JPH1180185A - オリゴヌクレオチドの化学合成法 - Google Patents
オリゴヌクレオチドの化学合成法Info
- Publication number
- JPH1180185A JPH1180185A JP9241292A JP24129297A JPH1180185A JP H1180185 A JPH1180185 A JP H1180185A JP 9241292 A JP9241292 A JP 9241292A JP 24129297 A JP24129297 A JP 24129297A JP H1180185 A JPH1180185 A JP H1180185A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- base
- phosphoramidite
- unprotected
- oligonucleotide
- nucleoside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 34
- -1 nucleoside phosphoramidite Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 5
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M triflate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 4
- IWYHWZTYVNIDAE-UHFFFAOYSA-N 1h-benzimidazol-1-ium;trifluoromethanesulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F.C1=CC=C2NC=NC2=C1 IWYHWZTYVNIDAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical class OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 7
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- JNJFONBBNLVENC-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole;trifluoromethanesulfonic acid Chemical compound C1=CNC=N1.OS(=O)(=O)C(F)(F)F JNJFONBBNLVENC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=[NH+]C=C1 AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 1H-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC=NC2=C1 HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000006053 organic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 １００量体以上の長鎖オリゴヌクレオチドを
簡便かつ確実に化学合成することのできる実用的な方法
と、この方法に用いる新規化合物を提供する。 【解決手段】 ホスホロアミダイト法によるオリゴヌク
レオチドの化学合成において、下記の化学式で表される
イミダゾールのトリフルオロメタンスルホン酸塩を用い
て塩基部無保護ヌクレオシドから塩基部無保護ヌクレオ
シドホスホロアミダイトを調製し、この塩基部無保護ヌ
クレオシドホスホロアミダイトを所定の順番でカップリ
ングすることにより、所定の塩基配列からなるオリゴヌ
クレオチドを化学合成する。
簡便かつ確実に化学合成することのできる実用的な方法
と、この方法に用いる新規化合物を提供する。 【解決手段】 ホスホロアミダイト法によるオリゴヌク
レオチドの化学合成において、下記の化学式で表される
イミダゾールのトリフルオロメタンスルホン酸塩を用い
て塩基部無保護ヌクレオシドから塩基部無保護ヌクレオ
シドホスホロアミダイトを調製し、この塩基部無保護ヌ
クレオシドホスホロアミダイトを所定の順番でカップリ
ングすることにより、所定の塩基配列からなるオリゴヌ
クレオチドを化学合成する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この出願の発明は、オリゴヌ
クレオチドの化学合成法に関するものである。さらに詳
しくは、この出願の発明は、塩基部無保護ヌクレオシド
ホスホロアミダイトを構成単位として、長鎖のＤＮＡ断
片またはＲＮＡ断片を簡便かつ確実に化学合成すること
のできる新規な方法と、この方法に用いる新規化合物に
関するものである。
クレオチドの化学合成法に関するものである。さらに詳
しくは、この出願の発明は、塩基部無保護ヌクレオシド
ホスホロアミダイトを構成単位として、長鎖のＤＮＡ断
片またはＲＮＡ断片を簡便かつ確実に化学合成すること
のできる新規な方法と、この方法に用いる新規化合物に
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＤＮＡ断片やＲＮＡ断片糖のオリゴヌク
レオチドを化学的に合成する方法としては、ホスホロア
ミダイト法(Nucleic Acids Research, 17, 7059-7071,
1989)が現在もっとも汎用されている。このホスホロア
ミダイト法は、一般的には、テトラゾールを促進剤とし
たヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレオシドの縮
合反応を鍵反応として用いている。この反応は、通常、
糖部分の水酸基とヌクレオシド塩基部のアミノ基の両方
に競合的に起こるが、所望のヌクレオチド合成のために
は糖部分の水酸基にのみ選択的に反応を起こさせる必要
がある。従って、従来は、以下に反応式を例示したよう
に、アミノ基を保護することでアミノ基への副反応を防
止するようにしていた。
レオチドを化学的に合成する方法としては、ホスホロア
ミダイト法(Nucleic Acids Research, 17, 7059-7071,
1989)が現在もっとも汎用されている。このホスホロア
ミダイト法は、一般的には、テトラゾールを促進剤とし
たヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレオシドの縮
合反応を鍵反応として用いている。この反応は、通常、
糖部分の水酸基とヌクレオシド塩基部のアミノ基の両方
に競合的に起こるが、所望のヌクレオチド合成のために
は糖部分の水酸基にのみ選択的に反応を起こさせる必要
がある。従って、従来は、以下に反応式を例示したよう
に、アミノ基を保護することでアミノ基への副反応を防
止するようにしていた。
【０００３】
【化３】
【０００４】しかしながら、保護基は合成終了時には除
去しなければならないが、この保護基の導入および除去
は、操作的に煩雑な有機反応や高価で有害な試薬を大量
に必要とするため、実用性、経済性、環境保全等の点で
この方法を実施する際の大きな問題点となっていた。こ
のため、アミノ基を保護しないヌクレオシドホスホロア
ミダイトを構成単位とするオリゴヌクレオチドの化学合
成方法が望まれており、その先駆的なものとしては、以
下に反応式を示したようなLetsinger 等の方法(Nucleic
Acids Research, 20, 1879-1882, 1992) が知られてい
る。
去しなければならないが、この保護基の導入および除去
は、操作的に煩雑な有機反応や高価で有害な試薬を大量
に必要とするため、実用性、経済性、環境保全等の点で
この方法を実施する際の大きな問題点となっていた。こ
のため、アミノ基を保護しないヌクレオシドホスホロア
ミダイトを構成単位とするオリゴヌクレオチドの化学合
成方法が望まれており、その先駆的なものとしては、以
下に反応式を示したようなLetsinger 等の方法(Nucleic
Acids Research, 20, 1879-1882, 1992) が知られてい
る。
【０００５】
【化４】
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、このLe
tsinger 等の方法の場合には、(1) 各ステップの縮合収
率が低く（９７％程度：５０量体以上の長鎖オリゴヌク
レオチドの合成には最低でも９９％以上の収率が要求さ
れる）、また市販の自動ＤＮＡ合成装置には適用できな
いため、ＤＮＡ等の化学合成で一般に要求される５０〜
１００量体といった長鎖オリゴヌクレオチドの合成が不
可能である、(2) 反応性の高い特定のヌクレオシドホス
ホロアミダイトしか使用できないため、適用範囲が狭
く、実用性に欠ける、(3) 促進剤として使用するピリジ
ン塩酸塩は極めて保湿性が高く、不安定な化合物である
ため、取り扱いが困難である等の欠点があり、実用性、
一般性に欠け、実際には使用されていないのが実状であ
る。
tsinger 等の方法の場合には、(1) 各ステップの縮合収
率が低く（９７％程度：５０量体以上の長鎖オリゴヌク
レオチドの合成には最低でも９９％以上の収率が要求さ
れる）、また市販の自動ＤＮＡ合成装置には適用できな
いため、ＤＮＡ等の化学合成で一般に要求される５０〜
１００量体といった長鎖オリゴヌクレオチドの合成が不
可能である、(2) 反応性の高い特定のヌクレオシドホス
ホロアミダイトしか使用できないため、適用範囲が狭
く、実用性に欠ける、(3) 促進剤として使用するピリジ
ン塩酸塩は極めて保湿性が高く、不安定な化合物である
ため、取り扱いが困難である等の欠点があり、実用性、
一般性に欠け、実際には使用されていないのが実状であ
る。
【０００７】この出願の発明は、以上のとおりの従来技
術の事情に鑑みてなされたものであり、１００量体以上
の長鎖オリゴヌクレオチドを簡便かつ確実に化学合成す
ることのできる実用的な方法と、この方法に用いる新規
化合物を提供することを目的としている。
術の事情に鑑みてなされたものであり、１００量体以上
の長鎖オリゴヌクレオチドを簡便かつ確実に化学合成す
ることのできる実用的な方法と、この方法に用いる新規
化合物を提供することを目的としている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するものとして、ホスホロアミダイト法によるオ
リゴヌクレオチドの化学合成において、以下の化学式で
表されるイミダゾールのトリフルオロメタンスルホン酸
塩を用いて塩基部無保護ヌクレオシドから塩基部無保護
ヌクレオシドホスホロアミダイトを調製し、この塩基部
無保護ヌクレオシドホスホロアミダイトを所定の順番で
カップリングすることにより、所定の塩基配列からなる
オリゴヌクレオチドを化学合成する方法を提供する。
を解決するものとして、ホスホロアミダイト法によるオ
リゴヌクレオチドの化学合成において、以下の化学式で
表されるイミダゾールのトリフルオロメタンスルホン酸
塩を用いて塩基部無保護ヌクレオシドから塩基部無保護
ヌクレオシドホスホロアミダイトを調製し、この塩基部
無保護ヌクレオシドホスホロアミダイトを所定の順番で
カップリングすることにより、所定の塩基配列からなる
オリゴヌクレオチドを化学合成する方法を提供する。
【０００９】
【化５】
【００１０】また、この発明の上記方法では、カップリ
ングされた塩基部無保護ヌクレオシドホスホロアミダイ
トを、ベンズイミダゾールのトリフルオロメタンスルホ
ン酸塩溶液で処理することを好ましい態様としてもい
る。さらにこの発明は、次の化学式
ングされた塩基部無保護ヌクレオシドホスホロアミダイ
トを、ベンズイミダゾールのトリフルオロメタンスルホ
ン酸塩溶液で処理することを好ましい態様としてもい
る。さらにこの発明は、次の化学式
【００１１】
【化６】
【００１２】で表されるイミダゾールのトリフルオロメ
タンスルホン酸塩をも提供する。すなわち、この出願の
発明者等は、ヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレ
オチドとの縮合反応促進剤として、従来用いられていた
テトラゾールの代わりに新規化合物であるイミダゾール
のトリフルオロメタンスルホン酸塩（以下、イミダゾリ
ウムトリフラートと記載する）を用いて調製した塩基部
無保護ヌクレオシドホスホロアミダイトは、ヌクレオシ
ド塩基部アミノ基への副反応が起こらず、その結果、保
護基の導入、除去等の煩雑な操作を必要とせず、しかも
その合成が市販のＤＮＡ合成機で実施可能であることを
見出してこの発明を完成させた。さらにこの出願の発明
者等は、上記の塩基部無保護ヌクレオシドホスホロアミ
ダイトをカップリングした際に、ベンスイミダゾールの
トリフルオロメタンスルホン酸塩（以下、ベンスイミダ
ゾリウムトリフラートと記載する）のメタノール溶液で
処理すると、塩基部アミノ基への副反応が完全に抑えら
れ、より完全なオリゴヌクレオチドが合成されることを
見出して、この発明を完成させた。
タンスルホン酸塩をも提供する。すなわち、この出願の
発明者等は、ヌクレオシドホスホロアミダイトとヌクレ
オチドとの縮合反応促進剤として、従来用いられていた
テトラゾールの代わりに新規化合物であるイミダゾール
のトリフルオロメタンスルホン酸塩（以下、イミダゾリ
ウムトリフラートと記載する）を用いて調製した塩基部
無保護ヌクレオシドホスホロアミダイトは、ヌクレオシ
ド塩基部アミノ基への副反応が起こらず、その結果、保
護基の導入、除去等の煩雑な操作を必要とせず、しかも
その合成が市販のＤＮＡ合成機で実施可能であることを
見出してこの発明を完成させた。さらにこの出願の発明
者等は、上記の塩基部無保護ヌクレオシドホスホロアミ
ダイトをカップリングした際に、ベンスイミダゾールの
トリフルオロメタンスルホン酸塩（以下、ベンスイミダ
ゾリウムトリフラートと記載する）のメタノール溶液で
処理すると、塩基部アミノ基への副反応が完全に抑えら
れ、より完全なオリゴヌクレオチドが合成されることを
見出して、この発明を完成させた。
【００１３】以下、この発明の実施の形態について詳し
く説明する。
く説明する。
【００１４】
【発明の実施の形態】この発明のイミダゾリウムトリフ
ラートは、例えば後述の実施例１にその調製例を示した
ように、イミダゾールとトリフルオロメタンスルホン酸
をジクロロメタン中、１：１当量に混合することによっ
て調製することができる。このようにして得られたイミ
ダゾリウムトリフラートは、実施例１にも示したよう
に、吸湿性もなく、通常の使用環境状態で極めて安定で
あり、容易に取り扱うことができる。
ラートは、例えば後述の実施例１にその調製例を示した
ように、イミダゾールとトリフルオロメタンスルホン酸
をジクロロメタン中、１：１当量に混合することによっ
て調製することができる。このようにして得られたイミ
ダゾリウムトリフラートは、実施例１にも示したよう
に、吸湿性もなく、通常の使用環境状態で極めて安定で
あり、容易に取り扱うことができる。
【００１５】この発明の化学合成方法においては、上記
のとおりのイミダゾリウムトリフラートを用いて塩基部
無保護ヌクレオシドから塩基部無保護ヌクレオシドホス
ホロアミダイトを調製し、この塩基部無保護ヌクレオシ
ドホスホロアミダイトを構築単位をして、各々を所定の
順番でカップリングすることによって、所定の塩基配列
からなるオリゴヌクレオチドを化学合成する。
のとおりのイミダゾリウムトリフラートを用いて塩基部
無保護ヌクレオシドから塩基部無保護ヌクレオシドホス
ホロアミダイトを調製し、この塩基部無保護ヌクレオシ
ドホスホロアミダイトを構築単位をして、各々を所定の
順番でカップリングすることによって、所定の塩基配列
からなるオリゴヌクレオチドを化学合成する。
【００１６】塩基部無保護ヌクレオシドホスホロアミダ
イトは、例えば、後述の実施例２に例示したように、イ
ミダゾリウムトリフラートを触媒に用いて塩基部無保護
ヌクレオシドをシアノエチルビスアミダイトと反応させ
ることによって調製することができる。この場合、反応
はヌクレオシドの糖部水酸基に選択的に起こるため、Ｄ
ＮＡ合成に使用する４種類のＮ−無保護ヌクレオシドホ
スホロアミダイト、すなわち、デオキシアデノシン、デ
オキシチミジン、デオキシグアノシンおよびチミジンホ
スホロアミダイトを定量的に得ることができる。
イトは、例えば、後述の実施例２に例示したように、イ
ミダゾリウムトリフラートを触媒に用いて塩基部無保護
ヌクレオシドをシアノエチルビスアミダイトと反応させ
ることによって調製することができる。この場合、反応
はヌクレオシドの糖部水酸基に選択的に起こるため、Ｄ
ＮＡ合成に使用する４種類のＮ−無保護ヌクレオシドホ
スホロアミダイト、すなわち、デオキシアデノシン、デ
オキシチミジン、デオキシグアノシンおよびチミジンホ
スホロアミダイトを定量的に得ることができる。
【００１７】以上のとおりに得られた４種類のＮ−無保
護ヌクレオシドホスホロアミダイトを構成単位として、
公知の固相合成法等により、所望の塩基配列からなるオ
リゴヌクレオチドを合成することができる。また、この
合成反応は、市販のＤＮＡ合成機を用い、そのプロトコ
ールに従って行うこともできる。さらに、この発明の方
法では、カップリングした各Ｎ−無保護ヌクレオシドホ
スホロアミダイトを、その都度に、ベンズイミダゾリウ
ムトリフラートの溶液（例えば、エタノール溶液）で処
理するのが好ましい。この処理によって、塩基部アミノ
基への副反応は完全に抑えられ、より完成度の高いオリ
ゴヌクレオチドが合成される。
護ヌクレオシドホスホロアミダイトを構成単位として、
公知の固相合成法等により、所望の塩基配列からなるオ
リゴヌクレオチドを合成することができる。また、この
合成反応は、市販のＤＮＡ合成機を用い、そのプロトコ
ールに従って行うこともできる。さらに、この発明の方
法では、カップリングした各Ｎ−無保護ヌクレオシドホ
スホロアミダイトを、その都度に、ベンズイミダゾリウ
ムトリフラートの溶液（例えば、エタノール溶液）で処
理するのが好ましい。この処理によって、塩基部アミノ
基への副反応は完全に抑えられ、より完成度の高いオリ
ゴヌクレオチドが合成される。
【００１８】なお、ベンズイミダゾリウムトリフラート
は、以下の反応式によって合成することができる。
は、以下の反応式によって合成することができる。
【００１９】
【化７】
【００２０】以下、実施例を示してこの出願の発明につ
いてさらに詳細かつ具体的に説明するが、この発明は以
下の例によって限定されるものではない。
いてさらに詳細かつ具体的に説明するが、この発明は以
下の例によって限定されるものではない。
【００２１】
実施例１：イミダゾリウムトリフラートの調製 以下にその反応式を示したように、イミダゾールとトリ
フルオロメタンスルホン酸をジクロロメタン中、１：１
当量に混合し、２５℃で１０分間反応させることによっ
て、この発明のイミダゾリウムトリフラートを調製し
た。
フルオロメタンスルホン酸をジクロロメタン中、１：１
当量に混合し、２５℃で１０分間反応させることによっ
て、この発明のイミダゾリウムトリフラートを調製し
た。
【００２２】
【化８】
【００２３】得られたイミダゾリウムトリフラートは、
公知の方法による分析の結果、表１に示したとおりの特
性を有していた。
公知の方法による分析の結果、表１に示したとおりの特
性を有していた。
【００２４】
【表１】
【００２５】実施例２：塩基部無保護ヌクレオシドホス
ホロアミダイトの調製 以下にその反応式を示したように、実施例１で得たイミ
ダゾリウムトリフラートを触媒に用いて塩基部無保護ヌ
クレオシドをシアノエチルビスアミダイトと反応させ
た。
ホロアミダイトの調製 以下にその反応式を示したように、実施例１で得たイミ
ダゾリウムトリフラートを触媒に用いて塩基部無保護ヌ
クレオシドをシアノエチルビスアミダイトと反応させ
た。
【００２６】
【化９】
【００２７】この反応によって、表２に示した４種類の
Ｎ−無保護ヌクレオシドホスホロアミダイト、すなわ
ち、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシ
グアノシンおよびチミジンホスホロアミダイトを各々調
製した。表２にも示したように、各ヌクレオシドホスホ
ロアミダイトはほぼ定量的に得られた。
Ｎ−無保護ヌクレオシドホスホロアミダイト、すなわ
ち、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシ
グアノシンおよびチミジンホスホロアミダイトを各々調
製した。表２にも示したように、各ヌクレオシドホスホ
ロアミダイトはほぼ定量的に得られた。
【００２８】
【表２】
【００２９】実施例３：ＤＮＡ断片の合成 実施例３で得た４種類のＮ−無保護ヌクレオシドホスホ
ロアミダイトを構成単位として、市販のＤＮＡ合成機を
用いた固相合成法により、配列番号１に塩基配列を示し
た６０量体のＤＮＡ断片を合成した。なお、反応サイク
ルは表３のとおりとした。
ロアミダイトを構成単位として、市販のＤＮＡ合成機を
用いた固相合成法により、配列番号１に塩基配列を示し
た６０量体のＤＮＡ断片を合成した。なお、反応サイク
ルは表３のとおりとした。
【００３０】
【表３】
【００３１】この合成反応において、図１に示したよう
な鎖長伸長における各ステップ（縮合反応）はほぼ１０
０％で進行し、リン酸部保護６０量体が通常収率１００
％で得られた。この収率は、現在一般的に行われている
従来法における６０量体の合成収率が２０〜４０％程度
であることを考慮すると、極めて高効率であった。さら
に、図２に示したように、アンモニア溶液処理（２５
℃、６０分間）によって脱保護および脱離反応を行うこ
とによって、無保護ＤＮＡ６０量体が定量的収率で得ら
れた。
な鎖長伸長における各ステップ（縮合反応）はほぼ１０
０％で進行し、リン酸部保護６０量体が通常収率１００
％で得られた。この収率は、現在一般的に行われている
従来法における６０量体の合成収率が２０〜４０％程度
であることを考慮すると、極めて高効率であった。さら
に、図２に示したように、アンモニア溶液処理（２５
℃、６０分間）によって脱保護および脱離反応を行うこ
とによって、無保護ＤＮＡ６０量体が定量的収率で得ら
れた。
【００３２】また、得られた無保護ＤＮＡ６０量体の粗
抽出物を表４に示した条件からなるで高速液体クロマト
グラフィーによって分析したところ、図３に示したよう
に、その純度は９５％以上であった。
抽出物を表４に示した条件からなるで高速液体クロマト
グラフィーによって分析したところ、図３に示したよう
に、その純度は９５％以上であった。
【００３３】
【表４】
【００３４】
【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この発明の
新規化合物であるイミダゾリウムトリフラートと、この
イミダゾリウムトリフラートを用いることを特徴とする
オリゴヌクレオチド合成法は、以下のとおりの利点を有
している。 (1) 各ステップの縮合収率が１００％と高く、また合成
プログラムおよび使用する試薬の変更のみで市販の自動
ＤＮＡ合成装置にも適用可能であるため、ＤＮＡ等の化
学合成で一般に要求される５０〜１００量体といった長
鎖オリゴヌクレオチドの合成が従来方法の１０分の１以
下のコストで可能である。 (2) 不特定のヌクレオシドホスホロアミダイトを使用で
きるため、適用範囲が広く、実用的である。 (3) 促進剤として使用するこの発明のイミダゾリウムト
リフラートは吸湿性もなく、安定な化合物であるため、
通常使用状態での取り扱いが極めて容易である。
新規化合物であるイミダゾリウムトリフラートと、この
イミダゾリウムトリフラートを用いることを特徴とする
オリゴヌクレオチド合成法は、以下のとおりの利点を有
している。 (1) 各ステップの縮合収率が１００％と高く、また合成
プログラムおよび使用する試薬の変更のみで市販の自動
ＤＮＡ合成装置にも適用可能であるため、ＤＮＡ等の化
学合成で一般に要求される５０〜１００量体といった長
鎖オリゴヌクレオチドの合成が従来方法の１０分の１以
下のコストで可能である。 (2) 不特定のヌクレオシドホスホロアミダイトを使用で
きるため、適用範囲が広く、実用的である。 (3) 促進剤として使用するこの発明のイミダゾリウムト
リフラートは吸湿性もなく、安定な化合物であるため、
通常使用状態での取り扱いが極めて容易である。
【００３５】
配列番号：１ 配列の長さ：６０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 TATGGGCCTT TTGATAGGAT GCTCACCGAG CAAAACCAAG AACAACCAGG AGATTTTATT 60
【図１】この発明の方法おける各反応ステップの模式図
である。
である。
【図２】この発明の方法におけるアンモニア処理に実施
した場合の各反応ステップの模式図である。
した場合の各反応ステップの模式図である。
【図３】この発明の方法で合成されたＤＮＡ断片の液体
高速クロマトグラフィーの結果である。
高速クロマトグラフィーの結果である。
Claims (3)
- 【請求項１】 ホスホロアミダイト法によるオリゴヌク
レオチドの化学合成において、以下の化学式で表される
イミダゾールのトリフルオロメタンスルホン酸塩を用い
て塩基部無保護ヌクレオシドから塩基部無保護ヌクレオ
シドホスホロアミダイトを調製し、この塩基部無保護ヌ
クレオシドホスホロアミダイトを所定の順番でカップリ
ングすることにより、所定の塩基配列からなるオリゴヌ
クレオチドを化学合成する方法。 【化１】 - 【請求項２】 カップリングされた塩基部無保護ヌクレ
オシドホスホロアミダイトを、ベンズイミダゾールのト
リフルオロメタンスルホン酸塩溶液で処理する請求項１
の方法。 - 【請求項３】 次の化学式 【化２】 で表されるイミダゾールのトリフルオロメタンスルホン
酸塩。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9241292A JPH1180185A (ja) | 1997-09-05 | 1997-09-05 | オリゴヌクレオチドの化学合成法 |
| US09/145,973 US6040439A (en) | 1997-09-05 | 1998-09-03 | Method for chemical synthesis of oligonucleotides |
| DE69819998T DE69819998T2 (de) | 1997-09-05 | 1998-09-04 | Verfahren zur chemischen Synthese von Oligonukleotiden |
| CA002246909A CA2246909C (en) | 1997-09-05 | 1998-09-04 | Method for chemical synthesis of oligonucleotides |
| EP98307128A EP0906917B1 (en) | 1997-09-05 | 1998-09-04 | Method for chemical synthesis of oligonucleotides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9241292A JPH1180185A (ja) | 1997-09-05 | 1997-09-05 | オリゴヌクレオチドの化学合成法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1180185A true JPH1180185A (ja) | 1999-03-26 |
Family
ID=17072109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9241292A Pending JPH1180185A (ja) | 1997-09-05 | 1997-09-05 | オリゴヌクレオチドの化学合成法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6040439A (ja) |
| EP (1) | EP0906917B1 (ja) |
| JP (1) | JPH1180185A (ja) |
| CA (1) | CA2246909C (ja) |
| DE (1) | DE69819998T2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004500370A (ja) * | 1999-12-31 | 2004-01-08 | ノース・キャロライナ・ステイト・ユニヴァーシティ | 化学合成した核酸の純度を測定する方法と組成物 |
| WO2005082923A1 (ja) * | 2004-03-01 | 2005-09-09 | Japan Science And Technology Agency | 塩基部無保護法による新規核酸合成法 |
| JP2008532946A (ja) * | 2005-03-04 | 2008-08-21 | ギリンデュス アクチェンゲゼルシャフト | オリゴヌクレオチドの合成 |
| JP2013056939A (ja) * | 2005-03-04 | 2013-03-28 | Girindus Ag | オリゴヌクレオチドの合成 |
| WO2021080021A1 (ja) * | 2019-10-24 | 2021-04-29 | 日東電工株式会社 | オリゴヌクレオチドを製造する方法 |
| WO2021095874A1 (ja) * | 2019-11-13 | 2021-05-20 | 日本新薬株式会社 | オリゴ核酸化合物の製造方法 |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6274725B1 (en) * | 1998-06-02 | 2001-08-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Activators for oligonucleotide synthesis |
| AU2005315631A1 (en) * | 2004-12-15 | 2006-06-22 | Girindus Ag | Synthesis of phosphitylated compounds using a quaternary heterocyclic activator |
| US9670517B1 (en) | 2012-01-16 | 2017-06-06 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Synthesis of long nucleic acid sequences |
| US20150159152A1 (en) | 2013-12-09 | 2015-06-11 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Long nucleic acid sequences containing variable regions |
| US10155944B2 (en) | 2015-08-05 | 2018-12-18 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Tailed primer for cloned products used in library construction |
| US9988624B2 (en) | 2015-12-07 | 2018-06-05 | Zymergen Inc. | Microbial strain improvement by a HTP genomic engineering platform |
| US11208649B2 (en) | 2015-12-07 | 2021-12-28 | Zymergen Inc. | HTP genomic engineering platform |
| EP3858996B1 (en) | 2015-12-07 | 2022-08-03 | Zymergen Inc. | Microbial strain improvement by a htp genomic engineering platform |
| JP6821598B2 (ja) | 2015-12-07 | 2021-01-27 | ザイマージェン インコーポレイテッド | Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ由来のプロモーター |
| KR102345898B1 (ko) | 2016-06-30 | 2022-01-03 | 지머젠 인코포레이티드 | 글루코오스 투과 효소 라이브러리를 생성하는 방법 및 이의 용도 |
| US10544390B2 (en) | 2016-06-30 | 2020-01-28 | Zymergen Inc. | Methods for generating a bacterial hemoglobin library and uses thereof |
| WO2018213796A1 (en) | 2017-05-19 | 2018-11-22 | Zymergen Inc. | Genomic engineering of biosynthetic pathways leading to increased nadph |
| WO2018226900A2 (en) | 2017-06-06 | 2018-12-13 | Zymergen Inc. | A htp genomic engineering platform for improving fungal strains |
| KR102741381B1 (ko) | 2017-06-06 | 2024-12-11 | 지머젠 인코포레이티드 | 사카로폴리스포라 스피노사를 개량하기 위한 고 처리량(htp) 게놈 공학 플랫폼 |
| JP2020524494A (ja) | 2017-06-06 | 2020-08-20 | ザイマージェン インコーポレイテッド | ハイスループットトランスポゾン変異誘発 |
| EP3485013B1 (en) | 2017-06-06 | 2021-03-24 | Zymergen, Inc. | A htp genomic engineering platform for improving escherichia coli |
| CN111902540A (zh) | 2018-03-20 | 2020-11-06 | 齐默尔根公司 | 用于中国仓鼠卵巢细胞基因工程改造的htp平台 |
| BR112020024839A2 (pt) | 2018-06-06 | 2021-05-18 | Zymergen Inc. | manipulação de genes envolvidos em transdução de sinal para controlar a morfologia fúngica durante a fermentação e produção |
| US11479779B2 (en) | 2020-07-31 | 2022-10-25 | Zymergen Inc. | Systems and methods for high-throughput automated strain generation for non-sporulating fungi |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5077285A (en) * | 1989-07-31 | 1991-12-31 | Merck & Co., Inc. | Imidazole compounds and their use as transglutaminase inhibitors |
| US5955600A (en) * | 1996-12-27 | 1999-09-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Method for the synthesis of nucleotide or oligonucleotide phosphoramidites |
-
1997
- 1997-09-05 JP JP9241292A patent/JPH1180185A/ja active Pending
-
1998
- 1998-09-03 US US09/145,973 patent/US6040439A/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-04 EP EP98307128A patent/EP0906917B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-04 DE DE69819998T patent/DE69819998T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-04 CA CA002246909A patent/CA2246909C/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004500370A (ja) * | 1999-12-31 | 2004-01-08 | ノース・キャロライナ・ステイト・ユニヴァーシティ | 化学合成した核酸の純度を測定する方法と組成物 |
| US7901892B2 (en) | 1999-12-31 | 2011-03-08 | North Carolina State University | Methods and compositions for determining the purity of chemically synthesized nucleic acids |
| US8173377B2 (en) | 1999-12-31 | 2012-05-08 | North Carolina State University | Methods and compositions for determining the purity of chemically synthesized nucleic acids |
| JP2012107019A (ja) * | 1999-12-31 | 2012-06-07 | North Carolina State Univ | 化学合成した核酸の純度を測定する方法と組成物 |
| US8323910B2 (en) | 1999-12-31 | 2012-12-04 | North Carolina State University | Methods and compositions for determining the purity of chemically synthesized nucleic acids |
| US8697355B2 (en) | 1999-12-31 | 2014-04-15 | North Carolina State University | Methods and compositions for determining the purity of chemically synthesized nucleic acids |
| WO2005082923A1 (ja) * | 2004-03-01 | 2005-09-09 | Japan Science And Technology Agency | 塩基部無保護法による新規核酸合成法 |
| US7807821B1 (en) | 2004-03-01 | 2010-10-05 | Japan Science And Technology Agency | Method for the synthesis of nucleic acid without protecting base moiety |
| JP2008532946A (ja) * | 2005-03-04 | 2008-08-21 | ギリンデュス アクチェンゲゼルシャフト | オリゴヌクレオチドの合成 |
| JP2013056939A (ja) * | 2005-03-04 | 2013-03-28 | Girindus Ag | オリゴヌクレオチドの合成 |
| WO2021080021A1 (ja) * | 2019-10-24 | 2021-04-29 | 日東電工株式会社 | オリゴヌクレオチドを製造する方法 |
| WO2021095874A1 (ja) * | 2019-11-13 | 2021-05-20 | 日本新薬株式会社 | オリゴ核酸化合物の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0906917A2 (en) | 1999-04-07 |
| CA2246909A1 (en) | 1999-03-05 |
| EP0906917A3 (en) | 1999-09-22 |
| EP0906917B1 (en) | 2003-11-26 |
| DE69819998D1 (de) | 2004-01-08 |
| US6040439A (en) | 2000-03-21 |
| DE69819998T2 (de) | 2004-09-02 |
| CA2246909C (en) | 2003-12-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH1180185A (ja) | オリゴヌクレオチドの化学合成法 | |
| US5817786A (en) | Single-stranded labelled oligonucleotides of preselected sequences | |
| US6111086A (en) | Orthoester protecting groups | |
| US5548076A (en) | Method of making oligonucleotides, oligonucleoside thiophosphates and oligonucleoside phosphotriesters using H-phosphonate intermediates | |
| KR101032008B1 (ko) | 폴리뉴클레오티드 표지 시약 | |
| EP1176151B1 (en) | Synthesis of polynucleotides using combined oxidation/deprotection chemistry | |
| CA1244786A (en) | Synthesis of amino-derivitized oligonucleotides | |
| EP1428810A2 (en) | Libraries of oligomers labelled with different tags | |
| US20030036066A1 (en) | Linker phosphoramidites for oligonucleotide synthesis | |
| US6451998B1 (en) | Capping and de-capping during oligonucleotide synthesis | |
| JPH0692435B2 (ja) | 修飾ｄｎａの化学合成のためのホスホラミダイト試薬 | |
| US6350863B1 (en) | 3, 4-di(acylamino)phenyl ribofuranosides, 2'-deoxyribofuranosides, and methods of making | |
| US20030129593A1 (en) | Process for producing multiple oligonucleotides on a solid support | |
| JPS6169788A (ja) | 修飾アデニン基を有するプローブ | |
| US7807821B1 (en) | Method for the synthesis of nucleic acid without protecting base moiety | |
| Pon et al. | Linker phosphoramidite reagents for the attachment of the first nucleoside to underivatized solid‐phase supports | |
| EP2170924B1 (en) | 5-bromo-2'-deoxy-uridine labeled nucleotide triphosphates and nucleic acid probes and methods of making and using the same | |
| RU2292350C1 (ru) | Способ получения 5`-аминоалкилфосфат олигодезоксирибонуклеотидов | |
| SU1049498A1 (ru) | Способ получени 5-или 3-фосфоамидов моно-или олигонуклеотидов | |
| EP1828218B1 (en) | Synthesis of phosphitylated compounds using a quaternary heterocyclic activator | |
| EP0562014A1 (en) | Methods for labelling oligonucleotides | |
| US7276598B2 (en) | Phosphorylation reagents for improved processes to convert terminal hydroxyl groups of oligonucleotides into phosphate monoesters | |
| JPS60252492A (ja) | 触媒性アルコ−ルを使用するオリゴヌクレオチドトリエステル合成速度の促進方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070501 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070702 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20071023 |