JPH1164334A - 尿中トリプシンインヒビターの測定方法 - Google Patents
尿中トリプシンインヒビターの測定方法Info
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- JPH1164334A JPH1164334A JP9220495A JP22049597A JPH1164334A JP H1164334 A JPH1164334 A JP H1164334A JP 9220495 A JP9220495 A JP 9220495A JP 22049597 A JP22049597 A JP 22049597A JP H1164334 A JPH1164334 A JP H1164334A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＵＴＩ濃度を高精度で再現性良く迅速かつ簡
便に測定可能な測定方法を提供する。 【解決手段】 抗ＵＴＩ抗体を検体に添加し、その結果
生じる凝集の程度を、例えば、吸光度の変化量により測
定する。図３のグラフに示すように、ＵＴＩ濃度と凝集
程度（吸光度変化量）とは相関がある。吸光度の測定
は、一般の分光光度計を使用でき、波長は３００〜４０
０ｎｍの範囲が好ましい。また、凝集促進剤として、ポ
リエチレングリコールを反応液中に添加することが好ま
しい。ポリエチレングリコールは、平均分子量が２００
０〜２００００の範囲が好ましく、反応液中の濃度は２
〜１０重量％が好ましい。
便に測定可能な測定方法を提供する。 【解決手段】 抗ＵＴＩ抗体を検体に添加し、その結果
生じる凝集の程度を、例えば、吸光度の変化量により測
定する。図３のグラフに示すように、ＵＴＩ濃度と凝集
程度（吸光度変化量）とは相関がある。吸光度の測定
は、一般の分光光度計を使用でき、波長は３００〜４０
０ｎｍの範囲が好ましい。また、凝集促進剤として、ポ
リエチレングリコールを反応液中に添加することが好ま
しい。ポリエチレングリコールは、平均分子量が２００
０〜２００００の範囲が好ましく、反応液中の濃度は２
〜１０重量％が好ましい。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、体液中に含まれる
尿中トリプシンインヒビター（ＵＴＩ）の測定方法に関
する。ＵＴＩは、当初、尿中に存在を認められた物質で
あるが、その後の研究により、尿以外の体液にもその存
在が確認されている。したがって、本発明は、例えば、
血清、血漿、髄液、羊水など尿以外の体液に対しても適
用できる。
尿中トリプシンインヒビター（ＵＴＩ）の測定方法に関
する。ＵＴＩは、当初、尿中に存在を認められた物質で
あるが、その後の研究により、尿以外の体液にもその存
在が確認されている。したがって、本発明は、例えば、
血清、血漿、髄液、羊水など尿以外の体液に対しても適
用できる。
【０００２】
【従来の技術】ＵＴＩは、尿中に存在するトリプシン阻
害物質として１９０９年にＢａｕｅｒとＲｅｉｃｈによ
って発見された。その後、細菌性感染症、悪性腫瘍（胃
癌、乳癌、肺癌など）、腎疾患、心筋梗塞、外科手術、
妊娠などで尿中にＵＴＩ量が有意に増加することが報告
されており、特に小児科領域では細菌感染症の早期指標
としての有用性が指摘されている（炎症１４：５３−５
７，１９９４）。
害物質として１９０９年にＢａｕｅｒとＲｅｉｃｈによ
って発見された。その後、細菌性感染症、悪性腫瘍（胃
癌、乳癌、肺癌など）、腎疾患、心筋梗塞、外科手術、
妊娠などで尿中にＵＴＩ量が有意に増加することが報告
されており、特に小児科領域では細菌感染症の早期指標
としての有用性が指摘されている（炎症１４：５３−５
７，１９９４）。
【０００３】従来から、ＵＴＩは、トリプシン活性の阻
害作用を測定する酵素学的測定法や、ＵＴＩと抗ＵＴＩ
抗体との反応に基づく様々な免疫学的測定法によって測
定されている。免疫学的測定法としては、一元免疫拡散
法（ＳＲＩＤ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫
測定法（ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ）、ラテックス凝集免疫比
濁法（ＬＡＩＡ）等があげられる。
害作用を測定する酵素学的測定法や、ＵＴＩと抗ＵＴＩ
抗体との反応に基づく様々な免疫学的測定法によって測
定されている。免疫学的測定法としては、一元免疫拡散
法（ＳＲＩＤ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫
測定法（ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ）、ラテックス凝集免疫比
濁法（ＬＡＩＡ）等があげられる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】前記酵素学的測定法
は、自動分析機の使用により迅速に測定できるが、トリ
プシン活性の阻害量をみるため、ＵＴＩ以外のトリプシ
ン阻害物質も含めて測定することになり、特異性に問題
がある。これに対し、前記免疫学的測定法は、抗原抗体
反応に基づくためＵＴＩのみを正確に測定することがで
きる。
は、自動分析機の使用により迅速に測定できるが、トリ
プシン活性の阻害量をみるため、ＵＴＩ以外のトリプシ
ン阻害物質も含めて測定することになり、特異性に問題
がある。これに対し、前記免疫学的測定法は、抗原抗体
反応に基づくためＵＴＩのみを正確に測定することがで
きる。
【０００５】しかしながら、従来の免疫学的測定方法に
は、種々の問題があった。まず、ＲＩＡは放射性物質を
使用するため特別な施設でしか測定できないという問題
がある。また、ＳＲＩＤ、ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡは、測定
操作が煩雑であり、また測定に長時間を要するという問
題がある。一方、ＬＡＩＡは、短時間で簡単に測定可能
であるが、一般の自動分析機ではラテックスの非特異的
凝集により測定値がばらついたり、試薬の乾燥により自
動分析機が詰まるなどの問題がある。
は、種々の問題があった。まず、ＲＩＡは放射性物質を
使用するため特別な施設でしか測定できないという問題
がある。また、ＳＲＩＤ、ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡは、測定
操作が煩雑であり、また測定に長時間を要するという問
題がある。一方、ＬＡＩＡは、短時間で簡単に測定可能
であるが、一般の自動分析機ではラテックスの非特異的
凝集により測定値がばらついたり、試薬の乾燥により自
動分析機が詰まるなどの問題がある。
【０００６】このように、ＵＴＩは、種々の疾患の指標
物質としての有用性を指摘されながら、その測定方法に
問題があるため、十分に活用されていないのが現状であ
った。そこで、本発明の目的は、高精度で迅速かつ簡単
にＵＴＩを測定できる測定方法を提供することである。
物質としての有用性を指摘されながら、その測定方法に
問題があるため、十分に活用されていないのが現状であ
った。そこで、本発明の目的は、高精度で迅速かつ簡単
にＵＴＩを測定できる測定方法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に、本発明のＵＴＩの測定方法は、尿中トリプシンイン
ヒビターに対する抗体を準備し、この抗体を検体に添加
し、その結果生じる凝集の程度を測定する方法である。
に、本発明のＵＴＩの測定方法は、尿中トリプシンイン
ヒビターに対する抗体を準備し、この抗体を検体に添加
し、その結果生じる凝集の程度を測定する方法である。
【０００８】このように、本発明では、特異性に優れた
抗原抗体反応を利用するため、精度および再現性に優
れ、また、抗原抗体反応により生じる凝集程度を測定す
るため、抗体の固定化等の特別な操作、設備や装置を使
用することなく簡便に行うことができる。さらに、ＬＡ
ＩＡに比べ、自動分析機の汚染が少ないという利点もあ
る。
抗原抗体反応を利用するため、精度および再現性に優
れ、また、抗原抗体反応により生じる凝集程度を測定す
るため、抗体の固定化等の特別な操作、設備や装置を使
用することなく簡便に行うことができる。さらに、ＬＡ
ＩＡに比べ、自動分析機の汚染が少ないという利点もあ
る。
【０００９】本発明の測定方法において、ポリエチレン
グリコールが反応液中に２〜１０重量％の割合で存在す
る条件下で、抗体を検体に添加することが好ましい。前
記ポリエチレングリコールは凝集促進剤であり、この使
用により、さらに測定が迅速かつ正確におこなうことが
できるからである。なお、前記反応液とは、抗原抗体反
応液、すなわち、検体と抗ＵＴＩ抗体が存在する液を意
味する。
グリコールが反応液中に２〜１０重量％の割合で存在す
る条件下で、抗体を検体に添加することが好ましい。前
記ポリエチレングリコールは凝集促進剤であり、この使
用により、さらに測定が迅速かつ正確におこなうことが
できるからである。なお、前記反応液とは、抗原抗体反
応液、すなわち、検体と抗ＵＴＩ抗体が存在する液を意
味する。
【００１０】また、前記ポリエチレングリコールの平均
分子量は、２０００〜２００００の範囲が好ましい。
分子量は、２０００〜２００００の範囲が好ましい。
【００１１】そして、ポリエチレングリコールの好まし
い平均分子量と反応液中濃度との関係は、平均分子量が
６０００〜２００００で濃度４〜６重量％である。
い平均分子量と反応液中濃度との関係は、平均分子量が
６０００〜２００００で濃度４〜６重量％である。
【００１２】本発明の測定方法において、凝集の程度の
測定方法は、光学的測定方法であることが好ましい。凝
集程度は、目視観察でもよいが、光学的に測定すれば、
より迅速かつ正確に測定できるからである。光学的測定
方法としては、例えば、後述するように、凝集程度によ
る吸光度の変化量を測定することが好ましい。なお、光
学的測定方法以外の測定方法として、凝集の程度による
電気抵抗の変化を測定する電気的測定方法がある。
測定方法は、光学的測定方法であることが好ましい。凝
集程度は、目視観察でもよいが、光学的に測定すれば、
より迅速かつ正確に測定できるからである。光学的測定
方法としては、例えば、後述するように、凝集程度によ
る吸光度の変化量を測定することが好ましい。なお、光
学的測定方法以外の測定方法として、凝集の程度による
電気抵抗の変化を測定する電気的測定方法がある。
【００１３】
【発明の実施の形態】つぎに、本発明の実施の形態につ
いて説明する。
いて説明する。
【００１４】本発明では、ＵＴＩと特異的に反応する抗
ＵＴＩ抗体を必要とし、その他、免疫学的測定に使用さ
れる種々試薬等を用いてもよく、この使用により、より
適当な条件で測定を行うことができる。前記試薬として
は、緩衝液、凝集促進剤、安定化剤、防腐剤などがあげ
られる。
ＵＴＩ抗体を必要とし、その他、免疫学的測定に使用さ
れる種々試薬等を用いてもよく、この使用により、より
適当な条件で測定を行うことができる。前記試薬として
は、緩衝液、凝集促進剤、安定化剤、防腐剤などがあげ
られる。
【００１５】前記抗ＵＴＩ抗体は、ＵＴＩに対して特異
的に反応し抗原抗体反応によって凝集を生じるものであ
れば特に制限されず、モノクローナル抗体、ポリクロー
ナル抗体若しくはポリクローナル抗体を含む抗血清等の
いずれでも良い。抗体の種類も制限されず、免疫グロブ
リン（Ｉｇ）Ａ、ＩｇＥ、ＩｇＧ，ＩｇＭ、ＩｇＤが使
用できる。また、抗体の由来も制限されず、ラット、
兎、山羊等の由来の抗体が使用できる。これらの抗体
は、免疫原としてＵＴＩを使用すること以外は、通常行
われる抗体作製方法により得られる（例えば、日泌尿会
誌７４巻，９号（１９８３年）に記載の方法）。また、
反応液中の抗ＵＴＩ抗体の濃度は、測定感度と測定上限
に影響するので、適量を実験によって求めることが望ま
しい。その際、抗ＵＴＩ抗体の力価や精製の程度を考慮
して、適量を求めることはいうまでもない。
的に反応し抗原抗体反応によって凝集を生じるものであ
れば特に制限されず、モノクローナル抗体、ポリクロー
ナル抗体若しくはポリクローナル抗体を含む抗血清等の
いずれでも良い。抗体の種類も制限されず、免疫グロブ
リン（Ｉｇ）Ａ、ＩｇＥ、ＩｇＧ，ＩｇＭ、ＩｇＤが使
用できる。また、抗体の由来も制限されず、ラット、
兎、山羊等の由来の抗体が使用できる。これらの抗体
は、免疫原としてＵＴＩを使用すること以外は、通常行
われる抗体作製方法により得られる（例えば、日泌尿会
誌７４巻，９号（１９８３年）に記載の方法）。また、
反応液中の抗ＵＴＩ抗体の濃度は、測定感度と測定上限
に影響するので、適量を実験によって求めることが望ま
しい。その際、抗ＵＴＩ抗体の力価や精製の程度を考慮
して、適量を求めることはいうまでもない。
【００１６】本発明に使用できる緩衝液は、抗原抗体反
応を利用した測定に通常使われる緩衝液であれば特に限
定はされず、例えば、トリス緩衝液、グッド緩衝液など
があげられる。また、緩衝液の反応時のｐＨは６〜１０
の範囲が好ましい。
応を利用した測定に通常使われる緩衝液であれば特に限
定はされず、例えば、トリス緩衝液、グッド緩衝液など
があげられる。また、緩衝液の反応時のｐＨは６〜１０
の範囲が好ましい。
【００１７】本発明において、検体への抗ＵＴＩ抗体の
添加に際し、ポリエチレングリコール、ポリビニルアル
コール、デキストランなどの凝集促進剤を共存させてお
けば、測定感度を高めることができ好ましい。前記凝集
促進剤としては、前述のように、ポリエチレングリコー
ルが好ましく、その平均分子量は、約２０００〜約２０
０００であり、好ましくは約６０００以上である。これ
ら複数種類のポリエチレングリコールを組み合わせて使
用することも可能である。
添加に際し、ポリエチレングリコール、ポリビニルアル
コール、デキストランなどの凝集促進剤を共存させてお
けば、測定感度を高めることができ好ましい。前記凝集
促進剤としては、前述のように、ポリエチレングリコー
ルが好ましく、その平均分子量は、約２０００〜約２０
０００であり、好ましくは約６０００以上である。これ
ら複数種類のポリエチレングリコールを組み合わせて使
用することも可能である。
【００１８】ポリエチレングリコールは、ＵＴＩと抗Ｕ
ＴＩ抗体の反応液の２〜１０重量％の割合で使用できる
が、使用するポリエチレングリコールの種類によって適
当な感度が得られる濃度は異なる。ポリエチレングリコ
ールは、平均分子量が大きくなるほど、また高濃度にな
るほど凝集促進作用が強くなる。しかし、反応液中の濃
度が約１０重量％以上の高濃度になると非特異的凝集反
応が増加するため測定誤差の原因となる。従って、平均
分子量が約６０００〜２００００のポリエチレングリコ
ールを反応液中濃度４〜６重量％で使用することが望ま
しい。
ＴＩ抗体の反応液の２〜１０重量％の割合で使用できる
が、使用するポリエチレングリコールの種類によって適
当な感度が得られる濃度は異なる。ポリエチレングリコ
ールは、平均分子量が大きくなるほど、また高濃度にな
るほど凝集促進作用が強くなる。しかし、反応液中の濃
度が約１０重量％以上の高濃度になると非特異的凝集反
応が増加するため測定誤差の原因となる。従って、平均
分子量が約６０００〜２００００のポリエチレングリコ
ールを反応液中濃度４〜６重量％で使用することが望ま
しい。
【００１９】また、ポリエチレングリコールに限らず、
凝集促進剤を高濃度で使用する場合は上記の通り抗原抗
体反応以外の非特異的凝集反応が生じる可能性が高いの
で、それが測定精度に影響する場合は塩化ナトリウムな
どの無機塩や非イオン性界面活性剤を添加するなどの防
止策を必要とする。
凝集促進剤を高濃度で使用する場合は上記の通り抗原抗
体反応以外の非特異的凝集反応が生じる可能性が高いの
で、それが測定精度に影響する場合は塩化ナトリウムな
どの無機塩や非イオン性界面活性剤を添加するなどの防
止策を必要とする。
【００２０】安定化剤としては、例えば、糖類、タンパ
ク質、界面活性剤などがあげられ、通常この分野で使用
されるものをそれぞれの効果によって適当な濃度で使用
することができる。
ク質、界面活性剤などがあげられ、通常この分野で使用
されるものをそれぞれの効果によって適当な濃度で使用
することができる。
【００２１】本発明の測定対象となる検体は、一般的に
尿であるが、本発明はこれに限定されない。すなわち、
ＵＴＩは、当初、尿中に存在を認められた物質である
が、その後の研究により、尿以外の体液にもその存在が
確認されたからである。したがって、本発明は、例え
ば、血清、血漿、髄液、羊水など尿以外の体液に対して
も適用できる。
尿であるが、本発明はこれに限定されない。すなわち、
ＵＴＩは、当初、尿中に存在を認められた物質である
が、その後の研究により、尿以外の体液にもその存在が
確認されたからである。したがって、本発明は、例え
ば、血清、血漿、髄液、羊水など尿以外の体液に対して
も適用できる。
【００２２】つぎに、本発明における凝集程度の測定
は、吸光度変化量の測定によるのが好ましいことは先に
述べたとおりである。この時の波長は、一般に、３００
〜４００ｎｍで行われる。また、測定用機器は、通常、
分光光度計であるが、好ましくは分光光度計を備えた自
動分析機である。
は、吸光度変化量の測定によるのが好ましいことは先に
述べたとおりである。この時の波長は、一般に、３００
〜４００ｎｍで行われる。また、測定用機器は、通常、
分光光度計であるが、好ましくは分光光度計を備えた自
動分析機である。
【００２３】
【実施例】つぎに、実施例について説明する。
【００２４】（実施例１：ＵＴＩ濃度の測定）下記に示
すように、溶液中のＵＴＩ濃度を測定し、ＵＴＩ濃度と
吸光度変化量の関係を調べた。なお測定に用いた分析機
械は、自動分析装置（７０７０形、日立社製）である。
すように、溶液中のＵＴＩ濃度を測定し、ＵＴＩ濃度と
吸光度変化量の関係を調べた。なお測定に用いた分析機
械は、自動分析装置（７０７０形、日立社製）である。
【００２５】（測定用試料）精製ＵＴＩ（商品名ユーテ
ィニン、メクト社製）を０．９重量％生理食塩水に溶解
し、０μｇ／ｍＬ，２．５μｇ／ｍＬ，５μｇ／ｍＬ，
１０μｇ／ｍＬ，１５μｇ／ｍＬ，２５μｇ／ｍＬ，５
０μｇ／ｍＬ，１００μｇ／ｍＬ，２５０μｇ／ｍＬ，
５００μｇ／ｍＬ，１０００μｇ／ｍＬの種々濃度のＵ
ＴＩ溶液を調製し、以下の方法で吸光度変化量を測定し
た。
ィニン、メクト社製）を０．９重量％生理食塩水に溶解
し、０μｇ／ｍＬ，２．５μｇ／ｍＬ，５μｇ／ｍＬ，
１０μｇ／ｍＬ，１５μｇ／ｍＬ，２５μｇ／ｍＬ，５
０μｇ／ｍＬ，１００μｇ／ｍＬ，２５０μｇ／ｍＬ，
５００μｇ／ｍＬ，１０００μｇ／ｍＬの種々濃度のＵ
ＴＩ溶液を調製し、以下の方法で吸光度変化量を測定し
た。
【００２６】（測定用試薬） ａ．緩衝液（第１試液） ６重量％ポリエチレングリコール（＃６０００、ナカラ
イテスク社製）および０．０５重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ
１００（ナカライテスク社製）を０．１重量％アジ化ナ
トリウムを含む１００ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
４）に溶解したものを第１試液とした。 ｂ．抗体溶液（第２試液） 抗ＵＴＩ抗体を２．５ｍｇ／ｍＬの割合で０．３重量％
アジ化ナトリウムを含む１００ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７．４）に溶解したものを第２試液とした。な
お、蛋白量はヒトＩｇＧを標準物質として２８０ｎｍの
吸光度から求めた。また、抗ＵＴＩ抗体は、以下の方法
により調製した。
イテスク社製）および０．０５重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ
１００（ナカライテスク社製）を０．１重量％アジ化ナ
トリウムを含む１００ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
４）に溶解したものを第１試液とした。 ｂ．抗体溶液（第２試液） 抗ＵＴＩ抗体を２．５ｍｇ／ｍＬの割合で０．３重量％
アジ化ナトリウムを含む１００ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７．４）に溶解したものを第２試液とした。な
お、蛋白量はヒトＩｇＧを標準物質として２８０ｎｍの
吸光度から求めた。また、抗ＵＴＩ抗体は、以下の方法
により調製した。
【００２７】抗ＵＴＩ抗体調製方法 精製ＵＴＩを家兎（日本白色種、メス）に２週間おきに
５回免疫することで抗血清を得た。すなわち、１回目の
免疫は、完全フロイントアジュバントとともに０．２５
ｍｇのＵＴＩを皮内注射し、２〜５回目の免疫では不完
全フロイントアジュバントとともに０．５ｍｇのＵＴＩ
を皮内注射した。そして、５回目の免疫の１０日後に採
血し、得られた抗血清をプロテインＡアフィニティクロ
マトグラフィーを用いて精製し、この精製品を、０．３
重量％アジ化ナトリウムを含む１００ｍＭトリス塩酸塩
緩衝液（ｐＨ７．４）で適当な濃度に調整したものを抗
ＵＴＩ抗体溶液とした。
５回免疫することで抗血清を得た。すなわち、１回目の
免疫は、完全フロイントアジュバントとともに０．２５
ｍｇのＵＴＩを皮内注射し、２〜５回目の免疫では不完
全フロイントアジュバントとともに０．５ｍｇのＵＴＩ
を皮内注射した。そして、５回目の免疫の１０日後に採
血し、得られた抗血清をプロテインＡアフィニティクロ
マトグラフィーを用いて精製し、この精製品を、０．３
重量％アジ化ナトリウムを含む１００ｍＭトリス塩酸塩
緩衝液（ｐＨ７．４）で適当な濃度に調整したものを抗
ＵＴＩ抗体溶液とした。
【００２８】（測定条件）測定用試料１０μＬに第１試
液２３０μＬを混合して３７℃で５分間保温後、測定波
長３４０ｎｍにおける吸光度（ＡＢＳ１）を測定した。
さらに反応液に６０μＬの第２試液を分注し、３７℃で
５分間反応させたあと測定波長３４０ｎｍにおける吸光
度（ＡＢＳ２）を測定した。これらＡＢＳ１とＡＢＳ２
より液量の変化を補正した上で下記の式（数１）により
吸光度変化量（ΔＡＢＳ）を求めた。そして、その結果
を、下記の表１および図１のグラフに示した。
液２３０μＬを混合して３７℃で５分間保温後、測定波
長３４０ｎｍにおける吸光度（ＡＢＳ１）を測定した。
さらに反応液に６０μＬの第２試液を分注し、３７℃で
５分間反応させたあと測定波長３４０ｎｍにおける吸光
度（ＡＢＳ２）を測定した。これらＡＢＳ１とＡＢＳ２
より液量の変化を補正した上で下記の式（数１）により
吸光度変化量（ΔＡＢＳ）を求めた。そして、その結果
を、下記の表１および図１のグラフに示した。
【００２９】
【数１】 ΔＡＢＳ＝ＡＢＳ２−ＡＢＳ１×（２４０／３００）
【００３０】
【表１】
【００３１】図１に示すように、ＵＴＩ濃度２５０μｇ
／ｍＬを超えると抗原過剰によるプロゾーン現象で吸光
度変化量が減少したが、２５０μｇ／ｍＬまでは濃度に
依存して吸光度変化量が増加した。また、表１の結果か
ら分かるように、少なくとも２．５μｇ／ｍＬ以上の濃
度のＵＴＩは検出可能であるといえる。
／ｍＬを超えると抗原過剰によるプロゾーン現象で吸光
度変化量が減少したが、２５０μｇ／ｍＬまでは濃度に
依存して吸光度変化量が増加した。また、表１の結果か
ら分かるように、少なくとも２．５μｇ／ｍＬ以上の濃
度のＵＴＩは検出可能であるといえる。
【００３２】（実施例２：尿検体の測定）実施例１と同
様にしてＵＴＩ水溶液（濃度：０μｇ／ｍＬ，２５μｇ
／ｍＬ，５０μｇ／ｍＬ，１００μｇ／ｍＬ）のＵＴＩ
濃度を測定して検量線を得た。この検量線から、健常者
尿３検体の吸光度変化量（実施例１と同様にしてそれぞ
れ同時に１０回測定）を濃度換算して同時再現性を求め
た。その結果を下記の表２に示す。なお、下記の表２に
おいて、ＳＤは標準偏差を示し、ＣＶは変動係数を示
す。
様にしてＵＴＩ水溶液（濃度：０μｇ／ｍＬ，２５μｇ
／ｍＬ，５０μｇ／ｍＬ，１００μｇ／ｍＬ）のＵＴＩ
濃度を測定して検量線を得た。この検量線から、健常者
尿３検体の吸光度変化量（実施例１と同様にしてそれぞ
れ同時に１０回測定）を濃度換算して同時再現性を求め
た。その結果を下記の表２に示す。なお、下記の表２に
おいて、ＳＤは標準偏差を示し、ＣＶは変動係数を示
す。
【００３３】
【表２】
【００３４】上記表２に示すように、２．６μｇ／ｍＬ
の低濃度の検体を含めて３検体を再現性良く測定でき
た。
の低濃度の検体を含めて３検体を再現性良く測定でき
た。
【００３５】（実施例３：尿へのＵＴＩ添加試験）３つ
の尿検体（Ｄ，Ｅ，Ｆ）のそれぞれにＵＴＩを２５μｇ
または５０μｇ添加したものを、実施例２と同様の方法
で測定しＵＴＩ濃度を求めた。その結果を図２のグラフ
に示す。なお、図２において、−▲−は尿検体Ｄ、−■
−は尿検体Ｅ、−●−は尿検体Ｆをそれぞれ示す。
の尿検体（Ｄ，Ｅ，Ｆ）のそれぞれにＵＴＩを２５μｇ
または５０μｇ添加したものを、実施例２と同様の方法
で測定しＵＴＩ濃度を求めた。その結果を図２のグラフ
に示す。なお、図２において、−▲−は尿検体Ｄ、−■
−は尿検体Ｅ、−●−は尿検体Ｆをそれぞれ示す。
【００３６】図２のグラフに示すように、測定値はＵＴ
Ｉ添加量と比例して増加しており、添加したＵＴＩ量が
正確に測定されていることが判る。
Ｉ添加量と比例して増加しており、添加したＵＴＩ量が
正確に測定されていることが判る。
【００３７】（実施例４：ポリエチレングリコールの濃
度と平均分子量の検討）平均分子量２００００のポリエ
チレングリコール（＃２００００、ナカライテスク社
製）を反応液中濃度４重量％にした以外は、実施例１と
同様にしてＵＴＩ濃度の測定を行った。ただし、ＵＴＩ
濃度は、０μｇ／ｍＬ，２５μｇ／ｍＬ，５０μｇ／ｍ
Ｌ，１００μｇ／ｍＬとした。その結果を、図３のグラ
フに示す。なお。同グラフには、平均分子量６０００の
ポリエチレングリコール（＃６０００、ナカライテスク
社製）を反応液中濃度６重量％として実施例１と同様の
測定を行った例も併せて示している。
度と平均分子量の検討）平均分子量２００００のポリエ
チレングリコール（＃２００００、ナカライテスク社
製）を反応液中濃度４重量％にした以外は、実施例１と
同様にしてＵＴＩ濃度の測定を行った。ただし、ＵＴＩ
濃度は、０μｇ／ｍＬ，２５μｇ／ｍＬ，５０μｇ／ｍ
Ｌ，１００μｇ／ｍＬとした。その結果を、図３のグラ
フに示す。なお。同グラフには、平均分子量６０００の
ポリエチレングリコール（＃６０００、ナカライテスク
社製）を反応液中濃度６重量％として実施例１と同様の
測定を行った例も併せて示している。
【００３８】図３のグラフから、平均分子量２００００
のポリエチレングリコールを使用すれば、平均分子量６
０００のエチレングリコールより低濃度であっても、同
等の感度が得られることが分かる。
のポリエチレングリコールを使用すれば、平均分子量６
０００のエチレングリコールより低濃度であっても、同
等の感度が得られることが分かる。
【００３９】
【発明の効果】以上のように、本発明のＵＴＩの測定方
法は、特異性が高いＵＴＩと抗ＵＴＩ抗体との抗原抗体
反応により生じる凝集の程度を測定する。凝集程度の測
定は、吸光度変化量の測定等の簡単な方法を適用でき
る。このため、本発明の適用により、検体中のＵＴＩ濃
度を再現性良く高精度で迅速かつ簡単に測定することが
可能となり、この結果、臨床診断等の分野等において、
ＵＴＩを疾病、特に感染症の有用な指標として十分活用
することが期待できるようになる。
法は、特異性が高いＵＴＩと抗ＵＴＩ抗体との抗原抗体
反応により生じる凝集の程度を測定する。凝集程度の測
定は、吸光度変化量の測定等の簡単な方法を適用でき
る。このため、本発明の適用により、検体中のＵＴＩ濃
度を再現性良く高精度で迅速かつ簡単に測定することが
可能となり、この結果、臨床診断等の分野等において、
ＵＴＩを疾病、特に感染症の有用な指標として十分活用
することが期待できるようになる。
【図１】ＵＴＩ濃度と吸光度変化量との関係を示すグラ
フである。
フである。
【図２】尿へのＵＴＩ添加量と吸光度変化量との関係を
示すグラフである。
示すグラフである。
【図３】ポリエチレングリコールの平均分子量と濃度を
変化させた際の、ＵＴＩ濃度と吸光度変化量との関係を
示すグラフである。
変化させた際の、ＵＴＩ濃度と吸光度変化量との関係を
示すグラフである。
Claims (6)
- 【請求項１】 尿中トリプシンインヒビターに対する抗
体を準備し、この抗体を検体に添加し、その結果生じる
凝集の程度を測定する尿中トリプシンインヒビターの測
定方法。 - 【請求項２】 ポリエチレングリコールが反応液中に２
〜１０重量％の割合で存在する条件下で、抗体を検体に
添加する請求項１記載の測定方法。 - 【請求項３】 平均分子量２０００〜２００００のポリ
エチレングリコールの存在下で抗体を検体に添加する請
求項１記載の測定方法。 - 【請求項４】 平均分子量６０００〜２００００のポリ
エチレングリコールが反応液中に４〜６重量％の割合で
存在する条件下で、抗体を検体に添加する請求項１記載
の測定方法。 - 【請求項５】 凝集の程度の測定方法が光学的測定方法
である請求項１〜４のいずれか一項に記載の測定方法。 - 【請求項６】 検体が、尿、血清、血漿、髄液および羊
水からなる群から選択された少なくとも一つの体液であ
る請求項１〜５のいずれか一項に記載の測定方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22049597A JP3298812B2 (ja) | 1997-08-15 | 1997-08-15 | 尿中トリプシンインヒビターの測定方法 |
| US09/133,942 US6673632B1 (en) | 1997-08-15 | 1998-08-14 | Method for measuring urinary trypsin inhibitor |
| EP98306480A EP0908726B1 (en) | 1997-08-15 | 1998-08-14 | Method for measuring urinary trypsin inhibitor |
| DE69809172T DE69809172T2 (de) | 1997-08-15 | 1998-08-14 | Verfahren zur Messung von Harn-Trypsininhibitor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22049597A JP3298812B2 (ja) | 1997-08-15 | 1997-08-15 | 尿中トリプシンインヒビターの測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1164334A true JPH1164334A (ja) | 1999-03-05 |
| JP3298812B2 JP3298812B2 (ja) | 2002-07-08 |
Family
ID=16751958
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22049597A Expired - Fee Related JP3298812B2 (ja) | 1997-08-15 | 1997-08-15 | 尿中トリプシンインヒビターの測定方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6673632B1 (ja) |
| EP (1) | EP0908726B1 (ja) |
| JP (1) | JP3298812B2 (ja) |
| DE (1) | DE69809172T2 (ja) |
Families Citing this family (4)
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|---|---|---|---|---|
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| US7419665B2 (en) * | 2003-10-16 | 2008-09-02 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Monoclonal antibodies for detection of urinary trypsin inhibitors |
| DE102006000707A1 (de) * | 2006-01-03 | 2007-07-05 | Qiagen Gmbh | Verwendung von Polymeren zur Erhöhung der Signalintensität bei der Durchführung von Nachweisreaktionen |
| RU2638792C1 (ru) * | 2016-09-13 | 2017-12-15 | Андрей Николаевич Лобанов | Способ определения содержания ингибитора трипсина в соевом жмыхе или шроте и устройство для его осуществления |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4148869A (en) * | 1975-03-06 | 1979-04-10 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Immunological reagent and method of using same |
| US4080264A (en) * | 1976-03-01 | 1978-03-21 | Massachusetts Institute Of Technology | Immunoassay by light scattering spectroscopy |
| US4174952A (en) * | 1978-01-23 | 1979-11-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Immunoassay by light scattering intensity anisotropy measurements |
| JPS6094404A (ja) | 1983-10-28 | 1985-05-27 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | ビニル重合体ラテツクスの製造方法 |
| US4703018A (en) * | 1985-02-20 | 1987-10-27 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | High refractive index haloalkyl-functional shell-core polymers and their use in light scattering immunoassays |
| US5175112A (en) * | 1989-01-20 | 1992-12-29 | Diagnostica Stago | Submicron particles, preparation and utilization in immunodiagnosis |
| US5100805A (en) * | 1989-01-26 | 1992-03-31 | Seradyn, Inc. | Quantitative immunoassay system and method for agglutination assays |
| US5891664A (en) * | 1989-04-07 | 1999-04-06 | Cancerforskningsfondet Af 1989 | Vectors and methods for recombinant production of uPA-binding fragments of the human urokinase-type plasminogen receptor (uPAR) |
| DE4034509A1 (de) | 1990-10-30 | 1992-05-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Immunologisches praezipitationsverfahren zur bestimmung eines bindefaehigen analyten sowie reagenz zur durchfuehrung dieses verfahrens |
| CA2055425A1 (en) * | 1990-11-13 | 1992-05-14 | Hideaki Morishita | Polypeptide, dna fragment encoding the same and process for producing the same, and enzyme inhibition process, drug composition and methods of treating using the same |
| JPH04198866A (ja) | 1990-11-29 | 1992-07-20 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | 診断薬用担体ラテックス及び診断薬 |
| FR2738917B1 (fr) | 1995-09-19 | 1997-11-21 | Aetsrn | Test immunologique elisa pour l'inter-alpha-trypsine inhibiteur |
-
1997
- 1997-08-15 JP JP22049597A patent/JP3298812B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-08-14 DE DE69809172T patent/DE69809172T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-14 US US09/133,942 patent/US6673632B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-14 EP EP98306480A patent/EP0908726B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6673632B1 (en) | 2004-01-06 |
| JP3298812B2 (ja) | 2002-07-08 |
| EP0908726A2 (en) | 1999-04-14 |
| EP0908726A3 (en) | 2001-04-04 |
| EP0908726B1 (en) | 2002-11-06 |
| DE69809172T2 (de) | 2003-07-24 |
| DE69809172D1 (de) | 2002-12-12 |
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