JPH11507215A

JPH11507215A - アゴニスト活性を実質的にもたないＣ５ａ受容体アンタゴニストおよび製造方法

Info

Publication number: JPH11507215A
Application number: JP9500138A
Authority: JP
Inventors: フアン・オーストルム，ヤン; フアン・ヘーケ，ジノ; シュミッツ，アルベルト
Original assignee: ノバルティス・アクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1995-06-05
Filing date: 1996-06-04
Publication date: 1999-06-29
Also published as: AU6125096A; EP0832223A1; WO1996039503A1

Abstract

(57)【要約】実質的にはアナフィラトキシンまたはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであるヒトＣ５ａのポリペプチド類似体または誘導体、類似体の誘導体、および類似体または誘導体の二量体形態が開示されている。ポリペプチドをコード化するＤＮＡ分子および類似体の製造方法も提供される。Ｃ５ａ類似体または誘導体を含む医薬製剤は、哺乳類におけるＣ５ａ仲介疾患および炎症状態の処置において治療的に、および炎症を誘発または既存の炎症状態を悪化させる事象により誘発される炎症を阻止または低減化するため予防的に、それぞれ使用される。さらに、ヒトＣ５ａとの交差反応性を実質的には呈しないＣ５ａ類似体、その誘導体および類似体および誘導体の二量体に特異的な抗体が開示されている。抗体は、循環しているＣ５ａ類似体または誘導体を検出または定量、並びにインビボでＣ５ａ受容体アンタゴニストの活性を修飾、すなわち中和するのに使用される。

Description

【発明の詳細な説明】アゴニスト活性を実質的にもたないＣ５ａ受容体アンタゴニストおよび製造方法発明の分野この発明は、免疫学分野、より具体的には哺乳類における補体仲介疾患および炎症状態の処置に関するものである。発明の背景炎症は傷害により誘導される局在的な防御的事象であり、傷害源および損傷組織の両方を破壊、減殺または壁防止する働きがある。炎症は、動脈、毛細管および小静脈の拡張を含み、導管透過性を高め、血流を増加させ、体液および血漿タンパク質を滲出させる一連の複雑な事象を伴う。これらのプロセスの後、多くの場合急速に白血球が血管内皮に接着し、それに続いて細胞から周囲組織への流入が起こる。補体系、すなわち異物に対する主要免疫防御機構は、炎症反応を含む因子の各々に影響を及ぼすことが示された。一般に、補体は、組織および血液から微生物および他の抗原を排除すべく働く一組のタンパク質を含む。この働きは、補体成分単独または抗体もしくは補体受容体を発現する細胞と協同することにより達成される。さらに具体的には、この系は約３０の血漿タンパク質から成り、それらは細胞受容体および数種の膜調節タンパク質に相当する。キノシタ、「イミュノロジー・トゥデー」、１２：２９１−３００(1991)。例えば抗原−抗体複合体または細菌表面構造による補体系の活性化が、補体成分のタンパク質分解的開裂およびタンパク質会合事象の増幅カスケードを誘発することにより、最終的には異物は破壊され、最後には排出される。ムラー-エーベルハルト、「アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー」５７：３２１−３４７(1988)。数種の生物活性ペプチドは、補体系の活性化により生成される。７４アミノ酸を含み、約１１０００の分子量を有する糖蛋白質Ｃ５ａは、Ｃ５転換酵素により補体の第５成分、Ｃ５のＮ−終止末端のタンパク質分解的開裂により生成される。ニルッソンら、「ジャーナル・オブ・イミュノロジー」１１４：８１５−８２２(1975)。Ｃ５ａの生物学的特性は、急性および慢性の両炎症プロセスに関与した多数の細胞および組織全体に波及する。ハグリ、「CRC Crit.Rev.Immunol.」１：３２１−３６６(1981)。これらの特性の多くは免疫学的に有益である。Ｃ５ａは、様々な病的状態に応じて宿主防御機構を伝達することが見いだされた。Ｃ５ａは、炎症応答に普通伴う広く多様な特異的生物機能、例えば平滑筋収縮、血管透過性の増加、ヒト皮膚への注入時における膨疹紅斑応答、マスト細胞からのヒスタミン放出、および多形核白血球（ＰＭＮＬｓ）からの酸化的バーストおよびリソソーム酵素放出の誘導に関与する。Ｃ５ａは、好塩基性細胞、好酸球、単核細胞および好中球を含むあらゆる循環性白血球細胞からの測定可能な応答を刺激する。ハグリ、前出、バウチュら、「イミュノバイオロジー」１８５：４１− ５２(1992)。Ｃ５ａはさらに強力な化学誘引物質であることが見いだされた。フェルナンデスら、「ジャーナル・オブ・イミュノロジー」１２０：１０９−１１５(1978)。このタンパク質は、炎症部位へのＰＭＮＬｓ、例えば食細胞の誘引に対する中枢刺激因子である。適当な標的、例えば侵入性微生物または腫瘍細胞に対して指向する場合、補体は有益であるが、不適当に活性化されると、明かな病原潜在性を有することになる。例えば、アナフィラトキシン、例えばＣ５ａは、数種の炎症疾患、例えば成人呼吸窮迫症候群およびリウマチ様関節炎の発病において原因または増悪因子として関与しでいる。バウチュら、「バイオケミカル・ジャーナル」２８８：２６１−２６６(1992)、ハスレットら、「ジャーナル・オブ・イミュノロジー」１４２：３５１０−３５１７(1989)。特に、組織におけるＣ５ａの迷入的存在は、これまでにリウマチ様関節炎、骨関節症、乾癬および非心臓性肺浮腫の患者から検出されている。ハマーシュミット、「ジャーナル・オブ・アメリカン・メディカル・アソシエーション」２４４：１９９−(1980)。Ｃ５ａは、炎症性白血球のリクルートおよび刺激および抗体産生の増大を含む追加的活性による補体活性化により生成される主たる炎症伝達物質であることが見いだされた。モリソンら、「プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ」８６：２９２−２９６(1989) 参照。炎症のインビボまたは薬理的制御は、化学走性の調整に依存的であると推定される。阻害が行われ得る３つのレベルは既に認識されている。これらは、（１）走化性刺激物質に対する白血球応答の抑制、（２）ケモタキシン生成の阻害、および（３）ケモタキシンの不活化である。さらに、Ｃ５ａは数種のヒト細胞、例えば好中球、好酸球および単核球誘導細胞の膜から見いだされる特異的Ｃ５ａ受容体に結合することによりその様々な機能を発揮するため、Ｃ５ａ伝達化学走性の阻害、および特にＣ５ａ受容体アンタゴニストの設計については、かなりの注意を惹いてきている。クリアリーらによるＵＳ４７７２５８４は、Ｃ５ａのＣ−末端から６アミノ酸ペプチドを開裂することによりＰＭＮＬｓへのＣ５ａの結合を阻害するストレプトコッカスＡ群から単離されたポリペプチドについて開示している。ハーンによるＵＳ４６９２５１１は、Ｃ５ａ遮断活性を示す必須コアテトラペプチドTyr-As p-Gly-Ala（配列番号１）またはAsp-Gly-Ala-Tyr（配列番号２）、またはコアトリペプチドAsp-Gly-Alaを含むＣ５ａに対するポリペプチド受容体アンタゴニストについて開示している。アボット・ラボラトリーズによるＵＳ５１９０９２２、ＷＯ９０／０９１６２および９２／１１８５８は、Ｃ５ａ受容体に結合し、主張によるとアナフィラトキシン活性を調整する様々なオリゴペプチドを開示している。しかしながら、これらの分子の幾つかは，重大なアゴニスト活性を保持していることが示された。モリソンら、「プログレス・イン・インフラメーション・リサーチ・アンド・セラピー」中「好中球受容体相互作用に関するＣ５ａ構造必要条件」、ビルクハウゼル・フェルラーク、バーゼル(1991)１７−２１頁、カワイら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー」３５：２２０−２２３(1992)、カワイら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー」３４：２０６８−２０７１ (1991)、およびオルら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー」３５：４０２−４０６(1992)参照。アゴニスト活性を実質的に無効にできる強力で治療上有効なＣ５ａ受容体アンタゴニストが依然として強く要望されている。さらに、かかるＣ５ａ受容体アンタゴニストの有効な製造方法も依然として強く要望されている。発明の要約本発明のー態様は、Ｃ５ａ受容体アンタゴニストであり、実質的にアナフィラトキシンまたはアゴニスト活性を呈しないヒトＣ５ａのポリペプチド類似体またはポリペプチド誘導体、並びに類似体または誘導体の２量体形態に関するものである。本発明の別の態様は、上記ポリペプチド類似体またはポリペプチド誘導体を含む融合タンパク質に関するものである。ポリペプチド類（すなわち、類似体またはその誘導体）または融合タンパク質をコード化するＤＮＡ分子、プラスミド、ベクターおよびＤＮＡ分子により形質転換された宿主細胞、並びにＣ５ａ類似体、誘導体または融合タンパク質の製造方法もまた提供される。Ｃ５ａ類似体、その誘導体または２量体を含む医薬製剤は、哺乳類におけるＣ５ａ仲介炎症状態および疾患の処置方法で、および上記炎症を阻止するための予防薬として有利に使用される。本発明の別の態様は、実質的にヒトＣ５ａとの交差反応性を呈しない、Ｃ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体に特異的な抗体に関するものである。これらの抗体は、循環性Ｃ５ａ類似体または誘導体を（以前にこれを投与された）対象から検出または定量し、およびインビボでＣ５ａ類似体および誘導体の活性を修飾、例えば中和するのに使用される。図面の簡単な記載図１は、オリゴヌクレオチドカップリングによるヒトＣ５ａをコード化する合成遺伝子の合成を説明する流れ図である。図２は、ｐＢ−６／Ｃ５ａのプラスミド地図である。好ましい態様の記載本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａポリペプチド類似体またはポリペプチド誘導体は、実質的にアゴニスト活性をもたないＣ５ａ受容体アンタゴニストである。「Ｃ５ａ受容体」の語は、Ｃ５ａ、その分解産物Ｃ５ａ−desＡｒｇおよび上記アンタゴニストが結合するヒト血液細胞、例えばＰＭＮＬｓおよび単核細胞の表面にある部位を指すものとして当業界では理解されている。例えば、ＵＳ５１７７１９０およびオッパーマンら、「ジャーナル・オブ・イミュノロジー」１５１（７）：３７８５−３７９４(1993)参照。Ｃ５ａは、カルボキシペプチダーゼＢ様酵素によりヒト血清中でＣ５ａ−desＡｒｇに酵素的に変換される、ヒトにおける主要生理学的最終産物である。チェノウェスら、「モレキュラー・イミュノロジー」１７：１５１−１６１(1980)。「アンタゴニスト」の語は、上記ポリペプチドがＣ５ａの阻害物質であることを意味する。すなわち、それらはＣ５ａとＣ５ａ受容体の結合を妨害する。特別な理論で束縛する意図はないが、本出願者らは、ヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体が、Ｃ５ａ受容体への結合をめぐってＣ５ａと競争する点でＣ５ａの競争的阻害物質であると考えている。ヒトＣ５ａの上記Ｃ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の拮抗作用は、実施例７で詳述されている、セリグマンら、「エージェンツ・アンド・アクションズ」２１：３７５−３７８(1987)に開示されたカルシウム増加検定でＩＣ₅₀として定量され得る。ＩＣ₅₀は、１００ピコモルのヒトＣ５ａを含む対抗量投与後、Ｃ５ａ受容体を担持するＰＭＮＬｓによるカルシウムイオンの細胞内動態化の５０％を阻止するヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の濃度として定義される。本発明のＣ５ａ受容体アンタゴニストは、セリグマンら、前出の文献で開示されたカルシウム増加検定において約２.０×１０^-6モルを越えないＩＣ₅₀を呈する。「実質的にアナフィラトキシン活性をもたない」または「実質的にアゴニスト活性をもたない」の語は、受容体へヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体（以後、Ｃ５ａ受容体アンタゴニストと互換的に使用する）が結合しても、最終的にＣ５ａとその受容体の結合により誘発されるアナフィラトキシン誘導炎症を通常伴う生理学的応答、例えば食細胞の活性化、平滑筋収縮、血管透過性の増加、および炎症伝達物質、例えばヒスタミン類、プロスタグランジン類、トロンボキサン類、ロイコトリエン類、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ− ６およびＩＬ−８の過剰生産をもたらす内在性シグナル変換事象は誘導されないことを意味する。ハグリら、ＣＲＣＣrit.Ｒev.Ｉmmunol.１：３２１−３２６( 1981)およびＰＣＴＷＯ９２／１０２０５参照。この特性の定量的尺度はまた、セリグマンら、前出文献に開示され、実施例７にも記載されているカルシウム増加検定を用いて得られる。ＥＣ₅₀は、アゴニスト活性の尺度である。本発明の目的の場合、ＥＣ₅₀値は、ヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体によりそれぞれ誘発される最大応答の５０％をもたらすヒトＣ５ａの同Ｃ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の濃度である。本出願人らは、同カルシウム増加検定において少なくとも約８.０×１０^-7モル、好ましくは少なくとも約３.０×１０^-6モル以下の濃度でヒトＣ５ａの上記Ｃ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体のアゴニスト活性を検出したことはない。本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体は、ＥＣ₅₀が、セリグマンのカルシウム増加検定で応答が全く検出され得ないことから、この検定において少なくとも約８.０×１０^-7 モル、好ましくは少なくとも約３.０×１０^-6モルのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体濃度以下で測定され得ない場合のものである。Ｃ５ａは７４−アミノ酸ポリペプチドであり、その配列はフェルナンデスら、「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」２５３：６９５５−６９６４（１９７８）に開示されている。誘導されたヌクレオチド配列に基づいて構築された合成遺伝子は、マンデッキら、「プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ」８２：３５４３−３５４７（１９８５）およびデヴィドウらのＵＳ４９３７１８９に開示されている。フェルナンデスにより開示されたＣ５ａのアミノ酸配列およびデヴィドウらにより開示された対応する合成ヌクレオチド配列は、下記表１に示されている。本出願人らは、予想外にもそして驚くべきことに、ヒトＣ５ａ（以後、「Ｃ５ａ（１-７４）」と互換的に使用する）のＣ−末端領域、すなわちアミノ酸６４ −７４をコード化する合成Ｃ５ａ遺伝子部分に突然変異を誘発させることにより生成されたヒトＣ５ａのある種の類似体またはポリペプチド誘導体が、Ｃ５ａとは劇的に異なる特性を有することを発見した。すなわち、それらは秀でたアンタゴニスト特性を呈し、実質的にアゴニスト活性をもたない。ヒトＣ５ａの上記類似体またはそのポリペプチド誘導体のＮ−末端アミノ酸残基は、いずれかのアミノ酸残基、例えばヒトＣ５ａのようにThr残基、またはＭet残基であり得る。特に、ヒトＣ５ａの上記ポリペプチド誘導体は、Ｎ−末端としてグリシン残基を有する。すなわち、本出願の一態様では、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体であって、実質的にアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、Ｎ−末端としてグリシン残基を有する誘導体が提供される。好ましくは、Ｎ−末端グリシン残基は付加物形態（Ｎ−末端付加残基）で有り得、または、同じく好ましくは、上記グリシン残基は、ヒトＣ５ａのＮ−アミノ酸トレオニンに対する置換基である（置換Ｔｈｒ１Ｇｌｙ）。特に、本発明によるヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体は、例えばヒトＣ５ａトレオニン〜グリシンのＮ−末端アミノ酸残基に突然変異を誘発させ、さらにヒトＣ５ａ（以後、「Ｃ５ａ（１-７４）」と互換的に使用する）のＣ−末端領域、すなわちアミノ酸６４-７４をコード化する合成Ｃ５ａ遺伝子部分に突然変異を誘発させることにより生成され得る。具体的には、本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体は、Ｃ５ａ（１-７４）のＣ−末端領域、（Ｃ５ａ（１-７４）のアミノ酸６４−７４）に対する２つの修飾または突然変異のうちの少なくとも１つまたは好ましくは両方に関して定義される。第一に、少なくともＬｅｕ（７２）まで、すなわちＧｌｙ（７３）およびＡｒｇ（７４）残基を除去することにより先端切除されている。第二に、最も好ましい態様において、ポリペプチドのＣ−末端アミノ酸（すなわち、Ｃ−末端）がシステインである場合、およびＣ−末端システインのチオール（ＳＨ）基が還元形態である（すなわち、遊離チオール基を有する）か、または遊離チオール基に自発変換し得るかまたは容易に変換され得る形態である場合、少なくとも１個のシステインがこの領域で置換されている。別の好ましい態様では、システイン残基は付加物形態（Ｃ−末端付加残基）である。すなわち、一実施態様では、上記ポリペプチド誘導体は、それがシステイン残基を有し、そのＣ−末端が少なくとも２個のアミノ酸残基により先端切除されているという点でヒトＣ５ａの対応するＣ−末端領域とは異なるＣ−末端領域を含む。好ましい態様では、ほとんどのＣ−末端アミノ酸の２〜６個は、Ｃ５ａ（１- ７４）から先端切除されている。従って、本発明の好ましいポリペプチド誘導体は、長さが６４〜７２アミノ酸、好ましくは６８〜７２アミノ酸、さらに好ましくは７０〜７２アミノ酸、および最も好ましくは７１アミノ酸である。すなわち、Ｎ−末端６３アミノ酸領域が無傷で保たれ、唯一システインが置換されている場合、それぞれの対応する例または態様は、例えば次のように示され得る。すなわち、Ｃ５ａ（１-７２、Ｌｅｕ７２Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-７２、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｌｅｕ７２Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-７２、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ，Ｌｅｕ７２Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-７１、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-７０、Ｍｅｔ７０Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-７０、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｍｅｔ７０Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-７０、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｍｅｔ７０Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-６９、Ａｓｐ６９Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-６９、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ａｓｐ６９Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-６９、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ａｓｐ６９Ｃｙｓ）、およびＣ５ａ（１- ６８、Ｌｙｓ６８Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-６８、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｌｙｓ６８Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-６８、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｌｙｓ６８Ｃｙｓ）。さらに好ましい態様において、Ｃ−末端領域は、Ｍｅｔ７０、Ｇｌｎ７１またはＬｅｕ７２まで（これらを含む）先端切除されており、それらは先に示された態様に相当する。さらにＣ−末端領域はＮ−末端がＡｓｎ６４まで先端切除され得、それらは代表的な上記の例または態様Ｃ５ａ（１-６７、Ｈｉｓ６７Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１- ６７、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｈｉｓ６７Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-６７、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｈｉｓ６７Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-６６、Ｓｅｒ６６Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-６６、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｓｅｒ６６Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-６６、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｓｅｒ６６Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-６５、Ｉｌｅ６５Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-６５、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｉｌｅ６５Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-６５、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｉｌｅ６５Ｃｙｓ）、およびＣ５ａ（１- ６４、Ａｓｎ６４Ｃｙｓ）、Ｃ５ａ（１-６４、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ａｓｎ６４Ｃｙｓ）、好ましくはＣ５ａ（１-６４、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ａｓｎ６４Ｃｙｓ）に対応するが、ただし生成されたヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチドは、前述の必須アンタゴニスト特性（ＩＣ₅₀は約２.０×１０^-6モルを越えない）を呈し、実質的にアナフィラトキシンまたはアゴニスト活性（Ｃ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体濃度が少なくとも３.０×１０^-6モル以下である測定不能なＥＣ₅₀）をもたないものとする。当業界の熟練者であれば、ヒトＣ５ａの「類似体」または「ポリペプチド誘導体」が、Ｃ５ａまたはＣ５ａ受容体の部位に特異的な抗体を含まないことは理解できるはずである。ここに記載されているヒトＣ５ａのさらに別の誘導体も、本発明の範囲内に含まれる。これらは、Ｎ−末端６３アミノ酸領域（Ｃ５ａ（１-７４）のアミノ酸１-６３）における修飾、例えば点突然変異、置換、付加および欠失、カーネイら、「プロテイン・サイエンス」２：1391−1399(1993)、およびこうして突然変異が誘発されたＣ−末端領域におけるさらに別のアミノ酸置換を包含する。上記と同様、生成される誘導体がＣ５ａ受容体アンタゴニストを保持し、かつ実質的にアゴニスト活性をもたなければ、修飾のタイプおよび範囲は総じて重要ではない。例えば、Ｃ５ａ（１-７４）のＮ−末端領域にあるＣｙｓ２７残基が例えばセリン残基に変換されることにより、再生中の折り重なりが最小限になり得る。すなわち、Ｃ５ａ類似体誘導体は、例えばＣ５ａ（１-７１、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）またはＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）、または好ましい態様では、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）で示され得る。また、Ｎ− 末端は、置換または付加によりメチオニン残基に変えられ、様々な宿主細胞、例えばエシェリヒア・コリにおいてＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の発現が行われ得る。実施例１で説明され、表３で示されているところによると（実施例３、下記）、エシェリヒア・コリで直接産生された上述のＣ５ａ類似体はそのＮ−末端としてＭｅｔ残基を有する。さらに、Ｎ−末端としてＭｅｔ残基を有するＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体は、融合タンパク質形態で生成され、それに続いて融合部分が開裂され得る。Ｎ−末端置換はまた、本発明のヒトＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体を融合タンパク質として様々な宿主細胞、例えばエシェリヒア・コリで発現させ、次いで融合タンパク質を好都合な部位で開裂することにより単離する場合に行われ得る。例えば、ヒドロキシルアミン結合により結合されたその融合タンパク質相手物質からヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体を開裂することにより、天然ヒトＣ５ａトレオニン（Ｔｈｒ）Ｎ−末端に対するグリシン（Ｇｌｙ）残基の置換が行われる。置換を有するポリペプチド誘導体Ｃ５ａ（Ｔｈ１Ｇｌｙ）の好ましい態様についでは上述されている。これらのうち、最も好ましい態様は、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）またはＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である。Ｃ−末端領域のさらに別の修飾の一例は、Ｃ５ａ（１-７４）の６７位にある天然ヒスチジンに対するフェニルアラニン残基の置換である。一例として、Ｃ５ａ類似体誘導体は、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｈｉｓ６７Ｐｈｅ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）と称される。すなわち、別の好ましい具体例では、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体は上述のものであり、置換Ｃ５ａ（Ｈｉｓ６７Ｐｈｅ）を含む。好ましいのは、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｈｉｓ６７Ｐｈｅ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）と称されるヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体である。本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体は、当業界では標準的な多くの方法により製造され得る。例えば、それらは直接化学合成により製造され得る。それらはまた、適当な宿主細胞においてポリペプチドをコード化するＤＮＡ分子、すなわち合成遺伝子の発現により製造され得る。すなわち、本発明のさらに別の態様によると、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子であって、前記誘導体が実質的にアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、Ｎ−末端としてグリシン残基を有する誘導体である、ＤＮＡ分子が提供される。その好ましい態様は、ここで述べられている本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子である。これらの中で、好ましいのは、本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子であり、長さは６４〜７２個、好ましくは７１個のアミノ酸残基である。さらにいっそう好ましいのは、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）またはＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｈｉｓ６７Ｐｈｅ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）と称されるポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子である。これらのＤＮＡ分子は、ヒトＣ５ａの類似体またはポリペプチド誘導体のアミノ酸配列から誘導可能であり、公知技術によっても製造され得る。ＤＮＡは、ナラング、「テトラヘドロン」３９：３−２２(1983)およびＥＰＡ１４６７８５、マンデッキら、「プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ」８２：３５４３−３５４７(1985)（Ｃ５ａをコード化する遺伝子の化学合成を開示している）に開示されている要領で化学的に合成され得る。ＤＮＡ分子のフラグメントは、化学的に製造され得、次いで酵素的に結合される。「カレント・プロトコルズ・イン・モレキュラー・バイオロジー」の第１巻、第８章、アウスベルら（編集）、ウィリー、ニューヨーク(1990)参照。本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡはまた、Ｃ５ａをコード化する公知合成または天然遺伝子、例えばフェルナンデス、マンデッキおよびデヴィッドソンにより開示されたものの突然変異誘発により製造され得る。アウスベルら、前出、マニアチスら、「モレキュラー・クローニング、ア・ラボラトリー・マニュアル」の第II巻、１５章、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク(1989)、およびモリソンら、「プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ」８６：２９２−２９６(1989)参照。さらに、ＤＮＡはＰＣＲ技術により製造され得る。ＰＣＲプロトコルズ、イニスら（編集）、アカデミック・プレス、サンディエゴ、カリフォルニア(1990)。本発明のＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子は、当業界公認の技術に従い、既知調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、３'−非翻訳配列および５'翻訳配列、例えばシグナルおよび先導配列に機能し得るように結合され、次に遺伝子を発現し得る宿主細胞へ形質転換される。次いで、形質転換された宿主細胞を、アンタゴニストコード化遺伝子の発現に適した条件下で培養する。代表的な宿主細胞には、原核生物、例えばエシェリヒア・コリおよびバシラス、例えばバシラス・サチリス、および真核生物、例えば糸状菌、例えばアスペルギルス・ニガー、酵母、例えばサッカロミセス・セレヴィシエ、ピキア・パストリスおよびヤロヴィア・リポリティカ、バキュロウイルス／昆虫細胞培養物（サマーズら、「ア・マニュアル・オブ・メソッズ・フォー・バキュロヴィールス・ベクターズ・アンド・インセクト・セル・カルチャー・プロシージャーズ」、テキサス・アグリカルチュラル・エクスペリメント・ステーション(1 987)）、哺乳類セルライン、および植物（バンデケルクホーヴェら、「バイオ／テクノロジー」７：９２９−９３２(1989)）がある。一般に、ユシェリヒア・コリにおけるＣ５ａの発現方法は、Ｃ５ａ類似体またはヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体の遺伝子発現に適用され得る。マンデッキ、「プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ」８２：３５４３−３５４７(1 985)、モリソンら、「プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ」８６：２９２−２９６(1989)、およびバウチュら、「イミュノバイオロジー」１８５：４１−５２(1992)参照。適当な調節配列、例えばプロモーター（例、Ｔ７ポリメラーゼ、ＵＶ５−Ｄ、ｔｒｐまたはｌａｃ）、リボソーム結合部位、および転写停止部位を含む適当なプラスミドベクター、例えばｐＫＫ２２３−２の選択は、当業界熟練者のレベルの範囲内に含まれる。エシェリヒア・コリにおける発現を最適化するためには、グオイら、「ヌクレイック・アシッズ・リサーチ」１０：７０５５−７０７４(1982)に開示されたエシェリヒア・コリに好適なコドンを用いてＤＮＡ分子を合成すべきであり、幾つかの制限エンドヌクレアーゼ部位を考慮すれば、合成されたＤＮＡの特性確認および恐らくはＤＮＡ配列の突然変異誘発が容易になる。この方法を用いて、ポリペプチドの第一アミノ酸をコードするトリプレットのすぐ上流に直接タンパク質合成用のＡＴＧ開始コドンを導入することにより、本発明のＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の直接発現が可能となる。さらに、エシェリヒア・コリ株、例えばイオン(Ion)は、野生型細胞に存在する幾つかのプロテアーゼの一つを欠いているため、タンパク質の収率を高めるという利点を呈する。フランケら、「メソッズ・イン・エンザイモロジー」１６２：６５３−６５８(1988)。すなわち、本発明のさらに別の態様は、本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子に機能し得るように結合された所定の宿主において機能し得るプロモーターを含む組換えＤＮＡ−分子に関するものである。さらに、本発明は、本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体をコード化する上述の組換えＤＮＡ分子を含む、所定の宿主と適合し得る組換えプラスミドに関するものである。より広い意味で、ある態様は、本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体をコード化する上述の組換えＤＮＡ分子を含む、所定の宿主と適合し得る組換えベクターに関するものである。また、例えばエシェリヒア・コリのような宿主におけるＣ５ａ類似体遺伝子の発現性は、融合タンパク質形態で遺伝子を発現させることにより高められ得る。本発明のさらに別の態様である上記融合タンパク質は、一般にＮ−末端〜Ｃ−末端、融合相手、開裂可能なリンカー、およびそれに融合した状態で、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体という順序で構成され、この場合、上記ポリペプチド誘導体は、実質的にアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストである。本発明の範囲内において、上記融合タンパク質のヒトＣ５ａ形成部分のポリペプチド誘導体は、上述されている本発明の特定類似体またはポリペプチド誘導体に制限されるわけではないが、それらは好ましい態様を形成している。反対に、こういった類似体または誘導体は、その類似体または誘導体が、実質的にアゴニスト活性を呈しないヒトＣ５ａから誘導されたＣ５ａ受容体アンタゴニストであれば、ヒトＣ５ａの他のいかなるＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体であってもよい。特に、上記融合タンパク質のさらに別の好ましい類似体または誘導体形成部分は、本発明の類似体または誘導体にヒトＣ５ａのＮ−末端置換、例えば置換Ｔｈｒ１ＧｌｙまたはＴｈｒ１Ｍｅｔを導入することにより誘導される。同様に、ヒトＣ５ａのＮ−末端（Ｔｈｒ１）に置換を伴わないヒトＣ５ａの類似体またはポリペプチド誘導体も融合タンパク質に使用され得る。別の方法では、ヒトＣ５ａの上記類似体またはポリペプチド誘導体のＮ−末端に他のアミノ酸が付加され得、付加物が得られる。好ましいのは、ヒトＣ５ａのかかる類似体またはポリペプチド誘導体がさらに、上記で述べられているように、システイン残基を有し、少なくとも２個のアミノ酸残基によりそのＣ−末端が先端切除されている点が、ヒトＣ５ａの対応するＣ−末端領域とは異なるＣ−末端領域を含む融合タンパク質である。さらに好ましくは、融合タンパク質は、付加物としてまたはさらに好ましくは置換基として、Ｃ−末端としてシステイン残基を有するヒトＣ５ａのかかる類似体またはポリペプチド誘導体を含む。化学的および酵素的開裂連鎖を用いる上記融合タンパク質の製造方法は、当業界では公知である。例えば、スミス、「メソッズ・イン・モレキュラー・バイオロジー」中、第３巻、「ニュー・プロテイン・テクニクス」、５７−７０および７１−８８頁(1984)、およびファン・ヘーケら、「プロテイン・エクスプレッション・アンド・ピュリフィケーション」４：２６５−７４(1993)参照。一般に、融合相手は、宿主、例えばエシェリヒア・コリにおいて高度発現される遺伝子（またはそのフラグメント）である。エシェリヒア・コリの場合、適当な融合相手には、内在性エシェリヒア・コリ遺伝子および合成遺伝子、例えばエシェリヒア・コリ好適コドンを含むものがある。さらに、当業界では公知の他の融合相手、例えばヒトカルボニックアンヒドラーゼII（詳細については実施例１６参照）も使用され得る。原則として、融合相手のサイズが小さいとき、ヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の収率が高くなる。本発明の非常に好ましい態様では、Ｎ−末端〜Ｃ−末端、融合相手、開裂可能なリンカーおよびそれに融合した状態でヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体といった順序で構成される融合タンパク質であって、上記ポリペプチド誘導体が実質的にアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、上記融合相手が細胞、好ましくはエシェリヒア・コリ細胞において封入体の形成を指令し得るポリペプチドである、融合タンパク質が提供される。本出願人らは、予想外かつ驚くべきことに、本発明による融合タンパク質により、特に上記開裂可能なリンカーと共存する上記融合相手がヒトＣ５ａの上記ポリペプチド誘導体のほぼアミノ酸長（または分子量）またはそれ未満のポリペプチドである場合、特にエシェリヒア・コリにおいて封入体形成を指令し得ることを発見した。すなわち、本発明の一実施態様は、上記融合タンパク質であって、融合相手が細胞、特にエシェリヒア・コリ細胞において封入体の形成を指令し得るポリペプチドである、融合タンパク質に関するものである。好ましいのは、上記開裂可能なリンカーと共存する上記融合相手がヒトＣ５ａの上記ポリペプチド誘導体のほぼアミノ酸長（または分子量）またはそれ未満のポリペプチドである、融合タンパク質である。すなわち、例えば上述のヒトＣ５ａの好ましいポリペプチド誘導体が６４〜７２アミノ酸長を有する場合、上記リンカーと共存する上記融合相手は好ましくはほぼ同じ長さ、好ましくは前記長さ未満、好ましくは４２〜６１アミノ酸またはそれ未満の長さを有する。上記融合相手自体は好ましくは４０〜５３アミノ酸長またはそれ未満の長さを有する。好ましくは、融合相手は、ヒトインターロイキン−１β（ＩＬ−１βまたはＩＬ−ＩＢとも称する）のＮ−末端フラグメントまたはその突然変異体を含む。熟練者が認めるところによると、点突然変異、例えばヒトＩＬ−１β（Ｃｙｓ９Ｓｅｒ）のような単一点突然変異は、ヒト１Ｌ−１βのＮ−末端フラグメントにおいて誘発され得、その結果、封入体形成を指令し得るさらに好ましい融合相手が生成される。例えば、上記融合相手は、上記で述べたところによると、ヒトＩＬ−１β（ディナレロ、「ブラッド」７７：１６２７−５２(1991)）またはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７を含む。所望によりさらに、上記融合相手は、例えばヒトＩＬ−１βの上記Ｎ−末端フラグメントに対しＣ−末端に位置する３〜６個のアミノ酸長（ディナレロ、前出）を有するヒトインターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ −１ＲＡとも示す）の短いフラグメントを含む。当業界の熟練者であれば、標準的技術（例、融合相手のサイズ（長さ）を系統的に変えることによりＣ５ａ類似体融合タンパク質の発現力価を測定することによる）に従い融合相手の適当なサイズを決定することができる。エシェリヒア・コリにおける発現に関して好ましい態様では、融合相手は、ハイブリッドタンパク質ヒトインターロイキン１ベータおよびインターロイキン１受容体アンタゴニストの５３アミノ酸フラグメントをコード化する１５９−ヌクレオチドＤＮＡによりコード化され、（ディナレロ、「ブラッド」７７：１６２７−５２(1991)）、そのＤＮＡはエシェリヒア・コリ好適コドンを含む。かかる融合相手は、例えばＮ−末端〜Ｃ−末端、上述されているヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７およびヒトインターロイキン１受容体アンタゴニスト（ディナレロ、上記参照）のアミノ酸残基５２〜５７という順序で構成される。また、エシェリヒア・コリにおける発現に融合相手として好ましいのは、ヒトインターロイキン１ベータおよびインターロイキン１受容体アンタゴニストのハイブリッドタンパク質から成る５０アミノ酸フラグメント（エシェリヒア・コリ好適コドンを含む１５０ヌクレオチドＤＮＡによりコード化される）である。かかる融合相手は例えば、Ｎ−末端〜Ｃ−末端、上述のヒトＩＬ−１β またはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７およびヒトインターロイキン１受容体アンタゴニスト（ディナレロ、上記参照）のアミノ酸５２〜５４という順序で構成される。好ましい態様において、本発明の融合タンパク質の開裂可能なリンカーは、ヒドロキシルアミン感受性部位（Ａｓｎ−Ｇｌｙ）（ヒドロキシルアミン開裂部位とも呼ばれる）（例、キャレイ、Ｅ.、クレイトン、Ｔ.Ｅ．（編）：「プロテイン・ストラクチャー、ア・プラクティカル・アプローチ」中、ＩＲプレス、オクスフォード、イギリス国(1989)）を含む。所望によりさらに、かかるリンカーは、上記ヒドロキシルアミン開裂部位に対してＮ−末端に位置する、当技術分野（例、ファン・ヘーケら、「プロテイン・エクスプレッション・アンド・ピュリフィケーション」４：２６５−２７４(1993)）で公知の、アミノ酸配列-Val-Asp-A sp-Asp-Asp-Lys-（配列番号６８）のエンテロキナーゼプロテアーゼ開裂部位を含み得、この場合上記リンカーは２４ヌクレオチドＤＮＡフラグメントによりコード化される。エシェリヒア・コリで発現させる場合、上記リンカーは、エシェリヒア・コリ好適コドンを含むＤＮＡ分子によりコード化される。熟練者であれば気付くように、上記リンカーと共存する上記融合相手の全長（または分子量）が生成されるヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体の長さ（または分子量）とほぼ同じまたはそれ未満である場合、上述の開裂部位（複数も可）を含むリンカーに追加のアミノ酸残基（複数も可）を含ませることにより、開裂が容易になり得る。例えば融合相手および上記開裂部位（複数も可）のいずれかの間に位置する追加的な１、２または３またはそれ以上のアミノ酸残基（複数も可）が存在し得る。別法として、複数の開裂部位が存在する場合、追加のアミノ酸残基（複数も可）は上記開裂部位の各２個間に存在し得る。すなわち、好ましい態様において、本発明による融合タンパク質は、Ｎ−末端〜Ｃ−末端、上述のヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７、およびヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５４、アミノ酸残基-Val-Asp -Asp-Asp-Asp-Lys-Asn-Gly-（配列番号６９）を含む開裂可能なリンカー配列、および上記ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体という順序で構成され、ここで上記開裂可能リンカーのＣ−末端アミノ酸残基Ｇｌｙは上記ポリペプチド誘導体におけるヒトＣ５ａのＮ−末端アミノ酸残基Ｔｈｒに対する置換基である。この明細書において、好ましいポリペプチド誘導体は、上記のもの、例えばアミノ酸残基の長さが６４〜７２、好ましくは７１である本発明のポリペプチド誘導体である。上記誘導体の好ましい例は、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１ＧｌｙＮＣｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）またはＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｈｕｓ６７Ｐｈｅ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である。本発明のさらに別の態様は、好ましい態様として上述した融合タンパク質をコード化するＤＮＡ分子に関するものである。例えば、好ましいのは、上述の融合タンパク質をコード化するＤＮＡ分子であり、この場合、上記融合相手は上述のヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７、およびヒトＩＬ −１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５７により構成されるか、または上記融合相手は上述のヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７、およびヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５４により構成される。特に好ましい例は、Ｎ−末端〜Ｃ−末端、上述されたヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７、ヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５４、アミノ酸配列 -Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-Asn-Gly-を含む開裂可能なリンカー、および請求項１記載のポリペプチド誘導体という順序で構成される、融合タンパク質をコード化するＤＮＡ分子であり、ここで上記リンカーのＣ−末端残基Ｇｌｙは上記ポリペプチド誘導体におけるヒトＣ５ａのＮ−末端アミノ酸残基Ｔｈｒに対する置換基である。本発明の別の態様は、上記の本発明による融合タンパク質をコード化するＤＮＡ分子に機能し得るように結合された所定の宿主において機能し得るプロモーターを含む、組換えＤＮＡ分子に関するものである。別の態様は、組換えプラスミドまたは、より広い意味で組換えベクターに関するものであり、それぞれ所定の宿主と適合し得、上記の組換えＤＮＡ分子を含む。上記組換えＤＮＡ分子、プラスミドまたはベクターそれぞれの好ましい具体例は、上記ＤＮＡ分子および／または上記融合タンパク質に関連して上記で記載されたものである。上記ＤＮＡ分子、組換えＤＮＡ、プラスミドまたはベクターのそれぞれの製造方法は、上記方法と同様である。一般に、Ｃ５ａ類似体コード化またはポリペプチド誘導体コード化合成遺伝子は、公知方法に従うことにより酵母において発現され得る。例えば、ロマノスら、「イースト」８：４２３−４８８(1992)、ゲーデル（編）、「メソッズ・イン・エンザイモロジー」６節、１８５：２３１−４８４(1990)、デヴィドウら、前出、およびＵＳ４７７５６２２参照。酵母での発現を最適化するため、特に内在性ＫＥＸ２プロテアーゼに関する標的であるＡｒｇ−Ａｒｇ対合を回避するために、ＤＮＡ分子は酵母好適コドンを用いて製造されるべきである。Ｎ−末端として、メチオニンとは対立するものとしてグルタミンを使用すると、シグナル配列、例えばアルファ因子シグナル配列からのタンパク質分解的開裂が容易になる。さらに好ましくは、本Ｃ５ａ受容体アンタゴニストの様々な態様の潜在的グリコシル化部位、例えば６４位のアスパラギンを排除する。哺乳類細胞における本発明のＣ５ａ類似体-またはポリペプチド誘導体-コード化遺伝子の発現は、公知方法に従い遂行され得る。マニアティスら、前述の「哺乳類細胞におけるクローン化遺伝子の発現」、第１６章参照。ヒト細胞における代表的発現方法は、ベルグら、「バイオ・テクニクス」１４（６）：９７２−９７８（１９９３）に開示されている。適当なヒト細胞には、公的に入手できるセルライン、例えばＨｅＬＡＳ３（ＡＴＣＣＣＣＬ２.２）およびＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣＣＲＬ１５７３）がある。ＣＨＯ細胞における発現は、例えばアッセルバーグスら、「フィブリノリシス」７：１−１４(1993)に開示されている。適当なハムスターセルラインには、ＣＨＯ-Ｋ１（ＡＴＣＣＣＣＬ６１）、ＢＨＫ（ＡＴＣＣＣＲＬ６２８１）、ＢＨＫ-２１（ＡＴＣＣ６２８１、ＣＣＬ１０およびＣＲＬ８５４４）がある。代表的なサル細胞は、ＣＶ−１（ＡＴＣＣＣＣＬ７０）、ＣＯＳ−７（ＡＴＣＣＣＲＬ１６５０）およびＶＥＲＯ細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ８１）である。適当なマウスセルラインは、Ｃ１２７（ＡＴＣＣ１８０４）である。好ましいセルラインは、ウリアウブら、「プロシーディング・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ」７７：４２１６−４２２０(1980)に開示されたＤＨＦＲ −マイナスＣＨＯラインである。血清依存性セルラインの方がさらに好ましい。クラノら、「バイオ／テクノロジー」１６：２４５−２５８(1990)参照。哺乳類宿主では、Ｃ５ａ類似体のグリコシル化または非グリコシル化形態が製造され得る。すなわち、本発明のさらに別の態様は、全て上記に記載された、ヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体をコード化するかまたは融合タンパク質をコード化するＤＮＡ分子を含む、組換えＤＮＡ分子により安定して形質転換された組換え宿主に関するものである。好ましくは、上記組換え宿主は、細菌、真菌、昆虫、哺乳類および植物細胞から成る群から選択され、それらは熟練者の知るところである。いずれの場合でも組換え宿主として特に好ましいのはエシェリヒア・コリである。好ましくは好都合な１段階方法を用いることにより、形質転換エシェリヒア・コリ細胞から単離されたヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体が復元され、Ｃ−末端システインが還元形態である、すなわち遊離チオール基を含む場合の生物活性を呈する。本出願人らは、予想外にも、還元剤対酸化剤のモル比が少なくとも約１００：１〜約５００：１である酸化還元対で変性の起こったＣ５ａ類似体を処理することにより、還元形態のＣ−末端システインを有する生物活性Ｃ５ａ類似体が得られることを発見した。この割合は、既知割合よりも約１０倍〜約５０倍大きい（１０：１という還元スルフヒドリル対酸化スルフヒドリル化合物の好ましい割合は、ビルダーら、ＵＳ４６２０９４８の１７欄４３− ４５行で開示されている）。この方法に従い、形質転換エシェリヒア・コリ細胞を、Ｃ５ａ類似体の生成を誘発するのに十分な条件下で培養後、変性および可溶化剤、例えば６ＭグアニジンＨＣ１と混合すると、変性Ｃ５ａ類似体が生成され、所望により公知技術、例えば音波処理、フレンチ・プレスまたはダイノミルによりさらに粉砕してもよい。次いで、変性を起こしたＣ５ａ類似体を含む上記要領で混合または粉砕された細胞を、適当な条件下で還元剤／酸化剤の重量によるモル比が少なくとも約１００：１〜約５００：１の酸化還元対と混合すると、復元された生物活性Ｃ５ａ類似体が生成される。すなわち、本発明の別の好ましい態様は、ヒトＣ５ａの生物活性ポリペプチド誘導体の製造方法であって、上記誘導体が実質的にアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、上記誘導体がＮ−末端としてグリシン残基を有するものであり、（１）ＤＮＡ分子の発現誘発に適した条件下で上記ポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子により安定して形質転換されたエシェリヒア・コリ細胞を培養し、（２）上記要領で培養された細胞を変性および可溶化剤と接触させることにより変性形態の上記ポリペプチド誘導体を製造し、そして（３）上記要領で変性を起こしたポリペプチド誘導体を、適当な条件下で還元剤対酸化剤のモル比が重量にして少なくとも約１００：１である還元剤および酸化剤を含む溶液と混合することにより、生物活性形態のポリペプチド誘導体を製造するという段階を含む方法に関するものである。適当な酸化還元対には、システイン／シスチンおよび還元グルタチオン／酸化グルタチオンが含まれる。当業界の他の熟練者であっても、他の酸化還元対を使用し得ることは認めるところである。グルタチオン酸化還元対が好ましい。適当な条件には、６.５〜７.５、好ましくは７.４のｐＨが含まれる。タンパク質の収率を最大にするのに十分な時間混合物を室温で放置する。好ましい時間は、約１／２時間〜約４時間である。すなわち、この方法により、細菌細胞から屈折力のある封入体（すなわち、発現されたタンパク質の不溶性塊）を分離し、次いでＣ−末端システインのチオール基を還元する必要が排除される。融合タンパク質としてヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体を発現するのが望ましいことであり得るため、この発明のさらに別の態様は、上述の方法であって、上記ＤＮＡ分子が融合タンパク質形態でポリペプチド誘導体をコード化する方法に関するものである。好ましくは、上記方法は、さらに上記混合段階の前に、発現された融合タンパク質を開裂する段階を含む。このため、ヒトＣ５ａの生物活性Ｃ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の製造方法であって、上記類似体が実質的にアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、（１）上記ポリペプチド誘導体Ｃ５ａ類似体の融合タンパク質形態をコード化する組換えＤＮＡ分子により安定して形質転換された宿主細胞を培養し、ただし上記培養は上記融合タンパク質の発現誘発に適した条件下で行われるものとし、（２）上記要領で培養された宿主細胞から融合タンパク質を分離し、（３）上記要領で分離された融合タンパク質を開裂することにより、ヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体が得られるという段階を含む方法が提供される。融合タンバク質および上記融合タンパク質に含まれるヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体の好ましい態様は、それぞれ上記の融合タンパク質またはポリペプチド誘導体である。好ましいポリペプチド誘導体は、アミノ酸残基の長さが６４〜７２であり、例えばＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）またはＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｈｉｓ６７Ｐｈｅ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である。上記方法のさらに別の反応条件は、上記の通りである。Ｃ５ａ類似体またはそのポリペプチド誘導体が封入体として融合タンパク質形態で発現される態様は、ヒトＣ５ａの生物活性ポリペプチド誘導体の製造方法であって、上記誘導体が実質的にアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、（１）上記ポリペプチド誘導体Ｃ５ａ類似体を融合タンパク質形態でコード化する組換えＤＮＡ分子により安定して形質転換された宿主細胞を培養し、ただし上記培養は封入体形態での上記融合タンパク質の発現誘発に適した条件下で行われるものとし、（２）上記要領で培養された宿主細胞から融合タンパク質を含む封入体を分離し、（３）上記要領で分離された封入体を変性および可溶化剤と接触させて、変性形態の融合タンパク質を生成し、（４）上記要領で分離された融合タンパク質を開裂することにより、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体が得られ、そして（５）上記要領で開裂された融合タンパク質を、適当な条件下、還元剤対酸化剤のモル重量比が少なくとも約１００：１である還元剤および酸化剤を含む溶液と混合することにより、生物活性形態のポリペプチド誘導体が生成されるという段階から成る方法（ただし、段階３および４は同時または連続して行われる）に関するものである。一般に、ＤＮＡ分子、融合タンパク質、ポリペプチド誘導体および宿主細胞の好ましい具体例は、上述のものである。すなわち、好ましくは上記宿主細胞は、エシェリヒア・コリ細胞である。好ましい具体例において、上記組換えＤＮＡ分子は、Ｎ−末端〜Ｃ−末端、融合相手、開裂可能なリンカーおよび、それに融合して、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体という順序で構成され、上記ポリペプチド誘導体が実質的にはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストである、融合タンパク質をコード化する。上記で述べたところによると、上記誘導体は好ましくは、システイン残基を有し、Ｃ−末端が少なくとも２個のアミノ酸残基により先端切除されている点で、ヒトＣ５ａの対応するＣ−末端領域とは異なるＣ−末端領域を含む。特に、上記誘導体はＣ−末端としてシステイン残基を有する。非常に好ましい具体例では、上記誘導体はＮ−末端としてグリシン残基を有する。この方法を効果的に遂行させるために、上記開裂可能リンカーと共存する上記融合相手は、好ましくはヒトＣ５ａの上記ポリペプチド誘導体とほぼ同じアミノ酸長（または分子量）のポリペプチドである。特に、上記融合相手は、上述のとおりヒトＩＬ−１βのＮ−末端フラグメントを含む。例えば、上記融合相手は、上述のヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７、およびヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５７により構成されるか、または上記融合相手は、上述のヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７、およびヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５４により構成される。好ましい具体例では、上記リンカーはヒドロキシルアミン開裂部位を含む。さらに具体的には、上記リンカーは、Ｎ−末端〜Ｃ−末端、エンテロキナーゼプロテアーゼ開裂部位およびヒドロキシルアミン開裂部位という順序で構成される。このため、かかる融合タンパク質は好ましくは、Ｎ−末端〜Ｃ−末端、上述のヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７、ヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５４、アミノ酸配列-Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-Asn-Gly -（配列番号６９）を含む開裂可能なリンカー、および請求項１記載のポリペプチド誘導体という順序で構成され、ここで上記リンカーのＣ−末端残基Ｇｌｙは、上記ポリペプチド誘導体におけるヒトＣ５ａのＮ−末端アミノ酸残基Ｔｈｒに対する置換基である。この誘導体は６４〜７２アミノ酸残基長であり得るか、または上述の別の好ましい長さを有し得る。この明細書における好ましいポリペプチド誘導体に関する例は、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）またはＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｈｉｓ６７Ｐｈｅ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である。特に、生成した融合タンパク質を含む封入体は、低速遠心分離（例、約３０００ｘｇ）を用いる細胞溶解後定量的に採取され得るため、比較的高濃度のフラクションが得られ、次いでこれは適当に可溶化され得る。この方法は、発酵槽から採取された細胞の単位重量当たりの体積が２０倍減少したものを用いるという利点を呈する。その好ましい態様において、上記混合は上記要領で行われ、特にｐＨは約６. ５〜約７.５である。好ましくは、上記混合は約１／２時間〜約４時間の期間行われる。酸化還元対は好ましくは、上記の通り、還元グルタチオン／酸化グルタチオンである。別法として、ヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体は、例えば、標準的再生および精製計画、例えばビルダーら、ＵＳ４６２０９４８に開示されたものに従って復元され得る。これらの方法に従うと、Ｃ−末端システインは付加物形態、例えばｃｙｓ−ｃｙｓまたはｃｙｓ−グルタチオンとなる。従って、遊離チオール基を得るためには付加物をさらに還元しなければならない。本出願人らは、ヒトＣ５ａの開示されたＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の付加物が、ここに記載されているとおり実質的にはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストとしても機能すること、そのため本発明の範囲内に含まれることを発見した。しかしながら、これらの標準復元技術を使用する場合、好ましい具体例を生成させるためには、さらに還元することが必要である。復元後、ヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体は、所望の程度に精製され得る。代表的精製案には、限外濾過、ダイアフィルトレーション、ゲル電気泳動、クロマトグラフィー方法、例えばイオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ、セファデックスによる処理、透析、アフィニティー・クロマトグラフィーなどがある。当業界の熟練者であれば、精製案の組み合わせが使用され得ることは認めるはずである。Ｃ−末端システイン残基を有する本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体は、標準的技術に従い酸化され二量体を形成し得る。すなわち、さらに別の態様は、ヒトＣ５ａの第一および第二ポリペプチド誘導体を含む二量体であって、上記誘導体の各々が実質的にはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、Ｃ−末端システイン残基を有し、上記第一および第二誘導体のシステイン残基がジスルフィド結合を介して結合されており、ヒトＣ５ａの上記第一および第二ポリペプチド誘導体が同一または異なり得、さらにヒトＣ５ａの上記第一および第二ポリペプチド誘導体の少なくとも一方が上記の、すなわちＮ−末端としてグリシン残基を有するヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体である、二量体に関するものである。好ましくは、かかる二量体では、上記第一および上記第二誘導体の各々のＣ−末端領域は、少なくとも２個のアミノ酸残基により先端が切除されている点で、ヒトＣ５ａの対応するＣ−末端領域とは異なる。かかる二量体における好ましい具体例では、上記第一および第二誘導体の各々がヒトＣ５ａ誘導体Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である。二量体を製造するため、各単量体（類似体）のＣ −末端システインのチオール（−ＳＨ）基を酸化すると、ジスルフィド結合が生成される。ホモニ量体およびヘテロニ量体は「二量体」の語に包含される。本発明の別の態様は、ヒトを含む哺乳類の治療または予防処置で使用される上記の本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体またはその二量体に関するものである。さらに別の態様は、ヒトを含む哺乳類におけるＣ５ａ仲介疾患または炎症状態を処置するための医薬組成物の製造を目的とする上記の本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体またはその二量体の使用に関するものである。別の態様は、上記本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体またはその二量体の治療有効量および所望により医薬的に許容し得る担体を含む、ヒトを含む哺乳類におけるＣ５ａ仲介疾患または炎症状態の処置に有用な医薬組成物に関するものである。この明細書では、好ましいポリペプチド誘導体または二量体は、本発明による好ましい化合物として上述されているもの（上記参照）である。例えば、医薬組成物は、好ましくはヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体、すなわちＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）または上記誘導体を含むその二量体を含む。さらに別の態様は、哺乳類におけるＣ５ａ仲介疾患または炎症状態の処置方法であって、処置を必要とするヒトを含む哺乳類に上述の医薬組成物を投与する段階を含む方法に関するものである。さらに別の態様は、ヒトを含む哺乳類においてＣ５ａ仲介炎症を低減化させる方法であって、炎症の低減化に十分な程度補体活性化−誘発または悪化事象に対して一度に上記哺乳類に上述した医薬組成物を投与する段階を含む方法に関するものである。特に、本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体およびその二量体は、補体系、より具体的にはＣ５ａおよびアナフィラトキシンが関与する有害な状態または疾患の処置および／または予防に有用である。それらは、Ｃ５ａ伝達組織破壊および死の危険に瀕している哺乳類患者、特にヒトに投与されると治療上非常に有効である。一般に、これらの状態または疾患は、例えばＣ５ａがタンパク質分解的に血清で生成される炎症疾患である。ヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体またはその二量体に反応する代表的な病状には、肺炎、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺繊維症、肺炎症または傷害、慢性進行性肺膿疱異常性(discystic)繊維症、綿肺症、石綿誘発性炎症、心筋梗塞、心筋梗塞後炎症、虚血性心損傷、肝硬変、原発性胆汁性肝硬変炎症、慢性肝炎、膵炎、出血性膵炎、炎症性腸疾患、大腸炎、虚血性脳損傷、脳炎、髄膜炎における脳神経損傷、髄膜炎、ブドウ膜炎、パーチャー網膜症、免疫複合体仲介糸球体腎炎、腎皮質壊死、痛風、脈管炎、血清病、血管浮腫、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、リウマチ様関節炎、水疱性皮膚疾患、過敏症、乾癬、エンドトキシンショック、敗血症、重度外傷および火傷がある。それらはまた、移植拒絶に苦しむ患者、免疫抑制療法または大量輸血を受けている患者、医療装置に曝されている患者、血液透析およびロイコフェレシス(leukopheresis)後に肺機能不全を経験している患者を処置するため治療的に使用され得る。さらにこれらの類似体、ポリペプチド誘導体およびその二量体は、特に再潅流、例えば虚血後の再潅流、および医療装置との循環的接触により誘発される状態における予防薬として、並びに移植拒絶を阻止するための治療用途を有する。この場合、Ｃ５ａ類似体または誘導体は、好適には炎症を誘発または既存の炎症状態を悪化させることが知られている事象の前または実質的に同時に投与される。本発明のＣ５ａ類似体、ポリペプチド誘導体およびその二量体は、所望に応じて慣用的非毒性の医薬的に許容し得る担体、アジュバントおよび賦形剤を含む単位用量製剤で、タンパク質性医薬にとって治療上有効な経路、例えば非経口、鼻腔内、直腸または口内経路により投与され得る。「非経口」の語は、例えば皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内、動脈内注射および注入技術といったデリバリー方法を包含する。本発明のＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体（および二量体）の用量は、個々の患者にとって望ましい治療応答が得られるように変えられ得る。例えば、これは、特定アンタゴニストの活性、投与方法、処置される病状の重篤度、および患者の健康状態により異なる。所定の状態および患者に対する治療有効用量の決定は、当業界の熟練者レベルの範囲内である。一般に、１日に体重１キログラム当たり約１μｇ〜１００ｍｇの用量レベルが哺乳類宿主に投与される。好ましい用量レベルは、１日に体重１ｋg当たり約０.１ｍｇ〜約２０ｍｇの範囲である。Ｃ５ａ類似体は、長期間にわたり１回連続用量として患者に投与される。しかしながら、総有効用量は、所望ならば、多用量、例えば１日に２〜４回の個別用量に分割され得る。本発明のＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体（および二量体）は、公知の医薬的に許容し得る成分および製造方法の両方を用いて組成物に製剤化され得る。例えば、レミントンら、「ファーマシューティカル・サイエンシーズ」第１５版、マック・パブ．（イーストン、ペンシルバニア）(1975)参照。非経口投与に適した組成物は、医薬的に許容し得る滅菌水性または非水性溶液、分散液、懸濁液またはエマルジョン、並びに使用直前に滅菌注射可能溶液または分散液に再構成される滅菌粉末を含む。適当な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形剤の代表的な例としては、水、エタノール、ポリオール類、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、およびそれらの適当な混合物、植物油、例えばオリーブ油、および注射可能有機エステル類、例えばエチルオレエートがある。流動性は、コーティング材料、例えばレシチンの使用、要求される粒子サイズの維持（分散液の場合）、および界面活性剤を含む様々な手段により維持され得る。これらの組成物はまた、補助薬剤、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールおよびソルビン酸、等張剤、例えば糖類、塩化ナトリウム、または吸収遅延剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含み得る。Ｃ５ａ受容体アンタゴニストは、遅効または持続放出または標的デリバリー系、例えばポリマーマトリックス、リポソームおよび微小球に組み込まれ得る。注射可能製剤は、保菌性フィルターに通す濾過を含む多数の手段により、または使用直前に滅菌水または他の無菌注射可能媒質に溶解または分散され得る滅菌固体組成物形態で滅菌剤を混入することにより消毒され得る。懸濁液は、Ｃ５ａ類似体、ポリペプチド誘導体またはその二量体および他の有効成分（あれば）に加えて、懸濁剤、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル類、微晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天-寒天、トラガカントゴムおよびそれらの混合物を含み得る。直腸または膣投与用組成物は、通常本発明のポリペプチドを適当な非刺激性賦形剤または担体、例えばココア脂、ポリエチレングリコールまたは坐薬鑞など室温では固体であるが体温では液体であるため、直腸または膣腔で溶けて受容体アンタゴニストを放出するものと混合することにより製造され得る坐薬形態である。眼病用製剤、眼用軟膏、散剤および溶液もまた、ここに開示された発明の範囲内に含まれる。本発明のさらに別の態様は、本発明のポリペプチド誘導体または二量体に特異的な抗体であって、実質的にはヒトＣ５ａとの交差反応性を呈しない抗体に関するものである。この抗体はポリクローナルまたはモノクローナルであり得る。好ましい抗体は、上述されている本発明のヒトＣ５ａの好ましいポリペプチド誘導体または二量体に特異的なものである。例えば、本発明の好ましい抗体は、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体、すなわちＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）に特異的である。別の好ましい抗体は、本発明の二量体に特異的であり、上記の第一および第二誘導体の各々はヒトＣ５ａ誘導体Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である。本発明のヒトＣ５ａのＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体および二量体に特異的なポリクローナルおよびモノクローナル抗体は、標準技術に従い製造され得る。ポリクローナル抗体は、例えば、動物、例えばウサギ、ヤギ、ヒツジまたはウマにＣ５ａ類似体-またはポリペプチド誘導体-または二量体-担体タンパク質コンジュゲートを注射することにより産生され、それぞれ抗Ｃ５ａ類似体または抗ポリペプチド誘導体または抗二量体抗体が産生される。例えばＡ．ジョーンストーンおよびＲ．ソーペ、「イミュノケミストリー・イン・プラクティス」、ブラックウェル・サイエンティフィック・パブリケーションズ、オクスフォード (1982)参照。本発明のＣ５ａ類似体、ポリペプチド誘導体または二量体に特異的なモノクローナル抗体は、コーラーおよびミルスタイン、「ネイチャー」２５６：４９５−９７(1975)に開示された技術に従い製造され得る。またピーターズ、Ｊ.Ｈ.、(編)「モノクローナル・アンティボディーズ」、スプリンガー・フェルラーク・ベルリン、ハイデルベルグ、ドイツ国(1992)参照。Ｃ５ａ類似体、ポリペプチド誘導体または二量体に特異的なポリクローナルおよびモノクローナル抗体は、実質的にはヒトＣ５ａとの交差反応性を呈しない。「実質的には交差反応性(を呈しない)」という語は、抗Ｃ５ａ類似体、抗ポリペプチド誘導体または抗二量体抗体が呈するヒトＣ５ａとの交差反応性が非常に低い(極僅かである)ため、生物試料における本発明Ｃ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体または二量体に関する検定で内生Ｃ５ａによる干渉が全く検出され得ないことを意味する。本発明のＣ５ａ類似体−特異的、ポリペプチド誘導体−特異的または二量体− 特異的抗体は、以前にＣ５ａ類似体、ポリペプチド誘導体または二量体をそれぞれ投与された対象における、循環している同物質の検出および定量、並びに循環しているＣ５ａ類似体の活性の調節、例えば中和に特に有用である。すなわち、本発明の別の態様は、活性調節を必要とする対象において本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体または二量体の活性を調節する方法であって、対象に本発明の抗体を好ましくは医薬組成物形態（下記参照）で投与する段階を含む方法に関するものである。本発明のさらに別の態様は、活性中和を必要とする対象において本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体または二量体の活性を中和する方法であって、対象に本発明の抗体を好ましくは医薬組成物形態（下記参照）で投与する段階を含む方法に関するものである。本発明のヒトＣ５ａの循環しているＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体または二量体は、抗体を利用する標準免疫学的技術に従い検出され得る。一般に、流体または組織試料を対象から採取し、次いで類似体および抗体間に検出可能な免疫複合体を形成させ得るのに適した条件下、対象に投与されたＣ５ａ類似体に特異的な抗体と反応させる。かかる免疫複合体の形成は、試料中における類似体の存在の指標である。上記検定では、血漿または血清試料を用いるのが好ましい。しかしながら、組織、例えばある種の血液細胞、例えばＰＭＮＬもまた使用され得る。反応の存在および／または程度は、当業界で公知の様々な方法、例えば放射線免疫検定法、酵素免疫検定法、蛍光免疫検定法、蛍光顕微鏡法などで測定され得る。適当な定性および定量的免疫学的検定方法は、Ｊ.バトラー、「イミュノケミストリー・オブ・ソリッド-フェーズ・イミュノアッセイ」、ＣＲＣプレス(1991)に開示されている。一般的には循環しているＣ５ａ類似体を検出する検定法を用いて、処置中の類似体のレベルをモニターする。すなわち、本発明のさらに別の態様は、対象における本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体または二量体の測定に関する定性的または定量的検定法であって、（１）対象から組織または液体試料を採取し、そして（２）抗体および誘導体間に検出可能な免疫複合体を形成（ここで、複合体の形成は対象における誘導体の存在の指標である）させ得るのに十分な条件下で本発明の抗体と試料を接触させるという段階を含む方法に関するものである。さらにかかる検定法は、対象におけるポリペプチド誘導体または二量体を定量する段階を含み得る。さらに、本発明の抗体は、循環しているＣ５ａ類似体の活性を調節または中和するために医薬組成物において有利に使用され得る。このため、さらに別の態様は、本発明のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体または二量体のインビボ活性の調節に有用な医薬組成物であって、誘導体の活性を調節するのに有効な量の本発明の抗体、および所望により医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物に関するものである。好ましいのは、上記抗体の量が上記誘導体または二量体のインビボ活性を実質的に中和するのに有効なものである上記医薬組成物である。使用される抗体の量は、投与される類似体の量のモル当量である。組成物は対象に非経口投与され得る。静脈内注射は緊急事態では特に好ましい。抗体は、医薬的に許容し得る賦形剤、例えば食塩水またはリンガー溶液と組み合わせて単位用量注射可能形態で製剤化される。以下、詳細な実施例により、本発明についてさらに説明する。当業界の熟練者が認めるところによると、実施例に記載された各製造または試験方法は、原則としてポリペプチド誘導体、二量体、融合タンパク質、ＤＮＡ分子、プラスミド、ベクター、形質転換された宿主および抗体をそれぞれ製造または試験するのに適したものである。これらの実施例は、説明を目的としているのに過ぎず、特記していなければ限定を意図したものではないものとする。実施例１ヒトＣ５ａコード化遺伝子の合成ヒトＣ５ａ遺伝子は、オリゴヌクレオチドのカップリングにより合成される。この合成遺伝子のコドンの用い方は、エシェリヒア・コリでの最適な発現を目的として設計されている。合成方法は図１で説明されている。その方法は、ＡＵＧコドンの与える翻訳開始頻度が他のコドンの場合よりもかなり高いためＴｈｒからＭｅｔに変えられたＮ−末端残基をもつ５フラグメントの縮合を含む。フラグメント１は、シャインーデルガーノ配列および合成遺伝子のＡＴＧ開始コドンをコード化する。フラグメント２−５はＣ５ａ遺伝子をコード化する。オリゴヌクレオチド合成：オリゴヌクレオチドは、固相ホスファーアミダイト方法によりジーン・アセンブラー（ファーマシア）で合成される。完全合成されたオリゴヌクレオチドは、固体支持体から開裂され、５５℃で１６時間濃ＮＨ₄ＯＨとのインキュベーションにより脱保護される。次いで、オリゴヌクレオチドをプレパラティブゲル電気泳動により精製する。使用されるアクリルアミド濃度は、長さが７０塩基対よりも大きいオリゴヌクレオチドの場合の１０％から４０塩基対より小さい場合の２０％に変化した。電気泳動後、オリゴヌクレオチドをＵＶシャドウィングにより明視化し、主要高分子量フラグメントをゲルから削り取る。ゲル薄片をガラス棒により試験管中で微粉化し、３７℃で１６時間３.０ｍｌの０.１モル重炭酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＢ）緩衝液（ｐＨ７.５）中でのインキュベーションによりＤＮＡを抽出する。ゲル残存物を遠心分離により除去し、セップ・パックＣ−１８カラム（ウォーターズ・アソーシエイツ）でのクロマトグラフィーによりオリゴヌクレオチドを単離する。１０ｍｌのアセトニトリル、５０ミリモルＴＥＡＢ中３０％アセトニトリル５ｍｌおよび１０ｍｌの２５ミリモルＴＥＡＢで連続洗浄することにより、カラムを予め平衡状態にする。オリゴヌクレオチドを適用し、１０ｍｌの２５ミリモルＴＥＡＢで洗浄し、３５.５ミリモルＴＥＡＢ中５０％アセトニトリル５ｍｌによりカラムから溶離する。フラクションを集め、２６０ｎｍでの吸光度により測定されるオリゴヌクレオチドを含むものをスピードヴァック（セイヴァント）で乾燥する。オリゴヌクレオチドのアニーリングおよびカップリング：アニーリング前、各オリゴヌクレオチドを５'末端でリン酸化する。キナーゼ反応混合物は、１２ミリモルのＭｇＣｌ₂、１ミリモルのＤＴＴ（ジチオトレイトール）および２ミリモルのＡＴＰを含む、ｐＨ７.５で７７ミリモルのトリス４０μｌの総体積中１μｇのオリゴヌクレオチドを含む。１０単位のＴ４ポリヌクレオチドギナーゼを加えることにより反応を開始させ、３７℃で４０分間続行させる。１０μｌの滅菌水を各キナーゼ反応物に加え、４８μｌの相補オリゴヌクレオチドを加え、混合し、７８℃の加熱ブロックに置く。加熱ブロックを消し、混合物を３０℃に放冷する。次いで、試料を６８℃で１０分間第二の加熱ブロックに置き、再びブロックを消し、混合物を２６℃に放冷する。アニーリングされた遺伝子フラグメントを用いて、ファージＭ１３ｍｐ１８（ニューイングランド・バイオラブズ）において遺伝子を組み立てる。Ｍ１３ｍｐ１８においてＣ５ａコード化遺伝子を組み立てる方法は、３回のライゲーション反応を必要とする。適当な遺伝子フラグメントをＭ１３ｍｐ１８へ各ライゲーション反応させた後、エシェリヒア・コリＪＭ１０１をライゲーションされたＭ１３ＤＮＡにより形質転換する。組換えクローンからＭ１３ファージを単離した後、構築物の配列分析をする。最終Ｃ５ａ遺伝子をＭ１３ｍｐ１８へクローン化すると、Ｍ１３ｍｐ１８／Ｃ５ａ（Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、１-７４）が得られる。Ｃ５ａ（１-７４）遺伝子を、プラスミドｐＴＺ１９ＲおよびｐＫＫ２２３-３（両方ともファーマシアから誘導された）から誘導されたｐＢ−６ベクターへサブクローン化すると、ｐＢ −６／Ｃ５ａ（Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、１−７４）が得られる。図２参照。実施例２Ｃ５ａ遺伝子の位置指定突然変異導入法オリゴヌクレオチド指定インビトロ突然変異導入システムバージョン２（アマーシャム）、Ｃ５ａ含有ベクターＭ１３ｍｐ１８／Ｃ５ａ（１-７４）からの１本鎖ＤＮＡおよび突然変異原性オリゴヌクレオチドを用いることにより、位置指定突然変異導入が遂行される。Ｃ５ａにおける突然変異Ｃｙｓ２７Ｓｅｒは、製造業者により与えられた手順に従い、突然変異原性オリゴヌクレオチド、ACGGTG CTTCTGTTAACA（配列番号６）を用いて行われる。正確なＣｙｓ２７Ｓｅｒ突然変異に対するジデオキシＤＮＡ配列決定法により、４プラークを分析する。正確な突然変異体クローンのーつから２本鎖ＤＮＡを単離し、ＰｓｔＩおよびＢａｍＨＩで制限する。突然変異を含む２３０ｂｐフラグメントをｐＢ−６ベクターにサブクローン化する。生成したプラスミド、ｐＢ−６／Ｃ５ａ（１-７４、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ）についても、ジデオキシ方法により配列決定し、突然変異を確認する。実施例３Ｃ５ａ遺伝子のカセット突然変異誘発プラスミドｐＢ−６／Ｃ５ａ（１−７４、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ）またはｐＢ−６／Ｃ５ａ（１-７４、Ｔ１Ｍ）を、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄIIIで制限し、同様に同酵素により制限されたベクターｐＷＣＢにおいてサブクローン化すると、Ｃ５ａ（１-７４、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ）をコード化する遺伝子を含むプラスミドｐＷＣＢ１１２、およびＣ５ａ（１-７４、Ｔ１Ｍ）をコード化する遺伝子を含むｐＷＣＢ１００がそれぞれ生成される。次いで、プラスミドをカセット突然変異誘発で使用すると、一連の新規遺伝子が製造される。カセット突然変異誘発で使用されるオリゴヌクレオチドは、アプライド・バイオシステムズ３８１ＡＤＮＡ合成装置により、製造業者の使用説明書に従い固相ホスファーアミダイト化学作用を用いで製造される。約６０μｇのｐＷＣＢ１１２を含む１０μｌのＴＥを、６０ＵのＰＶＵIIを含む６μｌおよび６０ＵのＨｉｎｄIII（ニューイングランド・バイオラブズ）を含む３μｌおよび１０×高塩緩衝液（１モルのＮａＣｌ、０.５モルのトリス／ＨＣｌ、ｐＨ７.５、０.１モルのＭｇＣ₁₂、１０ミリモルのＤＴＴ）１０μｌおよび７１μｌのｄｄＨ₂Ｏと混合し、総体積１００μｌとする。この溶液を３７ ℃で１６時間インキュベーションする。こうして線形にされた約４.５Ｋｂのベクターを、１％アガロースゲルを用いるプレパラティブ電気泳動により精製し、次いで削り取られたアガロースゲル薄片からＤＮＡフラグメントを電気溶出する。回収されたＤＮＡフラグメントをエッペンドルフ管に移し、１ｍｌの無水エタノールを加え、管をエッペンドルフ遠心機中１４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離にかける。ＤＮＡペレットを真空乾燥し、それに続いて４５μｌのＴＥ緩衝液（１０ミリモルのトリス／ＨＣｌ、ｐＨ７.４、１ミリモルのＥＤＴＡ含有）に溶かすと、ｐＷＣＢ１１２／Ａが得られる。１本鎖オリゴヌクレオチドの３５ｂｐ−配列 5'CTGCGTGCTAACATCTCTCACAAAGAC ATGTGCTA3'（配列番号７）および３９ｂｐ−配列 5'AGCTTAGCACATGTCTTTGTGAGAG ATGTTAGTTAGCACGCAG3'（配列番号８）を、８％ポリアクリルアミドゲルでのプレパラティブ電気泳動により精製する。電気泳動後、オリゴヌクレオチドをＵＶシャドウイングにより明視化し、適当なフラグメントをゲルから削り取る。ゲル薄片を試験管中でガラス棒により微粉化し、３７℃で１６時間ｐＨ７.５の０.１モルＴＥＡＢ緩衝液３.０ｍｌ中でインキュベーションすることにより、ＤＮＡを抽出する。ゲル残存物を遠心分離により除去し、セップ・パックＣ−１８カラム（ウォーターズ・アソーシエイツ）でのクロマトグラフィーによりオリゴヌクレオチドを単離する。１０ｍｌのアセトニトリル、５０ミリモルＴＥＡＢ中３０％アセトニトリル５ｍｌおよび１０ｍｌの２５ミリモルＴＥＡＢで連続洗浄することにより、カラムを予め平衡状態にする。オリゴヌクレオチドを適用し、１０ｍｌの２５ミリモルＴＥＡＢで洗浄し、３５.５ミリモルＴＥＡＢ中５０％アセトニトリル５ｍｌによりカラムから溶離する。フラクションを集め、２６０ｎｍでの吸光度により測定されるオリゴヌクレオチドを含むものをスピードヴァック（セイヴァント）で乾燥する。３５および３９ｂｐのオリゴヌクレオチドのアニーリングは、等量の各オリゴヌクレオチドを、０.０１モルＭｇＣｌ₂含有０.０５モルのトリス／ＨＣｌ、ｐＨ７.６を含むクレノウ緩衝液と混合し、試料を１０分間９５℃に加熱し、それに続いて２時間かけて室温に冷却することにより行われ、その結果２本鎖ＤＮＡが形成され、制限ベクターｐＷＣＢ１１２／Ａへのライゲーションが行われる。２本鎖ＤＮＡは、１μｌ、２ＵのＴ４ＤＮＡリガーゼ（ＢＲＬ）と共にベクターに対し３倍過剰の挿入体を用いて、制限ベクターｐＷＣＢ１１２にライゲーションされる。この反応は、４℃で１７時間行われる。本質的に同じ技術を用いて、単に異なるオリゴヌクレオチドおよびｐＷＣＢ１００またはｐＷＣＢ１１２を用いることにより、若干の分子が製造される。それらは下記表２に示されている。類似体番号１０−２０はアゴニストであり、本発明の範囲外である。それらは比較目的で記載されている。類似体番号８の二量体形態の製造は、下記実施例５ｃに記載されている。それは類似体番号２２と命名されている。Ｃ５ａ類似体番号２１をコード化するポリヌクレオチドの完全なヌクレオチド配列は、下記表３に示されている。しかしながら、当業界の熟練者であれば、遺伝子コードの縮重故に、同一Ｃ５ａ類似体をコード化する多くのポリヌクレオチドが製造され得ることは認めるはずである。例えばワトソンら、「リコンビナントＤＮＡ」、第２版、フリーマン、ニューヨーク(1993)参照。実施例４エシェリヒア・コリにおけるＣ５ａおよびＣ５ａ類似体の発現発現を達成するため、表１に示されたＣ５ａ類似体に対する合成遺伝子を、ｐＷＣＢベクター、ＢａｍＨ１部位が欠失し、ＰｖｕII部位がＰｖｕＩ部位に変えられ、イソプロピルーチオーベータ−Ｄ−ガラクトシド（ＩＰＴＧ）−誘導性ｔａｃ−プロモーターおよびアンピシリン耐性遺伝子を含む修飾発現ベクターｐＫＫ２２３−３（ファーマシア）においてサブクローン化する。エシェリヒア・コリ株ＬＣＩＱは、ゴフら、「プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステーツ・オブ・アメリカ」８１：６６４７−６６５１（１９８４）に開示された株ＬＣ１３７（ｉｏｎ、ｈｔｐＲ）の誘導体である。それは、株ＤＨ５アルファＦ’ＩＱ（ＢＲＬラボラトリーズ）からのｌａｃＩＱをコード化するＦプライム因子を含み、発現プラスミドに対する宿主である。ＯＤ₅₅₀が１に達するまで、適当な発現プラスミドを含むエシェリヒア・コリＬＣＩＱをＬＢ肉汁中３０℃で生長させる。培養物を３時間２.５ミリモル最終濃度でＩＰＴＧにより誘導する。細胞を遠心分離により採取し、使用時まで−８０℃で貯蔵する。実施例５ａＣ５ａおよびＣ５ａ類似体の再生および精製組換えタンパク質は、実施例４からの冷凍エシェリヒア・コリ細胞ペーストアリコートから、６モルのグアニジニウム塩酸塩を含む緩衝液中で解凍（５：１ｖ：ｗ、緩衝液：細胞ペースト）後に単離される。次いで、細胞を音波処理により破壊し、生成物を、１ミリモルのシステインおよび１ミリモルのシスチンまたは１ミリモルの還元／酸化グルタチオンを含む５０ミリモルのトリス／ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８.０）に対して一夜透析し、復元を促進する。次いで、６ＮのＨＣｌを加えることにより、透析物をｐＨ３に酸性化する。沈澱物を遠心分離により除去し、３０分にわたって０.１％ＴＦＡの存在下水中２５％〜３５％のアセトニトリルの直線勾配を用いてデルタ・パックＣ１８、１００オングストローム、１５ミクロンの逆相ＨＰＬＣカラム（ウォーターズ）で上清を精製する。約２８％アセトニトリルでカラムから溶離する主要ピークを集め、凍結乾燥する。このフラクションは、Ｃ５ａ類似体のグルタチオン-付加物（表１における類似体５、７、８、９および２１の付加物）またはＣ５ａ類似体のシステイン-付加物（類似体番号８の付加物、表１）を含んでいた。Ｃ５ａ類似体遺伝子産物のシステイン付加物約０.００２ミリモルを、０.１モルのトリス緩衝液(ｐＨ７.４)５０ｍｌに溶かす。０.０２ミリモルのＤＴＴを加える。４時間後、Ｃ−末端ｃｙｓ−ｃｙｓ連鎖の約８０％は遊離システインに変換され、生成物を、３０分間０.１％ＴＦＡの存在下水中２５％〜３５％のアセトニトリルの直線勾配を用いて、Ｃ４、１５ミクロン、３００オングストロームの逆相カラム（オールテック）で精製する。約２９％アセトニトリルで溶離する生成物を含むフラクションを凍結乾燥し、次いで４℃で貯蔵し、真空乾燥する。実施例５ｂＣ５ａおよびＣ５ａ類似体の再生および精製組換えタンパク質は、実施例４からの冷凍細胞エシェリヒア・コリペーストのアリコートから、６モルのグアニジニウム塩酸塩を含む緩衝液中で解凍（５：１ｖ：ｗ、緩衝液：細胞ペースト）後に単離される。次いで、細胞を音波処理により破壊し、生成物を、１ミリモルの還元／０.０１ミリモルの酸化グルタチオンを含む１００ミリモルのトリス／ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７.４）により２０倍に希釈する。４時間後、６ＮのＨＣｌを加えることにより、溶液をｐＨ３に酸性化する。生成した沈澱物を遠心分離により除去し、３０分にわたって０.１％ＴＦＡの存在下２５％〜３５％のアセトニトリルの直線勾配を用いてデルタ・パックＣ１８、１００オングストローム、１５ミクロンの逆相ＨＰＬＣカラム（ウォーターズ）で上清を精製する。約３０％アセトニトリルでカラムから溶離する主要ピークを集め、凍結乾燥する。こうして単離されたＣ５ａ類似体は、還元チオール基を有するＣ−末端システインを有する。実施例５ｃＣ５ａ類似体二量体の形成Ｃ−末端領域に遊離チオール基を有するＣ５ａ類似体は、単量体形態（実施例５ｂ記載の再生後）から二量体形態に変換される。組換えタンバク質は、実施例４からの冷凍エシェリヒア・コリペーストアリコートから、１００ミリモルのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ７.４）中１ミリモルの還元／０.０１ミリモルの酸化グルタチオン混合物を用いて実施例５ｂによる再生後に単離される。４時間後、６ＮのＨＣｌを加えることにより、溶液をｐＨ３に酸性化する。生成した沈澱物を遠心分離により除去し、２５ミリモル緩衝液（ｐＨ７.０）で平衡状態にしたＳＰ−スフェロデックス／イオン交換カラムに上清を吸着させる。２５ミリモルのトリス（ｐＨ７.０）でカラムを洗浄後、Ｃ５ａ類似体は、０.７５モルのＮａＣｌを含む２５ミリモルのトリス（ｐＨ７.０）によりカラムから溶離される。部分精製Ｃ５ａ類似体を蟻酸によりｐＨ３.０にし、蒸留水で希釈すると、約４５ｍＳ／ｃｍの伝導性を有するタンパク質溶液が得られ、０.６モルのＮａＣｌを含む、ｐＨ３.５で５０ミリモル蟻酸中平衡状態に達したＳＰ−高性能／イオン交換カラムに吸着させる。Ｃ５ａ類似体は、ｐＨ３. ５で５０ミリモル蟻酸緩衝液中０.６−１.０モルＮａＣｌの直線勾配を用いてカラムから溶離される。約０.７２５モルのＮａＣｌでカラムから溶離する主要ピークを集める。そうして単離されたＣ５ａ類似体は、還元チオール基を有するＣ−末端システインを有する。２５％アンモニア水溶液でｐＨ７.０に調節し、溶液を貯蔵すると、分子はその二量体形態に変換される。ｐＨ７.０および約０.３−０.６ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度および４−８℃での貯蔵では、変換は２日で少なくとも８０％完了する。Ｃ５ａ類似体の二量体形態は、最終的に３０分かけて０.１％ＴＦＡの存在下２５％〜４０％アセトニトリルの直線勾配を用いるデルタ・パックＣ１８、１００オングストローム、１５ミクロン、逆相ＨＰＬＣカラム（ウォーターズ）で精製される。約３３％アセトニトリルでカラムから溶離する主要ピークを集め、凍結乾燥する。こうして単離された分子は、エシェリヒア・コリ発現系により産生されたＣ５ａ類似体の二量体である。実施例６受容体結合検定法Ｃ５ａおよびＣ５ａ受容体アンタゴニストを、Ｃ５ａ受容体に対するそれらの親和力について試験する。ＰＭＮＬ膜に対する、ハリスら、「ジャーナル・オブ・レセプター・リサーチ」１１：１１５−１２８(1991)に記載された要領で製造された［１２５］ＢＨ−標識Ｃ５ａの結合性を、ロリンスら、「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー」、２６３：５２０−５２６(1988)に記載された要領に従い、ただしブラウンウォルダーら、「モレキュラー・イムノロジー」２９（１１）：１３１９−１３２４(1992)に記載された修正を加えて測定する。ＰＭＮＬを、Ｃａ⁺⁺およびＭｇ⁺⁺不含有で、１０ミリモルのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７.３）、２.５ミリモルのＭｇＣｌ₂、１００単位／ｍｌのデオキシリボヌクレアーゼＩ、０.１ミリモルのＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌのアプロチニンおよび１０μｇ／ｍｌのロイペプチンを含むハンクス平衡塩溶液に再懸濁する。次いで、それらを窒素キャビテーションボンベ中４００ｐｓｉで２０分間４℃で平衡状態にする。２５ミリモルＥＤＴＡおよび上記列挙のプロテアーゼ阻害剤を含む３倍容量の０.５モルのＫＨＣＯ₃中へ排出後、ゼラチン質物質をピンセットで除去し、混合物を４００×ｇで１０分間４℃で遠心分離にかける。生成した上清を、４ ℃で６０分間５００００×ｇで遠心分離にかける。２００×１０⁶細胞を示すアリコートからのペレットを−７０℃で貯蔵する。結合試験するため、これらの膜を、２０×１０⁶細胞／ｍｌの当量で１ミリモルのＣａＣｌ₂、５ミリモルのＭｇＣｌ₂ 、０.１ミリモルのＰＭＳＦ、０.１％のバシトラシンおよび０.５％のＢＳＡを含む５０ミリモルＨＥＰＥＳ（ｐＨ７.３）に再懸濁する。同緩衝液でさらに１：７５に希釈後、５０μｌの［１２５］ＢＨ−Ｃ５ａ（比活性２２００Ｃｉ／ミリモル、最終濃度４.０ピコモル）および５０μｌの緩衝液または試験されるＣ５ａ類似体を阻害剤特性に対して様々な濃度で含むデュプリケート管に、この懸濁液４００μｌを加える。１０ナノモル非標識Ｃ５ａの存在下で非特異的結合を測定する。ＰＭＮＬ膜を加えることにより結合反応を開始させ、４℃で１２０分間続行する。細胞採取装置（ブランデル、ガイザーズバーグ、メリーランド）を用いて０.０５％ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）により９０分間前処理したＧＦ／Ｃガラス繊維フィルター（ホワットマン）による真空濾過により、結合および遊離放射能を分離する。３×５ｍｌの氷冷５ミリモルのトリス緩衝液（ｐＨ７.４）でフィルターを洗浄し、マルチウェルのガンマカウンター（ジーンシス）で計数する。非線形回帰分析プログラム、ＲＳ／１（ボルト、ベラネックおよびニューマン、ボストン）を用いてデータを分析し、ＩＣ₅₀値として表す。結果は、チェング-プレソフ等式を用いＫｉ値として下記表４に示されている。ブラウンウォルダーら、前出参照。これらの結果は、本発明のＣ５ａ類似体が、ナノモル単位のＫｉをもつ野生型Ｃ５ａと競合的に置き換わることを示している。本発明のＣ５ａ類似体が有する、ブラウンウォルダーら、前出（放射性リガンド、［１２５Ｉ］ボルトン−ハンター標識Ｃ５ａ使用）で開示された競合的置換検定においてＫｉとして測定されるＣ５ａ受容体に対する親和力は、約１.０×１０^-8モル未満、好ましくは約２. ０×１０^-9モル未満、およびさらに好ましくは約１.０×１０^-10モル未満である。実施例７Ｃ５ａ誘導Ｃａ⁺⁺増加組換えヒトＣ５ａを、０.０１％トウィーン−２０を含むハンクス緩衝液に溶かし、Ｃ５ａの全貯蔵希釈液をこの緩衝液で製造する。フラ−２（フラ２ＡＭ、モレキュラー・プローブス）のアセトキシメチルエステルをＤＭＳＯに溶かす。６％ヘタスターチ（ヘスパン、デュポン、ワウケーガン、イリノイ）における沈降、次いでチャプマン-キルクランドら、「ジャーナル・オブ・イミュノロジカル・メソッズ」１４２：９５−１０４(1991)に記載された向流水簸により好中球をヒト末梢血から精製する。精製された細胞（２×１０⁶／ｍｌ）を、０.２マイクロモルのフラ−２ＡＭと混合し、カルシウムまたはマグネシウム不含有のＨＥＰＥＳ緩衝ハンクス溶液中３７℃で３０分間インキュベーションする。検定の１５分前、撹拌棒を含むキュベット(curvette)に細胞懸濁液を移し、カルシウムを加えて１ミリモルとする。細胞懸濁液を３７℃で撹拌しながらインキュベーションする。５時間の細胞精製時間内に検定は終結され、細胞応答が実験の時間中変化していないことを確実にするため、標準対照応答を定期的に得る。ＳＬＭ８０００分光蛍光計（ＳＬＭ−アミンコ・インスツルメンツ、ウルバナ、イリノイ）を用いて、蛍光量を測定する。キュベットを蛍光計中に置き、１０秒間基準線を得た後、アンタゴニスト特性について試験されるＣ５ａ受容体アンタゴニストを加え、３４０ｎｍ／３８０ｎｍの蛍光励起割合（５１０ｎｍの放出）における変化があればそれを測定する。類似体を加えた４０秒後、対抗量のＣ５ａを加えて１００ピコモルの最終濃度とし、生じた励起割合における変化を測定する。ＩＣ₅₀値をアンタゴニスト効力の尺度として使用する。これらの値は、１００ピコモルＣ５ａ対抗量のカルシウム増加応答を５０％減らすのに必要とされるＣ５ａ類似体濃度として定義される。ＥＣ₅₀値は、アゴニスト効力の尺度として使用される。ＥＣ₅₀は、類似体によりもたらされる最大カルシウム増加応答の５０％を誘導するＣ５ａ類似体の濃度として定義される。結果を下記表５に示す。Ｃａ５類似体番号７は、１.０×１０⁶モルの濃度以下で試験される。Ｃ５ａ類似体番号８は３.０×１０^-6モルの濃度以下で試験され、類似体番号９は１.５× １０⁶モルの濃度以下で試験され、類似体番号２１は８.０×１０^-7モルの濃度以下で試験される。アゴニスト活性は、どの場合にも検出されない。これらの結果と、上記表２に示された結果とを集合的に分析すると、本発明の類似体は、Ｃ５ａの競合的阻害剤として機能することが示唆されている。それらは、最高の効力を獲得するためには、類似体のＣ−末端が、非複合体形成システインまたはジスルフィド結合により本発明の別のＣ５ａ類似体と複合体を形成するシステイン残基であるべきことを示している。実施例８炎症のウサギ皮膚モデル実験は全て、体重２.５−３.０ｋｇの雄のニュージーランド白ウサギにおいて遂行される。ウサギの背中を剃り、４０−５０の皮膚部位に色の異なるマーカーで印をつける。様々な刺激物質（すなわち、Ｃ５ａ、Ｃ５ａ類似体、Ｃ５ａ＋Ｃ５ａ類似体、賦形剤対照など）を、無菌で使い捨ての２６ゲージ、０.５インチ針および１.０ｃｃツベルクリン注射器を用いて、０.１ｍｌ／部位の割合で皮内注射する。安楽死させるほぼ４５分前に、６反復実験において皮内注射を投与する。Ｃ５ａ単独を５０ｎｇ／部位の用量で注射し、同用量のＣ５ａと共にＣ５ａ受容体アンタゴニストを様々な濃度で同時注射する。安楽死の２０分前に、１. ０ｍｌの生理食塩水中１８−３６μＣｉの［１２５１］−標識牛血清アルブミンを、末端耳静脈から全身循環系へ導入する。４５分後、ウサギを静脈内過剰量のペントバルビタールナトリウムにより安楽死させる。末梢血の５.０ｍｌ試料を、心臓穿剌により入手し、２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離にかけ、１.０ｍｌの血漿を集め、血漿中の［１２５Ｉ］の量を測定するための対照標準として使用する。死後、背部の皮膚を摘出し、木製解剖台にピンで留める。皮膚の主要脈管構造の血液を周辺に向かって手で絞り出す。この操作により、皮膚部位間の変動が減り、バックグラウンド放射能も減少する。次いで、１５ｍｍコルク穿孔器および小槌の補助器具により外部皮膚から炎症病変部に穴をあけ、１２×７５ｍｍポリスチレン管中に入れる。次いで、注射部位を、ガンマカウンター（ジーンシス）を用いてそれらの放射能含有量について分析する。血管から滲出した、炎症部位に局在する［１２５Ｉ］−標識牛血清アルブミン（ＢＳＡ）の量は、血管透過性の強化度合いに直接比例することが見いだされた。Ｃ５ａ類似体のＩＤ₅₀値は、同じ部位での５０ｎｇのＣ５ａ同時注射によりもたらされる放射能の５０％減少を誘発するＣ５ａ類似体の用量である。Ｃ５ａ類似体番号８（表１で）は、７０ｎｇ／部位のＩＤ₅₀を有することが見いだされ、１７５ｎｇ／部位の用量では前炎症反応を誘発しない。この結果は、類似体がインビボアンタゴニストであり、インビボでアゴニスト特性を呈しないことを示している。実施例９ウサギにおけるＣ５ａ−誘導ニュートロペニア(neutropenia) 実験は全て、体重２.５−３.０ｋｇの雄のニュージーランド白ウサギにおいて遂行される。１.０ｍｇ／ｋｇキシラジンおよび５０ｍｇ／ｋｇケタミンを組み合わせて筋肉内投与することにより、ウサギに麻酔をかける。２５ゲージのバタフライカテーテルを外側耳静脈に挿入して、注入に使用する。各血液試料（０. ２ｍｌ）を中央耳動脈から２５ゲージ、５／８インチ針を取り付けたプラスチック注射器中に集め、抗凝血物質として７.５％ＥＤＴＡで満たす。即座に血液を１０マイクロリットルの７.５％ＥＤＴＡを含む微細遠心管中に絞り出す。初期動脈血試料（＃１）を入手し、その直後に賦形剤または実施例８のＣ５ａ類似体を静脈内注入（ボーラス注射）する。２０秒後、第二の血液試料（＃２）を入手し、その２０秒後に０.２ｍｌ中１００ｎｇのＣ５ａを静脈内注入（ボーラス注射）する。２０秒後、第三血液（＃３）試料を採取する。３０分後、第２回の血液試料（＃４）--２０秒--Ｃ５ａ注入--２０秒--血液試料（＃５）を行う。ウサギ血液に特異的なソフトウェアを用いる自動血液分析法（テクニコンＨ＊１）により、血液試料を評価する。Ｃ５ａにより誘導される好中球数（１ミリリットル当たりの数）の減少（Ｃ５ａ誘導ニュートロペニア、血液試料＃３〜＃２および＃５〜＃４を比較することにより測定）を、賦形剤処置およびＣ５ａ類似体処置動物間で比較する。Ｃ５ａ類似体が、正常動物からの基準線の好中球数を改変することはない、すなわち、Ｃ５ａ類似体はアゴニスト的（Ｃ５ａ様）特性を呈しない。Ｃ５ａ類似体処置ウサギにおけるＣ５ａ誘導ニュートロペニアは、４０秒および３０分Ｃ５ａ攻撃間隔でそれぞれ６７％および４１％と賦形剤処置ウサギの場合と比べて顕著に（Ｐ＞０.０５）阻害される。これらの結果は、Ｃ５ａ類似体の全身投与による効果を立証している。実施例１０Ｃ５ａ類似体とデカペプチド H-Ile-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Gln-Leu-Gly-Arg-OH（配列番号５２）の受容体結合およびＣ５ａ誘導カルシウム増加比較。５種のＣ５ａ類似体（表２における番号５、７、８、９および１０）を製造し、Ｃ５ａ受容体結合およびＣ５ａ受容体カルシウム増加検定にかけ、オルら、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー」３５：４０２−４０６（１９９２）における表１（１４番）に開示された合成デカペプチドと比較する。この実験の結果を下記表６に示す。これらの結果は、試験されたＣ５ａ類似体が、受容体に対してデカペプチドよりも１４０００−１００００倍大きい結合親和力を有することを示している。上記データはまた、記載されたＣ５ａ類似体が、実質的にはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニスト分子であるが、デカペプチドは顕著なアゴニスト活性を呈することを示している。実施例１１Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）に特異的なポリクローナル抗体の製造抗原製造製造業者の説明書に従い、ピアス・ケミカル・カンパニー（ロックフォード、イリノイ、アメリカ合衆国）製のイムジェクト／イムノゲンＥＤＣコンジュゲーションキット・を用いて、１ｍｇのＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）を、２ｍｇのキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にコンジュゲートする。３５００ｃｐｍの¹²⁵Ｉ−Ｃ５ａ（ニューイングランド・ヌクリアー、ボストン、マサチューセッツ）を加えることにより、コンジュゲーション効率を追跡する。コンジュゲートの最終体積は、０.３４ｍｇのＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）（０.１５ｍｇ／ｍｌ）および推定０.９ｍｇ／ｍｌのＫＬＨを含む２.２５ｍｌである。抗Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）抗血清の製造Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）コンジュゲート（０.５ｍｌ）を、０.５ｍｌのフロイント完全アジュバント（シグマ・ケミカル・カンパニー、セントルイス、ミズーリ）によりホモジネートする。雌のニュージーランド白ウサギをミルブロック・ファームズ（アムハースト、マサチューセッツ）から購入し、肩甲骨領域の２部位に皮下注射（１部位当たり０.２ｍｌホモジネート）する。２１日後、この操作を反復する。フロイント不完全アジュバント（シグマ）を用いてさらに注射を行う。合計５５日後、第３の注射を行い、１２６日目に第４の注射を行う。各注射後３週間から５週間の間ウサギから血液（約３０ｍｌ）を採取し、凝固させ、血清を除去する。抗体吸着用のペプチド固定化上記と同様、ピアス・ケミカル・カンパニー製のイムジェクト／イムノゲンＥＤＣコンジュゲーションキットを用いて、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）またはＣ５ａ（１ｍｇ）を、２ｍｇの牛血清アルブミン（ＢＳＡ）にコンジュゲートし、¹²⁵Ｉ−Ｃ５ａを加えて効率を追跡する。Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）／ＢＳＡの最終体積は、０.２５ｍｇ／ｍｌＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）で２.２５ｍｌであり、Ｃ５ａ／ＢＳＡの場合、最終体積は、０.３２ｍｇ／ｍｌＣ５ａで２.２５ｍｌである。両コンジュゲートとも、推定０.９ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含んでいた。２つのペプチドコンジュゲートを、炭酸ナトリウムでｐＨ８.６の緩衝液にした０.２モル炭酸水素ナトリウムに対して透析する。各コンジュゲートについて、同緩衝液中で予備洗浄された２ｍｌのＡＨ（アミノヘキシル）−アガロースゲル（シグマ・ケミカル・カンパニー、セントルイス、ミズーリ）を、グルタルアルデヒドを加えて１％ｖ／ｖの最終濃度とし、２０℃で１５分間インキュベーションすることにより活性化する。ゲルを緩衝液中で十分洗浄することにより、グルタルアルデヒドを除去し、次いでコンジュゲート溶液を加え、２０℃で１時間インキュベーションする。非結合タンパク質をゲルから洗い落とし、残存している結合部位を０.２モルのグリシルグリシン２０ｍｌと４℃で一夜インキュベーションすることにより遮断する。ゲルを０.５ｃｍ×１０ｃｍガラスカラム中に詰め入れ、０.１％アジ化ナトリウム含有ダルベッコのリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７.２（ＰＢＳ−Ａ）で十分洗浄する。アフィニティー・クロマトグラフィーＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）により免疫化したウサギから採取した血清を、２ｍｌ／時でＣ５ａ／ＢＳＡカラムに通す。カラムから出現する吸着した抗血清を集める。カラムを、０.０５モルのリン酸ナトリウムでｐＨ７.２の緩衝液にした０.１％アジ化ナトリウム含有０.５モルＮａＣｌで十分洗浄する。結合抗体を３モルのチオシアン酸アンモニウムにより除去する。溶離している抗体は、２８０ｎｍで読み取り０.２ＯＤ最大偏差で設定されたインラインＵＶモニターを用いて検出される。血清を最初２回通した後、溶離している抗体を集め、即座にＰＢＳ−Ａに対して透析し、次いで限外濾過により１ｍｇ／ｍｌ前後に濃縮する。このプロセスを各血清バッチに対して数回反復する。Ｃ５ａカラムから溶離しているタンパク質がそれ以上検出されなくなると、血清は吸着されたと考えられる。次いで、吸着された抗血清を、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）免疫吸着カラムに通す。結合抗体を３モルのチオシアン酸アンモニウムで溶離し、即座にＰＢＳ−Ａに対して透析し、次いで約１ｍｇ／ｍｌに濃縮する。実施例１２ａ結合したＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）を検出するための標識抗体の製造Ｃ５ａカラムから溶離した抗Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）抗体（すなわち、Ｃ５ａと交差反応しない抗体）を、アルカリ性ホスファターゼにコンジュゲートする。１ｍｌのＰＢＳ中１.４ｍｇの抗体を、５ｍｇ（５０００単位）のアルカリ性ホスファターゼ（タイプVII−Ｔ、シグマ・ケミカル・カンパニー）に加える。グルタルアルデヒドを加えて０.２％ｖ／ｖの最終濃度とする。混合物を２０℃で９０分間インキュベーションし、次いで４℃でＰＢＳ −Ａに対して一夜透析する。緩衝液を、１ミリモル塩化マグネシウムを含む０. ０５モルのトリス緩衝液、ｐＨ８.０に変え、４℃で一夜透析する。実施例１２ｂＥＬＩＳＡによる結合Ｃ５ａ(１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ)の検出０.５７ｍｇ／ｍｌでの特別精製ウサギ抗Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）を、０.１モルのほう酸ナトリウム／ほう酸、ｐＨ８.６中で１：５００に希釈する。ＥＬＩＳＡプレート（マキシソープ＼、ヌンク、ネイパービル、イリノイ）を、２０℃で４時間１００μｌ／ウェルのこの溶液によりコーティングする。プレートを３回洗浄することにより、非結合物質が除去される。Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）含有試料またはＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）の標準製剤を、好適にはＰＢＳ−Ａ＋１％ＢＳＡ（ＰＢＳ／ＢＳＡ）で希釈したものを、１００μｌ中２０℃で４時間ウェルに加える。標識抗体を１００μｌのＰＢＳ／ＢＳＡ中１：３０００の割合で加え、４ ℃で一夜インキュベーションする。プレートを洗浄し、次いで酵素基質（アルカリ性ホスファターゼの場合、ｐ−ニトロフェニルホスフェート（シグマ・ケミカル・カンパニー）、１０％ｖ／ｖジエチルアミン、ｐＨ９.８中１ｍｇ／ｍｌ）を加える。約５時間暗所中２０℃で現像を進行させる。バイオメック１０００（ベックマン・インスツルメンツ、カリフォルニア、アメリカ合衆国）を用いてプレートを４０５ｎｍで読み取る。上記と同じ条件を用いて、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）の標準曲線を作製する（データは示さず）。実施例１２ｃアフィニティー精製特異的抗Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）の特異性Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）またはＣ５ａを用いて、２０℃で４時間１００μｌコーティング緩衝液中１μｇ／ウェルでマイクロタイタープレートを被覆する。プレートを洗浄し、Ｃ５ａ吸着後Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）から溶離された抗体の系列希釈を、１００μｌのＰＢＳ／ＢＳＡ中プレートウェルで行う。２０℃で４時間インキュベーション後、プレートを再洗浄する。ウサギ抗体の結合は、ＰＢＳ／ＢＳＡ中１：１０００、１００μｌ／ウェルでヤギ抗ウサギ／西洋わさびペルオキシダーゼ（ピアス・ケミカル・カンパニー）により検出される。２０℃で４時間第二抗体とインキュベーション後、プレートを洗浄し、２,２'-アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン）−６スルホン酸ジアンモニウム塩ＡＢＴＳ基質（ピアス・ケミカル・カンパニー）により西洋わさびペルオキシダーゼ活性が立証される。３０分現像後、４０５ｎｍで色を読み取る。実施例１３ウサギ血漿試料におけるＣ５ａ(１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ)の測定麻酔した２匹のウサギ（＃１および＃２）からの血液試料を、ヘパリン被覆管へ採取後、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）を静脈内注射する。さらに３０分間隔をおいて血液を集める。次いで、さらにＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）の注射を行い、血液を３０分後に再び集める。これをさらに４回反復する。試料を遠心分離にかけて血液細胞を除去し、血漿を除去し、ＥＬＩＳＡで使用するまで−２０℃で貯蔵する。試料をＰＢＳ／ＢＳＡ中で希釈し、実施例１１で作製された標準曲線に対してＥＬＩＳＡで定量する。次いで、循環しているＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）の経時的増加を測定する。Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）の注射前の２ウサギから採取した試料からは、活性は全く検出され得なく、抗体の特異性を示している。これらの結果はまた、抗体がウサギＣ５ａとの交差反応性を全く呈しないこと、およびＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）がウサギには本来存在しない物質であることを示している。実施例１４ウサギ循環系におけるＣ５ａ(１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ)と標準Ｃ５ａ(１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ)の比較：Ｃ５ａ(１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ)に対する解毒薬としての特異的抗Ｃ５ａ(１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ)抗体の使用ウサギ＃２（実施例１３から）の最終時点から得られた血漿試料に対し、系列二重希釈を行い、得られた曲線の傾きを標準曲線の傾きと比較する。２つの傾きは平行していることから、ウサギにおいて循環していたＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）がまだその抗原特性を保持しており、標準Ｃ５ａ（１ -７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）の場合と同様にＥＬＩＳＡにおいて認められることがわかる。この結果はまた、循環系からのＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）の除去が必要となる場合、類似体が抗体により中和されることを示している。実施例１５モノクローナル抗Ｃ５ａ(１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ)の製造コーラーおよびミルスタイン、「ネイチャー」２５６：４９５−４９７（１９７５）により開発された標準的方法を用い、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてモノクローナル抗体の製造を行う。Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）抗原の同製品（ＫＬＨに結合）を用いてマウスを免疫化する。免疫化マウスからの脾臓細胞をハイブリドーマラインＰ３／ＮＳＩ／１−Ａｇ４−１（ＡＴＣＣＴＩＢ１８）と融合することにより製造されたモノクローナルセルラインのスクリーニングは、Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）／ＢＳＡおよびＣ５ａ／ＢＳＡを用いて行われる。ポリクローナルウサギ抗血清により行われた操作と直接平行して、Ｃ５ａとではなくＣ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）とのみ反応する抗体を、特異的モノクローナル抗Ｃ５ａ（１-７１、Ｔ１Ｍ、Ｃ２７Ｓ、Ｑ７１Ｃ）抗体として使用する。両方を認識するものを検出抗体として使用し、アルカリ性ホスファターゼで標識する。実施例１６ヒトカルボニックアンヒドラーゼII（ｈＣＡII）遺伝子およびＣ５ａ受容体アンタゴニスト遺伝子間の遺伝子融合体の構築プラスミドｐＷＣＢ４０１は、Ｃ５ａ受容体アンタゴニストをコードするＤＮＡ配列を含む（Ｃ５ａ(１-７１、Ｔｈｒ１Ｍｅｔ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ)）。このプラスミドは、実施例３記載のカセット突然変異誘発方法において配列番号２３を用いて製造される。次いで、このプラスミドは、標準ライゲーションプロトコル（マニアチスら）を用いて、ｐＷＣＢ４０１の唯一のＨｉｎｄIII制限部位における２本鎖合成オリゴヌクレオチド（ＯＬ１／ＯＬ２、OL1 -5'-AGC TGG GAT CCG ATA TCC-3'（配列番号５３）、OL2 5'-A GCT GGA TAT CGG ATC CC-3'(配列番号５４)）の挿入により修飾され、プラスミドｐＷＣＢ４０１ＢＥが製造される。この挿入により、停止コドンのすぐ下流にＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＶ制限部位が加えられ、ＨｉｎｄIII部位が削除される。次いで、標準的方法（マニアチスら、1989）により、さらに２つのオリゴヌクレオチド（OL3/ OL4; OL3-5'-A GCT TTC GTT GAC GAC GAC GAT AAA AAC GGT CTG CA-3'（配列番号５５）、OL4-5'G ACC GTT TTT ATC GTC GTC GTC AAC GAA-3'(配列番号５６)）を合成し、リン酸化し、アニーリングする。この合成されたオリゴヌクレオチドは、Ｃ５ａ受容体アンタゴニストに関する遺伝子をｈＣＡII遺伝子に結合し、エンテロキナーゼプロテアーゼーおよびヒドロキシルアミン化学的開裂部位をコード化する。２２２ｂｐＰｓｔＩ-ＥｃｏＲＶフラグメントをｐＷＣＢ４０１ＢＥから回収し、３方向ライゲーション実験でアニーリングした２本鎖オリゴヌクレオチドＯＬ３／ＯＬ４およびＨｉｎｄIIIおよびＥｃｏＲＩ消化ｐＢ０３０４ΔＲＶにライゲーションする。ｐＢ０３０４ΔＲＶは、ｐＢ０３０４の誘導体であり（ファン・ヘーケら、「プロテイン・エクスプレッション・アンド・ピュリフィケーション」４：２６５−２７４（１９９３））、テトラサイクリン耐性遺伝子におけるＥｃｏＲＶ制限部位を削除することにより得られる。３方向ライゲーションの生成物はプラスミド２９Ａ−１と命名され、合成オリゴヌクレオチドを含むクローニング接合点周囲のＤＮＡ配列は、標準ＤＮＡ配列決定方法（マニアチスら）により証明される。エシェリヒア・コリ株ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳおよびＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ（両方ともノヴァゲン製、マディソン、ワイオミング）を、プラスミド２９Ａ−１により形質転換し、テトラサイクリンを補ったルリア肉汁寒天プレートにおいてコロニーを分離する（マニアチスら）。実施例１７ＡＣ５ａ融合タンパク質の構築、エシェリヒア・コリにおける発現力価の測定オーバーラップ外延ＰＣＲによりヒトインターロイキン−１β遺伝子のフラグメント（エシェリヒア・コリ好適コドンにより修飾、ブリティッシュ・バイオテクノロジー・リミテッドから入手、イギリス国）と、ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ｈＩＬ１−ＲＡ）のペプチドフラグメントをコードするフラグメントとの交換を試みる実験が進むにつれて、７２位のアミノ酸に対するコドンの後にアーチファクト翻訳停止コドンが得られる。後にＢａｍＨＩ開裂部位（ＧＧＡＴＣＣ）を停止コドン部位に導入することにより、融合タンパク質の構築が容易になる。上記要領で得られた合成遺伝子は次の通りである：ＮｃｏＩおよびＧａｍＨＩ制限部位が両端に隣接するＩＬ７２のＤＮＡ配列この合成遺伝子は、両端にＮｃｏＩおよびＢａｍＨＩ部位が隣接しており、ヒトインターロイキン−１β（ｈＩＬ−１β）およびヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ｈＩＬ１−ＲＡ）の配列により構成されるハイブリッドタンパク質をコードする。次いで、この合成遺伝子をＮｃｏＩ−ＢａｍＨＩフラグメントとしてプラスミドｐＰＬＭｕにクローニングすると、プラスミドｐＰＬＭｕＩＬ７２が得られる。プラスミドｐＰＬＭｕは、ＮｃｏＩ−ＨｉｎｄIIIフラグメントが下記に示された多重クローニング部位により置き換えられたプラスミドｐＰＬｍｕＳＭＣｏｒｉ（ブエル,Ｇ.ら、「ヌクレイック・アシッズ・リサーチ」（１９８５）１３：１０２３−１０３８）である。リボソーム結合部位および多重クローニング部位を含むｐＰＬｍｕＳＭＣｏｒｉにおけるＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄIIIフラグメントの配列コード化されたハイブリッドタンパク質は、そのＮ−末端メチオニンから数えて、ｈＩＬ−１βのアミノ酸１−４７、次いでｈＩＬ１−ＲＡのアミノ酸５２− ５７、次いでｈＩＬ−１βのアミノ酸６０−７１、次いでアミノ酸配列Cys Val Leu Lys Ala Ala Ser(配列番号５９)および翻訳停止コドンにより構成される。次に、エシェリヒア・コリ株ＬＣ１３７（ゴフ、Ｓ.Ａ.ら、Nat'l Proc．Acad ．Sci.，USA ８１：６６４７−６６５１(1984)）を、熱不安定性ファージλＣＩ₈ ₅₇ リプレッサーをコード化する和合性プラスミドｐｃｌ₈₅₇を担うプラスミドｐＰＬｍｕＩＬ７２により形質転換する。熱誘導エシェリヒア・コリ細胞（ブエルら、前出）のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析されたところによると、熱誘導によりハイブリッドタンパク質の高度発現がもたらされた。プラスミドｐＰＬＭｕＩＬ７２によりコード化されるハイブリッドタンパク質は、３'プライマーとしてプライマーＣ、ＤおよびＥ：ＰＣＲプライマープライマーＣプライマーＤプライマーＥおよびプライマーＦを５'プライマーとして用いるＰＣＲによりさらに短くされ、それぞれプラスミドｐＰＬＭｕＩＬ３３、ｐＰＬＭｕＩＬ５３およびｐＰＬＭｕＩＬ６３が製造される。ＢａｍＨＩ部位のこれらの全構築物における配列ＧＡＴ（Ａｓｐ）は、ハイブリッドタンパク質をコードするＤＮＡ配列との適切な読み枠内にある。ＢａｍＨＩ開裂によりこの部位へクローン化された暗号化領域には、ＢａｍＨＩ開裂配列に一部含まれる配列GATCCXによりコード化される酸不安定アミノ酸配列Asp- Proが先行する。これらの融合タンパク質の酸による開裂は、酸不安定性Asp-Pro 部位における開裂を通じて融合相手を遊離させる。ｐＰＬＭｕＩＬ６３およびｐＰＬＭｕＩＬ５３における構築物は、もとのｐＰＬＭｕＩＬ７２と同量のハイブリッドタンパク質発現を示した。ｐＰＬＭｕＩＬ３３からは発現は全く観察されない。ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびクーマシー(商標)（ＩＣＩ、リミテッド）ブリリアントブルー染色後に発現レベルを測定する。次いで、ｐＰＬＭｕＩＬ３３およびｐＰＬＭｕＩＬ５３を用いて、ヒトＣ５ａとの融合タンパク質を構築する。次のｈＣ５ａ遺伝子との適切な読み枠内にあるアスパラギン（ＧＡＴ）をコードするＢａｍＨＩ部位は、プライマー指定ＰＣＲ突然変異誘発法により導入される。ＢａｍＨＩ−ＨｉｎｄIII切断Ｃ５ａフラグメントを、ＢａｍＨＩ−ＨｉｎｄIII切断プラスミドｐＰＬＭｕＩＬ３３およびｐＰＬＭｕＩＬ５３にライゲーションすると、それぞれプラスミドｐＰＬＭｕＩＬ３３−Ｃ５ａおよびｐＰＬＭｕＩＬ５３−Ｃ５ａが製造される。両端にＮｃｏｌおよびＨｉｎｄIII部位が隣接するＩＬ３３−Ｃ５ａの配列両端にＮｃｏｌおよびＨｉｎｄIII部位が隣接するＩＬ５３−Ｃ５ａ配列ｐＰＬＭｕＩＬ３３−Ｃ５ａおよびｐＰＬＭｕＩＬ５３−Ｃ５ａを担うエシェリヒア・コリＫ１２ＬＣ１３７の熱誘導により、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび抗ｈＣ５ａポリクローナル抗体によるウエスタン分析により判断されたところによると、融合タンパク質の高度発現がもたらされる。実施例１７ｂヒトインターロイキン１β／ヒトインターロイキン１受容体アンタゴニストのフラグメントおよびＣ５ａ類似体またはヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体間の遺伝子融合の構築コドン１−５０を含むプラスミドｐＰＬＭｕＩＬ５３−Ｃ５ａの５'領域を回収し、Ｃ５ａＲＡまたはヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体との融合タンパク質発現を目的としてＰＣＲを用いて最適化する。簡単に述べると、５'末端を適合させると、ｐＥＴ系列細菌発現ベクターへのクローニングが容易になる。９位にあるシステインコドンをセリンコドンと置き換え、フラグメントの３'末端を修飾すると、Ｃ５ａＲＡまたはヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体および開裂リンカーとの融合が行われ得る。下記の実験が行われる：ＩＬ−１β／ＩＬ１ＲＡフラグメントをコード化する遺伝子を回収し、標準ＤＮＡ増幅条件（マニアチスら、１９８９）およびプライマーとしてＧ８３およびＧ８４と称するオリゴヌクレオチド（Ｇ８３：5'-C GCA AGC TTG AGG CTC AAT G AA GCT CAT-3'(配列番号６６)）（Ｇ８４:5'-GGA GAT ATA CAT ATG GCA CCG GTT AGA TCT CTG AAC AGC ACC CTT CGC-3'(配列番号６７)）を用いるＰＣＲによりプラスミドｐＰＬＭｕＩＬ５３−Ｃ５ａから適合化する。増幅されたフラグメントを、制限エンドヌクレアーゼＮｄｅ１およびHｉｎｄIIIにより消化し、アガロースゲルから回収する（フラグメント１）。プラスミド２９Ａ−１をＨｉｎｄII IおよびＢａｍＨＩにより消化し、Ｃ５ａＲＡまたはポリペプチド誘導体遺伝子を含むフラグメントを回収する（フラグメント２）。ｐＥＴ９ｃ（ｐＥＴシステム・マニュアル、第３版、１９９３、ノヴァゲン）をＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化し、フラグメント１および２による３方向ライゲーション実験で使用することにより、プラスミド５８Ａ−１が構築される。この構築物では、Ｃ５ａＲＡまたはポリペプチド誘導体をコードする遺伝子を、エンテロキナーゼおよびヒドロキシルアミン開裂部位をコードするリンカー配列によりハイブリッドＩＬ１遺伝子フラグメントの修飾フラグメントに結合する。エシェリヒア・コリ株ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳおよびＨＭＳ１７４（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳを、ｐ５８Ａ −１により形質転換し、カナマイシンおよびクロラムフェニコールを補ったルリア肉汁寒天プレートにおいてコロニーを単離する(マニアチスら、１９８９)。実施例１８エシェリヒア・コリにおけるヒトＣ５ａ融合タンパク質のＣ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体の発現発現実験は、スタディアら、「メソッズ・イン・エンザイモロジー」１８５：６０−８９(1990)およびファン・ヘーケら、「プロテイン・エクスプレッション・アンド・ピュリフィケーション」４：２６５−２７４(1993)に記載されたＴ７／ｐＥＴ発現系に関する標準的方法を用いて行われる。簡単に述べると、発現プラスミドを含む単一エシェリヒア・コリコロニーを、光学密度（５５０ｎｍで測定）が約０.６に達するまで選択に適した抗生物質を補ったルリア肉汁中で生長させる。この時点で、ＩＰＴＧおよびＺｎ++を加えて、それぞれ０.４ミリモルおよび１２.５マイクロモルの最終濃度とする。細胞のインキュベーションを２１、３０または３７℃でさらに２−４時間続行する。細胞を遠心分離により採取し、使用時まで−８０℃で貯蔵する。実施例１９Ｃ５ａ類似体またはポリペプチド誘導体融合タンパク質のヒドロキシルアミン開裂組換え融合タンパク質を、実施例１８からの冷凍したエシェリヒア・コリペーストアリコートから、ｐＨ８.０で１ミリモルのＥＤＴＡを含む５０ミリモルのトリス／ＨＣｌ緩衝液（５：１ｖ：ｗ、緩衝液：細胞ペースト）中で解凍後に単離する。次いで、細胞を音波処理により破壊し、粗抽出物を３０００×ｇで２０分間遠心分離にかける。融合タンパク質含有ペレットを、０.２モルのＣＡＰＳＯ、２モルのＮＨ₂ＯＨ.ＨＣＬ、６モルのグアニジニウム塩酸塩を含む溶液に可溶化し、ＬｉＯＨによりｐＨ９.３に調節する（７：１ｖ：ｗ、緩衝液：細胞ペレット）。溶液を３７℃で７時間インキュベーションして、ヒドロキシルアミンによる融合タンパク質開裂を促し、それが８０％を越えると、４モルＨＣｌによりｐＨを８.０に調節する。８０％を越える割合でヒドロキシルアミン開裂融合タンパク質を含む溶液を、２５ミリモルのトリス.ＨＣｌ（ｐＨ７.３）に対して一夜透析する。次いで、透析物を３００００×ｇで２０分間遠心分離し、Ｃ５ａＲＡ−（またはポリペブチド誘導体）含有沈澱物を集める。沈澱物を６モルグアニジニウム塩酸塩（５：ｌｖ／ｗ、緩衝液：沈澱物）で可溶化し、実施例５ｂに記載された１ミリモル還元／０.０１ミリモル酸化グルタチオンを含む１００ミリモルのトリス／ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７.４）で２０倍に希釈する。次いで、上記方法に従い精製および二量体化が行われる。この明細書で述べられた出版物および特許出願は全て、この発明に関係がある当業界の熟練者の技術レベルを示すものである。各出版物または特許出願を具体的に個々に示して説明の一部している場合と同じ範囲までこれら全ての出版物および特許出願を引用して説明の一部としている。ここに記載された発明の様々な修正は、当業界の熟練者であれば明白に理解できるものである。それらの修正も後記請求の範囲内に含まれるものとする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 7/06 Ｃ０７Ｋ 14/47 14/47 16/18 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｋ 15/02 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/566 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＧ０１Ｎ 33/53 15/00 Ｃ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＥ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (31)優先権主張番号０８／４６３，３７７ (32)優先日 1995年６月５日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者シュミッツ，アルベルトスイス、ツェーハー−4056バーゼル、ガスシュトラーセ53番

Claims

【特許請求の範囲】（１）ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体であって、実質的にはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、Ｎ−末端としてグリシン残基を有する誘導体。（２）グリシン残基が付加物形態である、請求項１記載の誘導体。（３）グリシン残基がヒトＣ５ａのＮ−末端アミノ酸残基Ｔｈｒに対する置換基である、請求項１記載の誘導体。（４）システイン残基を有し、少なくとも２個のアミノ酸残基によりＣ−末端が先端切除されている点で、ヒトＣ５ａの対応するＣ−末端領域とは異なるＣ− 末端領域を含む、請求項１記載の誘導体。（５）Ｃ−末端としてシステイン残基を有する、請求項４記載の誘導体。（６）システイン残基が付加物形態である、請求項４記載の誘導体。（７）６４〜７２アミノ酸長である、請求項４記載の誘導体。（８）６８〜７２アミノ酸長である、請求項７記載の誘導体。（９）７０〜７２アミノ酸長である、請求項８記載の誘導体。（１０）７１アミノ酸長である、請求項９記載の誘導体。（１１）Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ，Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ，Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である、請求項１０記載の誘導体。（１２）Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌy，Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ，Ｈｉｓ６７Ｐｈｅ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である、請求項１０記載の誘導体。（１３）ヒトＣ５ａの第一および第二ポリペプチド誘導体を含む二量体であって、誘導体の各々が、実質的にはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであって、Ｃ−末端システイン残基を有し、第一および第二誘導体のシステイン残基がジスルフィド結合により結合されており、ヒトＣ５ａの第一および第二ポリペプチド誘導体は同一または異なり得、さらにヒトＣ５ａの第一および第二ポリペプチド誘導体の少なくとも一方が請求項１記載のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体である、二量体。（１４）第一および第二誘導体の各々のＣ−末端領域が、少なくとも２個のアミノ酸残基により先端切除されている点でヒトＣ５ａの対応するＣ−末端領域とは異なる、請求項１３記載の二量体。（１５）第一および第二誘導体の各々がヒトＣ５ａ誘導体Ｃ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である、請求項１４記載の二量体。（１６）Ｎ−末端〜Ｃ−末端、融合相手、開裂可能なリンカーおよびそれに融合して、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体といった順序で構成される融合タンパク質であっで、ポリペプチド誘導体が実質的にはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストである、融合タンパク質。（１７）誘導体が、システイン残基を有し、少なくとも２個のアミノ酸残基によりＣ−末端が先端切除されている点でヒトＣ５ａの対応するＣ−末端領域とは異なるＣ−末端領域を含む、請求項１６記載の融合タンパク質。（１８）誘導体がＣ−末端としてシステイン残基を有する、請求項１７記載の融合タンパク質。（１９）誘導体がＮ−末端としてグリシン残基を有する、請求項１７記載の融合タンパク質。（２０）融合相手が、細胞における封入体の形成を指令し得るポリペプチドである、請求項１６記載の融合タンパク質。（２１）細胞がエシェリヒア・コリ細胞である、請求項２０記載の融合タンパク質。（２２）開裂可能なリンカーと共存する融合相手が、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体のアミノ酸長とほぼ同じのポリペプチドである、請求項２０記載の融合タンパク質。（２３）融合相手がヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のＮ−末端フラグメントを含む、請求項２２記載の融合タンパク質。（２４）融合相手が、ヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７およびヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５７により構成される、請求項２３記載の融合タンパク質。（２５）融合相手が、ヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７およびヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５４により構成される、請求項２３記載の融合タンパク質。（２６）リンカーがヒドロキシルアミン開裂部位を含む、請求項１６記載の融合タンパク質。（２７）リンカーが、Ｎ−末端〜Ｃ−末端、エンテロキナーゼプロテアーゼ開裂部位およびヒドロキシルアミン開裂部位といった順序で構成される、請求項２６記載の融合タンパク質。（２８）Ｎ−末端〜Ｃ−末端、ヒトＩＬ−１βまたはその突然変異体のアミノ酸残基１〜４７、ヒトＩＬ−１ＲＡのアミノ酸残基５２〜５４、アミノ酸配列-V al-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-Asn-Gly-を含む開裂可能なリンカー、および請求項１記載のポリペプチド誘導体といった順序で構成され、上記リンカーのＣ−末端残基Ｇｌｙがボリペプチド誘導体におけるヒトＣ５ａのＮ−末端アミノ酸残基Ｔｈｒに対する置換基である、請求項１６記載の融合タンパク質。（２９）ポリペプチド誘導体が請求項７記載のものである、請求項２８記載の融合タンパク質。（３０）ポリペプチド誘導体が請求項１１記載のものである、請求項２９記載の融合タンパク質。（３１）ポリペプチド誘導体が請求項１２記載のものである、請求項２９記載の融合タンパク質。（３２）請求項１記載のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子。（３３）誘導体が請求項７記載のものである、請求項３２記載のＤＮＡ分子。（３４）誘導体が請求項１１記載のものである、請求項３３記載のＤＮＡ分子。（３５）誘導体が請求項１２記載のものである、請求項３３記載のＤＮＡ分子。（３６）請求項１６記載の融合タンパク質をコード化するＤＮＡ分子。（３７）融合タンパク質が請求項１９記載のものである、請求項３６記載のＤＮＡ分子。（３８）融合タンパク質が請求項２４記載のものである、請求項３７記載のＤＮＡ分子。（３９）融合タンパク質が請求項２５記載のものである、請求項３７記載のＤＮＡ分子。（４０）融合タンパク質が請求項２８記載のものである、請求項３７記載のＤＮＡ分子。（４１）請求項３２記載のＤＮＡ分子に機能し得るように結合された所定の宿主において機能し得るプロモーターを含む、組換えＤＮＡ分子。（４２）請求項３６記載のＤＮＡ分子に機能し得るように結合された所定の宿主において機能し得るプロモーターを含む、組換えＤＮＡ分子。（４３）請求項３２記載の組換えＤＮＡ分子を含む、所定の宿主と適合し得る組換えプラスミド。（４４）請求項３６記載の組換えＤＮＡ分子を含む、所定の宿主と適合し得る組換えプラスミド。（４５）請求項３２記載の組換えＤＮＡ分子を含む、所定の宿主と適合し得る組換えベクター。（４６）請求項３６記載の組換えＤＮＡ分子を含む、所定の宿主と適合し得る組換えベクター。（４７）請求項３２記載の組換えＤＮＡ分子により安定して形質転換された組換え宿主。（４８）細菌、酵母、真菌、昆虫、哺乳類および植物細胞から成る群から選択される、請求項４７記載の組換え宿主。（４９）エシェリヒア・コリである、請求項４８記載の組換え宿主。（５０）請求項３６記載の組換えＤＮＡ分子により安定して形質転換された組換え宿主。（５１）細菌、酵母、真菌、昆虫、哺乳類および植物細胞から成る群から選択される、請求項５０記載の組換え宿主。（５２）エシェリヒア・コリである、請求項５１記載の組換え宿主。（５３）請求項１記載のヒトＣ５ａの生物活性ポリペプチド誘導体の製造方法であって、 (1) ＤＮＡ分子の発現誘発に適した条件下ポリペプチド誘導体をコード化するＤＮＡ分子により安定して形質転換されたエシェリヒア・コリ細胞を培養し、 (2) 上記要領で培養された細胞を変性および可溶化剤と接触させて、上記ポリペプチド誘導体の変性形態を製造し、そして (3) 上記要領で変性したポリペプチド誘導体を、適当な条件下で少なくとも約１００：１の還元剤対酸化剤モル重量比で還元剤および酸化剤を含む溶液と混合することにより、ポリペプチド誘導体の生物活性形態を製造するという段階を含む方法。（５４）ＤＮＡ分子がポリペプチド誘導体の融合タンパク質形態をコード化する、請求項５３記載の方法。（５５）さらに混合段階前に上記要領で発現された融合タンパク質を開裂する段階を含む、請求項５４記載の方法。（５６）ＤＮＡ分子がヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体をコード化し、それが６４〜７２アミノ酸残基長である、請求項５４記載の方法。（５７）ポリペプチド誘導体がＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である、請求項５６記載の方法。（５８）ポリペプチド誘導体がＣ５ａ（１-７１、Ｔｈｒ１Ｇｌｙ、Ｃｙｓ２７Ｓｅｒ、Ｈｉｓ６７Ｐｈｅ、Ｇｌｎ７１Ｃｙｓ）である、請求項５８記載の方法。（５９）ヒトＣ５ａの生物活性ポリペプチド誘導体の製造方法であって、誘導体が実質的にはアゴニスト活性を呈しないＣ５ａ受容体アンタゴニストであり、 (1) 融合タンパク質形態のポリペプチド誘導体をコード化する組換えＤＮＡ分子により安定して形質転換された宿主細胞を培養し、ただし、この培養は、封入体形態の融合タンパク質の発現誘発に適した条件下で行われるものとし、 (2) 上記要領で培養された宿主細胞からの融合タンパク質を含む封入体を単離し、 (3) 上記要領で単離された封入体を変性および可溶化剤と接触させて、融合タンパク質の変性形態を製造し、 (4) 上記要領で単離された融合タンパク質を開裂することにより、ヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体が得られ、そして (5) 上記要領で開裂された融合タンパク質を、適当な条件下還元剤対酸化剤のモル比が重量にして少なくとも約１００：１である還元剤および酸化剤を含む溶液と混合することにより、ポリペプチド誘導体の生物活性形態が製造されるという段階（ただし、段階３および４は同時または連続して行われる）を含む方法。（６０）混合が約６.５〜約７.５のｐＨで行われる、請求項５９記載の方法。（６１）混合が約１／２時間〜約４時間の期間行われる、請求項５９記載の方法。（６２）酸化還元対が還元グルタチオン／酸化グルタチオンである、請求項５９記載の方法。（６３）宿主細胞がエシェリヒア・コリである、請求項５９記載の方法。（６４）組換えＤＮＡ分子が請求項１６記載の融合タンパク質をコード化する、請求項５９記載の方法。（６５）組換えＤＮＡ分子が請求項１９記載の融合タンパク質をコード化する、請求項６４記載の方法。（６６）組換えＤＮＡ分子が請求項２２記載の融合タンパク質をコード化する、請求項６５記載の方法。（６７）組換えＤＮＡ分子が請求項２３記載の融合タンパク質をコード化する、請求項６６記載の方法。（６８）組換えＤＮＡ分子が請求項２４記載の融合タンパク質をコード化する、請求項６７記載の方法。（６９）組換えＤＮＡ分子が請求項２５記載の融合タンパク質をコード化する、請求項６７記載の方法。（７０）組換えＤＮＡ分子が請求項２８記載の融合タンパク質をコード化する、請求項５９記載の方法。（７１）組換えＤＮＡ分子が請求項２９記載の融合タンパク質をコード化する、請求項７０記載の方法。（７２）組換えＤＮＡ分子が請求項３０記載の融合タンパク質をコード化する、請求項７１記載の方法。（７３）組換えＤＮＡ分子が請求項３１記載の融合タンパク質をコード化する、請求項７１載の方法。（７４）請求項１記載のポリペプチド誘導体または請求項１３記載の二量体に特異的な抗体であって、実質的にヒトＣ５ａとの交差反応性を呈しない抗体。（７５）抗体がポリクローナルである、請求項７４記載の抗体。（７６）抗体がモノクローナルである、請求項７４記載の抗体。（７７）請求項１１記載の誘導体に特異的である、請求項７４記載の抗体。（７８）請求項１４記載の二量体に特異的である、請求項７４記載の抗体。（７９）請求項１５記載の二量体に特異的である、請求項７８記載の抗体。（８０）ヒトを含む哺乳類におけるＣ５ａ仲介疾患または炎症状態の処置に有用な医薬組成物であって、請求項１記載のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体または請求項１３記載の二量体の治療有効量、および所望により医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物。（８１）誘導体が請求項１１記載のものであるか、または二量体が請求項１５記載のものである、請求項８０記載の医薬組成物。（８２）請求項１記載のヒトＣ５ａのポリペプチド誘導体のインビボ活性を調節するのに有用な医薬組成物であって、誘導体の活性を調節するのに有効な量の請求項７４記載の抗体、および所望により医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物。（８３）抗体の量が誘導体のインビボ活性を実質的に中和するのに有効なものである、請求項８２記載の医薬組成物。（８４）哺乳類におけるＣ５ａ仲介疾患または炎症状態の処置方法であって、処置を必要とするヒトを含む哺乳類に請求項８０記載の医薬組成物を投与する段階を含む方法。（８５）ヒトを含む哺乳類におけるＣ５ａ伝達性炎症を低減化する方法であって、炎症の低減化に十分な補体活性化−誘発または悪化事象に対し一度に上記哺乳類に請求項８０記載の医薬組成物を投与する段階を含む方法。（８６）調節を必要とする対象において、請求項１記載のポリペプチド誘導体または請求項１３記載の二量体の活性を調節する方法であって、請求項８２記載の医薬組成物を対象に投与する段階を含む方法。（８７）中和を必要とする対象において、請求項１記載のポリペプチド誘導体または請求項１３記載の二量体の活性を中和する方法であって、請求項８３記載の医薬組成物を対象に投与する段階を含む方法。（８８）対象における請求項１記載のポリペプチド誘導体の測定に関する定性的または定量的検定法であって、 (1) 対象から組織または液体試料を採取し、そして (2) 抗体および誘導体間に検出可能な免疫複合体を形成（ただし、免疫複合体の形成は対象における誘導体の存在の指標である）させるのに十分な条件下で試料を請求項７４記載の抗体と接触させる、という段階を含む検定法。（８９）さらに対象において誘導体を定量する段階を含む、請求項８８記載の検定法。（９０）ヒトを含む哺乳類の治療的処置で使用される請求項１記載のポリペプチド誘導体または請求項１３記載の二量体。（９１）ヒトを含む哺乳類におけるＣ５ａ仲介疾患または炎症状態処置用の医薬組成物を製造するための請求項１記載のポリペプチド誘導体または請求項１３記載の二量体の用途。