助剤バイフロス−パーセルを加えて渥過する。

濾液約４７１を３規定苛性ソーダでｐＨ６に調整後、約
４１のイオン交換樹脂ＩＲＣ−５０（Ｈ＋）のカラムに
通過させ、抗菌性物質を吸着させる。

充分水洗したのち０．１〜０．２規定の塩酸水にて溶離
する。

エシェリヒア・コリに抗菌活性を示す部分的５１を集め
て食塩飽和とし、３規定苛性ソーダでｐＨ８，５に調整
後１．５１の酢酸エチルで２回抽出する。

この酢酸エチル抽出液からさらに０．０５規定の塩酸水
２００ｍ１にて再抽出する。

この水溶液を残存する酢酸エチルを留去したのち、１規
定苛性ソーダでｐＨ６に調整してＸＡＤ−２，２００ｍ
１に吸着させ、５０％のアセトン水にて溶離する。

活性部をあつめアセトンを留去したのち約５０ｍ１まで
濃縮し、凍結乾燥を行い、約１９の粗塩酸塩を得た。

このうちの３００ｍｇを約２ｍｌの水にとかし、０Ｍセ
ファデックス、Ｃ−２５（２，１×７５ｃｍ）で水を展
開液として、クロマトグラフィーを行う。

１５ｇ分画で分画９７〜１４０をあつめ、ＸＡＤ−２，
１００ｍ１に吸着させ、５０％アセトンにて溶離する。

活性部のアセトンを留去し、水溶液を凍結乾燥して、３
５■の塩酸塩を得た。

融点：はぼ１２０°〜１３５℃（分解）実施例２実施例１と同様にして得た培養濾液５０１を約３１のイ
オン交換樹脂ＩＲＣ−５０（Ｈ＋）に吸着させ、０．２
規定の塩酸水で溶離する。

活性部分的４．５１を食塩飽和とし、苛性ソーダにてｐ
Ｈ８，５に調整後、１１の酢酸エチルで２度抽出する。

この酢酸エチル液から０．０５規定の塩酸水２００ｍ１
で再抽出する。

この水溶液を約５０ｍ１に減圧濃縮し、食塩を飽和させ
る。

しかる後、苛性ソーダにてｐＨを８．５に調整し、５０
ｍ１のエチルエーテルにて４〜５回抽出を行う。

このエーテル溶液を硫酸ナトリウムで脱水後、ピクリン
酸のエーテル溶液を加えるとピクラートの沈澱を生ずる
。

（約７００ｍｇ）融点：はぼ１２５〜１３０℃（分解）
。

この沈澱物を０．０５規定塩酸５０ｍ１と酢酸エチル５
０ｍ１にとかし水層をさらに３０ｍ１エーテルで２度洗
う。

水層のエーテルを減圧留去したのち１規定苛性ソーダで
ｐＨを６．０に調整する。

これを５０ｍ１のＸＡＤ−２に吸着させ、５０％アセト
ン水で溶離する。

アセトンを留去したのち凍結乾燥して２２０ｍｇの塩酸
塩を得た。

融点：はぼ１２０゜〜１３５℃（分解）。

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｆ−１７３９物質塩酸塩の水、０．５規定塩
酸水、０．５規定苛性ソーダ水における紫外線吸収スペ
クトルを示す図で、第２図は５Ｆ−１７３９物質塩酸塩
のＫＢｒにおける赤外線吸収スペクトルを示す図で、第
３図は５Ｆ−１７３９物質ピクラートの５０％含水メタ
ノールにおける紫外線吸収スペクトルを示す図で、第４
図は５Ｆ−１７３９物質ピクラートのＫＢｒにおける赤
外線吸収スペクトルを示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

１ストレプトミセス属に属する５Ｆ−１７３９物質生
産菌を培養し、得られた培養物から５Ｆ−１７３９物質
を採取することを特徴とする新抗生物質５Ｆ−１７３９
物質の製造法。