JPS58111699A - 大便中のヒモトリプシン又はトリプシンの活性測定法及び測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 慢性の肺臓炎であるとか、乳児においては膵ｉｉ＊艙症
であるとかの疑いがある場合、＃臓機能不全の診断は重
要かパラメーターであるが、この臨床−化学的検出法は
今日まで十分に解決されていない、このための最も信頼
で會る方法は一般にパンクレオチミン／セクレチン試験
である。この際、パンクレオチ２ン及びセクレチンによ
り刺激した後、膵臓分泌物をゾンデで集め、引き続き次
のパラメーターを検査す・る；容量、アｉラーぜ、リパ
ーゼ、トリプシン及びヒモトリプシンのげカルボネート
濃変−活性、この方法の主な欠点は時間がかかり、技術
的に煩雑であり、患者に大きな負担を負わせることであ
る。

更に、慢性膵臓炎及び膵臓線維症の検出テスＦ及び経過
コントロールの方法は大便中のヒモトリプシン又はトリ
プシンの測定である。慢性膵臓炎及び膵臓線維症の場合
、トリプシン及びヒモトリプシンの活性値は低下し、こ
の際ヒモトリプシン値はより良好なパラメーターである
ことが示されている。、大便中のヒモトリプシン又はト
リプシンの測定のためＫは、大便懸濁液を特異な基質の
水性メタノール溶液と混合し、一定の時間皐位内に遊離
したアｉ）酸を測定する。遊離アミノ酸の測定は例えば
アルカリ液。

特に苛性ソーダ液での滴定により行なわれる（　ｐＨ−
＠ｔａｔ　−Ｖｅｒｆａｈｒｅｎ　％Ｈａｖｅｒｂａｃ
ｋ等着、ｅａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏ１ｏｇｙ第４４巻（
１９６５年）、５８８−５９７：ムｍｍａｎｎ著、ｊＦ
Ｏｒｔｌ！１ｃｔｌｒｉｔｔ＠ｉｎ　ｃｌ＠ｒ　Ｐａｎ
ｋｒｅａａｆｕｎｋｔｉｏｎａｄｉａｇｎｏａｔｉｋ　
。

８ｐｒｉｎｇ＠ｒ　Ｖ８ｒ１ｇｋｇ　％Ｂ＠ｒｌｉｎ　
、　１１ｓｉｄｅＡｂｅｒｇ　。

Ｉｋｗ　Ｙｏｒｋ　（１９６７）　）か又は、溶液のμ
値の０．１皐位の低下に導び〈時間を測定する（ｐＨ−
ｄｒｏｐ　−Ｖｓｒｆａｈｒｅｎ　、　Ｒｏｂｉｎａｏ
ｎ　、１３ｍ１ｔｈ　。

１１１１１ｏｔｔ著、０Ｌｉｎ、　Ｏｈｉｍ、ムｅｔａ
第６２巻（１９７５年）、第２２５〜２２９頁）。

しかしながら、大便中のヒモトリプシン又はトリプシン
の活性を測定するためのすべての公知法は高い装置費用
及び時間がかかるという欠点を有する。

迅速で簡単な測光法による活性の測定は従来可能ではな
かつ九二ある１度正確な測定の九めには、少量の試料使
用にお込ては測定すべき測定容量が小さすぎ、多量の試
料使用においては懸濁小片による自体の色及び濁りがあ
まりにも強い、大便懸濁液の遠心分離後の測光法による
測定は、酵素が比較的しっかりと大便片に結合しており
、遠心分離の後、はとんど完全に沈殿物中に存在してい
るか又は、不完全にかつ再現性なく溶解するので不可能
である。

従って１本発明の課題は迅速で、簡単で、正確でかつ良
好な再現性のある大便中のヒモトリ、１１１ ゾシン又はトリプシンの活性を測定するための方法なみ
匹だすことである。この課題は本発明による活性測定法
により解決する。

の大便懸濁液による好適な基質の分解速度を測定するこ
とによる方法において、界面活性剤の存在下に大便を懸
濁させることを特徴とする大便中のヒモトリプシン又は
トリプシンの活性測定法である。

基質の分解の速度の測定は技術水準において公知の方法
により、例えば遊離アきノ酸をアルカリ液で滴定するこ
とにより（−一スタットー法）行なわれる。界面活性剤
の存在下に本発明和よる方法を実施する場合、一般に酵
素活性の９０憾より多くが溶解化されるので、基質分解
の反応速度は著しく高まり、基質の見かけ上のＩｎ値は
下がり（活性イヒファクター、約２〜１０入これにより
従来現われた問題（特に大便片への酵素の結合及びある
基質において結晶酵素に比較して未処理の大便試料の意
外に大きなｘｍ−値）が克服されることが判明した。特
にこのことにより、基質の分解速度を測光法で迅速に、
簡単に、正確にそして僅かな基質使用で測定することか
可能である。界面活性剤の存在する本発明による方法で
得られた結果は、牛膵臓からの純粋なα−ヒモトリプシ
ンにおいて界面活性剤の存在下又は存在なしで実施する
際に全く差異が見られなかったので４１１ＰＫ意外であ
る。

界面活性剤としては原則的にすべての好適な界面活性剤
、例えばアニオン系又は両性界面活性剤を使用すること
ができるが、有利には非イオン系界面活性剤、特にカチ
オン系界面活性剤を使用することかで會る拳 アニオン系界面活性剤は例えばアルカンスルホネート、
オレフィンスルホネート、例えばクメンスルホネート、
エステルスルホＡ−）、フルキルアリールスルホネート
、特にドデシルペンゾールスルホネートのタイプのアル
キルペン・戸−ルスルホネート及びアルキルナフタリン
ヌルホネート、アルキルスルフェート、　例、ｔｔｌ−
トリウム−ラウリルスルフェート、エーテルスルフェー
ト又は脂肪族アルコールヌルフェート。

脂肪酸及びコール酸の塩であり；両性界面活性剤はアニ
オン活性及びカチオン活性−水性基を有するもの、例え
ばベタイン構造を有するメリーに’）７誘導体、スルホ
ペタイ／及びレシチンであり；非イオン系界面活性剤は
例えばポリエーテル、特にアルキルフェノールポリメリ
コールエー予ル及び他の脂肪酸、脂肪酸ア（Ｐ、脂肪ア
ミン及び脂肪アルコール、のエトキシル化生成物、例え
ばエトキシル化ラウリルアルコール、ゾロぎレン及びエ
チレンオキシＶからのポリマー、ポリオキシエチレン−
アルキルエーテル又はポリオキシエチレン−ノニルフェ
ニルエーテル、ポリオキシエチレン−ツルはタンーモノ
オレアート又はポリオキシエチレンーソルビタノーモノ
ラウレアート、プロピレンオキシド／エチレンジアミン
／エチレンオキシドからなる付加生成物、ポリアルコー
ルの脂肪酸エステル及びアミンオキシドであり；カチオ
ン系界面活性剤は例えば直鎖及び環状アンモニウム化合
物、例工ばＮ−セチル−Ｎ−エチル−モルホリンメトス
ルフェート、ペンデルコニウムクロリド及び他の四級ア
ンモニウム塩、アミン塩、ぎリジニウム塩又は四級脂肪
族アきンーボリゲリコールエーテルである。

最適な界面活性剤の選択は他の反応条件、特に酵素及び
基質の種類、塩の種類及び濃度に依るし、媒体のβ値に
も依る。

本発明方法にとってまず第１に好適なカチオン系界面活
性剤のうちで最も強い活性化効果を示すのは四級アンモ
ニウム化合物特に式ＲｘＲ５９ＣｏＨｓ）＊　（式中、
Ｒ工は有利に炭素原子数８〜１４のアルキル基、特にラ
ウリル基及び七チル基を表わし、Ｒ，は有利に炭素原子
数１〜５の低級アルキル基又はアラルキル基、又はヒド
ロキシアルキル基、特にメチル基又はベンジル基を表わ
す、）及びアルキル基中に炭素原子数有利に１２〜１８
のアルキルピリジニウム塙。

例えばラウリルビリゾニウ＾クロリド、ラウリルビ＋）
ｙ＝つ７．．３に７エ二−１及び４１にへヤケデシルピ
リジニウムクロリドである。本発明方法にとって特に好
適な界面活性剤はラウリル−トリメチルーアンモエウム
クロリｒである。

大便の懸濁に使用した均質化溶液中の界面活性剤の濃度
は一般に約０．０２〜約１０重Ｉｌ唾、有利に０．５〜
５重量鴫である。測定溶液（大便懸濁液及び基質溶液）
中の界面活性剤の一度は有利に約０．０００５〜０．５
、及び有利に０．０１〜０．３重暑気であるのが良い。

懸濁液中の大便試料濃度は例えば基質ａｕｃｃ−ムｊａ
　−ＡＡａ　−Ｐｒ。

−Ｐｈｅ　−ｐＮムを使用する際０．２〜２ｔｌＩであ
る。

大便の懸濁のために使用する均質化溶液が界面活性剤の
他に１８以上の水溶性塩、例えばアルカリ合鴨塩化物及
び／又はアルカリ土類金属塩化物又は硫酸塩を含有して
いるのが有利である。特に有利であるのは　Ｎａ０４１
００〜１０００１００Ｏ／ｊ又はｏａｏｚ、　２０〜５
００　ｍＭｏｔ／ｊの含量、又は両方の塩の前記製置範
囲での組み合わせである。有機塩、例えば酢酸塩又はク
エン酸塩、並びに他めがチオンの塩も好適である。塩は
イオン強度２０〜１０００　ｍＶａｔ／ｊに相応する濃
度で存在するのが有利である。

界面活性剤及び塩（イオン強度）を含有する均質化溶液
により酵素活性の相加以上の上昇（反応速度の上界）が
生じた。言い換えると界面活性剤の存在又は塩の存在で
得られる値の総計よりも上昇が大であるということが意
外にも′判明した。更に、塩と界面活性剤の組み合わせ
によりはじめて（個々の成分とは異なり）、小片に結合
し九酵素の一定で高く、かつ再現性のある部分が溶解す
る。

基質としては一般に大便中のヒモトリプシン又はトリプ
シンの活性を測定するための公知技術から従来の方法に
より好適であるとして公知の基質を使用する（参照：例
えばＧｒ６ｇｓｍａｎ著、Ｐｒｏｃ、　８ｏｃ、　Ｂｉ
ｏｌ、　Ｍｅｄ、第１１０巻（１９６２年）、第４１頁
Ｓ　ＤｅＬ　Ｍａｒ等著、ムｎａｐ、　Ｂｉｏｃｈ＠ｍ
。

第９９巻（１９７９年）、第３１６頁；ナカヤマ等着、
：ｆ、Ｂｉｏｌ、　Ｏｈ＠ｍ、第２５４巻（１０）、１
９７９年、第４０２７〜４０３２頁）、特に水溶性、安
定性、ｘｍ値及び速度定数に関して、ヒモトリプシン測
定にＡｊａ　−ＡＬａ　−Ｐｈｅ　−ｐＮム及び特に８
ｕ（！Ｏ−ムＡａ−ムｌａ−Ｐｒｏ　−Ｐｈｅ　−ｐＭ
ム及びＭ＠ｏ　−８１ｃｃ−ムｒｇ　−ｐｒｏ　−Ｔｙ
ｒ　−ｐＨムが特に好適であることが判明しており；こ
れらは特に測光法に非常に、好適である。トリプシン活
性の測定に非常に好適である基質は例えばクロ■ モチーム　ＴＲＹ　　（カルボベンゾキシ−バリ嘉−〆
リシル−アルギニン−ｐ−ニトロアニＩＪ　トーアセテ
ート）である。

試薬溶液の製造のためｋは基質を水に又は水と有機溶剤
からの混合物に溶かす。この際、有機溶剤は基質の溶解
補助剤として働伊、例えばアセトニトリル、ジメチルス
ルホキシド、アセトン又はメタノールである。試薬溶液
は更に有利に均質化溶液に使用しｔと同じ塩を含有して
いる；試薬湛液中のこれらの塩の酸度は一般に均質化溶
液中の濃度より低い；全塩濃度は有利に約１０〜５００
　ｍＭｏｊ／ｊ、例えば塩化ナトリウム２５０　ｒｎＭ
Ｏ１／を及び塩化カルシウム２０．１．ｈｉｃ、ｔ７ｔ
である。

測定の実施のためには均質化溶液中の大代試料の懸濁液
又は透明に遠心分離をした遠心分離上澄液の一定量を試
薬溶液の一定量に加え（例えば試薬溶液２４に試料懸濁
液１００μｔ）、分解の速度を例えば滴定法又は測光法
により測定する。試料懸濁液（試料希釈物）の量は良好
に測定可能な値、例えば良好に測定可能な吸光増加７分
が得られるように、特に予定される酵素活性を目安にす
る。界面活性剤の使用により感電が上昇したので、試料
の量を少量にすることができ、その結果懸濁固体の自己
吸収が少なくなり、はじめて懸濁液で測光法により測定
することが可能となった。懸濁化溶液のβ値は特に重大
ではない；−値は一般に３〜１０、特に６〜８の間であ
る。試料懸濁液及び試薬溶液からの混合物のβ値は一般
に８〜１０の間であり、ｐＨ−９であるのが有利である
；この値を試薬溶液のβ値により調節するの、、、が：
、、１有利である・−億の網筒のためにこの溶液に例え
ばトリス−１緩衝剤、ゲリンンー緩衝剤又はグリシルグ
リシン−緩衝剤のような好適な緩衝剤混合物を加えるこ
とも有利である。緩衝剤濃度は一般に１０〜１０００　
ｍＭｏｔ／ｌ　、特に５０〜２００　ｍＭｏｔ／ｌであ
る。

界面中に存在するヒモトリプシン量のみを把握するため
の配量装置を使用する場合、例えば起こるような著しく
少量のヒモトリプシン量が存在する場合、特に感電の良
い検出法を使用することが有利である。この種の敏感な
反応はｙ、　Ｂｉｏｌ、　Ｏｈａｍ、　ｉｇ　１２８巻
（１９３９年）。

第５３７頁中に記載されておりデラットン／マーシャル
（Ｂｒａｔｔｏｎ／Ｍａｒａｈａｌｌ）−反応として公
知である。この反応は亜硝酸ナトリウム及びＮ−α−ナ
フチルエチレンシアきンの添加、及び引き続く酸付加に
基ずく。この際、酸としては有利にトリクロル酢酸又は
同様に強度な酸を使用する。

測定は手で、又は自動的な分析装置で実施す１１：。

ることかできる。測光法による活性測定のために、特に
自動測光法測定（吸光測定）のためＫ、試料懸濁液を測
定の前に透明になるまで遠心分離する。

本発明を実施するために特に有利であるのは西ドイツ国
特許出願ｐ３１３９７０２．ｓ中Ｋ「ペースト状試料の
処理容器及び酵素測定法」という名称で記載した本願出
願人による装置である。本発明による方法により、筒車
で清潔な試料採取、配量、処理及び測定が可能となり。

これ・により患者にも実験者にも負担が転くなる。

次に、実施例につき本願発明の詳細な説明するが、本願
発明はこれにより限定されるものではな込、他に記載の
ない限り憾は重量−を示す。

例　　１ ａ）均質化溶液の製造： Ｎａ０１　　　　　　　：　２．９Ｆ（−５００ｍＭｏ
ｊ／１）ＯａＯＡ２；　１．１Ｆ（１００ｍＭｏｔ／１
）６３％ラウリル−トリメチル−アンそニラムクｏ　Ｉ
Ｊ　ｐ：２．０ｒ（−０，７優） Ｈ２Ｏ（蒸留水）　　　：全１０〇− ｂ）試薬溶液の製造； ５ｕｃｃ−ムｚａ−Ａｚａ−ｐｒｏ−ｐｈｅ−ｐｌｉム
２９．５ダ（０，５ｍｍｏｌ／ｌ　） ＭａＯｊ　　　　　　　　　１．４６Ｆ（２５０ｍｍｏ
ｊｚｌ）””ｔａ　　　　　　　　　２２２ＭｆＣ２０
ｍｍｏｌ／ｌ）緩衝剤　）　＋）ｘ／ａｏｔ、ｐＨ９，
０，６０ｍ　ｍｏｔ７ｔ、全１００ｄＣ）試料の均質化 大便試料的１００ｑを１００倍重量の均質化溶液と混合
し、好適な容器中で処理し、微細な懸濁液とする。

ｄ）測定の実施： １ｃＩＮ測定キユベツト中に試薬溶液２−をピペットで
入れ、２５℃に恒温保持し、試料均質化物１００μＬを
加える。短時間に十分混合し、吸光増加７分を４０５　
ｎｍで測定する。酵素活性／を大便の計算には４０５　
ｎｍ　Ｋおける吸光度上昇７分にファクター２１２をか
ける。

例　　２ 均質化溶液及び試薬溶液の製造及び試料の均質化を例１
により行なう。均質化に続いて溶液が透明になるまで懸
濁液を遠心分離する。遠心分離上澄液から部分量をとり
出し、例１におけるように手で、又は自動分析装置の使
用下に酵素活性を測定する・ 例　　３ ａ）均質化溶液の製造：次の成分を有する水溶液を製造
； トリス／Ｈｏｔ−緩衝剤、ｐＨ９，０６０ｍｍｏｔ／ｚ
ＮａＯｊ　　　　　　　　　　　２５０ｍｍｏｚ／ｚ”
”＊　　　　　　　　　　　２０ｍｍｏｚｙ’４ラウリ
ルートリメチルーアンモニウムクロリｌ’０．７４ｂ）
試薬溶液の製造； 例１と同様に試薬溶液の製造を行なう。

Ｃ）試料の均質化：例１により行なう。

ｄ）測定の実施二側１により行なう。

例　４　（比較例） 例３と同様に行なうが、均質化溶液が全く界面活性剤（
ラウリルートリメチルーアンモニウムクロリｒ）を含有
していガいという点で異なる。例３及び例４による試薬
で同一の試料を比較測定した結果を次に記載する。

試料屋　　　界面活性剤なし　　　界面活性剤あり（例
４）　　　　　（例３） １　　　　　　　３１　　　　　　　　１８１２　　　
　　　　８　　　　　　　　６８３　　　　　　　６　
　　　　　　　４２４　　　　　　　８　　　　　　　
　６８５　　　　　　　２０　　　　　　　　　”１５
９例　　５ ａ）均質化溶液の製造は例１により行なう。

ｂ）試薬溶液の製造二次の成分を有する水溶液を製造す
る二 Ａｔ＆−ムｊａ−Ｐｈｅ　−ｐ−二）ロアニリｌ”ｌｒ
ｎｍｏＬ／ｌＮａＯ２２５０ｍｍｏｊ／１ ＯａＯｌｐ　　　　　　　　　　　　２０　ｍ　ｍｏｔ
／　Ｌトリス／１（０／５−ｍ１衝剤、ｐＨ９，０６０
ｍｒｎｏｔ／ｌ　　　’Ｃ）試料の均質化：大便試料２
００１１ｆを均質化溶液１０−と混合し、好適な装置で
処理し、微細な懸濁液とする。

ｄ）測定の実施： １３キユベツト中に試薬溶液１ｗｌ１をピペットで入れ
、２５℃に恒温保持し、試料均質化物２００μｔと混合
する。短時間で十分に混合し、４０５　ｎｍで吸光炭上
昇を測定する・例　６　（比較例） 例５と同様であるが、均質化溶液が全く界面活性剤を有
しでいないという点が異なる。

同一試料の例５及び例６による結果を次に対比させる。

界面活性剤なし　　　　　界面活性剤あり（例６）　　
　　　　　（例５） 例　　７ ａ）均質化溶液の製造を例１により行なう。

ｂ）試薬溶液の製造二次の成分を有する水溶液を製造す
る： ３−カルざメトキシプロピオニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ
−ピロリル−Ｌ−チロシン−ｐ−ニトロアニＩＪ　Ｉ’
４１１塩０．５　ｍＭｏｊ／ｚ ＮａＯｊ　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５０
ｍＭｏｔ／１ｏａｏｚ、　　　　　　　　　　　　　　
　　　２０ｍＭｏｔ／ｌトリス／ＨＯ１４衝剤、ｐＨ９
，０６ＱｍＭｏｔ７ｔｈ　均質化及び測定は例１により
行なう例　８　（比較例） 例７と同様に行なうが、均質化溶液が全く界面活性剤を
含有していなかという点で異なる。

同一試料を例７及び例８により測定し、その結果を次に
対比させて記載した： 界面活性剤なし　　　　界面活性剤あり（例８）　　　
　　　（例７） 例　　９ トリプシンの測定 ａ）例１により均質化溶液を製造 ｂ）試薬溶液の製造；次の成分を有する水溶液を製造す
る： カルメベンクキシーＬ−パリルーＬ−グリシル−Ｌ−ア
ルヤ二ンーｐ−ニトロアニリドーアセテ−）　　５ｍｍ
ｏｚ／ｚ””　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
０ｍｍｏｚ／ｚＯａ”２　　　　　　　　　　　　　　
　　２０　ｍ　ｍｏｔ／　Ｌトリス／ＨＯ１−緩衝剤、
ｐ）（９，Ｑ　　　　　　（５０ｍ　ｍｏｔ／　ｔＣ）
均質化及びｄ）測定は例１により行なう。

例１０　（比較例） 例９と同様であるが、均質化溶液は全く界面活性剤を含
有していないという点で異なっている０例９及び例１０
による同一の試料を用いての測定績果を次に記載する。

界面活性剤なし　　　　界面活性剤あり（例１０）　　
　　　（例９） ｍ１７分　　　　　　　ｍ１７分 例１１ 大便試料の部分量を好適な装置により、一方が濾紙又は
類似のものによりさえぎられている室中にこの試料が存
在するように配量する。こ■ Ｆ２Ｏ）又はフエカーノスティック　（Ｐａｃａ　−る
。

濾紙の上に、 ラウリルトリメチルアンモニウムクロリド　５０ｒ／ｚ
（５％）””　　　　　　　　　　　　　　　５００　
ｍ　ｍｏｔ／　１０ａ”ｓ　　　　　　　　　　　　　
　　１００ｍｍｏｚ／ｚからなる水性溶解化溶液５０μ
ｔを滴下し、この際、界面のヒモトリプシンは溶解化さ
れ、濾紙により取り込まれる。引き続き濾紙上に次の組
成； ８ｕｃｃ−Ａｔａ−Ａｔａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡ　
　２ｍ　ｍｏｔ／　ｊＮ−α−ナフチルエチレンシア２
ン　　　　５　ｔ／を亜硝酸ナトリウム　　　　　　　
　　　　１ｆ／１）ＩＪス／ＨＯｔ−緩衝剤、ｐ）（９
，０１００ｍｍｏｔ／ｌからなる試薬溶液５０μｔを滴
下する。５分間の反応時間後、濾紙にトリクロル酢酸（
３，２ｍｍｏｌ／ｌ　）　１滴を加えると、試料中のヒ
モトリプシンの存在において強力な紫色の着色が酵素量
の程度により形成される。

例１２　（比較例） 例１１を繰り返すが、酵素の溶解化に使用した溶液は全
く界面活性剤を含有していない・全く可視の着色は現わ
れない。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｔ　水性媒体又は水性／有機性媒体中の大便懸濁液によ
   る好適な基質の分解速度を測定することにより大便中の
   ヒモトリプシン又はトリプシンの活性を測定するための
   方法において、界面活性剤の存在下に大便を懸濁−ｇぜ
   ることを特徴とする大便中のヒモトリプシン又はトリプ
   シンの活性測定法。 ２、基質分解において遊離するアミノ酸を測定する特許
   請求の範囲第１項記載の測定法。 ６、遊離するアミノ酸を塩基で滴定することにより測定
   する特許請求の範囲第２項記載の測定法・ ４、基質の分解速度を測光法により測定する特許請求の
   範囲第１項記載の測定法・ ５、測定を大便懸濁液又は該懸濁液の遠心分離により得
   られた遠心分離上澄液を用いて実施する特許請求の範囲
   第１項〜ｌ／Ｅ４項のいずれか１項に記載の測定法。 ６、測定を手動で行なうか、又は自動分析装置で行なう
   特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれか１項に記載の
   測定法。 Ｚ　界面活性剤としてカチオン系界面活性剤又は非イオ
   ン系界面活性剤を使用する特許請求の範囲第１項〜第６
   項のいずれか１項に記載の測定法。 ８、界面活性剤として四級アンモニウム塩又はアルキル
   ｔリジニウム塙、特にラウリルートリメチルーアンモニ
   ウムクロリｒを使用する特許請求の範囲第７項記載の測
   定法。 ９　大便を懸濁させるために使用する均質化溶液中の界
   面活性剤一度は約０．０２〜約１０重量憾、有利に０．
   ５〜５重量憾暑気る特許請求の範囲第１項〜第８項のい
   ずれか１項に記載の測定法。 １０、大便を懸濁させる光めに使用する均質化溶液が界
   面活性剤の他に１種以上の水溶性塩を含有する特許請求
   の範囲第１項〜９項のいずれか１項に記載の測定法。 １１、均質化溶液がナトリウム塩及び／又はカルシウム
   塩を含有する特許請求の範囲第１０項記載の測定法。 １２、イオン強度が２０〜１０００ｍＶａｊ／Ａテある
   特許請求の範囲第１０項又は１１項記載の測定法。 １３、ヒモトリプシンを測定する特許請求の範囲第１項
   〜第１２項のいずれか１項に記載の測定法０ １４、基質としてＡＡａ−ムＡａ　−Ｐｈａ　−ｐＨム
   、ＥｉｔｌＣＯ−Ａｔ＆−五４６−１’ｒｏ　−Ｐｈｅ
   　−ｐＨム又はＭｅＯ−ＢＨＣ（２−ムｒｇ　−Ｐｒｏ
   　−’ｒｙｒ　−ｐＨムを使用する４ＩＩＩｆ請求の範
   囲第１０項記載の測定法。 １５、）ＩＪデシンを測定する特許請求の範囲第１項〜
   第１２項のいずれを１項に記載の測定法。 １６、基質としてカル？ベンゾキシ−Ｖａｊ　−ＧＬｙ
   −ムｒｇ　−ｐｌｉム−アセテートを使用する特許請求
   の範囲第１５項記載の測定法。 １７、界面活性剤の存在下に大便を懸濁させて作った、
   水性媒体又は水性／有機性媒体中の大便懸濁液による好
   適な基質の分解速度を測定することにより大便中のヒモ
   トリプシン又はトリプシンの活性を測定するための方法
   を実施するための試薬において、界面活性剤、酵素基質
   、水溶性塩及び水を含有しており、−値７〜１１である
   ことを特許とする大便中のヒモトリプシン又はトリプシ
   ンの活性測定試薬。 １８、　　界面活性剤　　　　　０．０２〜１０重量憾
   、酵暑気質　　　０−０５〜５ｍＭｏｚ／ｚ、、水溶性
   塩　　　２０〜１０００１００Ｏ／４及び緩衝剤、ｐＨ
   ７〜１１　１０〜１０００１００Ｏ／Ａを含有する特許
   請求の範囲第１７項記載の試薬。 １９　　界面活性剤　　　　０．５〜５重量憾暑気　　
   　　質　　　　　０．２〜２　ｍＭｏｔ／を及び”＆”
   、　　　　　　　　　１００〜１０００１００Ｏ／を及
   び１５Ｚｋ！Ｏａ　０４．　　　　　　　　　２０〜５
   ００ｍＭｏｊ　／　Ｌ　及ヒトリヌ緩衝剤　ｐＪ（８〜
   １０　５０〜２００ｍＭｏｊ／ｌを含有する特許請求の
   範囲第１８項記載の試薬。